DE3435718A1

DE3435718A1 - Proteolytischer wundverband

Info

Publication number: DE3435718A1
Application number: DE19843435718
Authority: DE
Inventors: Karel Dr.-Ing. Prag/Praha &Scaron;ebesta; Mojmír Dr. Sadská &Scaron;ebestík; Lenka Dipl.-Ing. Chot&ecaron;bo&rcaron; Jelínková; Vladimir Prag/Praha Pitrák; Ji&rcaron;í Dipl.-Ing. Stamberg; Jaroslava Dipl.-Ing. &Ccaron;eský Brod Turková
Original assignee: Czech Academy of Sciences CAS
Current assignee: Czech Academy of Sciences CAS
Priority date: 1983-09-29
Filing date: 1984-09-28
Publication date: 1985-04-11
Also published as: SE8404769D0; FR2552667A1; CS249311B1; CA1217134A; GB2147206B; GB2147206A; GB8423913D0; JPS6094916A; FR2552667B1; DD258121A3; HUT35956A; SE8404769L

Description

Ceskoslovenska akademie ved Prag, CSSR

Proteolytischer Wundverband

Die Erfindung betrifft einen proteolytischen Wundverband in Form eines Streupulvers, der sich insbesondere zur Abdeckung und Behandlung von eitrigen und nekrotischen. Wunden eignet, und seine Herstellung.

In der üblichen pharmazeutischen und medizinischen Praxis werden zur Abdeckung und Behandlung eitriger und nekrotischer Wunden aus verschiedenen Grundlagen (Stärke, Talk u.a.) und aus Bakteriziden und gegebenenfalls bakteriostatisch wirksamen Stoffen, besonders aus Antibiotika, Sulfonamiden und Antimykotika bestehende Puder angewandt.

In letzter Zeit haben sich bei der Therapie von eiternden Wunden absorbierende Wundverbände in Form von Streupulvern bewährt, die als Hauptbestandteil ein hydrophiles Polymerisat enthalten. Ihre Wirkung beruht auf der Flüssigkeitsabnahme von der Wundoberfläche durch Sorption in der

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porösen Struktur der wirksamen polymeren Komponente und Ansaugen in die Teilchenzwischenräume der Streupulverschicht durch Kapillarwirkung. Auf diese Weise werden aus der Wunde Exsudate wie auch Bakterien und Entzündungen verursachende Verbindungen, gegebenenfalls Toxine, beseitigt. In der medizinischen Praxis haben sich besonders die Präparate auf der Basis von vernetzten Dextranen durchgesetzt (B.S. Jacobsen et al., Scand. J. Plast. Reconstr. Surg. K) (1976) 65-72). Vielversprechende Ergebnisse wurden auch mit polymeren Verbundmaterialien auf der Basis von Cellulose erreicht, die als Beimengung in der Masse eine hoch hydrophile polymere Komponente, zB Carboxymethylcellulose, enthalten (CS-Patentanmeldung PV 4129-82)

Bei der weiteren Entwicklung von Streupulvern mit reinigender Wirkung zur Behandlung von eitrigen Wunden wurden Cellulosepuder angegeben, die immobilisierte Enzyme aus der Gruppe der Proteasen enthalten (Immobilizovannyje proteolyticeskije fermenty ν lecenii gnojno-nekroticeskich processov, Sbornik rabot, AN SSSR, Sibirskoje otdelenije, Institut citologii i genetiki, Novosibirsk, 1981). In diesem Falle werden zur Erzielung von Reinigungseffekten die enzymatischen Wirkungen ausgenutzt. Proteolytische Wundverbände verursachen die hydrolytische Zersetzung und Auflösung von nekrotischen Geweben und Eiter in der Wundoberfläche, wodurch zugleich das Milieu für das Wachstum von Bakterien beseitigt und die Resorption toxischer Produkte aus der Wunde unterbunden wird.

Die praktische Ausnützung des proteolytischen Prinzips setzt allerdings die Lösung einer Reihe von Problemen bei der Herstellung wirksamer Wundverbände voraus, die keine schädlichen Nebenwirkungen auslösen. Bei der Verwendung in der Humanmedizin handelt es sich hierbei besonders um die Verhinderung des Eintritts von Cellulose und gegebenenfalls Cellulosederivaten in den Blutkreislauf, da dem menschlichen Organismus keine enzymatischen Systeme zur Beseitigung solcher Verbindungen zur Verfügung stehen. Zur Herstellung der bisherigen proteolytischen. Wundverbände wurden jedoch lediglich übliche, herkömmliche Cellulosen, d.h. gemahlene pulverige Ionenaustauscher mit faseriger Struktur, verwendet, die pulverige Anteile enthalten, die in das Blut eindringen können.

Die Erfindung geht davon aus, daß zur Erzielung einer maximalen Wirksamkeit der Wundverbände das proteolytische Prinzip nicht ohne gleichzeitige Anwendung des früher erkannten Absorptionsprinzips ausgenutzt werden sollte. Bei den bisherigen Lösungen wurde aber als Ausgangsmaterial nur die konventionelle Cellulose mit hoher Kristallinität und niedriger Porosität verwendet, d.h. Cellulose, die Wundverbände mit verhältnismäßig geringem Absorptionsvermögen ergibt.

Die Erfindung geht ferner davon aus, daß zur Ausnutzung des proteolytischen Prinzips außerdem solche Verfahren zur Immobilisierung von Proteasen an Cellulose auszuwählen sind, bei denen eine Freisetzung des Enzyms aus der Matrix und sein Eindringen in einer löslichen Form in den Blutkreis-

lauf, wo es als Antigen allergische Reaktionen auslösen könnte, ausgeschaltet ist.

Der Erfindung liegt entsprechend die Aufgabe zugrunde, einen proteolytischen Wundverband und seine Herstellung anzugeben, bei dem bei gleichzeitig hohem Absorptionsvermögen Proteasen derart an einer Matrix auf Cellulosebasis immobilisiert sind, daß eine Freisetzung von Enzymmolekülen und/oder von in den Blutkreislauf gelangenden Anteilen der Matrix sicher ausgeschaltet ist.

Die Aufgabe wird anspruchsgemäß gelöst.

Der erfindungsgemäße proteolytische Wundverband vermeidet die Nachteile bisheriger Wundverbände. Er ist dadurch gekennzeichnet, daß er aus sphärischen Teilchen mit einem Durchmesser von 0,05 bis 0,5 mm und vorteilhaft von 0,1 bis 0,3 mm auf der Basis von Cellulose mit daran immobilisierten Enzymen aus der Gruppe der Proteasen besteht, die insbesondere unter Chymotrypsin, Trypsin und Subtilisin ausgewählt sind.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung des proteolytischen Wundverbands geht von durch Suspensionsverfahren gemäß dem CS-Urheberschein Nr. 172 640 hergestellter Perlcellulose aus; es ist ferner dadurch gekennzeichnet, daß die im Wasser gequollene und vorher nie getrocknete Perlcellulose einer Teilchengröße von 0,07 bis 0,7 mm und vorzugsweise 0,14 bis 0,4 mm durch Waschen und/oder durch Wasserdampfdestillation

vollkommen von toxischen Verunreinigungen befreit, für die Enzymbindung aktiviert, durch Immobilisierung von Proteasen wie insbesondere Chymotrypsin, Trypsin und Subtilisin modifiziert, abwechselnd mit Puffer von pH 8,5 bis 9,5 und Puffer von pH 4 bis bis zum Ausbleiben proteolytischer Aktivität in der Waschflüssigkeit gewaschen, danach mit Puffer von pH 7,5 bis 8,5 gewaschen und schließlich in diesem Milieu bis auf 0,1 bis 15 % Wassergehalt im Trockenrest, vorteilhaft durch Lyophilisierung, getrocknet wird.

Die regelmäßige sphärische Form der individuellen Teilchen, aus denen der erfindungsgemäße Wundverband besteht, sowie die gewählte Teilchengröße und Korngrößenverteilung (0,05 mm bis 0,5 mm, vorteilhaft 0,1 bis 0,3 mm) gewährleisten leichte Handhabbarkeit bei Herstellung und Verwendung, gute Rieselfähigkeit und Streubarkeit des Puders beim Bestreuen von Wunden und erfüllen insbesondere die Forderung der Verhinderung des Eintritts von Cellulose in den Blutkreislauf.

Bei der Herstellung des neuen Wundverbands geht man vorteilhaft von regenerierter sphärischer Cellulose aus, die gemäß dem CS-Urheberschein Nr. 172 640 hergestellt ist. Ihr Vorteil ist die hohe Porosität, welche die Aktivierung für die Bindung von Enzymen und auch die eigentliche Immobilisierung der Proteasen ermöglicht. Der poröse hydrophile Charakter des Trägers aus Perlcellulose bleibt auch nach der Aktivierung, Immobilisierung und Trocknung erhalten. Als

Trocknungsmethode eignet sich besonders die Lyophilisierung, die eine in Bezug auf das gebundene Enzym schonende Abtrennung des Wassers erlaubt und entsprechende trockene Cellulosederivate mit ausreichendem Absorptionsvermögen liefert.

Die Perlcellulose, die nach dem im CS-Urheberschein Nr. 172 640 beschriebenen Verfahren hergestellt ist, wird zunächst von den löslichen Anteilen, besonders von allen Verunreinigungen mit toxischen Wirkungen, vollkommen befreit, mit denen sie im Verlauf der Herstellung kontaminiert wurde (Zersetzungsprodukte der Xanthogenatgruppen, Reste des Dispergiermediums, z.B. Chlorbenzol). Zu diesem Zweck wird sie bei 50 bis 90 ⁰C mit Wasser und/oder Ethanol, gegebenenfalls mit beiden Lösungsmitteln gewaschen. Chlorbenzol wird auch besonders wirksam durch Wasserdampfdestillation beseitigt.

Zur Aktivierung der Cellulose für die Bindung von Proteasen kann man eine Reihe aus der Literatur bekannter Verfahren (Handbook of Enzyme Biotechnology, Editor: A. Wiseman, E. Horwood Limit., Chichester, 1975) verwenden, wobei solche Verfahren auszuwählen sind, die zu einer ausreichend stabilen Bindung zwischen dem Enzym und der Cellulose führen und das Produkt nicht mit toxischen Verbindungen kontaminieren, die bei der Anwendung des Wundverbands zur Wirkung kommen könnten, z.B. durch Freisetzung oder direkten Kontakt. Ein geeignetes Verfahren stellt die Perjodatoxidation dar, die relativ einfach und leicht durchführbar ist und Produkte

von ausreichender Porosität mit hoher Absorptionswirkung liefert.

Zur Immobilisierung eignen sich die verschiedensten Proteasen, besonders Trypsin und Chymotrypsin, aber auch Thermolysin, Papain, Subtilis in u.a. Die Bindung von Enzymen an der durch die Perjodatoxidation aktivierten Cellulose, die dadurch reaktive Dialdehydgruppen enthält, wird in zwei Stufen durchgeführt: Zuerst bilden sich Verbindungen der Cellulose mit dem Enzym vom Typ der Schiff'sehen Basen, die anschließend durch Reduktion der unvernetzten Aldehydgruppen durch Natriumborhydrid stabilisiert werden.

Ein wichtiger Schritt bei der Herstellung des erfindungsgemäßen Wundverbands ist die vollkommene Beseitigung der löslichen Proteasen aus modifizierter Perlcellulose enthaltenden Anteile. Man erreicht dies durch wiederholten Wechsel von schwach alkalischen (pH 8,5 bis 9,5) und schwach sauren (pH 4 bis 5) Puffern in statischer, diskontinuierlicher Verfahrensweise oder im Kolonnenverfahren. Dazu eignen sich z.B. 0,1 M Boratpuffer mit 1 M NaCl (pH 9) und 0,1 M Acetatpuffer mit 1 M NaCl (pH 4,5), gegebenenfalls beide Puffer ohne NaCl, welche auf das Celluloseprodukt nach der Immobilisierung bis zum Verschwinden der proteolytischen Aktivität der flüssgen Phase einwirken gelassen werden. Das Wechseln der Puffer von niedrigerem und höherem pH mit veränderlicher Ionenstärke ermöglicht die Elution kovalent gebundener Proteine bei variabler Unterdrückung der elektrostatischen und hydrophoben

Wechselwirkungen. Zur Gewinnung des vollkommen stabilen Präparats mit immobilisiertem Enzym werden die Perlen schließlich mit Boratpuffer, z.B. von pH 8, gewaschen und in Suspension mit diesem Puffer lyophilisiert. Unter diesen Bedingungen gewinnt man das nur kovalent gebundenes Enzym enthaltende Produkt, das keinen löslichen Anteil enthält, der bei der Wundbehandlung in den Blutkreislauf gelangen und als Antigen wirken könnte.

Der proteolytische Wundverband mit immobilisiertem Chymotrypsin wurde klinisch geprüft. Er wies nicht nur proteolytische Aktivität gegenüber nekrolytischem Gewebe, Eiter und Fibrin auf, sondern zeigte auch keinerlei schädigende Wirkung gegenüber gesundem Gewebe. Aufgrund der Hydrophilität und porösen Struktur der Cellulosematrix zeichnete sich das Produkt ferner durch hohes Absorptionsvermögen aus. Es saugte das Exsudat aus der Gewebenekrosen und Bakterien enthaltenden Wunde an. Durch die Bindung des Enzyms am Träger wurden seine Autolyse und dadurch Aktivitätsverluste im Verlauf der Einwirkung verhindert. Die verlängerte proteolytische Aktivität von Chymotrypsin führte zum Freiwerden der Wunde von Nekrosen in großem Ausmaß und zu ihrer fortschreitenden Reinigung. Das frühere infizierte Sekret wurde aktiv unter den Streupulverteilchen absorbiert, wodurch die Maceration der Wundränder unter Verminderung der Nährfläche für das Wachstum der bakteriellen Infektion verhindert wurde. Durch die Kombination der proteolytischen und der absorptiven Wirkung wurde eine schnelle Reinigung

von infizierten nekrotischen Defekten, die Bildung von reinen Granulationen und eine schnelle Wundheilung erzielt.

Es hat sich gezeigt, daß der erfindungsgemäße Wundverband zur Behandlung von eitrigen oder nekrotischen Wunden aller Art, einschließlich Operationswunden, die per secundam heilen, Abszessen, belegten und nicht heilenden Geschwüren verschiedener Genese (Unterschenkelgeschwüren, Röntgengeschwüren, trophischenGeschwüren), Defekten nach decubitalen Nekrosen,infizierten und nekrotischen Defekten nach acralen Amputationen, Incisionen und Nekrektomien bei diabetischen Gangränen arteriosclerotischer Genese, Karbunkeln, eitrigen Verbrennungen 2. und 3. Grades, infizierten offenen Frakturen, AmputationsStümpfen sowie etwa zerfallenen und eitrigen Tumoren geeignet ist. Schädliche Nebenwirkungen wurden bei der Anwendung des neuen Wundverbands nicht beobachtet.

Im folgenden wird die Herstellung erfindungsgemäßer Wundverbände und ihre Verwendung anhand von Beispielen näher erläutert.

Beispiel 1

Herstellung eines Wundverbands mit gebundenem Chymotrypsin

a) Einführung von Aldehydgruppen durch Natriumperjodatoxidation

Es wurde eine nach dem CS-Urheberschein Nr. 172 640 hergestellte, nie getrocknete, in Wasser gequollene Perlcellulose mit einer Porosität von 90 % (Porengesamtgehalt in Vol-%) verwendet. Die Cellulose wurde durch Waschen mit heißem Wasser (90 ⁰C, 5 h, 20-facher Überschuß) und durch Wasserdampfdestillation (4h) vollständig von Verunreinigungen befreit. 1000 g abgesaugte Cellulose wurden in 5 1 0,1 M Natriumperjodatlösung suspendiert und bei Raumtemperatur 45 min gerührt. Nach Beendigung der Oxidation wurde die oxidierte Cellulose sofort mit 20 1 destilliertem Wasser auf einem Büchnertrichter gewaschen, dann in eine Kolonne übergeführt und darin mit destilliertem Wasser gewaschen, bis die Leitfähigkeit des Eluats gleich der Leitfähigkeit des destillierten Wassers war (über Nacht).

b) Bindung von Chymotrypsin an der oxidierten Cellulose

1000 g gewaschene oxidierte Cellulose wurden in 1 1 0,1 M Boratpuffer (pH 9) suspendiert, der 5 g Chymotrypsin enthielt (proteolytische Aktivität der Lösung 5,35 j_A /min-ml, bestimmt mit einer Lösung von denaturiertem Hämoglobin, pH 8). Die Suspension wurde bei Raumtemperatur gerührt. Die Bindungsgeschwindigkeit wurde anhand der Abnahme der proteolytischen Aktivität in der Bindungslösung verfolgt. Nach 1 h, als die proteolytische Aktivität auf den Wert 0,1 j. /min-ml

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abgesunken war, wurde die Bindung durch Absaugen der Bindungslösung gehemmt. Die Bindungsgeschwindigkeit des Chymotrypsins wächst mit wachsendem pH. Zugleich erhöht sich aber auch die Solubilisierung der Cellulose, und zwar in Abhängigkeit von der Oxidationsdauer. Das ausgewählte Verfahren wurde aufgrund einer Reihe von Vergleichsversuchen ausgearbeitet und entspricht einem Kompromiß zwischen der Menge des gebundenen Enzyms und den Verlusten der Cellulose infolge der Solubilisierung.

c) Reduktion der Cellulose mit gebundenem Chymotrypsin zur Stabilisierung der Bindungen vom Typ der Schiff'sehen Basen zwischen Träger und Enzym und Beseitigung von unvernetzten Aldehydgruppen

Die Cellulose mit dem gebundenen Chymotrypsin wurde in 1 1 0,1 M Boratpuffer (pH 9) suspendiert, in dem 500 mg NaBH. aufgelöst wurden. Nach 20 min Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reduktion durch Absaugen der Reduktionslösung gestoppt und noch einmal auf dieselbe Weise mit neuer Natriumborhydridlösung wiederholt. Die zweistufige Reduktion mit Zugabe von NaBH.-Lösung niedrigerer Konzentration wurde durchgeführt, um den Verlust der protolytischen Aktivität des Chymotrypsins durch eventuelle Reduktion von Disulfidbrücken zu vermeiden.

d) Waschen und Lyophilisierung der Cellulose mit gebundenem Chymotrypsin

Nach Beendigung der Reduktion wurde die Cellulose mit gebundenem Chymotrypsin abwechselnd

mit 2 1 0,1 M Boratpuffer mit 1 M NaCl (pH 9), 2 0,1 M Acetatpuffer mit 1 M NaCl (pH 4,5) und danach mit gleichen Volumina beider Puffer ohne NaCl-Gehalt gewaschen. Dann wurde die Cellulose mit gebundenem Chymotrypsin in eine Kolonne übergeführt, die mit allen angeführten Puffern jeweils bis zum Verschwinden der proteolytischen Aktivität des Eluats gewaschen wurde. Anschließend wurde die Cellulose mit dem gebundenen Chymotrypsin mit 0,25 M Boratpuffer (pH 8) gewaschen und in Suspension in diesem Puffer lyophilisiert. Auf diese Weise wurde ein Präparat gewonnen, das 5 mg aktives Chymotrypsin, bezogen auf 1 g trockene Cellulose, enthielt. Durch Vergleichsanalyse der Aminosäuren der hergestellten Probe und einer Probe, die ferner mit 6 M Guanidinhydrochlorid und destilliertes Wasser gewaschen worden war, wurde nachgewiesen, daß das gesamte Chymotrypsin kovalent an die Cellulose gebunden ist und daher bei der Applikation nicht in das Blut übergehen und folglich auch nicht als Antigen wirken kann.

Beispiel 2

Herstellung eines Wundverbands mit kovalent gebundenem Trypsin

Die Immobilisierung des Trypsins wurde wie im Beispiel 1 durchgeführt. Es wurde ein Präparat gewonnen, das 8,2 mg aktives Trypsin auf 1 g lyophilisierte Cellulose enthielt. Aufgrund der eingeschränkten spezifischen Wirkung (Spaltung von Proteinen lediglich nach den basischen Aminosäuren Lysin und Arginin) spaltet Trypsin

Proteine in kleinere Peptide auf.

Beispiel 3

Herstellung eines Wundverbands mit kovalent gebundenem Subtilisin

Die Immobilisierung der bakteriellen Protease wurde wie in Beispiel 1 durchgeführt. Es wurde ein Präparat gewonnen, das 11,3 mg aktives Enzym auf 1 g lyophilisiertes Präparat enthielt.

Pharmakologische und medizinische Ergebnisse

1) Der proteolytische Wundverband mit gebundenem Chymotrypsin nach Beispiel 1 wurde bei sieben Patienten 1 bis 4 Wochen lang angewandt, in sechs Fällen mit sehr gutem Erfolg, der sich durch Rückgang der eitrigen Sekretion, Reinigung des Defektuntergrundes und durch Freiwerden von anliegenden Nekrosen, die, falls sie von größerem Ausmaß waren, chirurgisch durch Nekrotomie beseitigt wurden, äußerte. Vor der weiteren Applikation des Präparats wurde die Wunde mit Wasserstoffperoxid und Chloraminlösung (2 °/oo) gespült. Auf diese Weise wurden frische rote Granulationen sowie eine Epithelisierung der Defekte von Rändern her unter fortschreitender Verkleinerung erzielt. Nach Behandlungsende wurden die epithelisierenden Defekte in den meisten Fällen lokal mit Panthenolspray behandelt.

In einem Fall verringerte sich zwar die eitrige Sekretion und 1/5 der Wunde wurde.bis zu frischen Granulationen gereinigt, im übrigen Teil des Defekts bestanden jedoch tief eingreifende adhärierende Nekrosen im Bereich einer chronischen Ischämie weiter, die durch Kombination einer diabetischen Mikroangiopathie und einer obliterierenden Arteriosklerose von peripheren Adern verursacht wurde, so daß die ungenügende Durchblutung der umliegenden Gewebe den limitierenden Faktor für die Wundheilung darstellte. Nach Aussetzen des Präparats kam es nach 4 Wochen zur Progression des Defekts im Sinne einer abscedierenden diabetischen Phlegmone.

Weitere Beispiele zur Anwendung dieses Präparats

2) Patient, 72 Jahre alt. Wunde von 3 cm Durchmesser nach Amputation der 4.Zehe des rechten Beines wegen diabetischer Gangrän mit nassen Untergrundnekrosen, mit eitriger Sekretion: Nach zweiwöchiger Anwendung des Präparats kommt es zu vorwiegend reinen Granulationen mit vereinzelten adhärierenden Nekrosen im medialen Wundrand ohne eitrige Sekretion.

3) Patient, 60 Jahre. Nach Amputation des rechten Unterschenkels wegen diabetischer Gangrän Ausbildung einer abscedierenden Phlegmone mit einer Wunde von 5 cm Durchmesser mit Nekrosen am Untergrund im lateralen Teil des Amputationsstumpfes und mit im ganzen Wundbereich medial belegten Granulationen von 10 cm Länge und 1 cm Breite, mit eitriger Sekretion: Nach vierwöchi-

ger Anwendung des Präparats wurde eine nahezu vollständige Heilung mit Ausnahme eines Defekts von 2 cm Durchmesser und 1 cm Tiefe im lateralen Stumpfteil, mit reinen Granulationen und fortschreitender Epithelisierung der Ränder erzielt.

4) Patient, 66 Jahre. Wunde nach Amputation des 1. - 3. Fingers einschließlich Köpfchen der zugehörigen Metatarsi wegen diabetischer Gangrän , Größe 4 bis 5 cm, teils mit belegten Granulationen, teils mit adhärierenden Nekrosen, Tiefe im lateralen Teil des Defekts bis zu 1 cm. Nach vierwöchiger Anwendung des Präparats wurden reine Granulationen im ganzen Bereich der Wunde mit fortschreitender Epithelisierung der Ränder unter Verkleinerung auf eine mittlere Größe von 3 cm erzielt. Bei dem gleichen Patienten war es wegen Gangrän der distalen Hälfte des 4. Fingers nötig, eine Amputation einschließlich des Köpfchens des 4. Metatarsus durchzuführen; hierdurch kam es zu einer Wunde von 3 cm Durchmesser, mit belegtem Untergrund. Nach einwöchiger Anwendung des Präparats granulierte die Wunde rein, ohne Sekretion, mit beruhigter Umgebung.

5) Patient, 77 Jahre. Wunde nach Amputation der 2., 3. und 4. Zehe wegen diabetischer Gangrän , Größe 4 bis 5 cm, Tiefe bis 3 cm, mit häufiger eitriger Sekretion und ausgedehnten adhärierenden Nekrosen im gesamten Wundbereich: Nach vierwöchiger Anwendung des Präparats kam es bei 1/5 der Wunde zur Bildung von reinen Granulationen; im übrigen Teil wurde der nekrotische Prozeß infolge schlechter Durchblutung der Beinperipherie bei diabetischer

Mikroangiopathie und obliterierender Arteriosklerose nicht begrenzt, wobei jedoch die eitrige Sekretion in der Wunde reduziert wurde. Nach Aussetzen des Präparats kam es zu einem progressiven Befund.

6) Patient, 56 Jahre. Wunde nach Incision einer abscedierenden Phlegmone des Zwischengliedgelenks der großen Zehe, die intraartikulär eingriff, von 2,5 cm Durchmesser, mit Nekrosen und eitriger Sekretion: Nach einwöchiger Anwendung des Präparats kam es zum Rückgang der Sekretion und zur Reinigung der Wunde unter Ausbildung reiner Granulationen. Die Umgebung der Wunde war beruhigt.

7) Patientin,78 Jahre. Zwei Wunden im Amputationsstumpf nach Amputation wegen diabetischer Gangrän mit sukzessiver abscedierender Stumpfphlegmone.

Defekt nach Amputation der 1. und 2. Zehe einschließlich der Köpfchen der zugehörigen Metatarsi wegen diabetischer Gangrän , Größe 5x3 cm, mit belegtem Untergrund, adhärierenden Nekrosen und eitriger Sekretion im distalen Wundpol. Nach vierwöchiger Anwendung des Präparats wurden reine Granulationen im gesamten Wundbereich, eine Unterdrückung der eitrigen Sekretion sowie eine Verkleinerung des Defekts auf 3 χ 2 cm infolge fortschreitender Epithelisierung erzielt.

8) Patientin, 77 Jahre. Zwei Wunden im Amputationsstumpf des Unterschenkels nach Amputation wegen diabetischer Gangrän mit sukzessiver abscedierender Stumpfphlegmone, die zu einer Wundauflösung im gesamten Bereich führte. Größe der Defekte

10 χ 2 bis 4 cm, mit eitriger Sekretion, belegten Granulationen und ausgedehnten, fest am Untergrund adhärierenden Nekrosen. Nach vierwöchiger Anwendung des Präparats kam es zur Reinigung der Granulationen und Freiwerden von Nekrosen, einem Rückgang der Sekretion und zu fortschreitender Epithelisierung der Wundränder, so daß die Defekte medial auf einen Durchmesser von 3 cm und lateral auf einen Durchmesser von 1,5 cm verkleinert wurden.

Claims

1. Proteolytischer Wundverband,
dadurch gekennzeichnet,

daß er aus sphärischen Teilchen mit einem Durchmesser von 0,05 bis 0,5 mm, auf der Basis von Cellulosederivaten mit daran immobilisierten Proteasen besteht.

2. Proteolytischer Wundverband nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch Chymotrypsin, Trypsin, Papain und/oder Subtilisin als immobilisierte Proteasen.

3. Proteolytischer Wundverband nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet durch sphärische Teilchen von 0,1 bis 0,3 mm Durchmesser.

4. Verfahren zur Herstellung des proteolytischen Wundverbands nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß

regenerierte, in Wasser gequollene, nie getrocknete Perlcellulose mit einer Teilchengröße von 0,07 bis 0,7 mm durch Waschen und/oder durch Wasserdampfdestillation von toxischen Verunreinigungen vollkommen befreit, für die Bindung von Enzymen aktiviert, durch Immobilisierung von Proteasen

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modifiziert, abwechselnd mit Puffer von pH 8,5 bis 9,5 und mit Puffer von pH -4 bis 5 bis zum Ausbleiben proteolytischer Aktivität in der Waschflüssigkeit gewaschen, danach mit Puffer von pH 7,5 bis 8,5 gewaschen und in diesem Milieu auf einen Wassergehalt im Trockenrest von 0,1 bis 15 % getrocknet wird.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß als Proteasen Chymotrypsin, Trypsin, Papain und/oder Subtilisin eingesetzt werden.

6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß Perlcellulose einer Teilchengröße von 0,14 bis 0,4 mm eingesetzt wird.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Aktivierung der Cellulose durch Oxidation mit Perjodat vorgenommen wird.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Immobilisierung der Proteasen durch Umsetzung entsprechender Proteasen mit unter Ausbildung von Dialdehydstrukturen aktivierter Cellulose zu entsprechenden Schiff'sehen Basen und anschließende Reduktion der unvernetzten Aldehydgruppen mit Natriumborhydrid vorgenommen wird.

9. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die abschließende Trocknung durch Lyophilisierung vorgenommen wird.