DE60014323T2

DE60014323T2 - Pyrimidine-2,4,6-trione als matrixmetalloproteinase-hemmer

Info

Publication number: DE60014323T2
Application number: DE60014323T
Authority: DE
Inventors: Helen Louise FOLEY; Robert Edward Palermo; Ping Wang
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1999-02-12
Filing date: 2000-02-09
Publication date: 2006-02-16
Anticipated expiration: 2020-02-10
Also published as: EP1153015B1; JP2002536439A; KR100477160B1; BR0008109A; CA2361605A1; ATE277912T1; CN1339028A; KR20020011963A; ZA200106214B; JP3655551B2; US6265578B1; DE60014323D1; TR200102334T2; AR035008A1; AU774487B2; CN1147481C; WO2000047565A1; AU2908500A; EP1153015A1; ES2226790T3

Description

Die Erfindung betrifft Verbindungen der Formel I
wobei
R₁ Wasserstoff, C_1-7-Alkyl, Hydroxymethyl oder Benzyloxy ist; und
R₂ Phenoxy ist; und
pharmazeutisch annehmbare Salze einer sauren Verbindung der Formel I davon.
Die Verbindungen der Erfindung sind Matrix-Metallprotease-Inhibitoren, die für die Behandlung oder Bekämpfung von Krebs geeignet sind, der mit einer Überexpression von Gelatinase-A und/oder Gelatinase-B assoziiert ist, insbesondere Hautkrebs, Brustkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs und Magenkrebs. Die Verbindungen der Erfindung sind ebenfalls für andere Krankheiten geeignet, die mit einem unregulierten Abbau der extrazellulären Matrix assoziiert sind, einschließlich rheumatoider Arthritis, Osteoarthritis, Multipler Sklerose, Hornhautulzeration, Periodontalerkrankungen und dgl.
WO-A-98/58925 offenbart Barbitursäurederivate, die als Matrix-Metallprotease-Inhibitoren fungieren.
Wie hierin verwendet, bedeutet der Ausdruck "Alkyl" eine geradkettige oder verzweigtkettige Alkylgruppe enthaltend maximal 7 Kohlenstoffatome, wie etwa Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, sec-Butyl, t-Butyl und Pentyl, und Hexyl. Vorzugsweise befindet sich R₂ in der Para-Position. Am meisten bevorzugt sind die Verbindungen 5-Methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion, 5-Hexyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4-6-trion, 5-Benzyloxymethyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion und 5-(2-Hydroxyethyl)-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
Die Verbindungen der Formel I können gemäß den folgenden Schemata I-II hergestellt werden. Die Verbindungen der Formel I werden gemäß dem folgenden Schema I hergestellt.
SCHEMA I
Die Verbindungen der Formel III werden durch die Behandlung der Verbindungen der Formel II mit einer starken Base, wie Natriumhydrid, Lithiumdiisopropylamid oder Lithium-bis(trimethylsilyl)amid in einem aprotischen Lösungsmittel, wie etwa Tetrahydrofuran (THF), hergestellt. Das resultierende Anion wird anschließend mit Dimethylcarbonat oder Dimethylchloroformat bei Temperaturen im Bereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss reagiert, um eine Verbindung der Formel III zu bilden.
Die Verbindungen der Formel IV werden durch Reagieren einer Verbindung der Formel III mit Harnstoff in einer basischen Lösung, wie etwa Natriummethoxid in Methanol, unter Rückfluss hergestellt.
Die Verbindungen der Formel I werden hergestellt durch Reagieren einer Verbindung der Formel IV mit einer starken Base, wie etwa Natriumhydrid, Lithiumdiisopropylamid, Lithium-bis(trimethylsilyl)amid, in einem aprotischen Lösungsmittel, wie etwa THF, zur Bildung eines Anions. Das Anion wird dann mit einem Alkylhalogenid, wie etwa Methyljodid, Hexylbromid, Allylbromid oder Benzylchlormethylether, bei Temperaturen im Bereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss behandelt. N-substituierte 2,4-6-Trione werden anschließend durch Chromatographie entfernt, um die gewünschte Verbindung der Formel I bereitzustellen.
Die Verbindungen der Formel II sind bekannt oder können durch bekannte Verfahren erhalten werden.
Die Verbindungen der Formel I können auch wie in Schema II beschrieben hergestellt werden.
SCHEMA II
Die Verbindungen der Formel V werden hergestellt durch Reagieren einer Verbindung der Formel III mit einer starken Base, wie etwa Natriumhydrid, Lithiumdiisopropylamid, Lithium-bis(trimethylsilyl)amid, in einem aprotischen Lösungsmittel, wie etwa THF. Das resultierende Anion wird anschließend mit einem Alkylhalogenid behandelt, wie etwa Methyljodid, Hexylbromid, Allylbromid oder Benzylchlormethylether, bei Temperaturen im Bereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss.
Im Fall der Verbindung der Formel V, wobei R₁ Hydroxymethyl ist, werden Verbindungen der Formel V ebenfalls durch Reagieren einer Verbindung der Formel III mit einer starken Base, wie etwa Natriumhydrid, Lithiumdiisopropylamid, Lithium-bis(trimethylsilyl)amid in einem aprotischen Lösungsmittel, wie etwa THF, hergestellt. Das resultierende Anion wird anschließend mit Ethylenoxid behandelt. Alternativ werden im Fall einer Verbindung der Formel V, wobei R₁ Hydroxymethyl ist, Verbindungen der Formel V auch durch Durchführen einer oxidativen Spaltung der Verbindung der Formel III, Dimethyl-2-)2-propenyl)-2-(4-phenoxyphenyl)malonat mit Ozon und Reduzieren des resultierenden Ozonids mit einem Phosphin oder einem Thiol, um das Aldehyd zu ergeben, welches anschließend mit dem Alkohol reduziert wird, unter Verwendung eines Reduktionsmittels, wie etwa Natriumborhydrid hergestellt.
Verbindungen der Formel I werden hergestellt durch Erwärmen von Verbindungen der Formel V mit Harnstoff in Gegenwart von Mg(OCH₃)₂ in Form einer Paste bei 80 bis 100 °C für eine Zeitdauer, die ausreichend ist, um die Reaktion zu vollenden.
Falls gewünscht, kann eine saure Verbindung der Formel I mit einer Base auf bekannte Art und Weise in ein pharmazeutisch annehmbares Salz umgewandelt werden. Geeignete Salze sind solche, die nicht nur von anorganischen Basen abgeleitet sind, z.B. Natrium-, Kalium- oder Calciumsalze, sondern auch jene, die von organischen Basen abgeleitet sind, wie etwa Ethylendiamin, Monoethanolamin oder Diethanolamin.
Die Verbindungen der Formel O und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze und Pro-Pharmaka inhibieren die Matrix-Metallprotease und sind somit geeignet zur Behandlung oder Bekämpfung von Krebs, der mit einer Überexpression von Gelatinase-A und/oder Gelatinase-B assoziiert ist, insbesondere Hautkrebs, Brustkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs und Magenkrebs. Die Verbindungen der Erfindung sind auch geeignet für andere Krankheiten, die mit der unregulierten Zersetzung der extrazellulären Matrix assoziiert sind, einschließlich rheumatoider Arthritis, Osteoarthritis, Multipler Sklerose, Hornhautexulzeration, Periodontalkrankheiten und dgl.
Die humane Gelatinase mit 72 kDa wurde aus dem konditionierten Medium von fötalen Lungenfibroblasten gemäß bekannten Verfahren aufgereinigt. Das Enzym wurde in der Pro-Form bei –80 °C gelagert und vor der Verwendung durch Behandlung mit 1 mM Aminophenyl-Quecksilberacetat (APMA) für 1 Stunde bei 37 °C aktiviert, anschließend vor der Verwendung gegen einen Reaktionspuffer dialysiert. Humane Neutrophil-Gelatinase (95 kDa Gelatinase) wurde aus konditioniertem Medium von NSO-Zellen gemäß bekannten Verfahren aufgereinigt. Dieses Enzym wurde gleichermaßen in der Zymogen-Form bei –80 °C gelagert. Es wurde durch Behandlung mit Trypsin (5 μg/ml) für 1 Stunde bei 37 °C aktiviert, gefolgt von einer Zugabe von Rinder-Pankreas-Trypsininhibitor in einer Menge von 50 μg/ml. Humanes Matrilysin wurde aus einem bakteriellen Expressionssystem als Ubiquitin-Fusionskonstrukt gemäß Welch, A.R., Holman, C.M., Browner, M.F., Gehring, M.R., Kan, C.-C. & Van Wart, H.E. (1995) Arch. Biochem. Biophys. 324, 59 – 64, erhalten. Die reife Form von Matrilysin wurde nach der Aktivierung mit 1 mM APMA (1 Stunde, 37 °C) aufgereinigt, und das aktive Enzym bei –80 °C gelagert. Die katalytische Domäne der humanen Kollagenase-3 wurde in analoger Weise zu Matrilysin erhalten. Die endgültige Form der Kollagenase-3, die für diese Studien verwendet wurde, bestand aus den Resten Tyr₁₀₄ – Asn₂₇₄ aus der gesamten Kollagenasensequenz. Die katalytische Domäne des humanen Stromelysin-1 wurde über E.coli-Expression erzeugt, und die Aufreinigung erfolgte gemäß bekannten Verfahren. Die aktivierte katalytische Domäne wurde bei –80 °C gelagert.
Die Assaymethoden verwendeten das fluorogene Substrat: Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH₂. (Dnp = Dinitrophenyl; Cha = Cyclohexylalanin; Cys(Me) = S-Methylcystein, Lys(NMA) = N^ε-Methyl-anthranoyl-1-lysin). Stammlösungen wurden in DMSO hergestellt. Stammlösungen der Verbindungen der Formel I (Inhibitor) wurden ebenfalls in DMSO hergestellt. Alle Reaktionen hatten einen endgültigen DMSO-Grad von 5 % (Vol/Vol.) in den angegebenen Puffern für die jeweiligen Enzyme.
Für Gelatinase-A und Gelatinase-B war der Puffer pH 7,5 50 mM Tris HCl, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 20 μM ZnCl₂, 0,05 % (Gew./Vol.) Brij-35. Für Matrilysin und die katalytische Domäne der Kollagenase-3 war die Pufferzusammensetzung pH 7,5, 50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 20 μM ZnCl₂, 0,05 % (Gew./Vol.) Brij-35. Die endgültige Substratkonzentration betrug in allen Fällen 10 μM. Die ungefähren Konzentrationen für die Enzyme waren: Gelatinase-A, 0,8 nM; Gelatinase-B, 0,5 nM; Kollagenase-3, 0,4 nM; Matrilysin, 10 nM. Um den Peptidspaltungsassay durchzuführen, wurde das Gefäß, welches Puffer und Verbindung der Formel I enthielt, bei 37 °C voräquilibriert, anschließend wurde die Reaktion initiiert durch aufeinanderfolgende Zugaben konzentrierter Stammlösungen von Enzym und Substrat, und wurde weitergeführt mit einer Inkubation bei 37 °C. Zu aufeinanderfolgenden Zeitpunkten zwischen 30 und 120 Minuten wurden 50 μl Proben der Assays genommen, und die enzymatische Reaktion wurde durch Zugabe von 150 μl 30 mM EDTA (pH 7,4) in der Vertiefung einer schwarzen Mikrotiterplatte mit flachem Boden gestoppt. Das Ausmaß der Substratkonversion wurde durch Ablesen der Fluoreszenz in den gestoppten Reaktionen (Anregungswellenlänge: 355 nm; Emissionswellenlänge: 460 nm) bestimmt. Positive Kontrollen wurden in Abwesenheit von Inhibitor durchgeführt; negative Kontrollen hatten kein Enzym und zeigten eine vernachlässigbare spontane Spaltung.
Graphen der Fluoreszenz gegen die Zeit (30 bis 120 Minuten) waren linear. Ein Vergleich mit Standards zeigte, dass die Substratkonversion weniger als 20 in allen Fällen betrug. Eine Geschwindigkeit für jede Inhibitorkonzentration wurde aus einer Annäherung der kleinsten Quadrate an den Fluoreszenzzeitverlauf erhalten. Der Prozentsatz des Inhibition bei der Inhibitorkonzentration [I] wurde wie folgt berechnet: %Inh[I] = 100 (1 – Geschwindigkeit[i]/Geschwindigkeit PC)wobei
%Inh[I] = Prozent Inhibition bei der Inhibitorkonzentration [I]
Geschwindigkeit [I] = Geschwindigkeit bei Inhibitorkonzentration [I]
Geschwindigkeit PC = Geschwindigkeit der positiven Kontrolle
Die IC₅₀ für den Inhibitor wurde dann erhalten durch Anpassung der Konzentrationsabhängigkeit der %Inh[I] an die einfache Bindungsisotherme: %Inh[I] = 100 (([I]/[IC50 + [I]))
Messungen für Stromelysin-1: Die katalytische Domäne von Stromelysin-1 wurde unter Verwendung desselben Substrats, aber mit einem modifizierten Protokoll durchgeführt. Der Assaypuffer war pH 6,5, 50 mM Mes, 2,5 mM EDTA, 5 mM CaCl₂ und 0,05 % (Gew./Vol.) Brij-35. Die Substratkonzentration betrug 10 μM, und die Enzymkonzentration betrug 10 nM. Reaktionen wurden bei Raumtemperatur durchgeführt. Geeignete Mengen an Puffer, Substrat und Inhibitor wurden in der Vertiefung einer schwarzen Mikrotiterplatte mit flachem Boden vereinigt. Die Reaktion wurde durch Zugabe eines Aliquots an Enzymstammlösung gestartet, und die erzeugte Fluoreszenz wurde direkt nach 60 Minuten abgelesen. Positive Kontrollen wurden in Abwesenheit von Inhibitor durchgeführt. Negative Kontrollen enthielten kein Enzym und zeigten eine endliche Zunahme während des Verlaufs des Assays. Um die enzymatischen Reaktionen zu korrigieren, wurde diese Hintergrundfluoreszenz von den Werten für die positive Kontrolle und die inhibierten Reaktionen abgezogen. Die %Inh[I] wurde wie folgt berechnet: %Inh[I] = 100 (1 – Fluor[I]/FluorPC)wobei Fluor[I] = korrigierte Fluoreszenz nach 60 Minuten, die für die Inhibitorkonzentration [I] beobachtet wurde
FluorPC = korrigierte Fluoreszenz bei 60 Minuten, die für die positive Kontrolle beobachtet wurde.
Die IC₅₀ für den Inhibitor wurde anschließend durch Anpassung der %inh[I] an die oben angegebene Einstellenbindungsisotherme erhalten.
Die IC₅₀ sind in der unten dargestellten Tabelle für die Verbindungen der Formel I gezeigt.

A = 5-Methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
B = 5-Hexyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
C = 5-Benzyloxymethyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
D = 5-(2-Hydroxyethyl)-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.

Die Verbindungen der Formel I und ihre Salze und Pro-Pharmaka können als Medikamente verwendet werden, beispielsweise in Form von pharmazeutischen Zubereitungen, welche oral verabreicht werden können, beispielsweise in Form von Tabletten, überzogenen Tabletten, Dragees, harten oder weichen Gelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen. Sie können auch rektal verabreicht werden, beispielsweise in Form von Zäpfchen, oder parenteral, beispielsweise in Form von Injektionslösungen.
Zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen können diese Verbindungen mit therapeutisch inerten, anorganischen oder organischen Trägern formuliert werden. Lactose, Maisstärke oder Derivate davon, Talkum, Stearinsäure oder deren Salze können als derartige Träger für Tabletten, überzogene Tabletten, Dragees und harte Gelatinekapseln verwendet werden. Geeignete Träger für weiche Gelatinekapseln sind pflanzliche Öle, Wachse, Fette, halbfeste oder flüssige Polyole. Je nach der Natur der aktiven Substanz sind jedoch im Allgemeinen im Fall von weichen Gelatinekapseln keine Träger erforderlich. Geeignete Träger für die Herstellung von Lösungen und Sirupen sind Wasser, Polyole, Saccharose, Invertzucker und Glucose. Geeignete Träger für Injektionslösungen sind Wasser, Alkohole, Polyole, Glycerin und pflanzliche Öle. Geeignete Träger für Zäpfchen sind natürliche oder gehärtete Öle, Wachse, Fette und halbflüssige Polyole.
Die pharmazeutischen Zubereitungen können auch Konservierungsmittel, Solubilisierungsmittel, Stabilisierungsmittel, Benetzungsmittel, Emulgiermittel, Süßungsmittel, Färbemittel, Geschmacksmittel, Salze zum Variieren des osmotischen Drucks, Puffer, Beschichtungsmittel oder Antioxidantien enthalten. Sie können auch noch weitere therapeutisch wertvolle Substanzen enthalten.
Die Verbindungen der Formel I und die zuvor genannten Salze und Pro-Pharmaka können bei der Behandlung oder Bekämpfung von Krebs verwendet werden, der mit einer Überexpression von Gelatinase-A und/oder Gelatinase-B assoziiert ist, insbesondere Hautkrebs, Brustkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs und Magenkrebs. Die Verbindungen der Erfindung sind auch geeignet für andere Krankheiten, die mit einer unregulierten Zersetzung der extrazellulären Matrix assoziiert sind, einschließlich rheumatoider Arthritis, Osteoarthritis, Multipler Sklerose, Hornhautexulzeration, Periodontalkrankheiten und dgl. Die Dosis kann innerhalb breiter Bereiche variieren und wird an die individuellen Erfordernisse jedes einzelnen Falles angepasst. Im Allgemeinen sollte für den Fall oraler oder parenteraler Verabreichung an erwachsene Menschen eine tägliche Dosis von etwa 10 mg bis 1000 mg, und vorzugsweise 100 mg bis 500 mg angemessen sein, obgleich die obere Grenze überschritten werden kann, wenn sich dies als zweckdienlich herausstellt. Die tägliche Dosis kann als Einzeldosis oder in aufgeteilten Dosen verabreicht werden, oder für parenterale Verabreichung kann sie als eine kontinuierliche Infusion gegeben werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die vorliegende Erfindung, ohne sie einzuschränken. Wie hierin verwendet, bedeutet THF Tetrahydrofuran und EtOAc bedeutet Ethylacetat.
Beispiel 1 (Referenz)
Zu einer Suspension von NaH (1,02 g 60 %iger NaH in Mineralöl, gewaschen mit Hexanen, 0,61 g, 25,6 mmol) in trockenem THF (30 ml) wurde Methyl(4-phenoxyphenyl)acetat (2,7 g, 11,1 mmol) in trockenem THF (10 ml) hinzugegeben. Das resultierende Gemisch wurde bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt, und anschließend wurde Dimethylcarbonat (4,0 g, 3,75 ml, 44,4 mmol) hinzugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bis zum Rückfluss erhitzt und anschließend auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 1N HCl (60 ml) gequencht, und mit Ether extrahiert (2 × 100 ml). Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser, anschließend mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), konzentriert und unter Verwendung von HPLC (Porasil), eluiert mit 15 % EtOAc/Hexanen, aufgereinigt, um 2,56 g Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat als weißen Feststoff zu ergeben: ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃), δ 7,39 – 6,92 (9H, m), 4,65 (1H, s), 3,75 (6H, s).
Beispiel 2 (Referenz)
Zu einer NaOCH₃-Lösung (hergestellt durch Reagieren von 0,23 g eines Na-Metalls mit 7,2 ml trockenem CH₃OH) wurde Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (1,0 g, 3,33 mmol) hinzugegeben, gefolgt von Harnstoff (0,4 g, 6,66 mmol). Das resultierende weiße Reaktionsgemisch wurde für 24 Stunden einem Rückfluss unterzogen und anschließend auf 0 °C abgekühlt und mit 3N HCl gesäuert. Die weißen Feststoffe wurden filtriert und mit Wasser gewaschen und getrocknet, um 900 mg Rohprodukt zu ergeben. Dieses wurde weiter aufgereinigt durch Zerreiben mit EtOAc/Hexanen (1 : 1), um 5-(4-Phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion als weißes Pulver (830 mg) zu ergeben:¹H NMR (400 mHz, CDCl₃d) 3: 2 Keto/Enol-Form δ 11,38 (2 × NH Keto-Form, s) 10,58 (2 × NH Enol-Form, s), 7,46 – 6,91 (9H, m), 4,85 (H-5, s); HRMS berechnet für C₁₆H₁₂N₂O₄ 296,0796; gefunden 296,0806.
Beispiel 3
Das Folgende wurde in einer inerten Atmosphäre durchgeführt:
Zu einer Suspension von NaH (16,21 g von 60 % in Mineralöl, 9,72 mg, 0,405 mmol) in trockenem THF wurde 5-(4-Phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion (100 mg, 0,34 mmol) hinzugegeben. Nachdem das Gemisch bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt worden war, wurde Methyljodid (48,2 mg, 0,34 mmol) hingegeben. Die Reaktion wurde bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt, und anschließend wurde zusätzliches NaH (24 mg von 60 % in Mineralöl, 14 mg, 0,60 mmol) hinzugegeben, gefolgt von Methyljodid (96,4 mg, 0,86 mmol). Dieses Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt und anschließend über Nacht einem Rückfluss unterzogen. Die Reaktionslösung wurde mit EtOAc verdünnt und anschließend mit 1N HCl gequencht. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit Wasser, Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), konzentriert und anschließend durch Chromatographie auf einem Chromatotron unter Verwendung einer Silicagelplatte (1000 Mikron) mit 30 % EtOAc/Hexane, und anschließend 50 EtOAc/Hexane und schließlich EtOAc aufgereinigt, um 1,3-Di-N-Methyl-5-methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion (7,3 mg) und 1-N-Methyl-5- methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion (10,0 mg) und anschließend 5-Methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion (27 mg) in der Reihenfolge der Eluierung zu ergeben.
Die Spektren für 5-Methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion: ¹H NMR (200 mHz, CD₃OD) δ 7,37 – 6,95 (9H, m), 1,77 (3H, s); HRMS berechnet für C₁₇H₁₄N₂O₄ 310,0954; gefunden 310,0963.
Die Spektren für 1-N-methyl-5-methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion: ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃) δ 8,38 (1NH, s), 7,39 – 6,92 (9H, m), 3,31 (3H, s), 1,86 (3H, s); HRMS berechnet für C₁₈H₁₆N₂O₄ 324,1110; gefunden 324,1116.
Die Spektren für 1,3-Di-N-methyl-5-methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion: ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃) δ 7,38 – 6,91 (9H, m), 3,34 (6H, s), 1,85 (3H, s); HRMS berechnet für C₁₉H₁₈N₂O₄ 338,1267; gefunden 338,1267.
Beispiel 4
Schritt 1:
Durchgeführt in einer inerten Atmosphäre:
Zu einer Suspension von NaH (144 mg von 60 % in Mineralöl gewaschen mit Hexanen, 86,4 mg, 3,6 mmol) in trockenem THF (20 ml) wurde vorsichtig Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (900 mg, 3,0 mmol) hinzugegeben. Das resultierende Gemisch wurde bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt, und anschließend wurde 1-Jodhexan (1,27 g, 0,89 ml, 6,0 mmol) hinzugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt und anschließend über Nacht bis zum Rückfluss erhitzt. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 1N HCl (20 ml) gequencht und mit Ether extrahiert (2 × 40 ml). Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit gesättigtem Na₂S₂O₃, Wasser, anschließend Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), konzentriert und durch Chromatographie unter Verwendung eines Chromatotrons mit einer Silicagelplatte (4000 Mikron), eluiert mit 13 % EtOAc/Hexanen, aufgereinigt, um 950 mg Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)-2-n-hexylmalonat als viskoses Öl zu ergeben. ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃) δ 7,39 – 6,92 (9H, m), 3,75 (6H, s), 2,10 (2H, t), 1,29 (8H, m), 0,87 (3H, t).
Schritt 2:
Mg(OCH₃)₂ wurde wie folgt hergestellt. Zu einer 25 ml Rundbodenflasche unter Argon wurden hinzugegeben: Mg Tunings (90 mg, 3,70 mmol), trockenes CH₃OH (2 ml), 2 Tropfen CCl₄ und eine katalytische Menge an Mg-Pulver. Es fand eine exotherme Reaktion statt, und die Entwicklung von Wasserstoffgas wurde beobachtet. Nachdem die anfängliche exotherme Reaktion abgeklungen war, wurde das Reaktionsgemisch bis zum Rückfluss für 1 Stunde erhitzt und anschließend auf Raumtemperatur abgekühlt. Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)-2-n-hexylmalonat (500 mg, 1,30 mmol) und Harnstoff (162 mg, 2,70 mmol) wurden zu dem Mg(OCH₃)₂ hinzugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde für 1 Stunde auf 85 – 90 °C erwärmt, und anschließend wurde überschüssiges CH₃OH abdestilliert, bis eine Fluid-Paste erhalten wurde, und diese Paste wurde über Nacht auf 85 – 90 °C erwärmt. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, mit EtOAc verdünnt und mit 1N HCl gewaschen. Die saure wässrige Schicht wurde mit EtOAc re-extrahiert. Die vereinigten EtOAc-Extrakte wurden mit Wasser, Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und konzentriert. Das resultierende Öl wurde durch HPLC (Porasil) unter Verwendung von 30 % EtOAc/Hexanen als Eluent aufgereinigt, um 330 mg 5-n-Hexyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion als weißen Schaum zu ergeben: ¹H NMR (400 mHz DMSO-d₆) δ 11,71 (2NH, s), 7,42 – 6,99 (9H, m), 2,22 (2H, t), 1,24 (8H, m), 0,85 (3H, t); HRMS berechnet für C₂₂H₂₄N₂O₄ 380,1736; gefunden 380,1740.
Beispiel 5
Schritt 1:
Durchgeführt in einer inerten Atmosphäre.
Zu einer Suspension von NaH (0,37 g von 60 % in Mineralöl gewaschen mit Hexanen, 0,22 g, 9,2 mmol) in trockenem THF (30 ml) wurde vorsichtig Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (2,5 g, 8,33 mmol) hinzugegeben. Das resultierende Gemisch wurde bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt, und anschließend wurde Benzylchlormethylether (1,43 g, 1,27 ml, 9,16 mmol) hinzugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und mit gesättigtem NH₄Cl gequencht und anschließend mit Ether (100 ml) extrahiert. Der Etherextrakt wurde getrocknet (MgSO₄) und konzentriert, um 4,0 g viskoses Öl zu ergeben. Dieses wurde unter Verwendung von HPLC (Porasil) eluiert mit 15 % EtOAc/Hexanen aufgereinigt, um 2,1 g Dimethyl-2-benzyloxymethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat als viskoses Öl zu ergeben: ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃) δ 7,48 – 6,95 (14H, m), 4,55 (2H, s), 4,20 (2H, s), 3,75 (6H, s).
Schritt 2:
Mg(OCH₃)₂ wurde wie in Beispiel 4 Schritt 2 hergestellt aus: Mg (116 mg, 4,76 mmol), trockenem CH₃OH (3,0 ml), 1 Tropfen CCl₄, einer katalytischen Menge Mg-Pulver. Hierzu wurde Dimethyl-2-benzyloxymethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (700,0 mg, 1,67 mmol), Harnstoff (208,0 mg, 3,47 mmol) hinzugegeben, und das Gemisch wurde bis zum Rückfluss erhitzt, und anschließend wurde überschüssiges CH₃OH abdestilliert, bis eine Paste erhalten wurde. Die resultierende Paste wurde über Nacht auf 85 – 90 °C erwärmt. Die weitere Verarbeitung, wie in Beispiel 4 beschrieben, ergab nach der Konzentrierung ein viskoses Öl (0,75 g), welches unter Verwendung eines Chromatotrons mit einer Silicagelplatte (4000 Mikron) und eluiert mit 40 EtOAc/Hexanen chromatographiert wurde, um 180 mg 5-Benzyloxymethyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion als weißen Feststoff zu ergeben: ¹H NMR (400 mHz, DMSO-d₆) δ 8,01 (2NH, s), 7,38 – 6,94 (15H, m), 4,58 (2H, s), 4,27 (2H, s); HRMS berechnet für C₂₄H₂₀N₂O₅ 416,1372; gefunden 416,1383.
Beispiel 6
Schritt 1:
Eine Lösung aus Dimethyl-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (2,56 g, 8,54 mmol) in trockenem THF (5 ml) wurde auf –78 °C abgekühlt, und anschließend wurde Lithiumdiisopropylamid (4,7 ml einer 2M Lösung in THF, 9,8 mmol) hinzugegeben. Die Reaktion wurde bei –78 °C für 1 Stunde gerührt, und anschließend wurde Allylbromid (11,4 mg, 9,4 mmol) hinzugegeben. Die Reaktion wurde bei –78 °C für 3 Stunden gerührt und wurde dann auf Raumtemperatur erwärmt und in einem Ölbad bei 75 °C erwärmt, bis die Reaktion sich durch TLC als beendet erwies. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 1N HCl gequencht. Eine Extraktion mit Ether und Trocknen der Etherextrakte (MgSO₄) ergab ein Rohprodukt. Die Aufreinigung durch Filtration durch Silicagel 60 (70 – 230 mesh) unter Verwendung von EtOAc, gefolgt von HPLC (Porasil) unter Verwendung von 11 % EtOAc/Hexanen ergab 1,8g Dimethyl-2-(2-propenyl)-2-(4-phenoxyphenyl)malonat als viskoses Öl: ¹H NMR (200 mHz, CDCl₃) δ 7,4 – 6,85 (9H, m), 5,75 (1H, m), 5,05 (2H, m), 3,75 (6H, s), 3,1 (2H, d).
Schritt 2:
Eine Lösung aus Dimethyl-2-(2-propenyl)-2-(4-phenoxyphenyl)malonat (1,8 g, 5,3 mmol) in CH₂Cl₂ (200 ml) wurde auf –70 °C abgekühlt, und anschließend wurde O₃ hindurchgeleitet, bis eine blaue Farbe vorherrschte. Die blaue Lösung wurde mit Argon entgast, und, immer noch bei –70 °C, mit Ph₃P (4,0 g, 15,2 mmol) behandelt und langsam auf Raumtemperatur erwärmt. Die Konzentrierung, gefolgt von einer Aufreinigung durch HPLC (Porasil) unter Verwendung von 20 % EtOAc/Hexanen ergab 1,66 g des Aldehyds als Öl. Dieses wurde in CH₃OH (50 ml) gelöst und NaBH₄ (0,184 g, 4,85 mmol) wurden hinzugefügt, und die Reaktion bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt. Nach der Konzentrierung wurde der Rückstand in EtOAc gelöst und mit Wasser, Salzlösung gewaschen und anschließend getrocknet (MgSO₄), und konzentriert, um 1,55 g eines Gemisches aus Dimethyl-2-(2-hydroxyethyl)-2-(4-phenoxyphenyl)malonat und seinem davon abgeleiteten Lacton zu ergeben.
Schritt 3:
Mg(OCH₃)₂ wurde wie in Beispiel 4 Schritt 2 hergestellt aus: Mg (116 mg, 4,76 mmol), 3ml CH₃OH, 1 Tropfen CCl₄ und einer katalytischen Menge an Mg-Pulver. Hierzu wurde das obige Gemisch aus Dimethyl-2-(2-hydroxyethyl)-2-(4-phenoxyphenyl)malonat und seinem davon abgeleiteten Lacton (521 mg, 1,67 mmol) und Harnstoff (228 mg, 3,47 mmol) hinzugegeben, und das Gemisch wurde bis zum Rückfluss erhitzt, und anschließend wurde überschüssiges CH₃OH abdestilliert, bis eine Paste erhalten wurde. Die resultierende Paste wurde auf 85 – 90 °C für 8 Stunden erwärmt und anschließend auf Raumtemperatur abgekühlt. Die Reaktion wurde unter EtOAc und 10 ml 1N HCl aufgeteilt. Die EtOAc-Schicht wurde abgetrennt, getrocknet (Na₂SO₄) und konzentriert, um 600 mg eines Rohprodukts zu ergeben. Eine Chromatographie unter Verwendung eines Chromatotrons mit einer Silicagelplatte (2000 Mikron) eluiert mit EtOAc ergab 120 mg reines 5-(2-Hydroxyethyl)-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion als weißen Feststoff: IR (KBr) 3214, 3100, 1765(sh), 1705 cm^–1; ¹H NMR (400 mHz, DMSO-d₆) δ 11,48 (2H, br s, N-H), 7,45 – 6,95 (9H, m), 4,85 (1H, t, OH), 3,50 (2H, m), 2,50 (2H, m); HRMS berechnet für C₁₈H₁₆N₂O₅ 340,1059, gefunden 340,1055.
Beispiel 7 TABLETTENFORMULIERUNG
Herstellungsverfahren:

1. Mischen der Bestandteile 1, 2 und 3 in einem geeigneten Mischer für 15 Minuten.
2. Granulieren des Pulvergemisches aus Schritt 1 mit 15 % Povidon K30-Lösung (Bestandteil 4).
3. Trocknen des Granulats aus Schritt 2 bei 50 °C.
4. Mahlen des Granulats aus Schritt 3 in einer geeigneten Mahlvorrichtung.
5. Hinzufügen von Bestandteil 5 zu dem gemahlenen Granulat aus Schritt 4 und Mischen für 5 Minuten.
6. Komprimieren des Granulats aus Schritt 5 in einer geeigneten Presse.
7. Unter Verwendung eines geeigneten Luftsprühsystems, Beschichten der Kerne aus Schritt 6 mit einer Filmüberzugssuspension enthaltend Hydroxypropylmethylcellulose 6 cps-2910, Talkum und Titandioxid.

Beispiel 8 KAPSELFORMULIERUNG
Herstellungsverfahren:

1. Mischen der Bestandteile 1, 2 und 3 in einem geeigneten Mischer für 15 Minuten.
2. Hinzufügen der Bestandteile 4 und 5 und Mischen für 3 Minuten.
3. Abfüllen des Pulvergemisches aus Schritt 2 in eine geeignete Kapsel.

Claims

Verbindungen der Formel I
wobei R₁ Wasserstoff, C_1-7-Alkyl, Hydroxmethyl oder Benzyloxy ist; und R₂ Phenoxy ist; und pharmazeutisch annehmbare Salze einer sauren Verbindung der Formel I davon.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R₂ in der para-Stellung ist.
5-Methyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
5-Hexyl-5-(4-phenoxyphenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
5-Benzyloxymethyl-5-(4-phenoxy-phenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
5-(2-Hydroxyethyl)-5-(4-phenoxy-phenyl)pyrimidin-2,4,6-trion.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Verwendung als Arzneimittel.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Herstellung eines Arzneimittels, enthaltend eine solche Verbindung zur Behandlung oder Bekämpfung von Hautkrebs, Brustkrebs, Prostatakrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs, Magenkrebs, Rheumatoider Arthrits, Osteoarthritis, Multipler Sklerose, Hornhautgeschwürbildung und Periodontalerkrankung.