DE4226340A1 - DNA kodierend für Aphrodisin - Google Patents

DNA kodierend für Aphrodisin

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DE4226340A1
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aphrodisin
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Hans-Juergen Dr Maegert
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K—PEPTIDES
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Description

Gegenstand der Hauptanmeldung P 42 08 634.5 ist unter anderem DNA kodierend für Aphrodisin.
Es ist jetzt gelungen mit Hilfe der Hamster-Aphrodisin­ cDNA als Hybridisierprobe vier unabhängige Phagenklone aus einer gekauften Goldhamster-Genbank (Stratagene) zu isolieren, welche alle das Goldhamster-Aphrodisin-Gen enthalten.
Fragmente dieses Gens wurden in das Plasmid pUC 18 "sub­ kloniert" und Teile davon sequenziert. Dabei ist es ge­ lungen, zusammenhängende Sequenzdaten aus dem Bereich des Promotors-Exon I-Intron I zu erhalten. Neben den reinen Sequenzdaten (siehe anliegende Blätter Promotor-Region des "Goldhamster-Aphrodisin-Gens" und "Aphrodisin-Gen, Intron I") ergeben sich hieraus folgende Schlußfolgerun­ gen:
Die aus der Sequenz des Exons I abgeleiteten, innerhalb des prozessierten Aphrodisins liegenden Aminosäuren, stimmen vollkommen mit der Hamster-Sequenz überein (Gln Asp Phe Ala Glu).
Das Goldhamster-Aphrodisin besitzt in seiner unprozes­ sierten Form (also sofort nach Translation der Boten­ ribonukleinsäure) N-terminal zusätzlich nur ein 16 Aminosäuren langes Peptid, das eine für sekretorische Signalpeptide typische Sequenz aufweist:
In den Regionen des Promotors und des ersten Introns be­ finden sich einige kurze Sequenzen ("Motifs"), die typisch für Bindestellen diverser genregulatorischer Pro­ teine sind. Diese Bereiche sind über- und unterstrichen und mit der Bezeichnung des Sequenz-"Motifs" oder des bindenden Proteins versehen (z. B. Oct-l, NF-I, AP-l etc.).
Das Resultat einer "Northern-Hybridisierung" radioaktiv markierter Aphrodisin-cDNA gegen RNA aus verschiedenen Goldhamster-und Rattengeweben findet sich in der an­ liegenden Abbildung. Hierbei ist im erwarteten Größen­ bereich ein Signal aus Ratten-Bartholini-Drüse zu sehen, was auf die dortige Synthese eines Aphrodisin-verwandten Proteins hinweist.
Die Abbildung zeigt "Northern-Hybridisierung" radioaktiv markierter Aphrodisin-cDNA gegen RNA aus verschiedenen Hamster- und Rattengeweben.
Spuren
1 Hamster Vagina
2 Hamster Bartholini Drüse
3 Ratte Bartholini Drüse
4 Ratte Vagina Tier 1
5 Ratte Vagina Tier 2
6 Ratte Vagina Tier 3
7 Ratte Vagina Tier 4.
Das Autoradiogramm zeigt die typischen, relativ starken Hybridisierungssignale aus Hamster-Vagina und -Bartholini Drüse. Die Ratten-Bartholini Drüse zeigt ebenfalls ein Hybridisierungssignal in der für Aphrodisin-mRNA er­ warteten Höhe, was darauf hindeutet, daß dort möglicher­ weise ein ähnliches Protein synthetisiert wird.
Die Signale in Höhe der 18 S ribosomalen RNA sind wahr­ scheinlich durch eine oft beobachtete, konzentrations­ bedingte Kreuzhybridisierung mit dieser RNA zu erklären.
Das sekretorische Signalpeptid von 16 Aminosäuren ist vermutlich verantwortlich für die Ausschleusung des Aphrodisins aus der Zelle, wobei üblicherweise sekre­ torische Signalpeptidasen das Peptid schneiden und dann ausschleusen. Eine DNA kodierend für Aphrodisin und zusätzlich für eine Signalsequenz kann von erheblicher praktischer Bedeutung sein bei der Gewinnung des Aphro­ disins in eukaryonten Zellen, beispielsweise in Kulturen von Insektenzellen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit die DNA gemäß nachfolgender Patentansprüche.
Promotor Region des Goldhamster-Aphrodisin-Gens
Goldhamster-Aphrodisin-Gen, Intron I

Claims (2)

1. DNA kodierend für Aphrodisin gemäß Patentanmeldung P 42 08 634.5, dadurch gekennzeichnet, daß sie zu­ sätzlich kodiert für ein sekretorisches Signal­ peptid.
2. DNA gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Signalpeptid die Sequenz aufweist:
DE19924226340 1992-03-18 1992-08-08 DNA kodierend für Aphrodisin Ceased DE4226340A1 (de)

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