DE2813282A1 - Pharmazeutische zusammensetzung auf basis lytischer enzyme von physarum - Google Patents

Pharmazeutische zusammensetzung auf basis lytischer enzyme von physarum

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Description

Pharmazeutische Zusammensetzung auf Basis lytischer Enzyme von Physar^um
Vorliegende Erfindung umfaßt eine antimikrobielle Zusammensetzung, die einen Extrakt lytischer Enzyme von Physar_um enthält.
Ein roher Extrakt von Physar-um weist Chitinase-, cl-1,3-Glucanase-, oi-l,4-Glucanase-, cc-l,6-Glucanase-, ß-1,3-Glucanase-, ß-l,6-Glueanase-, ß-Glucosidase-, ß-Galactosidase-,, ß-Mannanase-, Chitobiase-, oL-Glucosidase- und Muramidase-Enzymaktivität auf.
Ein gereinigter Extrakt von Physar^um weist cC-1,3-Glucanase-, oi.-l,4-Glucanase-, c^-ljö-Glucanase-, ß-l,3-Glucanase-, ß-1,6-Glucanase-, ß-Glucosidase-, ß-Galactosidase-, ß-Mannanasesowie Chitobiase-Enzymaktivität auf. Vorliegende Erfindung umfaßt auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Kombination mit einem pharmazeutisch brauchbaren Träger geeignet ist und einen sterilen, pyrogenfreien, gefriergetrockneten Extrakt lytischer. Enzyme von Physar^um enthält. Vorliegende Erfindung umfaßt auch die zuvor genannten Formulierungen, welche'für eine parenterale oder topische Anwendung geeignet sind und ferner ein herkömmliches Antimykotikum, wie z.B. Amphotericin-B, Nystatin oder 5-Fluorcytosin,.sowie andere Agentien, die im Kapitel 12 von "Cuttings Handbook of Pharmacology", 4. Aufl., Verlag Appleton-Century-Crofts, New York, N.Y., S. 79-85_ genannt sind, enthalten.
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Zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung werden zelllytische (d.h. eine Zelllyse verursachende) Enzyme von Physarwum isoliert, und der Enzymextrakt wird sodann unter Bildung einer sterilen, pyrogenfreien Zusammensetzung gefriergetrocknet. Diese Zusammensetzung kann mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger und gegebenenfalls ferner mit einem Antimykotikum kombiniert werden.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen stellen ein Hilfsmittel zur herkömmlichen antimykotischen Chemotherapie dar, indem sie die Zellwände von Fungi partiell abbauen und dadurch Funguszellen gegenüber herkömmlichen Antimykotika
empfindlicher machen. Der Physar^umextrakt kann deshalb anstelle von oder gleichzeitig mit einem Antimykotikum zur Behandlung von Mykosen verwendet werden.
Im vorliegenden ist unter dem Begriff "therapeutisch wirksame Menge" die Menge an Physar^umextrakt zu verstehen,
welche allein oder zusammen mit einem herkömmlichen antimykotischen Wirkstoff, wie z.B. Amphotericin-B, wirksam ist. Ein Antimykotikum, welches.allein unwirksam oder bei wirksamen Dosen toxisch ist, kann durch Zusammensetzungen gemäß der Erfindung bei geringeren als therapeutischen Dosen wirksam gemacht werden. Für den Fachmann liegt es auf der Hand, daß die Dosen je nach Ernsthaftigkeit der Infektion und dem Ansprechen des einzelnen Patienten schwanken können. Typischerweise ist eine intravenöse Dosis von 2 mg/kg alle 12 Stunden während H Tagen zusammen mit einer Amphotericin-B-Therapie eine wirksame Dosis.
Typischerweise weist ein Enzymextrakt, der von einer Physarum-KuItur-Züchtung durch 1 bis 5 Volumina 95 $igen Ethanols ausgefällt wurde, folgende Enzymaktivitäten auf:
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Chitinase, <\-l,3-Glucanase, cL-l^-Glucanase, 01-1,6-Glucanase, ß-l,3-Glucanase, ß-l,6-Glucanase, ß-Glucosidase, ß-Galactosidase, ß-Mannanase und Chitobiase.
Diese Enzyme werden zur Verabreichung in Form steriler, pyrogenfreier Lösungen gefriergetrocknet. Beispielsweise werden 2 mg/kg Körpergewicht dieses Präparates in 200 ml einer 5 #igen Dextroselösung über 1 bis 2 Stunden zweimal täglich während 4 Tagen zusammen mit einer Amphotericin-B-Therapie bei einer Lungen-Coccidiomykose oder Aspergillus-Infektion verabreicht.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sind zur Behandlung von Candida-;Aspergillus- und Trichophyton-Infektionen, beispielsweise solchen, die durch Candida albicans, Aspergillus fumigatus und Trichophyton mentagrophyteshervorgerufen wurden, besonders wirksam.
Injizierbare, intravenöse sowie topische Formulierungen werden nach herkömmlichen Verfahren, wie beschrieben in Remington's Pharmaceutical Science, Mach Publishing Company, Easton, Pa., 1965,hergestellt. Dem Fachmann sind die verschiedensten Dosierungsformen und Formulierungen geläufig.
In Chemical Abstracts Bd. 78, 157871W (1973) sind zellwandabbauende Enzyme beschrieben, die aus einer Kultur von Physarum polycephalum, zusammen mit Hefe oder Bakterien gezüchtet, extrahiert wurden. Es wurde nachgewiesen, daß die erhaltenen Enzyme-die Zellwände von Hefe abbauen. Demgegenüber werden gemäß vorliegender Erfindung rohe und gereinigte Extrakte von Kulturen von Physarum allein verwendet, und die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen auf Basis derartiger Extrakte werden als ein Hilfsmittel bei der Therapie von Mykosen angewandt.
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In der US-PS 3 682 778 sind Verfahren zur Extrahierung von zelllytischen Enzymen aus verschiedenen Coprinus-Gattungen beschrieben. Im Biochem. Journal, Bd. 61, 579-588 (1955) sind Extrakte bestimmter Lycoperdon-Gattungen offenbart, wobei die Chitinase-Aktivität derselben mit der Chitinase-Aktivität von.Coprinusextrakten verglichen wird.
In den GB-PSn 1 048 887 und 1 410 079 sind Bakterienquellen zelllytischer Enzyme und ihre Aktivität in vitro gegenüber pathogenen Fungi beschrieben, während in Chem. Abstract, Bd. 79, I33662 V die Verwendung von ß-l,3~Glucanase und Chitinase als Fungizid für Reismehltau beschrieben werden. In Tohoku Journal of Exp. Med., Bd. 59, Nr. 4, S. 403 (1954) wird angedeutet, daß die Aktivität in vitro von bakterieller Chitinase deren Verwendung als potentielles (potical) Antidermatomykotikum anzeigen könnte, jedoch wurde dies nicht untersucht.
Es wurde nun gefunden, daß Gemische lytischer Enzyme, die aus Physarum-Gattungen extrahiert wurden, nicht nur eine signifikant größere antimykotische Wirksamkeit aufweisen als diejenigen, welche aus Coprinus und Lycoperdon extrahiert wurden, sondern daß die Enzymextrakte von Physarum zusätzlich ein breiteres Wirkungsspektrum zeigen, was von ihrer Fähigkeit herrührt, nicht nur die Zellwände von Fungi sondern auch von Bakterien anzugreifen. Letztere Eigenschaft ist auf die Anwesenheit von Muraraidase im rohen Enzymextrakt zurückzuführen, ein Enzym, das nicht in signifikanten Mengen in Extrakten von Coprinus oder Lycoperdon vorliegt.
Schließlich ist in der US-PS 4 062 941 die Anwendung zelllytischer Enzyme von Coprinus und Lycoperdon beschrieben; vorliegende Erfindung befaßt sich jedoch' demgegenüber mit medizinisch brauchbaren Extrakten von Physarum.
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Die bevorzugte Quelle des Enzymextrakts ist Physarum polycephalum. Das erwünschte Enzymextrakt wird am zweckmäßigsten durch Züchtung in einer flüssigen Kultur erhalten, wobei die überstehende Flüssigkeit von der Kultur abgetrennt, und das Produkt aus dieser Flüssigkeit isoliert v/erden.
Bei einem bevorzugten Verfahren wird Physarum polycephalum unter asroben Bedingungen in Schüttelf laschen oder in einer gerührten Fermentationsvorriehtung in einen flüssigen Medium folgender Zusammensetzung gezüchtet:
Glucose Bactopepton Zitronensäure
MgSO4-7H2O
Na2E
FeCl
Na2EDTA
10 g 1 Liter
10 g
3,54 S
2,0 g
0,9 g
0,6 g
0,224 g
0,06 g
0,034 g
0,0424 g
0,005 g
0,005 g
Thiamin-HCl Biotin Haemin
Destilliertes Wasser ad
Die Glucose kann durch Maltose, Stärke, Galactose oder ein anderes geeignetes Kohlenhydrat ersetzt werden.
Das Medium wird mit 10 #iger Natronlauge auf einen pH-Wert von 5 eingestellt.
Bevorzugte Züchtungsbedingungen sind folgende: Der pH-Wert sollte bei 4,5 bis 6 gehalten werden, wobei der optimale pH-Wert 5 ist; die erforderliche Temperatur beträgt 25 bis 29°C, und es ist eine kontinuierliche, sehr hohe
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Sauerstoffzufuhr erwünscht. Die Enzymfreigabe steigt mit der Anzahl der Zellen bis zur späten Exponentialphase^ wonach der Anstieg, wenn auch mit verminderter Geschwindigkeit, weiterverläuft. Für eine optimale Enzymproduktion und eine minimale Produktion extrazellularen Polysaccharids (welches die Extraktion kompliziert) werden die Kulturen nach annähernd I8O-2OO Stunden Wachstum geerntet. Das rohe Enzymextrakt wird wie folgt erhalten:
Der überstand der Kultur wird von den Zellen abgetrennt, beispielsweise durch Zentrifugieren (I6OO χ g während 20 Minuten). Der feste Rückstand wird verworfen. Der abgetrennte Überstand wird abgekühlt, und der schleimige Rest wird z.B. durch Zugabe von Ammoniumsulfat auf eine 25 $ige Sättigung oder durch Zugabe eines Volumens Ethanol oder Aceton, welche zuvor auf -20°C abgekühlt wurden, ausgefällt. Der Niederschlag wird von der Flüssigkeit abgetrennt, beispielsweise durch ' Zentrifugieren bei 10.000 χ g während 30 Minuten^und der Rest wird verworfen. Die Flüssigkeit wird gegenüber mehrmals erneuertem destillierten Wasser dialysiert und gefriergetrocknet. Hierbei wird der Rohextrakt erhalten, der gegebenenfalls nach herkömmlichen Verfahren, wie z.B. durch Membranfiltration, Gelfiltration oder Affinitätschromatographie^ weiter gereinigt werden kann.
Ein typischer Rohextrakt von Physarum polycephalum hat folgendes Enzymaktivitätsprofil:
Chitinase 0,0008 u
ß-l,3-Glucanase " 0,28 u
ß-l,6-Glucanase 0,02 u
af-l/6-Glucanase 0,00M u
od-1,3, 06-1,4-Glucanase 0,031 u
ß-Glucosidase O9l4 u
Chitobiase 0,113 u
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ß-Galactosidase ß-Mannanase
ß-1,4-Glucanase Ct-Glucosidase
d-1, 4-Glucanase Muramidase
0,17 U
0,03 U
0,02 U
0,06 U
0,03 U
100,00 U
Eine gereinigte Probe, ausgefällt mit 1 bis 5 Volumina 95 #igeniEthanol^hat folgendes Enzymaktivitätsprofil:
Chitinase
ß-1,3-Glucanase ß-1,6-Glucanase ol-l,6-Glucanase oi-1,3» ol-l, 4-Glucanase ß-Glucosidase
Chitobiase
ß-Galactosidase ß-Mannanase
0,02 U
0,49 U
0,07 U
0,02 U
0,04 U
0,35 U
0,25 U
0,35 ü
0,06 U
Hierbei bedeutet "u" eine Einheit, d.h. die Enzymmenge, welche 1 μΜοΙ Produkt pro 1 Minute pro 1 mg Protein bei 37°C freisetzt.
Der Physarumextrakt weist eine geringe Toxizität auf. Weibliche BALB/c-Mäuse mit einem Gewicht von 20 bis 25 g wurden intraperitoneal mit gereinigtem Extrakt (gereinigt durch Ausfällen mit 4 Volumina Ethanol) in Dosen von 0 bis 800 mg/kg in Kochsalzlösung injiziert. Die Mäuse wurden Tage beobachtet, und der Tod wurde aufgezeichnet. Die Toxizität LD,-« wurde errechnet, indem die überlebenden Tiere gegen die Dosis, und die toten Tiere gegen die Dosis aufgetragen wurden, wobei die LD1-- den Schnittpunkt der Kurven darstellt. Es wurde eine Toxizität festgestellt.
von 670 mg/kg
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/0794
Mit Rhesusaffen durchgeführte Toxizitätsversuche zeigten, daß bei Verabreichung einer Dosis an die Tiere, welche annähernd das 1Ofache der erwarteten Dosis für den Menschen an dem Physarumextrakt in Kochsalzlösung entsprach, keine Krankheitswirkungen auftraten. Die Atmung, der Puls und die Pulszahl, die Biochemie und Hämatologie blieben innerhalb normaler Toleranzen.
Nachfolgende Beispiele dienen zur weiteren Erläuterung der Erfindung.
Beispiel 1
In diesem Beispiel wurden die Wirkungen des Physarumextraktes, mit oder ohne herkömmliche Antimykotika, bezüglich der Wachstumshemmung von Candida albicans in vitro nach einem Trübungsmeßverfahren ermittelt. In Flaschen mit Nährbrühe, welche verschiedene.Mengen an rohem Physarumextrakt, Antimykotika oder Gemische dieser beiden enthielt, wurden 1 χ 10 Zellen von C. albicans inokuliert. Es wurden Proben dieser Suspensionen entnommen (T_)jund ihre Trübung wurde in einem Spektrophotometer bei 56Ό nm gemessen. Die Kulturen wurden 24 Stunden bei 37°C inkubiert, und die Trübung wurde abermals (T2Ii^ gemessen und mit derjenigen einer Kontrollkultur (Tpj, Kontrolle) verglichen. Die Ergebnisse sind in nachfolgender Tabelle I zusammengefaßt. Der Wert für T2J1 Kontrolle war 0,61.
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. ι Wirkungen Tabelle I Optische Dichte
20 μg/ml		 bei 56Ο nm (
1,0 μg/ml		 Durchschnitt eus 3 Messungen)
0,2 μg/ml 0,02 μg/ml		 0,69+0,07
O,15±O,O4
O,64+_O,O8		 281.3282
Konzentration 0,21+0,04
• 0,03+0,02
0,13+0,03		 O3
o:
0.		 0,15+0,03
0,03+0,03
0,57+0,09
OO Amphotericin-B
Nystatin
Phy s arurne xt r akt		 10μg + ^g 0,1μ2 + O,lpg
09841/0 Konzentration 0
0		 0
0		 OjOlpg + 0,01ug
~α
co		 Physarum +
Amphotericin-B
Physarum +
Nystatin		 0
0
- ■> ,33+0,04
,03+0,02
,35.+0,06
von Physarumextrakt und Antimykotika auf das Wachstum von Candida albicans
in flüssiger Kultur		 ig + lμg
100 με/ml 0
0
0
0,01+0,01
0,06+0,04
50μg + 50μg
0
0
Diese Ergebnisse zeigen einen deutlichen Synergismus zwischen dem Physarumextrakt und den Antimykotika.
Beispiel 2
Dieses Beispiel zeigt einen Versuch hinsichtlich der Wirkung von Physarumextrakt auf eine Infektion von Mäusen mit Aspergillus fumigatus.
BALB/c-Mäuse wurden über die seitliche Schwanzvene mit 0,2 ml einer Suspension injiziert, welche annähernd 5 x 10 Sporen von A. fumigatus enthielt. An den 3 Tagen nach der Infektion wurden die Mäuse durch intraperitoneale Injektion mit
folgenden Produkten behandelt:
0,2 ml Kochsalzlösung (Kontrolle);
0,2 ml Kochsalzlösung mit einem Gehalt an 10μg Physarumextrakt und 1 μg Amphotericin-B;·
0,2 ml Kochsalzlösung mit einem Gehalt an lediglich 10 pg Physarum;
0,2 ml Kochsalzlösung mit einem Gehalt an lediglich 1 pg Amphotericin-B.
Der Infektionsverlauf wurde täglich verfolgt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle II zusammengestellt.
Tabelle II Behandlung
ohne
3 x 10 pg Physarumextrakt 3 x 1 Mg Amphotericin-B 3 x (10 μg Physarumextrakt + 1 μg Amphotericin-B)
Tage des Überlebens (5 Mäuse/Gruppe)
12,5 i 1,6 25,2 + 2,3 14,1 +. 1,5
alle am Leben am 50. Tag
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- L2 -
Diese Ergebnisse zeigen deutlich, daß der Physarumextrakt allein in merklichem Ausmaß zur Bekämpfung der Infektion wirksam ist, wobei er zu besseren Ergebnissen führt als diejenigen, welche mit Amphotericin erhalten wurden. Die Ergebnisse, welche unter Verwendung des Extraktes zusammen mit dem Antimykotikum erhalten wurden, zeigen eine stark synergistische Wirkung.
Beispiel 3
Dieses Beispiel zeigt die Behandlung einer oberflächlichen Fungusinfektion bei Meerschweinchen mit Physarumextrakt mit oder ohne Zusatz von Nystatin.
ty 2
Die r'sierten Rücken von 25 Meerschweinchen wurden mit 5 nun einer Kultur von Trichophyton ment grophytes, ein übliches Hautpathogen, inokuliert, h Tage nach der Inokulation wurden die Tiere visuell hinsichtlich Infektionsanzeichen geprüft, und Haar- sowie Hautproben wurden entnommen und gezüchtet, (dies waren zur Bestätigung der Infektion entnommene TQ-Kontrollen). Sodann wurde mit der Behandlung begonnen. Alle Behandlungen wurden in "Carbopol" gepuffertem Gel mit einem Verhältnis von 0,5 g/Tier/Tag nach folgendem Schema vorgenommen, wobei jede Gruppe 5 Tiere umfaßte:
Gruppe 1: Kontrolle - behandelt lediglich mit Placebo-Gel;
Gruppe 2: Gel + 0,1 % (Gew./Gew.) Physarumextrakt;
Gruppe 3' Gel + 0,5 % (Gew./Gew.) Physarumextrakt;
Gruppe 4: Gel + 0,5 % (Gew./Gew.) Nystatin;
Gruppe 5: Gel + Physarum 0,1 SS + Nystatin 0,05 %.
Die Behandlung wurde 5 Tage fortgesetzt und weitere Haut- und Haarproben wurden entnommen und gezüchtet. Von jedem Tier wurden 5 Proben entnommen, und die Anzahl von getrennten Koljonien auf jeder Kulturschale wurde gezählt, wobei die
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Anzahl der Kol„.onien annähernd äquivalent zur Menge von auf den Tieren zurückbleibenden lebensfähigem Fungus war; (dies waren die Proben T1-). Die Ergebnisse sind in Tabelle III enthalten.
Tabelle III 2 3 4 5
Gruppe 1 100 100 100 100
Proben T
(% infizierte		 Tiere) 100 . 60 40 60 20
Proben T-
{% infizierte:.		 Tiere) 100 91 70 96 28
Anzahl der Kolonien
von den Proben		 212
Diese Ergebnisse zeigen eine beträchtliche Verminderung der Anzahl an infizierten Tieren und der Anzahl von sich entwickelnden Fungi-KoLjonien, als ein Ergebnis aller Behandlungen. Jedoch wurden bei der Gruppe 3 (mit 0,5 % (Gew./Gew.) Physarum/ und der Gruppe 5 (0,1 % Physarum +
Λ Λc «f »τ *.■*.· ^A e te^Len Ergebnisse
0,05 % Nystatin)/erhalten, was wiederum den Synergismus
zwischen dem Extrakt und Nystatin zeigt. Beispiel 4
Dieses Beispiel zeigt die Messung der antibakteriellen Wirksamkeit von Physarumextrakt als Funktion einer verminderten Trübung von Zellsuspensionen von Micrococcus lysodeikticus.
Die potentielle antibakterielle Wirksamkeit von Physarum-Enzymextrakt aufgrund der Muramidase«-Aktivität des Extraktes wurde als Verminderung der optischen Dichte (bei 57Onm) einer Suspension von lyophilisierten Zellen von Micrococcus lysodeikticus gemessen. Der Enzymextrakt von Physarum (2 mg/ml) wurde mit einem Enzymextrakt von der Gattung Coprinus (2 mg/ml)
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und mit einer Reihe von Lysozym-Standardlösungen (0 - 16 yug/ml) verglichen. Die optische Dichte (abgekürzt als OD bezeichnet) wurde bei TQ und Tp0 (nach 20 Minuten Inkubation bei 37°C) bestimmt. Die Ergebnisse waren wie folgt:
Lysozym-Standardlösung OD bei 570 nm
16 ug/ml 0,112
8 ug/ml 0,220
4 ug/ml 0,360
2 ug/ml 0,408
1 ug/ml 0,417
T0 Kontrolle ' 0,476
Coprinus
T20 0,456
T0 0,465
Physarum
T20 . 0,120
T0 0,470
Diese Ergebnisse zeigen, daß der Coprinusextrakt geringe oder überhaupt keine Muramidaseaktivitat aufweist, während der Physarumextrakt bei 2 mg/ml eine Muramidaseaktivitat zeigt, welche 15 ug/ml Lysozym, d.h. reiner Muramidase, annähernd äquivalent ist.
Beispiel 5
(1) 4 Gruppen von BALB/c-Mausen wurden durch intravenöse Injektion von 0,2 ml einer Suspension infiziert, welche 5 x 10 Sporen von Aspergillus fumigatus enthielten; in den 2 folgenden Tagen nach der Infektion wurden sie durch intraperitoneale Injektion mit
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(a) 0,2 ml Kochsalzlösung 24 und 48 Stunden nach der Infektion (Kontrolle);
(b) 0,2 ml Kochsalzlösung mit einem Gehalt an 200 jug Physarumextrakt, ausgefällt durch 1 bis 5 Volumina 95 #igen Ethanols nach 24 Stunden und 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden;
(c) 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden und 1 /ig Amphotericin-B in 0,2 ml Kochsalzlösung nach Stunden; bzw.
(d) 200 ug Physarumextrakt in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden und 1 /ig Amphotericin-B in 0j2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden
behandelt.
Der Infektionsverlauf ivurde täglich verfolgt.
Durchschnittliche Tage des Überlebens Gruppe (a) 13,4 +_ 1,14 12,6 +_ 1,82 Gruppe (b) 19,4 + 1,52 14,6 +_ 2,41 Gruppe (c) 16,6 +_ 2,07 15,0 +_ 2,24 Gruppe (d) Alle Tiere nach 4l Tagen am Leben und getötet zwecks Autopsie.
Hieraus ergibt sich eine starke synergistische Wirkung zwischen dem Physarumextrakt und Amphotericin-B.
Bei der Autopsie wurden keine Abnomalitäten und keine Fungusaktivität festgestellt. Einiges Material aus dem Nierengewebe könnte ein von Fungus befallenes Gewebe besitzen, jedoch wurden keine positiven Kulturen erhalten.
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Beispiel 6
(2) Dieser Versuch ist demjenigen des Beispiels 5 ähnlich.
6 Gruppen zu je 5 Mäusen wurden intravenös mit 5 x 10 Sporen von A. fumigatus infiziert und 24 bzw. 48 Stunden nach der Infektion durch intraperitoneale Injektion mit Physarumextrakt und Amphotericin-B wie folgt behandelt:
(a) 0,2 ml Kochsalzlösung 24 und 48 Stunden nach der Infektion;
(b) 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden, 1 jug Amphotericin-B in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden;
(c) 100 ^g Physarumextrakt, ausgefällt durch 1 bis 5 Volumina 95 $igen Ethanols; in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden, 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden;
(d) 10 ug Physarurnextakt in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden, 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden;
(e) 10 ug Physarumextrakt in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden, 1 jag Amphotericin-B in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden;
(f) 10 zug Physarumextrakt in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 24 Stunden, 1 Mg Amphotericin-B in 0,2 ml Kochsalzlösung nach 48 Stunden.
Die Ergebnisse waren folgende:
Durchschnittl. Tage des Überlebens
Gruppe (a) 14,0 +_ 2,0
Gruppe (b) 16,0 +_ 2,55
Gruppe (c) 16,2 _+ 3,19
Gruppe (d) 14,4 +_ 2,07
Gruppe (e) ■ alle nach 50 Tagen noch am Leben
Gruppe (f) 42,0 +_ 2,74
8098A1 /0794
Hiermit wurde wiederum der Synergismus zwischen Physarumextrakt und Amphotericin-B belegt.
Für: G.D. Searle & Co.
Skokie, 111., V.St,A.
Dr.H.J.Wolff Rechtsanwalt
809841/0794

Claims (6)

Patentansprüche: ' ·
1. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie lytische Enzyme von Physar^um und gegebenenfalls einen pharmazeutischen Träger und/oder ein Antimykotium enthält.
2. Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die lytischen Enzyme ein Extrakt lytischer Emzyme
. von Physar_um sind.
3. Zusammensetzung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt steril, pyrogenfrei und gefriergetrocknet ist.
1J. Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 2 oder 3> dadurch gekennzeichnet, daß der Extrakt ein gereinigter Extrakt zelllytischer Enzyme von Physar^um mit einer Enzymaktivität von Ί-1, 3-Glucanase, d-lj^l-Glucanase, et- · 1,6-Glucanase, ß-l,3-Glucanase, ß-l,6-Glucanase, ß-. Glucosidase, ß-Galactosidase, ß-Mannanase ,ixssäc Chitobiase und Chitinase ist.
5. Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Antimykotikum Amphotericin-ß,
., Nystatin oder 5-Fluorcytosin ist. ." .
6. Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Träger für eine parenterale, intravenöse oder topische Verabreichung .geeignet ist.
. '. .. ORIGINAL fMSPECTED
80 9 84 1/0794 ■ .
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