DE60003220T2

DE60003220T2 - [1,2,3]-TRIAZOLO[4,5-d]PYRIMIDIN-DERIVATE ALS ANTITHROMBOTISCHE MITTEL

Info

Publication number: DE60003220T2
Application number: DE60003220T
Authority: DE
Inventors: Simon Loughborough GUILE; Brian Loughborough SPRINGTHORPE
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1999-11-15
Filing date: 2000-11-14
Publication date: 2004-07-15
Anticipated expiration: 2020-11-15
Also published as: EP1232156B1; JP4859321B2; EP1232156A1; AU1428801A; ATE242246T1; WO2001036421A1; US6713483B1; SE9904129D0; DE60003220D1; JP2003514819A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt neue [1,2,3]-Triazolo[4,5-d]pyrimidinanaloga, ihre Verwendung als Arzneimittel, diese Verbindungen enthaltende Zusammensetzungen und Verfahren zu ihrer Herstellung bereit.
ALLGEMEINER STAND DER TEHNIK
Thrombozytenadhäsion und -aggregation sind einleitende Ereignisse bei arterieller Thrombose. Die Adhäsion von Thrombozyten an die sub-endotheliale Oberfläche mag eine wichtige Rolle bei der Reparatur geschädigter Gefäßwände spielen, die diesen Vorgang einleitende Thrombozytenaggregation kann jedoch eine akute thrombotische Verstopfung vitaler Gefäßbahnen verursachen, was zu Ereignissen mit hoher Morbidität wie Herzinfarkt und instabiler Angina führt. Zum Erfolg von Eingriffen zur Verhinderung bzw. Linderung dieser Zustände, wie beispielsweise Thrombolyse, durch Thrombozyten vermittelte Okklusion bzw. Reokklusion, gehört auch Angioplastie.
Zur Thrombozytenaggregation kommt es auf einer Reihe von konvergierenden Pfaden. Dabei ist das abschließende gemeinsame Ereignis, unabhängig von dem ursprünglichen Anlaß, eine Quervernetzung von Thrombozyten durch Bindung von Fibrinogen an eine Membranbindungsstelle, das Glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). Die hohe Antithrombozytenwirkung von Antikörpern bzw. Antagonisten für GPIIb/IIIa erklärt sich dadurch, daß sie dieses abschließende gemeinsame Ereignis stören. Die Blutungsprobleme, die mit dieser Klasse von Wirkstoffen beobachtet wurden, können jedoch gleichfalls durch diese Wirkung erklärt werden.
Thrombin kann eine Thrombozytenaggregation mehr oder weniger unabhängig von anderen Pfaden bewirken, jedoch ist es unwahrscheinlich, daß größere Mengen an Thrombin vorliegen, ohne daß die Thrombozyten zuvor durch andere Mechanismen aktiviert wurden. Thrombininhibitoren wie Hirudin sind hochwirksame Antithrombosemittel, können jedoch ebenfalls zu übermäßigen Blutungen führen, da sie sowohl als Anti-Thrombozytenmittel als auch als Antikoagulantien wirken (The TIMI 9a Investigators (1994), Circulation 90, S. 1624–1630; The Global Use of Strategies to Open Occluded Coronary Arteries (GUSTO) IIa Investigators (1994) Circulation 90, S. 1631–1637; Neuhaus K. L. et al. (1994) Circulation 90, S. 1638– 1642).
Es wurde gefunden, daß Adenosin-5'-diphosphat (ADP) als einer der Hauptmediatoren bei Thrombose wirkt. Die ADP-induzierte Thrombozytenaggregation wird durch den P_2T-Rezeptor-Subtyp, der sich auf der Thrombozytenmembran befindet, vermittelt. Der P_2T-Rezeptor (auch als P2Y_ADP bzw. P2T_AC bekannt), bei dem es sich um ein G-Protein handelt, ist primär an der Vermittlung der Thrombozytenaggregation/-aktivierung beteiligt. Die pharmakologischen Eigenschaften dieses Rezeptors sind beispielsweise in den Literaturstellen Humphries et al., Br. J. Pharmacology, (1994), 113, 1057–1063 und Fagura et al., Br. J. Pharmacology (1998) 124, 157–164 beschrieben. Vor kurzem wurde gezeigt, daß Antagonisten für diesen Rezeptor gegenüber anderen Antithrombosemitteln beträchtliche Vorteile bieten (siehe J. Med. Chem. (1999) 42, 213). Es besteht ein Bedarf für P_2T- (P2Y_ADP- bzw. P2T_AC-)Antagonisten als Antithrombosemittel.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Gemäß einem ersten Aspekt der Erfindung werden Verbindungen der Formel (I):
wobei:
R¹ für OR⁵ oder CH₂R⁶ steht;
R² für C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Halogenalkyl steht;
R³ für gegebenenfalls durch R⁷ substituiertes C_3-6-Cycloalkyl steht;
R⁴ für C_1-6-Alkyl steht;
R⁵ für H oder gegebenenfalls durch OH substituiertes C_1-6-Alkyl steht;
R⁶ für OH, N₃ oder NHR⁸ steht;
R⁷ für gegebenenfalls durch eine oder mehrere aus C_1- ₆-Alkyl, Halogen und OR¹⁰ ausgewählte Gruppen substituiertes Phenyl steht;
R⁸ für H, C_1- ₆-Alkyl oder COR⁹ steht;
R⁹ für C_1- ₆-Alkyl steht;
R¹⁰ für C_1-6-Alkyl steht;
und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und Solvate, und Solvate solcher Salze bereitgestellt.
Vorzugsweise hat die Verbindung der Formel (I) die folgende Stereochemie:
wobei R³ für
die Stereochemie ist vorzugsweise
Geeigneterweise steht R¹ für OH, O(CH₂)₂OH, CH₂OH, CH₂N₃, CH₂NH₂ oder CH₂NHAc.
Geeigneterweise steht R² für n-Pr.
Geeigneterweise steht R³ für gegebenenfalls durch Phenyl, das gegebenenfalls durch eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus C_1- ₆-Alkyl, Halogen und OR¹⁰ substituiert ist, substituiertes Cyclopropyl.
Geeigneterweise steht R⁹ für Methyl.
Zu den besonders bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen gehören:
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(2-Hydroxyethoxy)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propyl thio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-cyclopentan-1,2-diol;
[1S-(1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-(7-[N-Methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3)-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol;
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(Hydromethyl)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-cyclopentan-1,2-diol;
[1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-[2-(3,4-Difluorphenylcyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol;
[1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-N-[2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol;
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Azidomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol;
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Aminomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol;
[1R-[1α,2β,3β,4α(1R*,2S*)]]-N-[[2,3-Dihydroxy-4-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-cyclopentyl]methyl]acetamid;
und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und Solvate, und Solvate solcher Salze.
Gemäß der Erfindung wird weiterhin ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) bereitgestellt, bei dem man:

a. für Verbindungen der Formel (Ia), in denen R¹ für O(CH₂)₂OH steht, eine Verbindung der Formel (II)
wobei R², R³ und R⁴ wie in Formel (I) definiert sind, P und P' für Schutzgruppen, beispielsweise CMe₂, stehen, mit 2-(2-Bromethoxy)-2H-tetrahydropyran in Gegenwart von Dimethylsulfoxid, einem Phasentransferkatalysator wie einem Tetraalkylammoniumhalogenid, vorzugsweise Tetrabutylammoniumbromid, und Natronlauge in Gegenwart eines nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, vorzugsweise Toluol, bei einer Temperatur zwischen etwa 50 und etwa 120°C umsetzt und anschließend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt.

Schutzgruppen können unter Anwendung bekannter Reaktionsbedingungen eingeführt und entfernt werden. Die Verwendung von Schutzgruppen ist in „Protective Groups in Organic Chemistry", herausgegeben von J W F McOmie, Plenum Press (1973), und „Protective Groups in Organic Synthesis", 2. Auflage, T W Greene & P G M Wutz, Wiley-Interscience (1991), ausführlich beschrieben.
Tetrahydropyranylgruppen lassen sich mit einer Säure, beispielsweise Trifluoressigsäure, in Wasser oder wäßrigem Acetonitril, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C entfernen.
Verbindungen der Formel (II) lassen sich darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (III)
in welcher P, P' und R² wie oben definiert sind, mit R³R⁴NH in Gegenwart einer Base, vorzugsweise N,N-Diisopropylethylamin, in einem inerten etherischen Lösungsmittel, vorzugsweise Diethylether oder Tetrahydrofuran, oder einem Chlorkohlenwasserstoff-Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt.
Steht R³R⁴NH für
und R⁷ für Phenyl, so kann man die Verbindung wie von C. Kaiser et al., J. Org. Chem., 1962, 27, 768–773, unter Verwendung von (1R-traps)-2-Phenylcyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (hergestellt wie von L. A. Mitscher et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 2044, beschrieben) darstellen.
Steht R³R⁴NH für
so lassen sich solche Verbindungen durch Acylierung von
(hergestellt wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9905143 beschrieben) mit Essigsäureanhydrid und Kaliumcarbonat in Tetrahydrofuran bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen. Das Produkt dieser Umsetzung läßt sich mit Natriumhydrid und Methyliodid in Tetrahydrofuran bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C methylieren, worauf sich eine Deacylierung mit wäßriger Salzsäure bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 100°C anschließt.
Verbindungen der Formel (III) lassen sich durch Diazotierung einer Verbindung der Formel (IV)
in welcher P, P' und R² wie oben definiert sind, mit einem Alkylnitrit, vorzugsweise Isoamylnitrit, in einem dipolaren aprotischen Lösungsmittel, vorzugsweise Acetonitril, bei einer Temperatur zwischen etwa 50 und etwa 100°C darstellen.
Verbindungen der Formel (IV) lassen sich durch Reduktion einer Verbindung der Formel (V),
in welcher P, P' und R² wie oben definiert sind, unter Verwendung eines Metalls, vorzugsweise Eisenpulver, in Gegenwart einer Säure, vorzugsweise Essigsäure, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Verbindungen der Formel (V) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (VI),
in welcher P und P' wie oben definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (VII):
in welcher R² wie oben definiert ist, in Gegenwart einer Base, vorzugsweise N,N-Diisopropylethylamin, in einem inerten etherischen Lösungsmittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Steht R² für n-Pr, so kann man die Verbindung der Formel (VII) wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9703084 beschrieben darstellen.
Verbindungen der Formel (VI) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (VIII),
mit einem Ketal oder Acetal, vorzugsweise 2,2-Dimethoxypropan, in Aceton als Lösungsmittel, in Gegenwart einer Säure, vorzugsweise p-Toluolsulfonsäure, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C und anschließende Hydrolyse und Decarboxylierung des geschützten Iminodiesters unter wäßrigen Bedingungen, vorzugsweise in Wasser, bei einer Temperatur zwischen etwa 100 und etwa 120°C darstellen.
Verbindungen der Formel (VIII) lassen sich durch Dihydroxylierung einer Verbindung der Formel (IX),
unter Verwendung von Osmiumtetroxid in Gegenwart eines Oxidationsmittels, vorzugsweise N-Methylmorpholin-N-oxid, unter wäßrigen Bedingungen, vorzugsweise in wäßrigem Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Verbindungen der Formel (IX) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (X):
mit einem geschützten Amin, vorzugsweise Imidocarbonsäure-bis(1,1-dimethylethyl)ester, in Gegenwart einer Base, vorzugsweise Natriumhydrid, und eines metallorganischen Katalysators, vorzugsweise Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0), in einem inerten etherischen Lösungsmittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 100°C darstellen.

b. Für Verbindungen der Formel (Ia), in denen R¹ für OH steht, eine Verbindung der Formel (XI):
in welcher P für eine Schutzgruppe steht und R² und R³ wie oben definiert sind, mit einer Base, vorzugsweise Natriumhydrid, und einem Alkylierungsmittel, vorzugsweise Methyliodid, in einem inerten dipolaren aprotischen Lösungsmittel, vorzugsweise N,N-Dimethylformamid, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt.

Zu den Schutzgruppen gehören Trialkylsilylgruppen, vorzugsweise die t-Butyldimethylsilylgruppe. Diese läßt sich durch Umsetzung mit einem Tetraalkylammoniumfluorid, vorzugsweise Tetrabutylammoniumfluorid, unter wäßrigen Bedingungen, vorzugsweise wäßrigem Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C entfernen.
Verbindungen der Formel (XI) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (XII):
in welcher R² und R³ wie oben definiert sind, mit einem Trialkylsilylhalogenid, vorzugsweise t-Butyldimethylsilylchlorid, in Gegenwart von Imidazol, in einem inerten dipolaren aprotischen Lösungsmittel, vorzugsweise N,N-Dimethylformamid, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Verbindungen der Formel (XII) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (XIII):
in welcher R² wie in Formel (I) definiert ist, mit einem Amin R³NH₂, in Gegenwart einer Base, vorzugsweise N,N-Diisopropylethylamin, in einem inerten etherischen Lösungsmittel, vorzugsweise Diethylether oder Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Steht R³NH₂ für (1R-trans)-2-Phenylcyclopropanamin, (1R-trans)-2-Phenylcyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3- dihydroxybutandioat (1 : 1), so läßt es sich wie von L. A. Mitscher et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 2044, beschrieben darstellen.
Verbindungen der Formel (XIII) lassen sich durch Reduktion einer Verbindung der Formel (XIV),
in welcher R² wie oben definiert ist, in Gegenwart eines Metalls, vorzugsweise Eisenpulver, und einer Säure, vorzugsweise Essigsäure, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C, und anschließende Diazotierung des Aminopyrimidins mit einem Alkylnitrit, vorzugsweise Isoamylnitrit, in einem inerten dipolaren aprotischen Lösungsmittel, vorzugsweise Acetonitril, bei einer Temperatur zwischen etwa 50 und etwa 100°C darstellen.
Verbindungen der Formel (XIV) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (VII) mit einer Verbindung der Formel (XV)
in Gegenwart einer Base, vorzugsweise Triethylamin oder N,N-Diisopropylethylamin, in einem inerten etherischen Lösungsmittel, vorzugsweise Tetrahydrofuran, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 100°C darstellen.
Verbindungen der Formel (XV) lassen sich durch Hydrolyse und Decarboxylierung einer Verbindung der Formel (VIII) unter Anwendung der in Schritt a beschriebenen Methoden darstellen.

c. für Verbindungen der Formel (Ia), in denen R¹ für CH₂OH steht, eine Verbindung der Formel (XVI)
in welcher R² wie in Formel (I) definiert ist, P und P' für Schutzgruppen stehen, mit R³R⁴NH und einer Base, vorzugsweise N,N-Diisopropylethylamin, in einem Chlorkohlenwasserstoff-Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt.

Die Darstellung von R³R⁴NH ist oben beschrieben.
Stehen P und P' für CMe₂, so lassen sich die Schutzgruppen mit einer Säure unter wäßrigen Bedingungen, vorzugsweise mit wäßriger Salzsäure oder wäßriger Trifluoressigsäure in einem alkoholischen Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C abspalten.
Die Darstellung einer Verbindung der Formel (XVI), in welcher P und P' für CMe₂ stehen, ist in der internationalen Patentanmeldung WO 9703084 beschrieben.

d. für Verbindungen der Formel (Ia), in welchen R¹ für CH₂N₃ steht, eine Verbindung der Formel (XVII)
in welcher R², R³ und R⁴ wie in Formel (I) definiert sind und P und P' für Schutzgruppen stehen, mit einem Alkaliazid, vorzugsweise Natriumazid, in einem inerten Chlorkohlenwasserstoff-Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt.

Verbindungen der Formel (XVII) lassen sich durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (XVIII)
in welcher R², R³ und R⁴ wie in Formel (I) definiert sind, P und P' für Schutzgruppen stehen, mit einem Iodierungsmittel, vorzugsweise Methyltriphenoxyphosphoniumiodid, in einem inerten Chlorkohlenwasserstoff-Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C darstellen.
Die Verbindung (XVIII) läßt sich unter Anwendung der in Schritten a–c beschriebenen Methoden darstellen.

e. für Verbindungen der Formel (Ia), in denen R' für CH₂NH₂ steht, eine Verbindung der Formel (Ia), in welcher R¹ für CH₂N₃ steht (synthetisiert wie in Schritt d beschrieben), mit Wasserstoff in Gegenwart eines Übergangsmetallkatalysators, vorzugsweise 10% Palladium-auf-Aktivkohle, in einem inerten alkoholischen Lösungsmittel, vorzugsweise Ethanol, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C reduziert.
f. für Verbindungen der Formel (Ia), in denen R¹ für CH₂NHCOR⁹ steht, wobei R⁹ wie oben definiert ist, eine Verbindung der Formel (Ia), in welcher R¹ für CH₂NH₂ steht (synthetisiert wie in Schritt e beschrieben), mit einem Acylierungsmittel, vorzugsweise einem Säureanhydrid (R⁹CO)₂O, in Gegenwart einer Base, vorzugsweise N,N-Diisopropylethylamin, in einem inerten Chlorkohlenwasserstoff-Lösungsmittel, vorzugsweise Dichlormethan, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C acyliert und anschließend mit einem Alkalialkoxid, vorzugsweise Natriummethanolat, in einem alkoholischen Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol, bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C behandelt.

Die Verbindungen der Formeln (II), (XVII) und (XVIII) bilden einen weiteren Aspekt der Erfindung.
Salze von Verbindungen der Formel (I) lassen sich darstellen, indem man die freie Base oder ein Salz bzw. ein Derivat davon mit einem oder mehreren Äquivalenten der entsprechenden Säure (beispielsweise einer Halogenwasserstoffsäure (insbesondere HCl), Schwefelsäure, Oxalsäure oder Phosphorsäure) umsetzt. Die Reaktion kann in einem Lösungsmittel bzw. Medium durchgeführt werden, in dem das Salz unlöslich ist, oder in einem Lösungsmittel, in dem das Salz löslich ist, z. B. Wasser, Ethanol, Tetrahydrofuran oder Diethylether, welches im Vakuum abgezogen werden kann, oder durch Gefriertrocknung. Bei der Umsetzung kann es sich auch um ein metathetisches Verfahren handeln, oder die Umsetzung wird an einem Ionenaustauscherharz durchgeführt. Nichttoxische physiologisch unbedenkliche Salze sind bevorzugt, jedoch können auch andere Salze ihren Nutzen haben, z. B. bei der Isolierung bzw. Reinigung des Produktes.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken als P_2T-(P2Y_ADP- oder P2T_AC-)Rezeptorantagonisten. Dementsprechend eignen sich die Verbindungen zur Verwendung in der Therapie, vor allem der Kombinationstherapie, wobei sie insbesondere zur Verwendung als: Inhibitoren der Thrombozytenaktivierung, -aggregation und -degranulation, Mittel, die die Thrombozytendisaggregation fördern, Antithrombosemittel oder zur Behandlung bzw. Prophylaxe von instabiler Angina, koronarer Revaskularisierungverfahren einschließlich Angioplastie (PTCA), Herzinfarkt, Perithrombolyse, primären arteriellen thrombotischen Komplikationen einer Arteriosklerose wie z. B. thrombotischem oder embolischem Schlaganfall, vorübergehenden ischämischen Anfällen, peripherer Gefäßkrankheit, Herzinfarkt mit oder ohne Thrombolyse, arteriellen Komplikationen aufgrund von Eingriffen bei arteriosklerotischen Erkrankungen wie z. B. Angioplastie, Endarterektomie, Stent-Plazierung, Transplantationen von Herz- und anderen Gefäßen, thrombotischen Komplikationen chirurgischer oder mechanischer Schädigungen wie Gewebebergung nach Trauma als Folge eines Unfalls oder eines chirurgischen Eingriffs, rekonstruktiven operativen Eingriffen einschließlich Haut und Muskellappen, Zuständen mit einer diffusen Komponente, bei der es zu einem thrombotischen/Thrombozytenverzehr kommt, wie z. B. disseminierter intravaskulärer Koagulation, thrombotischer thrombozytopenischer Purpura, hämolytischem urämischem Syndrom, thrombotischen Komplikationen bei Septikämie, Adult Respiratory Distress Syndrome, Anti-Phospholipid-Syndrom, Heparin-induzierter Thrombozytopenie und Prä-Eklampsie/Eklampsie oder Venenthrombose wie Tiefvenenthrombose, venookklusiver Krankheit, hämatologischen Zuständen wie myeloproliferative Krankheit, einschließlich Thrombozythämie, Sichelzellenkrankheit; oder zur Prävention von mechanisch induzierter Thrombozytenaktivierung in vivo, wie kardiopulmonalem Bypass und extrakorporaler Membranoxygenation (Prävention von Mikrothromboembolismus), mechanisch induzierter Thrombozytenaktivierung in vitro, wie die Verwendung zur Konservierung von Blutprodukten, z. B. Thrombozytenkonzentraten, oder Shunt-Verstopfung wie bei Nierendialyse und Plasmapherese, Thrombose als Sekundärerscheinung nach Gefäßschäden/-entzündung wie Vaskulitis, Arteritis, Glomerulonephritis, entzündlicher Darmerkrankung und Organtransplantatabstoßung, Zuständen wie Migräne, Raynaudsche Gangrän, Zustände, bei denen Thrombozyten zum zugrundeliegenden entzündlichen Erkrankungsprozeß beitragen können wie etwa der Bildung/Ausbreitung von atheromatösen Plaques, Stenose/Restenose und anderen entzündlichen Zuständen wie Asthma, bei denen Thrombozyten und von Thrombozyten abgeleitete Faktoren im Krankheitsprozeß impliziert sind, indiziert sind. Weitere Indikationen sind beispielsweise die Behandlung von Erkrankungen des ZNS und die Prävention des Wachstums und der Ausbreitung von Tumoren.
Gemäß der Erfindung wird weiterhin die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung als Wirkstoff für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung oder Prävention der obigen Erkrankungen bereitgestellt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich insbesondere zur Behandlung von Herzinfarkt, thrombotischem Schlaganfall, vorübergehenden ischämischen Anfällen, peripherer Gefäßkrankheit und stabiler und instabiler Angina, insbesondere instabiler Angina. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention der obigen Erkrankungen, bei dem man einem an einer solchen Erkrankung leidenden Patienten eine therapeutisch wirksame Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung verabreicht.
Die Verbindungen können topisch, z. B. an die Lunge und/oder die Atemwege, in Form von Lösungen, Suspensionen, HFA-Aerosolen und Trockenpulverformulierungen, oder systemisch, z. B. durch orale Verabreichung in Form von Tabletten, Pillen, Kapseln, als Sirup, als Pulver oder als Granulat, oder parenteral als sterile parenterale Lösungen oder Suspensionen, subkutan oder rektal als Zäpfchen oder transdermal verabreicht werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können für sich alleine oder als eine die erfindungsgemäße Verbindung in Kombination mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Verdünnungsmittel, Adjuvans oder Trägerstoff enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung verabreicht werden. Besonders bevorzugt sind Zusammensetzungen, die keine Materialien enthalten, die eine Nebenwirkung, z. B. eine allergische Reaktion, auslösen können.
Trockenpulverformulierungen und unter Druck stehende HFA-Aerosole von erfindungsgemäßen Verbindungen können durch orale oder nasale Inhalation verabreicht werden. Zur Inhalation ist die Verbindung zweckmäßigerweise feinteilig. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch mittels eines Trockenpulverinhalationsgerätes verabreicht werden. Bei dem Inhalationsgerät kann es sich um ein Einzeldosis- oder Mehrfachdosisinhalationsgerät, z. B. ein durch Einatmen aktiviertes Trockenpulverinhalationsgerät, handeln.
Eine Möglichkeit besteht darin, die feinteilige Verbindung mit einem Trägerstoff, z. B. einem Mono-, Di- oder Polysaccharid, einem Zuckeralkohol oder einem anderen Polyol zu mischen. Geeignete Trägerstoffe sind beispielsweise Zucker und Stärke. Alternativ dazu kann man die feinteilige Verbindung mit einer anderen Substanz beschichten. Es ist weiterhin möglich, die Pulvermischung in Hartgelatinekapseln abzufüllen, die jeweils die gewünschte Wirkstoffdosis enthalten.
Eine weitere Möglichkeit besteht darin, das feinteilige Pulver zu kleinen Kügelchen zu verarbeiten, die während des Inhalationsvorgangs zerfallen. Man kann dieses sphäronisierte Pulver in das Arzneimittelreservoir eines Mehrfachdosisinhalationsgeräts, z. B. des als Turbuhaler^® bekannten Geräts, füllen, wobei eine Dosierungsvorrichtung die gewünschte Dosis abmißt, die dann vom Patienten inhaliert wird. Mit diesem System wird dem Patienten der Wirkstoff mit oder ohne Trägerstoff verabreicht.
Bei der die erfindungsgemäße Verbindung enthaltenden pharmazeutischen Zusammensetzung kann es sich zweckmäßigerweise um Tabletten, Pillen, Kapseln, Sirupe, Pulver oder Granulate zur oralen Verabreichung, um sterile parenterale oder subkutane Lösungen, um Suspensionen zur parenteralen Verabreichung oder um Zäpfchen zur rektalen Verabreichung handeln.
Zur oralen Verabreichung kann man den Wirkstoff mit einem Adjuvans oder einem Trägerstoff, z. B. Laktose, Sucrose, Sorbit, Mannit, Stärken wie Kartoffelstärke, Maisstärke oder Amylopektin, Cellulosederivaten, einem Bindemittel wie Gelatine oder Polyvinylpyrrolidon und einem Gleitmittel wie Magnesiumstearat, Calciumstearat, Polyethylenglykol, Wachsen, Paraffinen und dergleichen vermischen und dann zu Tabletten verpressen. Benötigt man überzogene Tabletten, so kann man die wie oben beschrieben hergestellten Kerne mit einer konzentrierten Zuckerlösung, die beispielsweise Gummi arabicum, Gelatine, Talk, Titandioxid und dergleichen enthalten kann, beschichten. Alternativ dazu kann man die Tablette mit einem geeigneten, in einem leichtflüchtigen organischen Lösungsmittel oder einem wäßrigen Lösungsmittel gelösten Polymer beschichten.
Zur Herstellung von Weichgelatinekapseln kann man die Verbindung z. B. mit einem Pflanzenöl oder Polyethylenglykol mischen. Hartgelatinekapseln können ein Granulat der Verbindung enthalten, wobei man entweder die obengenannten Träger für Tabletten, z. B. Laktose, Saccharose, Sorbit, Mannit, Stärken, Cellulosederivate oder Gelatine verwendet. Hartgelatinekapseln können auch mit Flüssigkeiten oder Halbfeststoffen des Arzneistoffs gefüllt werden.
Flüssige Zubereitungen zur oralen Verabreichung können in Form von Sirupen oder Suspensionen vorliegen, beispielsweise als Lösungen, die die Verbindung enthalten, wobei der Rest aus Zucker und einem Gemisch aus Ethanol, Wasser, Glyzerin und Propylenglykol besteht. Derartige flüssige Zubereitungen können gegebenenfalls Farbmittel, Geschmacksverbesserer, Saccharin und Carboxymethylcellulose als Verdickungsmittel oder andere wohlbekannte Hilfsstoffe enthalten.
BEISPIELE
Die Erfindung wird durch die folgenden nicht einschränkenden Beispiele näher erläutert.
Die NMR-Spektren in den Beispielen wurden auf einem Varian Unity Inova 300- oder 400-Spektrometer aufgenommen, und die MS-Spektren wurden wie folgt gemessen: EI-Spektren wurden auf einem VG 70-250S- oder einem Finnigan Mat Incos-XL-Spektrometer aufgenommen, FAB-Spektren wurden auf einem VG70-250SEQ-Spektrometer aufgenommen, ESI- und APCI-Spektren wurden auf einem Finnigan Mat SSQ7000- oder Micromass Platform-Spektrometer aufgenommen. Präparative HPLC-Trennungen wurden im allgemeinen unter Verwendung von Novapak^®-, Bondapak^®- oder Hypersil^®-Säulen, die mit BDSC-18-Umkehrphasenkieselgel gepackt waren, durchgeführt. Flash-Chromatographie (in den Beispielen als (SiO₂) angegeben) wurde mit Matrix-Kieselgel von Fisher, 35– 70 μm, durchgeführt. Bei Beispielen, deren Protonen-NMR-Spektrum das Vorliegen von Rotameren zeigten, sind jeweils nur die chemischen Verschiebungen für das Hauptrotamer angegeben.
Beispiel 1
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(2-Hydroxyethoxy)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino)-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
a) (1R-cis)-Bis(1,1-dimethylethyl)-4-hydroxy-2-cyclo-pentenylimidodicarbonat
Imidodicarbonsäure-bis(1,1-dimethylethyl)ester (25,0 g) wurde zu einer Suspension von mit Ether gewaschenem Natriumhydrid (3,94 g einer 60%igen Dispersion in Öl) in Tetrahydrofuran (500 ml) gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden lang bei 50°C gerührt. (1S-cis)-4-Acetoxy-2-cyclopenten-1-ol (10,0 g) und Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0) (2,0 g) wurden bei Raumtemperatur zur Reaktionsmischung gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 24 Stunden lang gerührt, mit Wasser verdünnt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organischen Extrakte wurden getrocknet und im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Hexan 1 : 5 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung als Feststoff (20,0 g) erhielt.
NMR δH (d₆-DMSO) 5,71–5,77 (2H, m), 4,91 (1H, d, J = 5,4 Hz), 4,86 (1H, tq, J = 8,0, 1,8), 4,51–4,57 (1H, m), Hz), 2,54 (1H, dt, J = 12,6, 7,4 Hz), 1,61 (1H, ddd, J = 12,3, 7,7, 6,4 Hz), 1,43 (18H, s).
b) [1R-[1α,2β,3β,4α)]-2,3,4-Trihydroxycyclopentenyl-imidodicarbonsäure-bis(1,1-dimethylethyl)ester
N-Methylmorpholin-N-oxid (11,08 g) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt a) (20,0 g) in Tetrahydrofuran (500 ml) und Wasser (50 ml) gegeben. Osmiumtetroxid (11,75 ml, 2,5%ige Lösung in t-Butanol) wurde dann zugesetzt, und die Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Natriumhydrosulfit (6,0 g) behandelt. Die Suspension wurde über Celite filtriert, und der feste Rückstand wurde mit Methanol gewaschen. Das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Hexan 1 : 1 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung erhielt (17,37 g).
NMR δH (d₆-DMSO) 4,82 (1H, d, J = 4,6 Hz), 4,56 (1H, d, J = 5,9 Hz), 4,54 (1H, d, J = 4,8 Hz), 4,11–4,21 (2H, m), 3,66–3,73 (1H, m), 3,55–3,58 (1H, m), 1,97–2,05 (1H, m), 1,46–1,60 (1H, m), 1,44 (18H, s).
c) [3aR-(3aα,4α,6α,6aα)]-6-Amino-2,2-dimethyltetrahydro-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
p-Toluolsulfonsäure (0,86 g) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt b) (15,0 g) in Aceton (250 ml), das 2,2-Dimethoxypropan (22,1 ml) enthielt, gegeben. Die Mischung wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde zwischen Essigsäureethylester (700 ml) und Kochsalzlösung (300 ml) verteilt, und die organischen Extrakte wurden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Wasser (250 ml) wurde Wasser zu dem verbliebenen Gummi gegeben, und die Mischung wurde 24 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Die abgekühlte Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und durch azeotrope Destillation mit Toluol getrocknet, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (7,5 g) erhielt.
MS (APCI) 174 (M + H⁺, 100%).
d) [3aR-(3aα,4α,6α,6aα)]-6-[[6-Chlor-5-nitro-2-(propylthio)pyrimidin-4-yl]amino]-2,2-dimethyltetrahydro-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
Eine Lösung des Produkts von Schritt c) (7,5 g) in Tetrahydrofuran (500 ml) wurde im Verlauf von 1 Stunde zu 4,6-Dichlor-5-nitro-2-(propylthio)pyrimidin (dargestellt wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9703084 beschrieben) (25,57 g) und N,N-Diisopropylethylamin (8,3 ml) in Tetrahydrofuran (1000 ml) gegeben, und es wurde noch eine Stunde lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und mit Essigsäureethylester (1000 ml) versetzt, und die Mischung wurde mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Isohexan-Essigsäureethylester als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (14,22 g) erhielt.
MS (APCI) 405/7 (M + H⁺), 405 (100%).
e) [3aR-(3aα,4α,6α,6aα)]-6-[[5-Amino-6-chlor-2-propylthiopyrimidin-4-yl]amino]-2,2-dimethyltetrahydro-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
Eisenpulver (15,0 g) wurde zu einer gerührten Lösung des Produkts aus Schritt d) (13,45 g) in Essigsäure (500 ml) gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und im Vakuum auf die Hälfte ihres ursprünglichen Volumens eingeengt. Der Rückstand wurde mit Essigsäureethylester verdünnt, und die Mischung wurde mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung erhielt (10,26 g).
MS (APCI) 375/7 (M + H⁺), 375 (100%).
f) [3aR-(3aα,4α,6α,6aα)]-6-[7-Chlor-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-2,2-dimethyl-tetrahydro-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
Isoamylnitrit (5,5 ml) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt e) (10,26 g) in Acetonitril (500 ml) gegeben, und die Lösung wurde 1 Stunde lang auf 70°C erhitzt. Die abgekühlte Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Isohexan 2 : 1 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (8,93 g) erhielt.
MS (APCI) 386/8 (M + H⁺), 386 (100%).
g) [3aR-[3aα,4α,6α(1R*,2S*),6aα]]-Tetrahydro-2,2-dimethyl-6-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
Eine Mischung des Produkts von Schritt f) (1,0 g), (1R-trans)-N-Methyl-2-phenylcyclopropanamin-hydrochlorid (dargestellt wie von C. Kaiser et al., J. Org. Chem., 1962, 27, 768–773, beschrieben, unter Verwendung von (1R-trans-2-Phenylcyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (dargestellt wie von L. A. Mitscher et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 2044, beschrieben) (0,522 g) und N,N-Diisopropylethylamin (1,35 ml) in Ether (20 ml) wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde nacheinander mit 1 M Salzsäure, gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (1,23 g) erhielt.
MS (APCI) 497 (M + H⁺, 100%).
h) [3aS-[3aα,4α(1S*,2R*),6α,6aα]-N-Methyl-N-(2-phenyl-cyclopropyl)-3-[[[[(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy]-ethyl]oxy]-2,2-dimethyl-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-yl)-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-7-amin
Eine Lösung des Produkts von Schritt g) (1,23 g) in Toluol (10 ml) wurde mit Natronlauge (5 N, 10 ml) versetzt. Dann wurde Tetrabutylammoniumbromid (0,12 g) zugegeben, und die Mischung wurde 30 Minuten lang gerührt. Dimethylsulfoxid (704 μl) und 2-(2-Bromethoxy)-2H-tetrahydropyran (3,93 ml) wurden zugesetzt, und die Mischung wurde 16 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Weiteres 2-(2-Bromethoxy)-2H-tetrahydropyran (3,93 ml) und Tetrabutylammoniumbromid (0,12 g) wurden zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde 16 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Hexan 1 : 4 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (1,2 g) erhielt.
MS (APCI) 625 (M + H⁺, 100%).
i) [1S-(1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(2-Hydroxyethoxy)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
Eine Lösung des Produkts von Schritt h) (0,50 g) in Trifluoressigsäure (9 ml) und Wasser (1 ml) wurde 1 Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (HPLC, Novapak^® C18-Säule, 0,1%ige wäßrige Ammoniumacetatlösung : Acetonitril, 55 : 45), wodurch man die Titelverbindung erhielt (0,113 g).
MS (APCI) 501 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO) 7,31–6,87 (5H, m), 4,98 (1H, q, J = 8,5 Hz), 4,81 (1H, d, J = 6,5 Hz), 4,73 (1H, d, J = 4,1 Hz), 4,61–4,56 (1H, m), 4,29 (1H, s breit), 4,00– 3,97 (1H, m), 3,83–3,79 (1H, m), 3,56–3,49 (7H, m), 3,08–3,01 (2H, m), 2,98–2,91 (1H, m), 2,66–2,58 (1H, m), 2,41 (1H, m), 2,10–2,03 (1H, m), 1,63 (1H, Sextett, J = 7,2 Hz), 1,58–1,53 (1H, m), 1,45 (1H, q, J = 6,6 Hz), 0,94 (3H, t, J = 7,2 Hz).
Beispiel 2
[1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-Methyl-(2-phenyl-cyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo-[4,5-d]pyrimidin-3-yl)cyclopentan-1,2,3-triol
a) [1S-(1α,2β,3β,4α)]–[4-[6-Chlor-5-nitro-2-(propylthio)pyrimidin-4-yl]amino]cyclopentan-1,2,3-triol
2 M Salzsäure (5 ml) wurde zu einer Lösung des Produkts von Beispiel 1, Schritt b) (0,6 g) in Methanol (10 ml) gegeben. Die Mischung wurde 24 Stunden lang gerührt, im Vakuum eingeengt und durch azeotrope Destillation mit Toluol getrocknet. Eine Lösung von 4,6-Dichlor-5-nitro-2-(propylthio)pyrimidin (dargestellt wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9703084 beschrieben) (0,82 g) in Tetrahydrofuran (5 ml) wurde einer Suspension des verbliebenen Aminhydrochlorids und N,N-Diisopropylethylamin (1,78 ml) in Tetrahydrofuran (10 ml) gegeben. Die Mischung wurde 24 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt, abgekühlt und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Isohexan-Essigsäureethylester 3 : 7 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (0,469 g) erhielt.
MS (APCI) 365/7 (M + H⁺), 365 (100%).
b) [1S-(1α,2β,3β,4α)]-[4-[5-Amino-6-chlor-2-(propylthio)pyrimidin-4-yl]amino]cyclopentan-1,2,3-triol
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß Beispiel 1, Schritt e), unter Verwendung des Produkts aus Schritt a) dargestellt und wurde direkt für den nächsten Schritt verwendet.
c) [1S-(1α,2β,3β,4α)]-4-[7-Chlor-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß Beispiel 1, Schritt f), unter Verwendung des Produkts aus Schritt b) dargestellt.
MS (APCI) 346/8 (M + H⁺), 346 (100%).
d) [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[(2-Phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß Beispiel 1, Schritt g), unter Verwendung des Produkts aus Schritt c) und (1R-trans)-2-Phenylcyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (dargestellt wie von L. A. Mitscher et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 2044, beschrieben) dargestellt.
MS (APCI) 443 (M + H⁺, 100%).
e) [(1R-[1α(1R*,2S*),2β,3β,4α]]-N-)-2-Phenylcyclopropyl)-5-(propylthio)-3-[2,3,4-tris[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyclopentyl]-3H-[1,2,3]triazo-lo[4,5-d]pyrimidin-7-amin
Eine Mischung des Produkts aus Schritt d) (1,79 g), tert-Butyldimethylsilylchlorid (1,22 g) und Imidazol (1,10 g) in N,N-Dimethylformamid (3 ml) wurde 24 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Weiteres tert.-Butyldimethylsilylchlorid (1,0 g) wurde zugegeben, und die Mischung wurde weitere 6 Stunden lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Hexan 1 : 20 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (2,43 g) erhielt.
NMR δH (CDCl₃) 7,34–7,18 (5H, m), 6,38 und 3,22 (1H, breit s), 5,30–5,19 (1H, m), 4,96–4,89 (1H, m), 4,04– 3,99 (1H, m), 3,89–3,86 (1H, m), 3,11–3,01 (2H, m), 2,83–2,70 (1H, m), 2,24–2,16 (1H, m), 2,14–2,03 (1H, m), 1,75–1,61 (2H, m), 1,5–1,3 (2H, m), 0,98–0,92 (3H, m), 0,94 (9H, s), 0,93 (9H, s), 0,69 (9H, s), 0,13 (3H, s), 0,12 (3H, s), 0,09 (3H, s), 0,08 (3H, s), –0,19 (3H, s), –0,47 (3H, s).
f) [1R-[1α(1R*,2S*),2β,3β,4α]]-N-Methyl-N-(2-phenylcyclopropyl)-5-(propylthio)-3-[2,3,4-tris[[1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]cyclopentyl]-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-7-amin
Natriumhydrid (35 mg einer 60%igen Dispersion in Öl) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt e) (0,576 g) in Tetrahydrofuran (10 ml) gegeben. Die Lösung wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt und mit Methyliodid (68 μl) versetzt. Nach 5 Stunden wurde weiteres Methyliodid (68 μl) zugesetzt, und es wurde noch weitere 36 Stunden lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Hexan 1 : 20 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (0,537 g) erhielt.
NMR δH (CDCl₃) 7,35–7,18 (5H, m), 5,32–5,22 (1H, m), 4,89 (1H, dd, J = 8,3, 3,3 Hz), 4,03 (1H, dt, J = 6,5, 1,7 Hz), 3,91–3,87 (1H, m), 4,4–3,6 (3H, s breit), 3,12–3,02 (2H, m), 2,82–2,70 (1H, m), 2,38–2,26 (1H, m), 2,17–2,05 (1H, m), 1,80–1,65 (2H, m), 1,48–1,40 (1H, m), 1,27–0,65 (5H, m), 0,95 (9H, s), 0,93 (9H, s), 0,69 (9H, s), 0,13 (3H, s), 0,12 (3H, s), 0,09 (3H, s), 0,08 (3H, s), –0,19 (3H, s), –0,45 (3H, s).
g) [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-Methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
Tetrabutylammoniumfluorid (1 M in Tetrahydrofuran/Wasser 95/5; 2,3 ml) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt f) (0,53 g) in Tetrahydrofuran (10 ml) gegeben. Die Lösung wurde 20 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (HPLC, Novapak^® C18-Säule, 0,1%ige wäßrige Ammoniumacetatlösung : Acetonitril), wodurch man die Titelverbindung (0,23 g) erhielt.
MS (APCI) 457 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO) 7,32–7,18 (5H, m), 4,97 (1H, q, J = 8,5 Hz), 4,91 (1H, d, J = 4,5 Hz), 4,77 (1H, d, J = 6,5 Hz), 4,68–4,63 (2H, m), 3,97–3,95 (1H, m), 3,82 (1H, m), 3,57 (3H, s breit), 3,15–2,90 (3H, m), 2,63– 2,33 (2H, m), 1,97–1,93 (1H, m), 1,63–1,54 (3H, m), 1,45–1,43 (1H, m), 0,93 (3H, t, J = 7,0 Hz).
Beispiel 3
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(Hydroxymethyl)-5-[7-[N-methyl-2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
a) [3aR-[3aα,4α,6α(1R*,2S*)6aα]-Tetrahydro-2,2-dimethyl-6-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-methanol
N,N-Diisopropylethylamin (2 ml) wurde zu einer Lösung von (3aR-(3aα,4α,6α,6aα)]-6-[7-Chlor-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]tetrahydro-2,2-dimethyl-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-methanol (dargestellt wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9703084 beschrieben) (1,15 g) und (1R-trans)-N-Methyl-2-phenylcyclopropanamin-hydrochlorid (dargestellt wie von C. Kaiser et al., J. Org. Chem., 1962, 27, 768–773, beschrieben, unter Verwendung von (1R-traps)-2-Phenylcyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (dargestellt wie von L. A. Mitscher et al., J. Med. Chem., 1986, 29, 2044, beschrieben)) (0,53 g) in Dichlormethan (20 ml) gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 18 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Isohexan 1 : 1 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (1,3 g) erhielt.
MS (APCI) 511 (M + H⁺, 100%).
b) [1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(Hydroxymethyl)-5-[7-[N-methyl(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
Eine Lösung des Produkts von Schritt a) (0,25 g) in Methanol (8 ml) und 2 N HCl (2 ml) wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Acetonitril (5 ml) verrieben, wodurch man einen weißen Feststoff erhielt, der abfiltriert wurde. Durch Verreiben mit Methanol (5 ml) erhielt man die Titelverbindung (0,19 g).
MS (APCI) 471 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO bei 90°C) 7,33–7,20 (5H, m), 5,02 (1H, q), 4,46 (1H, q), 3,93 (1H, q), 3,59–3,46 (5H, m), 3,08–2,98 (3H, m), 2,44–2,40 (1H, m), 2,31–2,24 (1H, m), 2,18–2,12 (1H, m), 1,92–1,85 (1H, m), 1,68–1,53 (3H, m), 1,44 (1H, q), 0,95 (3H, t).
Beispiel 4
[1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-(2-(3,4-Difluorphenyl)cyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
a) (1R-trans)-N-[2-(3,4-Difluorphenyl)cyclopropyl]acetamid
Essigsäureanhydrid (0,31 ml) wurde zu gegeben einer Suspension von (1R-trans)-2-(3,4-Difluorphenyl)cyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (dargestellt wie in der internationalen Patentanmeldung WO 9905143 beschrieben) (700 mg) und Kaliumcarbonat (1,0 g) in Tetrahydrofuran (20 ml) gegeben, und die Mischung wurde 20 Stunden lang gerührt. Eine gesättigte Ammoniumchloridlösung wurde zugesetzt, und die Mischung wurde mit Ether extrahiert und die organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO₄) und eingedampft, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (470 mg) erhielt.
MS (APCI) 270 (M + MeCO₂ ^–, 100%).
b) (1R-trans)-N-[2-(3,4-Difluorphenyl)cyclopropyl]-N-methylacetamid
Natriumhydrid (109 mg einer 60%igen Dispersion in Öl) wurde zu einer Lösung des Produkts von Schritt a) (470 mg) und Methyliodid (0,4 ml) in Tetrahydrofuran (15 ml) gegeben, und die Mischung wurde 18 Stunden lang gerührt. Eine gesättigte Ammoniumchloridlösung wurde zugefügt, und die Mischung wurde mit Ether extrahiert. Die organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO₄), eingedampft und chromatographisch gereinigt (SiO₂, Dichlormethan : Methanol (49 : 1) als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (470 mg) erhielt.
MS (APCI) 226 (M + H⁺, 100%).
c) (1R-trans)-2-(3,4-Difluorphenyl)-N-methylcyclopropanamid-hydrochlorid
Eine Lösung des Produkts von Schritt b) (443 mg) in HCl 4 M (10 ml) wurde 8 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abgezogen, wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (357 mg) erhielt.
NMR δH (d₆-DMSO) 9,25 (1H, s), 7,39–7,30 (2H, m), 7,09– 7,02 (1H, m), 2,98–2,95 (1H, m), 2,64 (3H, s), 1,52– 1,51 (1H, m), 1,31–1,29 (2H, m).
d) [3aR-[3aα,4α,6α(1R*,2S*),6α]-Tetrahydro-2,2-dimethyl-6-[7-[N-[2-(3,4-difluorphenyl)cyclopropyl)-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3J-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-4H-cyclopenta-1,3-dioxol-4-ol
Die im Untertitel genannte Verbindung (800 mg) wurde gemäß der Methode von Beispiel 3, Schritt a), ausgehend vom Produkt aus Beispiel 1, Schritt f) (612 mg) und dem Produkt von Schritt c) (357 mg) dargestellt.
MS (APCI) 533 (M + H⁺, 100%).
e) [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-[2-(3,4-Difluorphenyl)cyclopropyl)-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
Eine Lösung des Produkts von Schritt a) (798 mg) in einer Mischung aus Trifluoressigsäure (8 ml), Methanol (5 ml) und Wasser (3 ml) wurde 1 Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt, in 2 M Kaliumcarbonat gegossen und mit Essigsäureethylester extrahiert. Der Extrakt wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Dichlormethan: Methanol (14 : 1) als Laufmittel), wodurch man die Titelverbindung (703 mg) erhielt.
MS (APCI) 493 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO) 7,40–7,30 (2H, m), 7,15–7,03 (1H, m), 5,12 (1H, dd), 5,03–4,95 (2H, m), 4,93 (1H, d), 4,68 (1H, q), 3,98–3,55 (3H, m), 3,10–2,90 (1H, m), 2,85– 2,72 (1H, m), 2,64–2,54 (1H, m), 2,40–2,20 (1H, m), 1,97–1,85 (1H, m), 1,80–1,42 (4H, m), 1,02–0,82 (3H, m).
Beispiel 5
(1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-(2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
a) (1R-trans)-N-[2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]acetamid
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß der Methode von Beispiel 4, Schritt a), ausgehend von (1R-trans)-2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropanamin, [R-(R*,R*)]-2,3-dihydroxybutandioat (1 : 1) (dargestellt wie in WO 9905143 beschrieben) dargestellt, wodurch man einen weißen Feststoff (655 mg) erhielt.
MS (APCI) 206 (M + H⁺, 100%).
b) (1R-trans)-N-[2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]-N-methylacetamid
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß der Methode von Beispiel 4, Schritt b), unter Verwendung des Produkts aus Schritt a) dargestellt, wodurch man einen weißen Feststoff (587 mg) erhielt.
MS (APCI) 220 (M + H⁺, 100%).
c) (1R-trans)-2-(4-Methoxyphenyl)-N-methylcyclopropanamin-hydrochlorid
Die im Untertitel genannte Verbindung wurde gemäß der Methode von Beispiel 4, Schritt c), unter Verwendung des Produkts aus Schritt b) dargestellt, wodurch man einen weißen Feststoff (507 mg) erhielt.
NMR δH (d₆-DMSO) 9,24 (2H, s), 7,11–7,09 (2H, m), 6,87– 6,85 (2H, m), 3,72 (3H, s), 2,88–2,84 (1H, m), 2,64 (3H, s), 2,44–2,39 (1H, m), 1,46–1,41 (1H, m), 1,97– 1,15 (1H, m).
d) [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-N-[2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol
Die Titelverbindung (400 mg) wurde gemäß der Methode von Beispiel 3, Schritt a), ausgehend vom Produkt aus Beispiel 1, Schritt f) (765 mg) und vom Produkt aus Schritt c) (507 mg) und anschließendes Entschützen gemäß der Methode von Beispiel 4, Schritt e), dargestellt.
MS (APCI) 487 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO) 7,20–7,17 (2H, m), 6,88–6,85 (2H, m), 4,98–4,96 (1H, q), 4,69–4,65 (1H, m), 3,98–3,97 (1H, m), 3,85–3,82 (1H, m), 3,74 (3H, s), 3,56 (3H, s), 3,55–3,41 (4H, m), 3,07–2,99 (2H, m), 2,50–2,48 (1H, m), 2,47–2,38 (1H, m), 2,00–1,96 (1H, m), 1,68–1,61 (2H, m), 1,50–1,47 (1H, m), 1,38–1,36 (1H, m), 0,97– 0,92 (3H, t).
Beispiel 6
(1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Azidomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
a) [3aR-[3aα,4α,6α(1R*,2S*),6aα]]-N-Methyl-N-(2-phenylcyclopropyl)-5-(propylthio)-3-[tetrahydro-6-(iodmethyl)-2,2-dimethyl-3aH-cyclopenta[d][1,3]dioxol-4-yl]-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-7-amin
Eine Lösung des Produkts aus Beispiel 3a) (1,0 g) in Dichlormethan (10 ml) wurde mit Methyltriphenoxyphosphoniumiodid (1,5 g) versetzt, und die so erhaltene Lösung wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Diese Mischung wurde dann chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Isohexan 1 : 4 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (0,77 g) erhielt.
MS (APCI) 621 (M + H⁺, 100%).
b) [1S-1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Iodmethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
Eine Lösung des Produkts von Schritt a) (0,76 g) in einer Mischung aus Tetrahydrofuran (6 ml) und Methanol (4 ml) wurde mit wäßriger 2 M Salzsäure (1,5 ml) versetzt, und die Lösung wurde 5 Stunden lang bei 35°C stehengelassen. Die Mischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde azeotrop mit Toluol (3 × 100 ml) destilliert. Der Rückstand wurde chromatographisch gereinigt (SiO₂, Essigsäureethylester : Isohexan 1 : 2 als Laufmittel), wodurch man die im Untertitel genannte Verbindung (0,53 g) erhielt.
MS (APCI) 581 (M + H⁺, 100%).
c) [1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Azidomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol
Eine Lösung des Produkts von Schritt b) (0,53 g) in Dimethylsulfoxid (5 ml) wurde mit Natriumazid (0,07 g) versetzt, und die so erhaltene Mischung wurde 18 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde zwischen Essigsäureethylester (200 ml) und einer gesättigten wäßrigen Kochsalzlösung (200 ml) verteilt. Die Essigsäureethylesterphase wurde mit Wasser (3 × 100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt, wodurch man die Titelverbindung (0,43 g) erhielt.
MS (APCI) 496 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO) 7,32–7,19 (5H, m), 5,01 (1H, q), 4,81 (1H, d), 4,63 (1H, d), 4,41 (1H, q), 3,91 (1H, q), 3,60–3,49 (2H, m), 3,06–2,98 (6H, m), 2,45–2,35 (2H, m), 2,30–2,20 (1H, m), 1,91–1,86 (1H, m), 1,67–1,52 (3H, m), 1,45–1,42 (1H, m), 0,94 (3H, t).
Beispiel 7
[1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Aminomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol-hydrochloridsalz
Eine Lösung des Produkts aus Beispiel 6, Schritt c) (0,39 g) in Ethanol (15 ml) wurde mit 10% Palladium-auf-Aktivkohle-Katalysator (0,04 g) versetzt, und die so erhaltene Mischung wurde unter 4 Atmosphären Wasserstoff 4 Stunden lang kräftig gerührt. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 1,4-Dioxan (10 ml) gelöst und dann mit einem leichten Überschuß an konzentrierter Salzsäure behandelt. Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde azeotrop mit Toluol (3 × 100 ml) extrahiert und dann mit Essigsäureethylester verrieben, wodurch man die Titelverbindung (0,16 g) erhielt.
MS (APCI) 470 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO bei 90°C) 8,00 (3H, s), 7,33–7,17 (5H, m), 5,03–4,96 (1H, m), 4,37 (1H, t), 4,01 (1H, t), 3,56 (3H, s), 3,10–2,93 (4H, m), 2,45–2,35 (2H, m), 1,90– 1,79 (1H, m), 1,67–1,53 (3H, m), 1,44 (1H, q), 0,94 (3H, t).
Beispiel 8
[1R-[1α,2β,3β,4α(1R*,2S*)]]-N-[2,3-Dihydroxy-4-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentylmethyl]acetamid
Eine Lösung des Produkts aus Beispiel 7 (0,2 g) in Dichlormethan (15 ml) wurde mit N,N-Diisopropylethylamin (0,11 g) und dann mit Essigsäureanhydrid (0,16 g) versetzt, und die so erhaltene Mischung wurde 4 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Mischung wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösung (15 ml) gewaschen, und die organische Phase wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in einer 0,1 M Lösung von Natriummethanolat in Methanol (20 ml) gelöst, und die Lösung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach Einengen im Vakuum wurde der Rückstand durch vorsichtige Zugabe von Essigsäure angesäuert, die Mischung wurde wiederum im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde azeotrop mit Toluol (3 × 100 ml) destilliert. Chromatographische Aufreinigung (SiO₂ Methanol : Chloroform 1 : 24 als Laufmittel) lieferte die Titelverbindung (0,12 g).
MS (APCI) 512, 5 (M + H⁺, 100%).
NMR δH (d₆-DMSO bei 90°C) 7,63 (1H, s), 7,32–7,19 (5H, m), 4,98 (1H, q), 4,72 (1H, d), 4,48–4,44 (2H, m), 3,86 (1H, q), 3,34–3,29 (1H, m), 3,12–3,06 (1H, m), 3,05– 2,97 (5H, m), 2,42–2,39 (1H, m), 2,37–2,30 (1H, m), 2,20–2,15 (1H, m), 1,81–1,75 (4H, m), 1,67–1,52 (3H, m), 1,44 (1H, q), 0,94 (3H, t).
Pharmakologische Daten
Die Darstellung für den Assay der erfindungsgemäßen Verbindungen auf P_2T- (P2Y_ADP- oder P2T_AC-) Rezeptor-Agonist/Antagonist-Wirkung in gewaschenen Human-Thrombozyten wurde wie folgt durchgeführt.
Venöses Humanblut (100 ml) wurde zu gleichen Teilen auf 3 Röhrchen verteilt, die jeweils 4 ml 3,2%iges Trinatriumcitrat als Antikoagulans enthielten. Die Röhrchen wurden 15 Minuten lang bei 240 G zentrifugiert, was ein thrombozytenreiches Plasma (PRP) ergab, dem 300 ng/ml Prostacyclin zugesetzt wurden, um die Thrombozyten während des Waschvorgangs zu stabilisieren. Erythrozytenfreies PRP wurde durch 10 Minuten Zentrifugieren bei 125 G und anschließendes 15minütiges Zentrifugieren bei 640 G erhalten. Der Überstand wurde verworfen und das Thrombozytenpellet in 10 ml modifizierter kalziumfreier Tyrode-Lösung [CFT, Zusammensetzung: 137 mM NaCl, 11,9 mM NaHCO₃, 0,4 mM NaH₂PO₄, 2,7 mM KCl, 1,1 mM MgCl₂, 5,6 mM Dextrose] resuspendiert, mit 95% O₂/5% CO₂ begast und bei 37°C gehalten. Nach dem Zusatz von weiteren 300 ng/ml PGI₂ wurde die gepoolte Suspension noch einmal 15 Minuten bei 640 G zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und die Thrombozyten wurden zunächst in 10 ml CFT resuspendiert, wonach die endgültige Thrombozytenzahl mit weiterem CFT auf 2 × 10⁵/ml eingestellt wurde. Diese schließlich erhaltene Suspension wurde unter Luftausschluß bei 3°C in einer 60-ml-Spritze gelagert. Zur Erholung von der PGI₂-Inhibierung ihrer normalen Funktion wurden Thrombozyten erst 2 Stunden nach der letzten Resuspendierung für Aggregationsstudien verwendet.
Bei allen Studien wurden 3-ml-Aliquots Thrombozytensuspension in Röhrchen mit CaCl₂-Lösung (60 μl einer 50 mM Lösung mit einer Endkonzentration von 1 mM) gegeben. Humanfibrinogen (Sigma, F4883) und 8-Sulfophenyltheophyllin (8 SPT, zur Blockierung jeglicher P₁-Agonist-Wirkung von Verbindungen) wurden zu Endkonzentrationen von 0,2 mg/ml (60 μl einer 10 mg/ml Lösung von koagulierbarem Protein in Kochsalzlösung) bzw. 300 nM (10 μl einer 15 mM Lösung in 6% Glukose) zugesetzt. Anschließend wurden Thrombozyten bzw. Puffer in einem Volumen von 150 μl in die einzelnen Vertiefungen einer Platte mit 96 Vertiefungen gegeben. Alle Messungen der Thrombozyten der einzelnen Spender wurden jeweils dreimal durchgeführt.
Die Agonist/Antagonist-Wirkstärke wurde wie folgt bewertet.
Die Aggregationsreaktionen in den Platten mit 96 Vertiefungen wurden über die mit einem Plattenlesegerät bei 660 nm bestimmten Änderungen in der Extinktion gemessen. Bei dem verwendeten Plattenlesegerät handelte es sich entweder um ein Bio-Tec Ceres 9000- oder ein Dynatech MRX-Gerät.
Zur Bestimmung eines Baseline-Wertes wurde die Extinktion der einzelnen Vertiefungen in der Platte bei 660 nm gelesen. Den einzelnen Vertiefungen wurde dann Kochsalzlösung bzw. die entsprechende Lösung der Testverbindung in einem Volumen von 10 μl zu einer Endkonzentration von 0, 0,01, 0,1, 1, 10 bzw. 100 mM zugesetzt. Die Platte wurde dann 5 Minuten lang auf einem Rotationsschüttler bei Einstellung 10 geschüttelt, und die Extinktion bei 660 nm wurde abgelesen. Eine Aggregation zu diesem Zeitpunkt deutete auf eine Antagonistenwirkung der Testverbindung hin. Dann wurde Kochsalzlösung bzw. ADP (30 mM; 10 μl von 450 mM) in die einzelnen Vertiefungen gegeben, und die Platte wurde vor dem Ablesen der Extinktion wiederum bei 660 nm weitere 5 Minuten lang geschüttelt.
Die Antagonistenwirkstärke wurde als prozentuale Inhibierung der ADP-Kontrollreaktion abgeschätzt, wodurch man einen IC₅₀-Wert erhielt. Als Beispiele angeführte Verbindungen haben pIC₅₀-Werte von über 5,0.

Claims

Verbindungen der Formel (I):
wobei: R¹ für OR⁵ oder CH₂R⁶ steht; R² für C_1-6-Alkyl oder C_1-6-Halogenalkyl steht; R³ für gegebenenfalls durch R⁷ substituiertes C_3-6-Cycloalkyl steht; R⁴ für C_1-6-Alkyl steht; R⁵ für H oder gegebenenfalls durch OH substituiertes C_1-6-Alkyl steht; R⁶ für OH, N₃ oder NHR⁸ steht; R⁷ für gegebenenfalls durch eine oder mehrere aus C_1-6-Alkyl, Halogen und OR¹⁰ ausgewählte Gruppen substituiertes Phenyl steht; R⁸ für H, C_1-6-Alkyl oder COR⁹ steht; R⁹ für C_1-6-Alkyl steht; R¹⁰ für C_1-6-Alkyl steht; und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und Solvate, und Solvate solcher Salze.
Verbindungen nach Anspruch 1 mit der Formel
wobei R¹, R² und R⁴ wie in Anspruch 1 definiert sind.
Verbindungen nach Anspruch 2, wobei R³ für
wobei R⁷wie in Anspruch 1 definiert ist.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei R¹ für OH, O(CH₂)₂OH, CH₂OH, CH₂N₃, CH₂NH₂ oder CH₂NHAc steht.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei R² für n-Pr steht.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei R³ für gegebenenfalls durch Phenyl substituiertes Cyclopropyl steht.
Verbindungen nach Anspruch 6, wobei R³ für durch Phenyl, das gegebenenfalls durch eine oder mehrere aus C_1- ₆-Alkyl, Halogen und OR¹⁰ ausgewählte Gruppen substituiert ist, substituiertes Cyclopropyl steht.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei R⁴ für Methyl steht.
Verbindungen nach Anspruch 1; bei denen es sich um: [1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(2-Hydroxyethoxy)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol; [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-Methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol; [1S-(1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-(Hydroxymethyl)-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol; [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-[N-[2-(3,4-Difluorphenylcyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol; [1S-[1α,2β,3β,4α(1S*,2R*)]]-4-[7-N-[2-(4-Methoxyphenyl)cyclopropyl]-N-methylamino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2,3-triol; [1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Azidomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol; [1S-[1α,2α,3β,5β(1S*,2R*)]]-3-Aminomethyl-5-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H- [1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentan-1,2-diol; [1R-[1α,2β,3β,4α(1R*,2S*)]]-N-[[2,3-Dihydroxy-4-[7-[N-methyl-(2-phenylcyclopropyl)amino]-5-(propylthio)-3H-[1,2,3]-triazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl]cyclopentyl]methyl]acetamid; und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und Solvate, und Solvate solcher Salze handelt.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 in Kombination mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Verdünnungsmittel, Adjuvans oder Träger.
Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von Herzinfarkt, thrombotischem Schlaganfall, vorübergehenden ischämischen Anfällen und/oder peripherer Verschlußkrankheit, enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9.
Pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von instabiler oder stabiler Angina, enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Verwendung in der Therapie.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von Herzinfarkt, thrombotischem Schlaganfall, vorübergehenden ischämischen Anfällen und/oder peripherer Verschlußkrankheit.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von instabiler oder stabiler Angina.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 als Wirkstoff bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von Herzinfarkt, thrombotischem Schlaganfall, vorübergehenden ischämischen Anfällen und/oder peripherer Verschlußkrankheit.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 als Wirkstoff bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention von instabiler oder stabiler Angina.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 als Wirkstoff bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung oder Prävention einer Thrombozytenaggregationsstörung.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für O(CH₂)₂OH steht, bei dem man eine Verbindung der Formel (II):
wobei R², R³ und R⁴ wie in Anspruch 1 definiert sind, P und P' für Schutzgruppen stehen, mit 2-(2-Bromethoxy)-2H-tetrahydropyran in Gegenwart von Dimethylsulfoxid, einem Phasentransferkatalysator, Natronlauge und einem nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 50 und etwa 120°C umsetzt und anschließend die vorhandenen Schutzgruppen abspaltet.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für OH steht, bei dem man eine Verbindung der Formel (XI):
wobei P für eine Schutzgruppe steht und R² und R³ wie in Anspruch 1 definiert sind, mit einer Base und einem Alkylierungsmittel in einem inerten dipolaren aprotischen Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend die vorhandenen Schutzgruppen abspaltet.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für CH₂OH steht, bei dem man eine Verbindung der Formel (XVI):
wobei R² wie in Anspruch 1 definiert ist und P und P' für Schutzgruppen stehen, mit R³R⁴NH und einer Base in einem Chlorkohlenwasserstofflösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend die vorhandenen Schutzgruppen abspaltet. 22. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für CH₂N₃ steht, bei dem man eine Verbindung der Formel (XVII):
wobei R², R³ und R⁴ wie in Anspruch 1 definiert sind und P und P' für Schutzgruppen stehen, mit einem Alkaliazid in einem inerten Chlorkohlenwasserstofflösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C umsetzt und anschließend die vorhandenen Schutzgruppen abspaltet.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für CH₂NH₂ steht, bei dem man eine wie in Anspruch 22 beschrieben synthetisierte Verbindung der Formel (Ia) mit Wasserstoff in Gegenwart eines Übergangsmetallkatalysators in einem inerten alkoholischen Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C reduziert.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) nach Anspruch 2, wobei R¹ für CH₂NHCOR⁹ steht, bei dem man eine wie in Anspruch 23 beschrieben synthetisierte Verbindung der Formel (Ia) mit einem Acylierungsmittel in Gegenwart einer Base in einem inerten Chlorkohlenwasserstofflösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C acyliert und anschließend in einem alkoholischen Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen etwa 20 und etwa 50°C mit einem Alkalialkoholat behandelt.
Verbindungen der Formeln (II), (XVII) und (XVIII):
wobei R², R³ und R⁴ wie in Anspruch 1 definiert sind und P und P' für Schutzgruppen stehen.