DE3886718T2 - Hydrogenierte Derivate von Antibiotika A/16686. - Google Patents
Hydrogenierte Derivate von Antibiotika A/16686.Info
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Description
- Die Erfindung betrifft depsipeptidische Verbindungen der folgenden Strukturformel I:
- R-CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub3;,
- -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2; oder
- -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2; bedeutet;
- und R' einen α-D-Mannopyranosyl-Rest oder einen 2-O-α-D-Mannopyranosyl-α-D- mannopyranosyl-Rest bedeutet, und die Säureadditionssalze davon einschließlich ihrer Gemische in irgendeinem Verhältnis, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Antibiotika.
- Die oben erwähnten Substanzen stehen in Beziehung mit dem Antibiotikum A/16686 und werden durch Hydrierung der Verbindungen, die als Antibiotikum A/16686-Faktoren A1, A2, A3, A'1, A'2 und A'3 identifiziert sind, und den Gemischen davon erhalten.
- In der US-PS 4 303 646 wird das Antibiotikum A/16686 als Substanz, die gegenüber grampositiven Bakterien aktiv ist, zusammen mit seinem Herstellungsverfahren und pharmazeutischen Präparaten, die es enthalten, beschrieben.
- Es wurde dann gefunden, daß drei eng verwandte Komponenten aus dem Antibiotikum A/16686 isoliert werden können, die als Faktoren A1, A2 und A3 bezeichnet wurden. Der Faktor A2, Ramoplanin, ist die Komponente, die in überwiegender Menge erhalten wird, und sie ist für die biologische Aktivität am wichtigsten. Die Faktoren A1 und A3 werden in geringer Menge erhalten. Diese Substanzen wie auch ihre Herstellung und ihre Verwendungen werden in der US-Patentschrift 4 427 656 beschrieben.
- Ein Verfahren für die selektive Verbesserung der Bildung der Faktoren A2 und/oder A3 des Antibiotikums A/16686 durch Zugabe geeigneter Vorstufen zu einer A/16686-erzeugenden Kultur wird in der europäischen Patentveröffentlichung 0 259 780 beschrieben.
- In der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680, für die eine Priorität der britischen Anmeldung mit dem Aktenzeichen 8 727 807 vom 27. November 1987 beansprucht wird, wird die Herstellung der Antibiotikum A/16686-Faktoren A'1, A'2 und A'3 beschrieben, deren Struktur der der Verbindungen der obigen Formel 1 entspricht, worin R' einen α-D-Mannopyranosyl-Rest bedeutet und R:
- -CO-CH=CH-CH=CH-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub3;,
- -CO-CH=CH-CH=CH-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2; oder
- -CO-CH=CH-CH=CH-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2;
- bedeutet.
- Die sechs erfindungsgemaßen Verbindungen werden der Einfachheit halber wie folgt bezeichnet (unter Bezugnahme auf Formel I):
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A1 (R: -CO(CH&sub2;)&sub6;CH&sub3;; R': 2-O-α-D-Mannopyranosyl-α-D-mannopyranosyl-Rest);
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A2 (R: -CO(CH&sub2;)&sub5;CH(CH&sub3;)&sub2;; R': wie oben)
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A3 (R: -CO(CH&sub2;)&sub6;CH(CH&sub3;)&sub2;; R': wie oben)
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A'1 (R:-CO(CH&sub2;)&sub6;CH&sub3;; R': α-D-Mannopvranosyl-Rest)
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A'2 (R: -CO(CH&sub2;)&sub5;CH(CH&sub3;)&sub2;; R': wie oben)
- A/16686-tetrahydrierter Faktor A'3 (R: -CO(CH&sub2;)&sub6;CH(CH&sub3;)&sub2;; R': wie oben)
- Die erfindungsgemäßen Verbindungen können durch Hydrierung der entsprechenden Faktoren A1, A2, A3, A'1, A'2 und A'3 oder eines Gemisches aus zwei oder mehreren von ihnen hergestellt werden. Dementsprechend kann die Hydrierung entweder mit den einzelnen Faktoren oder mit einem Gemisch aus zwei oder mehreren davon, wie beispielsweise dem A/16686-Antibiotikumkomplex, der durch Fermentation von Actionoplanes sp. ATCC 33076 (ein Stamm, der in der permanenten Kultursammlung ATCC hinterlegt ist und jetzt frei verfügbar ist und gemäß dem Budapester-Vertrag am 31. Januar 1981 angenommen ist), wie es in der US-Patentschrift 4 303 646 beschrieben wird, hergestellt werden. Weitere Beispiele für Gemische der A/16686-Faktoren sind solche, die nach dem Verfahren der europäischen Patentveröffentlichung 0 259 780 gebildet werden, wobei das Verhältnis des Faktors A2 und/oder A3 selektiv während des Fermentationsverfahrens erhöht wird, oder Gemische, die die Faktoren sowohl der A- als auch der A'-Gruppen enthalten, die durch Fermentation des oben erwähnten Actinoplanes sp. ATCC 33076 unter geeigne ten Bedingungen oder durch Behandlung der A-Faktoren-Gruppe oder ihrer Gemische mit dem Mycelium des gleichen Stamms während einer geeigneten Zeitdauer und bei geeigneten Bedingungen gemäß den Verfahren, die in der oben erwähnten europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680 beschrieben werden, erhalten werden. In allen oben erwähnten Fällen liegen die Ausgangsmaterialien entweder in Form einer freien Base oder in Form eines Säureadditionssalzes vor, wie solche, die in den US- Patentschriften 4 303 646, 4 427 656 und in der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680 beschrieben werden, und die hydrierten Produktgemische können in reine Komponenten, die den erfindungsgemäßen Tetrahydroverbindungen entsprechen, getrennt werden.
- Obgleich irgendein Typ eines Hydrierungsverfahrens, mit dem gesättigte konjugierte Doppelbindungen in einer aliphatischen Kette ohne irgendeine weitere chemische Modifizierung der verbleibenden Teile des Moleküls bzw. der Moleküle des A/16686-Ausgangsmaterials verwendet werden kann, ist die katalytische Hydrierung (vgl. beispielsweise: J. March "Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure", 2. Auflage, S. 707-715, McGraw-Hill Kogakusha Ltd., Tokyo, 1977) ein bevorzugtes Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der obigen Formel I.
- Die Hydrierungskatalysatoren werden für das erfindungsgemäße Verfahren im allgemeinen aus Übergangsmetallen und ihren Verbindungen ausgewählt. Sowohl heterogene Katalysatoren (vgl. beispielsweise M. Freifelder "Catalytic Hydrogenation in Organic Synthesis: Procedures and Commentary", John Wiley & Sons, New York, 1978; M. Freifelder "Practical Catalytic Hydrogenation: Techniques and Applications", John Wiley & Sons, New York, 1976) als auch Katalysatoren, die in dem Reaktionsmedium löslich sind (vgl. beispielsweise: James "Homogeneous Hydrogenation", J. Wiley & Sons, New York, 1973; und F.J. McQuillin "Homogeneous Hydrogenation in Organic Chemistry"; D. Reidel Publishing Co., Dordrecht, Holland, 1976), können verwendet werden. Heterogene Katalysatoren sind jedoch bevorzugt, da ihre Verwendung die Gewinnung der Reaktionsprodukte erleichtert. Palladium und Platin auf Trägern (beispielsweise Kohle bzw. Aktivkohle, Calciumcarbonat, Bariumsulfat und aktives Aluminiumoxid) oder Platinoxid sind im allgemeinen die am meisten bevorzugten Katalysatoren. Tatsächlich werden gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung 5 bis 10% Palladium-auf-Aktivkohle und Platinoxid bevorzugt als Hydrierungskatalysatoren für die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen aus A/16686-Ausgangsmaterialien verwendet.
- Das Verhältnis zwischen dem zu hydrierenden Substrat und dem Katalysator kann stark variieren. Im allgemeinen werden diese Substanzen auf Gew./Gew.-Basis in einem Verhältnis von 0,1:1 bis 1,5:1 (Katalysator zu Substrat, Gew./Gew.), ebenfalls abhängig von den spezifischen Eigenschaften des ausgewählten Katalysators und den Reaktionsbedingungen, behandelt. Im allgemeinen ist ein Verhältnis zwischen 0,5:1 und 1,2:1 (Katalysator zu Substrat, Gew./Gew.) bevorzugt.
- Bei heterogenen Katalysatoren ist das Reaktions-Lösungsmittel normalerweise Wasser, ein mit Wasser mischbares polares organisches Lösungsmittel, wie ein (C&sub1;-C&sub4;)Alkanol, ein Glycol, ein Polyglycol, ein wasserlöslicher Ether (beispielsweise 2-Methoxyethanol, Tetrahydrofuran, Tetrahydropyran) und Essigsäure oder ein Gemisch davon.
- Repräsentative und bevorzugte Beispiele für (C&sub1;-C&sub4;)Alkanole sind Methanol und Ethanol. Das bevorzugte Reaktions-Lösungsmittel wird normalerweise aus Wasser, einem Wasser/Methanol-Gemisch oder Wasser/Ethanol-Gemisch in einem Verhältnis von 20:80 bis 30:70 (Vol./Vol.) und 5 bis 20% wäßriger Essigsäure ausgewählt.
- Wenn die Hydrierungsreaktion mit einem Mineralsäure-Additionssalz der als Ausgangsmaterial verwendeten A/16686-Verbindung durchgeführt wird, wird dieses letztere üblicherweise zu dem ausgewählten Lösungsmittel zugegeben, und das Gemisch wird dann durch Zugabe einer wäßrigen Lösung der Mineralsäure bis zu einem pH-Wert von etwa 2,5 bis 3 angesäuert.
- Mit homogenen nichtionischen Katalysatoren, wie beispielsweise Chlortris(triphenylphosphin)rhodium, kann die Hydrierungsreaktion in einem organischen Lösungsmittel oder in einem Gemisch aus organischen Lösungsmitteln (beispielsweise Dimethylformamid, Benzol oder einem Gemisch aus Benzol und einem niedrigen Alkanol) durchgeführt werden. Bei homogenen ionischen Katalysatoren, wie beispielsweise Pentacyanocobaltat, sind geeignete Lösungsmittel Wasser oder Wasser/Niedrigalkanol-Gemische.
- Der Reaktionsdruck ist im allgemeinen bei den Hydrierungsreaktionen ein wesentlicher Parameter. Im allgemeinen steht er in Beziehung zu dem Typ und der Konzentration des Hydrierungssubstrats, des Katalysators und der Reaktionstemperatur. Im vorliegenden Fall kann er zwischen Umgebungsdruck und 5 Atmosphären (490332,5 Pa) liegen. Im allgemeinen werden schon hohe Ausbeuten erhalten, indem bei Umgebungsdruck oder mit einem geringen Wasserstoff-Überdruck (zwischen Umgebungsdruck und 1,5 Atmosphären) gearbeitet wird.
- Wie bei der Reaktionstemperatur, werden gute Ergebnisse im allgemeinen erhalten, wenn bei Raumtemperatur gearbeitet wird. Abhängig von den spezifischen Reaktionsbedingungen, d.h. dem Typ und der Konzentration des Katalysators und des Lösungsmittels, kann es möglich oder zweckdienlich sein, höhere oder niedrigere Temperaturen zu verwenden.
- Wie es dem Fachmann geläufig ist, variiert die Reaktionszeit in Abhängigkeit von dem Substrat und den spezifischen Reaktionsbedingungen. Im allgenieinen ist die Hydrierungsreaktion in 3 bis 12 Stunden beendigt. In jedem Fall kann der Verlauf der Reaktion durch TLC- oder HPLC-Verfahren, wie sie auf diesem Gebiet bekannt sind, verfolgt werden. Beispielsweise können Proben in Intervallen entnommen und analysiert werden, um festzustellen, wann die Reaktion beendigt ist. Die Reaktion kann dann beendigt werden, um die negative Folge eines verlängerten Kontakts zwischen dem Endprodukt und der Reaktionsmasse zu vermeiden. Ein komplementäres oder alternatives Verfahren für die Bewertung der Reaktionszeit und des Endes des Hydrierungsverfahrens beruht auf der Messung der Absorption von Wasserstoffgas durch die Reaktionsmasse, wobei in Betracht gezogen werden muß, daß jedes mol an A/16686-Ausgangsverbindung zwei mol Wasserstoffgas absorbiert.
- Nachdem die Reaktion beendigt ist, wird das Reaktionsprodukt nach per se bekannten Verfahren isoliert. Typischerweise wird der Katalysator durch Filtration abgetrennt. Der wiedergewonnene Katalysator wird gut gewaschen, und die Filtrate werden vereinigt. Diese Flüssigkeiten enthalten das Reaktionsprodukt, welches dann nach an sich bekannten Verfahren wiedergewonnen und gereinigt wird, wie durch Verdampfen, Extraktion mit Lösungsmitteln, Präzipitation durch Zugabe von Nicht-Lösungsmitteln, Säulenchromatographie und ähnlichen. Manchmal kann es zweckdienlich sein, die Filtrate auf ein geringes Volumen zur Präzipitation des rohen Hydrierungsproduktes zu konzentrieren. Die Isolierung der erfindungsgemäßen antibiotischen Substanzen aus dem rohen Hydrierungsprodukt, ihre Trennung und Reinigung erfolgt nach per se bekannten Verfahren, die die Extraktion mit Lösungsmitteln, die Präzipitation aus der erhaltenen Lösung durch Zugabe von Nicht- Lösungsmitteln oder die Änderung des pH-Werts der Lösung, die Verteilungschromatographie, die Umkehrphasen-Verteilungschromatographie, die Ionenaustauschchromatographie, die Affinitätschromatographie, HPLC-Verfahren und ähnliche einschließen.
- Wenn die katalytische Hydrierung mit einem Substrat durchgeführt wird, das ein Gemisch aus zwei oder mehreren der Faktoren A1, A2, A3, A'1, A'2 und A'3 enthält, und die Erzeugung der einzelnen tetrahydrierten Produkte gewünscht wird, erfolgt die Trennung und Reinigung bevorzugt unter Verwendung präparativer HPLC-Verfahren.
- Die präparaten HPLC-Verfahren werden üblicherweise unter Bedingungen durchgeführt, die bei der Trennung und Reinigung von Antibiotikum A/16686-Faktoren üblich sind. Beispiele für solche Trenn- und Reinigungsvorgänge werden beispielsweise in der US-Patentschrift 4 427 656 beschrieben, wo eine C-18-Alkyl-silanisierte Silicagelsäule und ein Eluierungsgemisch aus wäßrigem Ammoniumformiat und Acetonitril verwendet werden.
- Während der präparativen HPLC werden die eluierten Flüssigkeiten aus jeder Injektion durch analytische HPLC geprüft, und die Fraktionen, die an dem bzw. den einzelnen A/16686-hydrierten Faktor(en) angereichert sind, werden getrennt.
- Die Fraktionen, die an jeder der obigen Verbindungen angereichert sind, werden vereinigt und zur Trockene im Vakuum eingedampft. Gegebenenfalls werden die entsprechenden festen Rückstände durch Chromatographie unter Verwendung eines makroporösen Harzes (beispielsweise XAD-2) entsalzt, und die Eluierung erfolgt mit einer sauren Lösung. Das feste Produkt bzw. die festen Produkte, das bzw. die durch Konzentrierung der eluierten Lösung(en) resultiert bzw. resultieren, wird bzw. werden gefriergetrocknet, wobei das bzw. die entsprechende(n) reine(n) Produkt(e) in Form eines mineralsauren Additionssalzes bzw. in Form mineralsaurer Additionssalze, beispielsweise des Dihydrochlorids bzw. der Dihydrochloride, gewonnen wird bzw. werden. Das obige Verfahren kann einmal oder mehrere Male wiederholt werden, wenn die Reinheit der entstehenden Produkte nicht zufriedenstellend ist.
- Die tetrahydrierten Antibiotikum A/16686-Faktoren A1, A2, A3, A'1, A'2 und A'3 werden der Zuckergehaltsbestimmung (saure Hydrolyse), der Säure/Base-Titration, der Aminosäureanalyse (für die quantitative Menge und die Sequenz), der IR-, UV-, NMR-Spektrometrie und der Fast Atom Bombardment-Massenspektrometrie (FAB-MS) unterworfen. Die Werte, die bei diesen analytischen Tests erhalten werden, bestätigen die angenommenen Strukturen.
- Wie es in Formel I gezeigt wird, besitzen die erfindungsgemäßen antibiotischen Substanzen zwei basische Funktionen, die nach an sich bekannten Verfahren Säureadditionssalze bilden können.
- Repräsentative und geeignete Säureadditionssalze der Verbindungen der Formel I umfassen solche Salze, die durch Standardreaktionen sowohl mit organischen als auch mit anorganischen Säuren, wie beispielsweise Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff-, Schwefel-, Phosphor-, Essig-, Trifluoressig-, Trichloressig-, Bernstein-, Zitronen-, Ascorbin-, Milch-, Malein-, Fumar-, Palmitin-, Chol-, Pamoa-, Mucin-, Glutamin-, Campher-, Glutar, Glycol-, Phthal-, Wein-, Laurin-, Stearin-, Salicyl-, Methansulfon-, Benzolsulfon-, Sorbin-, Picrin-, Benzoe-, Zimtsäure und ähnlichen, gebildet werden.
- Die Umwandlung der erfindungsgemäßen freien Amino- oder Nicht- Salzverbindungen in die entsprechenden Säureadditionssalze und umgekehrt, d.h. die Umwandlung eines Säureadditionssalzes einer erfindungsgemäßen Verbindung in die Nicht-Salzform, sind dem Fachmann geläufig und ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
- Beispielsweise kann eine erfindungsgemäße Verbindung in das entsprechende Säureadditionssalz durch Auflösen der Nicht-Salzform in einem wäßrigen Lösungsmittel und Zugabe eines geringen molaren Überschusses der ausgewählten Säure hergestellt werden. Die entstehende Lösung oder Suspension kann dann zur Gewinnung des gewünschten Salzes lyophilisiert werden.
- Wenn das Endsalz in einem Lösungsmittel unlöslich ist, in dem die Nicht-Salzform löslich ist, kann das Salz durch Filtration aus der organischen Lösung der Nicht-Salzform nach der Zugabe der stöchiometrischen Menge oder eines geringen molaren Überschusses der ausgewählten Säure gewonnen werden.
- Die Nicht-Salzform kann hergestellt werden, indem das entsprechende Säuresalz in einem wäßrigen Lösungsmittel gelöst wird, welches dann unter Freisetzung der Nicht-Salzform neutralisiert wird.
- Wenn nach der Neutralisation ein Entsalzen erforderlich ist, kann ein übliches Entsalzungsverfahren verwendet werden.
- Beispielsweise können die Chromatographie an silanisiertem Silicagel, nichtfunktionalisiertem Polystyrol, Acrylverbindungen und Polydextranharzen mit kontrollierten Poren (wie Sephadex LH 20) oder an Aktivkohle zweckdienlich verwendet werden. Nach Eluierung der unerwünschten Salze mit einer wäßrigen Lösung wird das gewünschte Produkt mittels eines linearen Gradienten oder eines Stufengradienten aus einem Gemisch aus Wasser und einem polaren oder apolaren organischen Lösungsmittel, wie Acetonitril/Wasser von 50:50 bis etwa 100% Acetonitril, eluiert.
- Wie es auf diesem Gebiet bekannt ist, kann die Salzbildung entweder mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren oder mit nicht-pharmazeutisch annehmbaren Säuren als geeignetes Reinigungsverfahren verwendet werden. Nach der Bildung und Isolierung kann die Salzform eines Antibiotikums der obigen Formel I in das entsprechende Nicht-Salz oder in ein pharmazeutisch annehmbares Salz überführt werden.
- Die tetrahydrierten Faktoren des Antibiotikums A/16686 sind besonders aktiv gegenüber grampositiven Mikroorganismen. Das mikrobiologische Aktivitätsspektrum des tetrahydrierten Antibiotikum A/16686-Faktors A2 wird in der folgenden Tabelle angegeben. TABELLE 1 In vitro-Aktivität von tetrahvdriertem A/16686-Faktor A2 (Dihvdrochlorid) Stamm Staphylococcus aureus Tour 2 a) b) Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Staphylococcus haeinolyticus L 602 c) Streptococcus pyogenes C203 SKF 13400 streptococcus pneumoniae UC41 Streptococcus faecalis ATCC 7080 Streptococcus mitis L 796 Propionibacterium acnes a) Inokulum 10&sup6; CfU/ml b) unter Zugabe von 30% Rinderserum c) klinische Isolate
- Die minimale Inhibitorkonzentration bzw. minimale Hemmkonzentration (MIC) wird entweder nach dem Kulturbrühen- oder dem zweifachen Agarreihen-Verdünnungsverfahren bestimmt. Kulturmedien und Wachstumsbedingungen:
- Iso-Sensitest-Kulturmedium (Oxoid) für Staphylokokken und Streptococcus faecalis; Todd-Hewitt-Kulturmedium (Difco) für andere Streptokokken-Spezies; Wilkins-Chalgren-Agar für P. acnes [T.D. Wilkins, S. Chalgren: Antimicrob. Agents Chemother. 10, 926 (1976)]; das End-Inokulum beträgt etwa 10&sup4; koloniebildende Einheiten/ml oder Fleck. MIC wird als die niedrigste Konzentration abgelesen, die kein sichtbares Wachstum nach einer 18- bis 24stündigen Inkubation bei 37ºC zeigt; für P. acnes ist die Inkubation bei 37ºC 48 Stunden in anaerober Atmosphäre (N&sub2;:CO&sub2;:H&sub2;; 80:10:10).
- Die akute Toxizität des tetrahydrierten A/16686-Komplexes wird in CDI-Mäusen (Charles River) beiderlei Geschlechts mit einem Gewicht von 18 bis 22 g durch einfache i.v.-Injektion des Produktes, solubilisiert in ste- riler Salzlösung, bestimmt. Die Infusionsrate beträgt 0,1 ml/s. Der ungefähre LD&sub5;&sub0;-Wert beträgt 170 mg/kg. Die anderen erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen biologische Aktivitäten, die mit denen des tetrahydrierten A/16686-Faktors A2 vergleichbar sind.
- Die erfindungsgemäßen antibiotischen Verbindungen sind nützlich für die Herstellung von Arzneimitteln gegen Infektionen, insbesondere bedingt durch grampositive, stark diffundierte Bakterien. Insbesondere sind die erfindungsgemäßen Verbindungen nützlich für die topische Behandlung von Haut- und Wundinfektionen und Akne.
- Für die allgemeine Verwendung als Arzneimittel können die erfindungsgemäßen Verbindungen auf verschiedenen Wegen, entweder in Form der freien Verbindungen oder in Form ihrer Additionssalze, mit pharmazeutisch annehmbaren Säuren verabreicht werden. Diese letztere Verabreichung ist bevorzugt. Der topische Weg ist im allgemeinen der geeignetste für die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen.
- Für medizinische Verwendungen werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in pharmazeutische Dosisformen, die für die orale, topische oder parenterale Verabreichung geeignet sind, eingearbeitet, wie in Tabletten, Kapseln, Pastillen, gelartige Zubereitungen, Granulate, Pulver, Salben, Gele, flüssige Lösungen, Cremes, Lösungen für die Injektion, Suspensionen und ähnliche. Beispielsweise können die Zubereitungen der Dosisformen nach den allgemeinen Lehren von Remingston's Pharmaceutical Sciences, 17. Auflage, 1985, Merck Publishing Company, Easton, Pennsylvania, hergestellt werden.
- Die Dosiseinheit kann von 0,01 bis 99%, bevorzugt von 0,5 bis 80%, an aktivem Bestandteil enthalten. Die tägliche Dosis kann von verschiedenen Faktoren, wie von dem Körpergewicht, dem infizierenden Mikroorganismus, der Stärke der Infektion, dem Alter des Patienten, der Dauer und dem Weg der Verabreichung, abhängen. Im allgemeinen sind die erfindungsgemäßen Verbindungen in einer täglichen Dosis im Bereich von etwa 2 mg bis etwa 100 mg pro kg Körpergewicht wirksam, gegebenenfalls unterteilt in eine oder mehrere Verabreichungen pro Tag. Offensichtlich sind diese Dosismengen nur beispielhaft, und die geeignetste Dosis kann im spezifischen Fall und unter Anwendung von biologischen Testverfahren, die für die Bestimmung der Menge an aktiver Verbindung, die für die Erzeugung der gewünschten Wirkung erforderlich ist, nützlich sind, eingestellt werden.
- Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken.
- Zu einer Lösung von 250 mg A/16686-Komplex (erhalten gemäß der US-Patentschrift 4 303 646) in 25 ml von 10% CH&sub3;COOH werden 125 mg 5%iges Pd/C gegeben. Die Lösung wird bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck während 5 Stunden unter magnetischem Rühren hydriert. Nach dieser Zeit werden weitere 125 mg Katalysator zugegeben, und die Reaktion wird zusätzliche 5 Stunden weitergeführt. Gegen Ende der Reaktion werden insgesamt 5,4 ml Wasserstoff absorbiert. Das Reaktionsgemisch wird filtriert. Die klare Lösung wird gefriergetrocknet, wobei 200 mg Tetrahydroderivat des A/16686- Komplexes erhalten werden.
- Eine Probe (9 g) eines Gemisches aus A/16686-Faktoren, welches die Faktoren A1, A2, A3, A'1, A'2 und A'3 in dem gleichen Verhältnis wie in Beispiel 4 der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680 [d.h.: Faktoren A1 (10%), A2 (28%), A3 (9%), A'1 (10%), A'2 (38%), A'3 (5%); HPLC-Titer] enthält, wird bei den gleichen Bedingungen wie in Beispiel 1 hydriert. Das gefriergetrocknete Gemisch der hydrierten Verbindungen (etwa 8 g) wird durch eine präparative Umkehrphasen-Säule (Lichrosorb RP-18, 10 um, 250 mm x 50 mm, Merck) unter Verwendung eines Gemisches aus CH&sub3;CN/0,05M HCOONH&sub4;, 4:6, als Eluierungsmittel in einer Strömungsgeschwindigkeit von 12 ml/min weiterverarbeitet. Es wird eine Vorrichtung verwendet, die durch Zusammenbau einer Waters-Pumpe, Modell 590, und eines Waters-Lambda-Max-UV-Dektors, Modell 481LC (λ = 254 nm), erhalten wird. Das Tetrahydroderivat-Gemisch wird in Versuchen von etwa 200 mg, jeweils gelöst in 5 ml Wasser, verarbeitet. Die Fraktionen, die jeden der Faktoren enthalten, werden gesammelt und mit einer Säule, die mit einem makroporösen vernetzten Polystyrolharz gefüllt ist (XAD-2, 80 cm x 2,6 cm, Rohm und Haas), verdampft und entsalzt, wobei zuerst mit Wasser zur Eliminierung des Ammoniumformiats und dann mit einem Gemisch aus CH&sub3;CN/HCl N/100 (1:1) eluiert wird. Die eluierten Fraktionen, die den jeweiligen tetrahydrierten Faktor enthalten, werden eingedampft, und der Rückstand wird gefriergetrocknet, wobei die entsprechenden tetrahydrierten Faktoren der Titelverbindung als entsprechende Dihydrochloride erhalten werden.
- Zu einer Lösung von 1 g Antibiotikum A/16686-Faktor A2 in 60 ml N/1000 HCl (pH 3) werden 0,33 g PtO&sub2; gegeben, und das Gemisch wird bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck hydriert. Nach 7 Stunden sind 80 ml Wasserstoff absorbiert, und die Reaktion ist beendigt. Diatomeenerde (0,5 g Celite) wird zugegeben, und der Katalysator wird durch wiederholte Filtration auf dem gleichen Filter, bis ein klares Filtrat erhalten wird, abfiltriert. Die klare Lösung wird nochmals durch ein 0,22 um mikroporöses Filter (Millex GC, Waters) zur Entfernung von Spuren des Katalysators filtriert. Das Filtrat wird gefriergetrocknet, wobei 0,82 g des Tetrahydroderivats von dem Antibiotikum A/16686-Faktor A2 erhalten werden. Das gleiche Verfahren kann für die Herstellung der anderen tetrahydrierten Faktoren aus den entsprechenden ungesättigten Verbindungen verwendet werden.
- Vorrichtung: Hewlett-Packard-Flüssigkeitschromatograph, Modell 1084 B, ausgerüstet mit einem UV-Detektor, der bei 254 nm eingestellt ist.
- Säule: Erbasil C-18, 10 um, 250 mm x 4,6 mm (Carlo Erba).
- Mobile Phase: A) 0,05M HCOONH&sub4;
- B) CH&sub3;CN
- Strömungsgeschwindigkeit: 0,8 ml/min Gradientenprofil:
- Bei diesen Bedingungen sind die Retentionszeiten (tR) wie folgt (die Werte der entsprechenden nichthydrierten Verbindungen sind in Klammern angegeben): tR (Minuten) Tetrahydro - A
- Die Zuckerbestimmung erfolgt nach der Säurehydrolyse (2N H&sub2;SO&sub4;, 100ºC, 2 Stunden), wie von B. Cavalleri et al. in The Journal of Antibiotics, Bd. 37, Nr. 4, S. 309-317, 1984, beschrieben. Die Anwesenheit von zwei D-Mannoseeinheiten für jedes Molekül der drei hydrierten Faktoren A1, A2 und A3 und einer D-Mannoseeinheit für jedes Molekül der drei hydrierten Faktoren A'1, A'2 und A'3 wird festgestellt.
- Die Säurehydrolyse wird mit den drei tetrahydrierten A1-, A2- und A3-Verbindungen mit 6N HCl bei 105ºC während 20 Stunden in einem versiegeiten Rohr durchgeführt. Das Aminosäurengemisch wird durch Säulenchromatographie an einem stark sauren Sulfonsäure-Divinylbenzolharz (Dowex 50 W) durch Eluierung mit wäßriger HCl mit steigenden Konzentrationen von 0,05N bis 2N getrennt.
- Die Aminosäuren werden durch Vergleich mit authentischen Proben auf der Grundlage von ¹H-NMR und GC-MS identifiziert. Das Aminosäureverhältnis und ihre Sequenz in den intakten Molekülen werden durch NMR-Versuche bestimmt.
- Alle drei Verbindungen zeigen die gleichen Aminosäurezusammensetzungen und Sequenzen.
- In der folgenden Tabelle II sind der Typ und die Zahl der Aminosäurereste in jedem der drei tetrahydrierten A-Faktoren angegeben.
- Die tetrahydrierten A'-Faktoren besitzen die gleiche Zahl an Aminosäureresten, was aus der Hydrolyse folgt, die mit der als Ausgangsmaterial verwendeten ungesättigten Verbindung durchgeführt wurde, die in der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680 beschrieben wird. Tabelle II Aminosäure Zahl der Einheiten Threo-β-hydroxyasparaginsäure Asparaginsäure Allo-threonin Glycin Alanin 4-Hydroxyphenylglycin Leucin Phenylalanin 3-Chlor-4-hydroxyphenylglycin Ornithin
- Zwei Äquivalente von Ammoniak pro mol von jedem Faktor werden in den entsprechenden Säurehydrolysegemischen mittels eines automatischen Aminosäureanalysators titriert, wodurch die Anzeichen für zwei primäre Amidgruppen gegeben sind.
- Außerdem übersteigt die Gesamtzahl der Amid-Stickstoffatome (19), die aus den ¹&sup5;N NMR-Versuchen folgt, um zwei die Zahl der Stickstoffatome, die an Peptidbindungen entsprechend der Zahl der Aminosäuren in dem Molekül (Tabelle II) beteiligt sind. Die Titration der Faktoren zeigt keine Anwesenheit von freien Carbonsäuregruppen. Diese Überlegungen beweisen, daß die zwei primären Amidgruppen an den Asparagin- bzw. Threo-β-hydroxyaparaginsäureeinheiten vorhanden sind.
- Die NMR-Spektren wurden innerhalb eines Temperaturbereiches von 25 bis 60ºC mit einem Bruker-AM 250-Spektrometer, der mit einem Aspect 3000-Computer ausgerüstet ist, aufgenommen.
- Für die 2D-NMR-Spektren werden eine Standard-Pulssequenz und Standard-Software mit geringen Modifizierungen zur Unterdrückung des Wasserpeaks während der Messung verwendet.
- Die folgenden 2D-Verfahren werden verwendet: COSY, verstärktes bzw. relayed COSY, doppelverstärktes bzw. doppel-relayed COSY [W.J. Chazin. D.P. Goldenberg, T.E. Creighton, K. Wüthrich: Euro. J. Biochem., 152, 429- 437 (1985)], COSY mit Verstärkung der Kupplungen im langen Bereich [A. Bax, R. Freeman: J. Magn. Reson. 44, 542-561 (1981)], NOESY (S. Macura, K. Wüthrich, R.R. Ernst: J. Magn. Reson. 47, 351-357 (1982)] und COLOC [H. Kessler, C. Griesinger, J. Zarbock, H.R. Loosli: J. Magn. Reson. 57, 331-336 (1984)].
- In der folgenden Tabelle III sind die ¹H-NMR chemischen Verschiebungen (δ, ppm) der Aminosäuren der Aminosäuregruppierung des tetrahydrierten Antibiotikum A/16686-Faktors A2 in H&sub2;O/DMSO, 4:1, bei pH 6,4, Temp.: 40ºC, Innenstandard TMS (δ = 0,00 ppm) angegeben. Tabelle III Aminosäure Andere Asparaginsäure β-Hydroxyasaraginsäure 4-Hydroxyphenylglycin Ornithin Threonin Phenylalanin Phenyl Tabelle III (Fortsetzung) Aminosäure Andere Ornithin 4-Hydroxyphenylglycin Threonin Glycin Leucin Alanin 3-Chlor-4-hydroxyphenylglycin Phenyl
- Die ¹H-NMR-Spektren, bezogen auf die Aminosäuregruppierung, der anderen hydrierten Faktoren zeigen das gleiche Muster wie das des tetrahydrierten Faktors A2.
- In der Fig. 1 ist das ¹H-NMR-Spektrum des tetrahydrierten Faktors A2 dargestellt.
- Die Hydrierung der konjugierten Doppelbindungen der Fettsäure- Seitenketten wird durch die Abwesenheit der vinylischen Protonenresonanz in den ¹H-NMR-Spektren der tetrahydrierten Faktoren angezeigt, die unter den in Beispiel 4.3. beschriebenen Versuchsbedingungen aufgenommen wurden.
- Die D-Mannoseeinheit der hydrierten A'-Faktoren ergibt die folgenden ¹H-NMR-Signale (δ, ppm) für jeden der drei A'-Faktoren in H&sub2;O/DMSD, 4:1, bei pH 4,6, Temperatur 40ºC, Innenstandard TMS (6 0,00 ppm); 5,40 (ein anomeres Proton); 4,01; 3,91-3,71; 3,60-3,51 (andere Protonen). Die Verbindungsstelle des Zuckers zu der peptidischen Gruppierung wird durch NMR-Versuche (Nuclear Overhauser Effect) bestimmt. Für die hydrierten A- Faktoren ergibt die D-Mannoseeinheit die folgenden ¹H-NMR-Signale (6, ppm) für jedes von ihnen bei den oben gegebenen Versuchsbedingungen: 5,68; 5,03 (zwei anomere Protonen); 4,01; 3,91-3,71; 3,60-3,51 (andere Protonen).
- Die Anwesenheit eines Lactonrings wird durch die Absorption bei 1760 cm&supmin;¹ in dem IR-Spektrum (vgl. bei Beispiel 5, Paragraph 5.1) belegt. Die Stellung der Lactonbindung wird sichergestellt durch:
- a) Identifizierung der Aminosäure, die zu der Lactonbindung mit ihrer Carbonsäuregruppe beiträgt,
- b) Identifizierung der Hydroxyaminosäure, die zu der Lactonbindung mit ihrer Hydroxylgruppe beiträgt.
- Gemäß Stufe a) wird fein vermahlenes CaCl&sub2; (2,5 g) zu einer gekühlten (0 bis 5ºC) Lösung von NaBH&sub4; (1,5 g) in absolutem EtOH (150 ml) un- ter magnetischen Rühren zugegeben. Nach 1,5 Stunden wird der tetrahydrierte Faktor A2 (1 g), gelöst in trockenem DMF (60 ml), tropfenweise zugegeben. Das gekühlte Reaktionsgemisch wird während 24 Stunden gerührt, dann vorsichtig in Wasser (600 ml) gegossen. Der pH wird auf 5 mit wäßriger HCl eingestellt, und die Lösung wird an einer Säule, gefüllt mit makroporösem vernetzten Polystyrolharz XAD-2 (Amberlite, Rohm und Haas), durch Eluieren zuerst mit H&sub2;O zur Entfernung der Salze und danach mit eineni Gemisch von 0,01N HCl/CH&sub3;CN, 1:1, zur Gewinnung des reduzierten Peptids entsalzt. Fraktionen, die das Peptid enthalten, werden vereinigt und zur Trockene im Vakuum konzentriert.
- Der Rückstand wird mit 6N HCl bei 105ºC während 20 Stunden hydrolysiert. Die saure Lösung wird nach der Extraktion mit Ethylacetat im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird an einer Dowex 50Wx4-Säule durch Eluieren mit 0,05N HCl chromatographiert. Die Fraktionen, die die gewünschte Verbindung (geprüft durch bidimensionale HPTLC/Cellulose, erster Versuch: Butanol/Essigsäure/Wasser, 4:1:5, obere Schicht; zweiter Versuch: Pyridin/Wasser, 4:1, Flecken der Aminosäuren werden durch Sprühen mit Ninhydrin und Erwärmen bei 120ºC während 5 Minuten nachgewiesen) enthalten, werden vereinigt und konzentriert. Der ölige Rückstand wird erneut durch präparative Dünnschichtchromatographie (SiO&sub2;, 5 mm dick, Butanol/Essigsäure/Wasser, 4:1:5, obere Schicht) gereinigt, wobei 2-Amino-2-(3-chlor-4-hydroxyphenyl)ethylalkohol erhalten wird: ¹H-NMR (250 MHz, DMSO-d&sub6;) δ, ppm 3,45 (m, CH, teilweise überlagert durch das Wassersignal); 3,38 (m, CH&sub2;); 6,92 (d, CH- 5); 7,11 (dd, CH-6, ³J = 8,8 Hz); 7,32 (d, CH-2, &sup4;J 2,5 Hz). Die Struktur wird weiter durch Vergleich mit einer authentischen Probe, die aus 3-Chlor- 4-hydroxyphenylglycin (30 mg) hergestellt wurde, die in ihren Methylester (MeOH, HCl) überführt wurde, dann mit Ca(BH4)&sub2; reduziert wurde, wobei das oben beschriebene Verfahren verwendet wurde, bestätigt.
- Die Stufe b) wird durchgeführt, indem zuerst der tetrahydrierte Faktor A2 mit Phenylisocyanat umgesetzt wird. Dieses letztere reagiert mit allen freien Hydroxyl- und Aminogruppen des Peptids und ergibt Urethane bzw. Harnstoffe, die im allgemeinen gegenüber der durchgeführten Säurehydrolyse recht beständig sind, wie in Beispiel 4, Paragraph 3 beschrieben. Die Menge an Hydroxyasparaginsäure nimmt nicht ab, während die Mengen der anderen hydroxylierten Aminosäuren abnehmen, was anzeigt, daß dies die Aminosäure ist, die mit ihrer Hydroxylgruppe an der Lactonbindung teilnimmt.
- Dementsprechend wird der tetrahydrierte Faktor A2 (100 mg) in DMF (2 ml) gelöst, und Phenylisocyanat (300 ul) wird zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei Raumtemperatur 48 Stunden stehengelassen, durch Zugabe von H&sub2;O (20 ml) abgeschreckt und filtriert. Die feste Verbindung wird hydrolysiert und auf ihre Aminosäurezusammensetzung, wie in Beispiel 4, Paragraph 3 beschrieben, analysiert. Dieser Schluß wird weiter durch die Tatsache bestätigt, daß die Hydrolyse, die mit dem Phenylisocyanatderivat einer Faktor-A2-Verbindung, bei der der Lactonring zuvor durch Behandlung mit 0,1N NaOH während 0,5 Stunden bei Raumtemperatur und anschließende Ansäuerung mit 0,1N HCl geöffnet wurde, eine sensible Abnahme der Menge an Hydroxyasparaginsäure zeigt.
- Die gleichen Versuche, die mit tetrahydrierten Faktoren A1 und A3 durchgeführt wurden, ergeben entsprechende Ergebnisse. Wie für die hydrierten A'-Faktoren wird auf die Werte, die in der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680 angegeben sind und die die entsprechenden ungesättigten Verbindungen betreffen, vertraut.
- 5.1. Das IR-Spektrum des tetrahydrierten Faktors A2, aufgenommen als Nujol-Mull mit einem Perkin-Elmer-Spektrophotometer, Modell 580, ist in Fig. 2 der beigefügten Zeichnungen dargestellt. Es werden die folgenden Absorptionsmaxima beobachtet: 3700-3100 (ny NH und ny DH); 3020-2800 (Nujol); 1760 (ny C=O, Lacton); 1630 (ny C=0, Amid 1); 1510 (δ NH, Amid II); 1460 und 1375 (Nujol); 1230 (ny C-O, Lacton); 1055-970 (ny C-O, Zucker); 840 und 815 cm&supmin;¹ (γ, CH, aromatische Protonen).
- Die Spektren der anderen hydrierten Faktoren zeigen keine wesentlichen Unterschiede.
- 5.2. Das Ultraviolettspektrum des tetrahydrierten Faktors A2, aufgenommen in Wasser mit dem Perkin Elmer-Spektrophotometer, Modell 320, ist in Fig. 3 der beigefügten Zeichnungen dargestellt. Das Spektrum zeigt die folgenden Absorptionsmaxima: 232 nm (E 1%, 1 cm 173,8) und 275 nm (E 1%, 1 cm 27,8).
- Die UV-Spektren der anderen tetrahydrierten Faktoren zeigen keine wesentlichen Unterschiede.
- 5.3. Die Fast Atom Bombardment-Massenspektren (FAB-MS) werden mit einem MS9/50TC-Instrument unter Verwendung eines Thioglycerol/Glycerol-Gemisches, 1:1, als Matrix aufgenommen.
- Bombardiergas XE; kinetische Energie 6 keV; Beschleunigungsspannung 4 kV. Die isotopen Cluster der kationisierten Molekularionen MH&spplus; zeigen Molekulargewichte von 2543 (tetrahydrierter Faktor A1), 2557 (tetrahydrierter Faktor A2) bzw. 2571 (tetrahydrierter Faktor A3) (niedrigste Isotopzusammensetzungen). Diese Werte und die Anwesenheit in den Spektren von Fragmentionen, die dem Verlust von 325 ug aus den entsprechenden MH&spplus;-Ionen entsprechen, stehen in Übereinstimmung mit den zugeordneten Strukturen.
- Für die hydrierten A'-Faktoren wird auf die Werte vertraut, die in der schwebenden europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnr. 0 318 680, die die entsprechenden ungesättigten Verbindungen betrifft, angegeben sind.
- Die Elementaranalyse ergibt nach dem Trocknen der Probe bei etwa 140ºC bei inerter Atmosphäre die folgenden ungefähren Zusammensetzungen in Prozentgehalten: Tetrahydrierter Faktor Aschen %
- Die obigen Werte stehen in Übereinstimmung mit denem, die für die entsprechenden Dihydrochloridsalze der sechs Verbindungen berechnet wurden.
Claims (15)
1. Verbindung der Formel 1:
worin:
R -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub3;.
-CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH3)&sub2; oder
-CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2; bedeutet; und
R' einen α-D-Mannopyranosyl-Rest oder einen 2-O-α-D-
Mannopyranosyl-α-D-mannopyranosyl-Rest bedeutet, und die
Säureadditionssalze davon einschließlich ihrer Gemische in
irgendeinem Verhältnis.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub3;
bedeutet und R' den
2-O-α-D-Mannopyranosyl-α-D-mannopyranosyl-Rest bedeutet.
3. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2;
bedeutet und R' die in Anspruch 2 gegebene Bedeutung besitzt.
4. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R -CO-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)&sub2;
bedeutet und R' die in Anspruch 2 gegebene Bedeutung besitzt.
5. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R die in Anspruch 2 gegebene Bedeutung
besitzt und R' α-D-Mannopyranosyl bedeutet.
6. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R die in Anspruch 3 gegebene Bedeutung
besitzt und R' α-D-Mannopyranosyl bedeutet.
7. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß R die in Anspruch 4 gegebene Bedeutung
besitzt und R' α-D-Mannopyranosyl bedeutet.
8. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Form des
Dihydrochlorids.
9. Verfahren zur Herstellung der Verbindung nach Anspruch
1, dadurch gekennzeichnet, daß eine
Verbindung, ausgewählt aus Antibiotikum-A/16686-Faktoren A1, A2,
A3, A'1, A'2 und A'3 oder einem Gemisch aus zwei oder
mehreren dieser in irgendeinem Verhältnis, hydriert wird und, wenn
ein Tetrahydroderivaten-Gemisch erhalten wird, gegebenenfalls
die einzelnen tetrahydrierten Faktoren aus dem
Tetrahydroderivaten-Gemisch nach an sich bekannten Verfahren abgetrennt
und gereinigt werden.
10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch
gekennzeichnet, daß die Hydrierung eine katalytische
Hydrierung ist und daß der Katalysator ein heterogener
Katalysator ist, ausgewählt aus Palladium und Platin auf Trägern
und Platinoxid, bevorzugt 5% bis 10% Palladium-auf-Aktivkohle
und Platinoxid, und daß die Hydrierung bei Umgebungsdruck und
-temperatur durchgeführt wird.
11. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 für die
Verwendung als antibakterielles Mittel.
12. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 für die
Verwendung bei der topischen Behandlung von Wundinfektionen
oder Akne.
13. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1
bis 8 für die Herstellung eines Arzneimittels für die
Bekämpfung infektiöser Krankheiten, die durch grampositive
Mikroorganismen bedingt sind.
14. Pharmazeutisches Präparat, dadurch
gekennzeichnet, daß es eine Verbindung nach Anspruch 1 als
aktiven Bestandteil enthält.
15. Pharmazeutisches Präparat nach Anspruch 14, insbesondere
für die topische Behandlung von Wundinfektionen oder Akne.
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