DE2911377B2

DE2911377B2 - S-Hydroxy^-hydroxymethyl-phenylglycin (Forphenicinol), dessen Hydrate und Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel

Info

Publication number: DE2911377B2
Application number: DE2911377A
Authority: DE
Inventors: Takaaki Fujisawa Kanagawa Aoyagi; Masaaki Ishizuka; Ikuo Matsumoto; Hajime Morishima; Tomio Takeuchi; Hamao Umezawa; Takuzo Yamamoto
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1977-09-12
Filing date: 1979-03-23
Publication date: 1981-02-05
Also published as: DE2911377C3; GB2043625A; CA1124261A; FR2451911A1; JPS5761265B2; US4238507A; IT1165945B; GB2043625B; JPS5444632A; DE2911377A1; IT7909378A0; FR2451911B1

Description

H₃COOC

(VJ.')

CH₃ CH₃

H₃COOC

CH₂

umsetzt,
(3) die gemäß (2) erhaltene Verbindung mit

Natriumdihydro-bis(2-methoxyäthoxy)-aluminat zu 3,4-O-Isopropyliden-3-hydroxy-4-hydroxymethyl-benzylalkohol der Formel IV"

HOH₂C

(IV")

50

CH₂

reduziert,

(4) die gemäß (3) erhaltene Verbindung mit Chromtrioxid zu 3,4-0-Isopropyliden-3-

hydroxy-4-hydroxymethyl-benzaldehyd der Formel HI"

CH₃ CH₃

OHC

CH₂

(IH")

oxydiert,

(5) die gemäß (4) erhaltene Verbindung mit Natriumcyanid und Ammoniumchlorid

60

65 nach der Strecker-Methode zu 3,4-O-Isopropyliden-S-hydroxy^hydroxymethylphenylglycin-nitril der Formel II"

CH₃ CH₃

10

dessen Hydrate und pharmazeutisch annehmbare Salze von Forphenicinol und dessen Hydraten.

2. Verfahren zur Herstellung von 3-Hydroxy-4-hydroxymethyl-phenylglycin (Forphenicinol) gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man jeweils in an sich bekannter Weise entweder

(A) (1) Dimethyl-hydroxyterephthalat in Methanol mit Natriumborhydrid zu Methyl-3-hydroxy-4-hydroxymethyl-benzoat der Formel VP

OH NH₂

umsetzt und

(6) die gemäß (5) erhaltene Verbindung mit wäßrigem Bariumhydroxid hydrolysiert und danach die Isopropylidengruppe mit wäßriger Schwefelsäure abspaltet, oder (B) 3-Hydroxy-4-formyl-phenylglycin (Forphenicin) der Formel VIII

HOOC

NH,

CHO

(VHI)

25

reduziert,

(2) die gemäß (1) erhaltene Verbindung mit 2,2-Dimethoxvpropan in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure zu Methyl-3,4-O-isopropyliden-S-hydroxy^-hydroxymethylbenzoat der Formel V"

mit Natriumborhydrid zu Forphenicinol reduziert

3. Arzneimittel mit immunopotenzierender Wirkung, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung gemäß Anspruch 1 und üblichen Träger- und Hilfsstoffen.

Die Erfindung betrifft S-Hydroxy^-hydroxymethylphenylglycin (Forphenicino!) der Formel I

OH

40 HOOC-CH

NH₂

CH₂OH

dessen Hydrate und pharmuzeutisch annehmbare Salze von Forphenicinol und dessen Hydraten. Forphenicinol zeichnet sich durch eine immunopotenzierende Wirkung aus und kann infolgedessen als Immunopotentiator zur Erhöhung der immunologischen Reaktion bei Tieren und Menschen eingesetzt werden.

Forphenicinol ist eine neue Verbindung, die von der Anmelderin im Rahmen ihrer Untersuchungen an Forphenicin hergestellt werden konnte. Forphenicin ist eine bekannte Substanz, die zunächst aus der Kulturbrühe eines Stammes von Actinomyces von H. Umezawa et al. isoliert worden ist. Diese Substanz ist ein starker Inhibitor der alkalischen Phosphatase (japanische Patentanmeldungs-Vorveröffentlichung »Kokai« Nr. 116 685/75, Journal of Antibiotics Bd. 31, Seiten 244 bis 246 und Bd. 31, Seiten 483-484 [1978]).

Es konnte festgestellt werden, daß Forphenicino' gemäß vorliegender Erfindung beständiger ist als Forphenicin und bei oraler Verabreichung auch eine höhere Wirkung aufweist als letzteres.

Die Aufgabe der Erfindung bestand darin, eine neue Verbindung bereitzustellen, die eine immunopotenzierende Wirkungvaufweist.

Diese Aufgabe wird durch die im Anspruch 1 angegebene Verbindung gelöst.

Forphsnicinol der Formel 1 liegt in Form farbloser Kristalle vor, die sich allmählich oberhalb 200" C unter Braunfärbung zersetzen.

rorphenicinol besitzt eine amphotere Natur, so daß es mit einer großen Zahl verschiedener Säuren und Basen Salze bilden kann. Die pharmazeutisch akzeptablen Salze von Forphenicinol gemäß vorliegender Erfindung umfassen sowohl Salze mit anorganischen Säuren wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure mit organischen Säuren wie Maleinsäure, Fumarsäure, Weinsteinsäure, Benzolsulfonsäure und Tolcolsulfonsäure, mit Alkalimetallen wie Natrium und Kalium, mit Erdalkalimetallen wie Kalzium und Magnesium sowie auch mit organischen Aminen wie Trialkylamin, Dicydohexylamin.

Forphenicinol kann in an sich bekannter Weise auf verschiedenen Wegen hergestellt werden. Einige Beispiele dieser Herstellungsverfahren sind schematisch in der folgenden Formeltabelie zusammengestellt, wobei Ri eine Alkylgruppe darstellt und die Gruppe

eine zweiwertige Hydroxyl-Schutzgruppe bedeutet, in welcher R2 und R3 Wasserstoffatome oder Alkylgruppen sind.

Schema

OH OH

R₁OOC

Reduktion

CH₂OH

R₁OOC^f >—CH₂OH

(VD

Protektion

OHC

NC — CH--<f y-CHj NH₂ (ΙΓ)

Hydrolyse

R₂

OH

HOOC-CH

CH₂OH

NH₂

Forphenicinol (I)

Reduktion
OH _H00C-CH-V~V-CH₂

NH₂ (I')

HOOC — CH^f
NH₂

Forphenicin (VIII)

Die am meisten zu bevorzugenden Wege sind — wie sich herausgestellt hat — die im Anspruch 2 angegebenen beiden Alternativen, die in den Beispielen noch näher erläutert werden.

Um die immunopotenzierende Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindung (I) festzustellen, wurde der Einfluß der Verbindung (I) auf die Zellimmunität (zellenvermittelte Immunität) nach der bekannten verzögerten Hypersensitivitätstechnik (D.T.H.) geprüft (vergl. P. H. Lagrange, G. B. Mackaness und T. E. Mille, »J. Exp. Med.«, 139,1529—1539 [1974]), wobei als Versuchstiere Mäuse verwendet wurden, die mit roten Blutzellen von Schafen als Antigen immunisiert worden waren.

108 rote Blutzellen von Schafen (SRBC) wurden in 0,05 ml physiologischer Salzlösung suspendiert; die Suspension wurde zum Zeitpunkt der Immunisierung sub-

kutan in den rechten hinteren Fußballen jeder zum Test gehörenden dd/y-Maus (weiblich, 6 Wochen alt) injiziert, um so eine Hypersensitivität von: verzögerten Typ her voi zurufen. Gleichzeitig mit der Immunisierung wurden jeder Maus unterschiedliche Dosen der Verbindung (I) intraperitoneal injiziert oder oral verabreicht Vier Tage später wurden 10⁸ rote Blutzelbn von Schafen subkutan in den linken Hinterfußballen jeder Versuchsmaus injiziert, um die D.T.H.-Reaktion hervorzurufen. 24 Stunden nach der Injektion wurde die Dicke des linken Hinterfußballens gemessen, um den Grad der Schwellung des Ballens festzustellen. Das Ausmaß der Schwellung dient zur Bestimmung der erreichten Zellimmunität In der folgenden Tabelle ist das Ausmaß der Schwellung in Werten ausgedrückt, die nach folgender Gleichung berechnet wurden:

Dicke des Fußballens einer mil der erfindungsgemäßen Verbindung behandelten Maus Dicke des Fußballens einer unbehandelten Maus

■ 100.

Tabelle

Dosis der Verbindung	Ausmaß der	Schwellung
	i.p.-Injektion	orale Ver
		abreichung
100 μ§/Μ8υ5	131	166
10 μg/Maus	148	191
1 μg/Maus	159	133
0,1 ug/Maus	183	139

Die vorstehenden Ergebnisse zeigen, daß die erfindungsgemäße neue Verbindung eine intensive Verstärkung der Zellimmunität bewirkt, und zwar sowohl bei intraperitonealer Injektion als auch bei oraler Verabreichung, wobei die Verbindung in einem breiten Dosierungsbereich angewandt werden kann. Dies zeigt, daß sich die neue Verbindung in wirksamer Weise zur Immunotherapie und zur Behandlung von Immunkrankheiten verwenden läßt.

Die Verbindung (I) gemäß vorliegender Erfindung weist einen LD50- Wert von mehr als 5GO mg/kg auf, wenn sie intraperitoneal Mäusen injiziert wird.

Zur Immunotherapie, d.h. zur Verstärkung der Immunreaktion bei lebenden Tieren und Menschen verabreicht man daher die erfindungsgemäße Verbindung der Formel (I) oral oder parenteral als solche cder in Form eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes oder Hydrates derselben. Vorzugsweise verwendet man die Verbindungen in Form eines pharmazeutischen Präparates bzw. Arzneimittels, welches die aktive Substanz der Formel (I) oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Hydrat derselben oder ein Salz des Hydrates in Kombination mit einem pharmazeutisch akzeptablen Trägermaterial oder Streckmittel enthält.

Das Präparat kann im Hinblick auf die orale oder parenterale Verabreichung zusammengesetzt werden. Präparate in Form von injizierbaren Lösungen können 0,1 bis 10 Gew.-°/o Forphenicinol als aktiven Bestandteil enthalten und daneben ein oder mehrere Mittel zur Einstellung des pH-Wertes, Puffermittel, Stabilisatoren, Streckmittel, lokale Anästhetika und Zusätze, die die Lösung isotonisch machen. Die injizierbaren Lösungen können zur subkutanen, intramuskulären oder intravenösen Injektion mit Hilfe bekannter Techniken hergestellt werden. Gegebenenfalls können die Lösungen lyophilisiert werden, und zwartbenfalls in an sich bekannter Weise.

Feste Präparate für die orale Verabreichung können in Form von Tabletten, überzogenen Tabletten, Körnchen, Pulvern und Kapseln hergestellt werden; diese können Streckmittel für das aktive Material und, falls erforderlich, andere Zusätze enthalten; zu den letzteren können Mittel gehören, die das Zerfallen beschleunigen, sowie Gleitmittel, Farbstoffe. Süßstoffe und Geschmacksstoffe. Das Verhältnis von Forphenicinol zu Trägermaterial soll im allgemeinen bei einem Gewichts-

jo verhältnis von 1 :1 bis ! : 100 liegen und kann in diesem Bereich je nach der für die orale Verabreichung gewählten Form ausgewählt werden.

Flüssige Präparate für die orale Verabreichung können die Form von Sirupen oder Trockensirupen haben;

j5 sie können ebenfalls Süßstoffe, Puffermittel, Stabilisatoren, Geschmacksstoffe enthalten.

Suppositorien können neben Streckmitteln, falls erforderlich, oberflächenaktive Substanzen zusätzlich zu den aktiven Bestandteilen enthalten.

Die zu verabreichende Dosis der Verbindung (I) richtet sich nach der Art der Verabreichung und nach der Art der gewünschten Behandlung. Bei Menschen beträgt die Dosis im allgemeinen zwischen 0,02 und 200 mg der Verbindung (I), die in Einzeldosen aufgeteilt einmal oder mehrmals pro Tag verabreicht werden kann.

Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung.

Beispiel 1

(A) Herstellung von Methyl-3-hydroxy-4-hydroxymethyl-benzoat der Formel VI'

OH

H₃COOC

CH₂OH

(VI')

In einen Dreihals-Kolben mit einem Fassungsvermögen von 300 ml, der mit einem Kühler ausgestattet war, wurden 1577 mg Dimethylhydroxyterephthalat der Formel

OH

HCOOC

COOCH,

(VII)

zusammen mit 50 ml Methanol eeeeben. 5675 me

Natriumborhydrid wurden langsam unter Rühren zu dem Inhalt des Kolbens gegeben, wobei unter Aufschäumen Wärme frei wurde und der Rückfluß des Inhaltes begann. Nach Beendigung der Zugabe nach etwa 2 Stunden wurde das Reaktionsgemisch eine weitere Stunde zum Rückfluß erhitzt, um die Reduktion zu vervollständigen. Danach wurden 100 ml Wasser zu dem Reaktionsgemisch gegeben, welches dann mit 6 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und mit 50 ml Butanol versetzt wurde. Das Methanol wurde unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand wurde dreimal mit je 50 ml Butanol extrahiert. Die Butanolextrakte wurden vereinigt und mit 20 ml Wasser gewaschen. Nach Entfernung des Butanols durch Verdampfen unter vermindertem Druck lagen 1548 mg eines farblosen Pulvers vor. Das Pulver wurde in Benzol aufgenommen und die Lösung wurde über eine Kolonne geleitet, welche eine einem Volumen von 100 ml entsprechende Menge enthielt Silikagel (KIESELGEL 60^s Merck, Feinheit entsprechend einem Prüfsieb mit 70 bis 230 Maschen). Das Silikagel wurde als Suspension in Benzol eingefüllt. Die gewünschte Verbindung wurde an der Kolonne absorbiert. Diese wurde dann anschließend mit 500 ml einer Mischung aus Benzol und Äthylacetat (Volumenverhältnis 9:1) gewaschen und anschließend mit einer Mischung aus Benzol-Äthylacetat (Volumenverhältnis 4 :1) eluiert. Das Eluat wurde in Fraktionen von je 15 g aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 35—65 enthielten die gewünschte Verbindung. Diese wurden vereinigt und unter vermindertem Druck eingeengt, um das Lösungsmittel zu entfernen. Auf diese Weise erhielt man 1224 mg farblose Kristalle. Nach Umkristallisieren aus einer Mischung aus Methanol-Benzol-Äthyläther lagen 914 mg der Verbindung der Formel (VI') in Form von farblosen Kristallen vor, die einen Schmelzpunkt von 104,5 bis 105⁰C aufwiesen.

I.R.-Spektrum:

3430, 3200, 2920, 1708, 1695, 1612, 1590, 1517, 1440, 1420. 1370. 1360. 1295. 1280. 1255. 1220, 1190, 1178, 1110.1095.1030,978,950,923,880,872,840,805,790, 756.

N.M.R.-Spektrum (60MH7, in Deutero-methanol):

,TMS. "ppm-

3,88 (3 H, S), 4,72 (2 H, S, überlappend mit dem Signal von Deutero-Wasser), 7,3-7,7 (3 H).

(B) Herstellung von Methyl-3,4-O-isopropyliden-3-hydroxy-4-hydroxymethylbenzoat der Formel V"

H₃COOC

CH₃

50

55

60

1224 mg der Verbindung (VI'), die gemäß Beispiel 1 erhalten worden waren, wurden in 30 ml trockenem Benzol suspendiert Zu der Suspension wurden dann 5 ml 2^2-Dimethoxypropan und 50 ml p-Toluolsulfon- _6ä säure-monohydrat gegeben, um die Isopropylidengruppe als Hydroxylschutzgruppe einzuführen. Man ließ die entstandene Mischung 3 Stunden bei Raumtem-

peratur stehen, damit die Reaktion zuende ablaufen konnte. Die klare Reaktionslösung wurde dann über eine Kolonne mit Silikagel (entsprechend der in Beispiel 1 beschriebenen) gegeben. Die Kolonne wurde mit ■> Benzol gewaschen und die Waschlösungen wurden mit dem Ablauf von der Kolonne vereinigt. Die vereinigte Lösung (etwa 250 ml insgesamt) wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um das Lösungsmittel zu entfernen; auf diese Weise verblieben 1462 mg eines ίο farblosen Öles. Beim Stehen bei Raumtemperatur verfestigte sich das öl zu farblosen Nadeln der gewünschten Verbindung (V"), welche einen Schmelzpunkt von 47,5 bis 48° C aufwies.

_|:. I.R.-Spektrum:

2990, 2950, 2860, 1712, 1620, 1580, 1505, 1430, 1378, 1360, 1310, 1283, 1255, 1240, 1220, 1140, 1120, 1093, 1052, 985, 953, 930, 920, 885, 845, 838, 820, 790, 760, 735.

N.M.R.-Spektrum (60MHz, in CDCl₃, mit interner Referenz auf TMS):

c TMS.
°ppm-

1,53 (6 H, s), 3,89 (3 H, s), 4.88 (2 H, s), 7,04 (1 H, Dublett-ähnlich), 7,52 (1 H, Singlett-ähnlich), 7,60 (1 H, dd).

(C) Herstellung von S^-O-Isopropyliden-S-hydroxy-4-hydroxymethyl-benzylalkohol der Formel

J HOH₂C

CH₃

CH₂

(IV")

1460 mg der Verbindung (V"), die gemäß Beispiel 2 erhalten worden waren, wurden in 20 ml trockenem Benzol gelöst. Zu dieser Lösung wurden tropfenweise und unter Eiskühlung 2,8 ml einer 70%igen Lösung von Natriumdihydro-bis(2-methoxyäthoxy)-aluminat in Benzol gegeben. Die Mischung ließ man bei Umgebungstemperatur 2 Stunden stehen, damit die Reduktion ablaufen konnte. Das Reaktionsgemisch wurde dann eisgekühlt und mit 1 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 7 eingestellt Der sich bildende weiße Niederschlag wurde abfiltriert das Filtrat wurde mit Benzol extrahiert und der Extrakt wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um das Benzol zu entfernen. Auf diese Weise erhielt man 1213 mg farblose Kristalle. Nach Umkristallisieren aus Benzol-Cyclohexan lagen 928 mg der gewünschten Verbindung (FV") in Form von farblosen Nadeln mit einem Schmelzpunkt von 73,5—75,5° C vor.

I.R.-Spektrum:

-,KBr.

max *

3350,3250, 2955, 2925,2875, 1623,1580, 1510, 1455, 1430,1375, 1355,1300,1285,1263,1235,1205,1160, 1142,1115,1065,1053,1020, 990, 980,970, 935, 938, 920, 873, 851, 813, 798, 758, 730, 702, 668.

N.M.R.-Spektrum (60MHz, in CDCl₃):

JtTMS

-»ppm-

153 (6 H, s), 1,82 (1 H, t), 4,62 (2 H, d), 4,85 (2 H, s), 6,8-7,0 (3 H).

(D) Herstellung von ß^-O-Isopropyliden-a-hydroxy-4-hydroxymethylbenzaldehyd der Formel

OHC

(Ul")

CH₂

10

250 mg Chromtrioxid wurden in 10 ml trockenem Methylenchlorid suspendiert. Die Suspension wurde mit 240 mg 3,5-DimethyIpyrazol versetzt Die dann vorliegende Mischung wurde bei Raumtemperatur zwei Stunden gerührt und anschließend mit einer Lösung der !5 Verbindung (IV") von Beispiel 3 in 2 ml trockenem Methylenchlorid versetzt. Die entstandene Mischung ließ man 2 Stunden bei Umgebungstemperatur stehen, damit die Oxidation ablaufen konnte. Anschließend wurden 100 ml Äthyläther zu der Reaktionslösung gegeben. Der sich bildende Niederschlag wurde abfiltriert und mit Benzyläther gewaschen. Das Filtrat und die Waschlösungen wurden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft, um das Lösungsmittel zu entfernen. Der Rückstand wurde in Benzol aufgenommen und die so gewonnene Lösung wurde über eine Kolonne geleitet die eine einem Volumen von 50 ml entsprechende Menge an Silikagel (dasselbe wie in Beispiel 1) enthielt; das Silikagel wurde als Suspension in Benzol eingefüllt Die Kolonne wurde mit 150 ml Benzol gewaschen und dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Benzol uad Äthylacetat (Volumenverhältnis 50:1) eluiert Das Eluat wurde in 15-g-Fraktionen aufgefangen; die Fraktionen Nr. 13—22, die die gewünschte Verbindung enthielten, wurden vereinigt und unter vermindertem Druck vom Lösungsmittel befreit Auf diese Weise erhielt man 164 mg der gewünschten Verbindung (HI") farblose viskose Flüssigkeit.

I.R.-Spektrum:

■»'ma⁶,' (Cm"'):

2975, 2950, 2850, 2760, 1695, 1615, 1580, 1505, 1438, 1400,1383, 1365, 1320,1290, 1258, 1210, 1148, 1112, 1060,1000,985, 952,880,848,830, 812, 775 735 705 670.

N.M.R-Spektrum (60 MHz, in CDCl₃):

40

1,55 (6 H, s), 4,91 (2 H, s), 7,15 (1 H, d), 7,34 (1 H. d). 7.47 (1 H, dd), 9,91 (1 H, s).

(E) Herstellung von S^-O-Isopropyliden-S-hydroxy-4-hydroxymethyl-phenylglycin-nitril der Formel ΙΓ

NC —CN

NH₂

CH₃ CH₃

CH₂

60

216 mg Natriumcyanid wurden in 5 ml konzentriertem wäßrigem Ammoniak (25—28%) gelöst Zu der Lösung wurden dann unter Eiskühlung und unter Rühren 236 mg Ammonhimchlorid und eine methanolische Lösung von 206 mg der Verbindung (IH") gemäß Beispiel 4 gegeben. Man ließ die Mischung 4.5 Stunden bei Raumtemperatur stehen, so daß die Umsetzung zuende ablaufen konnte. Anschließend wurde die Reaktionslösung unter vermindertem Druck eingeengt, um Ammoniak und Methanol zu entfernen. Anschließend wurde mit 30 ml Wasser verdünnt und mit Buianol, dreimal mit je 10 ml, extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Methanol aufgenommen, die danach vorliegende Lösung wurde im Vakuum über Silikagel (demselben wie in Beispiel 1) getrocknet und in Benzol suspendiert Die Suspension wurde auf eine Kolonne gegeben, die mit einer einem Volumen von 50 ml entsprechenden Menge Silikagel (demselben wie vor) gefüllt war; das Süikage! war als Suspension in Benzol eingefüllt worden. Die Kolonne wurde mit Benzol gewaschen und dann mit einer Mischung aus Benzol und Äthylacetat (Volumenverhältnis 4:1) eluiert. Das Eluat wurde in Fraktionen von je 15 g aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 14—35 enthielten das gewünschte Produkt und wurden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft Auf diese Weise erhielt man 198 mg der Titelverbindung (H").

I.R.-Spektrum:

_vKBr .

man '

3400, 3320, 2980, 2950, 2870, 2220, 1623, 1585, 1505, 1435, 1388, 1380, 1363, 1315, 1288, 1258, 1200, 1142, 1120,1055,980,950,900,870,850, 820, 760,735, 700.

N.M.R.-Spektrum (60 MHz, in CDCl₃):

,5TMS.

^PPm 1,53 (6 H, s), 3,27 (2 H, s, breit), 4,83 (2 H, s), 4,88 (1 H₁ s), 6,8-7,2 (3 H).

Die folgenden Beispiele 6 bis 8 dienen der Erläuterung der Herstellung des Endproduktes Forphenicinol der Strukturformel (I), siehe weiter vorn.

(F) Herstellung von Forphenicinol

198 mg des Aminonitrilderivates (U"), welche gemäß Beispiel 5 erhalten worden waren, wurden in 5 ml Äthanol gelöst, worauf 3 ml Wasser und 2 g Bariumhydroxid zu der Lösung gegeben wurden. Die entstandene Mischung wurde 5 Stunden zum Rückfluß erhitzt, um die Hydrolyse durchzuführen. Danach wurde die Reaktionslösung auf Raumtemperatur abgekühlt mit Wasser verdünnt, mit 1 η Schwefelsäure auf pH 2,0 eingestellt und weitere 30 Minuten zum Rückfluß erhitzt (um die Hydroxylschutzgruppe, nämlich die Isopropylidengruppe zu entfernen). Nach Beendigung der Umsetzung wurde das Reaktionsgemisch 10 Minuten zentrifugiert (3000 Umdrehungen pro Minute), um das gebildete Bariumsulfat zu entfernen. Die Flüssigkeitsschicht wurde unter vermindertem Druck eingeengt Das Konzentrat wurde durch eine Kolonne geleitet, die eine einem Volumen von 10 ml entsprechende Menge des Adsorptionsmittels »SP-Sephadex C-25«®, welches in der H+-Form vorliegt, enthielt Nach dem die gewünschte Verbindung an der Kolonne adsorbiert worden war, wurde diese mit Wasser eluiert und das Eluat wurde in Fraktionen aufgefangen. Die Fraktionen, die die gewünschte Verbindung enthielten, wurden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei man 89 mg eines schwach gelb gefärbten Pulvers erhielt Das Pulver wurde aus Wasser umkristallisiert Auf diese Weise erhielt man 62 mg ForphenicinoL d. h. die neue Verbindung (I) in Form von

farblosen Kristallen. Der Schmelzpunkt dieser Verbindung lag bei 200⁰C; oberhalb 200⁰C zersetzt sich die Ve^rbindung allmählich und verfärbt sich braun.

l.R.-Spektrum:

„KBr .

3450, 3030, 2950, 2920, 2875, 2710, 2610, 2320, 2080, 1640, 1620, 1592,1530, 1495, 1440, 1410, 1380, 1350, 1320, 1303, 1258, 1200, 1165, 1135, 1120, 1038, 980, 970, 940, 910, 872, 830, 780, 760, 738, 675.

N.M.R.-Spektrum:

O ext. TMS, ppm '

5,12 (2 H, s), 5,18 (1 H, s), 7,35-7,55 (2 H), 7,82 (1 H. d).

Beispiel 2

587 mg Forphenicin wurden in 25 ml Wasser suspendiert Die Suspension wurde unter lebhaftem Rühren langsam in kleinen Portionen mit 120 mg Natriumborhydrid versetzt Nach Beendigung der Zugabe erfolgte die Reduktion bei Raumtemperatur in 10 Minuten. Die Reaktionslösung wurde mit 1 η Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und durch eine Kolonne (3,5 χ 28 cm) geleitet, die als Adsorptionsmittel »SP-Sephadex C-25«® (dasselbe Produkt wie in Beispiel 6) enthielt. Nach der Adsorption der gewünschten Verbindung an der Säule wurde die letztere mit Wasser eluiert und das Eluat wurde in Fraktionen von je 18 g aufgefangen. Die Fraktionen 215—310, die die gewünschte Verbindung (I) enthielten, wurden vereinigt und auf ein Volumen von 5 ml durch Eindampfen unter vermindertem Druck eingeengt. Die ausgefallenen farblosen Kristalle wurden abfiltriert und im Vakuum getrocknet Man erhielt auf diese Weise 398 mg Forphenicinol (I).

Gewichtsanalyse für C₉HnNO₄:

Berechnet: C 54,82, H 5,62, N 7,10;
gefunden: C 54,58, H 5,61, N 7,22.

Die folgenden Beispiele 3 und 4 sowie 5 erläutern die Herstellung pharmazeutischer Präparate bzw. Arzneimittel, die die Verbindung (I) als aktiven Bestandteil enthalten und die als Immunopotentiatoren be^; Tieren und Menschen Anwendung finden können.

Beispiel 3

10 g der Verbindung (I) wurden in destilliertem Wasser gelöst, so daß 1000 ml einer Lösung vorlagen, die in üblicher Weise sterilisiert wurde. Die sterilisierte Lösung wurde in 2-ml-Portionen in Ampullen abgefüllt und lyophilisiert. Das so hergestellte Präparat wird vor der Verwendung mit destilliertem Wasser verdünnt und stellt dann eine injizierbare Lösung dar.

Beispiel 4

Ein Teil der Verbindung (I), 200 Teile Lactose und 50 Teile Maisstärke wurden zusammengemischt und durch Zugabe von Äthanol granuliert; das Granulat wurde in üblicher Weise getrocknet und gesiebt. Die gewonnenen Körnchen wurden mit 0,5% Magnesiumstearat als Gleitmittel vermischt. Diese Mischung wurde zu Tabletten gepreßt, von denen jede ein Gewicht von 3,6 mg hatte.

Beispiel 5

Ein Teil der Verbindung (I) wurde sorgfältig mit 900 Teilen Lactose vermischt Die Mischung wurde durch ein Prüfsieb mit 50 Maschen gesiebt und in Pulverform verwendet.

Claims

Patentansprüche:

1. S-Hydroxy-^hydroxymethyl-phenylglycin (Forphenicinol) der Fomel I

OH

HOOC—CH

NH,

CH₂OH (I)