DE3706731A1 - Neues cardiodilatinfragment und verfahren zur gewinnung von cardiodilatinfragmenten - Google Patents
Neues cardiodilatinfragment und verfahren zur gewinnung von cardiodilatinfragmentenInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein neues Cardiodilatinfragment
und Verfahren zur Gewinnung von Cardiodilatinfragmen
ten aus Körperflüssigkeiten.
Biologisch aktive Peptide wie insbesondere Hormone
werden in geringen Mengen in verschiedenen endokrinen
Drüsen produziert und werden über das Blut zu den
Zielorganen transportiert. Dort regulieren sie eine
ganze Reihe von physiologischen und metabolischen
Aktivitäten. In der Regel werden inaktive Formen der
jeweiligen Peptide in der jeweiligen endokrinen Drüse
synthetisiert und durch die Einwirkung von Proteasen in
ihre aktive Form umgewandelt. Nur in dieser aktiven
Form haben sie die gewünschte Wirkung auf das Zielorgan.
Ein Hormon, das erst in jüngster Zeit entdeckt wurde
und das Einfluß hat auf die Ionotropie des Herzmuskels
und auf die glatte Gefäßmuskulatur sowie Einflüsse auf
die Schweißsekretion aufweist und dem daher große
klinische und therapeutische Bedeutung zukommt, ist das
Peptidhormon Cardiodilatin. Einige Fragmente dieses
Peptidhormons zeigen, zum Teil in abgeschwächter Form,
biologische Aktivität. Die einzige bisher bekannte
aktive Form des Cardiodilatins, die im Blut zirkuliert,
ist das Fragment human-CDD(99-126) mit der folgenden
Aminosäuresequenz:
Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp- Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe- Arg-Tyr-OH, die als alpha-ANP, alpha atrial natriuretic polypeptide, bezeichnet wird. Dieses alpha-ANP kann aus Atriumextrakten nur in verschwindend geringen Mengen erhalten werden.
Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp- Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe- Arg-Tyr-OH, die als alpha-ANP, alpha atrial natriuretic polypeptide, bezeichnet wird. Dieses alpha-ANP kann aus Atriumextrakten nur in verschwindend geringen Mengen erhalten werden.
Es war nun Aufgabe der Erfindung, weitere biologisch
aktive Fragmente des Cardiodilatins zu finden und
weiterhin Verfahren zur Gewinnung von biologisch akti
ven Cardiodilatinfragmenten zu schaffen, die von einem
leicht zugänglichen Ausgangsmaterial ausgehen und zu
Produkten führen, die in der im Körper aktiven Form
vorliegen.
Diese Aufgabe wird gelöst durch das Cardiodilatinfrag
ment human-CDD(95-126) mit der Peptidsequenz:
Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe- Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly- Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr.
Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe- Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly- Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr.
Überraschenderweise wurde gefunden, daß das Fragment
human-CDD-(95-126) eine biologisch aktive Form des
Cardiodilatins ist, das nicht nur eine abgeschwächte
Aktivität aufweist, sondern die volle Aktivität be
sitzt.
Dieses neue Cardiodilatinfragment human-CDD(95-126)
kann synthetisch in an sich bekannter Weise z. B. durch
Merrifield-Synthese mit BOC-Aminosäuren hergestellt
werden. Ebenso ist die Herstellung durch klassische
Fragmentsynthese in Lösung möglich.
Eine weitere Möglichkeit besteht darin, alpha-ANP
direkt mit dem N-terminal verlängernden Tetrapeptid
Thr-Ala-Pro-Arg-OH umzusetzen. Da das Peptid alpha-ANP
keine Seitengruppe mit freien Aminofunktionen enthält,
ist diese Synthese relativ problemlos durchzuführen.
Das Tetrapeptid wird in an sich bekannter Weise vorher
synthetisiert.
Da diese Syntheseverfahren noch relativ aufwendig sind,
war es wünschenswert, ein Verfahren zur Gewinnung der
aktiven Cardiodilatinfragmente zu schaffen, bei dem ein
leicht zugängliches Ausgangsmaterial verwendet werden
kann. Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß in
Humanurin das Cardiodilatin-aktive Peptid human-CDD(95-126)
enthalten ist. Weiterhin wurde überraschenderweise
festgestellt, daß in Hämodialysat und Hämofiltrat bio
logisch aktive Peptide, insbesondere Hormone wie z. B.
alpha-ANP, in ihrer aktiven Form enthalten sind und aus
dieser Lösung gewonnen werden können.
Hämofiltration und Hämodialyse sind Verfahren, in denen
aus dem Blut über eine natürliche oder künstliche Membran
Stoffwechselprodukte, Wasser und Ionen entfernt werden.
Diese Verfahren werden insbesondere bei Niereninsuffizienz,
Intoxikationen und Hyperhydratation durchgeführt. Über
raschenderweise wurde nun festgestellt, daß in Hämodialy
sat und Hämofiltrat alpha-ANP in die Aufarbeitung
lohnender Menge enthalten ist und aus dieser Lösung
gewonnen werden kann.
Die Hämodialyse bzw. Hämofiltration ist inzwischen ein
sehr weit verbreitetes Verfahren, insbesondere für
Patienten, die unter Niereninsuffizienz leiden und oft
mehrmals wöchentlich an ein entsprechendes Gerät ange
schlossen werden müssen. Die dabei anfallende Lösung,
die die vom Körper nicht ausgeschiedenen Stoffe enthält,
fällt in großen Mengen an und ist daher leicht zugänglich.
Überraschenderweise konnte gefunden werden, daß im Urin
eine bisher unbekannte aktive Form des Cardiodilatins -
human-CDD(95-126) - enthalten ist und in die Aufarbeitung
lohnenden Mengen vorliegt. Weiterhin konnte überraschen
derweise festgestellt werden, daß biologisch aktive
Cardiodilatinfragmente, die ein Molekulargewicht von
weniger als 20 kg/Dalton, bei der Hämodialyse bzw.
Hämofiltration in das Dialysat bzw. Filtrat übergehen
und dort in die Aufarbeitung lohnenden Mengen vorliegen.
Dies war überraschend, da man bisher annahm, daß nur
niedermolekulare Substanzen bei dieser Blutbehandlung
ausgeschieden werden.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher ein
Verfahren zur Gewinnung von biologisch aktiven Cardio
dilatinfragmenten aus Körperflüssigkeiten, das dadurch
gekennzeichnet ist, daß man Urin, Hämodialysat oder
Hämofiltrat als Ausgangsmaterial verwendet, dieser
Lösung Alginsäure zusetzt, die an der Alginsäure adsor
bierten Cardiodilatinfragmente eluiert und das Eluat
nach üblichen biochemischen Reinigungsmethoden frak
tioniert und die aktive Fraktion durch übliche Methoden
zum Nachweis der biologischen Aktivität bestimmt.
Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird
Urin oder Hämodialysat bzw. Hämofiltrat gegebenenfalls
nach Ansäuerung zuerst mit Alginsäure in Kontakt gebracht.
An der Alginsäure werden die Cardiodilatinfragmente
adsorbiert.
Anschließend wird die mit den Cardiodilatinfragmenten
beladene Alginsäure eluiert. Zur Elution eignen sich
insbesondere verdünnte Carbon- und Mineralsäuren.
Bevorzugt verwendet man Salzsäure einer Konzentration
von 0,1 bis 0,3 M.
Das Eluat wird dann mit üblichen biochemischen Reinigungs
methoden fraktioniert. Bevorzugt wird dabei zuerst eine
Salzfällung, bevorzugt mit Natriumchlorid, durchgeführt.
Der dabei gebildete Niederschlag wird dann direkt ent
salzt und gereinigt an einer Gelchromatographiesäule.
Bevorzugt wird dazu Sephadex-G-25 verwendet.
Die das gewünschte biologisch aktive Cardiodilatinfrag
ment enthaltenden Fraktionen, die durch übliche Methoden
zum Nachweis der biologischen Aktivität bestimmt werden,
werden gesammelt und anschließend weiter aufgereinigt.
In einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsge
mäßen Verfahrens werden sie dazu zuerst über eine
Ionenaustauschersäule chromatographiert. Besonders
bevorzugt werden die Fraktionen vor der Ionenaustausch
chromatographie lyophilisiert.
Die Elution von der Ionenaustauschersäule erfolgt mit
einem Gradienten. In der Regel sind die biologisch
aktiven Cardiodilatinfragmente in den Fraktionen, die
mit der höchsten Ionenstärke eluiert werden, zu finden.
Diese Fraktionen werden dann einer Hochdruckflüssig-
Chromatographie an einem Umkehrphasen-Kieselgel unter
worfen. Besonders bevorzugt werden die Fraktionen auch
vor der HPLC lyophilisiert. Als Elutionsmittel für die
HPLC wird ein geeignetes Lösungsmittel bzw. Lösungsmittel
system verwendet. Als besonders geeignet hat sich ein
Gemisch aus Wasser, Acetonitril und HCl mit einem
kontinuierlichen Gradienten erwiesen.
Um das gewünschte biologisch aktive Cardiodilatinfrag
ment noch weiter aufzureinigen, kann die Fraktion, die
das biologisch aktive Material enthält, ein zweites Mal
über HPLC an einem Umkehrphasen-Kieselgel aufgetrennt
werden. Bei diesem zweiten Chromatographieschritt wird
bevorzugt als Elutionsmittel ein Gemisch aus Wasser,
Methanol und Trifluoressigsäure mit einem kontinuier
lichen Gradienten verwendet. Auf diese Weise erhält man
ein sehr reines Material.
Um bei den chromatographischen Auftrennungen jeweils
die Fraktionen, die das gewünschte biologisch aktive
Cardiodilatinfragment enthalten, zu bestimmen, werden
an sich bekannte Nachweismethoden für die biologische
Aktivität angewendet. Geeignet ist beispielsweise zum
Nachweis von CCD(95-126) bzw. alpha-ANP der Nachweis
der relaxierenden Wirkung auf glatte Muskulatur. Dazu
wird bevorzugt Arteria renalis vom Kaninchen, Aorta
abdominalis von Kaninchen oder Ratte oder Arteria
mesenterica inferior vom Kaninchen im Organbad benutzt,
wobei die nach Adrenalinvorbehandlung kontrahierten
Gefäßmuskelstreifen nach Zugabe des aktiven Cardiodi
latinfragments eine deutliche Relaxation zeigen. Am
deutlichsten ist diese Relaxation bei Muskelstreifen
aus Arteria renalis, wo die Relaxation schon bei Dosen
von ca. 10 bis 100 ng pro 10 ml im Organbad nachweisbar
ist.
Die Erfindung wird noch durch die folgenden Figuren und
Beispiele erläutert.
Fig. 1 zeigt das Chromatogramm eines auf einer 50 mm
i. D. × 850 mm Sephadex G 25 Fine-Säule in
0,2 M Essigsäure aufgetrennten Peptidmaterials.
Die schraffierte Fläche zeigt das eluierte
bioaktive Material.
Fig. 2 zeigt das Chromatogramm eines auf einer
Sephadex G25-Säule aus TSK-CM-50S (50 mm i. D.
× 850 mm) aufgetrennten bioaktiven Materials.
Die Sternchen zeigen den schrittweisen An
stieg der Molarität der Ammoniumbicarbonat
konzentration (0,01 M, 0,08 M, 0,2 M, 0,5 M).
Die Elution wurde in 16 ml Fraktionen durch
geführt. Die Cardiodilatin-Bioaktivität wurde
in den Fraktionen 71 bis 91 gefunden.
Fig. 3 zeigt das Chromatogramm einer HPLC von 1 mg
human-CDD-bioaktivem Material aus der Kationen
austauschchromatographie. Als Säule wurde
7,8 mm i. D. × 300 mm (TSK-ODS-120 T) verwen
det. Durchflußrate: 1,5 ml/min; Lösungsmittel
A: 0,01 N HCl; Lösungsmittel B: 80% CH-CN in
0,01 N HCl. Das CDD-aktive Material wurde
durch 14% CH-CN/0,01 N HCl eluiert, wo die
stärkste Vasorelaxation beobachtet wurde. Die
Fraktionen in dem schraffierten Bereich
wurden für die weitere Reinigung gesammelt.
Fig. 4 zeigt ein Reversephase-HPLC-Chromatogramm.
Die Frakionen mit der stärksten Vasorelaxation
wurden zur letzten Aufreinigung an einer ana
lytischen TSK-ODS-120T (4,8 mm i. D. × 250 mm)
Säule chromatographiert. Durchflußrate:
0,5 ml/min; Lösungsmittel A: 0,1% TFA in 40%
Methanol; Lösungsmitel B: 0,1% TFA in Methanol.
Es wurden fünf Fraktionen gesammelt.
Fig. 5 zeigt die Kontrolle der Vaso-relaxierenden
Aktivität der in der HPLC erhaltenen Frak
tionen, die in dem Chromatogramm von Fig. 4
gezeigt sind. Ein Aliquot von 0,1 µl jeder
HPLC-Fraktion wurde in ein Medium gegeben,
das mit Norepinephrin vorkontraktierte
Kaninchen Aortamuskelstreifen enthielt.
Fraktion 3, die für die Sequenzanalyse ver
wendet wurde, enthielt 200 µl Eluat. Der
Biotest zeigt, daß mehr als 2 µg alpha-ANP
(human CDD(99-126)) in diesem Durchlauf
erhalten wurden.
Fig. 6 zeigt ein HPLC-Chromatogramm von human-CDD
(95-126). Elutionsmittel ist Methanol.
Rf-Werte: 25 Minuten
Bedingungen:
Säule: TSK-ODS-120T, 250 × 4,8 mm
Laufmittel A: 40% Methanol in Wasser (0,1% Trifluoressigsäure)
Laufmittel B: 100% Methanol (0,1% Trifluor essigsäure)
Gradient: 10 Minuten isokratisch A, dann 30 Minuten Zudosierung von B bis 100% B ansteigend.
Fluß: 0,5 ml/min. 20°C; Papiervorschub 5 mm/min; Abs. ber. 0,08, UV 254 nm.
Rf-Werte: 25 Minuten
Bedingungen:
Säule: TSK-ODS-120T, 250 × 4,8 mm
Laufmittel A: 40% Methanol in Wasser (0,1% Trifluoressigsäure)
Laufmittel B: 100% Methanol (0,1% Trifluor essigsäure)
Gradient: 10 Minuten isokratisch A, dann 30 Minuten Zudosierung von B bis 100% B ansteigend.
Fluß: 0,5 ml/min. 20°C; Papiervorschub 5 mm/min; Abs. ber. 0,08, UV 254 nm.
Fig. 7 zeigt ein HPLC-Chromatogramm von human-CDD
(99-126) mit Methanol als Elutionsmittel zum
Vergleich. Rf-Werte: 35 Minuten. Die Bedingun
gen waren dieselben wie bei Fig. 6.
Fig. 8 zeigt ein Diagramm, in dem die biologische
Aktivität von CDD(95-126) wiedergegeben ist.
Getestet wurden die Fraktionen 1 bis 4 der
HPLC, die in Fig. 6 dargestellt ist, im
Relaxationsassay mit Aorta-Muskelstreifen.
Dosiert wurden je 1 µl der HPLC-Fraktionen
pro 10 ml Organbad (1 µl entspricht ca. 3 µg
human-CDD(95-126).
Fig. 9 zeigt ein Diagramm, in dem die biologische
Aktivität der Fraktion II wie in Fig. 8
dargestellt ist.
Menschliches Hämofiltrat von Patienten, die an Nieren
insuffizienz leiden, wurde verwendet. Das Hämofiltrat
wurde sofort angesäuert mit Eisessig auf eine Endkon
zentration von 0,2 M. Chargen von jeweils 200 bis 400 l
wurden dann auf einen pH von 2,7 eingestellt mit kon
zentrierter Salzsäure. Zu der ersten Charge wurden
2,5 kg Alginsäure zugegeben und es wurde 8 bis 12 Stun
den gerührt. Dann setzte sich die Alginsäure ab und der
Überstand wurde durch eine neue Charge von angesäuertem
Hämofiltrat ersetzt. Dieses Verfahren wurde so lange
wiederholt, bis mehr als 1000 l Hämofiltrat mit den
2,5 kg Alginsäure umgesetzt worden waren. Die Alginsäure
wurde dann sedimentiert und von dem Hämofiltrat abge
trennt und mit Ethanol und 0,005 M Salzsäure in einem
Büchner-Trichter gewaschen. Die Polypeptide wurden dann
mit 0,2 M Salzsäure eluiert. Der pH des Eluates wurde
auf 4,0 eingestellt und Natriumchlorid wurde bis zur
Sättigung zugegeben. Nach 24 Stunden bei 4°C wurde ein
Salzkuchen, der sich auf der salzgesättigten Lösung
gebildet hatte, abgenommen. Dieses Verfahren wurde über
ein Radio-Immuno-Assay für Cardiodilatin verfolgt,
wobei sich zeigte, daß mehr als 90% der nachweisbaren
Substanz erhalen worden waren. Der Salzkuchen wurde
dann auf eine Sephadex G-25 Säule aufgegeben und die
Peptide, die erhalten wurden, wurden durch ein Bioassay
für Cardiodilatin unter Verwendung von Aorta Muskel
streifen getestet. Die Fraktionen, die die meiste
Cardiodilatin-Bioaktivität enthielten, wurden dann lyo
philisiert und auf einer Ionenaustauschsäule chromato
graphiert. Die Verteilung der Bioaktivität ist in
Fig. 1 dargestellt. Das bioaktive, vasorelaxierende
Material wurde in den Fraktionen gefunden, die bei der
höchsten Ionenstärke mit schrittweisem Gradienten
eluierten, wie es aus Fig. 2 zu entnehmen ist. Diese
Fraktionen wurden wieder lyophilisiert und zweimal
einer HPLC unterworden. Bei der ersten HPLC wurde eine
Reverse-Phase-Säule TSK-ODS-120T verwendet. Als
Eluierungsmittel wurde Wasser-Acetonitril-HCl mit einem
kontinuierlichen Gradienten eingesetzt, wie es in
Fig. 3 dargestellt ist. Das bioaktive Material erscheint
dort, wo zum Vergleich eingesetztes synthetisches
alpha-ANP eluiert. Die bioaktiven Fraktionen wurden auf
eine analytische Reverse-Phase-Säule desselben Typs ge
geben, wobei Wasser-Methanol-Trifluoressigsäure mit
einem kontinuierlichen Gradienten, wie er in Fig. 4
dargestellt ist, eluiert wurde. Das bioaktive Material
wurde wiederum in derselben Fraktion gefunden, in der
zum Vergleich eingesetztes synthetisches alpha-ANP
eluiert. Die Analyse der Aminosäuresequenz, des An
teils der einzelnen Aminosäuren und der C-terminalen
Aminosäure durch Carboxypeptidase-A-Spaltung dieses
hochgereinigten Materials ergab, daß es sich um alpha-
ANP handelte.
Das hochgereinigte Polypeptid wurde in 6 M HCl, 1,0%
Phenol bei 110°C 24 Stunden lang in evakuierten Röhr
chen hydrolysiert. Die Gesamtzusammensetzung wurde in
einem Waters-Aminosäure-Analysesystem bestimmt, wobei
vorher mit Phenylisothiocyanat und Biocyanat derivati
siert wurde. Die Analyse zeigte einen hohen Grad an
Übereinstimmung zwischen der Primärstruktur, die durch
Sequenzanalyse erhalten wurde und der Gesamtzusammen
setzung, insbesondere für die Werte von Tyr 0,9 (1);
Met 0,99 (1); Cys 2,1 (2); Ile 1,1 (1); Leu 2,1 (2).
Es wurde ein schrittweiser Edman-Abbau des intakten
Peptids durchgeführt in einem Gasphasen-Protein-Se
quenzer 420 A der Firma Applied Biosystems. Die PTH-
Aminosäuren wurden durch high performance liquid
chromatography gemäß Lottspeich (High Performance
Liquid Chromatography in Protein and Peptide Chemistry,
Seiten 259-268, Lottspeich F, Henschen A, Hupe K. P.,
Walter Dekrüter: Berlin/New York, 1981). Das hochge
reinigte Polypeptid hatte die folgende Aminosäurese
quenz: Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-
Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-
Ser-Phe-Arg-Tyr-OH.
Die C-terminale Aminosäure wurde durch Spaltung des
Polypeptids mit Carboxypeptidase A bestimmt und analy
siert in dem oben beschriebenen Waters-Aminosäure-Ana
lysesystem. Nach 30minütiger Inkubation bei Raumtempe
ratur wurde ein Protein zu Enzym im Verhältnis von 50 : 1
und ein Peak für Tyrosin sowie ein zweiter Peak für
Arginin nach 60 Minuten Inkubation erhalten.
Es wurde wie im Beispiel 1 beschrieben, verfahren.
Dabei wurde jedoch statt Hämofiltrat Urin von gesunden
Menschen verwendet. Die Vorgehensweise und die Rea
genzien waren dieselben wie im Beispiel 1. Für die
Durchführung der HPLC wurde jedoch als Vergleichsmate
rial synthetisches CDD(95-126) eingesetzt. Es wurde
bioaktives Material in derselben Fraktion gefunden, in
der zum Vergleich eingesetzes synthetisches CDD(95-126)
eluierte. Die Analyse der Aminosäuresequenz, des Anteils
der einzelnen Aminosäuren und der C-terminalen Aminosäure
durch Carboxypeptidase-A-Spaltung dieses hochgereinigten
Materials ergab, daß es sich um CDD(95-126) handelte.
Claims (6)
1. Cardiodilatinfragment human-CD-(95-126) mit der
Aminosäuresequenz:
Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe- Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly- Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH.
Thr-Ala-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe- Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly- Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH.
2. Verfahren zur Gewinnung von Cardiodilatinfragmen
ten aus Körperflüssigkeiten, dadurch
gekennzeichnet, daß man Urin,
Hämodialysat oder Hämofiltrat als Ausgangsmaterial
verwendet, dieser Lösung Alginsäure zusetzt, die
an der Alginsäure adsorbierten Peptide eluiert und
das Eluat nach üblichen biochemischen Reinigungs
methoden fraktioniert und die aktive Fraktion
durch übliche Methoden zum Nachweis der biologi
schen Aktivität bestimmt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch
gekennzeichnet, daß man die an
der Alginsäure adsorbierten Cardiodilatinfragmente
eluiert, das Eluat einer Salzfällung unterwirft,
den Niederschlag mittels Gelchromatographie ent
salzt, den erhaltenen Rohextrakt einer Ionenaus
tausch-Chromatographie unterwirft und anschließend
über HPLC auftrennt.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch
gekennzeichnet, daß man die
Auftrennung über HPLC an einem Umkehrphasen-Kie
selgel durchführt.
5. Verfahren zur Gewinnung von alpha-ANP,
dadurch gekennzeichnet,
daß man Hämodialysat oder Hämofiltrat mit Algin
säure in Kontakt bringt, das an der Alginsäure
adsorbierte alpha-ANP eluiert und das Eluat nach
üblichen biochemischen Reinigungsmethoden frak
tioniert unter Anwendung eines Tests, bei dem die
Fraktion, die alpha-ANP enthält, durch die rela
xierende Wirkung auf die glatte Muskulatur bestimmt
wird.
6. Verfahren zur Gewinnung von human-CDD(95-126),
dadurch gekennzeichnet,
daß man Urin mit Alginsäure in Kontakt bringt, das
an der Alginsäure adsorbierte human-CDD(95-126)
eluiert und das Eluat nach üblichen biochemischen
Reinigungsmethoden fraktioniert unter Anwendung
eines Tests, bei dem die Fraktion, die human-CDD
(95-126) enthält, durch die relaxierende Wirkung
auf die glatte Muskulatur bestimmt wird.
Priority Applications (10)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19873706731 DE3706731A1 (de) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Neues cardiodilatinfragment und verfahren zur gewinnung von cardiodilatinfragmenten |
AU13481/88A AU614738B2 (en) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | New cardiodilatin fragment, process for preparing same and use thereof |
JP63502001A JP2819467B2 (ja) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | 新規なカルジオジラチン断片およびその製造方法 |
DE8888901838T DE3878231T2 (de) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | Neues cadiodilatin-fragment, prozess zu dessen herstellung und dessen anwendung. |
PCT/EP1988/000144 WO1988006596A1 (en) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | New cardiodilatin fragment, process for preparing same and use thereof |
AT88901838T ATE85345T1 (de) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | Neues cadiodilatin-fragment, prozess zu dessen herstellung und dessen anwendung. |
EP88901838A EP0349545B1 (de) | 1987-03-02 | 1988-02-27 | Neues cadiodilatin-fragment, prozess zu dessen herstellung und dessen anwendung |
DK198806108A DK174112B1 (da) | 1987-03-02 | 1988-11-02 | Cardiodilatinfragment benævnt urodilatin, fremgangsmåde til fremstilling deraf, lægemiddel indeholdende det, fremgangsmåde til bestemmelse af cardiodilatin samt anvendelse af urodilatin til fremstilling af diagnostika samt til fremstilling af lægemidler |
US08/185,240 US5449751A (en) | 1987-03-02 | 1994-01-24 | Cardiodilatin fragment, process for preparing same and use thereof |
US08/480,359 US5665861A (en) | 1987-03-02 | 1995-06-07 | Cardiodilatin fragment, process for preparing same and use thereof |
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19873706731 DE3706731A1 (de) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Neues cardiodilatinfragment und verfahren zur gewinnung von cardiodilatinfragmenten |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
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DE3706731A1 true DE3706731A1 (de) | 1988-09-15 |
Family
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Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19873706731 Withdrawn DE3706731A1 (de) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Neues cardiodilatinfragment und verfahren zur gewinnung von cardiodilatinfragmenten |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE3706731A1 (de) |
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1987
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