JPS61502400A - 抗生物質ｌ１７３９２（デグルコテイコプラニン）の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗生物質Ｌ１７３９２　（デグルコテイコプラニン）の製造方法抗生物質Ｌ１７ ３９２は、グリコペプチドの抗生物質ティコプラニンからすべての糖部分を除去 することにより得られる抗生物質である。

ティコプラニンは以前ティコマイシンと命名さｎた抗生物質の国際非所有名称（ ＩＮＮ）であり、この抗生物質は炭素、窒素および無機塩類の同化可能な源を含 有する培養基中で株アクチノプラネス・テイコミセ−？７Ｘ（Ａｃｔｉｎｏｐｌ ａｎｅｓ　ｔｅｉｃｈｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）ｎｏｖ、ｓｐ、ＡＴＣＣ３１１２ １を培養することによって得られる（米国特許第４，２３９，７５１号参照）、 上に引用した特許に記載される手順に従い、分離された発酵流体培養基からティ コプラニンＡ、、Ａ２およびＡ３を含有する抗生物質複合体を適当な水不溶性有 機溶媒で抽出し、そして普通の手順に従い抽出溶媒から沈殿させることによって 回収される。ティコプラニンＡ２は、単離される抗生物質の複合体の主要成分で あり、次いで得られた混合物からセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ＠）のカラ ムクロマトグラフィーにより分離される。

結晶質の純粋な抗ノニ物質Ｌ１７３９２の物理化学的特性ａ）　９より大きいｐ Ｈ値の水および水性メタノール、エタノールおよびアセトン中に可溶性であり； エチルアルコールおよびジメチルホルムアミド中にわずかに可溶性である、 ｂ）次の吸収極大を示す紫外吸収極大ニー　０．ＩＮの塩酸中ニ ー　Ｏ，ｌＮの水酸化ナトリウム中： 入　２９７ｎｍ（Ｅ’％　＝１６５．３）ｍａｘ　１ｃｍ Ｃ）次の主として有意な吸収極大（ｃｍ””）をもつ赤外吸収スペクトル（ｎｕ ｊｏｌ）： ３２５０　（νＮＨ，およびフェノールのν０Ｈ）１６４５　（アミド　エ） １６１０　（ｐｃＯｏ−） １５９５（δＮＨ３＋） １５２０　（アミド　■） ｄ）　ブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＷＨ−２７０スペクトロメーターを使用し、 ＤＭＳＯ−ｃｈ、中で５０℃および２７０ＭＨｚにおいて記録したＩＨＮＭＲス ペクトル（内部標準ＴＭＳ、δ；０．ＯＯｐｐｍ）のＤ２０交換および選択的デ カップリング（ｄｅｃａｕｐｌｉｎｇ）実験の後に得られるＩＨＮＭＲデータの あるものは、次の通りである（δ、多重度）：２．８５−３．３０．２ｃｌｄ、 ４．１２、ｄｄ、４．３７、ｄ；４．４５、ｄ；４．５０．ｓ；５．００．ｄｄ ｄ；５．１１、ｄ；５．１４．ｄ；５．３５、ｄ、５．５６．ｄ、５．６０、ｄ ：６．３−７．９、ｍ；８．５５、ｄ、７．３７、ｄ、７．５０、ｄ、７．６１ 、ｄ；８．２６、ｄ、８．２８、ｄ　、　８　、５−１０．２、ｂｒ； ｄ　＝二重線 ｄｄ　＝二重線の二重線 ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線 Ｓ　＝−重線 ｍ　＝多重線 ｂｒ　＝幅広い ｅ）次の概算百分率組成（平均）を示す元素分析：炭素５８．０５％；水素３． ５８％；窒素８．２３％；塩素５．８５％；　（１１％の重量損失について補正 後、熱重量分析により測定）、ｆ）ＦＡＢ−ＭＳ分析によっても確認された１１ ９９の分子量、ｇ）次の式［入手可能なデータに基づいて計算］Ｃ５８Ｈ４ＳＣ １２Ｎ７０１８ ｈ）ペリソープ（Ｐｅｒｉ　５ｏｒｂ）ＲＰ−８［３０Ｂｍ；ブルり（Ｍｅｒｃ ｋ）］を充填した予備カラム（ｐｒａ−ｃｏ　ｌｕｍｎ）（５ａｍ）、次いでリ チロソーブ（ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ）ＲＰ−８（１０ｇｍ）を予備充填した／＼ イバー（Ｈｉ　ｂａｒ）ＲＴ−２５０−４カラム［メルク（Ｍｅｒｃｋ）］を使 用し、そして０．２％の水性ギ酸アンモニウム中の１０％〜３０％のアセトニト リルの直線的段階−勾配を用いて溶離するＨＰＬＣによって分析したとき、１２ ．２分の保持詩間（ｔＲ）；流速：２ｍｌ／分（内部標卆：英国特許出願公開第 ２１２１４０１号のティコプラニンＡ２成分２、ｔＲ＝２２．４分）、ｉ）塩を 形成できる酸性官能基（ａｃｉｄｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、１）１１！を形成 できる塩基性官能基（ｂａｓｉｃ　ｆｕｎｃｔ　１ｏｎ）、ｍ）糖残基をもたな い。

物理化学的データに基づいて、次の式を抗生物質Ｌ１７３９２に帰属同一の構造 式を有する物質は、欧州特許出願第０００９８５７号（こ開示されており、そし て抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂと名付ζすられてｌ、Ｎる。

この物質は微生物学的方法により得られ、この方法は株ストレプトマｐｔｏｍｙ ｃｅｓ　ｖｉｒｇｉｎｉａｅ）Ｎ１５１５６を抵当な培養基中で発酵させ、含ま れる抗生物質Ａ４１０３０因子Ｂを単離し、精製し、そしてその成分に分割する ことを包含する。

抗生物質Ｌ１７３９２は、それぞえ塩基および酸と塩を形成できる酸官能性およ び塩基官能性を有する。抗生物質Ｌ１７３９２の酸および／または塩基の塩は、 一般に、それ自体既知の手順により調製すること力くできる。

これらの手順は、抗生物質Ｌ１７３９２を少なくとも１モル当量の選択した酸ま たは塩基と反応させることからなる。

抗生物質Ｌ１７３９２と塩基との塩を調製する好ましい手順は、抗生物質Ｌ１７ ３９２および塩基を約等モル量で水中で便利には室温において反応させ、そして 得られた溶液を塩化反応の終りに凍結乾燥することからなる。

抗生物質Ｌ１７３９２と酸との塩を調製する好ましい手順は、抗生物質Ｌ１７３ ９２および選択した水性低級アルコール中で、便利には室温において反応させる ことからなる０次いで、水を排除し、そして抗生物質Ｌ１７３９２の所望の塩を 非溶媒、例えば、エチルエーテルの有機相への添加により沈殿させる。低級アル コールの好ましい例は、水とブタノールとの混合物である。好ましい水／ブタノ ールの比は約３０ニア０である。

抗生物質Ｌ１７３９２と塩基との塩の代表例は、アルカリ金属、例えば、ナトリ ムまたはカリウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウムの塩である。これ らの塩基との塩は、また、アミノ酸、例えば、リジンおよびアルギニンとの塩を 包含する。

抗生物質Ｌ１７３９２と酸との塩の代表例は、次の酸との付加塩である：塩酸、 臭化水素酸、硫酸、リン酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、 マロン酩、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸 、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニ ル酢酸、桂皮酸、２−フェノ午シ安息香酸、メタンスルホン酸および２−ヒドロ キシェタンスルホン抗生物質Ｔ−１７３９２の生体外抗バクテリア活性を、マイ クロタイター（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ）系における２倍希釈を使用して決定した 。トッド昏ヘウィッ）　（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉ　ｔ　ｔ）の流体培養基［ディフ コ（Ｄｚｆｃｏ）］をストレブトコッキ（ｓｔｒｅｐｔｏｃ。

ｃｃｉ）バクテリアについて使用し、そしてアインセンシテスト（工５ｏｓｅｎ ｓｉｔｅｓｔ）流体培養基［オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）］をススタフ４０コツキ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）およびグラム陽性バクテリアについて使用した。

−夜の流体培養基の培養物を希釈して、最終の接種物が約１０４コロニー形成単 位／ｍｌ　（ｃｆｕ／ｍｌ）になるようにした。最小阻止濃度（ＭＩＣ）を、３ ７°Ｃにおいて１８〜２４時間のインキュベーション後に可視生長を示さない最 小濃度として読んだ。

得られる結果を下表Ｉに報告する： 表　工 Ｌ１７３９２の試験管内抗バクテリア活性ＣＣ６５３８０，０２５ ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）Ｔ。

ｕｒａ）　０．２ ｍ１ｄｉｓ）ＡＴＣＣ１２２２８０，０１２５Ｇ　２０３　０．０５ ストレプトコツカス・ニューモニアエ（Σｙｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕ ｍｏｎｆａｅ）ＵＣ４１０，０５ ＡＴＣＣ７０８００，１ エシエリヒアψコリ（Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｔ）ＳＫＦ　１２１４０　２ ５ プロテウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅ■ｌ−ｖｕｌｇａｒｉｓ）Ｘ　１９　ＨＡ ＴＣＣＣＣ１０１４５＞Ｚｏ。

ａ）接種物：１０６ｃｆｕ／ｍ１ ｂ）３０％のウシ血清の存在下に決定した。

抗生物質Ｌ１７３９２は、スタフ４０コツキ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ。

ｃｃｉ）　（Ｓ、ａｕｒｅｕｓ）　（Ｓ、ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対して非 常に活性であることがわかった。とくに、それは種々の臨床的分離物メチシリン （ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ）抵抗性スタフ４０コツキ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ ｃｉ）に非常に有効であった。いくつかの実験の結果を表Ｈに報告する： 表■ 有機体　ＭＩＣ（ルｇ／ｍ１） Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　Ｌ　１０９６　０．０５Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　Ｌ　１０９ ７　０．０５Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　Ｌ　１５２４　０．１Ｓ、　ａｕｒｅｕｓ　 Ｌ　１５２６　０．０５Ｓ、　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　７８５　０．０５ Ｓ、　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　Ｌ　８３５　０．０５Ｓ、　ｅｐｉｄｅｒｍｉ ｄｉｓ　Ｌ　１３７８　０．０５ 複雑な分子、例えば、グリコペプチドの抗生物質からのすべての糖部分の除去は 、常に多くの困難を有することが知られている。事実、適度の酸条件は通常糖部 分を部分的にのみ除去し、より強い酸加水分解条件は基質の部分的分解および／ またはキラル中心の立体化学的立体配置の変化を促進する０例えば、アボパルシ ンという名称のグリコペプチドの抗生物質の真のアグリコンは決して分離されな い。なぜなら、この物質について、同様な物質を使用して、「コア・ペプチド」 構造を変更しないですべての糖部分を除去することができる選択的加水分解条件 を案出することがまだ可能でなはいからである。上の考察は、次の科学文献にヤ ーナル・オブφアメリカン・ケミカル拳ソサイアティ（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、ｓ ｏｃ、）、１０５，６９１５　（１９８３）：Ｗ、Ｊ、−ｖクガーレン（ＭｃＧ ａ　ｈ　ｒ　ｅ　ｎ）ら、ジャーナル壷オブ・アンチビオチックス（Ｊ、Ａｎｔ ｉｂｉｏｔｉｃｓ）、３６．１６７１　（１９８３）。

上に引用した文献においてティコプラニン化合物またはティコプラニン様化合物 を対応するティコプラニンアグリコン（抗生物質Ｌ１７３９２またはデグルコテ イコブラニン）の共有する特別の加水分解条件を使用することを誰が示唆してい るかの支持は存在しない。その上、ティコプラニン様化合物（下の定義した）か ら糖部分のすべてを除去して抗生物質Ｌ１７３９２を生成ることは、基質の化学 構造またはキラル中心の修飾または変更を同時に引き起こさないで実施しなくて はならない。なぜなら、これらの修飾は生ずる物質の生物学的活性を不都合に影 響を及ぼすからである。

本発明の方法は、適当なデグルコテイコプラニンエステルを接触水素化分解して 抗生物質Ｌ１７３９２を生成することに関する。

デグルコテイコプラニンエステルは、接触水素化分解のより切離し可能であるエ ステル結合を有することを特徴とする、ティコプラニンのアグリコン部分のカル ボキシ官能におけるエステル誘導体の１種であることができる。

本発明の方法において適当な材料であるデグルコテイコプラニンエステルの代表 例は、ベンジル、置換ベンジル、ベンズヒドリル、４−ピコリルエステルなどで ある。「置換ベンジル」という語は、フェニル環において、クロロ、ブロモ、フ ルオロ、ニトロ、（Ｃ＋−Ｃ３）アルキル、（Ｃ＋−Ｃ３）アルコキシなどから 成る群より選択される少なくとも１つの置換基、好ましくは１〜３つの置換基に で置換されたフェニルメチル基を示し、ただしトリーニトロフェニル基を除外す る。前記置換されたフェニル基の例は次の通りである＝３−クロロベンジル、４ −クロロベンジル、２．３−ジクロロベンジル、２．４−ジクロロベンジル、２ ，４．６−トリクロロベンジル、３−フルオロベンジル、４−フルオロベンジル 、３−メチルベンジル、３−メトキシベンジル、２−エトキシベンジルなどであ る。

本発明の水素化分解に用いる触媒は、ある数の既知の触媒、例えば、この分野に おいて知られているゼロ価の状態のおよび／または適当な担体上のパラジウム、 ニッケル、銅、コバルトの１種であることができ、ただしそれらは「阻害された （ｐｏｉｓｏｎｅｄ）Ｊ触媒として使用される。

好ましい金属触媒は、炭素、炭酸バリウム、硫酸バリウムおよび硫酸カルシウム から選択される担体上のパラジウムである。本発明の方法における優れた結果は 、硫酸バリウム上に担持された５〜１０％のパラジウムを使用することにより得 られる。

この反応は、一般に、不活性溶媒、すなわち、反応過程を不都合に妨害しない有 機溶媒中で実施する。適当な溶媒の代表例は、反応温度において液体である低級 アルコールおよび好ましくは室温において液体であるもの、例えば、メタノール およびエタノール、ジオキサン、グリコール類およびグリコールモノアルキルエ ーテル類、例えば、エチレングリコールおよびエチレングリコールモノメチルエ ーテルである。一般に、この反応は酸性媒質中で実施される。

反応混合物中に添加すべき好ましい酸は、むしろ強い鉱酸、例えば、ハロゲン化 水素酸１例えば、塩酸である。

反応媒質の圧力は、一般に、臨界的パラメーターであり、そして主として使用す る触媒の型に依存する。−競゛に、それは周囲圧力および約５気圧である。

反応温度は選択した触媒および圧力に依存する。好ましい温度は室温であるが、 必要に応じて、３０〜４０°Ｃまでの温度を用いることができる。

触媒が鉱酸の存在下の硫酸バリウム上の５−１０％のパラジウムであるとき、本 発明の方法は有利には室温および常圧において実施される。

この場合において、＄実、反応は合理的期間（０，５〜５時間）以内に非常に高 い収率（８０〜９０％）で完結されるので、温度または圧力を増加することは必 要ではない。

本発明の方法は本質的に純粋なデグルコテイコプラニンエステルまたはその酸付 加塩についそ実施するとき、木質的に純粋な抗生物質Ｌ１７３９２が得られる。

反応過程はこの分野において知られているようにＴＬＣまたはＨＰＬＣ手順によ り、例えば、ＵＶまたはオートバイオグラフィーの検出を使用して容易に監視す ることができる。ＵＶ検出は約２５４ｎｍにおいて実施するが、オートバイオグ ラフィーの検出はティコプラニン抗生物質に感受性の微生物を使用して実施する 。

本発明の方法において使用する水素の理論的量はエステル基質の１モルにつき約 １モルである。一般に、この分野において知られているように、過剰量の水素は 反応の完結に必要である。

次いで、反応生成物を、それ自体既知の手段により、例えば、非溶媒による沈殿 、溶媒抽出、溶媒からの結晶化およびクロマトグラフィーおよび逆相カラムクロ マトグラフィーにより回収しかつ精製する。

すでに述べたように、むしろ精製された出発物質を使用するとき、得られる抗生 物質Ｌ１７３９２は許容されうる純度を有する。抗生物質Ｌ１７３９２のそれ以 上の精製を必要とするかあるいは望む場合、それは通常の精製技術により、とく に、クロマトグラフィー、例えば、「逆相」高性能液体クロマトグラフィー（Ｈ ＰＬＣ）およびカラムクロマトグラフィーにより得ることができる。

好ましい精製手順は、逆相力ラムクロマトグラフィーの使用を包含する。この場 合における好ましい吸着剤は、０．０６〜０．２ｍｍの粒度分布範囲を有するシ ラン化シリカゲルである。

溶離剤はこの精製技術において使用される親水性混合物の１つであることができ る、これらの親木性溶離剤の代表例は有機酸のアンモニウム塩ノ希釈水溶液、ア セトニトリルまたは水溶性低級アルカノールの混合物である。有機酸のアンモニ ウム塩の希釈水溶液の代表例は０．１〜６％のギ酸アンモニウム水溶液であり、 一方適当なアルカノールの例はメタノール、エタノール、プロパツールなどであ る。好ましい溶離剤はｐＨ６〜８の水性ギ酸アンモニウムとアセトニトリルとの 混合物または水性ギ酸アンモニウムとメタノールとの混合物である。好ましい手 順は、シラン化シリカゲル（０，０６〜０．２ｍｍ）を使用しかつ０．２％の水 性ギ酸アンモニウム中の５〜２１％のアセトニトリルの直線の段階的勾配で展開 する第１逆相クロマトグラフイーおよび、溶離剤としてアセトニトリル／水のｌ 　：　ｌｉ合物を使用する第２カラムクロマトグラフイーを包含する。

他の好ましい手順は、次のものを包含する：ａ）　粗製の抗生物質の溶液を０． ２％の水性ギ酸アンモニウム／メタノール／ｎ−ブタノール、１：２：３中でシ ラン化シリカゲルと混合し、そして溶媒をストリッピングする、ｂ）　残留物を シラン化シリカゲル（０、０６〜０．２ｍｍ）のカラムの上部へ適用し、０．６ ％のギ酸アンモニウムおよびアセトニトリル、９：１、で展開し、溶離液を排出 し、そして水中のアセトニトリルの１＝９〜１：４の直線の勾配で溶離を続ける 。

本発明の反応プロセスの過程を監視することができ、あるいはＨＰＬＣにより反 応生成物を滴定することのできる方法の例は、次の通りである：試料を反応混合 物から前もって決定した時間に抜出し、０．２％ギ酸アンモニウム／アセトニト リル、５０　：　５０　（ｖ／ｖ）の混合物中で約２ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希 釈し、そしてＨＰＬＣ系中に注入（２０琲１）する、ＨＰＬＣ系は２０ル１のル ープ・インゼクター争レオダイｙ（Ｒｈｅｏｄｙｎｅ）７１２５；２５４ｎｍの ＵＶ検出器およびペリンーブ（Ｐｅ　ｒ　ｆ　ｓ　ｏ　ｒ　ｂ）　ＲＰ−８マー ク（Ｍｅｒｋ）（３０〜４０ｐｍ）を充填した予備カラムおよび引続くリクロン ーブ（ＬｉＣｈｒ。

ｓ　ｏ　ｒ　ｂ）　ＲＰ−８（ｌ　Ｏｇｍ）を予備充填したハイパー・マーク（ Ｈｉｂａｒ　Ｍｅｒｋ）カラム（２５ｃｍ）を備えるクロマトグラフ拳パリアン （Ｖａｒｉａｎ）５０００である。

溶離剤：Ａ中の５％のＢかもＡ中の６０％のＢの勾配、３０分以内、中速３　ｍ 　ｌ　／分； 溶ｉＡ：ｏ、２％の水性ギ酸アンモニウム；溶液Ｂニアセトニトリル。

上の手順に従い得られる生成物は、木質的に純粋な抗生物質Ｌ１７３９２であり 、この説明に従う使用のために満足すべき物理化学的および生物学的特性を有す る。

抗生物質Ｔ、　１７３９２は、また、粗製反応生成物から直接に、あるいは実質 的に純粋な抗生物質Ｌ１７３９２の処理により、結晶質の純粋な物質として得る ことができる。

結晶質の純粋な抗生物質Ｌ１７３９２は、事実、実質的に純粋な非晶質抗生物質 を水とアセトニトリルとの混合物、９：１、ＰＨＨＩ３７、中に懸濁することに よって得ることができる。ＰＨは便利にはＩＮ４酸の添加により調節される。生 ずる溶液をカラムクロマトグラフィーにより精製し、次いでプールした抗生物質 Ｌ１７３９２含有分画を約２４時間放置して結晶質抗生物質Ｌ１７３９２を沈殿 させる。

この場合において、好ましいカラムクロマトグラフィー手順は、希釈水性ギ酸ア ンモニウムで平衡化したシラン化シリカゲルのカラムに酸性溶液を適用し、水で 洗浄し、そして１０％から４０％の水中のアセトニトリルの直線の勾配；流速７ ０ｍ１／時間、３０時間、で展開することからなる。

この手順は、また、粗製抗生物質Ｌ１７３９２に直接適用することができ、ある いはここに開示する水素化分解プロセスの終に触媒の除去後シこ得られる粗製抗 生物質Ｌ１７３９２の溶液に適用することができる。

抗生物質Ｌ１７３９２結晶は無色の針状結晶である。

「木質的に純粋な」という用語は、この開示の抗生物質について用いるとき、９ ５％（前もって決定したＵＶ波長、一般に２５４ｎｍにおけるピークの面積の％ ）より大きいＨＰＬＣのタイター、１０〜１ｆｆｉｆｆｉ％の水および溶媒の含 量および０．５重量％より低い無機残留物を有する物質を意味する。

本発明の方法の出発物質であるデグルコテイコプラニンエステル誘導体は、次式 ＩＩにより表わされる： 式中、Ｒは、上に定義したように、接触水素化分解により切離し可能であるエス テル結合を隣接カルボキシ基と形成するアルコールのアルキル残基であり、そし てＡ、ＢおよびＺは水素原子を表わす、これらのデグルコテイコプラニンエステ ルは、適当なティコプラニン様物質を制御された条件下にエステル化することに よって調製される。ここで便宜上、「ティコプラニン様」物質または基質は、テ ィコプラニン、ティコプラニン因子、抗生物質Ｌ１７０５４．抗生物質Ｌ１７０ ４６、およびそれらの任意の比率の温合物を表わす。

これらのティコプラニン様物質のあるものは、ＲおよびＲ１が水素を表わし、Ａ が水素またはＮ　［（Ｃ＋ｏ　Ｃ＋＋）脂肪族アシル］−β−Ｄ−グルコサミン であり、Ｂが水素またはＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンであり、そしてＺ が水素またはα−Ｄ−マンノースである上ｃｈｏｍｙｃｅｔ　１ｃｕｓ）ＡＴＣ Ｃ３１１２１により得られる抗生物質であり、そして米国特許第４，２３９，７ ５１号に開示されている。

英国特許出願公開第２１２１４０１号は、抗生ティコプラニン（以前にはティコ マイシンと呼ばれた）因子Ａ２が５種類の密接に関連する同時に生成される成分 の混合物であることを開示している。最近の構造の研究に従うと、ティコプラニ ンＡ２の成分１．２．３．４および５を、ＲおよびＲ２の両者が水素であり、Ａ がＮ−・［（Ｃ１゜−０１１）脂肪族アシル］−β−Ｄ−グルコサミン基であり 、ＢがＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン基であり、モして２が水素またはα −Ｄ−マンノースである上の式１により表わすことが可能である。

これらの糖部分のすべては、存在するとき、ティコプラニン核へ〇−グリコシド 結合を介して結合している。（Ｃ＋　ｏ　−Ｃ＋　＋　）脂肪族アシル基の代表 的かつ好ましい例は、ｎ−デカメイル、８−メチルノナメイル、Ｚ−４−デセノ イル、８−メチルデカノイルおよび９−メチルデカノイルである。

抗生物質Ｌ１７０５４および抗生物質Ｌ１７０４６はティコプラニンの加水分解 生成物である。それらは、それぞれ、欧州特許出願部８４１０２６６６．９号お よび欧州特許出願部８４１０２６６５．１号に記載されている。それらはティコ プラニン、その純粋な因子または前記因子のいずれかの任意の比率の混合物を選 択的に加水分解し、これにより出発物質の１つまたは２つの糖部分を除去するこ とにより得られる。

さらに詳しくは、Ｎ　［（Ｃ＋ｏ　Ｃ＋＋）脂肪族アシル］−β−Ｄ−グルコサ ミン基を選択的に除去すると抗生物質Ｔ、　１７０５４が得られ、一方Ｎ−［（ Ｃ＋　ｏ　−Ｃ＋　１）脂肪族アシル］−β−Ｄ−グルコサミン基およびα−Ｄ −マンノース基を選択的に除去すると抗生物質Ｌ１７０４６が得られる。

抗生物質Ｌ１７０５４を生成するための好ましい加水分解条件は、次の通りであ るニア０〜９０℃の温度において一般に１５〜９０分の時間の間の約０．５Ｎ塩 酸。

抗生物質Ｌ１７０５４は、ＲおよびＲ１が水素原子であり、Ａがヒドロキシであ り、ＢがＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンであり、そしてＺがα−Ｄ−マン ノースである上の式■により表わされる。

抗生物質Ｌ１７０４６を調製するための好ましい加水分解条件は、次の通りであ る２５０〜９０℃の温度において一般に３０〜９０分の時間の間の約１〜３Ｎ塩 酸。

抗生物質Ｌ１７０４６は、ＲおよびＲ１が水素原子であり、ＡおよびＺがヒドロ キシであり、ＢがＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンである上の式Ｈにより表 わされる。

すでに述べたように、式■のデグルコテイコプラニンエステルは適当なティコプ ラニン様物質を制御された条件下でエステル化することによって調製される。

エステル化手順の反応条件は、「ティコプラニン核」が修飾されずかつ出発物質 の糖部分がエステル化の完結前に加水分解されるような条件である。本発明のデ グルコテイコブラニンエステル中間体を調製する便利な手順は、テイコプラ二ノ 様化合物を過剰量の式ＲＯＨ（式中、Ｒは上に定義した通りである）のアルコー ルと、酸触媒、例えば、３７％の塩酸の存在下に反応させることを含む。好まし くは、式ＲＯＨのアルコールは反応温度において液体であり、こうしてそれがま た反応媒質として作用することができ、こうして他の適当な溶媒の添加を不必要 とする。この反応は好ましくは減圧下に実施する０反応温度は、反応圧力が約２ ０　ｍｍＨｇであるとき、一般に５０〜８０℃である。必要に応じて、３７％の 塩酸と適当なアルコールとの混合物を少しずつ時々添加して、蒸発する反応媒質 を補充する。

水と最小共沸混合物を形成できる適当な不活性溶媒をまた少しずつ添加し、次い で形成する共沸物を減圧蒸留する。水と最小共沸混合物を形成できる溶媒の例は 、次の通りである：ベンゼン、トルエン、ブチルエーテル、四塩化炭素、クロロ ホルム、シクロヘキサン、２，５−ジメチルフラン、ヘキサン、ノナン、ｍ−キ シレンなど。

アルコール性塩酸を添加し、次いで最小共洟混合物形成溶媒を添加し、そして形 成する水性共８物を蒸留して、反応を完結することによって、これらの操作を変 更した（すなわち、所望のエステル誘導体を許容しうる収率または最適収率で生 成する）。

デグリコテイコプラニンエステル塩酸　の物理化学的特性ａ）　パーキン−エル ？−（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）８５０計器を用いるＩＲ（ｎｕｊｏｌ）の記 録：ｐＣＯｘステル＝１７３０ｃトに報告したＨＰＬＣ系（ｔＲデグリコテイコ プラニン　１１゜４分） Ｃ）　メチルセロソルブ＠／水４：１中に溶解した試料のｐＫａ値。

６．６７ ｄ）　ｔｒＶ吸収極大（ｎｍ）＋　２８０　（メタノール中）、２７９（０゜Ｉ Ｎ塩酸４０．２７９（リン酸塩緩衝液ｐＨ７，４中）、２９８（０，ＩＮ水酸化 ナトリウム中）； ｅ）　元素分析（１４０℃で窒素雰囲気中で前もって乾燥した試料について決定 ）： 実測値： ０％５８．５７；Ｎ％４．１４．Ｎ％７．２８：Ｃ１％（合計）ｂ）７．９０． Ｃ１％（イオン性）ｂ）２．６６、無機残留物％０）０．２；重量損失％ｄ）１ ０．１ Ｃ６５Ｒ５１Ｃ１２Ｎ７０１　Ｂについての計算値：０％５８．９０．Ｎ％３． ９５．Ｎ％７．４０．Ｃ１％（合計）ｂ）８．０２．Ｃ１％（イオン性）ｂ）２ ．６７゜ｂ）収量損失および無機残留物について補正した。

Ｃ）酸素雰囲気中で９００℃で試料を加熱後に決定した。

ｄ）１４０℃で熱重量分析により決定した。

抗　物質Ｌ１７０４６の物理化学的特 抗生物質Ｌ１７０４６は、次の特性を有する：ｂ）ｐＨ＞８．０の水、ジメチル ホルアミド、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールおよびメチルセロソ ルブ中に自由に溶解し：メタノール中にわずかに溶解し：ｎ−ヘキサン、エチル エーテルおよびアセトン中にほとんど不溶性である； Ｃ）次の吸収最大を示す紫外吸収極大ニー　Ｏ，ｌＮの塩酸中ニ ー　０．ＩＮの水酸化ナトリウム中ニ ー　リン酸１′！！緩衝液、ｐＨ７，４中：ｄ）次の観測可能な吸収極大（Ｃｍ ’）をもつ赤外吸収スペクトル（ｎｕｊｏｌ）： ３７００−２０００．２９７０−２８５０　（ｎｕ　ｊ　ｏ　Ｉ）、１６５５． １６１０．１５９５．１５１５．１４９０．１４６０　（ｎｕ　ｊ　ｏ　ｌ）、 １３７５　（ｎｕ　ｊｏ　１）、１３００．１２３０．１１４５．１０６０．１ ０１０．８９０，８５０．８２０．７２０　（ｎｕ　ｊ　ｏ　１）ｅ）試料を約 １４０℃で不活性雰囲気中で前もって乾燥した後（重量損失＝８．４％）の元素 分析、これは次の概算百分率組成（平均）：炭素、５６．７４％：水素、４．２ ７％：窒素、７．９９％；塩素、５．１１％；灰分、０．６％ ｆ）下に示すＴＬＣ系における次のＲｆ値：溶離系（Ｖ／ｖ）　Ｒｆ値 工）アセトニトリル１５％の水７５：２５　０．５３［シリカゲル　ゾルり（Ｍ ｅｒｃｋ）６０’Ｆ２５ａ］ ■）アセトニトリル１５％の水性硫酸ナトリウム３０ニア０　０．５４ ［シリカゲル　メルク（Ｍｅｒｃｋ） シラン化６０　Ｆ２５４］ 可視化：　ＵＶ光、２５４ｎｍ；３％のエタノール性ニンヒドリン；１％のメタ ノール性フルオレスカミン：ｇ）　１５０Ｘ４　、０ｍｍ１７）ゾルパックス（ Ｚｏ　ｒｂａｘ）＠ＯＤＳ　（５〜６μｍ）カラム（Ｚｏｒｂａｘはデュポン社 のオクタデシルシランシリカマトリックスについての商標である）を使用し、そ して溶液Ａ中の０％〜５０％の溶液Ｂの直線勾配で４０分間溶離する逆相ＨＰＬ Ｃにより分析した時、ｉｏ、ｓ分の保持時間（ｔＲ）溶液Ａ　：　２５　ｍＭ（ ７）Ｎ　ａ　Ｈ２ＰＯａ　／アセトニトリル（９二１）、０、ＩＮのＮａＯＨで ｐＨ６，０にｗｔ衝化：溶液Ｂ　：　２５ｍＭ（７）ＮａＨ２ＰＯ４／アセトニ トリル（３ニア）、０　、ＩＮ（７）ＮａＯＨでｐＨ６，０に緩衝化、波速２ｍ ｌ／分；（内部標準：３，５−ジヒドロキシトルエン　ｔＲ５，６０分）ｈ）　 ０２０交換および選択的デカップリング（ｄｅｃｏｕｐｌｉｎｇ）実験の後に得 られるＩＨＮＭＲデータのあるものは、次の通りである（ＩＨＮＭＲスペクトル はＤＭＳＯ−ｄ６中で５０℃および２７０ＭＨｚにおいて２０ｍ４７ｍ１の試料 濃度で記録する：内部標準、ＴＭＳδ＝０．００ｐｐｍ）（δｐ、ｐｍ、多重度 ）：１．８６、ｓ；２．８１、ｄ、３．５、ｄｄ：約３−４．４．２１、ｄ、４ ．３２、ｄ：４゜３７、ｄ、４．５６、ｓ；４．９５、ｄｄｄ、５．０７、ｓ； ５．３１、ｄ；５．３９．ｓ；５．５１．ｓ；５．６６、ｄ、６．１２、ｄ：６ ．２９、ｓ：６．３２、ｓ；６．３７．ｓ；６．４２．ｓ；６．６０、ｄ：６． ６２、ｄ、６．６４、ｄ：６．９２、ｄ、７．０９、Ｓニア、１２、ｄニア、２ １．ｄニア、２５、ｄニア、４３、ｄ、７．６４、ｄ、７．６６、ｄ；７．７０ ．ｄ、７．８５、ｓ；８．１２、ｄ；８．４６、ｄ：約９．５．ｓ ｉ）メチルセロソルブ：水４：１中で、同一溶媒混合物中の０．０ＩＮより多く を含有する試験化合物の溶液を０．０１ＮのＮａＯＨで滴定したとき、次のｐ　 Ｈ１／　２値をもつ３つの滴定勾配を有する電位差滴定のプロフィル：　ｐＨ１ ／２＝５．０　（１当量）、７．０（１当量）および１１（５当量） １）塩を形成できる酸性室ｔ＠基 ｍ）ｊｔ！を形成できる塩基性官能基 Ω）Ｎ−７セチルーβ−Ｄ−グルコサミンである糖残基。

抗生物質Ｌ１７０５４の物理化学的特性抗生物質Ｌ１７０５４は、次の特性を有 する：ｂ）ｐＨ＞８．０の水、ジメチルホルアミド、ジメチルスルホキシド、プ ロピレングリコールおよびメチルセロソルブ中に自由に溶解し；メタ／−Ａ中に わずかに溶解し：エチルエーテルおよびアセトン中にほとんど不溶性である； Ｃ）次の吸収極大を示す紫外吸収極大ニー　０．ＩＮの塩酸中二 人　２７８ｎｍ（Ｅ’％ ｍａｘ　１ｃｍ＝””　６） −Ｏ，ＬＮの水酸化ナトリウム中： １％ 入　２９７ｎｍ（Ｅ　＝１１８．８） ｍａｘ　１　ｃｍ −リン酸塩緩衝液、ｐＨ７，４中二 ｅ）次の観測可能な吸収極大（ｃｍ’−’　）をもつ赤外吸収スペクトル（ｎｕ ｊｏｌ）： ３７００−２０００．２９７０−２８５０　（ｎｕｊ　ｏ　ｌ）、１６５５、！ ６１０，１５９５．１５１５．１４９０．１４６０　（ｎｕｊｏｌ）、１３７５ 　（ｎｕｊ　ｏ　ｌ）、１３００．１２３０．１１４５．１０６０．１０２０． ９７０．８９０，８５０．８２０．７２０　（ｎｕ　ｊ　ｏ　Ｉ）ｅ）試料を約 １４０℃で不活性雰囲気中で前もって乾燥した後（重量損失＝７．８％）の元素 分析、これは次の概算百分率組成（平均）：炭素、５５．４６％；水素、４．５ ０％：窒素、７．２０％；塩素、４゜６７％；灰分、０．２％ ｆ）下に示すＴＬＣ系における次のＲｆ値：溶離系（Ｖ／ｖ）　Ｒｆ値 ■）アセトニトリル１５％の水７５：２５　０．３２［シリカゲル　メルク（Ｍ ｅｒｃｋ）６０Ｆ２　ｓ　４］ Ｈ）アセトニトリル１５％の水性硫酸ナトリウム３０ニア０　０．６１ ［シリカゲル　メルク（Ｍｅｒｃｋ） シラン化６０　Ｆ２５４１ 可視化：　ＵＶ光、２５４ｎｍ；３％のエタノール性ニンヒドリン；１％のメタ ノール性フルオレスカミン：ｇ）１５０Ｘ４　、Ｏｍｍ（７）シルバー、クス（ Ｚｏｒｂａｘ）のｏＤｓ（５〜６７ｚｍ）カラム（Ｚｏｒｂａｘはデュポン社の オクタデシルシランシリカマトリックスについての商標である）を使用し、そし て溶液Ａ中の０％〜５０％の溶液Ｂの直線勾配で４０分間溶離する逆相ＨＰＬＣ により分析した時、８．３分の保持時間（ｔＲ）溶液Ａ二２５ｍＭのＮａＨ２Ｐ ｏ１１　／アセトニトリル（９：　１）、０．１ＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に緩 衝化：溶液Ｂ：２５ｍＭのＮａＨ２ＰＯａ　／アセトニトリル（３：　７）　。

０　、ＩＮのＮａＯＨでｐＨ６，０に緩衝化、流速２　ｍ　ｌ　／分：（内部標 準：３，５−ジヒドロキントルエン　ｔ　Ｒ５、６０分）ｈ）Ｄ２０交換および 選択的デカップリング（ｄｅｃｏｕｐ　］　ｉ　ｎｇ）実験の後に得られるＩＩ ｉＮＭＲデータのあるものは、次の通りである（ＩＨＮＭＲスペクトルはＤＭＳ Ｏ−ｄ６中で５０℃および２７０ＭＨｚにおいて２０ｍｇ／ｍｌの試料濃度で記 録する；内部標準、ＴＭＳδ＝Ｏ，ＯＯｐｐｍ）（δｐｐｍ、多重度）：ｌ、８ ８、ｓ；２．８５、ｄ；約３．５、ｄｄ、３−４．４．２０、ｄ：４．□４８、 ｄ：４゜５０、ｄ；４．６２．ｓ；４．９６、ｄｄｄ、５．１８、ｄ、５．３１ 、ｓ；５．３５．ｄ；５．３９、ｓ；５．６Ｂ、ｄ、５．７１、Ｓ；６．２０、 ｄ；６．４１．ｓ；６．５１．ｓ；６．５６、ｓ；６．７４、ｄ、６．７７、ｓ ；６．８０．ｓ；６．８０、ｄ、６．９８、ｄニア、０８、ｓ；７．１５、ｄ、 ７．２１、ｄ、７．２８、ｄ、７．３５、ｄ；７．５０、ｄ、７．５６、ｄ、７ ．６４、ｄ、７．７３、ｄ；７．８６、ｓ；８．４２、ｄ ｉ）メチルセロソルブ：水４：１中で、同一溶媒混合物中の０．０ＩＮより多く のＨＣＩを含有する試験化合物の溶液を０．０１ＮのＮ　ａＯＨで滴定したとき 、次のｐＨ１７２値をもつ３つの滴定勾配を有する電位差滴定のプロフィル：　 ｐＨ１／２＝５−０　（１当−！：）、７．０（１当量）および１１（５当量） ｌ）塩を形成できる酸性官能基 ｍ）塩を形成できる塩基性官能基 ｎ）α−Ｄ−マンノースおよびＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンである２つ の糖残基。

次の実施例は本発明を実施できる方法を例示するが、それら自体、未発明の全体 の範囲を限定するように解釈されるべきではない。

５００　ｍ　ｌのＣＨｓ　０Ｈ１０、１Ｎ　ＨＣ１（ｖ／ｖ）中（７）４．９ｇ の木質的に純粋なデグルコテイコプラニンベンジルエステル塩酸Ｊｆｉの溶液を 、室温および大気圧において３．５ｇの５％のＰｄ／ＢａＳＯ４の存在下に水素 化する９３０分以内に、約１４５ｍ１のＨ２が吸収される。コ（ｒ）Ｑ濁液を一 過し、触媒を２００ｍ１のＣＨ３０Ｈ／Ｈ２０，１：ｌ（ｖ／ｖ）溶液でよく洗 浄し、次いでそれを廃棄する。濾液を合わせ、６００　ｍ　ｌのｎ−ブタノール を添加し、モし−〔得られる溶液を小さい体積にＣ１１ａする。アセトンを添加 することにより、固体を分離させ、これを集め、アセトンで洗浄し、次いでエー テルで洗浄し、そして室温において一夜真空乾燥すると、４．Ｏｇの本質的に純 粋な抗生物質Ｌ１７３９２、塩酸塩が得られる。

丈施桝ヱ上　粗製抗生物質Ｌ１７３９２の精製上の実施例に従うが、粗製デグル コテイコプラニンベンジルエステルを使用することにより、粗製抗生物質Ｌｌ　 ７３９２が出発物質と実質的に同一の純度で得られる。

粗製抗生物質Ｌ１７３９２が得られるとき、それは次の手順に従って精製するこ とができる： ５．３ｇの粗製抗生物質Ｌ１７３９２　（タイター６０％）を１１の０．２％の 水性ギ酸アンモニウム／メタノール／ｎ−ブタノール、１：２　：　３　（ｖ／ ｖ／ｖ）　、の混合物中に溶解し、そしてシラン化シリカゲル［０、０６〜０　 、２ｍｍ　；　？−り（Ｍｅ　ｒ　ｋ）　６０コ　（２０ｇ）をそれに添加する 。退出の攪拌した後、溶媒を減圧下にストリッピングし、そして残留物を水中の ７５０ｇのシラン化シリカゲル［０、０６〜０゜２ｍｍ；マーク（Ｍｅｒｋ）］ で調製したクロマトグラフィーのカラムの上部へ適用する。このカラムを１１の ０．６％の水性ギ酸アンモニウムおよびＣＨ３ＣＨ，９：　１　（Ｖ／Ｖ）、の 混合物で展開する。この溶離液を廃棄し、次いで溶離を９：１から６＝４の水中 のアセトニトリルの直線の勾配で２００　ｍ　ｌ　７５ｊ間の速度で約３０時間 続ける。

２５ｍ１の分画を集め、モしてＨＰＩ、Ｃにより監視する。デグルコティコブラ ニン含有分画（２００〜２５０）をプールし、そしてｎ−ブタノールを添加する 。攪拌後、この混合物を小さい体積に減圧下に濃縮し、エチルエーテルを添加し 、分離する固体を濾過により集め、エチルエーテルで洗浄し、そして４０℃で減 圧乾燥すると、０．９ｇの本質的に純粋な抗生物質Ｌ１７３９２が得られる。

実施例３：　結晶質の純粋な抗生物質Ｌ１７３９２の調製１００ｍ１の水／アセ トニトリル、９０　：　Ｈ）（ｖ／ｖ）中の木質的純粋な抗生物質Ｌ１７３９２ 　（０，９ｇ）の懸濁液のｐＨを、室温においてＩＮ塩酸で１．７にする。得ら れる溶液をシラン化シリカゲルのカラム［２００ｇ、０．０６〜０．２ｍｍ、　 マーク（Ｍｅ　ｒ　ｋ）　６０］（１％の水性ギ酸アンモニウムと平衡化した） に流速２０ｍ１／時間で適用する。

水（３００ｍｌ）をこの方ラムに通過させ、モして溶離液を廃棄する。次いで、 このカラムを水中のアセトニトリルの１０％〜４０％の直線の勾配で７０　ｍ　 ｌ　７時間の速度で３０時間展開する。各７ｍｌの分画を集め、モしてＨＰＬＣ で監視する。

抗生物質Ｌ１７３９２に富んだ分画（２２１〜２３９）をプールし、そして室温 において２４時間静置する。固体の沈殿を濾過により集め、少ｉ（１０ｍｌ）の アセトニトリルで洗浄し、次いでエチルエーテ（１００ｍｌ）で洗浄し、そして 混合物水／アセトニトリル８０：２０（ｖ／Ｖ）から再結１化する。こうして得 られる結晶質固体を濾過により集め、エチルエーテルで洗浄し、そして最後に３ 日間真空（２ｍ、ｍＨｇ）乾燥すると、０．５５ｇの結晶質の純粋な抗生物質Ｌ １７３９２　（無色の針状結晶）が得られる。

実施例４：　抗生物質Ｌ１７３９２塩酸塩の：Ａ製前の実施例において得られた 結晶質の純粋な抗生物質Ｌ１７３９２（１３０ｍｍｇ）を混合物（１２ｍｌ）ア セトニトリル／水、２：３（Ｖ／Ｖ）中に懸濁させ、それにＩＮ塩酸（０，２ｍ １）を添加する。

ｎ−メタノール（１５ｍｌ）を添加した後、得られる溶液を小さい体積（約２ｍ １）に４０℃で減圧（２０ｍｍＨｇ）濃縮する。エチルエーテル（ｌｏｍｌ）を それに添加し、そして形成する沈殿を濾過により集め、エチルエーテルで洗浄し 、そして約５０℃で一夜減圧乾燥すると、１０７ｍｇの抗生物質Ｌ１７３９２塩 酸塩が得られる。

出発物質の調製： 抗生物質デグルコテイコブラニンベンジルエステル、塩酸塩の調製ａ）　抗生物 質Ｌ１７０４６のベンジルアルコールの１モルの塩酸塩による処理 ６００　ｍ　ｌのベンジルアルコール中の１モルの塩化水素中の１８ｇ（１０ミ リモル）の木質的純粋な抗生物質Ｌ１７０４６の懸濁液を６０°Ｃで攪拌する。

１５分後、透明な溶液が形成し、これをさらに同一温度で３時間攪拌し１次いで この溶液を１５℃に冷却し、そして攪拌を室温でさらに１２時間続ける。４１の ｎ−ヘキサン／エーテル、４＋４（ｖ／ｖ）を添加することにより、固体を分離 させ、これを集め、１１のエーテルで洗浄し、そして１５０ｍ１のメタノール中 に再溶解させる。

この溶液を１１のＨ２Ｏで希釈し、そして２１の酢酸エチルで抽出（ｐＨ２，５ ）する、有機層を合わせ、２００　ｍ　ｌのｎ−ブタノール中の１０ｍ１のＩＮ 　ＨＣＩの混合物を添加し１次いでこの溶液を小さい体積にｅｉ縮する。１１の 混合物ｎ−へキサン／エーテル、３：２（ｖ／Ｖ）を添加することにより、固体 を分離させ、これを集め、エーテルで洗浄し、そして４０℃で８時間減圧乾燥す ると、８，５ｇのデグルコテイコプラニンベンジルエステル、塩酸塩（分析：デ グルコテイコブラニンベンジルエステル、塩酸塩７０％、水および溶媒１５％、 明確にされない不純物１５％）が得られる。

ｂ）　９０％の水性ベンジルアルコール中の１モルの塩酸塩による抗生物質Ｌ１ ７０５４の処理 ９０ｍ１のベンジルアルコール中の１０ｇの本質的に純粋な抗生物質Ｌ１７０５ ４の攪拌した懸濁液に、１０ｍ１の３７％の塩酸を４０℃で添加する。この反応 混合物を７０℃に加熱し、攪拌を３０分間続け、次いで水を７０℃で減圧（約２ ０ｍｍＨｇ）下に完全に除去する。ベンゼンを添加し、次いでこの混合物を減圧 蒸発させて、共涜蒸留により存在するかもしれない水性残留物を除去する０次い で、この混合物を１００ｍ１の水性ベンジルアルコール中の１モルの塩化水素（ 上のようにして調製）で希釈する。このようにして得られる透明溶液を６５℃で ６時間攪拌し、次いで１５℃に冷却し、そして上のａ）に記載したようにして仕 上げると、４．８５ｇのデグルコティコプラニンベンジルエステル、塩酸塩（デ グルコテイコプラニンベンジルエステル、塩酸塩７５％、水および溶媒１５％、 明確にされない不純物１０％）が得られる。

Ｃ）　ティコプラニンの８０％の水性ベンジルアルコール中の２モルの塩酸を使 用する真空下の処理、およびベンゼンおよび３７％の塩酸の反復添加 ８０ｍ１のベンジルアルコール中の１０ｇのティコプラニン（ティコプラニン成 分中のティコプラニン＝８５％）の攪拌した懸濁液に、２０ｍ１の３７％の塩酸 を４０℃で添加する。この混合物を減圧（約２０ｍｍＨｇ）下に約６０分間保持 し、その間約６５℃（浴温度）に加熱し、次いで５０ｍ１のベンゼンを添加し、 そしてこの混合物を約６５℃で真空蒸発させる。３０分後、２５ｍ１のベンジル アルコール中の５ｍｌの３７％の塩酸の混合物を反応混合物に添加し、次いでこ れを再び「減圧下」の手順（約２０　ｍｍＨｇ　；約６５℃）に３０分間かける ０次いで、５０ｍ１のベンゼンを添加し、そして前述のように蒸発させる。１５ ｍ１のベンジルアルコール中の５ｍｌの３７％の塩酸の混合物および「減圧下」 の手順により分離される５０ｍ１のベンゼンを交互の添加を、３０分毎に８時間 反復する０次いで、２０ｍ１の３７％の塩酸および１００　ｍ　ｌのベンゼンを 添加し、その開本およびベンゼンを減圧蒸発させ、そして生ずる透明溶液を室温 および大気圧においてアルゴン雰囲気の下で１２時間攪拌し１次いでこの反応混 合物を１．５１のエーテル中に注ぐ、固体が分離し、これを集め、エーテルで洗 浄し、室温で一夜減圧乾燥すると、１０ｇの粗製の表題エステルが得られる。こ の生成物を１５０　ｍ　ｌのメタノール中に溶解し、そして３００ｍ１の水およ び３００ｍ１の酢酸エチルをそれに激しく攪拌しながら添加する。数分後、追加 の３００ｍ１ｃ７）水、３００ｍ１の酢酸エチルおよび３００ｍ１のｎ−ブタノ ール／水１：　２　（ｖ／ｖ）を添加した。水性層のＰＨを３．５に調節し、そ して有機相を分離する。水層を酢酸エチル（各回６００ｍ１）で２回抽出する。

有機層を合わせ、４００ｍ１の水で洗浄し、そして小さい体積に真空濃縮する。

エーテルの添加により、固体を分離させ、これを集め、エーテルで洗浄し、そし て室温で一夜真空乾燥すると、６．１ｇの粗製デグルコティコプラニンベンジル エステル、塩酸塩（デグルコテイコプラニンベンジルエステル、塩酸塩６５％、 水および溶媒１５％、明確にされない不純物２０％）が得られる。

シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによるデグルコテイコプラニンベンジル エステルの精製 シリカゲル［０、０６−０、２ｍｍ、マーク（Ｍｅｒｋ）６０］　（１０ｇ）を 、ＬＯＯｍｌの９０％の水性メタノール中の２．５ｇの粗製デグルコテイコプラ ニンベンジルエステル（タイター６５％）の溶液に添加する。この溶媒を完全に 真空蒸発させ、そして残留物をアセトニトリル中で攪拌した２５０ｇのシリカゲ ルを含有するクロマトグラフのカラムに適用する。この方ラムを順次に次の溶媒 混合物を使用して展開する： ＣＨ３ＣＮ　２５０ｍ　１ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０９７：　３　ＣＶ／Ｖ）　５００ｍ１ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０９ ４：　６　（ｖ／ｖ）　５００ｍ１溶離液を廃棄し、次いでこのカラムを１．５ １の各々の溶媒混合物ＣＨ３’　ＣＮ／Ｈ２０９４：　６　（Ｖ／　Ｖ）および ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２０７０：　３０　（ｖ／ｖ）を混合することにより得られる水 中のアセトニトリルの直線の勾配で２００ｍ１／時間の流速で溶離する。２５ｍ １の分画を集め、そしてＨＰＬＣによりアッセイする。デグルコテイコプラニン ベンジルエステル含有分画を合わせ（７００ｍｌ）、ｎ−ブタノール性０．０５ モルの塩化水素（２５０ｍｌ）をそれに添加し、そして溶媒を約３０ｍ１の最終 体積まで蒸発させる。エーテル（３００ｍｌ）の添加により、固体を分離させ、 これを集め、エーテルで洗浄し、そして４０℃で４８時間減圧乾燥すると、１． ６ｇの木質的に純粋なデグルコテイコプラニンベンジルエステル、塩酸塩が得ら れる。

上の実施例の手順に本質的に従って操作し、そして適当な試薬を使用することに より、次の出発物質を得ることができる：テクルコテイコプラニン４−クロロベ ンジルエステルテクルコテイコプラニン２，４−クロロベンジルエステルテクル コテイコブラニン４−ニトロベンジルエステルデグルコテイコプラニン３，４− ニトロベンジルエステルおよびそれらの酸付加塩。

補正ＩＦ（翻訳文）提出書　（箕”ｉ’Ｔａｔｒ　４条昭和６１年２月１２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の特性 ａ）９より大きいｐＨ値の水および水性メタノール、エタノールおよびアセトン 中に可溶性であり；エチルアルコールおよびジメチルホルムアミド中にわずかに 可溶性である、 ｂ）次の吸収極大を示す紫外吸収極大：−０．１Ｎの塩酸中： ▲数式、化学式、表等があります▼ −０．１Ｎの水酸化ナトリウム中： ▲数式、化学式、表等があります▼ ｃ）次の主として有意な吸収最大（ｃｍ−１）をもつ赤外吸収スペクトル（ｎｕ ｊｏｌ）： ３２５０（νＮＨ；およびフェノールのνＯＨ）１６４５（アミドＩ） １６１０（νＣＯＯ−） １５９５（δＮＨ３＋） １５２０（アミドＩＩ） ｄ）ブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＷＨ−２７０スペクトロメーターを使用し、Ｄ ＭＳＯ−ｄ６中で５０℃および２７０ＭＨｚにおいて記録した１Ｈ　ＮＭＲスペ クトル（内部標準ＴＭＳ、δ＝０．００ｐｐｍ）のＤ２Ｏ交換および選択的デカ ップリング（ｄｅｃｏｕｐｌｉｎｇ）実験の後に得られる１Ｈ　ＮＭＲデータの あるものは，次の通りである（δ、多重度）：２．８５−３．３０、２ｄｄ；４ ．１２、ｄｄ；４．３７、ｄ；４．４５、ｄ；４、５０、ｓ：５．００、ｄｄｄ ；５．１１、ｄ；５．１４、ｄ；５．３５、ｄ；５．５６、ｄ；５．６０、ｄ； ６．３−７．９、ｍ；６．５５、ｄ；７．３７、ｄ；７．５０、ｄ；７．６１、 ｄ；８．２６、ｄ；８．２８、ｄ；８．５−１０．２、ｂｒ； ｄ＝二重線 ｄｄ＝二重線の二重線 ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線 ｓ＝一重線 ｍ＝多重線 ｂｒ＝幅広い ｅ）次の概算百分率組成（平均）を示す元素分析：炭素５８．０５％；水素３． ５８％；窒素８．２３％；塩素５．８５％；（１１％の重量損失について補正後 、熱重量分析により測定）、ｆ）ＦＡＢ−ＭＳ分析によっても確認された１１９ ９の分子量、ｇ）次の式［入手可能なデータに基づいて計算］Ｃ５８Ｈ４５Ｃｌ ２Ｎ７Ｏ１８ ｈ）ペリソーブ（Ｐｅｒｉｓｏｒｂ）ＲＰ−８［３０μｍ；メルク（Ｍｅｒｃｋ ）］を充填した予備カラム（５ｃｍ）、次いでリチロソーブ〔ＬｉＣｈｒｏｓｏ ｒｂ）ＲＰ−８（１０μｍ）を予備充填したハイバー（Ｈｉｂａｒ）ＲＴ−２５ ０−４カラム〔メルク（Ｍｅｒｃｋ）］を使用し、そして０．２％の水性ギ酸ア ンモニウム中の１０％〜３０％のアセトニトリルの直線的段階−勾配を用いて溶 離するＨＰＬＣによって析したとき、１２．２分の保持時間（ｔＲ）：流速：２ ｍｌ／分（内部標準：英国特許出願公開第２１２１４０１号のテイコプラニンＡ ２成分２、ｔＲ＝２２．４分）、 ｉ）塩を形成できる酸性官能基、 ｌ）塩を形成でさる塩基性官能基、 ｍ）糖残基をもたない、 を有する抗生物質Ｌ１７３９２を調製するにあたり、式ＩＩ▲数式、化学式、表 等があります▼式ＩＩ式中、Ａ、ＢおよびＺは水素原子を表わし、Ｒはベンジル または置換ベンジルを表わし、ここでフェニル基はクロロ、ブロモ、フルオロ、 ニトロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシなどから選択され る少なくとも１つの置換基で置換されいるが、ただしトリ−ニトロフェニル基は 除く、のデグルコテイコプラニンエステルまたはその酸付加塩を、被毒した水素 化触媒の存在下に１０℃〜４０℃の温度および周囲圧力〜５気圧の圧力において 、不活性有機溶媒中で、好ましくは鉱酸の存在下に接触水素化分解することを特 徴とする抗生物質Ｌ１７３９２の製造方法。 ２、触媒が適当な担体上のゼロ価の状態または正の酸化数をもつバラジウム、ニ ッケル、銅およびコバルトから選択される被毒した触媒である特許請求の範囲第 １項記載の方法。 ３、被毒した触媒が炭素、炭酸バリウムまたは硫酸カルシウム上に担持されたバ ラジウムである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４．被毒した触媒が硫酸バリウム上に担持された５〜１０％のバラジウムである 特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、被毒した触媒が硫酸バリウム上に担持された５％のバラジウムである特許請 求の範囲第１項記載の方法。 ６、不活性有機溶媒がメタノール、エタノール、ジオキサン、エチレングリコー ルおよびエチレングリコールモノメチルエーテルから選択される特許請求の範囲 第１項記載の方法。 ７、鉱酸が塩酸である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８、温度が室温である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、圧力が周囲圧力である特許請求の範囲第１項記載の方法。 １０、式ＩＩの出発物質がデグルコテイコプラニンベンジルエステルまたはその 酸付加塩である特許請求の範囲第１項記載の方法。 １１、結晶質抗生物質Ｌ１７３９２を調製するための特許請求の範囲第１項記載 の方法。 １２、式ＩＩ ▲数式、化学式、表等があります▼式ＩＩ式中、Ａ、ＢおよびＺは水素原子を表 わし、Ｒはべンジルまたは置換ベンジルを表わし、ここでフェニル基はクロロ、 ブロモ、フルオロ、ニトロ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキ シなどから選択される少なくとも１つの置換基で置換されいるが、ただしトリ− ニトロフェニル基は除く、のデグルコテイコプラニンエステルまたはその酸付加 塩を、１０℃〜４０℃の温度および周囲圧力〜５気圧の圧力において、不活性有 機溶媒中で必要に応じて鉱酸の存在下に接触水素化分解することを特徴とする次 の式 ▲数式、化学式、表等があります▼（式Ｉ）を有する抗生物質Ｌ１７３９２の製 造方法。