DE437100T1 - Verfahren zur Klonierung und Herstellung der SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase. - Google Patents
Verfahren zur Klonierung und Herstellung der SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase.Info
- Publication number
- DE437100T1 DE437100T1 DE90314311T DE90314311T DE437100T1 DE 437100 T1 DE437100 T1 DE 437100T1 DE 90314311 T DE90314311 T DE 90314311T DE 90314311 T DE90314311 T DE 90314311T DE 437100 T1 DE437100 T1 DE 437100T1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- dna
- gene
- sfi
- restriction endonuclease
- methylase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 title claims 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 title claims 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 13
- 241000354558 Strongylocotes fimbriatus Species 0.000 claims 7
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 claims 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 claims 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 101150085823 hsdR gene Proteins 0.000 claims 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1003—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
- C12N9/1007—Methyltransferases (general) (2.1.1.)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Claims (18)
1. Eine DNA Sequenz, erhältlich aus S.fimbriatus, welche
das Sfi I Restriktionsendonukleasegen kodiert.
2. Die DNA Sequenz nach Anspruch 1, welche ferner die DNA
umfaßt, welche das Sfi I Methylasegen umfaßt.
3. Ein Vektor, der die DNA Sequenz gemäß Anspruch 1 oder 2 enthält.
4. Der Vektor nach Anspruch 3, wobei der Vektor
PEV123RM612-16 umfaßt.
5. Eine DNA Sequenz, erhältlich aus S. fimbriatus, welche
das Sfi I Methylasegen kodiert.
6. Ein Vektor, welcher die Sequenz gemäß Anspruch 5 enthält.
7. Ein mikrobieller Wirt, welcher durch den Vektor gemäß
Anspruch 1, 2, 5 oder 6 transformiert wurde.
8. Eine rekombinante Restriktionsendonuklease, erhältlich
aus S. fimbriatus, welche die DNA Sequenz GGCCNNNNNGGCC
erkennt und die Sequenz zwischen dem vierten und fünften N spaltet.
9. Eine rekombinante Modifikationsmethylase, erhältlich
aus S. fimbriatus, welche DNA vor Verdauung mit der Restriktionsendonuklease gemäß Anspruch 8, schützt.
10. Ein Verfahren zum Klonieren eines Sfi I Restriktionsendonukleasegenes,
welches umfaßt:
(a) Bilden von Bibliotheken aus Genom DNA aus S. fimbriatus;
(b) Isolieren von Klonen, welche das Gen enthalten, welches die Sfi I Modifikationsmethylase
kodiert;
(c) Bestimmen von Fragmenten, welche das Methylasegen und DNA, welche dem Methylasegen
benachbart ist, tragen; und Klonieren dieser Fragmente;
(d) Reinigen von Restriktionsendonukleaseprotein und Sequenzieren der ersten Aminosäurereste;
Konstruieren einer DNA-Sonde, welche auf der Sequenz basiert;
(e) Bestimmen, welche der Methylaseklone ebenfalls das Restriktionsendonukleasegen tragen durch
Identifizierung jener, welche mit der Sonde gemäß (d) hybridisieren und wenigstens 1 kb auf
jeder Seite des Hybridisierungsortes tragen;
(f) Sequenzieren der DNA auf der R-M Genregion, und kombiniert mit den Kartierungs- und
Deletionsdaten aus Schritt (c), Bestimmen eines Verfahrens zum Überexprimieren des Re-
striktionsgenes.
11. Das Verfahren nach Anspruch 10, wobei die Bibliothek gebildet wird durch die Schritte:
(a) Konstruieren eines Klonierungsvektors, welcher die Sfi I Stellen enthält;
(b) Reinigen von DNA aus S. fimbriatus;
5
5
(c) Verdauen der gereinigten DNA, um DNA Fragmente zu bilden;
(d) Ligieren der Fragmente in einen Klonierungsvektor;
(e) Transformieren einer Wirtszelle mit dem rekombinanten Klonierungsvektor aus Schritt (d),
um eine Zellbibliothek zu bilden; und
(f) Reinigen von rekombinanten Vektoren aus der Zellbibliothek, um eine Plasmidbibliothek zu
bilden.
12. Das Verfahren nach Anspruch 11, wobei der Klonierungsvektor
pEV328-8-6 ist.
13. Das Verfahren nach Anspruch 11, wobei der mikrobielle
Wirt ein E. coli Stamm ist, welcher hsdR" ist.
14. Das Verfahren nach Anspruch 12, wobei der Klon, welcher das Sfi I Modifikationsgen enthält, isoliert wird durch
Elektrophoretisieren der Plasmidbibliothek und Reinigen von ausschließlich rekombinanten Vektoren aus dem Gel,
Verdauen der Gel-gereinigten Plasmidbibliothek mit Sfi I, um einen Verdauungspool zu bilden, Übertragen des
Verdauungspools in einen mikrobiellen Wirt und Auswählen von Klonen, welche das Modifikationsgen
enthalten.
15. Ein Verfahren zum Herstellen der Sf i I Restriktionsendonuklease,
welches das Exprimieren des Genes gemäß der Ansprüche 1 oder 2 umfaßt.
16. Ein Verfahren zum Herstellen von Sf i I Restriktionsendonuklease,
welches umfaßt:
(a) Reinigen von DNA aus S. fimbriatus;
(b) Verdauen der gereinigten DNA mit einer
geeigneten Restriktionsendonuklease, um DNA Fragmente zu bilden;
(c) Konstruieren eines Klonierungsvektors, welcher die Sfi I Stellen enthält;
(d) Ligieren der Fragmente in den rekombinanten Klonierungsvektor, um eine DNA Mischung zu
bilden;
(e) Transformieren einer Wirtszelle mit der DNA Mischung aus Schritt (c), um eine Bibliothek zu
bilden;
(f) Isolieren von Klonen, welche das Sfi I
Modifikationsmethylasegen enthalten;
(g) Testen von Klonen, welche das Sf i I
Modifikationsmethylasegen enthalten und
Isolieren von Klonen, welche das Sfi I Re-
striktionsendonukleasegen enthalten;
(h) Überexprimieren des Sfi I Restriktionsendonukleasegens,
so daß das Gen in E. coli in Funktion sein kann;
(i) Kultivieren der Wirtszelle, welche die Klone gemäß Schritt (h) enthalten;
(j) Gewinnen der Sf i I Restriktionsendonuklease aus
der Kultur.
17. Das Verfahren nach Anspruch 16, wobei der Klonierungsvektor
ein Plasmid- oder virales DNA Molekül ist.
18. Das Verfahren nach Anspruch 17, wobei das Plasmid pEV328-8-6 ist.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US46590490A | 1990-01-11 | 1990-01-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE437100T1 true DE437100T1 (de) | 1994-02-03 |
Family
ID=23849639
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE90314311T Pending DE437100T1 (de) | 1990-01-11 | 1990-12-27 | Verfahren zur Klonierung und Herstellung der SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase. |
| DE69024188T Expired - Lifetime DE69024188T2 (de) | 1990-01-11 | 1990-12-27 | SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase Gene und Verfahren zu deren Klonierung. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE69024188T Expired - Lifetime DE69024188T2 (de) | 1990-01-11 | 1990-12-27 | SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase Gene und Verfahren zu deren Klonierung. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5637476A (de) |
| EP (1) | EP0437100B1 (de) |
| JP (1) | JP3195604B2 (de) |
| DE (2) | DE437100T1 (de) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0581436B1 (de) * | 1992-07-07 | 2000-02-09 | New England Biolabs, Inc. | Verfahren zur Klonierung und zur Herstellung der AatII-Restriktionsendonuklease und -methylase |
| CN1301822A (zh) * | 1999-12-27 | 2001-07-04 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——dna甲基化酶13和编码这种多肽的多核苷酸 |
| US6403354B1 (en) * | 2001-01-19 | 2002-06-11 | New England Biolabs, Inc. | Method for cloning and expression of BstYI restriction endonuclease and BstYI methylase in E. coli and purification of BstYI and M.BstYI enzymes |
| US8293503B2 (en) * | 2003-10-03 | 2012-10-23 | Promega Corporation | Vectors for directional cloning |
| EP1685247B1 (de) * | 2003-10-03 | 2009-11-11 | Promega Corporation | Vektoren zur gerichteten klonierung |
| EP1919937A2 (de) | 2005-08-04 | 2008-05-14 | New England Biolabs, Inc. | Neuartige restriktionsendonukleasen, dns-kodierung dieser endonukleasen und verfahren zur identifizierung neuer endonukleasen mit der gleichen oder variierten spezifizität |
| WO2009053988A1 (en) * | 2007-10-25 | 2009-04-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Production of bac vectors carrying viral genomes |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN166864B (de) * | 1985-03-01 | 1990-07-28 | New England Biolabs Inc |
-
1990
- 1990-12-27 EP EP90314311A patent/EP0437100B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-27 DE DE90314311T patent/DE437100T1/de active Pending
- 1990-12-27 DE DE69024188T patent/DE69024188T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-01-11 JP JP01367091A patent/JP3195604B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-04-21 US US08/050,767 patent/US5637476A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0437100A1 (de) | 1991-07-17 |
| DE69024188T2 (de) | 1996-08-14 |
| JPH04211378A (ja) | 1992-08-03 |
| DE69024188D1 (de) | 1996-01-25 |
| JP3195604B2 (ja) | 2001-08-06 |
| EP0437100B1 (de) | 1995-12-13 |
| US5637476A (en) | 1997-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE395367T1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -methylase XamI. | |
| DE3153606C2 (de) | ||
| DE3687734T2 (de) | Stellenspezifische rekombination von dns in hefe. | |
| DE69011101T2 (de) | Methoden zur in vitro-dna-amplifikation, zum genomischen klonieren und zur genkartierung. | |
| DE3429430A1 (de) | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von hirudin und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens | |
| DE69133066T2 (de) | Verfahren zur Expression heterologischer Gene in der Hefe Pichia Pastoris, Expressionsverfahren und transformierte Mikroorganismen | |
| DD212532A5 (de) | Verfahren zur stabilisierung und selektion von wirtszellen, die rekombinierende dna enthalten | |
| DE437100T1 (de) | Verfahren zur Klonierung und Herstellung der SfiI-Restriktionsendonuklease und Methylase. | |
| DE3716513A1 (de) | Proteine mit tnf-wirkung | |
| DE388212T1 (de) | Verfahren zur Herstellung der Hinc-II-Restriktionsendonuklease und Methylase. | |
| DE3332264C2 (de) | ||
| DE343010T1 (de) | Verfahren zur Herstellung der EagI-Restriktionsendonuklease und Methylase. | |
| DE69522192T2 (de) | Regulierende Faktor für die Expression des Nitrilasegens und ein entsprechendes Gen | |
| DE323081T1 (de) | Verfahren zur Herstellung von xbaI-Restriktionsendonuklease und -methylase. | |
| DE3433156C2 (de) | ||
| DE388136T1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und -Methylase-MwoI. | |
| DE3226515A1 (de) | Expressionsvektoren | |
| DE69331434T2 (de) | Mutanter AOX2 Promotor, diesen enthaltender Vektor, transformierte Zellen und Herstellung von heterologen Proteinen | |
| DE3534359C1 (de) | Vektoren und deren Verwendung zur Herstellung von cDNA-Genbanken | |
| DE3688816T2 (de) | Dns-sequenz. | |
| EP0316378B1 (de) | Expressionsvektor zur regulierbaren expression von fremdgenen in prokaryonten | |
| DE422951T1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Restriktionsendonuklease und Methylase Hpa I. | |
| DE4024187C2 (de) | ||
| DE69434072T2 (de) | Regulierende nukleinsaeuresequenzen und verwendungen | |
| DE3331860C2 (de) |