DE3627063C2

DE3627063C2 -

Info

Publication number: DE3627063C2
Application number: DE19863627063
Authority: DE
Inventors: Metin Dr. 4006 Erkrath De Colpan
Original assignee: Diagen Institut fur Molekularbiologische Diagnostik 4000 Duesseldorf De GmbH
Current assignee: Diagen Institut fur Molekularbiologische Diagnostik 4000 Duesseldorf De GmbH
Priority date: 1986-08-09
Filing date: 1986-08-09
Publication date: 1991-08-29
Also published as: EP0263934A1; DE3627063A1; JPS6372699A

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie mit Hilfe von porösem Silica gel und daran oberflächlich kovalent gebundenen Affini tätsliganden.

Für die Affinitätschromatographie werden in erster Li nie poröse Träger wie Dextrane, Agarosen, Acrylamid etc. eingesetzt, die Porengrößenverteilungen zwischen 200 und 1000 Å aufweisen. An diese Materialien sind beispielsweise kovalent Antikörper gebunden. Mit derar tigen Materialien ist es möglich, Proteine wie Insulin, Interferone etc. im industriellen Maßstab zu reinigen.

In der US-PS 44 15 665 ist eine spezielle Methode zur kovalenten Bindung von biologisch aktiven organischen Substanzen an polymere Träger beschrieben, zu denen unter anderem Agarose, Cellulose und Kieselsäuregel zählen. Verwendet wurde in den Beispielen 4 und 5 ein poröses Silicagel unbestimmter Porengröße und unbestimmter Korn größe. Kovalent gebunden wurde N⁶-(6-Aminohexyl)-Adeno sin-5′-Monophosphat. Dieses Material ist jedoch nicht für die Affinitätschromatographie geeignet.

Die DE-OS 32 11 309 betrifft ein Verfahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren mittels Ionenaustauschchromatographie. Dabei wird poröses Kieselsäuregel verwendet, an dessen Oberfläche eine ionische Gruppe gebunden ist. Dieses Material eignet sich hervorragend zur Trennung von Nukleinsäuren und Proteinen. Charakteristisch für dieses Material ist, daß definierte enge Porengrößebereiche verwendet werden, welche das 1- bis 20fache der zu trennenden Nukleinsäuren oder Proteine besitzt.

Die FR-A 24 03 556 offenbart chromatographische Trennmaterialien, bei denen Antikörper auf poröser Kieselsäure adsorbiert werden und dann untereinander vernetzt werden. Die Liganden umschließen somit die Kieselsäurepartikel. Eine kovalente Bindung der Affinitätsliganden an das Trennmaterial ist mithin nicht gewährleistet.

Die Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, das Ver fahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren durch Affinitätschromatographie mit Hilfe von porösem Kieselsäuregel und daran oberflächlich kovalent gebundenen Affinitätsliganden zu verbessern, so daß hiermit eine rasche, zuverlässige und hochspezifische Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren möglich ist.

Dabei soll einerseits der meistens sehr teure Affini tätsligand, wie zum Beispiel Antikörper, optimal ausge nutzt werden, zum anderen auch die Menge des Trägerma terials so klein wie möglich gehalten werden, um unnö tige Verluste und Verdünnungen zu vermeiden. Intensive Untersuchungen verschiedener poröser Träger, verschie dener Affinitätsliganden und verschiedener durch die Affinitätschromatographie zu reinigender Biopolymere haben zu dem überraschenden Ergebnis geführt, daß die oben genannte Aufgabe optimal dadurch gelöst werden kann, daß poröses Kieselsäuregel werden mit definierten engen Porengrößenbereichen verwendet wird, welche jeweils das 5- bis 20fache der Größe des zu reinigenden Materials aufweisen, dadurch gekennzeichnet, daß die Biopolymere durch Affinitätschromatographie an oberflächlich über Kupplungsreagenzien kovalent an das Kieselsäuregel gebundenen Antikörpern oder anderen mehr oder weniger großen Substanzen, wie Protein A, mit spezifischer Affinität zu den zu reinigenden Biopolymeren als Affinitätsliganden, abgetrennt und gereinigt werden.

Werden Kieselsäuregele verwendet mit undefinierten und brei ten Porengrößenbereichen, kann keines der oben genann ten Ziele optimal gelöst werden. Werden Kieselsäuregele mit definierten engen Porengrößenbereichen eingesetzt, wel che zwar größer sind als das zu reinigende Material, jedoch kleiner als das fünffache der Größe des zu rei nigenden Materials, werden die teuren und wertvollen Affinitätsliganden nur unvollständig ausgenutzt. Außer dem wächst bei kleineren Porengrößenbereichen bereits die Menge an ausgebluteten Affinitätsliganden bzw. ver unreinigenden Fragmenten derselben. Werden Kieselsäuregele eingesetzt mit Porengrößenbereichen, die größer sind als das zwanzigfache der Größe des zu reinigenden Mate rials, so sinkt die Oberfläche des Materials in so er heblichem Maße, daß unnötig große Mengen Kieselsäuregel ein gesetzt werden müssen und ein unnötig großes Volumen von Elutionsflüssigkeit eingesetzt werden muß, um die ursprünglich gebundenen Biopolymeren wieder aus dem Material auszuwaschen.

Dies ist insbesondere bei therapeutisch einzusetzenden Biopolymeren außerordentlich unerwünscht.

Innerhalb des erfindungsgemäßen Bereiches vom fünf- bis zwanzigfachen der Größe des zu reinigenden Materials ist der untere Bereich bevorzugt für praktisch kugel förmige Biopolymere und der obere Bereich für langge streckte und sperrige Biopolymere.

Weiterhin ist der untere Porengrößenbereich bevorzugt, wenn relativ kleine Affinitätsliganden mit relativ kur zen Spacern an die Oberfläche des Kieselsäuregels gebunden sind, während der obere Porengrößenbereich bevorzugt ist, wenn größere und sperrige Affinitätsliganden und/ oder längerkettige Spacer zur Bindung der Affinitätsli ganden an die Oberfläche des Kieselsäuregels zum Einsatz kommen.

Als oberflächlich kovalent gebundene Affinitätsliganden kommen in erster Linie Antikörper in Frage, jedoch auch andere mehr oder weniger große Substanzen mit spezifi scher Affinität zu dem zu reinigenden Biopolymeren. Ein typisches Beispiel hierfür ist das Protein A aus Sta phylococcus aureus oder rekombinantes Protein A, wel ches eine spezifische Affinität zu Immunglobulinen (IgG) aufweist.

Besonders bedeutungsvoll ist das erfindungsgemäße Ver fahren für die Abtrennung und Reinigung von Proteinen, Glykoproteinen und/oder Nukleinsäuren, von Viren oder Vaccinen, von Zellorganellen, prokaryontischen oder eukaryontischen Zellen, Micellen oder Vesikeln, von Chylomikronen, VLDL- (very low density), LDL- (low den sity) und HDL- (high density) Lipoproteinen sowie Pro teinkomplexen.

Es handelt sich somit insbesondere um Biopolymere mit Größen von mindestens 5 bis 10 nm bis hinaus zu Biopo lymeren mit Größen von 500 und mehr nm. Erfindungsge mäß werden somit poröse Silicagele eingesetzt mit de finierten engen Porengrößenbereichen von mindestens 30 nm, vorzugsweise jedoch zwischen 50 und 1000 nm. Prin zipiell könnten auch Kieselsäuregele mit noch größeren Po rengrößen eingesetzt werden, jedoch ist es bisher tech nisch schwierig, Kieselsäuregele mit engen Porengrößenberei chen dieser Größenordnung herzustellen.

Einige typische Anwendungsgebiete für das erfindungsge mäße Verfahren sind im folgenden zusammengestellt:

Viren und Vaccine zur Impfstoffherstellung
- Lebend-Vaccine (Pockenviren, ⌀ca. 250 nm)
- attenuierte Virusstämme (Maul- und Klauenseuche-Vi ren, ⌀ca. 250 nm)
- recombinante Vaccine hergestellt durch gentechnolo gische Expressionsverfahren aus höheren Zellkulturen oder Bakterien (z. B. Hepatis B-Virus Hüllproteinkom plexe, ⌀ca. 50 nm)
- Vaccine auf der Basis von Vesikeln und Micellen (⌀ca. 10-50 nm).
Organellen
- Mitochondrien (⌀ca. 500 nm)
- Microbodies
Pro- und eukaryotische Zellen
- z. B. Entfernung von Mykoplasmen (⌀ca. 100 nm) und Tumorzellen (⌀ca. 10 000 nm) aus Medien oder Blut
Proteine
- kleine Proteine: Lymphokine wie z. B. Interferon und TNF (MW 10 000-20 000)
- mittlere Proteine: gewebsspezifische Plasminogenakti vatoren (MW ca. 65 000) IgG (MW 150 000, ⌀ca. 15 nm) Urokinase (⌀ca. 9 nm)
- große Proteine: IgM (MW ca. 900 000 nm, ⌀ca. 90 nm) Blutfaktoren wie z. B. Faktor VIII (MW<1 Mio., ⌀<50 nm)
Proteinkomplexe
- Entfernung von Immunkomplexen wie Rheumafaktoren (MW 500 000, ⌀ca.<50 nm) durch Blutwäsche
- Enzymkomplexe wie Fettsäuresynthethase (MW ca. 2,3 Mio.)
- filamentöse Komplexe wie Microtubulin, Actinkomplexe
- Ribosomen
Micellen und Vesikel
- Chylomikronen (⌀ca. 100-1000 nm)
- VLDL (very low density lipoproteins), ⌀ca. 30- 50 nm
- LDL (⌀ca. 20-25 nm)
- HDL (⌀<10 nm)

Die kovalente Bindung der Affinitätsliganden an die Oberfläche der Poren des Kieselsäuregels erfolgt in an sich bekannter Weise, beispielsweise durch Umsetzung eines Silans, welches durch anschließende Reaktionen am orga nischen Rest aktiviert werden kann zur Umsetzung mit den Affinitätsliganden.

Eine besonders schonende und deshalb bevorzugte Aktivie rung besteht im Aufbau von Alkyl- bzw. Arylsulfonsäure estern. Da diese in besonders schonender Weise mit Ami nogruppen, Hydroxylgruppen und Sulfhydrylgruppen der Affinitätsliganden reagieren und diese dadurch schonend kovalent an das Kieselsäuregel binden. Prinzipiell sind aber auch alle anderen bekannten Kupplungsreagenzien geeig net, sofern diese nicht zu einer elektrischen Aufladung des Affinitätsliganden oder einer sonstigen, die Affini tät beeinflussenden Denaturierung führen. Prinzipiell können sowohl kürzere als auch längere Spacer zwischen Kieselsäuregel und den Affinitätsliganden eingebaut werden. Besonders bevorzugt sind jedoch solche mit nur 2 bis 5 Kohlenstoffatomen. Kürzere Spacer können zu einer unnö tigen sterischen Behinderung der Reaktion zwischen Af finitätsliganden und zu reinigenden Biopolymeren füh ren. Längere Spacer führen zu einer unnötigen Vergeu dung des innerhalb der Poren zur Verfügung stehenden freien Raumes, ohne den Wirkungsgrad der Affinitätsli ganden zu erhöhen.

In den nachfolgenden Bezugsbeispielen ist die Herstel lung von einigen Kieselsäuregelen beschrieben, die ober flächlich so aktiviert sind, daß sie verschiedene Af finitätsliganden schonend kovalent binden können. In den anschließenden Beispielen ist beschrieben, wie spe zielle Affinitätsliganden oberflächlich kovalent gebun den werden und die so entstandenen porösen Kieselsäuregele zur effizienten Affinitätschromatographie der entspre chenden Biopolymeren eingesetzt werden können.

Bezugsbeispiel 1 Synthese von Diol-Kieselsäuregel

50 g poröses Kieselsäuregel mit einer Porengröße von 100 nm und einer Partikelgröße von ca. 60 µm werden in einem 500 ml Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 12 Stunden bei einer Temperatur von 150°C getrocknet und aktiviert. Nach dem Abkühlen wird belüftet und mit 50 ml destilliertem γ-Glycidyloxypropyltrimethoxysilan in 200 ml absolutem Toluol und 1 ml absolutem Tributylamin versetzt. Die Umsetzung erfolgt 12 Stunden bei 111°C, der Rückflußtemperatur von Toluol. Nach der Reaktion wird das Produkt Epoxy-Kieselsäuregel abgesaugt und zweimal mit 250 ml Toluol, dreimal mit 250 ml Aceton und zwei mal mit 0,005 M HCl gewaschen und abgesaugt. Das Epoxy- Kieselsäuregel wird in 250 ml 0,005 M HCl suspendiert und in 2 Stunden bei 90°C die Epoxy-Gruppe zur Diol-Gruppe gespalten.

Das Produkt Diol-Kieselsäuregel wird abgesaugt, fünfmal mit H₂O und zweimal mit Aceton gewaschen und bei 50°C ge trocknet.

Bezugsbeispiel 2 Aktivierung von Diol-Kieselsäuregel mit Tosylchlorid

50 g trockenes Diol-Kieselsäuregel mit 100 nm Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500-ml- Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt, die Suspension im Vakuum entgast und an einen Rührer angeschlossen. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tosylchlorid, gelöst in 50 ml absolutem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei Raumtemperatur 20 bis 24°C für 30 Minuten wird das Tosyl-aktivierte Kieselsäuregel abgesaugt und mit Aceton, Aceton : 2 mM HCl der Zusammensetzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen, abgesaugt und gefriergetrocknet.

Bezugsbeispiel 3 Aktivierung von Diol-Kieselsäuregel mit Trichlormethansul fonsäurechlorid

50 g trockenes Diol-Kieselsäuregel mit 250 nm Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500-ml- Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspen sion wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tri chlormethansulfonsäurechlorid, gelöst in 50 ml absolu tem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das Tri chlormethansulfonsäurechlorid-aktivierte Kieselsäuregel ab gesaugt und mit Aceton, Aceton : 2 mH HCl der Zusammen setzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschlie ßend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.

Bezugsbeispiel 4 Aktivierung von Dio-Kiesesläuregel mit 2,4,6-Trinitroben zolsulfonsäurechlorid

50 g trockenes Diol-Kieselsäuregel mit 500 nm Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500-ml- Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig keit zu entfernen.

Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolu tem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspension wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol 2,4,6-Trinitrobenzol sulfonsäurechlorid, gelöst in 50 ml absolutem Aceton, unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das 2,4,6-Trini trobenzolsulfonsäurechlorid-aktivierte Kieselsäuregel abge saugt und mit Aceton, Aceton : 2 mM HCl der Zusammenset zungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.

Bezugsbeispiel 5 Aktivierung von Diol-Kieselsäuregel mit 2,2,2-Trifluorethan sulfonsäurechlorid (Tresylchlorid)

50 g trockenes Diol-Kieselsäuregel mit 1000 nm Porengröße, synthetisiert nach Bezugsbeispiel 1, wird in einem 500-ml- Dreihalskolben bei einem Druck von <1 mbar 2 Stunden bei 70°C getrocknet, um eventuell vorhandene Feuchtig keit zu entfernen. Nach der Trocknung wird belüftet und mit 250 ml absolutem Aceton und 1 ml absolutem Pyridin versetzt und an einen Rührer angeschlossen. Die Suspen sion wird unter Vakuum entgast und mit einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dieser Suspension werden 10 mmol Tresyl chlorid unter ständigem Rühren langsam zugetropft. Nach der Reaktion bei 0°C für 30 Minuten wird das Tresylchlo rid-aktivierte Kieselsäuregel abgesaugt und mit Aceton, Ace ton : 2 mM HCl der Zusammensetzungen 75 : 25, 50 : 50, 25 : 75 gewaschen und abschließend mit 1 mM HCl gewaschen und gefriergetrocknet.

Beispiel 1 Reinigung von Human-Immunglobulinen (IgG) mit Protein A- Affinitätschromatographie

A: 10 g Sulfonylchlorid aktiviertes Kieselsäuregel mit ei ner Porengröße von 100 nm werden in 50 ml 0,1 M Na- Phosphatpuffer, pH 8,0, suspendiert und im Vakuum ent gast. Zu dieser Suspension werden 300 mg Protein A (aus Staphyloccus aureus oder recombinantes Protein A) gelöst in 15 ml 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 8,0, zuge geben. Die Suspension wird 6 Stunden bei 4°C geschüt telt, um eine hohe Immobilisierung von Protein A zu gewährleisten. Nach der Reaktion wird das Produkt Pro tein A-Kieselsäuregel abfiltriert, in 100 ml 0,1 M Mercapto ethanol, 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 8,0, suspendiert und 2 Stunden geschüttelt, um nicht abreagierte Sulfo nylgruppen zu blockieren. Nach der Blockierungsreaktion wird das Produkt fünfmal mit 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7.0, gewaschen.

B: 10 g Protein A-Kieselsäuregel-100 nm (100 nm) werden in eine 1,27 cm × 15 cm Chromatographiesäule mit Einlaß- und Auslaßadapter gepackt und zweimal mit 3 Säulenvolu mina 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7,0, und 2 Säulenvolu mina 0,05 M Na-Citratpuffer, pH 3.0, gewaschen und 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7,0, äquilibriert. Die IgG-Pro be, bestehend aus 1000 mg rohem Human-IgG, wurde in 100 ml 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7,0, gelöst und mit einer Flußgeschwindigkeit von 10 ml/min auf die Säule adsorbiert. Verunreinigungen mit anderen Proteinen und unspezifisch gebundenes IgG werden mit 2 Säulenvolumina 0,1 M Na-Phosphatpuffer, pH 7,0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgG mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3,0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min elu iert.

Die Bindekapazität von Protein A-Kieselsäuregel (Porengröße 100 nm) wurde zu 25 mg IgG/ml Säulenvolumen bestimmt.

Beispiel 2 Reinigung von Human-Immunglobulinen (IgG) mit Anti-Hu man-IgG Antikörpern durch Affinitätschromatographie

A: 200 mg Anti-Human-IgG Antikörper werden analog Bei spiel 1A an 10 g Sulfonyl aktiviertes Kieselsäuregel mit einer Porengröße von 250 nm immobilisiert.

B: Entsprechend Beispiel 1 B wird das Anti-Human-IgG Kieselsäuregel-2500 in eine Chromatograhiesäule gepackt und äquilibriert. Nach der Bindung von rohem Human-IgG wer den die unspezifisch gebundenen Proteine mit 0,1 M Na- Phosphatpuffer, pH 7,0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgG mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3,0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert. Die Bindekapazität von Anti-Human-IgG Kieselsäuregel (Porengröße 250 nm) wurde zu 10 mg Human IgG/ml Säulenvolumen be stimmt.

Beispiel 3 Reinigung von human IgM mit Maus Anti-human-IgM Anti körper Affinitätschromatographie

A: 10 mg Anti-human-IgM Antikörper werden analog Bei spiel 1 an 10 g Sulfonyl aktiviertes Kieselsäuregel mit einer Porengröße von 1000 nm immobilisiert.

B: Entsprechend Beispiel 1 B wird das Anti-human-IgM Antikörper-Kieselsäuregel-1000 in eine Chromatograhiesäule gepackt und äquilibriert.

Nach der Bindung von rohem Human-IgM werden die unspe zifisch gebundenen Proteine mit 0,1 M Na-Phosphatpuf fer, pH 7,0, ausgewaschen und das spezifisch gebundene Human-IgM mit 0,05 M Citratpuffer, pH 3,0, und einer Flußgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert. Die Bindeka pazität von Maus Anti-Human-IgM Kieselsäuregel (Porengröße 1000 nm) wurde zu 0,75 mg IgM/ml Säulenvolumen be stimmt.

Claims

1. Verfahren zur Abtrennung und Reinigung von Biopolymeren mit Hilfe von porösem Kieselsäuregel mit definierten engen Porengrößenbereichen, welche jeweils das fünf- bis zwanzigfache der Größe des zu reinigenden Materials aufweisen, dadurch gekennzeichnet, daß die Biopolymere durch Affinitätschromatographie an oberflächlich über Kupplungsreagenzien kovalent an das Kieselsäuregel gebundenen Antikörpern oder anderen mehr oder weniger großen Substanzen, wie Protein A, mit spezifischer Affinität zu den zu reinigenden Biopolymeren als Affinitätsliganden, abgetrennt und gereinigt wer den.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Kieselsäuregel verwendet werden mit definierten engen Porengrößen im Bereich von 50 bis 1000 nm.

3. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Proteine, Glykoproteine und/oder Nukleinsäuren sind.

4. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Viren oder Vaccine sind.

5. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Zellorganellen sind.

6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material prokaryotische oder eukaryotische Zellen sind.

7. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das zu reinigende Material Micellen, Vesikel, Chylomikronen, VLDL-, LDL- und/oder HDL-Lipoproteine sind.

8. Verwendung von porösem Kieselsäuregel mit definierten engen Porengrößenbereichen, welche jeweils das fünf- bis zwanzigfache der Größe des zu reinigenden Materials aufweisen mit oberflächlich durch Kupplungsreagenzien kovalent gebundenen Antikörpern oder anderen mehr oder weniger großen Substanzen, wie Protein A, mit spezifischer Affinität zu den zu reinigenden Biopolymeren als Affinitätsliganden, zur Trennung und Reinigung von Biopolymeren.