DE2505887C3

DE2505887C3 - Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen Enzympraparates

Info

Publication number: DE2505887C3
Application number: DE19752505887
Authority: DE
Inventors: Hans Dr. 5158 Horrem Betzing; Dac Dr. 5000 Koeln Lekim
Original assignee: A Nattermann & Cie 5000 Koeln GmbH
Current assignee: A Nattermann & Cie 5000 Koeln GmbH
Priority date: 1975-01-30
Filing date: 1975-01-30
Publication date: 1978-03-30
Also published as: DE2505887B2; DE2505887A1

Description

Gegenstand des deutschen Patents 24 08 379 ist nach Anspruch I ein Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen Enzympräparates durch Zerkleinern von Pankreasgewebe, Autolysieren, Entfetten und wäßrigem Extrahieren des zerkleinerten Gewebes sowie Ausfällung des Enzyms aus dem wäßrigen Extrakt durch Aceton und Trocknen der Fällung, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man das zerkleinerte Pankreasgewebe mit einer Mischung aus 9 Volumenteilen Chloroform und 1 Volumenteil Butanol behandelt, dann das so partiell entfettete zerkleinerte Gewebematerial bei 0 bis 4"C 24 bis 96 Stunden lang stehen läßt, anschließend mit Aceton entfettet und entwässert, worauf man mit 5%iger wäßriger Äthanollösung extrahiert und aus dem Extrakt das trockene Enzympräparat gewinnt, und nach dem Anspruch 2 ein Verfahren, das dadurch gekennzeichnet, ist, daß man das partiell entfettete Gewebe 48 Stunden lang stehen läßt.

Nach den Verfahren gemäß den 2 Ansprüchen des deutschen Patents 24 08 379 wird ein sehr aktives Lipaseenzymkonzentrat erhalten, das die bisher handelsüblichen Pankreatinpräparate in ihrer Enzymaktivität, insbesondere der Lipaseaktivität, um das 4 - 5fache übertrifft.

In weiterer Ausbildung des Verfahrens wurde nun gefunden, daß man das Verfahren vereinfachen kann, wobei man schonender, schneller und in besserer Ausbeute zu den gleich hochaktiven Enzympräparaten gelangt.

Die erfindungsgemäße Abwandlung der 2 Verfahren des Hauptpatents besteht darin, daß nunmehr die Äthanolextrakte unmittelbar einer Gefriertrocknung unterworfen werden. Hierbei fällt das Lipasereiche Enzympräparat als trockenes, grauweißes Pulver an.

Der Vorteil dieser Verfahrensabänderung liegt z. B. darin begründet, daß die Ausfällung des Enzympräparates mit Aceton entfällt Ferner entfällt auch die Isolierung des erhaltenen Niederschlags durch Filtrieren oder Zentrifugieren. Das beinhaltet außer einer

ίο großen Zeiteinsparung besonders auch die Einsparung großer Mengen von Aceton, deren Rückgewinnung durch den Wassergehalt im technischen Maßstab ohnehin erschwert ist. Außerdem gestattet die an sich bekannte Maßnahme der Lyophilisierung eine beson-

'5 ders schonende Behandlung des empfindlichen Enzymkonzentrats während der Trocknung und liefert das gewünschte Endprodukt ohne Ausbeuteverluste, so daß die Aktivität des so erhaltenen Lipasepräparats einem durch die Acetonfällung gewonnen Enzymniederschlag

ίο entspricht. Es ist überraschend, daß beim erfindungsgemäßen Verfahren die neuartige Vorbehandlung des Drüsengewebes und die Extraktion mit der 5%igen alkoholischen Lösung es ermöglicht, unmittelbar durch Lyophilisierung der Extrakte zu so hochaktiven

*5 Präparaten zu gelangen.

Beispiel

3 kg tiefgekühltes Schweinepankreas werden in einem Fleischwolf sehr fein zerkleinert und mit 3,0 1 einer Mischung von Chloroform-Butanol 9 :1 v/v in einem Mischgerät homogenisiert. Der entsprechende Organbrei wird 30 min. bei Zimmertemperatur gerührt, die chloroformhaltige flüssige Phase abgelassen und der Rückstand noch zweimal mit je 3,0 I Chloroform-Butanol 9 :1 v/v 30 min. bei Zimmertemperatur gerührt und jedesmal das Lösungsmittel abgetrennt. Der noch feuchte Rückstand w'rd dann 48 h bei 4°C sich selbst überlassen, und anschließend das weitgehend entfettete Organ noch zweimal mit je 1,5 1 Aceton 15 min.

ausgerührt und jedesmal die überstehende Lösung abdekantiert.

Zur Extraktion der lipasereichen Pankreasfermente wird das völlig entfettete Material zweimal mit je 1.5 I einer Mischung von Wasser-Äthanol 95 :5 v/v jeweils 30 min. lang gerührt und anschließend die Lösung durch ein Mctallsieb abfiltriert. Die vereinigten Wasser-Äthanol-Extrakte werden zur Entfernung des Lösungsmittels in einem Gcfriertrockungsapparat eingegeben. (Schichtdicke etwa I—2 cm, Anfangs.-.emperatur — 20⁰C) Das trockene poröse Material wird zerkleinert und gesiebt. Ausbeute: 365g (12% bezogen auf Nassorgan) eines hellgelben Pulvers mit einer Lipaseaktivität von etwa 250 Willstätter-Einheiten/g, entsprechend 110 000 FIP-Einheiten/g.

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen Enzympräparates durch Zerkleinern von Pankreasgewebe, Autolysieren, Entfetten und wäßrigem Extrahieren des zerkleinerten Gewebes sowie Ausfällung des Enzyms aus dem wäßrigen Extrakt durch Aceton und Trocknen der Fällung, wobei man das zerkleinerte Pankreasgewebe mit einer Mischung aus 9 Volumenteilen Chloroform und 1 Volumenteil Butanol behandelt, dann das so partiell entfettete zerkleinerte Gewebematerial bei 0 bis 4° C 24 bis 96 Stunden, vorteilhafterweise 48 Stunden lang stehen läßt, anschließend mit Aceton entfettet und entwässert, worauf man mit 5%iger wäßriger Äthanollösung extrahiert und aus dem Extrakt das trockene Enzympräparat gewinnt, nach Patent 24 08 379, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Isolierung des trockenen Enzympräparates den äthanolhaltigen wäßrigen Enzymextrakt unmittelbar einer Gefriertrocknung unterwirft.