DE2717979A1 - Staphylococcus-aureus-naehrbruehe - Google Patents

Staphylococcus-aureus-naehrbruehe

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DE2717979A1 DE19772717979 DE2717979A DE2717979A1 DE 2717979 A1 DE2717979 A1 DE 2717979A1 DE 19772717979 DE19772717979 DE 19772717979 DE 2717979 A DE2717979 A DE 2717979A DE 2717979 A1 DE2717979 A1 DE 2717979A1
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Description

1BERLIN33 8 MÜNCHEN
Augurta-VIktorla-StraS. « n ni|Crui/C i DADTKICD PieieenauertfraB·J P.t,Anw.Dr lnp.Ru.chk. Ul\ KUbCHKt & PAKTNEK P.t.-Am,. Dlpl.-tag.
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Staphylococcus-aureus-Nährbrühe
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-/- 27Ί7979
Die Erfindunn bezieht sinh auf ein Nährbrühenkulturmedium zur Bestimmunn von Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus (S.aureus) ist ein Mikroornanismus, der im Urin, in Abzessen usu. vorkommt. Das Vorhandensein dieses Mikroornanismus im Urin ist ein zuverlässiges Anzeichen für eine Infektion des Harntrakts. Wenn S.aureus in einer bestimmten Urinprobe vorhanden int, ist es ausserdem mönlich, daß E.coli, Streptococcus und andere ähnliche Organismen ebenfalls vorhanden sind.
Das KulturmedLim der Erfindunn ist ein verbessertes Kulturmedium, das zur V/er-Ljendunn in einem optischen Bestimtnunnssystem zur Analysierunn von Proben auf snezielle Hikroornanismen hin unter Ueruendunn eines Kunststoffbehälter oder einer Kunststoffkarte vornenehen ist, der bzuj. die eine Reihe von Trockenkulturmerljen in nesonderten aber miteinander verbundenen Zellen enthält, uobei jedes Kulturmedium für einen einzinen Mikroorganismus spezifisch ist. Ldenn die Probe in die Karte einneführt, mit den Kulturmedien in den Zellen vermischt und in einer Vorrichtung bebrütet uird, reaniert (reagieren) der in der Probe um vorhandene Ürnanismus (oder die Drnanismen) mit dem renenüber dem betreffenden Groanismus spezifischen Kulturmedium und führt (führnn) zu einer /'.nderunn in dem Medium, die von einer Vorrichtung ahnelesen uird und das Vorhandensein des betreffenden Organismus anzeigt. Zu einer Änderung in dem Kulturmedium rehört eine Änderung der Lichtdurchlässigkeitseioenschaften den Kulturmediums, d.h. eine Farbänrierunn oder eine Änderung der Trübung. Die Mnderunn kann durch me banalisehe Aktivität des Mikroorganismus heuirkt worden, die z.H. zur Bildunn von Säure und einer Änderunn des pH-Uerts führen knnn, bleiche eint? Farbünderunn bei einem pH-empfindlichen Indikator in dem Kulturmedium hervorruft. Die Änderunn der Lichtriurchlässinkeitseigenschaften des Knl"f;urmE?diiint3 knnn auch durch ein Präzipitat beuirkt uerden, das sich durch me-
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tRhnlische Aktivität des Organismus bildet, oder durch ein Wachstum des Urnanismus heriinnt sein.
Für die Ueruendunn in den nben Genannten Harten uornesehene spezifische Kulturmedien fördern alle jeweils das Uachstum υοη einem Mikroorganismus und hemmen das Wachstum von anderen Organismen, künnen nefriernetrocknet werden und können unter den Bedinnunnen einer niedrigen G -Konzentration in den Behältern der Karte funktionsfähin sein.
Positive Eroebnisse werden durch eine Anderunn der Farbe einer in dem Kulturmedium enthaltenen Indikatorlösunn annezeiot, uas zu einer einer Minderung der Uchl'.diirchlässiokeit des Kulturmediums Führt. Diese Anrierunn kann wan einem optischen Bestimmunnsmechanismus ahnelesen uerden. Der nesamte Test kann innerhalb von 12 bis 10 stunden beendet uerrien, uührenri derzeitine Bestimmunrsmethüden 36 bis ^B Utunden erfordern.
Die Erfindung schlänt ein fJährnrühenkulturmediuni zur üestinniunp won cJtpphylacaccus oureus uDr, das enthält
(a) eine stickstoffquelle,
(b) eine Kohlenstoffquelle,
(c) biologische Nührstoffiquellen,
(d) chemische Inhibitoren zur Hemmung des Wachstums von nrampositiv/en ürnanismen und Hefeornanismen und
(e) einen biolooischen Indikator, der DWA-Methylnrün und Vitamin Ü 12 in nenünender Menne enthält, sd daß das Kulturmedium in Genenuart von Staphylococcus aureus eine bläuliche Farbe annimmt.
(f) VorzunsLjeise enthält das Kulturmedium Mannit, Natriumchlorid, Haliumtellu-
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rit, Amphntericin B und Einen biologischen Indikator. DNA-Methylqrün uird als Farbindikator benutzt, und das Ziel ist, in Genenuart von Staphylococcus aureua eine bläuliche Farbe zu erhalten, uiobei eine benutzte automatische mikrobiologische Analysenvorrichtunn Blau abliest.
Das DNA-Methylgrün uird durch nachfolnende Zunabe einer Lösuno, die Supplement XW von Difco und Uitamin B 12 enthält, in ein rötliches Purpur umaeuandelt. Bei Zunabe von Supplement XU findet eine Aufhellung der qrünen Farbe statt, uaa wie angenommen uiird, durch ein reduzierendes Material bewirkt uird, und bei Zugabe von dem roten Uitamin B 12 ändert sich die Farbe des Kulturmediums zu einem rötliche Purpur.
Wenn Staphylococcus aureus zu diesem rötlich-purpurfarbenen Kulturmedium gegeben uird, greift dieser Mikroorganismus des DNA-Methylgrün an und uird ein bläuliches Purpur erhalten, uahrscheinlich aufgrund einer Reaktion von dem Methylgrün mit einem Protein oder einem anderen großen Körper in dem Kulturmedium. Normalerweise ändert sich die Farbe des Kulturmediums in einem Staphylococcus und DIMA-Methylgrün enthaltenden Reaktionsgemisch von Grün zum Farblosen.
Kaliumtellurit und Amphotericin B uerden benutzt, um gramnegative Organismen und gegebenenfalls Hefe zu hemmen.
Die Bestimmungsbrühe enthält vorzugsweise 7,ο bis 39,ο % Nährstoffe, etwa o,o55 bis etwa o,17 % eines Indikators, der das positive Wachstum von Staphy- i lococcus aureus-ürganismus anzeigt, etua 1,o bis etwa 3,o ml/1 Kaliumtellurit (einer 1%ioen Stammlösung), das als biologischer Inhibitor uirkt, um das Wachen turn gramnegativer Organismen zu hemmen, etwa 3 /ug/ml bis etua **o /Ug/ml Ampho-·
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-G-
tericin O, das als biolanischer Inhibitor uirkt, um das üJachstum von Hefe zu hemmen, etua 75 bis etwa 95 n/l Natriumchlorid, um eine erhöhte Selektivität für Staphylococcus aureus zu schaffen. Natriumchlorid uirkt außerdem derart, daß es dar LJachstum von Staphylococcus epidermidis und Streptococcus faecalis hemmt.
Der Nährstoffteil des Kulturmediums enthält etwa o,25 bis etwa 1,5 o/l Uracil, etwa 5,o bis etua 3o,o n/l Mannit, etua Z,α bis etwa 7,5 n/l Proteose-Pepton Nr. 3, etuia 2,α bis etua 1o,o n/l Hefeextrakt, etwa 5,o bis etwa kata ml/1 Supplement D, etwa 3o,o bis etuja 15o,o ml/1 kaliumoxaliertes Kaninchenplasma und etiua 3o,a bis etwa 15o,o ml/1 Kaninchenserum.
Ein neeiqneter Ersatz für Proteose-Pepton IMr. 3 ist irgendein Pepton, das in herkömmlichen Nährbrühenkulturmedien verwendet uird, oder irgendeine geeignete Stickstoffquelle.
Zueck des Uracils ist, das LJachstum von Staphylococcus aureus unter den Bedingungen nerinner Sauerstoffkonzentration zu fördern, die in den Karten herrschen, uelche in dem Mechanismus der automatischen mikrobiologischen Analysenvorrichtung verwendet werden. Zweck des Mannits ist, eine Kohlenstoffquelle für Staphylococcus aureus zur Verfügung zu stellen. Es ist von Bedeutung, daß das Kulturmedium reich an Nährstoffen ist, um ein schnelles Wachstum von S.aureus zu ermöglichen.
Ein bedeutender Aspekt der Erfindung ist die LJirkuno der chemischen Inhibitoren, Kaliumtellurit, Natriumchlorid und Amphotericin 3. Diese Inhibitoren wirken in der Ueise, daß sie das LJachstum von anderen Organismen als Staphylococcus au-
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hemmen.
Dns oJachGtum vnn Arten nramnoqativer ürnanismen, Hefen, Staphylococcus epidernidis, Streptococcus faecalis und anderen Omanismen, die zu einem hohen Wert positiver Ernehnisse bei herkümmlinhen Destimmunnsmethoden führen, ujird durch das Uorhandensein der vorstehenden chemischen Inhihitoren in dieser IMährbrühe nehemmt.
Die Konzentration vnn Kaliumtellurit (T,6ine Stammlösunn,) kann von etwa 1,o ':is etuja 3,ο ml/1 betragen, und die wirksamste Konzentration davon ist 2,α ml/1.
Die Konzentration von Amphotericin B kann etwa 25oo bis etwa 2o ooo ,un/1 betranen, und diese Komponente ist am wirksamsten bei einer Konzentration von 5oon ,un/1.
Die Konzentration von Natriumchlorid kann etwa 75 bis etua 95 n/l betranen, line) die uiirksamste Konzentration davon ist Ba n/l. LJenn die Konzentration irncndeines Inhibitors zu niedrin ist, werden höhere LJerte von unerwünschten falschen positiven Ernebnissen erhalten. Uenn die Konzentration zu hoch ist, werden nerinr-ere 'oJerte von positiven Ernebnissen erhalten.
Ueisniel 1
Zur Herstelluno eines 2X-Ki'lturmediums in einer Menne von 1oo ml wird eine Gtaphylncocciis aureus-üestirnmunnsnährhrühe wie folnt formuliert:
hl ml destilliertes Wasser werden in einen Meßzylinder einnetragen. Die Hälfte vnn dienen destillierten LJasser wird bis zum Sieden erwärmt, und o,1 q Uracil w'rri darin nelüst. Das uhriqe destillierte Uasser wird zu der Uracillösunci pe-
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neben. *t ml Supplement D van Difco, 1,o ml von 1ooo ,un/ml-Stammlösunn von Amphotericin D und 16 η Natriumchlorid werden zu der Lüsunr nenehen. Die Lü-Gunn uiird hei ^o C nerührt, his das Natriumchlorid nelöst ist. 2,ο π Mannit, 1,o π Proteose-Pepton Nr. 3 (von Difco), 1,o η Hefeextrakt (von HBL)1 o,U ml einer Taigen Stammlösunn vnn Kaliumtellurit werden zu der Läsunn neneben, und der pH-Uert wird auf 7,7 einnestellt. Die Lösung wird filtersterilisiert und in einem bedeckten Gehälter für PM Stunden in einem kalten (2 C) Raum aufbewahrt.
5a mn DNA-Methylnrün werden zu 2o ml destilliertem LJasser neoeben und in einem bedeckten Behälter für ?M Stunden in einem kalten (2 C) Raum oerührt.
Die DIMA-Methylnrünlüsunn wird mit der rjHhrstoff-Inhihitor-Lc;sunp in einem bedeckten Behälter vereinint. 1o,o ml kaliumoxaliertes Kaninchenplasma, 1o,o ml Kaninchenserurn und n,o5 η Supplement XU (von Difco) uerden zu dem Gemisch nepeben. Das Gemisch uirri dann für 1n Minuten nerührt.
0,o ml einer leinen Stammlösunn vnn Vitamin B 12 werden zu der Lüsunn neneben. (Die 1?jine Gtammlösunn von Vitamin El 12 wird durch Vermischen von o,1 π Vitamin B 12, 9,2 ml destilliertem Wasser und 0,6 ml 1 N Natriumhydroxid hernestellt. Das Gemisch uird für 1o Minuten nerührt. Der pH-LJert der ütaninlcJsunn uird auf θ,ο einnestellt.) Vitamin B 12 muG zuletzt zunereben werden. Der pH-Wert der Brühe wird dann auf 7,5 einnestellt, und danach wird die Hrühe zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wird in einen sterilen Behälter genossen und dann aufbewahrt. Das Kulturmedium hat die doppelte (2X) der üblichen Konzentration zur Verwendung in den Behältern und Karten für eine automatische
mikrobiolooische Analysiervorrichtunn. ' /
Dr.Ve./ho
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Claims (1)

  1. Patentansprüche
    fJährbrühenktilturmedium zur Elestimmunn von Staphylococcus aureus, dadurch gekennzeichnet, daD das Kulturmedium enthält
    (a) eine Stickstoffquelle,
    (h) eine Kohlenstoffquelle,
    (c) biologische Währstoffquellen,
    (d) chemische Inhibitoren zur Hemmunn des Wachstums von qramneqativen ürganismen und Hefeorqanismen und
    (e) einen hiolonischen Indikator, enthaltend DI\IA-Methylqrün und Vflamin B 12, in nenünender Kenqe, so daß das Kulturmedium in Gegenuart von Staphylococcus aureus eine bläuliche Farbe annimmt.
    2. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Stickstoffquelle Uracil ist.
    3. Kulturmedium nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es etue o,25 bis etwa 1,5 n/l Uracil enthält.
    Ί. Kulturmedium nach Anspruch 1, 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Kohlenstoffquelle Mannit ist.
    5. Kulturmedium nach Anspruch '», dadurch gekennzeichnet, daß es etua 5 bis etuia 3o g/l Mannit enthält.
    fi. Kulturmedium nach einem der vorheroehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es das anorganische Salz Natriumchlorid enthält.
    ORIGINAL INSPECTEO
    I-/- 271797S
    7. Kulturmedium nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es etua 75 bis etua 95 n/l l\iatriumchlorid enthält.
    0. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es Kaliumtellurit als nramnenativen Inhibitor enthält.
    9. Kulturmedium nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß es etua at1 bis etua o,3 o/l Kaliumtellurit enthält.
    10. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Hefeornanismus-Inhibitor Amphotericin B ist.
    11. Kulturmedium nach Anspruch 1o, dadurch gekennzeichnet, daß es etwa 25oo bis etua 2o ooo Mikronramm/1 Amphotericin ti enthält.
    12. Kulturmedium nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch r)e''firtnzeicb~ net, daß es Stipllement XV und vitamin B12 enthält.
    13. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Je Liter des Kulturmediums enthält
    (a) etua o,2 bis etua 1,5 q Uracil,
    (b) etua 5 bis etwa 3o π Mannit,
    (c) etua 2 bis etua 7,5 η Proteose-Pepton Nr. 3
    (d) etua 2 bis etwa 1o η Hefeextrakt,
    (e) etua 5 bis etua Ία ml Supplement B1
    (f) etua 75 bis etua 95 π Natriumchlorid,
    (g) etua o,1 bis etua o,3 η Kaliumtellurit,
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    (h) etua 25oD bis etua 2o ααα Mikroqramm Amphotericin B,
    (i) etua 3o bis etua 15α ml kaiiumoxaliertes Kaninchenplasma,
    (j) etua 3a his etua 15a ml Kaninchenserum,
    (k) etua 2aa bis etua ^oo ma DNA-Methylgrün,
    (1) etua α,15 bis etua α,5 α Supplement XU und
    (m) etua o,2 bis etua a,G Vitamin B12, und daß
    (n) das Kulturmedium einnn pH-Wert von etua 7,5 hat.
    1't. Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch Gekennzeichnet, daß es je Liter des Kulturmediums enthält
    (a) o,5 π Uracil,
    (b) 1o π Mannit,
    (c) 5 π Proteose-Pepton Mr. 3
    (d) 5 η Hefeextrakt,
    (e) 2n ml Supplement B1
    (f) 8α η Natriumchlorid,
    (n) o,2 η Kaliumtellurit,
    (h) 5aocj Kdkronramm Amphotericin B,
    (i) 5o ml kaliumocaliertes Kaninchenplasma,
    (j) 5o ml Kaninchenserum,
    (k) 25o mn DNA-Methylqrün,
    (1) o,25 η Supplement XU und
    (m) ο,ί» η Vitamin B 12, und daß
    (n) das Kulturmedium einen pH-LJert von etua 7,5 hat.
DE2717979A 1976-05-03 1977-04-21 Kulturbrühe zur Bestimmung von Staphylococcus aureus Expired DE2717979C3 (de)

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DE2717979A1 true DE2717979A1 (de) 1977-11-17
DE2717979B2 DE2717979B2 (de) 1980-02-21
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