NO781035L - T fremgangsmaate til fremstilling av et farmasoeytisk prepara - Google Patents

T fremgangsmaate til fremstilling av et farmasoeytisk prepara

Info

Publication number
NO781035L
NO781035L NO781035A NO781035A NO781035L NO 781035 L NO781035 L NO 781035L NO 781035 A NO781035 A NO 781035A NO 781035 A NO781035 A NO 781035A NO 781035 L NO781035 L NO 781035L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
extract
glucanase
physarum
fysarum
treatment
Prior art date
Application number
NO781035A
Other languages
English (en)
Inventor
David Allen Lewis Davies
Anthony Michael Samuel Pope
Original Assignee
Searle & Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Searle & Co filed Critical Searle & Co
Publication of NO781035L publication Critical patent/NO781035L/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01108—Lactase (3.2.1.108)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01023—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01025—Beta-mannosidase (3.2.1.25), i.e. mannanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01039—Glucan endo-1,3-beta-D-glucosidase (3.2.1.39)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01052—Beta-N-acetylhexosaminidase (3.2.1.52)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01058—Glucan 1,3-beta-glucosidase (3.2.1.58)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01073—Licheninase (3.2.1.73)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01075—Glucan endo-1,6-beta-glucosidase (3.2.1.75)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01078—Mannan endo-1,4-beta-mannosidase (3.2.1.78), i.e. endo-beta-mannanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01084—Glucan 1,3-alpha-glucosidase (3.2.1.84), i.e. mutanase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk prepara t.
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk preparat omfattende et ekstrakt av lyttiske ensymer fra fysarum. Offinnelsen omfatter et råekstrakt fra fysarum med chi tina se-, (X-l, 3 glucanase, a-1,4 glucanase, a-1,6 glucanase, (3-1,3 glucanase, |3-1,6 glucanase-, (3-gluco sidase, (3-galac to sidase-, |3-marmanase-, chi-tiobiase-, a-glucosidase- og muramidase-ensymaktivitet og et renset ekstrakt fra fysarum med a-1,3 glucanase-, a-1,4 glucanase-, a-1,6 glucanase-, (3-1,3 glucanase-, (3-1,6 glucanase-, P-glucosidase- , (3-galac to sida s e-, (3-mannanase- og chitobiase-ensymaktiviet. Oppfinnelsen omfatter videre et farmasøytisk preparat egnet for kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer, hvor preparatet omfatter et sterilt, pyrogenfritt, lyo-filisert ekstrakt av lyttiske ensymer fra fysarum. Oppfinnelsen omfatter ytterligere preparater egnet for parenteral eller topisk anvendelse og videre inneholdende et konvensjonelt anti-myotisk middel slik som amfotericin-B, nystatin eller 5-fluoro-cytosin samt andre midler angitt i kapittel 12 i "Cuttings Handbook of P.harmacology , " 4. utgave, Appleton-Century-Crof ts , N.Y., N.Y. sidene 79 - 85.
Foreliggende oppfinnelse omfatter som nevnt en fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk preparat hvilket består i isolering av celle-lyttiske ensymer fra fysarum, og deretter lyofili sering av ensymekstraktet for dannelse av et sterilt, pyrogenfritt preparat. Fremgangsmåten omfatter også at man kombinerer et således oppnådd produkt med eh egnet far-masøytisk bærer og eventuelt tilsetning av et antimykotisk middel .
Preparatene ifølge oppfinnelsen representerer et supplement til konvensjonell an tiniyko ti sk kjemi terapi ved delvis nedbrytelse av sopp-cellevegger og derved gjøres soppceller mer mottagelige for konvensjonell antimykotisk terapi. Oppfinnelsen angår derfor behandling av mykose hvilket innebærer vekslende eller samtidig administrasjon av fysarumekstrakt og antimykotisk middel.
Med betegnelsen terapeutisk effektiv mengde menes den mengde fysarumekstrakt som alene er effektiv eller effektiv i forbindelse med et konvensjonelt antimykotisk middel slik som amfotericin-B. Et antimykotisk middel som er ineffektivt alene eller toksisk i effektive doser, kan gjøres effektivt i mindre enn terapeutiske doser ved hjelp av preparater ifølge oppfinnelsen. En fagmann vil forstå at doser vil bli variert avhengig av graden av infeksjon og avhengig av den enkelte pasients respons. En effektiv intravenøs dose er typisk 2 mg/kg hver 12. time i
4 dager i forbindelse med amfotericin-B-terapi.
Et ensymekstrakt utfellt ved hjelp av 1-5 volumdeler 95$> etanol fra fysarium kulturvekst har typisk chitinase-, a-1,3 glucanase-, a-1,4 glucanase-, a-1,6 glucanase-, |3-1,3 glucanase-, (3-1,6 glucanase-, (3-gluco sidase-, (3-galactosidase, (3-mannanase-, og chitobiase-ensymaktiyitet.
Disse ensymer lyofiliseres for administrasjon i steri-le, pyrogenfrie oppløsninger. 2 mg/kg legemsvekt av dette preparat blir f. eks. administrert i 200 ml 5$ ekstrose i løpet av 1-2 timer 2 ganger daglig i 4 dager i fo.rbindelse med amfoteri-sin-B-terapi for lungekoksidiomyosis eller aspergillus-infeks jon..
Forbindelser og fremgangsmåter ifølge oppfinnelsen er spesielt effektive ved behandling av Candida-, aspergillus- og trichofyton-infeksjoner slik som de som forårsakes av Candida-albicans, aspergillus fLimigatus og trikofyton mentagrofytes .
Injeserbare, intravenøse og topiske foruinuleringer fremstilles som beskrevet i Remington's Pharmaceutical Science Mach Publishing Company, Easton, Pennsylvania 1965, ved hjelp av i og for seg kjent teknikk. Fagmannen vil forstå at det kan tilberedes mange forskjellige doseringsformer og preparater.
Chemical abstracts 78 15787'lW (1973) beskriver celle-vegg-nedbrytende ensymer ekstrahert fra en vekst av fysarum polycefalum dyrket sammen med gjær eller bakterier. De resulterende ensymer viste seg å nedbryte gjær-cellevegger. Foreliggende oppfinnelse omfatter rå og rensede ekstrakter av kulturer av fysarum alene, farmasøytiske preparater derav og bruk av disse preparater som supplement i terapi av mykose..
US-patent nr. 3 682 778 beskriver fremgangsmåter for ekstrahering av celle-lytiske ensymer fra forskjellige kopri-nusarter. M.V. Tracey, Biochem Journal 6l, 579-588 (1955) beskriver ekstrakter av visse lykoperdonarter og sammenligner chitinaseaktiviteten hos disse med chf<t>inaseaktivite ten hos coprinuseks takter.
Britiske patenter nr. 1 0^8'887 og 1 4-10 079 beskriver bakteriekilder av celle-lytiske ensymer og deres invitroaktivitet mot patogene fungi og Kokai et al. Chem. Abs. 79>133662 V beskriver (3-1,3 glucanase og chitinase som fungisid for bruk
på risplanter. Mirua, Tohoku Journal of Exp. Med. 59» No. k 403 (l954) foreslår at invitroaktivitet av bakteriell chitinase kan tyde på mulig anvendelse som po tisk an ti-dermatoinyco si smidde! , men dette ble ikke prøvet.
Det er funnet at lytiske ensymblandinger ekstrahert fra fysarumarter ikke bare har betydelig større antimykotisk aktivitet enn de som ekstraheres fra coprinus og lycoperdon, men fystarum-ensymekstraktene viser i tillegg et videre aktivi-tetsspektrum som skriver seg fra deres evne til ikke bare å angripe sopp-, men også bakterie-cellevegger. Denne sistnevnte egenskap antas å skrive fra tilstedeværelsen av muramidase i rå-ensymekstraktet, og dette er et ensym som ikke er tilstede i betydelige mengder i ekstraktene fra coprinus eller lycoperdon .
US-patent nr. h 062 9^1 beskriver bruk av celle-lytiske ensymer fra coprinus og lycoperdon, mens derimot foreliggende oppfinnelse angår medisinsk nyttige ekstrakter fra fysarum.
Den foretrukne kilde for ensymekstrakt er fysarum polycefalum. Det ønskede ensymekstrakt oppnås mest hensikts-messig ved vekst i flytende kultur, separering av den ovenstående væske fra kulturen og isolering av produktet fra denne væ sk e.
I en foretrukken fremgangsmåte dyrkes fysarum polycefalum under aerobe betingelser i rysteflasker eller i en fer-menteringsbeholder med roreverk i et væskeformig medium med følgende sammensetning:
Glucosen kan erstattes av maltosc, stivelse, galac-tose eller et annet egnet karbohydrat.
Mediet iamstilles til pH 5 med 10'/ o NaOH. Foretrukne vekstbetingelser er følgende: pH-verdien bør holdes i området 4,5-6, idet den optimale pH-verdi er 5, den nødvendige tempera-tur er i området 25 til 29°C og det er ønskelig med kontinuer-lig meget høy oksygenering.
Ensymfrigjøring øker med celletall opptil sen ekspo-nensialfase og fortsetter å øke etter dette, men. med redusert hastighet. For optimal ensymproduksjon og minimalt ekstracellu-lært polysaccarid (hvilket kompliserer ekstraksjon), høstes kulturer etter omkring 180-200 timers vekst. Det rå ensynek-strakt oppnås som følger: Kulturens ovenstående væske separeres fra cellene, f. eks. ved sentrifugering (l600 x g i 20 minutter). Den faste rest kasseres. Den separerte ovenstående væske avkjøles og resterende slimaktige stoff utfelles f.eks. ved tilsetning av amiiioniumsulfa t til 25 fo smeltning eller ved tilsetning av en volumdel etanol eller aceton som på forhånd er avkjølt til --20°C. Bunnfallet separeres fra væsken, f.eks. ved sentrifugering ved 10.000 x g i 30 minutter og resten kasseres. Væsken dialyseres mot flere utskiftninger av destillert vann og lyofiliseres. Således oppnås det rå ekstrakt som om ønsket kan ytterligere renses ved hjelp av konvensjonelle metoder slik som membranfiltrering, gelfil trering eller affinitetskromato-grafi . '
Et typisk råekstrakt fra fysarum polycef aluin har føl-gende ensymaktivitetsprofi1:
En renset prøver utfellt mellom 1 og 5 volumdeler 95 i° etanol har følgende ensyminrof il:
(u) 1 enhet - den mengde ensym som vil frigjøre 1 u mol produkt/l minutt/l mg protein ved 37°C.
Fysarumekstraktet hai' lav toksisitet. BALB/c hunnmus med en vekt på 20-25 g ble injisert i.p. med renset ekstrakt (renset ved utfelling med h volumdeler etanol) i doser på fra 0 til 800 mg/kg i saltoppløsning. Musene ble observert i 7 dager og dødsfall registrert etterhvert som de forekom. LD_,_-
50 verdien ble beregnet ved å plotte antall overlevende mot dose og ved å plotte antall dødsfall mot dose, idet LD^-verdien utgjorde krysningspunktet for.kurvene. Det ble funnet en LD^-verdi på 67O mg/kg.
I resusaper viste toksisitetsforsøk at man ikke fikk noen uheldige virkninger når dyrene ble gitt en dose på omtrent 10 ganger den forventede dose hos mennesker av fysariumekstrakt i saltoppløsning. Åndedretts-, puls- og hjerte-hastighet, bio-kjemi og hematologi forble innen de normale toleransegrenser.
Følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen ytterligere .
Eksempel 1.
Virkningene av fysarum ekstrakt med eller uten konvensjonelle antimyko ti ske legemidler med hensyn til izihibering av vekst av Candida.albicans in vitro, ble bestemt ved hjelp av en turbidimetrisk metode. 1 x 10 celler av C. albicans ble inokulert i flasker 5 i med buljong inneholdende forskjellige mengder rått fusarium-ekstrakt, antimykoti ske legemidler eller blandinger av disse stoffer. Prøver på disse suspensjoner ble tatt (T ) og deres turbitet målt i et spektrofotome ter ved 560 nm. Kulturene ble inkubert i 2k timer ved 37°G og turbiditeten målt igjen (T^^) og sammenlignet med den til en kontrollkultur (T^-kontroll) . Resultatene er vist i tabell I. Verdien for -kontrollprøven var 0,6l.
Disse resultater viser en klar synergisme mellom fysarumekstraktet og de antibiotiske legemidler.
Eksempel 2.
Virkning av fysarumekstrakt på Aspergillus fumigatus infeksjon hos mus. BALB/c mus ble injisert via den laterale halevene med 0,2 ml av en suspensjon inneholdende omtrent 5
x 10^ sporer av A. fumigatus. På den tredje dagen etter infeksjonen ble musene behandlet ved intraperitoneal injeksjon med 0,2 ml saltoppløsning (kontrolldyr), eller med 0,2 ml saltoppløsning inneholdende 10 ug fysarumekstrakt og 1 ug Amfotericin-B; eller med 0,2 ml saltoppløsning. inneholdende kun 10 ug fysarum; eller med 0,2 ml saltoppløsning inneholdende kun Amfotericin-B. Infeksjonens forløp ble fulgt daglig,
og de oppnådde resultater er angitt i nedenstående tabell II.
Disse resultater viser klart at fy sarurnekstrakte t alene er effektivt i betydelig grad når det gjelder å behandle infeksjonen, idet det oppnås bedre resultater enn med Amfotericin alene. Resultatene oppnådd ved anvendelse av ekstraktet sammen med det antimykoti ske legemiddel så vises det her i en sterk syergistisk virkning.
Eksempel 3-
Behandling av overflate-soppinfeksjon dios marsvin med fysarumekstrakt med eller uten nystatin.
Barberte ryggområder på 25 marsvin ble innokulert med 5 mm~ 2av en kultur av tricofyton mentagrolytes, et vanlig hud-patogen. k dager etter innokulering ble dyrene kontrollert visuellt med hensyn på tegn av infeksjon og prøver av hår og hud ble tatt og dyrket (disse var T -kontroller som ble tatt for å bekrefte infeksjon). Deretter begynte behandlingen. Alt behandlingsmateriale ble påført "karbopol"-bufferet gel i en mengde på 0,5 g/dyr/dag ifølge nedenstående skjema. Hver gruppe besto av 5 dyr:
Gruppe 1: kontroll - behandlet kun med placebo-gel
2: Gel + 0, 1% (vekt/vekt) fysarumekstrakt 3: Gel + 0, 5% (vekt/vekt) fysarumekstrakt h: Gel + 0, 5% (vekt/vekt) Nystatin 5: Gel + fysarum 0, 1% + Nystatin 0,05$.
Behandlingen ble fortsatt i 5 dager og ytterligere prøver av hud og hår ble tatt og dyrket. 5 prøver ble tatt fra hvert dyr og antall adskilte kolonier på hver kulturplate ble tellt, idet antall kolonier var omtrent ekvivalent med mengden av levedyktig fungus på dyrene (disse var T prøver). Resulta-, tene er gitt i tabell III.
Disse resultater viser en markert reduksjon i antall infiserte dyr og antall sopp-kolonier som utvikles som et re-sultat av alle behandlinger. Gruppe 3 (0,5 (vekt/vekt) fysarum) og gruppe 5 ( 0, 1% fysarum + 0,05 % nystatin) ga imidler-tid de beste resultater, hvilket også her viser synergisme mellom ekstraktet og nystatin.
Ek se nip el k .
Måling av antibakterie.il aktivitet til fy sarumeks trak t som en funksjon av reduksjon i turbiditet hos suspensjoner av celler av Micrococcus lysodeik ticus.
Den potensielle antibakterielle aktivitet til fysarum en syn-ekstrukt resulterende fra muramidascaktiviteten til ekstraktet, ble målt som reduksjon i optisk tetthet (ved 570 nm) hos en suspensjon av lyofiliserte celler av Micrococcus lyso-deikti cus.
Ensymekstrakt fra fysarum (2mg/ml) ble sammenlignet med et ensymekstrakt fra Coprinus (2 mg/ml)-arter og med en rekke standard lysozym-oppløsninger (0,l6 ug/ml). Den optiske tetthet (OD) ble avlest ved'T^og ved T (etter 20 minutters inkuba sjon ved 37 C). Følgende resultater ble oppnådd:
Disse resultater viser at Coprinusekstrakt har liten eller ingen muramidaseaktivitet, mens derimot Fysarumekstraktet ved 2 mg/ml viser en muramidaseaktivitet som er ekvivalent med omtrent 15 ug/ml lysozym, dvs. ren muramidase.
Elv se ni pel 5 .
l) Fire grupper av BALB/c muse ble infisert ved in-travenøs injeksjon av 0,2 ml av en suspensjon inneholdende 5
x 10^ sporer av Aspergillus fumigates og behandlet i de to da-gene etter infeksjonen med intraperitoneal injeksjon. a) 0,2 ml sal topplø siling i 24 timer og 48 timer etter infeksjon (kontroll) b) 0,2 ml saltoppløsning inneholdende 200 ug Fysarumekstrakt utfellt mellom 1 og 5 volumdeler 95 % etanol ved 2k timer og
0,2 ml saltoppløsning ved<4>8 timer.
c) 0,2 ml saltoppløsning ved 24 timer'og 1 ug Amfotericin B i 0,2 ml saltoppløsning ved 4 8 timer. d) 200 ug Fysarumekstrakt i 0,2 ml saltoppløsning ved 24 timer. 1 ug Amfotericin B i 0,2 ml saltoppløsning ved 48 timer.
Infeksjonsforløpet ble fulgt daglig.
Gjennomsnittlig overlevning (dager).
En sterk synergistisk effekt demonstreres mellom Fysarumekstraktet og Amfotericin B.
Ved obduksjon, ble det ikke funnet noen avnormaliteter og ingen soppaktivitet. Noe materiale fra nyrevev kunne ha vært fungalt vev, men ingen positive kulturer ble oppnådd.
Eksempel 6.
2) Lignende forsøk som angitt i eksempel 5»Seks grupper av 5 mus ble infisert intravenøst med 5 x 10^ sporer av A. fumigatus og behandlet 24 og 48 timer etter infeksjonen ved intraperitoneal injeksjon med Fysarumekstrakt og med Amfotericin-B. a) 0,2 ml saltoppløsning 24 og 48 timer etter infeksjon. b) 0,2 ml saltoppløsning ved 24 timer; 1 mg Amfotericin-B i 0,2 ml saltoppløsning ved 48 timer. c) 100 ug Fysarumekstrakt utfellt mellom 1 og 5 volumdeler 95 i° etanol i 0,2 ml sal topplø sning ved 24 timer; 0,2 ml
saltoppløsning ved 4 8 timer.
d) 10 ug Fysarumekstrakt i 0,2 ml saltoppløsning ved 24 timer; 0,2 nil saltopplø sning ved 4 8 timer. e) 100 ug Fysarumekstrakt i 0,2 ml saltoppløsning ved
24 timer; 1 ug Amfotericin-B i 0,2 ml saltoppløsning ved 48
timer.
f) 10 ug Fysarumekstrakt i 0,2 ml saltoppløsning ved 24 timer; 1 ug Amfotericin-B i 0,2 ml saltoppløsning ved 48 timer.
Også her ble synergisme mellom Fysarumekstrakt og Amfotericin-B påvist.

Claims (8)

1. Fremgangsmåte til fremstilling av et farmasøytisk preparat, karakterisert ved at man isolerer celle-lyttiske ensymer fra Fysarum, hvoretter ensymekstraktet lyofiliseres for dannelse av et sterilt, pyrogenfri tt preparat.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man kombinerer- nevnte lyofiliserte Fysarum-ensym-ekstraktet med en egnet farmasøytisk bærer.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at man kombinerer lyofiliserte Fysarumensym- ekstrakter med en egnet farmasøytisk bærer og et antimykotisk middel.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved at det antimykoti ske middel er Amfo tericin-B, Nystatin eller 5-fluorcytosin,
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, for fremstilling av et renset ekstrakt av celle-lyttiske ensymer fra fysarum, karakterisert ved at disse ensymer har a-1,3 glucanase, a-1, k glucanase, a-1,6 glucanase, (3-1,3 glucanase, |3-1,6 glucanase, (3-gluco sidase , (3-galac to sidase , (3-mannana s e , chitobiase, chitinase- aktivitet.
6. Fremgangsmåte til behandling av sopp-infeksjoner hos dyr, karakterisert ved at man til et dyr som har behov for anti-soppbehandling administrerer en effektiv mengde mykoly tti ske ensymer ekstrahert :fr*a Fysarum.
7. Fremgangsmåte til behandling av sopp-infeks joner hos dyr, karakterisert ved at man til et dyre som har behov for antisoppbehandling administrerer en effektiv mengde av mykolytti ske ensym-eks trakter fra Fysarum i forbindelse med et antimykotisk middel.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, for behandling av sopp-infeksjoner hos dyr, karakterisert ved at man til et dyr som har.behov for anti-soppbehandling administrerer en effektiv mengde mykolyttiske ensymer ekstrahert fra Fysarum i forbindelse med Amfotericin-B eller Nystatin.
NO781035A 1977-03-28 1978-03-22 T fremgangsmaate til fremstilling av et farmasoeytisk prepara NO781035L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB12919/77A GB1576891A (en) 1977-03-28 1977-03-28 Antimicrobial compositions containing extracts of light enzymes from physarum species

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO781035L true NO781035L (no) 1978-09-29

Family

ID=10013545

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO781035A NO781035L (no) 1977-03-28 1978-03-22 T fremgangsmaate til fremstilling av et farmasoeytisk prepara

Country Status (20)

Country Link
JP (1) JPS542310A (no)
AT (1) AT363589B (no)
AU (1) AU519066B2 (no)
BE (1) BE865369A (no)
CA (1) CA1107646A (no)
DE (1) DE2813282A1 (no)
DK (1) DK134678A (no)
ES (1) ES468236A1 (no)
FI (1) FI780933A (no)
FR (1) FR2385730A1 (no)
GB (1) GB1576891A (no)
GR (1) GR71706B (no)
IE (1) IE46698B1 (no)
IL (1) IL54364A0 (no)
NL (1) NL7803291A (no)
NO (1) NO781035L (no)
NZ (1) NZ186783A (no)
PT (1) PT67826B (no)
SE (1) SE7803456L (no)
ZA (1) ZA781758B (no)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58134014A (ja) * 1982-02-03 1983-08-10 Rooto Seiyaku Kk 義歯洗浄用組成物
US4542020A (en) * 1984-08-17 1985-09-17 E. R. Squibb & Sons, Inc. Long-lasting adhesive antifungal suppositories
JPH0261164A (ja) * 1988-08-27 1990-03-01 Hisaka Works Ltd 処理槽への内槽装填・取り出し方法およびそれに用いる移載車。
JPH0261163A (ja) * 1988-08-27 1990-03-01 Hisaka Works Ltd 繊維材料取り出し方法およびそれに用いる装置
ATE212785T1 (de) * 1996-06-07 2002-02-15 Dsm Nv Verwendung einer fungiziden zusammensetzung als pflanzenschutzmittel

Also Published As

Publication number Publication date
FI780933A (fi) 1978-09-29
ATA215978A (de) 1981-01-15
FR2385730B1 (no) 1981-07-10
NL7803291A (nl) 1978-10-02
JPS542310A (en) 1979-01-09
GR71706B (no) 1983-06-21
NZ186783A (en) 1980-12-19
PT67826B (en) 1979-09-27
PT67826A (en) 1978-04-01
BE865369A (fr) 1978-09-28
AU3447978A (en) 1979-09-27
GB1576891A (en) 1980-10-15
ZA781758B (en) 1979-05-30
DK134678A (da) 1978-09-29
IE780623L (en) 1978-09-28
SE7803456L (sv) 1978-09-29
DE2813282A1 (de) 1978-10-12
AU519066B2 (en) 1981-11-05
AT363589B (de) 1981-08-10
ES468236A1 (es) 1978-12-01
IE46698B1 (en) 1983-08-24
CA1107646A (en) 1981-08-25
FR2385730A1 (fr) 1978-10-27
IL54364A0 (en) 1978-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
San-Blas et al. Host-parasite relationships in the yeastlike form of Paracoccidioides brasiliensis strain IVIC Pb9
EP0295956B1 (en) Use of a protein-bound polysaccharide for making a drug for treating AIDS.
US4062941A (en) Method for treating fungal infections using cell lytic enzymes
DE3688710T2 (de) Isolierung und pharmazeutische Verwendung von Hyaluronidase und diese enthaltende pharmazeutische und tierärztliche Präparate.
Ashby Macrophomina phaseoli (Maubl.) comb. nov., the pycnidial stage of Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butl
Kobayashi et al. Amphotericin B potentiation of rifampicin as an antifungal agent against the yeast phase of Histoplasma capsulatum
Kim et al. Production of soluble β-glucan from the cell wall of Saccharomyces cerevisiae
US4985543A (en) Lectins and antiretroviral drugs containing the lectins as active ingredient
DE69020979T2 (de) Neue Arginin-Deiminase, Verfahren zu ihrer Herstellung und ein Antikrebsmittel, das dieses Enzym als wirksamen Bestandteil enthält.
Hehre et al. Dextran-splitting anaerobic bacteria from the human intestine
Hirst The effect of a polysaccharide-splitting enzyme on streptococcal infection
Felton et al. Vitreous inhibition of tumor neovascularization
KR0149477B1 (ko) Hiv 활성의 저해제
US2797183A (en) Nystatin and method of producing it
CN107982285B (zh) 蝉花活性物质及其用于降低眼压的用途
NO781035L (no) T fremgangsmaate til fremstilling av et farmasoeytisk prepara
US4144327A (en) Antimicrobial composition comprising lytic enzymes from physarum and an antimycotic agent
US4328313A (en) Method of producing a plaque dispersing enzyme
EP0201332A2 (en) A substance having an anti-infective activity
JPH0662426B2 (ja) 腫瘍の血管新生を抑制するための治療薬
DE2048848A1 (de) Verfahren zur Herstellung eines Korn plexes aus RNS und Polysacchand, Verfahren zur Gewinnung der Polysacchand Komponente und ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln
EP0295961A2 (en) Polysaccharides and antiviral drug containing polysaccharides as active ingredient
Faergemann et al. Antimycotic activity of propane-1, 2-diol (propylene glycol)
Cooper Phialophora verrucosa and other chromoblastomycotic fungi
Sulkin et al. Effect of zymosan on bacteriophage clearance