DE2942818A1

DE2942818A1 - Neue antitumoranthracycline mit einem gehalt an verzweigtkettigen aminodeoxyzuckern und verfahren zu deren herstellung

Info

Publication number: DE2942818A1
Application number: DE19792942818
Authority: DE
Inventors: Federico Arcamone; Alberto Bargiotti; Giuseppe Cassinelli; Marco Aurelio Di
Original assignee: Farmitalia Carlo Erba SRL
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1978-10-25
Filing date: 1979-10-23
Publication date: 1980-05-08
Also published as: IT7926628A0; FR2439792A1; US4265885A; IT1212373B; FR2439792B1; JPS5557599A; JPS6259717B2; CH642973A5; DE2942818C2

Description

PATENTANWÄLTE

Dipl-lng. P. WIRTH · Dr. V. SC H M I E D-KOWAR Zl K Dipl-ing. G. DANNENBERG · Dr. P. WE IN HOLD · Dr. D. GUDEL

335024 J-Jj_nI .I_n- ο Q-h..K ' » SIEGFRIEDSTRASSE 8

Telefon (089) «-"Η¹· 'ng. ο. ocnubert

335025 8000 MÖNCHEN 40

Case: G 408 SK/Sh

FARMITALIA CARLO ERBA S.p.A. Via Carlo Imbonati, 2k
Mailand / Italien

Neue Antitumoranthracycline mit einem Gehalt an verzweißtkettigen Aminodeoxyzuckern und Verfahren

zu deren Herstellung.

0 3 0 0 19/0768

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Antitumorglycoside des Anthracyclintyps, insbesondere auf bestimmte 4'-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycin (und Adriamycin)-Derivate, ihre Herstellung, Zwischenprodukte hievon und deren Verwendung in der Antitumortherapie.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen, die Derivate von Daunomycin und Adriamycin, welche beide bekannte Antitumorantibiotika darstellen, werden aus dem Aglycon von Daunomycin, d.h. Daunomycinon, einer bekannten Verbindung,hergestellt.

Die vorliegende Anmeldung nimmt bezug auf den Inhalt der GB-Anmeldung 53.454 vom 22. Dezember 1976, der BE-PS 841 266, der US-PS 3 803 124 und der US-PS 4 039 663, auf welche auch im folgenden verwiesen wird.

Die Erfindung bezieht sich somit gemäß einem Aspekt auf eine neue Klasse von Antitumorantibiotika der allgemeinen Formel (IA):

(IA) ,

OCH₃ O

worin R Wasserstoff oder Hydroxy darstellt und X

oder

bedeutet.

0300 1 9/0768

29Λ28Ί 8

S-

Selbstverständlich sind diese Verbindungen, wenn R Wasserstoff ist, Daunomycinderivate und, wenn R Hydroxy darstellt, Adriamycinderivate. Diese neuen Antitumorverbindungen sind:

4'-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycin, 4'-C-Methyl-4'-O-methyladriamycin, 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldaunomycin und 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyladriamycin.

Das Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen bildet ebenfalls einen Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Gemäß dem Verfahren der Erfindung wird ein tetracyclisches Aglycon mit einem Hydroxy-Anthrachinonchromophoren-System der Formel (D

-CH.

glycosidisch an eine 3-Amino-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-4-O-methyl-L-he.xopyranose gebunden.

Bei Durchführung des Verfahrens wird das Aglycon der Formel (I), nämlich Daunomycinon, mit einem geschützten (N-Trifluoracetyl) 1-Halogenderivat eines verzweigtkettigen Aminodeoxyzuckers aus der Gruppe 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoracetamido-4-C-methyl-4-0-methyl-L-lyxo-hexopyranosylchlorid (H-E) und 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoracetamido-4-C-methyl-4-0-methyl-L-arabino-hexopyranosylchlorid (III-E)

»Cl

H₃C-

H₃CO

CH

(H-E)

(HI-E)

0300 1 9/0768

-JT-

kondensiert, wobei die geschützten α-Glycoside der Formeln (IV) bzw. (VI):

C-CH.

Il

IV: V:

= H

VI: R₁ = -C-CF VII: R=H

erhalten werden, aus welchen nach Entfernen der N-Trifluoracetylschutzgruppe die Endprodukte (V) und (VII) erhalten werden.

Die Kondensationsreaktion zwischen dem Aglycon (I) und dem geschützten Halogenzucker (II-E oder III-E) unter Bildung der ot-Glycosidbindung erfolgt in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie Chloroform oder Methylendichlorid, in Anwesenheit eines löslichen Silbersalzkatalysators, wie Silbertrifluormethansulfonat (AgSO,CF-J und eines Molekularsiebes als Dehydratisierungsmittel gemäß dem in der BE-PS 841 266 beschriebenen Verfahren.

Die geschützten Halogenzucker (II-E) und (III-E) sind ebenfalls neue Verbindungen und fallen somit unter den Rahmen der vorliegenden Erfindung.

Das Ausgangsmaterial für die Herstellung der Halogenzucker (II-E) und (III-E) ist Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracet-

03001 9/0768

amido-a-L-threo-hexopyranosid-4-ulose (X), das in der US-PS 4 039 663 beschrieben ist:

OCH.

(H-A)

(UI-A)

Der Zusatz von Methylmagnesiumjodid zur Carbonylausgangsverbindung (X) ist in Abhängigkeit von der Reaktionstemperatur und dem Lösungsmittel hoch stereospezifisch. So ergibt die Behandlung einer ätherischen Lösung von Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamido-a-L-threo-hexopyranosid-4-ulose (X) mit Methylmagnesiumjodid bei -78°C Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-ct-L-lyxo-hexopyranosid (H-A) , während der Zusatz von Methylmagnesiumjodid in Tetrahydrofuran am Rückfluß Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-arabino-hexopyranosid (HI-A) ergibt.

Die Behandlung der neuen Zwischenprodukte (H-A und IH-A) mit Diazomethanbortrif luorätherat in Methylendichlorid, wie von J.O.Deferrari et al. (Methods in Carbohydrate Chemistry, Bd. VI, Seite 365, 1972, Academic Press, New York und London) und der Anmelderin in der GB-Patentanmeldung 53.454/76 (vom 22. Dezember 1976) beschrieben, jedoch bei einer niedrigeren Temperatur (-70⁰C)₁ ergibt die entsprechenden, bisher nicht bekannten 4-0-Methylderivate (H-B und IH-B) in guter Ausbeute.

030019/0768

-jg-

OCH.

?■

OCH,

H₃C

H-CO-CF.

H,CO 3 (H-B)

CH.

NH-CO-CF.

(HI-B)

Die Säurehydrolyse der Verbindungen (H-B) bzw. (HI-B) ergibt die entsprechenden Verbindungen (H-C) und (HI-C), die in Stellung 1 eine freie Hydroxylgruppe aufweisen.

H, OH

(H-C)

(HI-C)

Die Verbindungen (H-C) bzw. (HI-C) werden mit p-Nitrobenzoylchlorid in Pyridin umgesetzt, wobei die entsprechenden 1-0-p-Nitrobenzoylderivate (H-D) und (HI-D) erhalten werden :

H ,0R,

H, OR,

(IH-D) ,

worin R

NO₅ bedeutet.

Schließlich werden die Verbindungen (H-D) und (HI-D) einer Behandlung mit trockenem Chlorwasserstoff in wasserfreiem Methylendichlorid unterworfen, wobei die entsprechenden 1-Chlorderivate (II-C und IH-E) erhalten werden.

030019/0768

Um die Verbindungen der Formel (IA) herzustellen, d.h. jene, worin R Wasserstoff oder HydiOxy bedeutet und X

T ^NH?

oder

H₃CO

darstellt, wird die oberwähnte Kondensationsreaktion durch Verwendung von Daunomycinon (I) als Aglycon und 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-3-trifluoracetamido-L-lyxohexopyranosylchlorid (II-E) oder 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-O-methyl-3-trifluoracetamido-L-arabino-hexopyranosylchlorid (III-E) als geschütztes Halogenzuckerreagens bewirkt. Die Kopplungsreaktion ergibt die geschützten a-Glycoside (IV) und (VI), aus welchen durch milde alkalische Behandlung zur Entfernung der N-Trifluoracetylgruppe 4'-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycin (V) bzw. 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldaunomycin (VII) erhalten und als kristalline Hydrochloride isoliert werden.

Die darauffolgende Behandlung der Verbindungen (V) und

(VII) gemäß dem in der US-PS 3 803 124 (9. April 1974) beschriebenen Verfahren führt zu 4'-C-Methyl-4'-O-methyladriamycin (VIII) bzw. 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyladriamycin (IX).

0300 19/0768

-Ji-

AO-

O OH

OCH 2 ^R

+ IH-E

COCH₂R

CH

IV: R = H, R₁ = COCF

V: R = R₁ = H VIII: R = OH, R=H

VI : R = H, R₁ = COCF

VII : R=R=H

IX : R = OH, R₁ = H

030 0 19/0768

•Λ -

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung näher erläutern, ohne daß diese jedoch hierauf beschränkt sein soll (alle Teile beziehen sich, wenn nichts anderes angegeben ist, auf das Gewicht).

Beispiel 1:

Herstellung des Zwischenproduktes 2 ,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-

4-O-methyl-3-trifluoracetamido-L-lyxo-hexopyranosy!chlorid

Zu 100 ml einer ätherischen Lösung von Methylmagnesiumjodid (2,06g Mg + 7 ml CH₃J), auf -78⁰C gekühlt, wurden 20 ml einer ätherischen Lösung von 1,170 g (4,6 mMol) Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamido-a-L-threo-hexopyranosid-4-ulose (X) unter Rühren zugesetzt.

Nach 3 h bei -78⁰C wurde Wasser zugegeben, die ätherische Schicht abgetrennt und die wässerige Schicht mit Äthyläther extrahiert. Die vereinigten ätherischen Extrakte wurden mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet.

Der durch Eindampfen erhaltene Rückstand wurde aus Äthyläther-Hexan kristallisiert, wobei 1,180 g (95 %) Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-lyxohexopyranosid (H-A) erhalten wurden, Fp. 133 bis 134 °C; [ot]_D = -128° (c = 1 in CHCl₃).

Das C-13-NMR-Spektrum (DMSO-dg) der Verbindung (H-A) zeigte das C-4-Methylgruppensignal bei 21,3 ppm (unterhalb von Me₄Si, als interner Bezug verwendet) ein charakteristischer Verschiebungswert für die äquitoriale Methylgruppe in verzweigtkettigem Zucker.

Eine Lösung von 1 g (3,7 mMol) Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-lyxo-hexopyranosid (H-A) in 10 ml trockenem Methylendichlorid wurde bei -70⁰C mit 0,05 ml Bortrifluoridätherat behandelt. Während die Temperatur bei -70⁰C gehalten wurde, wurde ein Überschuß an Diazomethan, gelöst in Methylenchlorid, zugesetzt, bis eine blaßgelbe Farbe bestehen blieb. Nach 60 min bei -70⁰C wurde ein weißer Feststoff (Polymethylen) abfiltriert und das Filtrat

030019/0768

- vif -

wurde nacheinander mit 10 liger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen, worauf es mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet wurde. Der Rückstand, der durch Eindampfen erhalten wurde, wurde auf einer Silikagelsäule chromatographiert. Die Eluierung mit einer Mischung von Chloroform und Aceton (95:5) ergab 0,68 g (65 %) reines Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-4-O-methyl-3-trif luoracetamido-ot-L-lyxo-hexopyranosid (II-B) als Sirup; [α] = -129° (c = 1,1 in CHCl₃), Massespektrum m/e 285 (M⁺). Das NMR-Spektrum (CDCl₃) zeigte Absorptionen bei 1,22 (s, CH₃~C-4), 1,28 (d, CH₃-C-S), 3,33 und 3,48 (zwei s, -OCH₃) und 4,77 δ (breites s, C-1-H).

Eine Lösung von 0,60 g (2,1 mMol) der Verbindung (II-B) in 12 ml Essigsäure wurde dann zu 48 ml Wasser zugesetzt und 2 h lang auf 100⁰C erhitzt. Die Lösung wurde eingedampft, wobei 2 g (97 %) 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-lyxo-hexopyranose (II-C) als Sirup erhalten wurden, [a]_D = -95° (c = 1,1 in CHCl₃). Das NMR-Spektrum (CDCl₃) zeigte Absorptionen bei 1,22 (s, CH₃-C^), 1,26 (d, CH₃-C-S), 3,46 (s, CH₃O) und 5,37 δ (breites s, C-1-H).

Eine Lösung von 0,50 g (1,85 mMol) der Verbindung (II-C) in 12 ml trockenem Pyridin wurde bei O⁰C mit 0,68 g p-Nitrobenzoylchlorid unter Rühren behandelt. Nach 10 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung in Eiswasser gegossen und der erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert und mit Wasser bis zur Neutralität gewaschen. Das ausgefällte 1-p-Nitrobenzoat (Mischung von α- und ß-Anomeren) wurde in Chloroform gelöst und über Magnesiumsulfat getrocknet. Der bei Eindampfen erhaltene Rückstand ergab 0,735 g (90 %) 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-1-O-p-nitrobenzoyl-3-trifluoracetamido-L-lyxo-hexopyranose (II-D), Fp. 180 bis 181°C, [a]_D = -42° |c = 1 in CHCl₃).

Eine Lösung von 0,70 g (1,66 mMol) der Verbindung (II-D) in 15 ml trockenem Methylenchlorid wurde bei O⁰C mit wasserfreiem Chlorwasserstoff gesättigt. Der erhaltene Niederschlag von p-Nitrobenzoesäure wurde unter wasserfreie Bedingungen abfiltriert und das Filtrat wurde zu einem Rückstand eingedampft,

030019/0768

der das 2, 3 ,o-Trideoxy^-C-methyl-'l-O-methyl-S-trif luoracetamido-L-lyxo-hexopyranosylchlorid (II-E, 0,45 g) war. Dieses Material war ohne weitere Reinigung zur Verwendung bei der Kopplungsreaktion geeignet.

Beispiel 2:

Herstellung des Zwischenproduktes 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-

4-Q-methyl-3-trifluoracetamido-L-arabino-hexopyranosylchlorid (HI-E)

Eine am Rückfluß gehaltene Lösung von Methylmagnesiurnjodid (3,1 g Mg + 10,5 ml CH.,J) in 150 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde zu 1,76 g (6,9 mMol) Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamido-a-L-threo-Hexopyranosid-4-ulose (X) in 35 ml trockenem Tetrahydrofuran zugesetzt.

Nachdem die Reaktionsmischung 3 h am Rückfluß gehalten worden war, wurde sie mit Chloroform und Wasser verdünnt, die Phasen wurden getrennt und die wässerige Schicht dann mit Chloroform extrahiert.

Die vereinigten Chloroformextrakte wurden mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet.

Der bei Eindampfen erhaltene Rückstand (1,85 g) wurde auf einer Silikagelsäule chromatographiert.

Die Eluierung mit einer Mischung von Chloroform und Aceton (97:3) ergab zwei Verbindungen. Die in geringerem Ausmaß vorhandene Verbindung wurde als Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-lyxo-hexopyranosid (II-A, 0,280 g, 15 %) identifiziert, während die in größerer Menge vorhandene Verbindung aus Isopropyläther kristallisiert und als Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trifluoracetamido-a-L-arabino-hexopyranosid (HI-A, 1,40 g, 75 %) identifiziert wurde, Fp. 140 bis 141⁰C, [a]^³=-155° (c = 1,1 in CHCl₃), Massespektrum m/e 271 (M ). Das C-13-NMR-Spektrum (DMSO-d,) der Verbindung (HI-A) zeigte das C-4-Methylgruppensignal bei 13,6 ppm (unterhalb von Me.Si, als interner Bezug verwendet) ein charakteristischer chemischer Verschiebungswert für die axiale Methylgruppe im verzweigtkettigen Zucker.

030019/076 8

Die Behandlung von 1,30 g (4,8 mMol) Methyl-2,3,6-trideoxy-4-C-methyl-3-trif luoracetamido-ot-L-arabino-hexopyranosid (III-A) in 10 ml Methylendichlorid mit Diazomethan/Bortrifluorid, wie in Beispiel 1 beschrieben, ergab 1,03 g (75 %) des entsprechenden 4-O-Methylderivats·(III-B) als Sirup: [a]^³ = -118° (c = 1 in CHCl₃), Massespektrum m/e 285 M⁺; NMR-Spektrum (CDCl₃): 1,12 (s, CH₃-C-4), 1,17 (d, CH₃-C-S), 3,22 und 3,33 (zwei s, OCH₃) und 4,66 δ (m, C-1-H).

Die Säurehydrolyse von 1 g (3,5 mMol) der Verbindung (III-B), wie in Beispiel 1 beschrieben, ergab 0,94 g (95 %) 2 , 3 ,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-3-trifluoracetamido-L-

23° arabino-hexopyranose (III-C) als Sirup, [a]_D = -70° (c = 1 in CHCl₃); NMR-Spektrum (CDCl₃): 1,12 (s, CH₃-C-4), 1,16 (d, CH₃-C-5), 3,24 (s, OCH₃) und 5,28 δ (breites s, C-1-H).

Die Behandlung von 0,9 0 g (3,3 mMol) der Verbindung (III-C) mit p-Nitrobenzoylchlorid in Pyridin, wie in Beispiel 1 beschrieben, ergab 1,26 g (90 %) des entsprechenden 1-O-p-Nitrobenzoylderivats (HI-D), Fp. 175 bis 176°C, U]^³ = -40° (c= 1,1 in CHCl₃).

Eine Lösung von 1 g (2,4 mMol) der Verbindung (HI-D) in trockenem Methylendichlorid wurde bei 0⁰C mit wasserfreiem Chlorwasserstoff gesättigt. Nach Abfiltrieren der ausgefällten p-Nitrobenzoesäure wurde die Lösung zur Trockene eingedampft, wobei 0,65 g 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-trifluoracetamido-L-arabino-hexopyranosylchlorid (HI-E) erhalten wurden.

Beispiel 3:

4'-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycin (IMI 96)

Eine Lösung von 0,816 g (2,05 mMol) Daunomycinon in 80 ml trockenem Methylendichlorid wurde zu 0,4 5 g 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-3-trifluoracetamido-L-lyxohexopyranosylchlorid (H-E) in 10 ml Methylendichlorid und

5 g Molekularsieb (4 A Merck) zugesetzt und dann mit 0,40 g AgSO₃CF₃ in 10 ml wasserfreiem Ä'thyläther unter starkem Rühren behandelt. Nach 1 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit einer gesättigten wässerigen NaHCO^-Lösung

0300 19/0768

- Y* -• Λ5·

neutralisiert und die organische Phase abgetrennt und unter Vakuum eingedampft. Chromatographische Reinigung des rohen Rückstandes an einer Kieselerdesäule unter Verwendung einer Mischung von Chloroform und Aceton (95:5) als Kluicrungsmittel ergab 0,72 g 4'-C-Methyl-4'-O-methyl-N-trifluoracetyldaunomycin (IV), Fp. 91 bis 93⁰C, fa]^³° = +222° (c = 0,05 in CHCl₃). Das NMR-Spektrum (CDCl₃) zeigte Absorption bei 1,19 (s, CH₃-C-^'), 1,32 Id₁ CH₃-C-5'), 2,39 (s, CH₃-CO), 3,45 (s, C-4'-O-CH₃), 4,04 (s, C-4-O-CH₃), 5,25 (breites s, C-7-H), 5,47 (breites s, C-1'-H), 13,17 und 13,86 6 (zwei s, phenolisches OH).

Eine Lösung von 0,6 g der Verbindung (IV) in 10 ml Aceton wurde mit 45 ml 0,2n wässerigem Natriumhydroxyd behandelt und unter Stickstoff bei Raumtemperatur gerührt. Nach 2 h wurde die Reaktionsmischung mit 1n wässerigem Chlorwasserstoff auf pH 3,5 eingestellt und dann mit Chloroform extrahiert, um Verunreinigungen zu entfernen. Die wässerige Phase, auf pH 8,2 eingestellt, wurde zweimal mit Chloroform (50 und 30 ml-Portionen) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über Na-SO. getrocknet, auf ein kleines Volumen eingeengt und mit 0,5n methanolischem Chlorwasserstoff auf pH 4,5 angesäuert. Durch Zusetzen von überschüssigem Diäthyläther wurden 0,38 g (68 %) 4'-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycin (V) als Hydrochlorid erhalten, Fp. 178 bis 180⁰C (Zers.), [a]_D = +285° (c = 0,05 in CH₃OH).

Beispiel 4:

4'-C-Methyl-4'-O-methyladriamycin (VIII) (IMI 97)

Eine Lösung von 0,3 g (0,5 mMol) 4 '-C-Methyl-4'-O-methyldaunomycinhydrochlorid in einer Mischung von 4 ml wasserfreiem Methanol, 11,5 ml Dioxan und 0,30 ml Athylorthoformiat wurde mit 1,2 ml einer Lösung von 0,93 g Brom in 10 ml Chloroform behandelt. Nach 2 h bei 10⁰C wurde die Reaktionsmischung in eine Mischung von 60 ml Äthyläther und 30 ml Petroläther gegossen. Der erhaltene rote Niederschlag wurde nach Filtrieren und mehrmaligem Waschen mit Äthyläther zur vollständigen Entfernung von Azidität in einer Mischung von 10 ml Aceton und 10 ml 0,25n

030019/0768

• 4b'

wässerigem Bromwasserstoff gelöst. Nach 20 h bei 30⁰C wurde die Reaktionsmischung mit 0,4 5 g Natriumformiat in 5 ml Wasser behandelt und 48 h bei 30⁰C gerührt. Die erhaltene Mischung wurde mit Chloform extrahiert, um lipophile Verunreinigungen zu entfernen. Die wässerige Phase wurde nach Einstellen des pH-Wertes mit wässeriger NaHCO., auf 7,6 wiederholt mit Chloroform extrahiert, bis die Extrakte farblos waren. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden mit Na^SO. getrocknet und unter Vakuum auf ein kleines Volumen (etwa 15 ml) eingedampft. Die erhaltene rote Lösung, mit wasserfreiem methanolischen Chlorwasserstoff auf pH 3,5 eingestellt, wurde mit einem Überschuß an Äthyläther versetzt, wobei 0,21 g 4'-C-Methyl-4'-O-methyl-adriamycin (VIII) als Hydrochlorid erhalten wurden, Fp. 185 bis 186⁰C (Zers.), [a]^³° = +291° (c = 0,05 in CH₃OH).

Beispiel 5:

4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methy!daunomycin (VII) (IMI 98)

Die Synthese der Verbindung (VII), ausgehend von Daunomycinon (I) und 2,3,6-Trideoxy-4-C-methyl-4-0-methyl-3-trifluoracetamido-L-arabino-hexopyranosylchlorid (III-E) erfolgte gemäß dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren.

4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldaunomycin (VII) wurde als Hydrochlorid in Form von roten Kristallen erhalten, Fp. 187 bis 188⁰C (Zers.), [α]^³° = +251° (c = 0,05 in CH₃OH).

Beispiel 6:

4 ' -Epi-4'-C-methyl-4'-0-methy!adriamycin (IX) (IMI 101)

Das 14-Bromderivat der Verbindung (VII) wurde hergestellt und allmählich in Stellung 14 gemäß dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren hydroxyliert. Durch dieses Verfahren wurde 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyl-adriamycin (IX) als Hydrochlorid in Form roter Kristalle erhalten, Fp. 190 bis 191°C (Zers.), [a]^³° = +272° (c = 0,025 in CH₃OH).

Biologische Wirksamkeit

Die erfindungsgemäßen neuen Anthracyclinglycoside zeigen Antitumorwirksamkeit. Die Verbindungen wurden gegen

0300 19/0768

HeLa-Zellen "in vitro" (Zeit, während der sie den Heilmitteln ausgesetzt waren: 24 h) und gegen P 388-l,eukämie in Mäusen im Vergleich mit Daunorubicin und Doxorubicin untersucht. Die Ergebnisse der "in vitro"-Versuche, die in Tabelle I gezeigt sind, sind als IDc₀ (Hemmungsdosis 50 % in ng/ml) angegeben.

Es kann festgestellt werden, daß alle Verbindungen die Zellenentwicklungsfähigkeit in vitro hemmten.

Die Antitumorwirksamkeit wurde "in vivo" an P 388-Leukämie im Vergleich mit Daunorubicin und Doxorubicin untersucht.

Die in Tabelle II angeführten Daten zeigen, daß alle neuen Anthracyclinglycoside Antitumorwirksamkeit in nichttoxischen Dosen zeigten.

Tabelle I

Wirksamkeit auf HeLa-Zellenentwicklungsfähigkeit in vitro

Verbindung	ID₅₀ ng/ml
Daunorubicin 4'-C-Methyl-4'-O-methyl-daunorubicin (V) 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyl-daunorubicin (VII) Doxorubicin 4'-C-Methyl-4'-O-methyldoxorubicin ( VIII) 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldoxorubicin (IX)	10 34 2,5 - 3,4 10 5 27

030019/076 8

'Ai'

Tabelle

II

Wirksamkeit gegen P 388-Leukämie

Verbindung	Dosis^a) mg/kg	T/C^b)	Anzahl der toxi schen Todesfälle/ gesamt
Daunorubicin	2,9 4,4 6,6	163 161 156	0/48 3/48 28/48
4' -C-Methyl-4' -O-methyldauno- rubin (V)	6,6 22,5 33,7 50,5	140 155 160 137	0/18 0/20 0/26 1/5
4' -Epi-4' -C-methyl-4' -O-methyl- daunorubicin (VII)	6,6 10,0 22,5	140 147 150	0/8 0/8 0/8
Doxorubicin	4,4 6,6 10,0	190 201 241	0/28 0/28 5/28
4'-C-Methyl-4'-O-methyldoxo- rubicin (VIII)	4,4 6,6 10,0	165 172 202	0/10 0/10 2/17
4' -Epi-4' -C-methyl-4' -Omethyl- doxorubicin (IX)	4,4 6,6 10,0	165 185 205	0/8 0/8 0/8

a) Mäuse wurden am 1. Tag nach der Tumorzelleninokulation i.p. behandelt.

b) Mittlere Uberlebenszeit von behandelten Mäusen gegenüber der mittleren Uberlebenszeit der Kontrollen χ 100.

0300 1 9/0768

Claims

Patentansprüche :

Eine Verbindung der allgemeinen Formel ([)

(i:

worin R Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet, eine der Gruppen

R₁ und

Methyl und die andere Methoxy darstellt. 2 . 4'-C-Methy1-4'-O-methyldaunorubicinhydrochlorid.

3. 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldaunorubicinhydrochlorid.

4. 4'-C-Methyl-4'-O-methyldoxorubicinhydrochlorid.

5. 4'-Epi-4'-C-methyl-4'-O-methyldoxorubicinhydrochlorid.

6. Pharmazeutische Zusammensetzung, die ein Anthracyclinglycosid der allgemeinen Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 5 in Kombination mit einem therapeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger enthält.

0300 1 9/0769

ORIGINAL INSPECTED

a-

7. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein tetracyclisches Aglycon mit einem Hydroxy-Anthrachinonchromophoren-System der Formel (I)

OCH 0

(D

glycosidisch an eine 3-Amino-2,3,o-trideoxy-A-C-methyl-A-O-methy1-L-hexopyranose gebunden wird.

0 3 0019/0768