DE3900755A1 - Verfahren zur quantitativen analyse von chloridionen und testpackung zur durchfuehrung des verfahrens - Google Patents
Verfahren zur quantitativen analyse von chloridionen und testpackung zur durchfuehrung des verfahrensInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur quantitativen Analy
se von Chloridionen auf enzymatischer Basis und eine Test
packung zur Durchführung des Verfahrens. Insbesondere be
trifft die Erfindung ein Verfahren zur quantitativen Analyse
von Chloridionen in einer biologischen Probe ohne unerwünsch
te störende Einflüsse von anderen Ionen in der Probe sowie
eine Testpackung zur Durchführung dieses Verfahrens.
Derzeit werden zur quantitativen Analyse von Chloridionen in
biologischen Proben, z. B. Blutserum, Urin, zerebrospinaler
Flüssigkeit und dgl., coulometrische Titrationsverfahren und
Elektrodenverfahren angewandt. Jedoch sind coulometrische
Titrationsverfahren in automatischen biochemischen Analyse
vorrichtungen nicht leicht durchzuführen. Das Elektrodenver
fahren bringt Schwierigkeiten in Bezug auf die Ionenspezifi
tät mit sich.
Eine weitere Gruppe von analytischen Verfahren sind die
enzymatischen Verfahren. Ein derartiges enzymatisches Verfah
ren ist beispielsweise in Eur. J. Biochem., Bd. 41 (1974),
S. 171-180 offenbart. Es beruht auf der Erscheinung, daß
Chloridionen eine Veränderung der Affinität zwischen Säuge
tier-Amylasen und Calciumionen bewirken. Das Prinzip der Mes
sung von Chloridionen nach dem enzymatischen Verfahren ist
nachstehend dargestellt.
Wenn eine von einem Schwein abgeleitete pankreatische α-Amy
lase zusammen mit einem Calcium-Chelatbildner, wie Ethylen
diamintetraessigsäure (EDTA), in Abwesenheit von Chloridionen
vorliegt, setzt die pankreatische α-Amylase ihre intramoleku
laren Calciumionen frei, so daß die α-Amylase in eine inakti
ve α-Amylase übergeführt wird. Der Ausdruck "Calcium-Chelat
bildner bedeutet ein komplexbildendes Reagens, das mit
Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagieren
kann. Wird das die inaktive α-Amylase enthaltende Gemisch mit
einer biologischen Probe, wie Blutserum, vermischt, so rea
giert die inaktive α-Amylase mit den Calciumionen, so daß
die inaktive α-Amylase in die aktive Form umgewandelt wird,
wobei die Geschwindigkeit der α-Amylase-Umwandlungsreaktion
von der Konzentration der Chloridionen in der biologischen
Probe abhängt. Die Menge der umgewandelten aktiven α-Amylase
kann durch Verwendung eines Reagens zur Bestimmung der
α-Amylaseaktivität ermittelt werden. Die Konzentration an
Chloridionen läßt sich aus der gemessenen Menge der umgewan
delten aktiven α-Amylase berechnen.
Das enzymatische Verfahren weist eine höhere Ionenspezifität
als das Elektrodenverfahren auf. Ferner läßt sich das enzy
matische Verfahren in einer automatischen biochemischen Ana
lysenvorrichtung durchführen. Die Ionenspezifität des enzyma
tischen Verfahrens ist in Tabelle I auf der Grundlage, daß die
Empfindlichkeit im Bezug auf Chloridionen als 100% angesetzt
wird, zusammen mit der Ionenspezifität für das Elektrodenver
fahren angegeben.
Aus Tabelle I ist ersichtlich, daß das enzymatische Verfahren
in Bezug auf die Ionenspezifität dem Elektrodenverfahren über
legen ist.
Jedoch fehlt beim vorerwähnten herkömmlichen enzymatischen
Verfahren eine Maßnahme zur Ausschaltung von schädlichen Ein
flüssen von Nitrit- und Nitrationen in einer Probe, so daß bei
diesem Verfahren Schwierigkeiten mit der Selektivität auftre
ten. Im Rahmen der Untersuchungen, die zur vorliegenden Er
findung führten, wurde festgestellt, daß beim Vorliegen von
Nitrit- und Nitrationen eine Abnahme der Ionenspezifität gege
ben ist. Wie in Tabelle I gezeigt, beträgt der Wert bei
Nitritionen 10,3% und bei Nitrationen 9,8%. Wie bereits er
wähnt, sind beim herkömmlichen enzymatischen Verfahren keine
geeigneten Maßnahmen vorgesehen, um den nachteiligen Einfluß
dieser Ionen auszuschalten.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein neues Verfahren zur quanti
tativen Analyse von Chloridionen bereitzustellen, bei dem der
schädliche Einfluß von Nitrationen und/oder Nitritionen ver
mieden wird und die Ionenspezifität und die Genauigkeit der
Messung von Chloridionen in der Probe erhöht wird. Ferner
soll erfindungsgemäß eine Testpackung zur Durchführung dieses
Verfahrens bereitgestellt werden.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur quantitativen
Bestimmung von Chloridionen, das dadurch gekennzeichnet ist,
daß man
- - eine Chloridionen enthaltende Probe mit einem Reagens zur Zersetzung von Nitritionen oder mit einem Reagens zur Zer setzung von Nitrat- und Nitritionen behandelt;
- - die behandelte Probe mit inaktiver Amylase, einer Calcium ionen enthaltenden Komplexverbindung und einem komplexbil denden Reagens, das mit Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagieren kann, behandelt; und
- - die Menge an erhaltener aktiver Amylase, die durch die Chloridionen in der Probe aus der inaktiven Amylase ge bildet worden ist, unter Verwendung eines Reagens zur Be stimmung der Amylaseaktivität mißt und dadurch die Menge der Chloridionen in der Probe bestimmt.
Gegenstand der Erfindung ist ferner eine Testpackung zur quan
titativen Bestimmung von Chloridionen in einer Probe, die
folgende Bestandteile enthält:
- (a) ein Reagens zur Zersetzung von Nitritionen oder ein Reagens zur Zersetzung von Nitrat- und Nitritionen;
- (b) eine inaktive Amylase;
- (c) eine Calciumionen enthaltende Komplexverbindung;
- (d) komplexbildendes Reagens, das mit Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagieren kann; und
- (e) ein Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität.
Nachstehend wird die Erfindung anhand der Zeichnung näher er
läutert. Es zeigen:
Fig. 1 ein Fließdiagramm einer Ausführungsform des erfin
dungsgemäßen quantitativen Verfahrens, wobei eine
automatische Analysenvorrichtung verwendet wird;
Fig. 2 ein Diagramm zur Erläuterung des Einflusses von
Nitrationen auf die Bestimmung von Chloridionen; und
Fig. 3 ein Diagramm zur Erläuterung des Einflusses von
Nitritionen auf die Bestimmung von Chloridionen.
Beim erfindungsgemäßen quantitativen Verfahren gibt es keine
speziellen Beschränkungen in Bezug auf die zu bestimmenden
Proben. Beispiele für entsprechende Proben sind biologische
Proben mit einem Gehalt an Chloridionen, einschließlich Blut
serum, Urin, zerebrospinale Flüssigkeit und dgl.
Als Reagentien zur Zersetzung von Nitritionen werden erfin
dungsgemäß vorzugsweise Reagentien mit einem Gehalt an einer
Nitrit-reduktase verwendet. Als Reagentien zur Zersetzung von
Nitrat- und Nitritionen werden vorzugsweise Reagentien ver
wendet, die sowohl eine Nitrat-reduktase als auch eine Nitrit
reduktase enthalten. Ferner können auch andere zersetzende
Materialien, unter Einschluß von anorganischen und organi
schen Materialien verwendet werden. Es ist vorteilhaft, die
Nitrit- und Nitrationen in der Probe unter Verwendung von
Enzymen, wie Nitrat-reduktasen und Nitrit-reduktasen, zu zer
setzen, da eine enzymatische Reaktion, die eine Substratspezi
fität besitzt, die gewünschten Ionen ohne einen unerwünsch
ten Einfluß auf andere Ionen zersetzen kann.
Reaktionen von Nitrit-reduktasen mit salpetriger Säure sind
nachstehend angegeben:
Dabei bedeutet der Ausdruck "NADPH" reduziertes Nicotinamidadenin-dinucleotid-phosphat
und der Ausdruck "NADP⁺"
Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat. Der Ausdruck "NADH"
bedeutet reduziertes Nicotinamid-adenin-dinucleotid. Der Ausdruck
"NAD⁺" bedeutet Nicotinamid-adenin-dinucleotid.
Wie aus den vorstehenden Reaktionsgleichungen hervorgeht, enthält
das erfindungsgemäß verwendete Reagens mit einem Gehalt
an Nitrit-reduktase üblicherweise zusätzlich ein Coenzym,
wie NADH, NADP, reduziertes Cytochrom C oder dgl. Enzymatische
Reaktionen zwischen Nitrat-reduktasen und Salpetersäure
sind nachstehend angegeben.
Wie aus den vorstehenden Reaktionsgleichungen hervorgeht, werden
Nitrationen durch Nitrat-reduktasen in Nitritionen übergeführt.
Daher ist es möglich, gleichzeitig die in einer Probe
enthaltenen Nitrat- und Nitritionen unter Verwendung
eines Reagens, das sowohl eine Nitrat-reduktase als auch eine
Nitrit-reduktase enthält, zu zersetzen. Wie durch die vorstehenden
Reaktionsgleichungen erläutert, wirkt eine Nitrat-reduktase
zusammen mit einem Coenzym, wie NADH und NADPH, wie im
Falle einer Nitrit-reduktase. Demgemäß ist es empfehlenswert,
ein Reagens zu verwenden, das eine Nitrat-reduktase und eine
Nitrit-reduktase und zusätzlich ein Coenzym, wie NADH und
NADPH, enthält.
Bei Behandlung einer Probe mit einem der vorstehend erwähnten
Reagentien ist es empfehlenswert, die Probe mit den Reagentien
zu vermischen und zu rühren.
Erfindungsgemäß werden Calcium-Chelatbildner verwendet, d. h.
komplexbildende Reagentien, die mit Calciumionen unter Bildung
von Komplexverbindungen reagieren können. Beispiele für
Calcium-Chelatbildner sind Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA),
trans-1,2-Cyclohexandiamin-N,N,N,N′-tetraessigsäure, Glykoletherdiamin-tetraessigsäure,
Aminotetraessigsäure, Diaminopropantetraessigsäure
und dgl.
Als inaktive Amylase wird erfindungsgemäß vorzugsweise eine
inaktive Amylase verwendet, die durch ein Verfahren erhalten
worden ist, bei dem eine native α- oder β-Amylase, z.B. eine
aus Schweinepankreas erhaltene Amylase, insbesondere native
α-Amylase, mit einem komplexbildenden Mittel (z. B. EDTA),
das mit Calciumionen unter Bildung einer vorstehend erwähnten
Komplexverbindung reagieren kann, erhalten worden ist. Durch
diese Behandlung setzt die native aktive Amylase die enthaltenen
Calciumionen frei, so daß die aktive Amylase in eine inaktive
Form übergeführt wird.
Als Calciumionen enthaltende Komplexverbindungen, die erfindungsgemäß
einzusetzen sind, wird vorzugsweise ein Calciumsalz
von Ethylendiamintetraessigsäure (Ca-EDTA) oder dgl. verwendet,
das beispielsweise aus einem Calcium-Chelatbildner
und Calciumionen gebildet worden ist.
Nachdem eine Probe mit dem vorerwähnten Reagens zur Zersetzung
von Nitritionen oder dgl. behandelt worden ist, wird sie mit
der inaktiven Amylase, der Calciumionen enthaltenden Komplexverbindung
und dem Calcium-Chelatbildner vermischt. Während
dieses Vorgangs nimmt die inaktive Amylase unter Einwirkung
der in der Probe enthaltenen Chloridionen Calciumionen aus
der Calciumionen enthaltenden Komplexverbindung auf, so daß
die inaktive Amylase in die aktive Form übergeführt wird. Es
wird empfohlen, die Calciumionen enthaltende Komplexverbin
dung in einem Überschuß in Bezug zur Menge der inaktiven Amy
lase einzusetzen. Vorzugsweise werden etwa 1 Millimol der
Calciumionen enthaltenden Komplexverbindung pro 16 000 bis
20 000 Einheiten der inaktiven Amylase eingesetzt. Durch Ver
wendung eines derartigen Überschusses der Komplexverbindung
ist es möglich, eine gute Proportionalität zwischen der Menge
der in der Probe enthaltenen Chloridionen und der Menge
der gebildeten aktiven Amylase zu erzielen, so daß die in
der Probe enthaltene Amylase mit hoher Genauigkeit bestimmt
werden kann.
Wird die Probe mit der inaktiven Amylase, der Calciumionen
enthaltenden Komplexverbindung und dem Calcium-Chelatbildner
vermischt, ist es möglich, gleichzeitig in der Probe Nitrit
und Nitrationen zu zersetzen, indem man dem System ein Reagens
zur Zersetzung von Nitrat- und Nitritionen zusetzt.
Nach Bildung der aktiven Amylase aus der inaktiven Form läßt
sich die Menge dieser aktiven Amylase unter Verwendung eines
Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität ermitteln. An
schließend kann daraus die Menge der in der Probe enthaltenen
Chloridionen berechnet werden. In der Praxis wird ein vorhe
riger Test durchgeführt, bei dem eine Standardprobe mit einer
bekannten Konzentration an Chloridionen den vorerwähnten
Schritten unterzogen wird, um eine Eichkurve zu erstellen, aus
der die Beziehung zwischen der Amylaseaktivität und der Konzen
tration an Chloridionen hervorgeht. Die Menge der Chlorid
ionen in der Probe läßt sich quantitativ aus dieser Eichkurve
ermitteln.
Als Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität können erfin
dungsgemäß beliebige herkömmliche Reagentien eingesetzt wer
den. Beispielsweise können 4-Nitrophenyl-α-D-maltopentaosid,
2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltopentaosid, 2-Chlor-4-nitrophe
nyl-β-D-maltoheptaosid oder dgl. verwendet werden. Diese
Reagentien werden im allgemeinen zusammen mit α-Glucosida
se und β-Glucosidase eingesetzt.
Wie aus der vorstehenden Beschreibung hervorgeht, läßt sich
das erfindungsgemäße Verfahren zur quantitativen Analyse von
Chloridionen vorteilhafterweise unter Verwendung einer Test
packung durchführen, die folgende Bestandteile enthält:
- (a) ein Reagens zur Zersetzung von Nitritionen oder ein Reagens zur Zersetzung von Nitrat- und Nitritionen;
- (b) eine inaktive Amylase;
- (c) eine Calciumionen enthaltende Komplexverbindung;
- (d) ein Calcium-Chelatbildner; und
- (e) ein Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität.
Die Reagentien (a), (b), (c) und (d) können zu einem ersten
Reagens vereinigt werden. In diesem Fall besteht die Test
packung aus einem derartigen ersten Reagens und einem zwei
ten Reagens, das das Reagens (e) enthält. Das zweite Reagens
kann ferner die Calciumionen enthaltende Komplexverbindung
und den Calcium-Chelatbildner enthalten.
Nachstehend folgt eine ausführliche Erläuterung einer bevor
zugten Ausführungsform der Erfindung.
Gemäß dieser Ausführungsform werden eine Nitrat-reduktase,
eine Nitrit-reduktase und NADH verwendet, um Nitrat- und
Nitritionen, die die quantitative Bestimmung von Chlorid
ionen stören können, zu zersetzen. Ferner werden α-Glucosida
se, β-Glucosidase und 2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltohepta
osid als Reagentien zur Bestimmung der α-Amylase eingesetzt.
Die bei dieser Ausführungsform verwendete Testpackung besteht
aus einem ersten Reagens und dem vorerwähnten Reagens.
Das erste Reagens wird auf die nachstehend beschriebene Weise
hergestellt.
115 mg Calcium-äthylendiamintetraacetat (Calciumionen enthal
tende Komplexverbindung) und 1,1 g Dinatrium-äthylendiamin
tetraacetat (Calcium-Chelatbildner) werden zu 100 ml einer
0,1 m Phosphatpufferlösung gegeben. Das erhaltene Gemisch
wird durch Zugabe einer 5%-igen wäßrigen Natriumhydroxidlö
sung auf den pH-Wert 7,0 eingestellt. Diese Lösung wird als
"Lösung A" bezeichnet. Anschließend wird die Lösung A mit
11 KU α-Glucosidase, 300 U b-Glucosidase, 2 KU inaktiver
α-Amylase, die durch Dialyse von α-Amylase aus Schweine
pankreas gegen eine EDTA enthaltende Phosphatpufferlösung er
halten worden ist, 200 U Nitrat-reduktase, 200 U Nitrit-reduk
tase und 0,8 mM NADH vermischt. Man erhält das
erste Reagens.
Das zweite Reagens wird auf die nachstehend beschriebene Weise
hergestellt.
1,0 g 2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltoheptaosid wird in 100 ml
der vorerwähnten Lösung A gelöst. Man erhält das zweite Reagens.
Wäßrige Natriumchloridlösungen der Konzentrationen 0, 40, 80,
120, 160 bzw. 200 millimolar werden als Standardproben her
gestellt. Jeweils 6 µl der Standardproben werden mit 320 µl des
ersten Reagens und 80 µl des zweiten Reagens vermischt. Die
Absorption dieser Proben wird unter Verwendung einer automati
schen Analysenvorrichtung (HITACHI, Modell 7150) bei 37°C und
einer Hauptwellenlänge von 405 nm und einer Nebenwellenlänge
von 480 nm gemessen. Man erhält eine Eichkurve.
Die Absorption nimmt in Abhängigkeit von der Konzentration an
Chloridionen im Lauf der Zeit zu.
Fig. 1 erläutert den Betrieb der automatischen Analysenvor
richtung. Die Bestimmung der Chloridionen erfolgt in der in
Fig. 1 erläuterten Art und Weise.
Wie in Fig. 1 gezeigt, wird die Probe mit dem ersten Reagens
vermischt und zur Durchführung einer Reaktion mehrere Minuten
gerührt. Anschließend wird das zweite Reagens zu der Probe
gegeben, wonach unter Rühren eine weitere Reaktion durchge
führt wird. Vom Zeitpunkt der Zugabe des zweiten Reagens bis
zur Beendigung der Messung wird die Absorption der Reaktions
lösung in Abständen von etwa 10 Sekunden gemessen. Die Kon
zentrationen an Chloridionen werden aufgrund der ausgewählten
Absorptionsmessung, die vom analytischen Verfahren abhängt,
berechnet.
Als Probe wird ein Kontroll-Blutserum verwendet, das mit einer
Natriumnitratlösung vermischt ist. Das Kontroll-Blutserum wird
mit destilliertem Wasser in einer Menge von 1/2 Volumenteil
pro Volumenteil des Blutserums verdünnt. Die verdünnte Probe
wird als "Lösung B" bezeichnet. 1,7 g Natriumnitrat werden in
100 ml destilliertem Wasser gelöst, so daß eine Lösung mit
einem Gehalt an 200 millimolar Nitrationen erhalten wird. Die
se Lösung wird als "Lösung C" bezeichnet. Die Lösung C wird
unter Bildung von Natriumnitratlösungen mit Konzentrationen
von 40, 80, 120, 160 bzw. 200 millimolar verdünnt. Die einzel
nen Natriumnitratlösungen werden mit der Lösung B in einem Ver
hältnis von 1:1 vermischt. Die quantitative Analyse der
Chloridionen wird unter Verwendung des vorstehend erwähnten
erfindungsgemäßen Reagens oder eines bekannten Reagens durch
geführt. Das bekannte Reagens besteht aus einem bekannten
ersten Reagens und einem bekannten zweiten Reagens, mit der
Maßgabe, daß sich das bekannte erste Reagens von dem im vor
stehenden Absatz (1) erwähnten erfindungsgemäßen ersten
Reagens dahingehend unterscheidet, daß das bekannte erste
Reagens keine Nitrat-reduktase, keine Nitrit-reduktase und
kein NADH enthält. Das bekannte zweite Reagens ist identisch
mit dem erfindungsgemäßen zweiten Reagens. Die Versuchsergeb
nisse sind in Fig. 2 zusammengestellt. Wie aus Fig. 2 hervor
geht, sind beim bekannten Verfahren die ermittelten Werte
für die Menge der Chloridionen wesentlich höher als die rich
tigen Werte, wenn die Probe eine höhere Konzentration an
Nitrationen enthält. Demgegenüber läßt sich erfindungsgemäß
der nachteilige Einfluß von Nitrationen ausschalten.
1,38 g Natriumnitrit werden in 100 ml destilliertem Wasser
unter Bildung einer Lösung mit einem Gehalt an Nitritionen
in einer Konzentration von 200 millimolar gelöst. Eine Probe
wird gemäß vorstehendem Absatz (4) hergestellt. Die quantita
tive Analyse der Chloridionen wird nach dem erfindungsgemäßen
Verfahren bzw. nach dem bekannten Verfahren durchgeführt.
Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Fig. 3 dargestellt.
Wie bei der im vorstehenden Absatz (4) geschilderten Untersu
chung wird bestätigt, daß erfindungsgemäß ein Einfluß von
Nitritionen mit Erfolg ausgeschaltet werden kann.
Der Konzentrationsbereich an Chloridionen, der erfindungsge
mäß bestimmt werden kann, beträgt 0 bis 200 millimolar, ange
geben als die Konzentration in einer Probe. Diese Konzentra
tion deckt den in üblichen Blutserumproben beobachteten Chlo
rid-Konzentrationsbereich von 70 bis 130 millimolar voll ab.
Somit ist es erfindungsgemäß möglich, eine quantitative Be
stimmung von Chloridionen in einer Blutserumprobe mit einer zu
friedenstellend hohen Genauigkeit durchzuführen.
Der bevorzugte Konzentrationsbereich der einzelnen Komponen
ten in den Reagentien ist nachstehend angegeben. Für das
erste Reagens gelten folgende bevorzugten Bereiche:
α-Glucosidase: 80 bis 110 KU/Liter; β-Glucosidase: 2,5 bis
3 KU/Liter; 4a-Amylase: 2 bis 20 KU/Liter; Ca2+ (Ca-EDTA):
0,75 bis 1,5 Millimol/Liter; EDTA: 30 bis 100 Millimol/Li
ter; Phosphatpufferlösung: 0,1 m/Liter, pH-Wert 7,0;
Nitrat-reduktase: 2 bis 20 KU/Liter, Nitrit-reduktase: 2 bis
20 KU/Liter; und NADH: 8 bis 80 Millimol/Liter.
In Bezug auf die Bestandteile des zweiten Reagens gelten die
folgenden bevorzugten Bereiche: Ca2+ (Ca-EDTA): 0,75 bis
1,5 Millimol/Liter; EDTA: 30 bis 100 Millimol/Liter;
2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltoheptaosid: 3,8 bis 7,5 Milli
mol/Liter.
Es ist auch möglich, 2,5% Maltopentose anstelle von 2-Chlor-
4-nitrophenyl-β-D-maltoheptaosid zu verwenden.
Wie in den vorstehenden Abschnitten erläutert ist, wird er
findungsgemäß ein Verfahren zur quantitativen Analyse von
Chloridionen bereitgestellt, bei dem eine Stufe zur Zersetzung
von Nitrat- und Nitritionen enthalten ist, um nachteilige Ein
flüsse von Nitrit- und Nitrationen auszuschalten, so daß das
Verfahren eine hohe Ionenspezifität aufweist. Somit läßt sich
erfindungsgemäß eine quantitative Analyse von Chloridionen
unter Erzielung einer hohen Genauigkeit durchführen.
Claims (14)
1. Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Chloridionen,
dadurch gekennzeichnet, daß man
- - eine Chloridionen enthaltende Probe mit einem Reagens zur Zersetzung von Nitritionen oder mit einem Reagens zur Zersetzung von Nitrat- und Nitritionen behandelt;
- - die behandelte Probe mit inaktiver Amylase, einer Calciumionen enthaltenden Komplexverbindung und einem komplexbildenden Reagens, das mit Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagieren kann, behan delt; und
- - die Menge an erhaltener aktiver Amylase, die durch die Chloridionen in der Probe aus der inaktiven Amylase ge bildet worden ist, unter Verwendung eines Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität mißt und dadurch die Menge der Chloridionen in der Probe bestimmt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es
sich beim Reagens zur Zersetzung von Nitritionen um eine
Nitrit-reduktase handelt.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich beim Reagens zur Zersetzung von Nitrit- und
Nitrationen um ein Reagens mit einem Gehalt an Nitrit
reduktase und Nitrat-reduktase handelt.
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich beim komplexbildenden Reagens um Ethylendiamin
tetraessigsäure (EDTA) handelt.
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich bei der inaktiven Amylase um eine inaktive Amy
lase handelt, die durch Behandeln einer Säugetier-α-
Amylase mit einem komplexbildenden Reagens, das mit
Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagie
ren kann, erhalten worden ist.
6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich bei der Calciumionen enthaltenden Komplexverbin
dung um Calcium-äthylendiamintetraacetat (Ca-EDTA) han
delt.
7. Testpackung zur quantitativen Bestimmung von Chlorid
ionen, enthaltend:
- (a) ein Reagens zur Zersetzung von Nitritionen oder ein Reagens zur Zersetzung von Nitrat- und Nitritionen;
- (b) eine inaktive Amylase;
- (c) eine Calciumionen enthaltende Komplexverbindung;
- (d) komplexbildendes Reagens, das mit Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung reagieren kann; und
- (e) ein Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität.
8. Testpackung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß
sie aus einem ersten und einem zweiten Reagens besteht,
wobei das erste Reagens eine Kombination der Reagentien
(a), (b), (c) und (d) enthält und das zweite Reagens das
Reagens (e) enthält.
9. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet,
daß es sich beim Reagens zur Zersetzung von Nitrat- und
Nitritionen um ein Reagens mit einem Gehalt an Nitrat
reduktase und Nitrit-reduktase handelt.
10. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
die Menge der Calciumionen enthaltenden Komplexverbin
dung erheblich größer als die Menge der eingesetzten in
aktiven Amylase ist.
11. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich beim komplexbildenden Reagens um EDTA handelt.
12. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich bei der Calciumionen enthaltenden Komplexverbin
dung um Ca-EDTA handelt.
13. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich bei der inaktiven Amylase um eine inaktive Amy
lase handelt, die durch Behandeln einer Säugetier-α-
Amylase mit einem komplexbildenden Reagens, das mit
Calciumionen unter Bildung einer Komplexverbindung rea
gieren kann, erhalten worden ist.
14. Testpackung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß
es sich beim Reagens zur Bestimmung der Amylaseaktivität
um ein Reagens mit einem Gehalt an 4-Nitrophenyl-α-D-
maltopentaosid, 2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltopentaosid
oder 2-Chlor-4-nitrophenyl-β-D-maltoheptaosid handelt.
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