DE2152314A1 - Glykosylpantothensaeuren,deren Herstellung und Verwendung - Google Patents

Description

Patentanwälte DIpL-Ing. R. ΠΓΠΤΖ Dlpl-Snn. K. I.A.v;;^:.^

Dr.-l.-i-j. Ιί. L. .:. :: .21 Jr. 8 München 22, Siainedorfstr. 10 _, . _ _Λ _ ,'

76-17.688P 20. 10. 1971

SUNTORY LIMITED, Osaka-shi (Japan)

Glykosylpantothenaäuren, deren Herstellung und Verwendung

Gegenstand der Erfindung sind Glykosylpantothensäuren der allgemeinen Formel

^GH3 R¹OOH₀ -C- GHGOIIHOH₉Oh₉COOH (i)

oir

in der einer der Reste R¹ und R² ein Wasserstoffatom und der andere ein ß-D-Ribofuranosyl-, ß-D-Glucopyranosyl-, ß-D-Galactopyranosyl-, ß-Cellobiosyl- oder ß-Maltosylrest ist.

Die neuen Verbindungen umfassen zwei Verbindungstypen, und zwar 2'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäuren der naehfolgen-

76-(SLG 14) NoHe

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den Formel (I-A) und 4'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäuren der nachfolgenden iormel (I-B):

₃
HOGH₉ - C - GHOOIIHCH₀Gh₀GOOH (I - A)

CH, OR⁵

₃
R⁴OGH₀ - C - GHG0NHGH_oGH_oC00H (I - B)

*- I I Ci

GH₃ OH

in denen R* und R⁴ ß-D-Ribofuranosyl-, ß-D-Glucopyranoayl-, ß-D-Galactopyranosyl-, ß-Gellobiosyl- oder ß-Maltosylreste sind.

Beide Verbindungstypen bilden hygroskopische Pulver, die in Waaser, Methanol, Äthanol, Pyridin usw. löslich aber in Benzol, Äthyläther, Chloroform usw. unlöslich sind.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind Derivate der D-Pantothensäure (D-pantothenic acid) und haben eine ähnliche physiologische Wirksamkeit wie diese. So zeigen sie beispielsweise eine regulierende Wirkung auf den Stoffwechsel von Mikroorganismen. Die physiologische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen ist höher als diejenige von CaI-cium-D-pantothenat, und sie zeigen beispielsweise eine um mehrere Male bis hundertmal höhere Wirksamkeit als Calcium-D-pantothenat bei Stämmen, die zu den Milchsäurebakterien (genus Lactobacillaceae) gehören. Die erfindungagemäßen Verbindungen sind weiter stärker alkali-, säure- und wärmebe-

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ständig als B-Pantothensäure. Sie sind demgemäß für unterschiedliche Anwendungen in Arzneimitteln, kosmetischen Artikeln, in oder als Nahrungsmittel- oder lutterzusätze oder Zusätze zu Kulturmedien für Mikroorganismen usw. brauchbar.

Bevorzugte Beispiele für die erfindungsgemäßen Verbindungen sind 2'-O-Cß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure, 2' -0-(ß-Gellobiosyl) -D-pantothensäure, 4' -0-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure, 4'-0-(ß-D-Ribofuranosyl)-D-pant othenaäure, 4'-0-(ß-D-Galactopyranosyl)-D-pantothensäure, 4'-O-(ß-Gellobiosyl)-D-pantothensäure und 4'-0-(B-MaItOSyI)-D-pantothensäure.

Von diesen Verbindungen wird die 4'-0-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure am meisten bevorzugt, da sie eine größenordnungsmäßig höhere physiologische Wirksamkeit bei einigen Mikroorganismen zeigt.

Zur Darlegung der physiologischen Wirksamkeiten der erfindungsgemäßen Verbindungen wurden folgende Untersuchungen durchgeführt.

I. Physiologische Wirksamkeit bei Milchsäurebakterien (Lactobacillaceae)

Test A:

Wirkung von 4'-O-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure auf den Stamm WNB - 75·

2 0 9 8 2 2 / i 0 U δ

1,0	1°	(Gew./Vol.)
1,0		(Gew./Vol.)
1,0	*	(Gew./Vol.)
1,0	ίο	(Gew./Vol.)
0,1		(Gew./Vol.)
0,025	io	(Gew./Vol.)
0,025		(Gew./Vol.)
0,025	°/>	(Gew./Vol.)
0,025		(Gew./Vol.)
0,006	(Gew./Vol.)

A - 1 Grundmedium (doppelte Stärke)
D-Glucose
D-Fructose
Hefeextrakt
Polypepton
KH₂PO₄
HaOl

CaGl₂* 2H₂O
MgS0₄«7H₂0
KOl
MnSO₄

A - 2 Prüfverfahren

Zu dem Grundmedium wurde 4'-0-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure in der in Tabelle 1 angegebenen Menge hinzugefügt und das Medium wurde dann 5 Minuten lang bei 120⁰C sterilisiert. Die Oberfläche des Mediums wurde mit flüssigem Paraffin abgedeckt. Das Medium wurde dann mit dem Bakterienstamm WNB-75 geimpft und 4 Tage lang bei 3O⁰C inkubiert. Die in Abhängigkeit von der Zeit entwickelte Anzahl Zellen wurde durch Kolonieauszählung auf Agarplatten bestimmt. Der Stamm WNB-75 ist als zu den Lactobacillaceen gehörig bekannt und in "Agr. Biol. Ghern.", Bd. 27, Hr. 8, Seite 590 bis 595 (1963) beschrieben.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefaßt. Zu Verglexchszwecken wurde bei einem Parallelversuch Calcium-D-pantothenat zum Grundmedium hinzugefügt und die Bakterienkultur in gleicher Weise durchgeführt wie oben angegeben. Auch die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 1 aufgeführt.

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A - :> Ergebnisse

Tabelle

geprüfte zugesetz-

7er- te Menge bindung (ug/inl)

Anzahl der Zellen (Zellen/ml)_

Inkubationszeit (Std) bei 3O⁰Q

24

48

Kontrolle 0

erfindungs- \ 0,05 gemäße < _{n 1} Verbindung [ ^u''

Calcium-

D-panto-

thenat

f 0,5 "j 5,0

10

10 10

10

5x10' 7x10'

2x10'

10 1,3x10'

4x10"

2x10

3x10^ 1,4x10

8x10^ 1,5x10·

9x1

4x10

6x10' 5,6x10

6x10' 3x10

Die Prüfergebnisse zeigen, daß die 4'--0-(ß-I)-Glucopyrano· syl)-D-pantothensäure ein Wachstum des Stammes V/ÜB-75 bei einer Konzentration herbeiführt, die 1/100 derjenigen von Calcium-D-pantothenat beträgt. D.h., daß erstere eine hundertmal stärkere Wirksamkeit hat als letzteres.

Test B:

Prüfung der Wirksamkeit anderer Verbindungen gemäß der Erfindung bei dem Stamm WNB-75.

B - 1 Prüfverfahren

Jede der nachfolgend aufgeführten verschiedenen erfindungsgemäßen Verbindungen wurde jeweils zu dem gleichen Grundmedium wie beim Test A hinzugegeben, in dem dann der

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ijfcamm VMB-75 in gleicher Weise wie beim Test α zur öös mung der physiologischen ./irkrsamkeifcen der eriindu.i Verbindungen relativ zu derjenigen von G'alcium-D-pantothenac gezüchtet wurde. Die physio Logischen V/irkaamkaiten uiu· geprüften Verbindungen werden in Relativwerten bezogen auf die als Einheit verwendete Wirksamkeit von Oalcium-D-pantothenat angegeben.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaßt.

B - 2 Ergebnisse

Tabelle 2 geprüfte Verbindung Wirkung (fiinheiten/U-PaA)

Calcium- -j

D-pantothenat

2'-0-(B-D-GlUCOPyranosyl)- ₅

D-panto thensäure

2«_ü-(ß-Gellobiosyl)-D- ₂₀

pantothensäure

4'-0-(ß-D-Galactopyranosyl)- ^

D-pantothensäure

4·-0-(B-D-CeIlObIoSyI)-D- ₂₀

pantothensäure

Test Cj

Physiologische Wirksamkeit bei dem Stamm Leuoonosfco citrovorum ML-34.

ORIGINAL 209822/1068

215

2314

- 7

ü - 1 Prüfverfahren

Zu dem gleichen Grundmedium, wie es bereits beim Test A verwendet wurde, wurden die in Tabelle 3 angegebenen Mengen 4 ' -O-f ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure hinzugefügt und der Bakterienstamm Leuconostoc citrovorum HIL-34 in gleicher weise wie bei Test A unter Bestimmung des Zellwachstums kultiviert. Die Ergebnisse Bind in Tabelle 3 wiedergegeben, die zu Vergleichszwecken auch Prüfergebnisse enthält, die in gleicher Weise wie oben unter Verwendung von Calcium-D-pantothenat erhalten wurden. Der oben erwähnte Stamm Leuconostoc citrovorum ist als zu den Lactobacillaceen gehörig bekannt und in "Am J. Enol. Viticult.", Bd. 11, 1 bis 4 (1960) von J. L. Ingraham, R. H. Vaughn und G. H. Cooke sowie Bd. 11, 59 bis 63 (1960) von R. B. Webb und J. L. Ingraham beschrieben.

C - 2 Ergebni sse

geprüfte

Verbindung

Tabelle 3

zugesetzte Menge (ug/ml)

Anzahl der Zellen (Zellen/ml) Inkubationszeit (Std) bei 30⁰G

24 48 72 96

Kontrolle

erfindungsgemäße Verbindung

Galcium-D-panto-
thenat

0,05 0,1

0,5 j 5,0

10

10 10

10 10

15

9x10
4x10'

3x10

5x10-1x10-

8x1

5x10^ 1,7x10

1,8x10-

2x10^]

7x10 6x10

2x10-4x10

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II. Physiologische Wirksamkeit bei Ratten

Prüfverfahren

Ein pulverförmiges passendes Futter "CA - 1" (Produkt der Japan Glea Co.) mit 80 mg/kg Calcium-D-pantothenat wurde mit 1 mg und 5 mg 4' -0-( ß-D-Glucopyranosyl)-I>-pantothensäure pro kg Futter angereichert. Daneben wurden zu Yergleichszwecken zwei andere Sorten Futter durch Anreicherung des gleichen "CA - 1"-Futters mit 50 bzw. 100 mg Calcium-D-pantothenat pro kg hergestellt. Alle so hergestellten Futtersorten wurden jeweils an zehn 3 Wochen alte männliche SD-JCL-Ratten verfüttert. Die Aufnahme von Futter und V/asser wurde den Ratten frei überlassen und ihr Gewicht wurde jeden Tag kontrolliert.

Die mittleren Gewichte der einzelnen Gruppen von je 10 Ratten sind in Tabelle 4 wiedergegeben.

Tabelle 4

geprüfte	zugesetzte	f 50	Tage	48	nach	Beginn der	0	20	Untersuchung	5	{fo relativ zur Kontrolle)
Ver	Menge	I 100	0	48,5 48,75	1		194	30	5	(100)
bindung	(mg/kg Futter)		47,5	106	,5 ,25	221,5 214,5	292	75	(112,33) (110,10)
Kontrolle		47,5	126 119	,5	199,5	328 321,	(100,17)
erfindungs- j 1 gemäße Ver-i ^ bindung |		111		215,25	292,	(109,85)
Calcium-	118		320,
D-panto thenat

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Die Ergebnisse dieser Untersuchung zeigen, daß die Gewichtszunahme beispielsweise bei einer Nahrung mit 1 mg der erfindungsgemäßen Verbindung pro kg Putter nach 30 Tagen um 36 g größer war als bei der Kontrollgruppe (entsprechend einer prozentualen Differenz von 12,3$). Dieses Ergebnis liegt über dem mit Calcium-D-pantothenat erhaltenen und zeigt, daß die erfindungsgemäße Verbindung anstelle von Calcium-D-pantothenat in geringerer Menge verwendet werden kann. Der Zustand der gesamten Gruppe war normal und gesund.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach verschiedenen Verfahren hergestellt werden. Gemäß einer bevorzugten Verfahrensweise zur Herstellung der Verbindungen der Formel I-A wird beispielsweise ein Alkyl-4'-0-acyl-D-pantothenat der unten angegebenen Formel II mit einem Halogenid eines acylierten Zuckers unter Bildung von Alkyl-4¹-0-acyl-2'-0-(O-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat der unten angegebenen Formel III als Zwischenprodukt (nachfolgend als "Zwischenprodukt-A " bezeichnet) umgesetzt und das so erhaltene Zwischenprodukt-Α dann einer Besacylierung und Desalkylierung unterworfen unter Bildung der gewünschten 2'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure (I-A). Dieses Verfahren wird nachfolgend als "Verfahren A" bezeichnet; die dabei stattfindenden Reaktionen werden durch die nachfolgenden Reaktionsgleichungen wiedergegeben:

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- ίο -

₃
AgOGH₀- C - CHCONHCH₀Ch₀COOR^

GH₃ OH

(H)

_Ac0GH _ G - GHGONHCH₉GH₉GOOr

₃ OR^Ac
(III)

Deaacylierung und

GH

_H0GH _ _c _ CHC0NHGH_oCH₉C00H

(I- A)

in denen R die bereits angegebene Bedeutung hat, Ac eine Acylgruppe wie der Acetyl- oder Benzoylrest ist, X für ein Halogenatom steht und R eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet.

Bei dem obigen Verfahren A ist das als Ausgangsmaterial verwendete Alkyl-V-O-aeyl-D-pantothenat (II) bekannt und leicht durch thermische Kondensation von 2'-0-Benzyl-D-pantolacton und ß-Alaninalkylester, Acylierung der Hydroxylgruppe am C - 4·' des resultierenden Kondensationsproduktes und anschließende Debenzylierung mit katalytischer Hydrierung herstellbar.

Zu den obigen Alkylestern der Acylpantothensäure (II) gehören Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl- und Butylester,

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wobei der Äthylester bevorzugt ist. Die Halogenide von Acylzuekern bzw. acylierten Zuckern sind z.B. Chloride oder Bromide von Acylderivaten der D-Ribofuranose, D-G-lucopyranose, D-Galactopyranose, D-Oellobiose oder D-Maltose.

Die Reaktion von Alkylestern der Aoylpantothensäure (II) mit Halogeniden von Acylzuckern in der ersten Stufe kann in einem Lösungsmittel wie Nitromethan, Benzol, Toluol, Chloroform etc. durchgeführt werden. Die Acylzuckerhalogenide können in stöchiometrischer Menge oder im Überschuß verwendet werden, wobei ein 10 bis 50 $iger Überschuß bevorzugt wird. Die Lösungsmittel können einzeln oder miteinander gemischt in 10 bis 5Ofacher Gewichtsmenge - bezogen auf die Ausgangsester (II) - verwendet werden. Zur Neutralisation des gebildeten Halogenwasserstoffs kann ein Säureakzeptcr zum Reaktionssystem zugesetzt werden. Beispiele für Säureakzeptoren sind Hg(GH)₂, Ag₃CO₅, AgO, AgClO₅, AgBP₄ etc., wobei Hg(CF)„ bevorzugt wird. Die Menge des angewandten Säureakzeptors kann über einen weiten Bereich veränderlich sein, er wird jedoch üblicherweise in einer Menge angewandt, die bezogen auf die Mole Acylzuckerhalogenid von einer äquimolaren Ilenge bis zu einem großen Überschuß reicht.

Die bevorzugte Reaktionstemperatur kann im Bereich von 80 bis 110 C liegen, obgleich die Umsetzung bei einer niedrigeren Temperatur mit verzögerter Geschwindigkeit und bei einer höheren Temperatur unter unerwünschter Nebenreaktion abläuft.

Zum Reaktionssystem können als Reaktionspromotoren Dehydratisierungsmittel wie CaSO. usw. in Mengen vom 1- bis 10-i'achen des Gewichts des Ausgangsesters (II) zugesetzt

I' 0 9 8 2 2 / 1 Ü B B

werden. Vorzugsweise wird die Umsetzung in einer wasserdampffreien Atmosphäre durchgeführt, wie beispielsweise in trockener Luft oder Inertgasatmosphäre. Im allgemeinen ist die Reaktion innerhalb von 5 bis 20 Stunden beendet, wodurch das Zwischenprodukt-Α¹J Alkyl-4¹-0-acyl-2'-0-(0-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat (III) erhalten werden kann.

Dieses Zwischenprodukt-Α kann bei Bedarf aus der resultierenden Reaktionsmischung isoliert werden, wie beispielsweise durch Filtrieren der Reaktionsmischung, Einengen des Filtrats unter vermindertem Druck, Auflösen der eingeengten Mischung in Benzol oder anderen nicht-polaren Lösungsmitteln, Waschen der benzolischen Lösung mit wässriger Alkalimetallhalogenide sung und dann mit Wasser, Einengen der gewaschenen Mischung und Säulenchromatographie der eingeengten Mischung an Silicagel unter Verwendung einer 1s1 (Volumenverhältnis) Mischung von Benzol und Äthylacetat.

Das Zwischenprodukt-Α wird nachfolgend innerhalb der von der ersten Stufe herstammenden Reaktionsmischung oder nach Isolierung desacyliert und desalkyliert. Die zweite Reaktionsstufe, d.h. die Desacylierung und Desalkylierung des so erhaltenen Zwischenprodukts-A (III) kann in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol, Äthanol oder ähnlichen niederen aliphatischen Alkoholen in Gegenwart eines Katalysators erfolgen. Das Lösungsmittel kann bezogen auf das Zwischenprodukt-Α in 5- bis 10-faeher Gewichtsmenge verwendet werden. Beispiele für Katalysatoren sind Ba(OGH,)p» NaOGH₇-, HH_x, Ba(OH)₀, etc. und sie können bezogen auf das

JJ -^c.

Zwischenprodukt-Α in geringem molaren Überschuß, vorzugsweise 0,1 molaren Überschuß, angewandt werden.

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Vorzugsweise wird die Reaktion bei einer Temperatur von 0 bis 30⁰G durchgeführt, da bei höheren Temperaturen unerwünschte Nebenreaktionen begünstigt sind. Die Reaktion kann in einer wasserdampffreien Atmosphäre durchgeführt werden, wie in trockener Luft oder einer Inertgasatmosphäre. Die Umsetzung ist üblicherweise innerhalb von 1 bis 24 Stunden abhängig von den Reaktionsbedingungen beendet, wodurch die gewünschte 2'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure (I - A) erhalten wird. Das so erhaltene gewünschte Produkt (I - A) kann isoliert werden, und zwar beispielsweise durch Zugabe von Wasser zu der resultierenden Reaktionsmischung, Hindurchleiten der Mischung durch eine Anionenaustauscherharzsäule in OH-Form wie eine Säule mit "Dowex 1 χ 8" (der Dow Chemical Co., U.S.A.), Waschen der ausgetauschten Substanz mit Wasser, Eluieren der Substanz mit einem Eluenten wie Essigsäure und Gefriertrocknen der Lösung zur Erzeugung des gewünschten Produktes (i - A) in Form eines weißen hygroskopischen Pulvers.

Der andere Typ von Produkten gemäß der Erfindung, d.h. die 4'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäuren der Formel I - B können auch nach verschiedenen Verfahren hergestellt werden. Gemäß einer bevorzugten Verfahrensweise wird Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat der unten angegebenen Formel IV zunächst mit Acylzuckerhalogenid zum Benzyl-2'-0-benzyl-4'-0-(O-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat der unten angegebenen Formel V (nachfolgend als "Zwischenprodukt-B " bezeichnet) umgesetzt. Das Zwischenprodukt-B (V) wird dann in Gegenwart eines Katalysators zum 4'-0-(0-Acyl-ß-glykosyl)~D-pantothensäure der Formel VI (nachfogend als "Zwischprodukt-B " be-

zeichnet) hydriert und das so erhaltene Zwischenprodukt-B (VI) wird schließlich desacyliert, wodurch die gewünschte

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21523U

4'-0-(ß-G-lykosyl)-D-pantQthensäure der IOrmel I -B erhalten werden kann. Das vorstehende Verfahren wird nachfolgend als "Verfahren-tB" bezeichnet und die dabei ablaufenden Reaktionen folgen den nachstehenden Gleichungen;

GH₅

HOGH₀G - GHGOKHCH₀GH₀COOBa GH₅ OBz

. (17)

GH·* ₀C

λ t J

R^AcOGH₀C - CHGOIiHGH₀GH₀GOOBz

OBz (Y)

+H ^ 3

— ^R⁴Ac-OCH₀C - CHCOHHGH₀Gh₀COOH

CH₅ OH (TI)

CH_{3 R}4₀₀ ' _ _GHG0NHCH_pCH₉C00H

CH, OH (I - B)

in denen Bz einen Benzylrest bedeutet und R , Ae und X die bereits angegebene Bedeutung haben.

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Das bei dem obigen Verfahren-IB als Ausgangsmaterial verwendete Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantotb.enat (IV) ist bekannt und kann beispielsweise durch thermische Kondensation von 2-0-Benzyl-D-pantolacton und ß-Alaninbenzylester erhalten werden. Die angewandten Acylzuckerhalogenide sind die gleichen wie beim Verfahren-A.

Beim Verfahren-1B kann die Reaktion zwischen Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat (IV) und Acylzuckerhalogenid unter den gleichen Bedingungen durchgeführt werden, wie sie für die erste Stufe des Verfahrens-Α angegeben wurden. Das in dieser Stufe erhaltene Zwischenprodukt-B (V) kann aus der resultierenden Reaktionsmischung isoliert werden, und zwar beispielsweise durch Filtrieren der Reaktionsmischung, Einengen des Filtrate, Auflösen der eingeengten Flüssigkeit in Benzol, Waschen der benzolischen Lösung mit wässriger Kaliumhalogenidlösung und dann mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung und weiter mit Wasser, Einengen der gewaschenen Flüssigkeit unter vermindertem Druck und abschliessende Säulenchromatographie der eingeengten Flüssigkeit an Silicagel unter Verwendung von Chloroform mit 2,5 Vol. $> Äthanol.

In der zweiten Stufe wird das Zwischenprodukt-B (V) in einem organischen lösungsmittel gelöst und die Lösung zur Reduktion in Gegenwart eines Katalysators in einer Wasserstoff atmosphäre gerührt bzw. geschüttelt. Zu den Lösungsmitteln gehören Essigsäure, Methanol, Äthanol usw. Diese Lösungsmittel können einzeln oder gemischt miteinander in Mengen vom 2- bis 10-fachen des Gewichts des Zwischenprodukt s-B angewandt werden. Bei der obigen Reaktion können konventionelle Reduktionskatalysatoren wie Palladiummohr,

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Palladiumkohle, Platinoxid usw. in Mengen von 1 bis 100 Gew.-$6 (bezogen auf das Gewicht des Zwischenprodukts-B ) verwendet werden. Vorzugsweise kann die Reaktion bei Zimmertemperatur in Wasserstoffatmosphäre durchgeführt werden, obgleich erhöhte Temperaturen und/oder erhöhte Drucke auch anwendbar sein können. Die Reaktion ist üblicherweise innerhalb von 5 bis 10 Stunden beendet, wodurch das Zwischen-

P
produkt-B der Formel VI erhalten werden kann.

Das so erhaltene Zwischenprodukt-B (VI) kann aus der resultierenden Reaktionsmischung isoliert werden,.und zwar beispielsweise durch Silicagel-Säulenehromatographie der Reaktionsmischung unter Verwendung einer 95:4:1 (Volumenverhältnis) Mischung von OHGl₅, CH₅OH und CH₅COOH oder einer 95:5 (Volumenverhältnis) Mischung von CHGl₅ und G₂H₅OH und nachfolgendes Umkristallisieren der resultierenden Substanz aus Äther.

In der dritten Stufe wird das Zwischenprodukt-B zu der gewünschten Verbindung 1 - B desacyliert. Die Desacy-Iierungsbedingungen sind die gleichen wie sie anläßlich der Desacylierung und Desalkylierung in der zweiten Stufe des Verfahrens-Α weiter oben·beschrieben wurden.

Die so erhaltene 4' -0-(ß-Glykosyl).-D-pantothensäure (I - B) kann aus der Reaktionsmischung in der gleichen Weise wie die Verbindung (I - A) beim Verfahren—A isoliert werden.

Nach einem anderen bevorzugten Verfahren zur Herstellung von 4'-O-OS-GlykosylJ-D-pantothensäure (I - B) gemäß der Erfindung wird Alkyl-D-pantothenat der unten angegebenen Formel VII zunächst mit Acylzuckerhalogenid zum Alkyl-4'-0-(0-acyl-ß-

9822/1ÜG8

glykosyl)-D-pantothenat der unten angegebenen Formel VIII
umgesetzt und das resultierende Alkyl-4'-0-(0-aeyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat (VIII) wird dann desacyliert und desalkyliert, wodurch die gewünschte 4^l-0~(ß-glykosyl)-D-pantothensäure (I - B) erhalten wird. Dieses Verfahren wird nachfolgend als ^llVerfahren-2B" bezeichnet und die damit verbundenen Reaktionen werden durch folgende Gleichungen wiedergegeben!

OH₃
HOGH₀C - CHGOIiHCH₀GH₀COOE⁶

CH₃ OH

(VII)

CH,

_R4_Ac0GHC _ GHCOIiHGH₂GH₂GOOR⁶

CH₃ OH

(VIII)

Desacylierung und ₃

_{> r}4q_CH _ ₀ _

CH₅ OH
(I - B)

bei denen R , Ac und X die bereits angegebene Bedeutung haben und R ein Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen ist.

Bei dem obigen Verfahren-2B ist das Alkyl-D-pantothenat z.B» ein Methyl-, Äthyl-, Propyl-, IsOpropyl- oder Butylesber

20082.27 H)BB

-Ιβ-

der D-Pantothensäure und die angewandten Halogenide der Acylzucker sind z.B. Chloride oder Bromide von Acylderivaten der D-Ribofuranose, D-Glucopyranose, B-Galactopyranose, D-Cellobiose oder D-Maltose.

Die in der ersten Stufe für die Reaktion zwischen Alkyl-D-pantothenat (VlT) und den Acylzuckerhalogeniden anzuwendenden Reaktionsbedingungen sind die gleichen, wie sie im Zusammenhang mit der Reaktion zwischen Alkyl-4'-O-acyl-D-pantothenat (II) und Acylzuckerhalogenid für das Verfahren-A besehrieben wurden_o Das resultierende Alkyl-4'-0-(0-acyl-ß-glykosyl)-D-pantQthenat (YIII) kann in der gleichen Weise wie das Zwischenprodukt·
Verfahreris-^A isoliert werden.

Weise wie das Zwischenprodukt-Α aus der ersten Stufe des

Die nachfolgende Besacylierung und Desalkylierung des Alkyl-4^l-0-(0-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenats kann in der gleichen Weise erf.olgen wie beim Zwischenprodukt-Α beim Verfahren-Α, wobei die gewünschte 4'-0-(ß-G-lylfcosyl)-D-pantothensäure (I - B) erhalten werden kann. Die 4^f-Q~(ß-Glykasyl) -D-pantothensäure kann in der gleichen Weise, wie oben beschrieben, isoliert werden.

Es folgen Durcnführungsbeispiele zur Erläuterung der Erfindung*

Beispiel ί . . .

2,9 g Äthyi-4^l-0-acetyl-D-pantothenat wurden in 20 ml einer trockenen 2 ί 1.(Volumenverhältnis) Mischung von Hitromethan und Benzol gelöst. Zu der resultierenden Lösung wurden 3,8 g trockenes Hg(QN)₂ und 7,0 g aktiviertes. CaHO₊ in Form

09«,: MUBB 0—*

von Pulver hinzugegeben und die resultierende Mischung bei Zimmertemperatur.1 Stunde lang gerührt. Die Mischung wurde weiter mit .7,0 Tetra-O-acetyl-cxi-D-glucopyranosyl-bromid versetzt und 20 Stunden lang auf 80 bis 100°0 aufgeheizt.

Nach dem Abkühlen wurde die resultierende Mischung filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingeengt. Die eingeengte Flüssigkeit wurde in Benzol gelöst zur Erzeugung von 100 ml benzolischer Lösung, die mit wässriger Kaliumbromidlösung und dann mit Wasser gewaschen wurde. Die gewaschene Flüssigkeit wurde unter vermindertem Druck zur Trocknung eingedampft und dann zweimal einer Silicagel-Säulenchromatographie mit einer 1 : 1 (Volumenverhältnis) Mischung von Benzol und Äthylacetat unterworfen, wodurch 2,6g iithyl-4¹-O-acetyl-2'-O-iO-acetyl-ß-D-glucopyranosyli-D-pantothenat erhalten wurden. Ausbeute} 42 $.

Die Kernmagnetresonanzspektroskopie (nachfolgend mit H.LitR.-Spektrum abgekürzt) in GDOl, ergab beim resultierenden Produkt die folgenden Werte:

N.M.R.-Spektrum ((-,ppm):

0,92 (3H; s); 1,02 (3H; s); 1,30 (3H; t; J=7"cps);' 2,0 bis 2,1 (5 x Me); 2,53 (2H; t; J=7 cps); 3,5 bis 5,3 (m); 6,93 (IH; t).

1,3 g des so erhaltenen Äthyl-4^l-0-acetyl-2'-0-(0-ace- *.,',] -ß-D-glueopyranosyl)-L-pantothenats wurden in 30 ml trockenem Methanol gelöst. Zu der n_tit Eiswasser gekühlten Lösung wuiden 10 ml 0,4 η Ba(OCH₅)₂~Lösung (methanolische Lösung) hinzugegeben und die resultierende Mischung 24 Stünden lang bei O⁰G stehengelassen. Zu der resultierenden Reaktionsmischung wurden 20 ml Wasser gegeben und die Mischung durch

BAD ORIGINAL

209022/ 1068

eine Säule mit "Dowex 1 χ 8" (Ionenaustauscherharz von Dow Chemical Co., U.S.A., benutzt in OH-Porm) geschickt. Nach Auswaschen mit Wasser wurde das Produkt mit 0,5 η Essigsäure eluiert und gefriergetrocknet, wobei 0,77 g 2^f-0-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure in Form eines weißen hygroskopischen Pulvers erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 95 $.

Das N.M.R.-Spektrum des resultierenden Produktes in D₂O und die Elementaranalyse desselben ergaben folgende Werte:

N.M.R.-Spektrum (£,ppm):

0,88 (6H; s); 2,58 (2Hj tj J=7 cps); 3,1 bis 3,8 (m)j 3,87 (1Hj s); 4,38 (1H; dj J=6 cps).

Elementaranalyse: GH N

gefunden: 47,29$ 7,0695 3,61$

berechnet für C₁₅H₂₇O₁₀Ni 47,24$ 7,14$ 3,67$

Beispiel 2

Zu 30 ml Benzol wurden 2,9 g Äthyl-4^l-0-acetyl-D-pantothenat und 3,8 g trockenes Hg(CN)₂ hinzugegeben und die Mischung unter Rühren zur Abdampfung von 20 ml Benzol aufgeheizt. Danach wurden 20 ml trockenes Benzol zu der Mischung hinzugegeben und nach Abdampfen des Benzols zusammen mit Wasser als azeotrope Mischung wurden weiter 20 ml trockenes Nitromethan hinzugefügt. Die resultierende Mischung wurde mit 7,0 g O-Acetyl-«.— D-Glucopyranosylbromid versetzt und 20 Stunden lang unter Rühren rückflußbehandelt. Die resultierende Reaktionsmischung wurde den gleichen Reinigungsstufen wie in Beispiel 1 unterworfen, wodurch 1,3 g Äthyl-

209822/1068

4'-O-aeetyl-2'-O-CO-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 21 "/>.

Die N.H.R.-Analyse des resultierenden Produktes ergab die gleichen Werte wie in Beispiel 1.

Nach Hydrolyse des Produktes wurde die 2'-0-(B-I)-GrIuCopyranosyl)-D-pantothensäure in gleicher Weise wie in Beispiel 1 isoliert. Die N.M.R.-Analyse dieses Produktes ergab die gleichen Werte wie in Beispiel 1.

Beispiel 3

Zu 30 ml einer trockenen 2 : 1 (Volumenverhältnia) Mischung von Nitromethan und Benzol wurden unter Rühren 2,9 g Äthyl-4'-0-acetyl-D-pantothenat, 3,8 g Hg(CN)₂ und 7,0 g O-Acetyl-ot—D-glucopyranosylbromid hinzugegeben. Die resultierende Mischung wurde 24 Stunden lang unter Rühren rückflußbehandelt. Die dabei erhaltene Reaktionsmischung wurde den gleichen Reinigungsstufen wie in Beispiel 1 unterworfen, wodurch 0,19 g Äthyl-4'-0-acetyl-2'-0-(0-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat erhalten wurden.

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produktes ergab die gleichen Werte wie in Beispiel 1.

Dieses Produkt wurde hydrolysiert und die 2'-0-(ß-D-Glucopyranosyl)-D-pantothensäure in gleicher Weise wie in Beispiel 1 isoliert. Die N.M.R.-Analyse des Produkts ergab die gleichen Werte wie in Beispiel 1.

209822/1068

Beispiel 4

Äthyl-4^l-0-acetyl-2'-0-(0-acetyl-ß-cellobiosyl)-D-pantothenat würde in gleicher Weise wie in Beispiel I hergestellt und isoliert, nur daß 4,9 g Äthyl-4'-0-acetyl-D-pantothenat, 4,3 g Hg(GN)₂ und 12 g Hepta-O-aeetyl-oi—- cello* biosylbromid verwendet wurden. Die Ausbeute betrug 3ö^c/o.

Die NoIvI.R.-Analyse des resultierenden Produktes in GDCl, ergab folgende Werte«

N.M.R.-Spektrum (o,ppm):

0,89 (3Hf s); 0,97 (3H,· s); 1,26 (3H? t; J-7 cps); 2,0 bis 2,2 (7 x OH,); 2,55 (2Hj t; J=7 cps); 3,5 bis 5,3 (m); 6,8 (1H; t).

0,4 g des so erhaltenen Äthyl-4'-0-acetyl-2'-0-(0-acetyl-ß-eellobiosyl)-D-pantothenats wurden in 15 ml trockenem Methanol gelöst. Zu der mit Biswasser gekühlten Lösung wurden 0,5 ml einer 0,4 η Ba(OCH^)₂-Losung (in Methanol) hinzugegeben und die resultierende Mischung 24 Stunden lang bei O⁰C stehengelassen. Die resultierende Reaktionsmischung wurde in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 behandelt, wodurch 0,23 g 2'-0-(ß-Cellobiosyl)-D-pantothensäure erhalten wurden. Die Ausbeute betrug

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produkts in ergab folgende Werte*

N.M.R.-Spektrum (^,ppm);

0,88 (6H; s); 2,59 (2H; t| J=7 Gps); 3,20 bis 4,00 (m); 4,35 bis 4,54 (2H; m).

20 9 8 22/ I 068

Beispiel 5

6,0 g Benzyl-2^f--0-benzyl-D-pantothenat wurden in 50 ml einer trockenen 2 : 1 (Volumenverhältnis) Mischung von Mitromethan und Benzol gelöst. Zu der lösung wurden 5,1 g trockenes Hg(ON)₂ und 10 g aktiviertes CaSO. in Form von Pulver hinzugegeben und die Mischung bei Zimmertemperatur 1 Stunde lang gerührt. Zu der Mischung wurden weiter 8,2 g Tetra-O-aoetyl-a-D-glucopyranosylbromid hinzugefügt und die Mischung 10 Stunden lang unter Rückfluß behandelt.

Nach dem Abkühlen wurde die resultierende Reaktionsmischung filtriert und der Rückstand mit Benzol gewaschen. Die Waschflüssigkeit (washed liquid) wurde mit dem Filtrat vereinigt und die Mischung unter vermindertem Druck eingeengt. Die eingeengte Flüssigkeit wurde in Benzol gelöst zur Erzeugung von 100 ml benzolischer Lösung, die mit wässriger Kaliumbromidlösung und dann mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung und abschließend mit Wasser gewaschen wurde. Die gewaschene Flüssigkeit wurde mit KpOO- getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt, wodurch eine gelb-braun gefärbte ölige Substanz erhalten wurde. Diese wurde dann einer Silicagel-Säulenchromatographie unterworfen zur Erzielung von 6,0 g Benzyl-2'-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat. Die Ausbeute betrug 40 $.

Die H.M.R.-Analyse des resultierenden Produkts in GDOl, ergab folgende Werte:

209822/ 1 Ob 8

N.M.R.Spektrum (<■>, ppm)»

0,87 (3Hj a)) 0,94 (5Hj β); 1,98 (4 χ OH₃); 2,53 (2Hi -ti J=6 ops)? 3,1 bis 4,7 (m); • 5,05 (2H; s)} 7,25 (10 H).

6,0 g Benzyl-2'-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-D-glucopyranoayl)-D-pantothenat mirden in 30 ml Essigsäure gelöst und die Lösung mit 1,0 g Palladiummohr versetzt. Die resultierende Mischung wurde für die katalytische Reduktion 8 Stunden lang bei Zimmertemperatur in Wasserstoffatmosphäre heftig gerührt. Nach Filtrieren und Einengen der resultierenden Reaktionsmischung wurde diese der Silicagel-Säulenchro matographie unter Verwendung einer 95 t 4 t 1 (Volumenverhältnis) Mischung von CHCl₅, GH₅OH und CH₅GOOH oder einer 95 t 5 (Volumenverhältnis) Mischung von GHCl₅ und C₃H₅OH unterworfen und danach aus Äther umkristallisiert, wodurch 2,3 g 4'-0-(Tetra-0-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothen- säure erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 85 $·

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produkts in CDCl₅ ergab folgende Werte:

N.M.R.-Spektrum (<-$, ppm):

0,91 (3H; s); 0,97 (3Hj s); 2,0 bis 2,1 (4 χ CH₅); 2,6 (2H; ti J=6 cps); -3,1 bis 5,3 (m); 7,00 (1H; m).

2,3 g 4^l-0-(Tetra-0-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothensäure wurden in 30 ml trockenem Methanol gelöst. Zu der mit Eiswasser gekühlten Lösung wurden 15 ml 0,4 η Ba (OCH,)ρ-Lösung (in Methanol) hinzugegeben und die resultierend⁰ Mischung 24 otunden bei 0 G stehengelassen. Die resulen u- IteaMionnmiBohung wurde mit PO ml -.»asaer versetzt

SAD ORiQiNAL

und durch eine Säule mit "Dowex 1 χ 8" (siehe Beispiel 1) geschickt. Nach Waschen mit Wasser wurde das Produkt mit 0,5 η Essigsäure eluiert und gefriergetrocknet zur Erzielung von 1,5 g 4'-0-(ß-D-Grlucopyranosyl)-D-pantothensäure In Form eines weißen hygroskopischen Pulvers. Die Ausbeute betrug 94 fi.

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Reaktionsproduktes in DpO und die Elementaranalyse desselben ergaben folgende Wertes

N.M.R.-Spektrum (έ

0,88 (3Hj s); 0,94 (3H; s);

2,58 (2Hj t; J=6 cps)j 3,2 bis 3,9 (m); 4,03 (1H; s)? 4,37 (1H? d; J=6 cps).

Elementaranalyse:

gefunden; berechnet für

	C	H	N
47	,2996	7,129ε	3,
47	124*	7,1 \ϊ°	3,

Beispiel b

üoiiiiyl -','. ^f -O-bensy I -4 ' -0-( O-acotyl-ü-oel.loo J Odyl ) -L·- pantothunat wurden in gleicher ;vei.ae wie in iieiüpitii μ hergestellt, und isoliert, nut· da^ 4,0 g Ben.vy I ~2^l ~i)-b'ui'/,\ 1 -D-pant.)thenat, ,6 g H^;(OrJ)^-Pulvor und /,u _f; Hepfca-o-a 'etyl ->-cellot)j >i/1 t.romid verwandet wurden. iJiü AuabeutiO botru.-; 4" ',·.

209822/1OU ft

Die N.M.H.-Analyse des resultierenden Produkte in CDCl₅ lieferte die folgenden Ergebnisseι

N.la.R.-Spektrum (&,ppm)»

0,85 (3Hf s)| 0,94 (3Hj e)| 2,02 (7 x CH₅)J 2,53 (2H| tj J*6 cpe)j 3,1 bie 5,2 (m)j 7,27 (10 H).

1,5g Benzyl-2'-0-benzyl-4^t-0-(0-acetyl-ß-cellobiosyl)-D-pantothenat wurden in 10 ml Äthanol gelöst und zu der Lösung wurden 0,3 g Palladiummohr hinzugegeben. Die Mischung wurde in der gleichen Weise wie in Beispiel 5 der katalytischen Reduktion unterworfen zur Herateilung von 0,7 g 4'-0-(O-Acetyl-ß-cellbioayl)-D-pantothensäure mit einem Schmelzpunkt von 100 bis 115°0. Die Ausbeute betrug 85 ^.

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produkts in CDCl, lieferte folgende Ergebnisses

N.M.R.-Spektrum (S,ppm):

0,91 (3Hj s)f 0,95 (3Hf s)j 2,03 (7 XOH₅); 2,57 (2Hj m); 3,74 (e)f 3,4 bis 5,3 (m).

0,55 g 4'-0-(0-Acetyl-ß-cellobioayl)-D-pantothensäure wurden in 20 ml trockenem Methanol gelöst. Zu der mit JSi swasaer gekühlten Lösung wurden 2,5 ml 0,4 η Ba(OGH₅)^-Lösung (in Methanol) hinzugegeben und die resultierende Mischung 24 ,ituriden lang bei O⁰O stehengelassen. Die resultierende Keaktionsinischung wurde in der gleichen Weise wie in Beijpifci] 1 behandelt, wodurch 330 mg 4'-0-(ß-0e\ Lobioayl )-D~ pantothensäure erhalten wurden. Die Aia3beute uetrug ^vj5 5^a·

ßAD 2U9822/1Ü68

Die N.M.B.-Analyse des resultierenden Produkte in DpO und die Elementaranalyse desselben lieferten folgende Werte:

N.M.R.-Spektrum (5» ppm)ι

0,89 (3H| s); 0,92 (3Hj s);
2,58 (2H; tj J=6 cps); 3,2 bis 3,9 (m); 4,02 (1H; β); 4,36 (1H; d; J=6 cps); 4,48 (1H; dj J=6 cps).

Elementaranalyse:

0 H N

gefunden! 46,605έ 7,00$

berechnet für _iC

Beispiel 7

4,0 g Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat, 2,8 g Hg(CN)₂ und 10 g GaSO^ wurden zu 40 ml einer 3 : 1 (Volumenverhältnis) Mischung von Nitromethan und Benzol gegeben und die Mischung 2 Stunden lang bei Zimmertemperatur gerührt. Zu der resultierenden Lösung wurden 4,8 g Tri-O-benzoyl-D-ribofuranosylchlorid (gelöst in 20 ml Benzol) hinzugegeben und die reeultierende Mischung dann 20 Stunden lang unter Rühren sacht rückflußbehandelt.

Nach dem Abkühlen wurde die resultierende Reaktionsmiechung filtriert und das Piltrat unter vermindertem Druck eingeengt. Die eingeengte Flüssigkeit wurde dann in Benzol gelöst und die benzolische Lösung mit 1 m KBr und dann mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck eingeengt. Das eingeengte Produkt wurde der Silicagel-Säulenchromatographie

Ί b - MUbH

mit 1 * Äthanol enthaltendem CHGl, unterworfen zur Erzielung von 8,7 g Benzyl-2^f-0-benzyl-4^f-0-(tri-0-benzoyl-ß-D-ribofuranosyl)-D-pantothenat, einem etwas verunreinigten Kondensationsprodukt.

Dieses Produkt wurde in 15 ml Essigsäure in Gegenwart von Hp-Gas unter Verwendung von 1 g Palladiummohr als Katalysator katalytisch reduziert. Das dabei erhaltene Produkt wurde dann der Silicagel-Säulenchromatographie mit einer 96 : 3 ί 1 (Volumenverhältnis) Mischung von CHCl₅, Methanol und Essigsäure unterworfen. Die resultierende Substanz wurde anschließend aus Äther-Petroläther umkristallisiert zur Erzielung von 5,2 g 4^f-0-(!Eri-0-benzoyl-ß-D-ribofuranosyl)-D-pantothensäure. Die Ausbeute betrug 78 *.

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produkts in CDCl, und die Elementaranalyse desselben lieferten folgende Werte:

N.M.R.-Spektrum (^,ppm)»

0,99 (6H; s); 2,59; 3,58; 4,13; 4,67; 5,32; 5,735 7,0 bis 8,2.

Elementaranalyse:

C H N

gefundeni 63,32* 5,69* 2,17*

berechnet für ⁰J₅H₃₇O₁₃Ni 63,34* 5,62* 2,11*

3,2 g des so erhaltenen Produkts wurden in 10 ml einer 1 » 4 (Volumenverhältnis) Mischung von CHpCIp und Methanol gelöst und die Lösung auf O⁰C abgekühlt und dann mit 15 ml 0,5 η NaOGH, versetzt. Die Mischung wurde dann 30 Stunden

209822/106 8

lang bei Zimmertemperatur stehengelassen. Nach dem Neutralisieren und nachfolgenden Einengen unter vermindertem Druck wurde das resultierende Produkt in eine wässrige Lösung (30 ml) umgewandelt, aus der Benzoesäure durch Extraktion mit Äther entfernt wurde. Das Produkt wurde dann auf eine Säule mit "Dowex 1 χ 8" (wie Beispiel 1) gegeben, mit Wasser gewaschen und dann mit 0,5 η Essigsäure eluiert und gefriergetrocknet und ergab 1,6 g ölige 4'-0-(ß-D-Ribofuranosyl)-D-pantothensäure. Die Ausbeute betrug 94 i».

Die N.M.R.-Analyse des Produkts in DpO und die Elementaranalyse desselben ergaben folgende Werte:

N.M.R.-Spektrum (o ,ppm):

0,94; 0,99; 1,02; 2,58 (2H; t; J=7 cps)j 3,25 bis 3,95 (m); 4,02 (s)j 4,05 bis 4,32 (m); 4,97.

Elementaranalyse;

C H N gefunden* 47,29# 7,285» 3,B8>

⁴⁷ >^ö6<^ ⁷'

Beispiel 8

In gleicher Weise wie in Beispiel 5 wurde Benzyl-2^l-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-D-galactopyranosyl)-D-pantothenat hergestellt, das der Silicagel-Säulenchromatographie mit einer 6 j 4 (Volumenverhältnis) Mischung von Benzol und GH,COOCpHc unterworfen wurde zur Erzielung von 2,15 g eines

209822/1068

gereinigten Produktes. Als Ausgangsmaterialien dienten 2,0 g Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat, 1,9 g Hg(CN)₂ und 3,5 g Tetra-O-acetyl-oi-D-galactopyranosylbromid. Ausbeute; 59 $.

2,15 g des ao erhaltenen Benzyl-2'-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-D-galactopyranosyl)-D-pantothenats wurden in 5 ml Essigsäure gelöst und mit 0,2 g Palladiummohr versetzt. Die resultierende Mischung wurde der katalytischen Reduktion in gleicher Weise wie in Beispiel 5 unterworfen und nachfolgend durch Chromatographie an Silicagel mit 5 ^üß> Äthanol enthaltendem GHCl, zur Erzielung von 1,5 g 4'-0-(0-Acetylß-D-galactopyranosyl)-D-pantothensäure gereinigt. Die Ausbeute betrug 93 #.

1,5 g dieses Produktes wurden in 30 ml trockenem Methanol gelöst und mit 10 ml 0,4 η Ba(OCH^)₂ versetzt, wobei die Lösung bei O⁰G gehalten wurde. Die Mischung wurde 24 übunden Lang bei O⁰C stehengelassen. Die RenietionuLösung wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 5 behandelt zur Erzielung von Ü50 mg 4'-0-(ß-D-ualac topyranosyL)-D-panbotherii3äure. Die Ausbeute betrug 82 ^C/O.

Die Ii.M.R,-Analyse des resultierenden Produkts in D,_;0 und die Elementaranalyse desselben ergaben folgende .Verto:

N.M.R.-Spektrum (6 ,ppm)j

0,87 (3H; s); 0,93 (3H; a);

2,58 (2H; t; J=7 eps); 3,3 bis 4,0 (m); 4.04 (1Hj 3)5 4,32 (1H; d; J=7 cpa).

209822/1068 BAD ORIGINAL

Elementaranalyse j

G H N

gefunden: 47,40$ 7,17$ 3,64#

berechnet für _{A7 O/L}g, _{7 u} »/ * _fi7<3/

°15^H27 1(T *

Beispiel 9

Unter Verwendung von 3,2 g Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat, 2,1 g Hg(CN)₂-Pulver und 5,6 g Hepta-O-acetyl-amaltosylbromid wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 5 Benzyl-2^l-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-maltosyl)-D-pantothenat hergestellt, das dann durch Silicagel-Säulenchromatographie mit 2,5 ^ Äthanol enthaltendem GHCl- gereinigt wurde zur Erzielung von 3,1 g eines gereinigten Produktes. Die Ausbeute betrug 38 #„

3.1 g Benzyl-2^f-0-benzyl-4'-0-(0-acetyl-ß-maltosyl)-D-pantothenat wurden in 7 ml Essigsäure gelöst und mit 0,2 g Palladiummohr versetzt. Die resultierende Mischung wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 5 der katalytischen Reduktion und nachfolgend der Silicagel-Säulenchromatographie mit einer 95 t 4 ι 1 (Volumenverhältnis) Mischung von CHOl, ΟΗ,ΟΗ und CH₅GOOH unterworfen zur Erzielung von 1,6 g 4'-0-(O-Acetyl-ß-maltosyl)-D-pantothensäure. Die Ausbeute betrug 63 ft.

1.2 g dieses Produktes wurden in 50 ml trockenem Methanol gelöst und die Lösung auf O⁰C abgekühlt, wonach 4 ml 0,5n NaOCH, zur Lösung hinzugegeben wurden. Die Mischung wurde 3 Stunden lang bei Zimmertemperatur stehengelassen.

Nach Zugabe von 20 ml H_?0 wurde das Reaktionsprodulct in gleicher Weise wie in Beispiel 5 mit einer "Dowex 1 χ 8" (3iehe Beispiel 1) Säule gereinigt. Das gereinigte Produkt wurde dann gefriergetrocknet unter Erzielung von 700 mg 4'-0-(ß-Maltosyl)-D-pantothensäure. Die Ausbeute betrug 89

Die IMoM.E.-Analyse des resultierenden Produktes in DpO und die Elementaranalyse lieferten folgende Ergebnisse:

N.MoRo-Spektrum (^

0,89 (3H; s); 0,94 (3H; s);

2,58 (2Hj t; J=7 cps); 3,2 bis 4,0 (m);

4,01 (1H; s); 4,37 (1Hj d; J=7 cps);

5,31 (111; d; J=3 cps).

Elementaranalyses

	für	46	C	H
ge fundens		46	,48$	6,88$
berechnet ϋ21Η37°15ί			, 40$	6,86$
Beispiel 10

2,58$

Zu 30 ml trockenem Benzol wurden 3,35 g Methyl-D-panto· thenat und 4,0 g Hg(GN)ρ hinzugegeben.. Die resultierende Mischung wurde tropfenweise innerhalb von 6 Stunden unter Rühren und Rückflußbehandlung mit 10 g 2,3,4,6-Tetra-O-benzoyl-oi-D-glucopyranosylbromid (gelöst in 100 ml Benzol) versetzt. Das Reaktionssystem wurde weiter 2 Stunden lang unter Rühren rückflußbehandelt.

Nach dem Abkühlen wurde die resultierende Reaktions-

2U9822/ 1068

.mischung filtriert. Der Rückstand wurde mit Ben. ---i gewaschen und nach Vereinigung der Waschflüssigkeit (the washing) mit dem FiItrat wurde die Mischung unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde in 100 ml Benzol gelöst und mit wässriger Kaliumbromidlösung, mit gesättigter Natrium-Mcarbonatlösung und schließlich mit Wasser gewaschen. Die gewaschene benzolische Lösung wurde mit Kaliumcarbonat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde der Silicagel-Säulenchromabographie unter Verwendung von Chloroform mit 2,5 V0I.-96 Äthanol unterworfen, wodurch 4,0 g Methyl-4'-0-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-päntothenat erhalten wurden.

Die if.„i.R₀-Analyse des resultierenden Produktes in CDOl, und die BLementaranalyse desselben ergaben folgende Wertei

NoMo R₀-Spektrum (_CS , ppm):

0,85 (611; s); 2,44 (211; t; J=7 cpa); :>,2.5 bis 3,95 (m); 4,50 bis 4,95 (in); 6,02 bis 5,57 (m); 7,20 bis 8,10 (20 H; m). .

Elementaranalyse!

	64	O	H	1	N
gefunden}	65	,9696	5,65/«	1	,77?b
berechnet für ΰ44Η25°14Ν :	,09/o	5,5996	,73/

1,6 g Methyl-4'-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat wurden in 5 ml Dichlormethan gelöst und weiter mit 15 ml trockenem Methanol versetzt. 6 ml 0,5 η NaOGH-, wurden zu der Lösung hinzugegeben, die danach 24 Stun-

209822/1068

den lang bei 2O⁰C stehengelassen wurde. Wach Abkühlen und Neutralisieren mit Ohlorwasserstoffsäure wurde die resultierende Reaktionsmisehung durch eine ijäule mit "Dowex 1 χ b" (siehe Beispiel 1) geschickt. Nach Waschen mit Wasser wurde das Produkt mit 0,5 η Essigsäure eluiert und gefriergetrocknet unter Erzielung von 0,68 g 4'-0-(13-D-GIuCopyranosyl)-B-pantothensäure in "Form eines weißen hygroskopischen Pulvers. Die Ausbeute betrug 90 °/o.

Das M.M.R.-Spektrum des resultierenden Produktes in D_?0 und seine ßlementaranalyse zeigten folgende Werte ι

N.M.R.-Spektrum (_cS,ppm)i

0,88 (3Hj s); 0,94 (3H; s); 2,58 (2I£; t; J =6 eps); 3,2 bis 3,9 (m); 4,03 (III; a); 4,37 (1H; d; J=6 cps) .

Elementaranalyse:

gefunden: berechnet für

C	2	'Yi''	H	Π	'/«	N
47,	2	7,	M		3, 8Ο/ο
47,		7,		3,67^

Beispiel 11

Zu 50 ml trockenem Benzol wurden 7,0g Methyl-D-pantothenat und 8,5 g Hg(GN)₂ hinzugegeben. Die resultierende Mischung wurde tropfenweise in 10 stunden unter Rühren und Rückflußbehandlung mit 13,0 g 2,3,4, 6-Tetra-O-acetyL-sX-D-glucopyranosylbromid (gelöst in 150 ml Benzol) versetzt und

ORIGINAL INSPECTED 209822/1068

das Reaktionssystem weiter 2 Stunden lang unter Rühren rückflußbehandelt.

Die resultierende Reaktionsmischung wurde dann in gleicher Weise wie in Beispiel 10 behandelt und der Silicagel-Säulenchromatographie unter Verwendung von Chloroform mit 4,0 Vol.-'/fe Äthanol unterworfen, wodurch 3,27 g Methyl-4'-0-(2,3,4,6-tetra-0-ac etyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat erhalten wurde.

Die H.Μ.Ro-Analyse des resultierenden Produktes in -z und seine Elementaranalyse ergaben folgende Werte»

G	11$	H	2	N
51,	15$	6,67$	2	,49$
51,	6,62$	,49$

N.MoR.-Spektrum O

0,90 (3H; s); 0,98 (311; s);

1,96 bis 2,12 (4 x CH₃CO); 2,55 (2H; t; J=6 cps);

3,20 bis 5,20 (m); 3,68 (3H; s).

Elementaranalyse ι

gefunden:

berechnet für

Π H O N ·
^υ24 37 14 '

200 mg Methyl-4'-0-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-ß-D-glucopyranosyl)-D-pantothenat wurden in 5 ml Methanol gelöst. Zu der mit Eis gekühlten lösung wurde 1 ml 0,4 η Ba(OCH„) hinzugegeben und die Lösung danach 24 Stunden lang bei O⁰G stehengelassen.

Nach Verdünnen mit 10 ml Wasser wurde die resultierende Reaktionsmischung in gleicher Weise wie in Beispiel 10 behandelt, wodurch 127 mg 4'-O-Cß-D-GlucopyranosylJ-D-panto-

209822/1068

thensäure erhalten wurden.

Die N.M.R.-Analyse des resultierenden Produktes in CDCl, und seine Elementaranalyse ergaben folgende Wertei

FoM.R.-Spektrum (^,ppm)«

0,88 (3H; s); 0,94 (3H; β);

2,58 (2H; t; J=6 cps); 3,2 bis 3,9 (m); 4,03 (1H; s); 4,37 (1H; d; J=6 cps).

Elementaranalyse: gefunden:

berechnet für G₁₅H₂₇O₁₀N :

C	7	H	N	78/
47,27/	7	,12/	5,	67/
47,24/	,14/	3,

209822/1068

Claims (9)

Patentansprüche

1. Glylcosylpantothensäuren der allgemeinen Formel

CH₃
R¹OGH₀ -C- CHCOWHCh₀CH₀COOH

c-x ip c. <L

CH₅ ΟΪΓ

1 2
in der einer der Reste R und R ein Wasserstoffatom und der andere ein ß-D-Ribofuranosyl-, ß-D-Glucopyranosyl-, ß-D-Galactopyranosyl-, ß-Cellobiosyl- oder ß-Maltoaylrest ist«

2. Glykosylpantothensäuren nach Anspruch 1, dadurch gekenn-

2
zeichnet, daß R in der obigen Formel ein ß-D-Glucopyranosyl- oder ß-Cellobiosylrest ist.

3. Glykosylpantothensäuren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R in der obigen Formel ein ß-D-Ribofuranosyl-, ß-D-Glucοpyranosyl-, ß-D-Galactopyranosyl-, ß-Cellobiosyl- oder ß-Maltosylrest und insbesondere ein ß-D-Glucopyranosylrest ist.

4. Verfahren zur Herstellung von 2'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäuren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein insbesondere durch Umsetzung von Alkyl-4¹-O-acyl-D-pantothenat mit Acylzuckerhalogenid erhaltenes Alkyl-4'-0-acyl-2'-0-(0-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat zur 2¹-O-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure desacyliert und desalkyliert und das resultierende Produkt aus der Reaktionsmischung abtrennt.

20Ü822/ 1 068

5. Verfahren zur Herstellung von 4¹-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine insbesondere durch Hydrierung von Benzyl-2¹-0-benzyl-4'-0-(0-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat erhaltene 4'-0-(0-Acyl-ß-glykosyl)-D-pantothensäure zur 4'-0-(B-GIykosyl)-D-pantothensäure desacyliert und das resultierende Reaktionsprodukt aus der Reaktionsmischung abtrennt.

6. Verfahren zur Herstellung von 4¹ -0-(ß-G-lykosyl)-D-pantothensäure nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Benzyl-2'-0-benzyl-D-pantothenat mit Acylzuckerhalogenid zum Benzyl-2'-0-benzyl-4^f-O-(O-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat umsetzt, das zur 4'-0-(0-Acyl-ß-glykosyl)-D-pantothensäure hydriert wird, die zur 4^t-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure desacyliert wird und daß man das resultierende Produkt von der Reaktionsmischung abtrennt«

7. Verfahren zur Herstellung 4'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Alkyl-B-pantothenat mit einem Acylzuckerhalogenid zum Alkyl-4^f-0-(O-acyl-ß-glykosyl)-D-pantothenat umsetzt und das Umsetzungsprodukt zur 4'-0-(ß-Glykosyl)-D-pantothensäure desacyliert und desalkyliert und das erhaltene Produkt aus der Reaktionsmischung abtrennt.

8. Verwendung der Glykosylpantothensäuren nach Anspruch 1 als Nahrungs- und Futterzusätze.

9. Pharmazeutische Mittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Glykosylpantothen3äure nach Anspruch 1.

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