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Die
Erfindung bezieht sich auf substituierte Chinoline für die Behandlung
von durch Protozoen und Retroviren verursachten Co-Infektionen.
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Die
geographischen Zonen endemischer Krankheiten, die auf Protozoen
(Leishmaniosen, Trypanosomen-Krankheiten, Malaria...) zurückzuführen sind,
sind auch Zonen eines hohen Vorherrschens retroviraler Krankheiten
und insbesondere des erworbenen Immunitätsmangel-Syndroms oder AIDS.
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Deswegen
erlebt man seit vielen Jahren das Auftreten von durch Protozoen
und Retroviren des Typs Leishmania/HIV-1, Plasmodium/HIV oder auch
Pneumocystis carinii/HIV verursachten Co-Infektionen, deren Anzahl
fortlaufend zunimmt, die ein extremes Problem darstellen und die
Lebenserwartung von davon betroffenen Personen stark reduziert.
So wird z.B. die viszerale Leishmaniose oder Kala-Azar, die durch
Leishmania donovani und Leishmania infantum hervorgerufen wird und
die schwerste Form der Leishmaniosen darstellt, als ein besonders
erschwerender Faktor für
die Entwicklung von AIDS angesehen (OMS, 1997, Weekly Epidemiol
Rec., 72:49-54).
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Es
ist bekannt, dass bestimmte Protozoen, wie die Leishmanien, die
Trypanosomen und die Toxoplasmen, und HIV die Fähigkeit besitzen, bestimmte
Wirtszellen, wie Makrophagen, Monozyten und dendritische Zellen,
zu infizieren und sich in denselben zu vermehren, die bei der Bereitstellung
und Entwicklung von Immunantworten gegenüber Krankheitserregern eine
wichtige Rolle spielen.
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Es
ist auch bekannt, dass die Co-Infektion dieser Zellen durch unterschiedliche
Krankheitserreger zur Folge hat, dass die Schwächung des Immunsystems erhöht wird
und die Vermehrung und Keimverstreuung dieser Krankheitserreger
im Organismus begünstigt
wird (Wolday et al., Parasitology Today, 1999,15:182-187).
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So
haben z.B. die in vitro an Zellen monozytischen Ursprungs durchgeführten Versuche
gezeigt, dass das Vorliegen von Leishmanien in diesem Typ von Zellen,
wenn diese schließlich
durch das HIV infiziert sind, die Replikation des Letzteren hervorrufen
und aktivieren kann (Bernier et al, 1995, J. Virol., 69: 7282-7275). Umgekehrt
ist das Vorliegen von HIV geeignet, das intrazelluläre Wachstum
von Leishmanien zu erhöhen, wenn
die Zellen sekundär
durch diese Protozoen infiziert werden (Wolday et al., Scand. J.
Infect. Dis., 30 : 29-34). Außerdem
zeigt ein hoher Prozentsatz an Patienten, die eine Leishmania/HIV-Co-Infektion
aufweisen, eine Vervielfachung und eine erhöhte Keimverstreuung von Leishmanien.
Die immunpathologischen Mechanismen, durch die die Leishmanien und
das HIV mit dem Immunsystem in Wechselwirkung treten und sich gegenseitig
verstärken,
sind noch nicht aufgeklärt.
Zahlreiche Hypothesen sind aufgestellt worden, aber keine von diesen
wurde bis heute tatsächlich
bestätigt
(Wolday et al., 1999, ebenda).
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Die
durch Protozoen und Retroviren verursachten Co-Infektionen stellen
besondere Probleme in Bezug auf die Therapie dar.
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Z.B.
sind im Fall von Leishmania/HIV-Co-Infektionen die Behandlungen
gegen Leishmanien nicht immer wirksam und die Misserfolge und Rückschläge, die
mit den Resistenzphänomenen
oder der Toxizität
von Produkten verbunden sind, sind häufig. So hat eine im Südwesten
von Europa durchgeführte
Studie gezeigt, dass 52% der Patienten, die Träger einer Leishmania/HIV-Co-Infektion
sind und mit fünfwertigen
Antimon-Verbindungen wie dem Meglumin-Antimonat (Glucantime®) – bei dem
es sich um das besonders bevorzugt verwendete Mittel zur Behandlung
der Leishmaniose handelt – behandelt
wurden, in einer Zeitspanne von einem Monat bis drei Jahren 1 bis
4 Rückfälle erlitten
(Quelle: OMS).
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Im Übrigen müssen alle
bisher verfügbaren
Mittel gegen Leishmanien (Meglumin-Antimonat, Pentamidin, Amphotericin
B) auf parenteralem Weg verabreicht werden, was ihre Anwendung kostspielig,
beim Fehlen von Krankenhausstrukturen wenig kompatibel und somit
für den
größten Teil
der Bevölkerung
von Regionen sehr häufig
unzugänglich
macht, die von Leishmania/HIV-Co-Infektionen betroffen sind.
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Wenn
es auch nicht bestreitbar ist, dass ihre Verabreichung in Form einer
Dreifachtherapie (Verbindung von zwei Inhibitoren der inversen Transkriptase
und eines Inhibitors der HIV-Protease) die Prognose von Leishmania/HIV-Co-Infektionen
verbessert, ist es im Hinblick auf die antiretroviralen Behandlungen
bekannt, dass sie virale Mutationen hervorrufen, die für das Auftreten
von Resistenzen und folglich für
das Phänomen einer
therapeutischen Hemmung verantwortlich sind, die ein Wiedereinsetzen
der Infektion zur Folge hat. Da sich zudem die hervorgerufenen Resistenzen
zwischen unterschiedlichen Mitteln gegen Retroviren sehr häufig überkreuzen, insbesondere zwischen den Protease-Inhibitoren,
sind die therapeutischen Substitutionen sehr eingeschränkt. Die
Verwendung der Dreifachtherapie hat zudem den hauptsächlichen
Nachteil, dass sie sehr kostspielig ist und auch für den größten Teil
der Bevölkerung
von Regionen unzulänglich
ist, die von Leishmania/HIV-Co-Infektionen
betroffen sind.
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In
der internationalen Anmeldung PCT
WO
93/07125 haben die Erfinder aufgezeigt, dass Chinoline, die
an dem Kohlenstoffatom, das sich in der Position 2 des Chinolinrings
befindet, durch eine n-Propylgruppe, Hydroxypropylgruppe, n-Propenylgruppe,
trans-Epoxypropylgruppe oder Styrylgruppe substituiert sind, sowohl
gegenüber
Leishmanien aktiv sind, die für
kutane und kutan-muköse
Leishmaniosen verantwortlich sind (Leishmania amazonensis, Leishmania
venezuelensis, ...), als auch gegenüber solchen aktiv sind, die
für die viszerale
Leishmaniose verantwortlich sind, wenn sie Mäusen – und dies selbst auf oralem
Weg – verabreicht werden.
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Außerdem haben
MEKOUAR et al. in der internationalen Anmeldung PCT
WO 98/45269 sowie in einem Artikel
gezeigt, der im Journal of Medicinal Chemistry (2000, 43:1433-1540)
veröffentlicht
wurde, dass 2-Styrylchinoline befähigt sind, in vitro die HIV-Integrase
und die Replikation dieses Virus in Zellen einer zuvor infizierten
Lymphozyten-Stammlinie (OEM) zu hemmen.
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Diese
Autoren weisen jedoch in ihrem Artikel darauf hin, dass für die Hemmwirkung
der substituierten Chinoline gegenüber der HIV-Integrase nicht
nur das Vorliegen eines untergeordneten aromatischen Rings erforderlich
ist – der
in Form der Phenyl gruppe des Styrylrests dargestellt wird -, sondern
auch das Vorliegen einer Carboxylgruppe und Hydroxylgruppe an C-7
bzw. C-8 des Chinolinrings. Die Hemmwirkung auf die intrazelluläre Replikation
von HIV erfordert ihrerseits das zusätzliche Vorliegen eines Paares
von Substituenten, die in ortho-Stellung am untergeordneten aromatischen
Ring vorliegen, d.h. eine Hydroxyl- oder Methoxygruppe an C-3' und eine Hydroxylgruppe
an C-4'.
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Nun
haben die Erfinder beim Fortsetzen ihrer Arbeiten über substituierte
Chinoline überraschend
festgestellt, dass bestimmte Chinoline, obwohl sie nicht den strukturellen
Kriterien entsprechen, die von den vorhergehenden Autoren geäußert wurden,
zugleich eine Antiprotozoen-Aktivität und eine Fähigkeit
zur Hemmung der intrazellulären
Replikation des Retrovirus und insbesondere HIV aufweisen und demgemäß geeignet sind,
eine Therapie der Wahl für
durch Protozoen und Retroviren verursachten Co-Infektionen darzustellen.
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Das
Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, wenigstens ein Chinolin
zu verwenden, das der allgemeinen Formel (I) entspricht:
wobei R
1 ein
Wasserstoff-Atom, eine C
1-C
15-Alkyl-Gruppe,
eine C
2-C
15-Alkenyl-Gruppe,
eine C
2-C
15-Alkinyl-Gruppe,
eine Formyl-Gruppe oder eine Heteroaryl-Gruppe bedeutet, wobei die
Letztere gegebenenfalls mit einer oder mehreren Hydroxyl-Gruppen
substituiert ist; oder
eine C
1-C
15-Alkyl-Gruppe oder C
2-C
7-Alkenyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl,
Carboxyl, Aryloxycarbonyl, C
2-C
8-Alkyloxycarbonyl,
C
3-C
9-Alkenyloxy carbonyl,
Nitril, Amin, C
1-C
7-Alkoxy,
Phenoxy, C
3-C
6-Cycloalkyl,
Aryl, Heteroaryl, Heteroaryloxy, Arylsulfon, C
1-C
7-Alkylsulfon, C
1-C
7-Thioalkyl und C
1-C
7-Aminoalkyl; oder
eine C
2-C
7-Alkinyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl,
Carboxyl, Aryloxycarbonyl, C
2-C
8-Alkyloxycarbonyl,
C
3-C
9-Alkenyloxycarbonyl,
Nitril, Aryl, Heteroaryl, Arylsulfon, C
1-C
7-Alkylsulfon, C
1-C
7-Thioalkyl und C
1-C
7-Aminoalkyl; oder
R
2,
das sich an Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann,
ein Wasserstoff-Atom oder Halogen-Atom bedeutet, eine Hydroxyl-,
Formyl-, Carboxyl-, C
1-C
7-Alkyl-, C
1-C
7-Alkoxy-, Amin-,
C
1-C
10-Alkylamid-,
C
2-C
7-Alkenyl-Gruppe,
die gegebenenfalls mit einer oder mehreren C
1-C
7-Alkoxy-Gruppen substituiert ist, oder auch eine
C
2-C
10-Alkinyl-Gruppe,
wobei die Letztere gegebenenfalls mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert
ist;
oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes desselben,
mit der Maßgabe,
dass R
1 und R
2 nicht
beide Wasserstoff-Atome sind, zur Herstellung eines Medikaments
für die
Behandlung von durch Protozoen und Retroviren hervorgerufenen Co-Infektionen.
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Gemäß der Erfindung
können
in der allgemeinen Formel (I) die Gruppen Alkyl, Alkoxy, Alkenyl
und Alkinyl auch verzweigt oder linear sein. Der Ausdruck "Aryl" bezeichnet jeden
cyclischen oder polycyclischen Rest, der eine aromatischen Charakter
hat, während
der Ausdruck "Heteroaryl" jeden cyclischen
oder polycyclischen Rest von aromatischer Art bezeichnet und somit
den oder die Ringe, die ein oder mehrere Atome tragen, die aus Stickstoff,
Sauerstoff und Schwefel ausgewählt
sind. Außerdem
können
die Chinoline der allgemeinen Formel (I) unter ihren unterschiedlichen
stereoisomeren Formen verwendet werden.
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Von
den Chinolinen der allgemeinen Formel (I) bevorzugt man solche zu
verwenden, deren Kohlenstoffatom, das sich in Position 2 des Chinolinrings
befindet, substituiert ist, d.h. solche, in denen R1 kein
Wasserstoffatom ist.
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Vorzugsweise
sind das Chinolin oder die Chinoline aus Chinolinen ausgewählt, deren
Kohlenstoffatom, das sich in Position 2 des Chinolinrings befindet,
durch eine ungesättigte
Kohlenwasserstoffkette substituiert ist, d.h. eine Alkenyl- oder
Alkinylgruppe, die Substituenten oder keine Substituenten trägt, und
insbesondere aus solchen, in denen
R1
eine
C2-C15-Alkenyl-
oder C2-C15-Alkinyl-Gruppe
bedeutet; oder
eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl, Carboxyl,
C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
Nitril, Amin, C1-C7-Alkoxy, Phenoxy,
C3-C6-Cycloalkyl,
Aryl, Heteroaryl, Heteroaryloxy, Arylsulfon, C1-C7-Alkylsulfon,
C1-C7-Thioalkyl, C1-C7-Aminoalkyl und
Trimethylsilyl; oder
eine C2-C7-Alkinyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl,
Carboxyl, C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
Nitril, Aryl, Heteroaryl, Arylsulfon, C1-C7-Alkylsulfon, C1-C7-Thioalkyl, C1-C7-Aminoalkyl und Trimethylsilyl; während
R2 ein Wasserstoff-Atom, eine Hydroxyl-Gruppe
oder eine C1-C7-Alkyl-Gruppe bedeutet.
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Besonders
bevorzugt sind das Chinolin oder die Chinoline aus Chinolinen der
allgemeinen Formel (I) ausgewählt,
wobei R1 eine C2-C7-Alkenyl- oder C2-C7-Alkinyl-Gruppe
bedeutet, die mit einem oder mehreren Halogen-Atomen, insbesondere
Chlor, Brom oder Fluor, substituiert ist, wobei die Erfinder in
der Tat festgestellt haben, dass das Vorliegen solcher Atome sich
im Allgemeinen durch besonders ausgeprägte Antiprotozoen-Eigenschaften äußert.
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Alle
Chinoline der Formel (I) können
durch chemische Synthese hergestellt werden, insbesondere gemäß den von
Webb, Tetrahedron Lett., 1985, 26, 3191-3194, Fakhfakh et al. Tetrahedron
Lett., 2001, 42, 3847-3850 und Fakhfakh et al. J. Organomet. Chem.,
2001, 624, 131-135, beschriebenen Verfahren.
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Die
Verwendung der Chinoline der allgemeinen Formel (I) für die Herstellung
eines Medikaments zur Behandlung von durch Protozoen und Retroviren
verursachten Co-Infektionen
ergibt zahlreiche Vorteile. Tatsächlich
ermöglicht
sie es durch die doppelte Aktivität – gegen Protozoen und gegen
Retroviren – dieser
Chinoline zwei Infektionen durch eine einzige medizinische Behandlung
zu behandeln, was die Beobachtung stark begünstigt und die Risiken medikamentöser Wechselwirkungen
beträchtlich
reduziert. Obwohl ihr Wirkungsmechanismus auf die HIV-Replikation
noch nicht klar ist, scheinen die Chinoline der allgemeinen Formel
(I) zudem weder auf die inverse Transkripstase noch auf die virale
Protease einzuwirken, so dass ihre Verwendung es erlauben sollte,
sich von den Problemen der Überkreuzresistenz
zu befreien, an denen sich zur Zeit die Ärzte bei der Behandlung einer
HIV-Infektion stoßen.
Außerdem
erbringen diese Chinoline den Beweis eines Fehlens von Toxizität, was für eine sehr
befriedigende Toleranz spricht.
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Als
beispielhafte Co-Infektionen, die durch ein nach der Erfindung hergestelltes
Medikament behandelt werden können,
kann man unter anderem die folgenden aufführen: Co-Infektionen, die durch
ein oder mehrere Protozoen hervorgerufen werden, die zu den Gattungen
Leishmania, Trypanosoma, Plasmodium, Toxoplasma, Pneumocystis und
Schistosomia gehören,
und durch einen Retrovirus vom Typ HIV oder HTLV-1 hervorgerufen
werden.
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Bevorzugt
ist das Medikament zur Behandlung einer Leishmania/HIV-Co-Infektion
vorgesehen.
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Die
Erfindung umfasst für
die Verwendung zur Herstellung eines Medikaments, das zur Behandlung von
durch Protozoen und Retroviren verursachten Co-Infektionen vorgesehen
ist, zugleich Chinoline, die bereits als geeignet beschrieben wurden,
um eine therapeutische Anwendung zu bieten, wie auch Chinoline,
die niemals als derartige Medikamente vorgeschlagen wurden.
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Die
Erfindung zielt demgemäß auch auf
ein Chinolin ab, das der vorhergehend dargestellten allgemeinen
Formel (I) entspricht, in der
R1 entweder
eine C1-C7-Alkyl-Gruppe,
eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe
bedeutet oder eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe, die
wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus Aryl-Gruppen, wobei R2, das sich an
Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann, eine C3-C7-Alkenyl-Gruppe
bedeutet, die mit einer oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen substituiert ist, oder eine
C2-C10-Alkinyl-Gruppe,
die mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist;
oder R1 eine C1-C7-Alkyl-Gruppe bedeutet, die wenigstens einen
Substituenten trägt,
der ausgewählt
ist aus den Gruppen Hydroxyl, Amin, C1-C4-Alkoxy und C1-C4-Aminoalkyl,
oder R1 eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe bedeutet, die wenigstens
einen Substituenten trägt,
der ausgewählt
ist aus den Gruppen Hydroxyl, Amin, C1-C4-Alkoxy
und C1-C4-Aminoalkyl,
wobei R2, das sich an Position 3, 6 oder
8 am Chinolin-Ring befinden kann, eine C3-C7-Alkenyl-Gruppe bedeutet, die mit einer
oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen
substituiert ist, oder eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe, wobei die Letztere gegebenenfalls
mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist;
oder R1 eine Methyl- oder Ethyl-Gruppe bedeutet,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus Halogenen;
wobei R2, das sich an
Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann, eine C1-C7-Alkoxy-, Amin-, C1-C10-Alkylamid-,
C2-C7-Alkenyl-Gruppe
bedeutet, die mit einer oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen substituiert ist, oder auch
eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe, die
mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist;
oder R1 für
einen 2-Pyridyl-Rest steht,
wobei R2,
das sich an Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann,
ein Wasserstoff-Atom oder Halogen-Atom bedeutet, Formyl, Carboxyl,
C1-C7-Alkyl, C1-C7-Alkoxy, Amin,
C1-C10-Alkylamid,
C2-C7-Alkenyl, das gegebenenfalls
mit einer oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen
substituiert ist, oder auch eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe, wobei die Letztere gegebenenfalls
mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist;
oder R1 eine C8-C15-Alkyl-Gruppe bedeutet, die gegebenenfalls
einen Substituenten trägt,
der ausgewählt
ist aus Aryl-Gruppen; oder
eine C8-C15-Alkenyl-Gruppe, eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Arylsulfonen; oder
eine C2-C15-Alkinyl-Gruppe, eine C2-C7-Alkinyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Aryl- und Arylsulfon-Gruppen;
wobei R2,
das sich an Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann,
für eine
Gruppe steht, die ausgewählt
ist aus C1-C7-Alkoxy,
Amin, C1-C10-Alkylamid,
C2-C7-Alkenyl, das gegebenenfalls
mit einer oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen
substituiert ist, oder auch eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe, die mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert
ist;
oder R1 ein Wasserstoff-Atom,
eine Formyl-Gruppe, eine Heteroaryl-Gruppe bedeutet, die gegebenenfalls
mit einer oder mehreren Hydroxyl-Gruppen substituiert ist, wobei
der 2-Pyridyl-Rest ausgenommen ist; oder
eine C1-C15-Alkyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff und den Gruppen Formyl, Carboxyl, Aryloxycarbonyl,
C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
C3-C9-Alkenyloxycarbonyl,
Nitril, Phenoxy, C3-C6-Cycloalkyl,
Heteroaryloxy, Arylsulfon, C1-C7-Alkylsulfon
und C1-C7-Thioalkyl,
eine C1-C7-Alkyl-Gruppe,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus den Gruppen C5-C7-Alkoxy und C5-C7-Aminoalkyl,
eine C3-C15-Alkyl-Gruppe,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus Halogenen, eine C6-C15-Alkyl-Gruppe,
die mit wenigstens einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist, eine C8-C15-Alkyl-Gruppe,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus den Gruppen Hydroxyl, Amin, C1-C7-Alkoxy und C1-C7-Aminoalkyl; oder
eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Carboxyl, Aryloxycarbonyl,
C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
C3-C9-Alkenyloxycarbonyl,
Nitril, Phenoxy, C3-C6-Cycloalkyl,
Heteroaryloxy, C1-C7-Alkylsulfon,
C1-C7-Thioalkyl,
C1-C7-Alkoxy und
C5-C7-Aminoalkyl;
eine C3-C7-Alkenyl-Gruppe,
die mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist; oder
eine
C2-C7-Alkinyl-Gruppe,
die wenigstens einen Substituenten trägt, der ausgewählt ist
aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl, Carboxyl,
Aryloxycarbonyl, C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
C3-C9-Alkenyloxycarbonyl,
Nitril, Heteroaryl, C1-C7-Alkylsulfon,
C1-C7-Thioalkyl
und C1-C7-Aminoalkyl;
oder
eine C2-C15-Alkenyl-
oder C2-C15-Alkinyl-Gruppe,
die mit wenigstens einer C1-C7-Trialkylsilyl-Gruppe
substituiert ist;
wobei R2, das sich
an Position 3, 6 oder 8 am Chinolin-Ring befinden kann, ein Wasserstoff-Atom
oder Halogen-Atom bedeutet, eine Hydroxyl-, Formyl-, Carboxyl-,
C1-C7-Alkyl-, C1-C7-Alkoxy-, Amin-,
C1-C10-Alkylamid-, C2-C7-Alkenyl-Gruppe,
die gegebenenfalls mit einer oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen substituiert ist, oder auch
eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe,
wobei die Letztere gegebenenfalls mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert ist;
oder
ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben, mit der Maßgabe, dass
R1 und R2 nicht
beide Wasserstoff-Atome sind, zur Verwendung als Medikament.
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Dabei
wird auch die Verwendung eines Chinolins bevorzugt, dessen Kohlenstoffatom
in Position 2 des Chinolinrings mit einer ungesättigten Kohlenwasserstoffkette
substituiert ist, und insbesondere ein Chinolin, in dem R1 entweder eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe
bedeutet, die gegebenenfalls mit einer oder mehreren Gruppen substituiert
ist, die ausgewählt
sind aus den Gruppen Hydroxyl, Amin, Aryl, C1-C4-Alkyloxy
und C1-C4-Aminoalkyl,
wobei R2 eine C3-C7-Alkenyl-Gruppe bedeutet, die mit einer
oder mehreren C1-C7-Alkoxy-Gruppen
substituiert ist, oder eine C2-C10-Alkinyl-Gruppe,
wobei die Letztere gegebenenfalls mit einer Heteroaryl-Gruppe substituiert
ist;
oder R1 eine C2-C7-Alkenyl-Gruppe bedeutet, die wenigstens
einen Substituenten trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Carboxyl, C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
Nitril, Phenoxy, C3-C6-Cycloalkyl, Heteroaryloxy,
C1-C7-Alkylsulfon,
C1-C7-Thioalkyl,
C5-C7-Alkoxy und
C5-C7-Aminoalkyl;
eine C3-C7-Alkenyl-Gruppe, die mit einer
Heteroaryl-Gruppe substituiert ist; oder
eine C2-C7-Alkinyl-Gruppe, die wenigstens einen Substituenten
trägt,
der ausgewählt
ist aus Sauerstoff, Halogenen und den Gruppen Hydroxyl, Formyl,
Carboxyl, C2-C8-Alkyloxycarbonyl,
Nitril, Heteroaryl, C1-C7-Alkylsulfon,
C1-C7-Thioalkyl
und C1-C7-Aminoalkyl, oder
eine
C2-C15-Alkenyl-
oder C2-C15-Alkinyl-Gruppe,
die mit wenigstens einer C1-C7-Trialkylsilyl-Gruppe
substituiert ist;
wobei R2 ein Wasserstoff-Atom,
eine Hydroxyl-Gruppe oder eine C1-C7-Alkyl-Gruppe bedeutet.
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Besonders
bevorzugt stellt R1 eine C2-C7-Alkenyl- oder C2-C7-Alkinylgruppe dar, die mit einem oder mehreren
Halogenatomen, insbesondere Chlor, Brom oder Fluor, substituiert
ist.
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Die
Erfindung umfasst zur Verwendung als Medikamente zugleich bekannte
und neue Chinoline.
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Ein
Ziel der vorliegenden Erfindung ist demgemäß auch ein neues Chinolin,
das dadurch gekennzeichnet, dass ist, dass es der vorhergehend dargestellten
allgemeinen Formel (I) entspricht, in der
R1 entweder
eine Cyclopropylhydroxymethyl-Gruppe, eine 4-Chlorbut-3-en-1-in-1-yl-Gruppe, eine Hept-1-en-1-yl-Gruppe,
eine 2-Bromethenyl-Gruppe, eine 2-Bromethinyl-Gruppe, eine 2-Brom-2-fluorethenyl-Gruppe,
eine 4-Methoxycarbonylbuta-1,3-dien-1-yl-Gruppe,
eine Dec-1-in-1-yl-Gruppe, eine 2-(2-Chinolyl)ethenyl-Gruppe, eine
2-(Trimethylsilylethinyl)-4-trimethylsilylbut-1-en-3-in-1-yl-Gruppe
bedeutet, wobei R2 für ein Wasserstoff-Atom steht;
oder
R1 eine Prop-1-en-1-yl-Gruppe bedeutet,
wobei R2 eine Methyl-Gruppe in Position
6 oder eine Hydroxyl-Gruppe in Position 8 des Chinolin-Rings bedeutet;
oder
R1 eine 2-Hydroxypropyl-Gruppe bedeutet,
wobei R2 eine Hydroxyl-Gruppe in Position
8 des Chinolin-Rings bedeutet;
oder R1 eine
2-Methoxycarbonylethenyl-Gruppe bedeutet, wobei R2 eine
Methyl-Gruppe in
Position 6 des Chinolin-Rings bedeutet.
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Ein
Ziel der vorliegenden Erfindung ist zudem eine pharmazeutische Zusammensetzung,
die als Wirkstoff wenigstens ein neues Chinolin wie das vorhergehend
definierte, umfasst.
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Weitere
Vorteile und Merkmale der Erfindung werden aus der Lektüre der nachfolgenden
Vervollständigung
der Beschreibung ersichtlich, die sich auf Herstellungsbeispiele
von in den Bereich der Erfindung fallenden substituierten Chinolinen
und das Aufzeigen ihrer biologischen in vitro-Aktivität bezieht.
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Es
gilt jedoch, dass diese Beispiele nur der Erläuterung der Erfindung dienen
und keine Einschränkung derselben
darstellen.
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I. Herstellung von substituierten Chinolinen
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Beispiel 1: Herstellung von 2-(2-Chinolyl)trimethylsilylacetylen
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- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-C C-Si(CH3)3 und
R2 = H]
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In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,6 g (4,13 mmol) Chinolin-N-oxid in 15 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran
(THF) bei 20°C.
Die sich ergebende Lösung
wird mit 0,64 ml (4,96 mmol) Isobutylchlorformiat behandelt, und
die erhaltene Suspension wird auf –78°C gekühlt.
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6,23
ml einer Trimethylsilylethinyl-magnesiumbromid-Lösung in THF (hergestellt aus
einem Gemisch von 1,28 ml (9 mmol) Trimethylsilylacetylen und 4,95
ml (9,9 mmol) einer 2M Butylmagnesiumbromid-Lösung in THF) werden dann tropfenweise
zugegeben. Nach 90-minütigem
Rühren
bei –78°C wird die
Lösung
langsam auf Umgebungstemperatur gebracht (30 Minuten) und dann mit
15 ml Wasser hydrolysiert.
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Nach
der Trennung der zwei Phasen wird die wässrige Phase mit Diethylether
(5 × 50
ml) extrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt, das Lösungsmittel
wird verdampft und der Rückstand
wird in 10 ml Schwefelsäure
(2 M) aufgenommen. Die saure Lösung
wird mit Dichlormethan (2 × 75
ml) extrahiert. Dann wird die wässrige
Phase mit Hilfe einer gesättigten
K2CO3-Lösung auf
einen pH = 9 gebracht und mit Dichlormethan (2 × 50 ml) extrahiert.
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Die
sich aus der sauren Extraktion ergebenden organischen Phasen werden
vereinigt, mit einer gesättigten
K2CO3-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
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Die
sich aus der basischen Extraktion ergebenden organischen Phasen
werden mit einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat
(MgSO4) getrocknet, filtriert und eingeengt.
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Die
zwei rohen Reaktionsprodukte werden vereinigt und durch Mitteldruck-Chrornatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat:
95/5 verwendet wird, um 0,696 g 2-(2-Chinolyl)trimethylsilylacetylen
zu erhalten.
- Ausbeute: 75%.
- Bruttoformel: C14H15NSi.
- 1H-NMR (200 MHz, CDCl3) δ ppm : 0,30
(s, 9H); 7,52 (m, 2H); 7,72 (m, 2H); 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 8,1
(d, J = 8,3 Hz, 1H).
- 13C NMR (50 MHz, CDCl3)- δ ppm : -0,35;
95,50; 104,19; 124,23; 127,02; 127,50; 127,31; 129,26; 129,84; 135,90;
143,09; 147,94.
- IC-MS (NH+): 225 (M+,100).
- IR (cm–1):
2955; 2155; 1590; 1555; 1500; 1455; 1420; 1375; 1330; 1305; 1245;
1220; 1115; 955; 905; 840; 820; 790; 765; 745; 700; 635.
-
Beispiel 2: Herstellung von 1-(2-Chinolyl)acetylen
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-C CH und R2 = H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,075 g (0,33 mmol) 2-(2-Chinolyl)trimethylsilylacetylen, das erhalten
wird wie in Beispiel 1 beschrieben, in 8 ml wasserfreiem THF. Zu
dieser Lösung
gibt man 0,36 ml (0,36 mmol) einer 1 M Lösung von n-Tetrabutylammoniumfluorid
in Tetrahydrofuran. Nach 15-minütigem
Rühren
bei Umgebungstemperatur wird die Reaktion mit 10 ml Wasser hydrolysiert.
-
Nach
Trennung der beiden Phasen wird die wässrige Phase mit Ethylacetat
(4 × 50
ml) extrahiert.
-
Die
organischen Phasen werden vereinigt, mit einer gesättigten
Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
erhaltene rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat
80:20 verwendet wird, um 0,045 g 1-(2-Chinolyl)acetylen zu erhalten.
- Ausbeute: 88%.
- Bruttoformel: C11H7N.
- 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm : 3,25
(s, 1H, H-2'); 7,55
(d, J = 8,7 Hz, 1H, H-3); 7,56 (t, J = 7,7 Hz, 1H, H-6); 7,74 (dd,
J = 7,6, 7,6 Hz, 1H, H-7); 7,81 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5); 8,11 (d,
J = 8,8 Hz, 1H, H-8); 8,4 (d, J = 8,7 Hz, 1H, H-4).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm : 77,48
(C-2'); 83,11 (C-1'); 123,80 (C-3),
127,04 (C-6); 127,18 (C-5); 127,40 (C-10); 128,97 (C-8); 129,78
(C-7); 135,91 (C-4); 142,06 (C-2); 147,68 (C-9).
- ESI-MS: 154 (MH+, 100).
- IR (cm–1):
3165; 2105; 1615; 1595; 1555; 1500; 1420; 1375; 1330; 1305; 1255;
1210; 1140; 1115; 955; 830; 620.
-
Beispiel 3: Herstellung von E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), worin R1 =
-CH=CH-C(O)OCH3 und R2 =
H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,2 g (1,27 mmol) 2-Formylchinolin in 10 ml wasserfreiem Toluol.
Dazu gibt man 0,51 g (1,52 mmol) Methyl(triphenylphosphoranyliden)acetat.
Das Reaktionsgemisch wird 90 Minuten lang mit Toluol am Rückfluss erhitzt,
dann wird die Lösung
langsam auf Umgebungstemperatur gebracht und mit 10 ml Wasser hydrolysiert.
-
Nach
der Trennung der zwei Phasen wird die wässrige Phase mit Ethylacetat
(4 × 50
ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit einer
gesättigten Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung
gewaschen, dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
erhaltene rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat
70:30 verwendet wird, um 0,216 g E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester
zu erhalten.
- Ausbeute: 80%
- Bruttoformel: C13H11NO2
- 1H-NMR (200 MHz, CDCl3) δ ppm : 3,85
(s, 3H, OMe); 7,00 (d, J = 14,9 Hz, 1H, H-2');
7,54 (t, J = 7,9 Hz, 1H, H-6); 7,57 (d, J = 8,7 Hz, 1H, H-3); 7,72
(dd, J = 7,2, 8,1 Hz, 1H, H-7); 7,78 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5); 7,89
(d, J = 16,0 Hz, 1H, H-1');
8,10 (d, J = 8,5 Hz, H-8); 8,14 (d, J = 8,5 Hz, H-4).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm : 51,67
(OMe); 120,12 (C-3); 123,01 (C-2'),
127,11 (C-6); 127,33 (C-5); 127,87 (C-10); 129,67 (C-8); 129,83
(C-7); 136,48 (C-4); 144,11 (C-1');
148,06 (C-9); 152,88 (C-2); 166,74 (C-3').
- ESI-MS: 214 (MH+, 100).
- IR (cm–1)
: 1740 (C=O); 1725; 1650; 1595; 1560; 1500; 1435; 1345; 1245; 1195;
1155; 975; 825; 755; 715; 620.
-
Beispiel 4: Herstellung von E-3-(2-Chinolyl)-prop-2-en-1-ol
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-CH=CH-CH2OH und R2 =
H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,2 g (0,93 mmol) E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester, der wie in
Beispiel 3 beschrieben erhalten wurde, in 10 ml wasserfreiem Toluol.
Die Lösung
wird auf –78°C gekühlt, dann
werden tropfenweise 1,87 ml (1,87 mmol) Diisobutylaluminiumhydrid
in einer 1M Toluol-Lösung
zugegeben. Nach zweistündigen
Rühren werden
5 ml Methanol zugefügt,
dann wird die Lösung
langsam auf Umgebungstemperatur gebracht und 50 ml Ethylacetat werden
zugegeben, die Hydrolyse wird während
der gesamten Nacht durchgeführt,
dann wird die Lösung über Celite
filtriert. Das Filtrat wird mit Ethylacetat (2 × 25 ml) extrahiert.
-
Die
organischen Phasen werden vereinigt, mit einer gesättigten
Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
erhaltene rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat
60:40 verwendet wird, um 0,085 g E-3-(2-Chinolyl)-prop-2-en-1-ol
zu erhalten.
- Ausbeute: 49%
- Bruttoformel: C12H11NO
- 1H-NMR (200 MHz, CDCl3) δ ppm : 4,44
(d, J = 3,9 Hz, 2H, H-3');
6,87 (dt, J = 16,8, 4,3 Hz, 1H, H-2'); 7,01 (d, J = 16,3 Hz, 1H, H-1'); 7,44 (m, 2H);
7,67 (m, 2H); 7,57 (m, 2H).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm: 62,60
(C-3'); 118,90;
126,15; 127,21; 127,40; 128,73; 129,73; 130,11; 136,48; 137,21;
147,67; 155,71.
- ESI-MS: 208 (M+Na, 12); 186 (MH+, 100).
- IR (cm–1):
3145; 2835; 1650; 1615; 1600; 1560, 1505; 1430; 1370; 1315; 1150;
1120; 1095; 965; 930; 840; 810; 770; 745; 635; 605.
-
Beispiel 5: Herstellung von 3-(2-Chinolyl)propenal
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-CH=CH-CHO und R2 = H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,2 g (1,27 mmol) 2-Formylchinolin in 10 ml wasserfreiem Toluol.
Zu dieser Lösung
gibt man 0,46 g (1,52 mmol) (Triphenylphosphoranyliden)acetaldehyd.
Die Mischung wird 90 Minuten lang mit Toluol am Rückfluss erhitzt,
dann wird die Lösung
langsam auf Umgebungstemperatur gebracht und mit 10 ml Wasser hydrolysiert. Nach
dem Trennen der zwei Phasen wird die wässrige Phase mit Ethylacetat
(4 × 50
ml) extrahiert.
-
Die
organischen Phasen werden vereinigt, mit einer gesättigten
Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
erhaltene rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat
75:25 verwendet wird, um 0,137 g 3-(2-Chinolyl)propenal zu erhalten.
- Ausbeute: 60%
- Bruttoformel: C12H9NO
- 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm : 7,13
(ddd, J = 16,2, 7,7, 0,7 Hz, 1H, H-2'); 7,59 (dd, J = 7,0, 7,0 Hz, 1H, H-6);
7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H, H-3); 7,73 (d, J = 16,1 Hz, 1H, H-1'); 7,76 (dd, J =
7,2, 7,5 Hz, 1H, H-7); 7,84 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5); 8,12 (d, J
= 8,5 Hz, 1H, H-8); 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H, H-4); 9,86 (dd, J =
7,7, 0,7 Hz, 1H, H-3').
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm : 119,85
(C-3); 127,52 (C-5), 127,78 (C-6); 128,11 (C-10); 129,91 (C-8); 130,22
(C-7); 132,54 (C-2');
136,84 (C-4); 148,28 (C-9); 151,75 (C-1'); 152,84 (C-2); 193,52 (C-3').
- ESI-MS: 184 (MH+, 100).
- IR (cm–1):
3050; 1670 (C=O); 1630; 1595; 1555; 1500; 1430; 1290; 1125; 1110;
980; 900; 825; 785; 625; 590.
-
Beispiel 6: Herstellung von (2-Chinolyl)ethylen
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-CH=CH2 und R2 =
H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,8 g (5,51 mmol) Chinolin-N-oxid in 15 ml wasserfreiem THF bei
20°C. Diese
Lösung
wird mit 0,78 ml (6,07 mmol) Isobutylchlorformiat behandelt; die
erhaltene Suspension wird auf –78°C gekühlt. Dann
werden 11 ml (11 mmol) einer 1 M Lösung von Vinylmagnesiumbromid
in THF tropfenweise zugegeben. Nach 90-minütigem Rühren bei –78°C wird die Lösung langsam auf Umgebungstemperatur
gebracht (30 Minuten), dann mit 15 ml Wasser hydrolysiert.
-
Nach
dem Trennen der beiden Phasen wird die wässrige Phase mit Diethylether
(5 × 50
ml) extrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt, das Lösungsmittel
wird verdampft und der Rückstand
wird mit 10 ml Schwefelsäure
(2 M) aufgenommen. Die saure Lösung
wird mit Dichlormethan (2 × 75
ml) extrahiert, und die wässrige
Phase wird mit Hilfe einer gesättigten
K2CO3-Lösung auf
einen pH von 9 gebracht, dann mit CH2Cl2 (2 × 50
ml) extrahiert.
-
Die
sich aus der sauren Extraktion ergebenden organischen Phasen werden
vereinigt, mit einer gesättigten
K2CO3-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Die
sich aus der basischen Extraktion ergebenden organischen Phasen
werden mit einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat
(MgSO4) getrocknet, filtriert und eingeengt.
-
Die
zwei rohen Reaktionsprodukte werden vereinigt und durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat:
95/5 verwendet wird, um 0,126 g (2-Chinolyl)ethylen zu erhalten.
- Ausbeute: 82%
- Bruttoformel: C11H9N
- 1H-NMR (200 MHz, CDCl3) δ ppm : 5,66
(d, J = 10,9 Hz, 1H, H-2'a);
6,27 (d, J = 17,7 Hz, 1H, H-2'b);
7,04 (dd, J = 17,7, 11,1 Hz, 1H, H-1'); 7,49 (t, J = 7,2 Hz, 1H, H-6); 7,60
(d, J = 8,7 Hz, 1H, H-3); 7,69 (dd, J = 7,2, 8,1 Hz, 1H, H-7); 7,77
(d, J = 7,9 Hz, 1H, H-5); 8,06 (d, J = 9,8 Hz, 1H, H-8); 8,11 (d,
J = 8,0 Hz, 1H, H-4).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm : 118,24
(C-3); 119,66 (C-2'),
126,17 (C-6); 127,11 (C-10); 127,32 (C-5); 129,22 (C-8); 129,46
(C-7); 136,17 (C-4); 137,87 (C-1');
147,93 (C-9); 155,96 (C-2).
- IR (cm–1):
1615; 1595; 1555; 1505; 1425; 1310; 1140; 1120; 1015; 990; 925;
830; 760; 715; 730; 615.
-
Beispiel 7: Herstellung von E-1-(2-Chinolyl)buten
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-CH=CH-CH2-CH3 und
R2 = H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, werden 4,90 g (12,7 mmol) Propyltriphenylphosphoniumbromid
in 15 ml wasserfreiem Toluol bei 0°C suspendiert, dann werden 1,71
g (15,2 mmol) Kalium-tert-butanolat (t-BuOK) zugegeben. Nach 15-minütigem Rühren wird eine
Lösung
bei 0°C,
die 1 g (6,36 mol) 2-Formylchinolin in 10 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran
enthält,
zugegeben. Die Reaktionsmischung wird 90 Minuten lang mit Toluol
am Rückfluss
erhitzt, dann wird die Lösung langsam
auf Umgebungstemperatur gebracht und mit 20 ml Wasser hydrolysiert.
-
Nach
dem Trennen der zwei Phasen wird die wässrige Phase mit Ethylacetat
(4 × 50
ml) extrahiert.
-
Die
organischen Phasen werden vereinigt, mit einer gesättigten
Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie auf
Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Cyclohexan/Ethylacetat
92:8 verwendet wird, um 0,674 g E-1-(2-Chinolyl)buten zu erhalten.
- Ausbeute: 58%
- Bruttoformel: C13H13N
- 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm : 1,17
(t, J = 7,5 Hz, 3H, H-4');
2,36 (dqd, J = 7,5, 6,3,1,5 Hz, 1H, H-3'); 6,72 (dt, J = 15,9, 1,5 Hz, 1H, H-1'); 6,88 (dd, J =
15,9, 6,3 Hz, 1H, H-2');
7,45 (ddd, J = 6,9, 6,9, 1,2 Hz, 1H, H-6); 7,52 (d, J = 8,6 Hz,
1H, H-3); 7,66 (ddd, J = 6,9, 6,9, 1,5 Hz, 1H, H-7); 7,74 (dd, J
= 8,01, 1,3 Hz, 1H, H-5); 8,03 (dd, J = 9,4 Hz, 1H, H-8); 8,06 (d,
J = 9,0 Hz, 1H, H-4).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm : 12,90
(C-4'); 25,80 (C-3'); 118,46 (C-3);
125,54 (C-6); 126,90 (C-10); 127,18 (C-5); 128,88 (C-8); 129,21
(C-7); 129,92 (C-1');
135,84 (C-4); 139,00 (C-2');
147,87 (C-9); 156,30 (C-2),
- ESI-MS: 184 (MH+, 100).
- IR (cm–1)
: 2965; 1650; 1615; 1595; 1555; 1505; 1460; 1425; 1315; 1115; 965;
855; 815; 750; 620.
-
Beispiel 8: Herstellung von E-1-Brom-2-(2-chinolyl)ethen
-
- [Chinolin der allgemeinen Formel (I), in der R1 =
-CH=CH-Br und R2 = H]
-
In
einem trockenen Kolben, der mit einem Magnetstab und einem Stickstoffeinlass
versehen ist, löst man
0,2 g (6,38 × 104 mol) 1,1-Dibrom-2-(2-chinolyl)ethen, das
aus 2-Formylchinolin, Tetrabromkohlenstoff (CBr4),
Triphenylphosphin (PPh3) erhalten wurde
(Ramirez et al., J. Am. Chem. Soc., 1962, 84 : 1745), und 11,28
mg (3,19 × 10–5 mol,
5 Mol-%) Eisentriacetylacetonat (Fe(acac)3)
in 3 ml wasserfreiem THF und 3 ml wasserfreiem N-Methylpyrrolidinon
(NMP) bei –10°C. Zu dieser
Lösung
gibt man tropfenweise 0,39 ml (7,02 × 10–4 mol)
einer 1,8 M Lösung
von Isopropylmagnesiumbromid in THF. Nach 30-minütigem Rühren wird die Umsetzung mit
10 ml Wasser hydrolysiert und auf Umgebungstemperatur gebracht.
Dann werden die zwei Phasen getrennt, und die wässrige Phase wird mit Diethylether
(3 × 30
ml) extrahiert.
-
Die
organischen Phasen werden vereinigt, mit einer gesättigten
Natriumhydrogencarbonat(NaHCO3)-Lösung gewaschen,
dann mit einer gesättigten
NaCl-Lösung
gewaschen, über
Magnesiumsulfat (MgSO4) getrocknet, filtriert
und eingeengt.
-
Das
erhaltene rohe Reaktionsprodukt wird durch Mitteldruck-Chromatographie
auf Kieselgel gereinigt, wobei als Elutionsmittel Hexan/Ethylacetat
92:8 verwendet wird, um 0,125 g E-1-Brom-2-(2-chinolyl)ethen zu erhalten.
- Ausbeute: 84%
- Bruttoformel: C11H8NBr
- 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,36
(d, J = 8,37 Hz, 1H); 7,37 (d, J = 15,9 Hz, 1H); 7,50 (d, J = 13,7
Hz, 1H); 7,52 (t, J = 3,55 Hz, 1H); 7,70 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,76
(d, J = 8,11 Hz, 1H); 8,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,10 (d, J = 8,4
Hz, 1H).
- 13C-NMR (50 MHz, CDCl3) δ ppm: 114,14
(C-2'); 119,24 (C-3);
126,51 (C-6); 126,75 (C-5); 127,51 (C-10); 129,35 (C-8); 129,97
(C-7); 136,71 (C-4); 137,53 (C-1');
147,06 (C-9); 154 (C-2).
- ESI-MS: 236 (MH+, 100); 234 (MH+, 78).
- IR (cm–1)
: 3055; 1605; 1590; 1550; 1500; 1425; 1305; 1140; 1115; 935; 835;
800; 775; 745; 620; 575.
-
II. Biologische in vitro-Aktivität von substituierten
Chinolinen
-
Die
biologische Aktivität
von substituierten Chinolinen gegen Protozoen wird bei:
- – Amastigoten
von Leishmania amazonensis (Referenz OMS: MPRO/BR/1972/M1841), Leishmania
donovani (MHOM/ET/67/L82) und Leishmania infantum (MHOM/MA(BE)67
und IPZ229/1/89);
- – Amastigoten
von Trypanosoma cruzi (Tulahuen-Stamm) und zirkulierenden Formen
von Trypanosoma brucei (Stamm S427)
aufgezeigt.
-
Ihre
antiretrovirale Aktivität
wurde an CEM4fx-Zellen aufgezeigt, die durch den molekularen Klon pIN4-3
des humanen Immunitätsmangel-Virus
(HIV-1) infiziert worden waren.
-
1) Getestete substituierte Chinoline
-
Die
substituierten Chinoline, deren biologische Aktivität getestet
wurde, sind in der nachstehenden Tabelle I aufgeführt. Tabelle
I
Tabelle
I (Fortsetzung)
Tabelle
I (Fortsetzung)
Tabelle
I (Fortsetzung)
Tabelle
I (Fortsetzung)
-
2) Versuchsprotokolle:
-
a) Mit Amastigoten von Leishmania amazonensis
durchgeführte
Tests
-
Der
Stamm Leishmania amazonensis wird durch aufeinanderfolgende Passagen
in Nacktmäusen (nackt/nackt)
gehalten. Die Amastigoten werden aus Läsionen isoliert, die sich in
Fußsohlenkissen
entwickelten, und nach dem Verfahren gereinigt, das von Antoine
et al. (Parasitology, 1989, 99 :1) beschrieben ist.
-
Die
Makrophagen, die als Wirtszellen für die Leishmanien dienen, werden
nach der Vermehrung und Differenzierung von medullären Vorstufen
von c/BALB-Mäusen
erhalten. Diese Kultur wird in Gegenwart des Überstandes einer konditionierten
Linie der Fibroblasten-L-929-Quelle von "Makrophagenkolonie stimulierendem Faktor" realisiert. Nach
einer fünftägigen Kultivierung
auf hydrophobem Träger
werden die anhaftenden Makrophagen gewonnen, dann auf einer Platte
mit 96 Vertiefungen mit flachem Boden für eine Zellkultur mit 4 × 104 Makrophagen pro Vertiefung verteilt. Die
Makrophagen werden dann mit gereinigten Amastigoten (4 Parasiten
pro Makrophage) infiziert und 24 Stunden lang bei 34°C inkubiert,
um die Entwicklung von parasitophoren Vakuolen und die Vermehrung
der Parasiten zu ermöglichen.
Unter diesen Bedingungen werden mehr als 95% der Makrophagen infiziert.
-
Die
Lösungen
der zu testenden substituierten Chinoline werden in DMSO hergestellt,
bevor sie in verschiedenen Konzentrationen zu den infizierten Makrophagen-Kulturen gegeben
werden. Verdünnungsreihen auf
der Basis von 2, ausgehend von 100 μg/ml bis zu 6 ng/ml, werden
verwendet, und die Endkonzentration in DMSO, die in allen Fällen 0,1%
ist, hat sich gegenüber
den Makrophagen als nicht toxisch erwiesen.
-
Die
Bestimmung der leishmaniziden Aktivität von Chinolinen wird 30 Stunden
nach der Zugabe der substituierten Chinoline durchgeführt. Sie
basiert auf der mehr oder weniger starken Verringerung, d.h. vollständigen Verringerung,
einerseits der Größe der parasitophoren
Vakuolen und andererseits der Anzahl der lebenden intrazellulären Amastigoten.
Für jedes
getestete substituierte Chinolin wird somit auch die Konzentration
bestimmt, die 100% der Parasiten hemmt (IC100).
-
b) Test mit Amastigoten von Leishmania
donovani und Leishmania infantum
-
Die
Stämme
Leishmania donovani und Leishmania infantum werden durch aufeinanderfolgende
Passagen in Goldhamstern gehalten. Die Amastigoten werden aus der
Milz von infizierten Goldhamstern isoliert und mit gereinigten Makrophagen
in Kontakt gebracht.
-
24
Stunden nach der intraperitonealen Injektion einer 2%igen Stärkelösung in
c/Balb-Mäuse
werden die peritonealen Makrophagen dieser Mäuse gewonnen, mit PBS-Dulbecco
gewaschen, dann in Labtek®-Kulturkammern zu 4 × 104 Zellen pro 100 μl pro Vertiefung in RPMI-1640-Medium,
ergänzt
mit 10% SCF und Antibiotika, verteilt. Nach 24 Stunden bei 37°C in feuchter
Atmosphäre
(5% CO2) werden die Makrophagen mit gereinigten
Amastigoten (3 Parasiten pro Makrophage) in einem Endvolumen von
200 μl während 4
Stunden in Kontakt gebracht. Das Medium wird dann abgezogen, um
extrazelluläre
Parasiten zu entfernen, und durch 100 μl frisches Medium ersetzt.
-
24
Stunden nach dem Beginn der Infektion werden die Lösungen von
substituierten Chinolinen, die hergestellt wurden wie in obigem
Absatz a) beschrieben, zugegeben, und die leishmanizide Aktivität wird nach Ablauf
von 48 Stunden durch Zählen
der Anzahl von noch lebenden Parasiten in den fixierten und gemäß Giemsa
angefärbten
Zellen bestimmt. Man bestimmt auch für jedes getestete substituierte
Chinolin die Konzentration, die 50% der Parasiten hemmt (IC50).
-
c) Test mit Amastigoten von Trypanosoma
cruzi
-
Peritoneale
Makrophagen von c/Balb-Mäusen
werden gewonnen, in PBS-Dulbecco gewaschen, dann auf Platten mit
96 Vertiefungen zu 3 × 104 Zellen pro 100 μl pro Vertiefung in RPMI-1640-Medium,
ergänzt
mit 10% FCS und Antibiotika, verteilt.
-
Nach
24 Stunden bei 37°C
werden 105 Trypomastigoten mit Verdünnungsreihen
auf der Basis von 2 von unterschiedlichen substituierten Chinolinen
zugegeben. Die Kulturen werden dann während 4 Tagen bei 37°C in feuchter
Atmosphäre
(5% CO2-95%
Luft) kultiviert. Nach der Fixierung und der anschließenden Anfärbung gemäß Giemsa
wird die antiparasitäre
Aktivität
bestimmt, indem man die extrazellulären Trypomastigoten und die
intrazellulärem
Amastigoten zählt.
Man bestimmt somit für
jedes getestete substituierte Chinolin die Konzentration, welche
50% der Parasiten hemmt (IC50).
-
d) Tests mit zirkulierenden Formen von
Trypanosoma brucei
-
Zirkulierende
Formen von Trypanosoma brucei werden in MEM-Medium (essentielles
Minimalmedium; Gibco-BRL, Nr. 072-1100), mit zugefügten Earle-Salzen
und ergänzt
mit 1 mg/ml Glucose, 2,2 mg/ml NaHCO3, 10
mM HEPES, 2 mM Natriumpyruvat, 0,2 mM 2-Mercaptoethanol, 0,1 mM
Hypoxanthin und 15% inaktiviertem Pferdeserum, kultiviert.
-
Die
Kulturen werden bei 37°C
in Platten mit 24 Vertiefungen in feuchter Atmosphäre (5% CO2-95% Luft) gehalten, und die Passagen erfolgten
alle 2 oder 3 Tage bei einer Dichte von 103 bis
105 Trypomastigoten pro ml. Die Aktivität der substituierten
Chinoline wird in Platten mit 96 Vertiefungen, in denen 103 Parasiten, die aus einer exponentiellen
Wachstumsphase stammen, pro Vertiefung verteilt werden, in Gegenwart
unterschiedlicher Lösungen
von substituierten Chinolinen in einem Endvo lumen von 200 μl dreifach
getestet. Nach einer 48-ständigen
Kultivierung wird die trypanozide Aktivität bestimmt, indem man in der
Neubauer-Zelle die Anzahl der lebenden Parasiten pro Vertiefung
zählt.
Man bestimmt somit für
jedes getestete substituierte Chinolin die Konzentration, die 50%
der Parasiten hemmt (IC50).
-
e) Tests zur Replikation von HIV-1
-
CEM4fx-Zellen
werden de novo durch den molekularen Klon pLN4-3 von HIV-1 infiziert
und gleichzeitig mit zu testenden substituierten Chinolinen behandelt,
die zuvor in DMSO gelöst
wurden. Das Virus vermehrt sich während 3 Tagen, dann wird das
Vorliegen von infizierten Virionen im Kulturüberstand (RPMI-Medium) nachgewiesen,
indem man P4 genannte Zellen erneut infiziert, die ein Reportergen
besitzen, das exprimiert wird, wenn sie durch das Virus infiziert
sind. Die Virenbeladung wird nach 72-ständiger Kultivierung durch zwei Verfahren
quantifiziert: Abschätzung
der Virenbeladung durch Infektion von HeLa-βgalCD4 +-Zellen und Bestimmung der Menge an viralem
Protein p24 durch einen ELISA-Test.
-
Außerdem wird
die Zytotoxizität
der Chinoline gegenüber
Wirtszellen durch einen Biotransformationstest von MTT [3-(4-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium)bromid]
gemessen. Alle Tests wurden dreifach durchgeführt.
-
3) Ergebnisse
-
Die
mit den substituierten Chinolinen – in der Tabelle I als Nr.
1, 2, 4, 6 bis 11, 13 bis 20, 23 bis 34, 37 und 38 angegeben – erhaltenen
Ergebnisse in Bezug auf ihre Aktivität gegenüber Amastigoten von Leishmania amazonensis,
Leishmania donovani und Leishmania infantum sowie ihre Zytotoxizität gegenüber Makrophagen
sind in der nachstehenden Tabelle II aufgeführt. Tabelle II
| Chinoline | L.
amazonensis IC100 (μg/ml) | Zytotoxizität gegenüber Makrophagen (μg/ml) | L.
donovani IC50 (μg/ml) | L.
infantum (IPZ229/1/89) IC50 (μg/ml) | L.
infantum (MHOM/MA(BE)67) IC50 (μg/ml) |
| 1 | 0,78125 | 6,25 | | | >32 |
| 2 | 3,12 | 6,25 | 1,2-2,8 | 1,3 | >32 |
| 4 | 25 | 25 | | | |
| 5 | | | | | 32 |
| 6 | 6,25 | 25 | | | |
| 7 | 12,5 | 25 | | | |
| 8 | 12,5 | 12,5 | | | |
| 9 | 0,781 | 1,56 | | | |
| 10 | 1,56 | 6,25 | | | 3 |
| 11 | 50 | 50 | | | 14 |
| 13 | 25 | 25 | | | |
| 14 | 25 | 100 | | | |
| 16 | 10-20 | | | | |
| 17 | | | | | 16 |
| 18 | 12,5 | 50 | | | >32 |
| 19 | 12,5 | 12,5 | | | |
| 20 | >50 | >100 | | | 16 |
| 23 | 12,5 | 50 | 3,3-20 | 0,4-2,2 | 26 |
| 24 | 10-25 | | | | |
| 25 | 12,5 | 25 | | | 16 |
| 26 | 12,5 | 1,56 | 1,7 | 10,9 | 10 |
| 27 | 50 | | | | 10 |
| 28 | 12,5 | 12,5 | | | >32 |
| 29 | 0,78125 | 3,12 | | | 2 |
| 30 | 12,5 | 25 | | | >32 |
| 31 | 25 | 25 | | | |
| 32 | 12,5 | 12,5 | | | |
| 33 | 10-25 | | | | |
| 34 | 50 | 25 | | | 2 |
| 35 | | | | | 10 |
| 37 | 50-25 | | | 0,3-5,8 | 17 |
| 38 | 25 | 25 | | | |
-
Als
Verbindung, die eine interessante Aktivität gegenüber den Amastigoten von Leishmania
amazonensis aufweist, wird eine solche angesehen, die einen IC100-Wert
von kleiner oder gleich 25 μg/ml
hat. Außerdem
wird sie als eine solche mit einer interessanten Aktivität gegenüber den
Amastigoten von Leishmania donovani und infantum angesehen, wenn
sie einen 1050-Wert von kleiner oder gleich
12,5 μg/ml
aufweist.
-
Die
mit den substituierten Chinolinen – in der Tabelle 1 als Nr.
2, 6, 9 bis 11, 13, 15, 17, 18, 20 bis 23, 25, 28, 29 und 34 bis
37 angegeben – erhaltenen
Ergebnisse in Bezug auf ihre Aktivität gegenüber Amastigoten von Trypanosoma
cruzi und den zirkulierenden Formen von Trypanosoma brucei sind
in der nachstehenden Tabelle III aufgeführt. Tabelle III
| Chinoline | T.
cruzi (Amastigoten) IC50 (μM) | T.
brucei IC50 (μM) |
| 1 | 8 | |
| 2 | 12 | 13 |
| 5 | >32 | |
| 6 | >32 | 17 |
| 9 | 5 | 19 |
| 10 | 4 | >32 |
| 11 | 19 | >32 |
| 13 | >32 | 10 |
| 15 | >32 | 16 |
| 17 | >32 | 3 |
| 18 | >32 | 16 |
| 20 | 19 | 13 |
| 21 | >32 | 14 |
| 22 | 16 | 16 |
| 23 | 15 | 16 |
| 25 | 11 | 4 |
| 26 | 8 | |
| 27 | 25 | |
| 28 | >32 | 5 |
| 29 | <0,5 | 1 |
| 30 | 26 | |
| 34 | 15 | 13 |
| 35 | >32 | 24 |
| 36 | 21 | 4 |
| 37 | >32 | 13 |
-
Als
Verbindung, die eine interessante Aktivität gegenüber den Amastigoten von Trypanosoma
cruzi aufweist, wird eine solche angesehen, die einen IC50-Wert von kleiner oder gleich 20 μM hat. Außerdem wird sie
als eine solche mit einer interessanten Aktivität gegenüber den zirkulierenden Formen
von Trypanosoma brucei angesehen, wenn sie einen IC50-Wert
von kleiner oder gleich 5 μM
aufweist.
-
Die
mit den substituierten Chinolinen – in der Tabelle I als Nr.
9, 20 und 26 angegeben – erhaltenen Ergebnisse
in Bezug auf ihre Zytotoxizität
gegenüber
CEM4fx-Zellen und
ihre Aktivität
gegenüber
der Replikation von HIV-1 in diesen Zellen sind in der nachstehenden
Tabelle IV aufgeführt. Tabelle IV
| Chinoline | Zytotoxizität IC50 (μM) | Antiretrovirale
Aktivität
IC50 (μM) |
| 9 | 2 | 0,6 |
| 20 | 9 | 2 |
| 26 | 3 | 0,9 |
-
Wie
aus den Tabellen II und III ersichtlich ist, variiert die Antiprotozoen-Aktivität der substituierten
Chinoline in der Mehrzahl der Fälle
in Abhängigkeit
von den Spezifitäten
der Parasiten, d.h., den Stämmen,
auf die sie getestet werden. So weist z.B. das als Nr. 23 angegebene
Chinolin eine deutliche Aktivität
gegenüber Leishmania
amazonensis, Leishmania donovani und den Stamm IPZ229/1/89 von Leishmania
infantum auf, während
seine Aktivität
gegenüber
dem Stamm MHOM/MA(BE)67 von Leishmania infantum sowie bei Trypanosoma
cruzi und Trypanosoma brucei sich als weniger interessant erweist.
Auf ähnliche
Weise zeigt das als Nr. 25 angegebene substituierte Chinolin eine
interessante Aktivität
gegenüber
Leishmania amazonensis, Trypanosoma cruzi und Trypanosoma brucei,
während
es gegenüber
Leishmania infantum weniger aktiv zu sein scheint.
-
Auch
wird der Fachmann in Abhängigkeit
von den Parasiten, die für
die Co-Infektion verantwortlich sind, die er behandeln möchte, das
substituierte Chinolin auswählen,
das ihm als am meisten geeignet erscheint. Er kann auch zwei oder
mehrere unterschiedliche substituierte Chinoline derartig kombinieren,
dass die therapeutische Reaktion optimiert wird oder das therapeutische
Wirkungsspektrum verbreitert wird.
-
II. Biologische in vivo-Aktivität von substituierten
Chinolinen
-
a) Mit Labortieren durchgeführte Versuche,
die mit Haut-Leishmaniose (Leishmania amazonensis) infiziert sind
-
1) Labortiere
-
Die
Versuchstiere sind männliche
oder weibliche c/BALB-Mäuse
eines Gewichts von 18-24 g und eines Alters von etwa 6-8 Wochen,
die danach für
die Reproduktion in der Tierhandlung des Instituto de Investigaciones
en Ciencas de la Salud (IICS), Asuncion, Paraguay gezüchtet wurden.
Goldhamster (Mesocricetus auratus) werden für die Haltung der Stämme und
als Reservoir von L. amazonensis- Parasiten verwendet.
-
2) Parasiten
-
Die
c/BALB-Mäuse
werden mit Parasiten im amastigoten Stadium von Leishmania amazonensis
des Referenzstamms IFLA/BR/67/PH8 auf subkutanem Weg im Bereich
des ventralen Polsters der rechten Hinterpfote infiziert, wobei
die linke Pfote als Kontrolle verbleibt. Die Menge an eingeimpften
Amastigoten beträgt
2 × 106 Amastigoten in 50 μl Phosphat-Salzlösung (PBS)
für L.
amazonensis.
-
3) Behandlung von Haut-Leishmaniose
-
Die
Behandlungen beginnen, sobald sich die Infektion stabil ausgebildet
hat, d.h. im Allgemeinen 5 bis 6 Wochen nach dem Einimpfen der Amastigoten
von L. amazonensis. Das ausgewählte
Referenzmedikament ist Glucantime® oder
Megluminantimonat von Aventis (Frankreich).
-
Die
Behandlungen werden auf folgende Weise durchgeführt (8 Mäuse pro Gruppe):
- – Glucantime® wird
auf subkutanem Weg in einer Konzentration von 100 mg/kg oder 28
mg SbV/kg mittels täglicher Injektion während 15
Tagen verabreicht;
- – die
Chinoline werden auf oralem Weg zu 25 mg/kg pro Tag während 15
Tagen zweimal – morgens
und mittags – verabreicht.
-
Die
Chinoline oder das N-Methylglucaminantimonat (Glucantime®)
werden in einem Tropfen Tween 80, ergänzt mit einer Phosphat-Salzlösung, gelöst, um die
erwünschte
Konzentration zu erhalten, dann werden 50 μl der erhaltenen Lösung verabreicht.
Die nicht behandelten Kontrollmäuse
erhalten 50 μl
einer Lösung
von Tween 80 mit PBS.
-
4) Untersuchte Parameter
-
Messung
der Läsion:
Die Durchmesser der Läsionen
der infizierten Pfote und der Kontrollpfote werden mit Hilfe eines
in 1/10 mm eingeteilten Mikrometers einmal pro Woche während der
Dauer des Experiments gemessen. Die ersten Messungen beginnen 48
Stunden nach dem Einimpfen der Parasiten. Die Berechnung des Unterschieds
der zwei Messungen ergibt die Dicke der Läsion.
-
Zählen der
amastigoten Formen in der Läsion:
Nach dem Beenden der Behandlung werden die Tiere getötet, dann
werden die Läsionen
in einer Petrischale gesammelt, gewogen, in Stücke geschnitten und mit Hilfe
einer Potter-Mühle
von 10 ml mit 5 ml RPMI-Kulturmedium (Rosewall Park Medecine Institute,
USA, Gibco) gemahlen. Die erhaltenen 5 ml Brei werden zweimal zentrifugiert.
Bei der Schicht, welche die Amastigoten umschließt, wird die Anzahl der Parasiten
mit Hilfe einer Neubauer-Zelle gezählt. Fünf Zählungen werden für jede Amastigoten-Schicht
durchgeführt.
Die Anzahl der amastigoten Formen wird mit Hilfe der Stauber-Formel bestimmt,
die das Gewicht der Läsion
berücksichtigt: A/N × P × Koeffizient
der Neubauer-Zelle
- A
- = Anzahl der Amastigoten,
- N
- = Anzahl der Kerne
- P
- = Gewicht der Läsion
-
Die
Ergebnisse werden durch Berechnung des arithmetischen Mittels der
Durchmesser der einmal pro Woche gemessenen Läsionen und am Ende des Protokolls
nach dem Töten
der Mäuse
der Gewichte der Läsionen
und der Anzahl der Amastigoten ausgedrückt. Ein Student-Test (t-Test)
wird für
die statistische Analyse aller Daten verwendet. Der Vergleich erfolgt
paarweise zwischen der "Kontroll"-Gruppe und der "Behandlungs"-Gruppe. Das Erhalten
eines Werts von P < 0,05
wird als statistisch signifikant angesehen.
-
Die 1 erläutert den
Effekt der Behandlungen mit Glucantime (28 mg SbV/kg
pro Tag), das auf subkutanem Weg verabreicht wurde, E-1-(2-Chinolyl)buten
(6) und E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester (23),
die auf oralem Weg zu 25 mg/kg pro Tag während 15 Tagen c/Balb-Mäusen (n=8)
verabreicht wurden, welche mit L. amazonensis infiziert waren.
-
Tabelle
V fasst die Wirkung der Behandlungen mit Glucantime, E-1-(2-Chinolyl)buten
(6) und E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester (23) auf die
mit L. amazonensis infizierten c/Balb-Mäuse (n=8) zusammen. Tabelle V
| Verbindung | Verabreichungsweg | Gewicht
der Läsionen
(g) (Mittelwert ± Standardabweichung) | %
Reduktion der Anzahl der Parasiten in der Läsion | Mittelwert
der Anzahl der Parasiten in der Läsion pro g |
| Kontrolle
ohne Behandlung | | 0,061 ± 0,038 | | 2,5 × 107 |
| Megluminantimonat | subkutan | 0,012 ± 0,010 | –97%* | 7,2 × 106 |
| E-1-(2-Chinolyl)buten
(6) | oral | 0,101 ± 0,100 | –73% | 6,9 × 106 |
| E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester
(23) | oral | 0,059 ± 0,010 | –88%** | 3,1 × 106 |
-
Student-Test:
-
- *P = 0,02, **P = 0,05 (gegenüber der nichtbehandelten Gruppe)
-
b) Mit Labortieren durchgeführte Versuche,
die mit viszeraler Leishmaniose (Leishmania infantum) infiziert wurden
-
1) Labortiere und Parasiten
-
Die
Versuchstiere sind männliche
oder weibliche c/BALB-Mäuse
eines Gewichts von 18-24 g und eines Alters von etwa 6-8 Wochen,
die in der Tierhandlung des Instituto de Investigaciones en Ciencas
de la Salud (IICS), Asuncion, Paraguay gezüchtet wurden. Die c/BALB-Mäuse werden
mit Parasiten von Leishmania infantum im promastigoten Stadium (Referenz:
MHOM/FR/91/LEM2259V) infiziert, ein Stamm, der von einem Patienten
mit AIDS isoliert wurde. Dieser Stamm wird in einem Schneider-Drosophila-Kulturmedium
(Gibco, USA), ergänzt
mit 20% fetalem Kalbserum, gehalten. Die infizierten Promastigoten
werden 7 Tage lang kultiviert, dann gezählt. Jede Maus wird dann auf
intravenösem
Weg mit 0,2 ml Kulturmedium, das 107 Promastigoten
enthält,
infiziert.
-
2) Behandlung der viszeralen Leishmaniose
-
Die
infizierten Mäuse
werden zufällig
in mehrere Gruppen zu 8 Mäusen
aufgeteilt, dann eine Woche nach der parasitären Infektion auf folgende
Weise behandelt:
- – Glucantime® wird
auf subkutanem Weg zu 100 mg/kg pro Tag oder 28 mg SbV/kg
pro Tag mittels täglicher Injektion
während
10 Tagen verabreicht;
- – die
Chinoline werden auf oralem Weg zu 25 mg/kg pro Tag während 10
Tagen in zwei Teilen – morgens und
mittags – verabreicht.
-
Die
Chinoline oder das N-Methylglucaminantimonat (Glucantime®)
werden in einem Tropfen Tween 80, ergänzt mit einer Phosphat-Salzlösung (PBS),
gelöst,
um die erwünschte
Konzentration zu erhalten, dann werden 50 μl der erhaltenen Lösung verabreicht.
Die nicht behandelten Kontrollmäuse
erhalten 50 μl
einer Lösung
von Tween 80 mit PBS.
-
3) Untersuchte Parameter
-
Zählen der
amastigoten Formen in der Leber und Milz:
Nach dem Beenden
der Behandlung und dem Töten
der Tiere werden die Eingeweide, die Leber und die Milz gewogen
und in einer Petrischale gesammelt. Mit jedem Organ führt man
mehrere Appositionen auf einer entfetteten dünnen Glassscheibe durch, die
fixiert, dann durch die Technik von May-Grünwald-Giemsa angefärbt wird,
wodurch die Bestimmung der Anzahl der amastigoten Formen pro 500
Kernzellen ermöglicht
wird. Dann werden die Organe in Stücke geschnitten und mit Hilfe
einer Potter-Mühle
von 10 ml mit 5 ml RPMI-Kulturmedium gemahlen. Die erhaltenen 5
ml Brei werden zweimal zentrifugiert. Bei der Schicht, welche die
Amastigoten umschließt,
wird die Anzahl der Parasiten mit Hilfe einer Neubauer-Zelle gezählt. Fünf Zählungen
werden für
jede Amastigoten-Schicht durchgeführt. Die Anzahl der amastigoten
Formen wird mit Hilfe der Stauber-Formel bestimmt, die das Gewicht
des zurückgewonnenen
Organs berücksichtigt: A/N × P × Koeffizient
der Neubauer-Zelle
- A
- = Anzahl der Amastigoten,
- N
- = Anzahl der Kerne
- P
- = Gewicht der Läsion
-
Ein
Student-Test (t-Test) wird für
die statistische Analyse aller Daten verwendet. Der Vergleich erfolgt paarweise
zwischen Kontrollgruppe und Behandlungsgruppe. Das Erhalten eines
Werts von P < 0,05
wird als statistisch signifikant angesehen. Die Ergebnisse sind
in der Tabelle VI aufgeführt.
-
Die
Tabelle VI erläutert
die Wirksamkeit von 3-(2-Chinolyl)propenal (9), 1-(2-Chinolyl)acetylen
(1), E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester
(23) und Glucantime auf mit Leishmania infantum infizierte c/Balb-Mäuse (n=8). Tabelle VI
| Behandlung | Lebergewicht
(g) | Anzahl
der Parasiten in der Leber pro Gramm | %
Reduktion der Anzahl der Parasiten in der Leber | Gewicht
der Milz (g) | Anzahl
der Parasiten in der Milz pro Gramm | %
Reduktian der Anzahl der Parasiten in der Milz |
| Ohne
Behandlung | 0,93 | 4,5 × 107 a | | 0,10 | 4,2 × 106 | |
| Glucantime | 1,10 | 1,6 × 107 a | –65,3 | 0,11 | 4,4 × 106 | +6,0 |
| 3-(2-Chinolyl)-propenal (9) | 0,93 | 3,8 × 106 a,e | –91,6 | 0,11 | 2,2 × 106 b | –47,6 |
| 1-(2-Chinolyl)-acetylen (1) | 0,97 | 1,8 × 107 c | –60,0 | 0,11 | 2,2 × 106 b | –47,6 |
| E-3-(2-Chinolyl)-2-propensäuremethylester (23) | 1,10 | 1,8 × 107 d | –60,0 | 0,10 | 1,5 × 106 c,f | –64,3 |
-
Student-Test:
-
- aP = 0,02 (gegenüber infizierter Gruppe ohne
Behandlung)
- bP = 0,01 (gegenüber infizierter Gruppe ohne
Behandlung)
- cP = 0,03 (gegenüber infizierter Gruppe ohne
Behandlung)
- dP = 0,04 (gegenüber infizierter Gruppe ohne
Behandlung)
- eP = 0,002 (gegenüber mit Glucantime behandelter
Gruppe)
- fP = 0,03 (gegenüber mit Glucantime behandelter
Gruppe)
Tabelle I (Fortsetzung)
Tabelle I (Fortsetzung)
Tabelle I (Fortsetzung)
