DE362279T1 - Saponin-hilfsmittel. - Google Patents
Saponin-hilfsmittel.Info
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Claims (23)
1. Verfahren zur Herstellung eines im wesentliehen reinen Saponinadjuvans, beinhaltend:
(a) eine Extraktion von Rohsaponin mit Methanol, um einen methanollöslichen Saponinextrakt zu erhalten,
(b) eine Reinigung des methanollöslichen Saponinextrakts von Stufe (a), indem man den Extrakt einer Umkehrphasen-Hochdruckflüssigchromatographie (RP-HPLC) unterzieht, und
(b) eine Reinigung des methanollöslichen Saponinextrakts von Stufe (a), indem man den Extrakt einer Umkehrphasen-Hochdruckflüssigchromatographie (RP-HPLC) unterzieht, und
(c) eine Gewinnung des im wesentlichen reinen Saponinadjuvans.
2. Verfahren zur Herstellung eines im wesentlichen reinen Saponinadjuvans, beinhaltend:
(a) eine Herstellung eines wäßrigen Extraktes aus Rohsaponin,
(b) eine Extraktion des Extraktes von Stufe (a) mit Methanol, um einen methanollöslichen Extrakt zu
erhalten,
(c) eine Silika-Adsorptionschromatographie des methanollöslichen Extraktes von Stufe (b), um
Fraktionen mit Immunadjuvansaktivität zu erhalten,
(d) eine Rückgewinnung der Fraktionen von Stufe (c), welche Immunadjuvansaktivität besitzen,
(e) eine Reinigung der Saponinfraktionen von stufe (d) bis zur Homogenität durch ümkehrphasenhochdruckflüssigchromatographie
(RP-HPLC) der Fraktionen, um im wesentlichen reine Saponine mit Immunadjuvansaktivität zu erhalten,
(f) eine Gewinnung des im wesentlichen reinen Saponin.
3. Im wesentlichen reines QA-7-Saponin mit einer Rückhaltezeit
von etwa 9-10 Minuten auf RP-HPLC auf einer Vydac-C4-Säule mit einer Teilchengröße von 5 pm, einer
Porengröße von 330 A, 4,6 mm ID &khgr; 25 cm L in einem
-&idigr;-
Lösungsmittel von 40 mM Essigsäure in Methanol/Wasser (58/42- Vol/Vol bei einer Strömungsgeschwindigkeit von
1 ml/min.
■5
4. Im wesentlichen reines QA-7-Saponin nach
Anspruch 3, worin das Saponin Immunadjuvansaktivität besitzt, etwa 35 % Kohlehydrat pro Trockengewicht
(geprüft durch Anthron) enthält, ein UV-Adsorptionsmaximum von 205 - 210 nm hat, eine Mizellbildungskonzentration
von 0,06 % (Gew/Vol) in Wasser und von 0,07 %
in phosphatgepufferter Salzlösung besitzt und bei Konzentrationen von 200 pg/ml keine nachweisbare
Hämolyse von roten Blutkörperchen von Schafen verursacht.
5. Im wesentlichen reines QA-7-Saponin nach Anspruch 4, worin das genannte Kohlehydrat eine
Zusammensetzung, bestehend aus endständiger Rhamnose, endständiger Xylose, endständiger Glukose, endständiger
Galactose, 3-Xylose, 3,4-Rhamnose, 2,3-Fucose, 2,3-Glucuronsäure
und Apiose, besitzt.
6_.. Im wesentlichen reines QA-17-Saponin mit einer Rückhaltezeit von etwa 35 Minuten auf RP-HPLC auf
einer Vydac-C«-Säule mit einer Teilchengröße von 5 pm, einer Porengröße von 330 A, 4,6 mm ID &khgr; 25 cm L in
einem Lösungsmittel . von 40 mM Essigsäure in Methanol/Wasser (58/42· Vol/Vol) bei einer Strömungsgeschwindigkeit
von 1 ml/min.
7. Im wesentlichen reines QA-17-Saponin nach Anspruch 6, worin das Saponin Iinmunadjuvansaktivität
besitzt, etwa 29 % Kohlehydrat pro Trockengewicht (geprüft durch Anthron) enthält, ein UV-Adsorptionsmaximum
von 205 - 210 nm hat, eine kritische Mizellbildungskonzentration von 0,06 % (Gew/Vol) in Wasser und
von 0,03 % (Gew/Vol) in phosphatgepufferter Salzlösung
besitzt und in Konzentrationen von 25 pg/ml oder mehr
in den roten Blutkörperchen von Schafen zu Hämolyse führt.
8. Im wesentlichen reines QA-17-Saponin nach
Anspruch 7, worin das Kohlehydrat eine Zusammensetzung, bestehend aus folgenden Monosaccharidresten, besitzt:
endständige Rhamnose, endständige Xylose, endständige Galactose, endständige Glukose, 2-Arabinose, 2-Fucose,
3-Xylose, 3,4-Rhamnose, 2,3-Glucuronsäure und Apiose.
9. Im wesentlichen reines QA-18-Saponin mit
einer Rückhaltezeit von etwa 38 Minuten, auf RP-HPLC auf einer Vydac-C4-Säule mit einer Teilchengröße von 5 pm,
einer Porengröße von 330 A, 4,6 mm ID &khgr; 25 cm L in
einem Lösungsmittel von 40 mM Essigsäure in Methanol/Wasser (58/42. Vol/Vol) bei einer Strömungsgschwindigkeit
von 1 ml/min.
10. Im wesentlichen reines QA-18-Saponin nach Anspruch 9, worin das Saponin Immunadjuvansaktivität
besitzt, etwa 25 - 26 % Kohlehydrat pro Trockengewicht enthält, ein UV-Absorptionsmaximum von 205 - 210 nm
besitzt, eine kritische Mizellbildungskonzentration von 0,04 % (Gew/Vol) in Wasser und von 0,02 % (Gew/Vol) in
phosphatgepufferter Salzlösung hat und in Konzentrationen von 25 pg/ml oder mehr bei roten Blutkörperchen von Schafen zu Hämolyse führt.
phosphatgepufferter Salzlösung hat und in Konzentrationen von 25 pg/ml oder mehr bei roten Blutkörperchen von Schafen zu Hämolyse führt.
11. Im wesentlichen reines QA-18-Saponin nach Anspruch 10, worin das Kohlehydrat eine Zusammensetzung,
bestehend aus folgenden Monosaccharidresten, besitzt: endständige Rhamnose, endständige Arabinose,
endständige Apiose, endständige Xylose, endständige Glukose, endständige Galactose, 2-Fucose, 3-Xylose,
3,4-Rhamnose und 2,3-Glucuronsäure.
12. Im wesentlichen reines QA-21-Saponin mit einer Rückhaltezeit von etwa 51 Minuten auf rp-hpcL auf
einer Vydac-C4-Säule mit einer Teilchengröße von 5 pm, einer Porengröße von 330 A, 4,6 mm ID 25 cm L in einem
Lösungsmittel von 40 mM Essigsäure in Methanol/Wasser (58/42; Vol/Vol) bei einer Durchflußgeschwindigkeit von
1 ml/min.
13. Im wesentlichen reines QA-21-Saponin nach Anspruch 12, worin das Saponin Immunadjuvansaktivität
besitzt, etwa 22 % Kohlehydrat pro Trockengewicht enthält, ein UV-Absorptionsmaximum von 205 - 210 nm
besitzt, eine kritische Mizellbildungskonzentration von etwa 0,03 % (Gew/Vol) in Wasser und von 0,02 % (Gew/Vol) in
phosphatgepufferter Salzlösung aufweist und in Konzentrationen von 25 pg/ml oder mehr bei roten Blutkörperchen
von Schafen zu Hämolyse führt.
14. Im wesentlichen reines QA-21-Saponin nach Anspruch 14, worin das Kohlehydrat eine Zusammensetzung,
bestehend aus folgenden Monosacchariden, besitzt: endständige Rhamnose, endständige Arabinose,
endständige Apiose, endständige Xylose, 4-Rhamnose, endständige Glukose, endständige Galactose, 2-Fucose,
3-Xylose, 3,4-Rhamnose und 2,3-Glucuronsäure.
15. Im wesentlichen reines anderes Saponin als QA-7, QA-17, QA-18 oder QA-21, das aus einem rohen
Quillajaextrakt durch Adsorptionschromatographie und Umkehrphasenchromatographie durch das Verfahren in den
Beispielen 3 und 4 isoliert wird, Immunadjuvansaktivität besitzt und weniger toxisch ist als roher Quillajaextrakt.
16. Verwendung im wesentlichen reinen Saponins bei der Herstellung eines Mittels zur Förderung der
Immunreaktion eines Lebewesens auf ein Antigen.
17. Pharmazeutische Zusammensetzung, die geeignet ist, bei einem Lebewesen die Produktion von Antikörpern
auf ein Antigen zu bewirken, beinhaltend eine immunogenetisch wirksame Menge eines Antigens und ein im
wesentlichen reines Saponin, wobei das im wesentlichen reine Saponin in ausreichender Menge vorhanden ist, um
die Immunreaktion des Lebewesens auf das Antigen zu fördern.
18. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, worin das Lebewesen ein Mensch oder eine
Katze ist.
19. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17 oder 18, worin das Antigen ein gp70-enthaltendes
Protein ist.
20. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, 18 oder 19, worin das Saponin QA-7, QA-17, QA-18
oder QA-21 ist.
21. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, 18 oder 19, worin das Saponin eine
Mischung aus zwei oder mehreren der gereinigten Saponine QA-7, QA-17, QA-18 oder QA-21 oder irgendeinem
der in Anspruch 15 beschriebenen Saponine ist.
22. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, 18 oder 19, worin das Saponin eine andere
Komponente als QA-7, QA-17, QA-18 oder QA-21 ist, jedoch von einer rohen Quillaja-Saponinmischung
isoliert wird, Immunadjuvansaktivität besitzt und im wesentlichen, wie in den Beispielen 3 und 4
beschrieben, durch Adsorptionschromatographie und Umkehrphasenchromatographie gereinigt wird und weniger
toxisch ist als rohe Quillaja-Saponinmischungen.
23. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, 18 oder 19, worin das Saponin im wesentlichen
frei von der toxischen Komponente QA-19 ist.
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| US5522987A | 1987-05-29 | 1987-05-29 | |
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|---|---|
| DE362279T1 true DE362279T1 (de) | 1991-01-17 |
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|---|---|---|---|
| DE1988905332 Pending DE362279T1 (de) | 1987-05-29 | 1988-05-31 | Saponin-hilfsmittel. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE362279T1 (de) |
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1988
- 1988-05-31 DE DE1988905332 patent/DE362279T1/de active Pending
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