DE3621448A1 - Verfahren zur bestimmung von ammoniak (oder atp) - Google Patents

Verfahren zur bestimmung von ammoniak (oder atp)

Info

Publication number
DE3621448A1
DE3621448A1 DE19863621448 DE3621448A DE3621448A1 DE 3621448 A1 DE3621448 A1 DE 3621448A1 DE 19863621448 DE19863621448 DE 19863621448 DE 3621448 A DE3621448 A DE 3621448A DE 3621448 A1 DE3621448 A1 DE 3621448A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
atp
ammonia
kinase
determination
glutamine synthetase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE19863621448
Other languages
English (en)
Inventor
Tatsurokuro Tochikura
Takashi Tachiki
Hidehiko Kumagai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takara Shuzo Co Ltd
Original Assignee
Takara Shuzo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takara Shuzo Co Ltd filed Critical Takara Shuzo Co Ltd
Publication of DE3621448A1 publication Critical patent/DE3621448A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/008—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions for determining co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Ammoniak wurde bisher hauptsächlich nach einer chemischen Methode (der sogenannten Indophenolmethode) bestimmt. Ammoniak kann auch nach verschiedenen enzymatischen Methoden bestimmt werden. In Frage kommt dabei eine Methode unter Verwendung von Glutamathydrogenase (JA-OS 21 995/'82), welche eine große Menge an Enzym zur Messung erfordert infolge seines großen Km-Wertes für Ammoniak. Eine andere enzymatische Methode verwendet Carbamate-Kinase (JA-PS 2 13 399/'84). Dieses Enzym, das im allgemeinen instabil ist und dazu neigt, seine Aktivität nach einer Dialyse und anderen Behandlungen zu verlieren, muß gereinigt oder in Gegenwart eines SH-Gruppenschutzmittels, wie reduziertem Glutathion und 2-Marcaptoethanol, gelagert werden. Wird Ammoniak in einer Lösung bestimmt, die ein Oxidase/ Peroxidase/Chromogen-System enthält, dann inhibiert das Vorliegen eines derartigen SH-Gruppenschutzmittels in dem Carbamatkinasepräparat das Farbreaktionssystem, wodurch negative Fehler erzeugt werden und keine genauen Messungen möglich sind. Eine dritte bekannte enzymatische Methode verwendet Carbamoylphophatsynthetase (JA-PS 47 698/'85). Diese Synthetase kann nur aus Säugetierorganen erhalten werden und eine konstante Lieferung in größeren Mengen ist nicht zu erwarten.
Es sind zwei Methoden bekannt zur Bestimmung von ATP: eine besteht darin, Hexokinase mit ATP in Gegenwart von Glukose unter Bildung von Glukose-6-phosphat umzusetzen, dann die Glukose-6-phosphatdehydrogenase auf dieses Phosphat in Gegenwart von NADP zur Umsetzung zu bringen und colorimetrisch die Menge an NADPHbei 340 nm zu messen (Methods of Enzymatic Analysis, 7, 346, 1985), während die andere Methode darin besteht, Luciferase mit ATP in Gegenwart von Luciferin und Mg2+-Ionen umzusetzen und die Menge an ATP durch Messung der Luminozität bei 562 nm zu messen (ibid., 7, 357, 1985). Die erstere Methode ist mit dem Nachteil einer geringen Empfindlichkeit behaftet, da nur ein Molekül NADPH aus einem Molekül ATP gebildet wird, während der Nachteil der letzteren Methode in den hohen Kosten von Luciferin und Luciferase liegt.
Aufgabe der Erfindung ist daher die Schafffung eines sehr empfindlichen, einfachen und billigen Verfahrens zur Bestimmung von Ammoniak oder ATP.
Diese Aufgabe wird durch das Verfahren gemäß Patentanspruch 1 gelöst.
Zusammengefaßt betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Bestimmung von Ammoniak (oder ATP) in einer Probelösung und besteht darin, Glutaminsynthetase auf die Probelösung in Gegenwart von L-Glutaminsäure und ATP (oder Ammoniak) und dann eine Kinase auf das gebildete Kinasesubstrat und ADP einwirkenzulassen und die Menge des erhaltenen Produkts der Kinasereaktion zu messen.
Das erfindungsgemäße Verfahren verwendet eine Zyklusreaktion mit hoher Empfindlichkeit, eine colorimetrische Bestimmung und die Verwendung von Glutaminsynthetase, die sehr stabil ist und billig in größeren Mengen aus Mikroorganismen erhalten werden kann (insbesondere Micrococcus- und Brevibacterium-Mikroorganismen, die in der Lage sind, Glutaminsynthetase in Mengen von 2 bis 3% des gesamten intrazellularen Proteins, das sie erzeugen, zu bilden). Auf diese Weise wird eine neue Methode der Bestimmung von Ammoniak und ATP geschaffen, die sehr wertvoll zur Durchführung von klinischen Tests ist.
Jede Probelösung, die Ammoniak oder ATP enthält, kann zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendet werden. Erwähnt seien Lösungen, die Ammoniak oder ATP enthalten, die durch enzymatische Reaktion gebildet worden sind. Nachfolgend werden typische enzymatische Reaktionen, die Ammoniak bilden, aufgezählt. Das erfindungsgemäße Verfahren kann in erfolgreicher Weise zur Messung der Aktivität dieser Enzyme und zur Bestimmung der Substrate und Produkte dieser Reaktionen eingesetzt werden.
  • 1. Asparaginase (EC3.5.1.1)
    L-Asparagin + H2O →L-Asparaginsäure + NH3
  • 2. Aspartase (EC4.3.1.1)
    L-Asparagin → Fumarsäure + NH3
  • 3. Adenindeaminase (EC3.5.4.2)
    Adenin + H2O → Hypoxanthin + NH3
  • 4. Adenosindeaminase (EC3.5.4.4)
    Adenosin + H2O → Inosin + NH3
  • 5. Adenosinmonophosphatdeaminase (EC3.5.4.6)
    AMP + H2O → IMP + NH3
  • 6. Adenosinphosphatdeaminase (EC3.5.4.17)
    Adenosinphosphat + H2O → Inosinphosphat + NH3
  • 7. Amindehydrogenase (EC1.4.99.3)
    Amin + oxidiertes Phenazinmethosulfat + H2O2 → Aldehyd + reduziertes Phenazinmethosulfat + NH3
  • 8. Arginindeiminase (EC3.5.3.6)
    L-Arginin → L-Citrullin + NH3
  • 9. Amidase (EC3.5.1.4)
    Monocarbonsäureamid + H2O → Monocarbonsäure + NH3
  • 10. ω-Amidase (EC3.5.1.3)
    2-Ketoglutaraminsäure + H2O → 2-Ketoglutarsäure + NH3
  • 11. Urease (EC3.5.1.5)
    Harnstoff + H2O → 2NH3 + CO2
  • 12. Ureidsuccinase (EC3.5.1.7)
    N-Carbamoyl-L-Asparaginsäure + H2O → L-Asparaginsäure + CO2 + NH3
  • 13. Guanindeaminase (EC3.5.4.3)
    Guanin + H2O → Xanthin + NH3
  • 14. Guanosindeaminase (EC3.5.4.15)
    Guanosin + H2O → Xanthosin + NH3
  • 15. Glutaminase (EC3.5.1.2)
    L-Glutamin + H2O → L-Glutaminsäure + NH3
  • 16. Creatinindeaminase (EC3.5.4.21)
    Creatinin + H2O → N-Methylhydantoin + NH3
  • 17. Cytidindeaminase (EC3.5.4.5)
    Cytidin + H2O → Uridin + NH3
  • 18. Cytosindeaminiase (EC3.5.4.1)
    Cytosin + H2O → Uracil + NH3
  • 19. Citrullinase (EC3.5.1.20)
    L-Citrullin + 2H2O → L-Ornitin + CO2 + NH3
  • 20. Trans-glutaminase (EC2.3.2.13)
    N2-R-Glutaminylpeptid + RNH2 → NH3 + N2-R-N5-R-Glutaminylpeptid
  • 21. Threonindehydratase (EC4.2.1.16)
    L-Threonin + H2O → 2-Ketobuttersäure + NH3 + H2O
  • 22. Nikotinamidase (EC3.5.1.19)
    Nikotinamid + H2O → Nikotinsäure + NH3
  • 23. Nikotinamidnukleotidamidase (EC3.5.1.42)
    Nikotinamidmononukeotid + H2O → Nikotinsäure-D-ribonukleotid + NH3
  • 24. L-Histidinammoniaklyase (EC4.3.1.3)
    L-Histidin → Urocansäure + NH3
  • 25. Phenylalaninammoniaklyase (EC4.3.1.5)
    L-Phenylalanin → Trans-zimtsäure + NH3
Nachfolgend werden typische enzymatische Reaktionen, die ATP bilden aufgezählt. Das erfindungsgemäße Verfahren kann in erfolgreicher Weise zur Messung der Aktivität dieser Enzyme und zur Bestimmung der Substrate und Produkte dieser Reaktionen verwendet werden.
  • 1. Tyrosyl-tRNA-Synthetase (EC6.1.1.1)
    L-Tyrosyl-tRNA + AMP PPi ⇄ L-Tyrosin + ATP + tRNA
  • 2. Acetyl-CoA-Synthetase (EC6.2.1.1)
    AMP + PPi + Acetyl-CoA ⇄ ATP + Essigsäure + CoA
  • 3. Asparagin-Synthetase (EC6.3.1.1)
    L-Asparagin + AMP + PPi ⇄ L-Asparaginsäure + NH3 + ATP
  • 4. NAD-Synthetase (EC6.3.1.5)
    AMP + Pyrophosphorsäure + NAD ⇄ ATP + Deamido + NH3
  • 5. Ribosephosphatpyrophosphokinase (EC2.7.6.1)
    AMP + 5-Phospho-α-D-ribosylpyrophosphat ⇄ ATP + D-Ribose-5-phosphat
  • 6. Pyruvatorthophosphatdikinase (EC2.7.9.1)
    AMP + Phosphoenolbrenztraubensäure + PPi ⇄ ATP + Brenztraubensäure + Pi
Die vorstehend angegebenen enzymatischen Reaktionen dienen nur zur Erläuterung, ohne die Erfindung zu beschränken.
Die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens einzusetzende Glutaminsynthetase findet sich im Hirm und in der Leber von verschiedenen höheren Tieren, im Saatgut von Hülsenfrüchten sowie in Escherichia colie und anderen Mikroorganismen. Davon werden Glutaminsynthetase erzeugende Spezies, die zum dem Genus Micrococcus oder Brevibacterium gehören, am als vorteilhafteste Quellen bezüglich der billigen Verfügbarkeit in größeren Mengen bevorzugt (vgl. die JA-PS 33 594/'82). In den folgenden Beispielen der vorliegenden Erfindung wird Glutaminsynthetase, die unter Einsatz von Brevibacterium flavum ATCC 14067 erzeugt wird, verwendet.
Die Wirkung und die Methode der Messung der enzymatischen Aktivität der erfindungsgemäß eingesetzten Glutaminsynthetase werden nachfolgend erläutert.
1. Wirkung
Dieses Enzym katalysiert die Biosynthese von L-Glutamin aus L-Glutaminsäure und Ammoniak unter Verwendung der chemischen Energie von ATP
L-Glutaminsäure + Ammoniak + ATP → L-Glutamin + ADP + anorganisches Phosphat
2. Messung der enzymatischen Aktivität
Eine Mischung aus 0,1 ml 500 mM Natrium-L-glutamatlösung, 0,1 ml 250 mM Ammoniakchloridlösung, 0,1 ml 75 mM ATP-Lösung, 0,1 ml 300 mM MgCl2-Lösung, 0,1 ml 1M Imidazol-HCl-Puffer (pH 7,0), 0,4 ml destilliertem Wasser und 0,1 ml Enzymlösung mit geeigneter Konzentration wird bei 37°C 10 Minuten stehengelassen. Nach Beendigung der Reaktion wird die Menge an gebildetem anorganischem Phosphat nach der Fiske-Subbarow-Methode gemessen oder das gebildete Glutamin wird durch Papierchromatographie abgetrennt und durch die Ninhydrin-Farbreaktion bestimmt. Eine Einheit Glutaminsynthetase wird durch die Menge an Enzym zum Ausdruck gebracht, die 1 µMol anorganisches Phosphat oder Glutamin in 1 Minute in den vorstehend beschriebene Reaktionssystemen zu erzeugen vermag.
Bestimmung von Ammoniak oder ATP:
Es wurde festgestellt, daß Ammoniak oder ATP in einer Probelösung in sehr einfacher Weise mit hoher Empfindlichkeit sowie preisgünstig durch Verwendung von Glutaminsynthetase bestimmt werden kann. Bei dieser Methode läßt man in der Probelösung enthaltenes Ammoniak mit L-Glutaminsäure und ATP durch Wirkung von Glutaminsynthetase unter Bildung von Glutamin, ADP und anorganischen Phosphat reagieren. ATP in einer Probelösung läßt man andererseits mit L-Glutaminsäure und Ammoniak durch Wirkung der Glutaminsynthetase unter Bildung von L-Glutamin, ADP und anorganischen Phosphat reagieren. Das durch diese enzymatischen Reaktionen gebildete ADP läßt man dann mit einer Kinase in Gegenwart von Kinasesubstrat unter Bildung von Kinasereaktionsprodukten und ATP reagieren. Die Reaktion von ADP mit Phosphoenolbrenztraubensäure (Kinasesubstrat), katalysiert durch Pyruvatkinase unter Gewinnung von ATP und Brenztraubensäure ist ein typisches Beispiel für diesen Typ von Reaktion. In diesem Falle kann die Menge an durch diese Reaktion gebildeter Brenztraubensäure nach jeder bekannten Methode gemessen werden. Beispielsweise läßt man NADH und Lactatdehydrogenase mit der Brenztraubensäure reagieren, worauf sich die Messung der Reduktion des Absorptionsvermögens bei 340 nm infolge von NADH anschließt. Ferner kann man Pyruvatoxidase auf die Brenztraubensäure einwirken lassen, worauf sich eine Messung des Sauerstoffverbrauchs nach der Sauerstoffelektrodenmethode anschließt oder eine Bestimmung von gebildetem Wasserstoffperoxid durch die Peroxidasefarbreaktion folgt (beispielsweise Messung des Absorptionsvermögens bei 500 nm, wenn das 4-Aminoantipyrin/Phenol/Peroxidase-System verwendet wird).
Bezüglich des Typs der für diese enzymatischen Reaktionen verwendeten Pufferlösungen gibt es keine besonderen Einschränkungen in vorteilhafter Weise werden jedoch Phosphat-, Imidazol-, Tris- und Glyzylglyzin-Pufferlösungen verwendet. Vorzugsweise liegt der pH zwischen 6 und 9, wobei ein pH von 7 am meisten bevorzugt wird. Die Glutaminsynthetase sollte vorzugsweise in einer Menge von 0,2 bis 20 Einheiten und insbesondere von 1 bis 5 Einheiten und die Kinase in einer Menge von 1 bis 10 Einheiten, insbesondere 5 Einheiten oder mehr, verwendet werden. L-Glutaminsäure sollte vorzugsweise in einer Konzentration von 1 bis 50 mM und insbesondere 5 bis 10 mM und ATP und das Kinasesubstrat (beispielsweise Phosphoenolbrenztraubensäure und NADH) in einer Konzentration von nicht weniger als derjenigen des zu bestimmenden Ammoniaks oder ATP eingesetzt werden. Diese Reaktionen werden vorzugsweise bei 20 bis 40°C während 1 bis 20 Minuten durchgeführt.
Die Erfindung wird nachfolgend durch die Beispiele und die beigefügten Zeichnungen näher erläutert. Die Fig. 1 zeigt eine Eichkurve, welche die Beziehung zwischen der Menge an Ammoniak und dem Unterschied des Absorptionsvermögens bei 340 nm bei dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren erläutert. Die Fig. 2 zeigt eine Eichkurve, welche die Beziehung zwischen der Menge an Ammoniak und dem Unterschied im Absorptionsvermögen bei 500 nm bei Anwendung des in Beispiel 2 beschriebenen Verfahrens zeigt. Fig. 3 zeigt eine Eichkurve, welche die Beziehung zwischen der Menge an ATP und dem Unterschied des Absorptionsvermögens bei 340 nm bei dem in Beispiel 3 angewendeten Verfahren erläutert. Fig. 4 zeigt die Veränderungen der Absorption bei 340 nm im Verlaufe der Reaktionszeit (Minuten), wenn Ammoniak unter Verwendung der erfindungsgemäßen Glutaminsynthetase (Kurve A) sowie unter Einsatz von herkömmlicher Glutamatdehydrogenase (Kurve B) bestimmt wird.
Beispiel 1
Bestimmung von Ammoniak (Pyruvatkinase/Lactatdehydrogenase- Reaktionssystem)
Zu 3,0 ml der vorstehenden Mischung werden 0,1 ml einer Ammoniumchloridlösung (1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM und 5 mM Konzentration) gegeben. Jede der erhaltenen Lösungen wird bei 37°C 5 Minuten stehengelassen. Wie aus Fig. 1 hervorgeht, wird eine gute lineare Beziehung zwischen der Menge an zugesetztem Ammoniumchlorid und der Abnahme des Absorptionsvermögens bei 340 nm festgestellt.
Beispiel 2
Bestimmung von Ammoniak (Pyruvatkinase/Pyruvatoxidase/Peroxidase- Reaktionssystem)
Zu 3,0 ml der vorstehenden Mischung werden 0,1 ml Ammoniumchloridlösung (Konzentration 1 mM, 2 mM, 3 mM, 4 mM und 5 mM) gegeben. Jede der erhaltenen Lösungen wird bei 37°C 5 Minuten stehengelassen. Wie aus Fig. 2 hervorgeht, wird eine gute lineare Beziehung zwischen der Menge an zugesetztem Ammoniumchlorid und der Zunahme des Absorptionsvermögens bei 500 nm beobachtet.
Beispiel 3
Bestimmung von ATP
Zu 3,0 ml der vorstehenden Mischung werden 0,1 ml ATP-Lösung (Konzentration 0,25 mM, 0,50 mM, 0,75 mM und 1,0 mM) gegeben und jede der erhaltenen Lösungen wird bei 37°C stehengelassen. Der Unterschied des Absoptionsvermögens bei 340 nm wird 3 Minuten und 5 Minuten später gemessen. Wie aus Fig. 3 hervorgeht, wird eine gute lineare Beziehung zwischen der Menge an zugesetztem ATP und dem Unterschied des Absorptionsvermögens bei 340 nm beobachtet (d. h. Abnahme der Menge an NADH).
Vergleichsbeispiel
Vergleich der Reaktionsgeschwindigkeit der Ammoniakbestimmung, wenn Glutaminsynthetase oder Glutamindehydrogenase verwendet wird:
Ein Test wird durchgeführt zum Vergleich der Reaktionsgeschwindigkeit der Bestimmung von Ammoniak mit niedriger Konzentration unter Verwendung von Glutaminsynthetase gemäß vorliegender Erfindung oder herkömmlicher Glutamatdehydrogenase aus Hefe. Die Zusammensetzung der Reaktantenmischung bei Verwendung von Glutaminsynthetase ist die gleiche, wie diejenige des Beispiels 1, mit der Ausnahme, daß 0,1 ml einer 45 Einheiten/ml-Glutaminsynthetase verwendet werden. Die Zusammensetzung der Glutamatdehydrogenasereaktion ist wie folgt: 1,0 ml 300 mM Tris-HCl-Puffer (pH 8,0) 0,1 ml 225 mM 2-Ketoglutarsäurelösung, 0,1 ml 6 mM NADPH-Lösung, 0,1 ml 45 Einheiten/ml-Glutamatdehydrogenaselösung und 1,6 ml Wasser. Zu jeweils 3,0 ml einer jeden der vorstehend beschriebenen gemischten Lösungen werden 50 µl Ammoniumchloridlösung (Konzentration 0,05 mM, 1,0 mM und 2,0 mM) gegeben und die erhaltenen Mischungen werden bei 37°C stehengelassen und die Absorption bei 340 nm infolge einer Abnahme an NADH oder NADPH im Verlaufe der Zeit wird gemessen.
Wie aus Fig. 4 hervorgeht, ist bei Verwendung von Glutaminsynthetase (Kurve A) die Reaktion nach ungefähr 3 Minuten bei allen getesteten Ammoniakkonzentrationen beendet. Wird Glutamatdehydrogenase verwendet (Kurve B), dann ist die Reaktion sogar noch nach 6 bis 7 Minuten im Falle von allen Ammoniakkonzentrationen unvollständig.
Wie aus den vorstehenden Ausführungen hervorgeht, vermag das erfindungsgemäße Verfahren in spezifischer Weise Ammoniak oder ATP mit hoher Empfindlichkeit zu bestimmen. Die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens eingesetzte Glutaminsynthetase kann durch Mikroorganismen auf billige Weise erzeugt werden und hat sich als wirksames Reagens zur Durchführung von klinischen Test erwiesen.

Claims (2)

1. Verfahren zur Bestimmung von Ammoniak (oder ATP) in einer Probelösung, dadurch gekennzeichnet, daß man Glutaminsynthetase auf die Probelösung in Gegenwart von L-Glutaminsäure und ATP (oder Ammoniak) und dann eine Kinase auf das gebildete Kinasesubstrat und ADP einwirken läßt und die Menge des erhaltenen Produkts der Kinasereaktion mißt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Glutaminsynthetase, die Kinase und das Kinasesubstrat gleichzeitig in der Probelösung vorliegen.
DE19863621448 1985-06-27 1986-06-26 Verfahren zur bestimmung von ammoniak (oder atp) Withdrawn DE3621448A1 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP14124185A JPS623800A (ja) 1985-06-27 1985-06-27 アンモニアまたはａｔｐの定量法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE3621448A1 true DE3621448A1 (de) 1987-01-08

Family

ID=15287374

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19863621448 Withdrawn DE3621448A1 (de) 1985-06-27 1986-06-26 Verfahren zur bestimmung von ammoniak (oder atp)

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JPS623800A (de)
DE (1) DE3621448A1 (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3315611A1 (de) * 2016-10-25 2018-05-02 ARKRAY, Inc. Quantifizierungsverfahren für ammoniak, quantifizierungsreagenz-kit, teststück und ammoniakquantifizierungsvorrichtung

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0647512B2 (ja) * 1990-04-10 1994-06-22 東陶機器株式会社 窯業製品表面模様の形成方法
KR100433683B1 (ko) * 2001-06-18 2004-05-31 한국과학기술연구원 글루타민 신쎄이즈의 미세분석방법
JP6989300B2 (ja) * 2016-10-25 2022-01-05 アークレイ株式会社 アンモニアの定量方法、定量試薬キット、試験片及びアンモニアの定量装置
JP7328739B2 (ja) 2017-08-10 2023-08-17 アークレイ株式会社 グルタミン合成酵素反応を効率よく行う方法、及び該方法を利用したアンモニア定量方法、並びにグルタミン合成酵素反応用試薬及びそれを含むアンモニア定量用試薬キット
CN113075139B (zh) * 2021-03-29 2022-10-11 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种稳定的双试剂血氨测定试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2834704A1 (de) * 1978-08-08 1980-02-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantitativen enzymatischen bestimmung von adp

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2834704A1 (de) * 1978-08-08 1980-02-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantitativen enzymatischen bestimmung von adp

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3315611A1 (de) * 2016-10-25 2018-05-02 ARKRAY, Inc. Quantifizierungsverfahren für ammoniak, quantifizierungsreagenz-kit, teststück und ammoniakquantifizierungsvorrichtung
US10731200B2 (en) 2016-10-25 2020-08-04 Arkray, Inc. Quantification method for ammonia, quantification reagent kit, test piece, and ammonia quantification device

Also Published As

Publication number Publication date
JPS623800A (ja) 1987-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Paetkau et al. Phosphofructokinase: correlation of physical and enzymatic properties
EP0009076B1 (de) Verfahren zur quantitativen enzymatischen Bestimmung von ADP und Reagenz zur Durchführung des Verfahrens
DE2122255B2 (de) Verfahren zur spezifischen Bestimmung von Creatinin
Traut et al. Inhibitors of orotate phosphoribosyl-transferase and orotidine-5'-phosphate decarboxylase from mouse Ehrlich ascites cells: a procedure for analyzing the inhibition of a multi-enzyme complex
DE69129306T2 (de) Hochempfindliches bestimmungsverfahren für ammoniak, alpha-aminosäure oder alpha-ketosäure und zusammensetzung hierfür
DE2908054A1 (de) Verfahren und reagenz zur bestimmung der creatinkinase
DE3621448A1 (de) Verfahren zur bestimmung von ammoniak (oder atp)
Pausch et al. Control of Pyrimidine Biosynthesis in the Perfused Liver: Feedback Inhibition of Glutamine‐Dependent Carbamoyl Phosphate Synthetase
DE69223710T2 (de) Zusammensetzung zum Bestimmen der Kaliumionenkonzentration
DE3642804A1 (de) Verfahren zur bestimmung von ammoniak oder atp in einer probeloesung
DE3415436C2 (de) Assay-Verfahren unter Verwendung von NAD-Synthetase
DE69635046T2 (de) Stabilisiertes reagenz durch verwendung eines coenzym-reduktionssystems
US4742001A (en) Method of terminating isocitrate dehydrogenase reaction in an analytical system
EP0154269B1 (de) Nucleosidtriphosphat-abhängige 1-Methylhydantoinase und ihre Verwendung
DE3153683C2 (de)
DE3752238T2 (de) Neue NAD-Synthetase gebrauchende Methode
DE69430305T2 (de) Reagenz zur bestimmung der kreatinkinase
DE2558536A1 (de) Verfahren zur kinetischen substratbestimmung und reagens zu seiner durchfuehrung
DE68920659T2 (de) Nukleosidoxidase und analytisches verfahren.
EP1038024B1 (de) Stabilisiertes reagenz und verfahren zur bestimmung von creatin-kinase
EP0207493A2 (de) Verfahren zur Beendigung der Isozitratdehydrogenase-Reaktion
DE3852498T2 (de) Enzymtest für biologische substanzen.
DE69206001T2 (de) Verfahren zur hochsensitiven Bestimmung von NADH mit NADH Kinase.
DE2167034C3 (de) Creatinin-amidohydrolase
DE19742117B4 (de) Verfahren zur Messung von Harnstoffstickstoff und Untersuchungssets dafür

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8130 Withdrawal