DE2505887C3 - Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen Enzympraparates - Google Patents
Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen EnzympraparatesInfo
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
Gegenstand des deutschen Patents 24 08 379 ist nach Anspruch I ein Verfahren zur Herstellung eines
lipasereichen Enzympräparates durch Zerkleinern von Pankreasgewebe, Autolysieren, Entfetten und wäßrigem
Extrahieren des zerkleinerten Gewebes sowie Ausfällung des Enzyms aus dem wäßrigen Extrakt durch
Aceton und Trocknen der Fällung, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man das zerkleinerte Pankreasgewebe
mit einer Mischung aus 9 Volumenteilen Chloroform und 1 Volumenteil Butanol behandelt, dann
das so partiell entfettete zerkleinerte Gewebematerial bei 0 bis 4"C 24 bis 96 Stunden lang stehen läßt,
anschließend mit Aceton entfettet und entwässert, worauf man mit 5%iger wäßriger Äthanollösung
extrahiert und aus dem Extrakt das trockene Enzympräparat gewinnt, und nach dem Anspruch 2 ein Verfahren,
das dadurch gekennzeichnet, ist, daß man das partiell entfettete Gewebe 48 Stunden lang stehen läßt.
Nach den Verfahren gemäß den 2 Ansprüchen des deutschen Patents 24 08 379 wird ein sehr aktives
Lipaseenzymkonzentrat erhalten, das die bisher handelsüblichen
Pankreatinpräparate in ihrer Enzymaktivität, insbesondere der Lipaseaktivität, um das 4 - 5fache
übertrifft.
In weiterer Ausbildung des Verfahrens wurde nun gefunden, daß man das Verfahren vereinfachen kann,
wobei man schonender, schneller und in besserer Ausbeute zu den gleich hochaktiven Enzympräparaten
gelangt.
Die erfindungsgemäße Abwandlung der 2 Verfahren des Hauptpatents besteht darin, daß nunmehr die
Äthanolextrakte unmittelbar einer Gefriertrocknung unterworfen werden. Hierbei fällt das Lipasereiche
Enzympräparat als trockenes, grauweißes Pulver an.
Der Vorteil dieser Verfahrensabänderung liegt z. B. darin begründet, daß die Ausfällung des Enzympräparates
mit Aceton entfällt Ferner entfällt auch die Isolierung des erhaltenen Niederschlags durch Filtrieren
oder Zentrifugieren. Das beinhaltet außer einer
ίο großen Zeiteinsparung besonders auch die Einsparung
großer Mengen von Aceton, deren Rückgewinnung durch den Wassergehalt im technischen Maßstab
ohnehin erschwert ist. Außerdem gestattet die an sich bekannte Maßnahme der Lyophilisierung eine beson-
'5 ders schonende Behandlung des empfindlichen Enzymkonzentrats
während der Trocknung und liefert das gewünschte Endprodukt ohne Ausbeuteverluste, so daß
die Aktivität des so erhaltenen Lipasepräparats einem durch die Acetonfällung gewonnen Enzymniederschlag
ίο entspricht. Es ist überraschend, daß beim erfindungsgemäßen
Verfahren die neuartige Vorbehandlung des Drüsengewebes und die Extraktion mit der 5%igen
alkoholischen Lösung es ermöglicht, unmittelbar durch Lyophilisierung der Extrakte zu so hochaktiven
*5 Präparaten zu gelangen.
3 kg tiefgekühltes Schweinepankreas werden in einem Fleischwolf sehr fein zerkleinert und mit 3,0 1 einer
Mischung von Chloroform-Butanol 9 :1 v/v in einem Mischgerät homogenisiert. Der entsprechende Organbrei
wird 30 min. bei Zimmertemperatur gerührt, die chloroformhaltige flüssige Phase abgelassen und der
Rückstand noch zweimal mit je 3,0 I Chloroform-Butanol
9 :1 v/v 30 min. bei Zimmertemperatur gerührt und jedesmal das Lösungsmittel abgetrennt. Der noch
feuchte Rückstand w'rd dann 48 h bei 4°C sich selbst
überlassen, und anschließend das weitgehend entfettete Organ noch zweimal mit je 1,5 1 Aceton 15 min.
ausgerührt und jedesmal die überstehende Lösung abdekantiert.
Zur Extraktion der lipasereichen Pankreasfermente wird das völlig entfettete Material zweimal mit je 1.5 I
einer Mischung von Wasser-Äthanol 95 :5 v/v jeweils 30 min. lang gerührt und anschließend die Lösung durch
ein Mctallsieb abfiltriert. Die vereinigten Wasser-Äthanol-Extrakte
werden zur Entfernung des Lösungsmittels in einem Gcfriertrockungsapparat eingegeben.
(Schichtdicke etwa I—2 cm, Anfangs.-.emperatur
— 200C) Das trockene poröse Material wird zerkleinert
und gesiebt. Ausbeute: 365g (12% bezogen auf
Nassorgan) eines hellgelben Pulvers mit einer Lipaseaktivität von etwa 250 Willstätter-Einheiten/g, entsprechend
110 000 FIP-Einheiten/g.
Claims (1)
- Patentanspruch:Verfahren zur Herstellung eines lipasereichen Enzympräparates durch Zerkleinern von Pankreasgewebe, Autolysieren, Entfetten und wäßrigem Extrahieren des zerkleinerten Gewebes sowie Ausfällung des Enzyms aus dem wäßrigen Extrakt durch Aceton und Trocknen der Fällung, wobei man das zerkleinerte Pankreasgewebe mit einer Mischung aus 9 Volumenteilen Chloroform und 1 Volumenteil Butanol behandelt, dann das so partiell entfettete zerkleinerte Gewebematerial bei 0 bis 4° C 24 bis 96 Stunden, vorteilhafterweise 48 Stunden lang stehen läßt, anschließend mit Aceton entfettet und entwässert, worauf man mit 5%iger wäßriger Äthanollösung extrahiert und aus dem Extrakt das trockene Enzympräparat gewinnt, nach Patent 24 08 379, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Isolierung des trockenen Enzympräparates den äthanolhaltigen wäßrigen Enzymextrakt unmittelbar einer Gefriertrocknung unterwirft.
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| 8340 | Patent of addition ceased/non-payment of fee of main patent |