DE2615092A1 - Verfahren zur quantitativen bestimmung von antigenen substanzen und testpackung zur durchfuehrung des verfahrens - Google Patents

Verfahren zur quantitativen bestimmung von antigenen substanzen und testpackung zur durchfuehrung des verfahrens

Info

Publication number
DE2615092A1
DE2615092A1 DE19762615092 DE2615092A DE2615092A1 DE 2615092 A1 DE2615092 A1 DE 2615092A1 DE 19762615092 DE19762615092 DE 19762615092 DE 2615092 A DE2615092 A DE 2615092A DE 2615092 A1 DE2615092 A1 DE 2615092A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
antibody
antigenic substance
antigen
amount
determined
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19762615092
Other languages
English (en)
Other versions
DE2615092C2 (de
Inventor
Kenji Chichibu
Kiyoshige Wakabayashi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication of DE2615092A1 publication Critical patent/DE2615092A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2615092C2 publication Critical patent/DE2615092C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/82—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a precipitate or turbidity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/805—Optical property
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Description

"Verfahren zur quantitativen Bestimmung von antigenen Substanzen und Testpackung zur Durchführung des Verfahrens"
Priorität: 10. April 1975, Japan, Hr. 42803/75
Die Erfindung betrifft den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.
Die Bestimmung von antigenen Substanzen, wie Imtnunoglobulin, Albumin, Ot1-Antitrypsin, Transferrin, Haptoglobin und Komplementkomponenten, spielt bei der Diagnose und Behandlung von verschiedenen Krankheiten eine wichtige Rolle.
Zur quantitativen Bestimmung dieser Substanzen sind Verfahren bekannt, die sich der einfachen Diffusion in Platten oder Röhrchen bedienen. Die einfache Diffusion in Platten wird im allgemeinen
609842/07 7 6
durchgeführt, indem man eine Trägerplatte aus Agargel herstellt, die einen für eine zu bestimmende antigene Substanz (Antigen) spezifischen Antikörper enthält, die antigene Substanz
in ein kleines Loch in der Gelplatte bringt, die Platte bei einer bestimmten Temperatur für eine bestimmte Zeit stehenläßt, um eine Diffusion der antigenen Substanz durch die Gelplatte und eine Reaktion mit dem Antikörper zu ermöglichen, und die Größe des iings um das Loch gebildeten weißen Präzipitatrings (Reaktionsprodukt) mißt.
Die einfache Diffusion in einem Röhrchen wird durchgeführt, indem man eine antigene Substanz auf ein in einem Glasröhrchen befindliches Agargel, das einen Antikörper enthält, bringt. Innerhalb dieses Röhrchens reagiert dann das Antigen mit dem Antikörper. Bei diesem Verfahren diffundiert das Antigen in das Gel von oben nach unten und bildet eine scharfe Präzipitatbande (Reaktionsprodukt). Die Bewegung der Bande kommt an der Stelle zum Stillstand, wo das System seinen Gleichgewichtszustand erreicht. Die Antigenmenge wird bestimmt, indem man den Abstand zwischen dem oberen Ende des Gels und der endgültig gebildeten Bande mißt.
Diese Verfahren haben jedoch den Fachteil, daß für die Diffusion und die Beendigung der Reaktion eine lange Zeit erforderlich ist, im allgemeinen 1 bis 2 Tage. Ferner ist eine weitere Zeitspanne" von 1 bis 2 Tagen abzuwarten, wenn die Probe das Antigen in einer
609842/0776
Menge enthält, die über dem einwandfrei meßbaren Bereich liegt. Außerdem ist es bei Anwendung dieser Verfahren nicht einfach, genaue Werte zu erhalten, da die Bestimmung durch visuelle Beobachtung mit Hilfe eines Vergrößerungsglases durchgeführt wird.
Ferner ist zusätzlich zu den vorgenannten Verfahren auch ein turbidimetrisches Verfahren bekannt. Bei diesem Verfahren wird die Beziehung zwischen den Mengen an Antigen und Präzipitat ausgenützt. Dieses Verfahren beruht auf der Tatsache, daß man bei der Präzipitationsreaktion zwischen einem Antigen und einem Antikörper bei konstanter Antigenmenge eine in Fig. 1 gezeigte Kurve erhalten kann. Obgleich die Antigenmenge gemäß diesem Verfahren durch Trübungsmessung des Reaktionsgemisches bestimmt werden kann,' ist eine Bestätigung der tatsächlichen Menge notwendig (X im Antigen-Mangelbereich und Y im Antigen-ÜberSchußbereich), da der Trübungswert für das Antigen zwei Werte liefert, nämlich X und Y. Dieser Test wird hier als "Bestätigungstest" bezeichnet. Aufgrund dieser Tatsache ist dieses Verfahren nicht dazu geeignet, eine große Anzahl von Proben innerhalb einer beschränkten Zeit zu untersuchen.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von äntigenen Substanzen zur Verfügung zu stellen, bei dem die vorgenannten Nachteile vermieden werden und das für eine einfache und genaue Bestimmung der Menge an antigener Substanz geeignet ist, ohne daß ein Bestätigungstest erforder-
ll0hiSt· ' 609842/0776
Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß man eine zu untersuchende Probe mit einer getrennt hergestellten, exogenen, antigenen Substanz, die mit der zu bestimmenden antigenen Substanz identisch ist, in einer zur Erzielung der maximalen Präzipitation bei der Umsetzung mit dem verwendeten Antikörper ausreichenden Menge oder in einer im Verhältnis dazu leicht überschüssigen Menge versetzt, das erhaltene Gemisch zur Auslösung der Antigen-Antikörper-Reaktion mit einem für die zu bestimmende antigene Substanz spezifischen Antikörper versetzt und die Menge des gebildeten Präzipitats turbidimetrisch bestimmt.
Erfindungsgemäß wird die Menge an antigener Substanz unter ausschließlicher Verwendung der Kurve im Überschußbereich an antigener Substanz verwendet, d.h. die letzte Hälfte der in Fig. 1 gezeigten Standardkurve ausgehend vom Punkt Z. Somit ist es nicht notwendig, einen "Bestätigungstest" durchzuführen.
In der Praxis wird das erfindungsgemäße Verfahren folgendermaßen durchgeführt: Sin Antikörper und eine Probe mit einem Gehalt an antigener Substanz werden getrennt mit einem Puffer, beispielsweise Phosphatpuffer, Tris-HCl-Puffer oder Veronalpuffer, die jeweils Kochsalz enthalten, auf Konzentrationen verdünnt, die jeweils für die Antigen-Antikörper-Reaktion und für die anschließende turbidimetrische Messung der Probe geeignet sind. Die getrennt hergestellte, exogene, antigene Substanz ' wird ebenfalls mit dem gleichen Puffer auf eine Konzentration
609842/0776
verdünnt, bei der eine Messung leicht durchführbar und eine maximale Präzipitation erzielbar ist. Die verdünnte antigene Substanz wird mit verdünnter exogener, antigener Substanz versetzt. Das erhaltene Gemisch wird mit verdünntem Antikörper vermischt, worauf die Antigen-Antikörper-Reaktion bei Temperaturen von 10 bis 40 C, vorzugsweise 20 bis 37°C, eine vorbestimmte Zeit stattfindet. Die Menge an antigener Substanz kann turbidimetrisch bestimmt werden, indem man die Menge an Präzipitat mißt und mit einer vorher erhaltenen Standardkurve vergleicht. Bei der Aufstellung der Standardkurve werden die gleichen Antikörper- und Standardantigenlösungen von verschiedenen bekannten Konzentrationen verwendet.
Dieses Verfahren läßt sich auf alle Arten von antigenen Substanzen anwenden, beispielsweise auf Immunoglobuline, wie IgG-, IgA und IgM, Albumin, tf-i -Antitrypsin, Transferrin, Haptoglobin und Komplementkomponenten, wie die Komplementkomponente C-,.
Das Diagramm von Fig. 1 zeigt die Beziehung zwischen den Mengen an der zu bestimmenden antigenen Substanz und dem gebildeten Präzipitat unter Verwendung eines herkömmlichen turbidimetrischen Verfahrens. Dabei ist die Konzentration des Antikörpers, der mit der antigenen Substanz reagiert, konstant.
Die Diagramme der Fig. 2 bis 8 zeigen Standardkurven zur Bestimmung von IgG, IgA, IgM, den Komplementkomponenten C,,Haptoglobin, Transferrin bzw. α^-Antitrypsin.
609842/0776
Durch das erfindungsgemäße Verfahren gelingt eine einfache und genaue quantitative Bestimmung von antigenen Substanzen in kurzer Zeit.
Für praktische Zwecke ist es möglich, das erfindungsgemäße Verfahren unter Verwendung einer Testpackung anzuwenden. Die Erfindung betrifft somit auch eine Testpackung, die aus folgenden Bestandteilen besteht:
(a) Eine Pufferlösung zur Verdünnung der zu bestimmenden Probe,
(b) eine getrennt hergestellte exogene, antigene Substanz in einer ausreichenden Menge, um bei der Reaktion mit dem Antikörper die maximale Fällung zu ergeben,
(c) eine Antikörperlösung, die auf eine zur Antigen-AntikörperReaktion geeignete Konsentration verdünnt ist und
(d) eine Reihe von Standardlösungen der antigenen Substanz, die jeweils verschiedene, bekannte Mengen an antigener Substanz enthalten.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
In Reagenzgläschen werden jev^eils 0,95 ml Serum, das 11 Wg IgG-
^ gegeben
(exogene, antigene Substanz) enthalt,/. Diese Menge an IgG- ergibt bei der Reaktion mit dem Antikörper die maximale Präzipitatinenge. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit unterschiedlichen, bekannten Mengen an IgG und .jeweils mit 1 ,0 ml
B0S842/0776
verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 60-fache Volumen verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches in den einzelnen Röhrchen beträgt jeweils 2 ml. Das Gemisch wird 30 Minuten bei 37°C stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz IgG und dem gebildeten Präzipitat ist in Fig. 2 zu sehen.
Beispiel 2
30 Proben von jeweils 0,1 ml Humanserum, das mit Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 80-fache verdünnt ist, werden jeweils mit 0,9 ml (entsprechend 110 ^ug) IgG (exogene, antigene Substanz) versetzt und gründlich vermischt. Aus den Röhrchen werden jeweils 0,1 ml Gemisch entnommen und mit 1,0 ml auf das 60-fache mit dem gleichen Puffer verdünntem Antikörper und 0,9 ml Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7j4 versetzt. Man läßt die Antigen-Antikörper-Reaktion bei 260C eintreten. Nach 30 Minuten wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Beim Vergleich der Ergebnisse mit dem Diagramm von Beispiel 1 ergibt sich als Durchschnittswert der 30 Proben ein Wert von 1307 mg/dl, was dem Normalwert von gesunden Personen entspricht.
Zur Ausbeutebestimmung wird eine Probe aus dem 30 Humanserumproben verwendet und mit bekannten Mengen an IgG versetzt. Die Ergebnisse sind in folgender Tabelle zusammengestellt.
60 9842/07 7 6
IgG zugesetzt (mg/dl)
O 525
1 050
2 100
Tabelle
berechnet (mg/dl)
2 685
3 210
4 260
gefunden Ausbeute*
mg/dl (*)
2 160 _
2 800 104
3 280 102
4 200 99
* Ausbeute
gefundener Wert berechneter Wert
χ 100
Beispiel 3
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml "verdünntes Serum mit einem Gehalt an 1 7 ,ug IgA (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt die maximale Präzipitatmenge bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper) gegeben. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit unterschiedlichen, bekannten Mengen an IgA und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 20-fache Volumen verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37 0 stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz IgA und dem gebildeten Präzipitat ist in Fig. 3 gezeigt.
609842/0776
Bei der Ausbeutebestimmung gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse»
Beispiel 4
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml verdünntes Serum mit einem Gehalt an 25 p-g IgM (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge) gegeben. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit unterschiedlichen, bekannten Mengen an IgM und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Veronalpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 30-fache Volumen verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37°G stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz IgM und dem Präzipitat ist in Fig. 4 gezeigt.
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse.
Beispiel 5
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml verdünntes Serum mit einem Gehalt an 18^g Komplementkomponente C^ (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge) gegeben,
609842/0776
Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit unterschiedlichen,, bekannten Mengen an der Komplementkomponente C, und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 20-fache verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37°C stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der antigenen Substanz Komplernen tkomponente C, und dem gebildeten Präzipitat ist in Fig. 5 gezeigt.
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse.
Beispiel 6
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml verdünntes Serum mit einem Gehalt an 15 Pg Haptoglobin (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die mariraale Präzipitatmenge) gegeben. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standard!- sierte antigene Substanz) mit einem Gehalt an unterschiedlichen, bekannten Mengen an Haptoglobin und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 20-fache Yolumen verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37°C
609842/0776
stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz Haptoglobin und dem gebildeten Präzipitat ist in Pig. 6 gezeigt.
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse.
Beispiel 7
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml verdünntes Serum mit einem Gehalt an 14· ,Ug Trans f err in (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge) gegeben. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit unterschiedlichen, bekannten Mengen an Transferrin und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7»4 auf das 60-fache Volumen verdünnt ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37°C stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz Transferrin und dem gebildeten Präzipitat ist in Fig. 7 gezeigt.
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse.
609842/0776
Beispiel 8
30 Proben von jeweils 0,1 ml mit 0,001 m Phosphatpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 20-fache verdünntem Humanserum werden in Teströhrchen mit 1,0 ml (entsprechend 14 /ig) Transferrin (exogene, antigene Substanz) versetzt und gründlich vermischt. Sodann wird" das Gemisch mit 1,0 ml mit der gleichen Pufferlösung auf das 60-fache verdünntem Antikörper versetzt und die Antigen-Antikörper-Reaktion bei 37°C hervorgerufen. Nach 60 Minuten wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Ergebnisse werden mit dem gemäß Beispiel 7 erhaltenen Diagramm verglichen. Als Mittelwert der 30 Proben ergibt sich ein Wert von 291 mg/dl, was dem Normalwert für gesunde Personen entspricht
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 wird eine willkürlich gewählte. Probe aus den 30 Humanserumproben verwendet. Man erhält gute Ergebnisse.
Beispiel 9
In Teströhrchen werden jeweils 0,95 ml verdünntes Serum mit einem Gehalt ah 28 ;ug oc-i-Antitrypsin (exogene, antigene Substanz; diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge) gegeben. Die einzelnen Röhrchen werden jeweils mit 0,05 ml Standardserum (standardisierte antigene Substanz) mit einem Gehalt an unterschiedlichen, bekannten Mengen an cCj-Antitrypsin und jeweils mit 1,0 ml verdünntem Antiserum (Antikörper), das mit 0,001 m Veronalpuffer-Kochsalzlösung vom pH-Wert 7,4 auf das 20-fache Volumen verdünnt
609842/0776
ist, versetzt. Das Gesamtvolumen des Gemisches beträgt jeweils 2,0 ml. Das Gemisch wird jeweils 1 Stunde bei 37°C stehengelassen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt. Die Beziehung zwischen der bestimmten antigenen Substanz Ou-Antitrypsin und dem gebildeten Präzipitat ist in Fig. 8 gezeigt.
Beim Ausbeutetest gemäß Beispiel 2 erhält man zufriedenstellende Ergebnisse.
Beispiel 10 -Herstellung einer Testpackung zur quantitativen Bestimmung von
Die Testpackung wird folgendermaßen hergestellt:
(a) Röhrchen mit Pufferlösung: 0,99 ml 0,001 m VeronalpufferKochsalzlösung vom pH-Wert 7,4.
(b) Röhrchen mit exogenem IgG: 0,98 ml Antiserum mit einem Gehalt an 11 ^g IgG. Diese Menge ergibt bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge
(c) Flasche mit Antikörper: Antiserum, das mit 0,001 m Veronalpuff er vom pH-Wert 7,4 auf eine für die Antigen-Antikörper-
Reaktion geeignete Konzentration verdünnt ist.
(d) Eine Reihe von Standard-IgG-Lösungen: Seren, die IgG in Mengen von 2, 4, 6, 8 bzw. 10yUg/0,02 ml enthalten.
Diese Testpackung kann folgendermaßen verwendet werden: 0,01 ml Probe wird in das Röhrchen mit der Pufferlösung (a)
609842/0776
Gemisches gegeben und gründlich -vermischt. Anschließend werden 0,02 ml des / in das Röhrchen mit dem exogenen IgG (b) gegeben. Sodann wird 1 ml aus dem Fläschchen mit Antikörper (c) entnommen und in das das Gemisch enthaltende Röhrchen gegeben. Man läßt die Antigen-Antikörper-Reaktion 60 Minuten bei 37°C ablaufen. Anschließend wird die Trübung turbidimetrisch bestimmt.
Das gleiche Verfahren wird unter Verwendung des Standardpuffers anstelle der Probe durchgeführt. Mit Hilfe der so gewonnenen Eichkurve wird die Menge an IgG bestimmt.
609842/0776

Claims (3)

  1. Patentansprüche
    Verfahren zur quantitativen Bestimmung von antigenen Substanzen, dadurch gekennzeichnet} daß man eine Probe mit einer getrennt hergestellten, exogenen, antigenen Substanz, die mit der zu bestimmenden antigenen Substanz identisch ist, in einer solchen Menge versetzt, daß bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper eine maximale Präzipitation erreicht wird, das erhaltene Gemisch zur Auslösung der Antigen-Antikörper-Reaktion mit einem für die zu bestimmende antigene Substanz spezifischen Antikörper versetzt .und die gebildete Präzipitatmenge turbidimetrisch bestimmt.
  2. 2. Verfahren zur quantitativen Bestimmung von antigenen Substanzen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Immunoglobulin G- (IgG), Immunoglobulin A (IgA), Immunoglobulin M (IgM), Albumin, o(^-Antitrypsin, Transferrin, Haptoglobin oder Komplementkomponenten bestimmt.
  3. 3. Testpackung,g ekennzeichnet durch
    (a) eine Pufferlösung zur Verdünnung der zu bestimmenden Probe,
    (b) eine getrennt hergestellte, exogene, antigene Substanz in einer solchen Menge, daß bei der Reaktion mit dem verwendeten Antikörper die maximale Präzipitatmenge erzielt wird,
    (c) eine Antikörperlösung, die auf eine für die Antigen-Antikörper-Reaktion geeignete Konzentration verdünnt ist, und
    609842/0776
    (d) eine Reihe von Standardlösungen mit antigener Substanz,
    die jeweils unterschiedliche, bekannte Mengen an antigener Substanz enthalten.
    4-. Testpackung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie als antigene Substanz Immunoglobulin G- (IgG-), Immunoglobulin A (IgA), Immunoglobulin M (IgM), Albumin, tf-j-Antitrypsin, Transferrin, Haptoglobin und Komplementkomponenten enthalten.
    609842/0776
    Leerseite
DE2615092A 1975-04-10 1976-04-07 Verfahren zur quantitativen Bestimmung von antigenen Substanzen und Reagenz zur Durchführung des Verfahrens Expired DE2615092C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP50042803A JPS605899B2 (ja) 1975-04-10 1975-04-10 免疫化学的定量法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE2615092A1 true DE2615092A1 (de) 1976-10-14
DE2615092C2 DE2615092C2 (de) 1985-02-21

Family

ID=12646111

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2615092A Expired DE2615092C2 (de) 1975-04-10 1976-04-07 Verfahren zur quantitativen Bestimmung von antigenen Substanzen und Reagenz zur Durchführung des Verfahrens

Country Status (6)

Country Link
US (1) US4091089A (de)
JP (1) JPS605899B2 (de)
DE (1) DE2615092C2 (de)
FR (1) FR2307270A1 (de)
GB (1) GB1508104A (de)
SE (1) SE7604242L (de)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4184849A (en) * 1977-12-05 1980-01-22 Technicon Instruments Corporation Mixed agglutination
DE3212658A1 (de) * 1982-04-05 1983-10-06 American Hospital Supply Corp Verfahren zur antigen-bestimmung
US4618589A (en) * 1980-07-16 1986-10-21 The University Of Birmingham Immunoprecipitation assay of immunoglobulins using monoclonal antibodies

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4178359A (en) * 1976-10-12 1979-12-11 Hoffmann-La Roche Inc. Immunoassay method
US4294817A (en) * 1977-11-25 1981-10-13 International Diagnostic Technology, Inc. Method of fluoro immunoassay
US4163779A (en) * 1978-01-09 1979-08-07 International Diagnostic Technology, Inc. Test for quantitation of immunoglobulin and identification of abnormal immunoglobulin
US4459361A (en) * 1982-06-04 1984-07-10 Angenics, Inc. Ligand assay with one or two particulate reagents and filter
JPS60188846A (ja) * 1984-03-08 1985-09-26 Hitachi Ltd 自動分析方法
US4925788A (en) * 1986-10-24 1990-05-15 Immunicon Corporation Immunoassay system and procedure based on precipitin-like interaction between immune complex and Clq or other non-immunospecific factor
FR2665378B1 (fr) * 1990-08-03 1992-10-09 Guigan Jean Dispositif pour separer par centrifugation deux phases d'un echantillon d'un liquide heterogene, utilisable notamment pour la separation du plasma du sang total.
US5679309A (en) * 1995-12-14 1997-10-21 Beckman Instruments, Inc. Automated random access analyzer
WO2002039114A2 (en) * 2000-11-13 2002-05-16 Sigma-Aldrich Co. Improved assay and reagents or immunological determination of analyte concentration
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
CN1307422C (zh) * 2005-01-31 2007-03-28 上海市血液中心 一种质控品稀释液及其形成的质控品
CN104407159B (zh) * 2014-12-15 2016-03-02 山东博科生物产业有限公司 一种免疫球蛋白IgM免疫比浊法检测试剂盒

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3284434A (en) * 1960-08-29 1966-11-08 Univ Kansas State Protein isolation and preparations
US3901654A (en) * 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Clin.Chem., Vol. 20, No. 8, 1974, S. 1055-1061 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4184849A (en) * 1977-12-05 1980-01-22 Technicon Instruments Corporation Mixed agglutination
US4618589A (en) * 1980-07-16 1986-10-21 The University Of Birmingham Immunoprecipitation assay of immunoglobulins using monoclonal antibodies
DE3212658A1 (de) * 1982-04-05 1983-10-06 American Hospital Supply Corp Verfahren zur antigen-bestimmung

Also Published As

Publication number Publication date
US4091089A (en) 1978-05-23
FR2307270A1 (fr) 1976-11-05
SE7604242L (sv) 1976-10-11
DE2615092C2 (de) 1985-02-21
FR2307270B1 (de) 1979-07-20
GB1508104A (en) 1978-04-19
JPS51118826A (en) 1976-10-19
JPS605899B2 (ja) 1985-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3852117T2 (de) Immunoassay mit Verwendung von nichtmetallischen, kolloidalen Teilchen.
DE2615092A1 (de) Verfahren zur quantitativen bestimmung von antigenen substanzen und testpackung zur durchfuehrung des verfahrens
DE3618101C2 (de)
DE2262413A1 (de) Direkte radioimmunpruefung auf antigene und ihre antikoerper
DE2811537A1 (de) Empfindlicher quantitativer assay
DE2633877A1 (de) Verfahren zur immunpruefung auf antigene in fester phase
DE2651139C3 (de) Reagens zur Durchführung eines Direktagglutinationstests zum Schwangerschaftsnachweis und Verfahren zu seiner Herstellung
DE2737491A1 (de) Verfahren zur bestimmung eines immunologisch aktiven materials und system zu seiner durchfuehrung
DE2602068C2 (de) Reagens zur Unlöslichmachung eines Antigen/Antikörper-Komplexes
DE2900546C3 (de) Verfahren zum Standardisieren einer markierten Bindungskomponente, welche in einem spezifischen Bindungstest-Verfahren mit einem Liganden reagiert, gegen einen Liganden-Referenzstandard und Verwendung der standardisierten markierten Bindungskomponente in spezifischen Bindungstest-Verfahren
DE3022681C2 (de)
DE69523027T2 (de) Kalibrierung und Prüfung von Immunoassays zur Verminderung von Störungen
EP0671006B1 (de) Immunologischer schnelltest zur optischen bestimmung von progesteron in flüssigkeiten
DE3688072T2 (de) Immuntestverfahren und satz.
DE2551576C3 (de) Träger für immunochemische Messungen
DE3533671A1 (de) Verfahren zur beschleunigung einer antigen-antikoerper-reaktion
DE68907365T2 (de) Verfahren zur Bestimmung des Vorhandenseins leichter Ketten in Urinproben, Komplex von Vorbereitungen zur Erledigung des Verfahrens und damit verbundenes Reagenz.
CH645727A5 (de) Praeparat zur bestimmung von menschlichem beta-2-mikroglobulin, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung.
DE1617734B1 (de) Verfahren zur Herstellung eines immunologischen Reagens
DE2827250C2 (de) Latexreagenz aus einem mit Steroid- Serumalbumin-Konjugat sensibilisierten Polymerlatex und Verfahren zur Herstellung dieses Latexreagenz
EP0034301B1 (de) Verfahren zur Bestimmung von Immunkomplexen
DE1954728C3 (de) Pufferlösung zur Verwendung in einem Hämagglutinationstest
DD214000A5 (de) Verfahren zur bestimmung von igg
DE602004002902T2 (de) Immuntest - Verfahren und Vorrichtung, welche zum Nachweis von Zonenphänomenen dient unter Verwendung einer Fourier-Transformation.
DE2746100A1 (de) Verfahren zur bestimmung von fibrinogenabbauprodukt in menschlichem serum oder urin

Legal Events

Date Code Title Description
8110 Request for examination paragraph 44
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee