DE2110416A1 - Stabile Chromogene mit analytischer Applikation sowie Verfahren fuer die Herstellung derselben - Google Patents

Stabile Chromogene mit analytischer Applikation sowie Verfahren fuer die Herstellung derselben

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DE2110416A1 DE19712110416 DE2110416A DE2110416A1 DE 2110416 A1 DE2110416 A1 DE 2110416A1 DE 19712110416 DE19712110416 DE 19712110416 DE 2110416 A DE2110416 A DE 2110416A DE 2110416 A1 DE2110416 A1 DE 2110416A1
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    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/10—Benzidines

Description

DR. ING. F. WtTESTHOFF 8 MÜNCHEN
Ϊ. G. PULS SOHWEIQEHSTHAeSB β
[MANN Taiaroir 83 0« Sl
BR. ING. B. BBHRBNS niMumiADKmi Patentanwalts raoTacTFATaKT mcxcmxx
1A-39 239
Be Schreibung zur Patentanmeldung der
Aktiebolaget Kabi, Lindhagensgatan 133» S-104 25, Stockholm / Schweden
betreffend
Stabile Chromogene mit analytischer Applikation sowie Verfahren für die Herstellung derselben.
109838/1832
Stabile Chromogene mit analytischer Applikation sowie Verfahren für die Herstellung derselben
Der Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind neue, stabile Chromogene mit analytischer Applikation sowie anwendbare Verfahren für die Herstellung derselben.
Bei mehreren Analysemethoden wird da« bei der Reaktion gebildete Wasserstoffperoxyd benutzt um eine geeignete chromogene Substanz, die in reduziertem Zustand im sichtbaren Teil des Spektrums nicht absorbiert, in ihre oxydierte Form zu überführen, welche sichtbares Licht absorbiert. " Solche Analysemethoden werden bei der Bestimmung individueller Zuckerarten, z.B. Glukose, Galaktose, verwandt, wo eine für die Zuckerart spezifische Oxydase, Oxygenoxydoreduktase, z.B. Glukoseoxydaee, Galaktoseoxydase, nur auf die Zuckerart einwirkt, die man zu bestimmen wünscht, unter Bildung von Wasser stoffperoxyd, da« unter Einwirkung von Per oxydaseenzym, Hydrogen-Peroxyd-Oxydoreduktaee, unter proportionaler Farbveränderung mit einer chromogenen Verbindung oxydiert. Weitere ähnliche Analysen sind z.B. die Bestimmung von Urinsäure unter Benutzung von Uricase, von Aminosäuren mit Hilfe der entsprechenden Aminosäureoxydase und von Pyridoxaminphosphat mittels Pyridoxaminphosphatoxydase.
^ In diesen Systemen haben Benzidinderivate wie o-Dianisidin und o-Tolidin
eine weitgehende praktische Verwendung gefunden. In oxydiertem Zustande erhält man Absorption im Wellenbereich um 450 Nanometer (nm) und ein geradliniger Zusammenhang zwischen Extinktion und der Komponente welche die Bestimmung bezweckt liegt vor.
Die bisher verwandten Chromogene weisen jedoch einige Nachteile auf. Bei Berazidiaderivaten ist dia Schwerlöslichkeit, welche in reduzierter Form bei atwa 10 mg pro Liter liegt, störend. Die Farbe muss daher binnen einer kurzen Zeitspanne abgelesen werden. Die Farbe von oxydiertem o-Dianisidin ist ausserdem lichtempfindlich.. Die Extinktion kann bei Beleuchtung rasch sinken, was bis zu 25% falsche Ergebnisse zur Folge hat mit grosser Streuung. Die Zeit für die Farbentwicklung bei ca 450 nm ist bei Bestimmungen
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unter Ausnutzung von o-Dianisidin und o-Tolidln störend lang. Dei Zimmertemperatur ist eine Zelt von 50 bis 60 Minuten erforderlich. Das Schlauchmaterial, welches in Analyseinstrumenten verwandt wird, absorbiert oxydiertes o-Dianisidin und o-Tolidin, was zu einer Entfärbung des Schlauchmaterials und falschen Analysedaten führt. Um die störend lange Entwicklungszeit für die Farbefdie Licht im gleichen Wellenbereich wie o-Dianisidin absorbiert, zu vermeiden, ist es üblich, dass man mit o-Tolidin eine zeitweilig auftretende Farbe benutzt die eine Absorption bei ca. 630 nm aufweist. Diese Farbe ist jedoch sehr empfindlich gegen Variationen in pH und Temperatur, die auch den Zeitpunkt beeinflussen wo eine maximale Farbentwicklung vorliegt.
Die Studien die durchgeführt wurden um Chromogene zu erzielen mit Eigenschaften, welche den höheren Ansprüchen, die eine moderne Analysentätigkeit erfordert, zu geniigen, haben zu Verbindungen geführt die die gestellten Ansprüche erfüllen mit folgender allgemeiner Formel
(O)n - A - X und ihre Salze und Sauren oder Basen, z.B. di-HCl bzw. di-Na, wobei
η - ö,oder I
A -- niedrigere Alkylkette mit wenigstens 3 Kohleatomeaiwischen -(O) - und - X
X = Carboxyl- oder Sulfonsäure Folgende Laboratoriumuntersuchungen gemäss standardisierten Methoden wurden angewandt bei der Auswertung der neuen Chromogene. Glukose wurde als Test- oder Modell zuckerverbindimg bei den analytischen Bestimmungen weifer unten benutzt, zusammen mit ihrer spezifischen Oxydase, Glukose oxydase, welche die mit den Standardreagenzienbestandteilen hinzugegebene Oxydase ist. enthalten in des folgenden Standardanzeige komposition
Chromogen 0,2 mM
Peroxydase 300 Einheiten
Spezifische Oxydase 3000 "
Phosphatpuffersalze O1IM
Destilliertes Wasser zu 1000 ml 10 S 838/1832
211041g 1
Die Test lösungen enthielten Glukose in den Konzentrationen 25, 50, 200, 300 und 400 mg pro 100 ml.
Bei der routine massigen Verwendung von auf den hier beschrieben Prinzipien aufgebauten Reagenzien werden auch Bertimmungen in biologischem.· pro te Inhaltigem Material vorgenommen, z. B. Blut. In solchen Fällen wird zuerst eine Proteinfällung vorgenommen, z.B. mit 0,33 M glycingepufferter Perchlorsäure, pH = 2,7, wobei eine Verdünnung der Probe auf 1:21 vorgenommen wird. Vor der endgültigen Bestimmung wird diese Lösung im Verhältnis 1:11 verdünnt mit dem oben beschriebenen Reagens, wonach man die Farbentwicklung bei 450 nm misst. Wenn man dieses Verdünnungschema auf die testlösungen verwendet erhält man Lösungen mit Glukosehalten 1,1; 2,2; 4,3; 8,6; 13,0 und 17,3 mg pro Liter.
Im folgenden wird die Erfindung durch zwei Serien von Beispielen belegt; teils eine Analyseserie mit römischen Ziffern und teils eine Syntheseserie mit arabischen Ziffern.
A naiv se ser te Beisplel_I_
Eine Reagenszubereitung laut angegebener Standardzusammensetzung mit 0,2 mM y.y'-^^'-Diamlno-S.S'-Biphenyldloxyjdlbuttersäure-diHCl, gemäss Beispielen 1-4 ale Chromogen erhalten, wird laut Standardschema auf die verschiedenen Teillösungen hin ausgewertet. Ma ximale Farbentwicklung trifft bei 450 nm ein binnen 25 Minuten bei 25°C bzw. 15 Minuten bei 37°C. Die Wasserlöslichkeit des Säureadditionssalzes des neuen Chromogens ist gut, und deshalb trifft keine Fällung des Chromogens ein. Die Farbstabilität des Chromogens gemäss Beispiel 4 bei Extionktlonsmaximum macht ein Ablesen zu einem wahlfreien Zeitpunkt bis zu 4 Stunden möglich, welches die längste untersuchte Zeitspanne darstellt.
Bei der Verwendung automatischer Analyse instrumente ist es wünschenswert, dass das Gummi oder die verschiedenen Plasticmaterialien, welche in die schläuche eingehen, nicht von der Reagenslösung verfärbt werden sollen. Muster verschiedener Schjauchtypen wurden 24 Stunden in die Reagenslösung getaucht
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2110415.
Schlauchmuster, die in Reagenskomppsitionen das Chromogen laut Beispiel 4 enthaltend, getaucht wurden, verfärbten sich nicht, wogegen Schlauchmuster in Lösungen,die o-Dianisidin enthielten, braun verfärbt wurden« In dem Masse wie Reaktionen zwischen dem Schlauchmaterial und dem Chromogen auftreten, ergeben die nachfolgenden Analysen falsche Werte.
Beispiel_n
Eine Reagenslösung laut angegebener Standardzueammensetzung mit 0,2 mM γ, γ' -(4,4* -Diamino-3,3' -Biphenyldloxy) dipropan-Sulfonsäure, laut Beispielen 5-6 als deren Chromogen erhalten, wird laut Standardschema auf die verschiedenen ' Testlösungen hin ausgewertet Maximale Farbentwicklung bei 430 - 450 nm trifft binnen 25 Minuten bei 25°C ein:. Die Wasserlöslichkeit des neuen Chromogens ist gut, und folglich trifft keine Fällung des Chromogens ein. Die Farbstabilität des Chromogens laut Beispiel 6 bei Extinktionsmaximum macht Ablesen zu einem wahlfreien Zeitpunkt bis zu 4 Stunden möglich, was die längste beobachtete Zeitspanne ist. Ebenso wird das Schlauchmaterial das normalerweise zu den automatischen Analyseinstrumenten gehört,durch das Chromogen nicht beeinflusst.
Untersuchungen der übrigen Verbindungen laut Erfindung zeigen dass die Eigenschaften, welche für die beiden Chromogene in Beispiel I und II typisch sind, auch bei den anderen Chromogenen vertreten sind, welche die allgemeine Formel umfasst. Vergleiche zwischen gewöhnlich verwandten Ben-zidinderivaten und Chromogenen laut Erfindung weisen folgende Ergebnisse auf:
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ο co co co co
co co to
Chromogen Wellenlänge
mn		 pH-Wert Löslichkeit bei pH 7 mg/1 oxydiert
(gefärbt)		 Ext inkt, verm
96 nach Be
strahlung
5 Min. mit
40 W Lampe		 Zeit f.d.
Farbent
wicklung
min*		 370C Absorption
an
Schlauch
material
o-Dianisidin
o-Tolidin
o-Tolidin
Laut Beispiel I
Laut Beispiel II		 450
430
630
450
450		 6,5
6,5
4,5
6,5
6,5		 reduziert
(ungefärbt)		 10
7
7
700
120		 26
1
instabil
2
2		 250C 35
45
6
15
15		 II+ + +
110
130
130
70000
12000		 50
60
10
25
25
2110 418
Die Chromogene laut Erfindung können auf viele, an und für eich bekannten Arten hergestellt werden, wobei in jedem besonderen Falle in erster Linie der Zugang zu einem geeigneten Ausgangsmaterial ausschlaggebend ist. In den Fällen, wo η = 1 ist es z.B. angebracht von dem im Handel leicht erhältlichen o-Dianisldin auszugehen«
weiches durch Demethylierung und Acylierung in Diphenol überführt wird, das an die gewünschte Seitenkette angeschlossen wird, wonach man die Schutzgruppe η entfernt. Geeignete Schutzgruppen für die Aminogruppe sind z.B. Acetyl- oder Phtalylgruppen. Vor dem Anschluss wird das Diphenol am besten in ein Salz überführt, vorzugsweise ein Natrium- oder Kaliumsalz, durch Reaktion mit beispielsweise Natriumhydrid, Natriumalkoholat oder Kalium alkoholat, und der Anschluss geschieht in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, einem Alkohol oder eventuell in einer Wasserlösung. Im letzteren Falle kann die Salzbildung einfach mit Alkalihydroxyd erreicht werden.
Geeignete Gruppen für die Einführung der gewünschten Seitenketten haben die allgemeine Formel
Z-A-Y
in welcher A die angebene Bedeutung hat, Z ein Halogenatom oder eine Arylsulfonyloxygruppe sowie, in solchen Fällen wo X eine Carboxylgruppe ist, Y eine Carboxylgruppe bedeutet oder eine andrer Gruppe z.B. eine Cyanidgruppe oder eine Alkoxy carboxylgruppe, welche in eine Carboxylgruppe überführt werden kann. In den Spezialfallen wo A (-CH„-)2 ist kann der Anschluss durch Zusatz von Acrylnitril geschehen. Wenn X von einer Sulfon-
säuregruppe gebildet wird kann V z.B. ein Halogenatom sein oder eine 109838/1832
Hydroxylgruppe, die danach in gewöhnlicher Weise in eine Sulfonsäuregruppe überführt wird. In diesem Falle kann der Anschluss auch vorzugweise mit einem zyklischen Sylfonester geschehen wie Propan- oder Butansulton . Alternativ kann o-Dianisidin als Ausgangsmaterial verwandt werden indem man die Verbindung zuerst in 3,3'-Dihydroxy-4,4'-Dinitrobiphenyl überführt, weiches wie oben beschrieben an eine geeignete Seitenkette angeschlossen wird, wonach schliesslich die Nitrogruppen durch Reduktion in Aminogruppen überführt werden.
In den Fällen wo η die Zahl 0 ist und X eine Carboxylgruppe geschieht die Herstellung am einfachsten indem man von Laktamen mit der Formel
ausgeht, in welcher A die angegebene Bedeutung hat. Diese Laktamen erhält man leicht aus den entsprechenden zyklischen Ketonen
Die Laktamen werden in die entsprechenden Halogenverbindungen überführt
Hal
vorzugsweise Jodverbindungen, woraufhin man diese, nachdem man die Aminogruppen durch Einführung eines Acyl- oder Sulfonrests inert gemacht hat,duroh Reaktion mit Kupfer (Ullmann-Schaltung) in die Biphenylderivate
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überführt, welche nach Hydrolyse die gewünschten Verbindungen ergeben.
Vor ihrer Verwendung als Reagenzien können die hergestellten Säuren je nach Wunsch in geeignete Salze überführt werden. So erhält man wenn X eine Carboxylgruppe ist Additionssalze mit z.B. Chlorwasserstoffsäure und anderen starken Säuren. Ebenso erhält man Salze mit Metallen z.B. Natrium oder Kalium.
Syntheseserie Beispiel^ I^
Zu einer Suspension von 16 g Natriumhydrid in 800 ml wasserfreiem Dimethylformamid wird unter Umrühren in Stickstoffatmosphäre total 90 g 4,4' -Diacetamino-3,3' -Dihydroxybiphenyl in kleinen Mengen hinzugegeben, wobei die Temperatur durch Kühlung im Kältebade bei etwa -5 C gehalten wird. (Die Mischung wird umgerührt bis die Entwicklung von Wasserstoff aufhört, etwa eine Stunde). Bei fortgesetzter Kühlung wird 90 g Methyl-y-Chlorbutyrat hinzugeträufelt. Das Kältebad wird entfernt und die Temperatur auf etwa 20 C erhöht. Die Einleitung von Stickstoff wird unterbrochen und die Temperatur wird nach und nach auf 80 C erhöht und bei dieser Temperatur über Nacht beibehalten. Der Hauptteil des Lösungsmittels wird unter Vakuum auf Wasserbad abdestilliert und der Rest im Kolben unter Umrührung in 2 1 Eiswasser gegossen. Nach einigen Stunden wird das Produkt abgesaugt und gründlich mit Wasser gewaschen. Das Rohprodukt wird getrocknet und danach in 2 1 kochendem 2-Propanol gelöst und filtriert. Nach Abkühlung erhält man 110 g (73%)Methyl γ,γ' -(4,4* -Diacetamino-3,3'Biphenyldioxy)dibutyrat Eine Probe wird aus 2-Propanol umkristallisiert und schmilzt danach bei 152-160°C.
Beispiel_2_
Dieser Methylester von Beispiel 1 (74 g) wird in Stickstoffatmosphäre unter Umriihrung in kleinen Mengen zu einer Lösung von 27 g Natriumhydroxyd in 450 ml Wasser und 450 ml Methanol hinzugegeben , wobei die Temperatur etwa 20 Stunden bei 20 C gehalten wird und danach während 6 Stunden bei 50°C.
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Der Hauptteil des Methanois wird im Vakuum abdestilliert. Nach weiterer Verdünnung mit 3 1 Wasser wird die freie γ, y -(4,4* -Diacetamino ,3,3'-Biphenyldioxy).dibuttersäure durch vorsichtigen Zusatz von 2 N Chlorwasserstoffsäure ausgefällt. Die ausgefällte Substanz wird separiert und mit Wasser gewaschen. Ausbeute etwa 90%. NachUmkristalliaation aus einer Mischung von Essigsäure und Wasser schmilzt das Produkt bei 214 - 217 C.
Beispiel 3_
Die Diacetylaminoverblndung von Beispiel 2 (40 g) wird unter Rücklauf 6 Stunden lang mit 500 ml konzentrierter Chlorwasserstoff säure gekocht. Die Kristallmasse wird abgesaugt und mit konz. Chlorwasserstoff säure gewaschen. Zur Reinigung wird in einer erforderlichen Menge kochendem Wasser aufgelöst, wonach konz. Chlorwasserstoff säure zur beginnenden Kristallisation hinzugegeben wird. Nach Abkühlung wird das Produkt abgesaugt, mit konz. Chlorwasserstoff gewaschen und in Vakuum über festem Kaliumhydroxyd getrocknet. Ausbeute 80% Dihydrochlorid von γ, y~(4,4'-Diamino-3,3'-Biphenyldioxy)dibuttersäure. Das Produkt zerfällt ohne festgestellten Schmelzpunkt bei Erhitzung.
Beispiel^
Das Dihydrochlorid von Beispiel 3 (0,92 g) wird in 10 ml Wasser aufgelöst. Nach Abkühlung auf Zimmertemperatur wird 0,32 g Pyridin hinzugegeben, wobei die freie γ, y'-(4,4'-Diamino-3, 3'-Biphenyldioxy)dibuttersäure sofort anfängt zu kristallisieren. Das Produkt wird abgesaugt und mit Wasser gewaschen. Man erhält ein grauweis see Kristallpulver, welches bei etwa 65 C Kristallwasser abgibt und bei etwa 160 - 165 C zerfällt.
Beispiel, 5_
Zu einer Lösung von 26,7 g Natriumhydroxyd in 300 ml Methanol wird 90 g 4,4'-Diacetamlno-3,39-Dihydroxypnenyl hinzugegeben. Nach Lösung dieses Diphenolswird ein Schlamm von y~Propansulton hinzugegeben (73,3 g) in 200 ml Methanol. Die Mischung wird bei 85 C während 1 Stunde erwärmt wobei man einen Kristalibrei erhält. Nach Abkühlung wird das Produkt abgesaugt und mit kaltem Methanol gewasohen . Zur Reinigung wird das rohe Dinatriumsalz der γ, y'-(4,4'-Diacetamlno-3,3'- Biphenyldioxy)dipropan-
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sulfon säure in 500 ml Methanol aufge schlämmt und abgesaugt. Nach Trocknen erhält man 108 geiner hellbraunen Substanz, die ohne festgestellten Schmelzpunkt zerfällt.
Beispiel 6_
Eine Lösung des Dinatriumsalzes von Beispiel 5 (40 g) in 250 ml Wasser wird filtriert durch eine Kolonne, welche wasserstoff iongesättigtes starkes Kationaustauschmaterial enthält. Das von Natriumionen freie Filtrat wird 2 Stunden lang gekocht unter Rückfluss mit SOO ml konz. Chlorwasserstoffsäure und bis zur beginnenden Kristallisation eingedunstet. Nach Abkühlung wird das Produkt abgesaugt und mit Methanol gewaschen. Zur Reinigung wird das Rohprodukt in 1,2 1 kochendem Wasser aufgelöst und mit Kohle
filtriert. Bei Abkühlung kristallisiert 11,7 g y,y'-(4,4'-Diamino-3,3'
-Biphenyldioxy)dipropansulfonsäure, welche bei über 300 C ohne festgestellten Schmelzpunkt zerfällt. Aus der Mutterlauge erhält man nach Konzentration weitere 8,7g.
Beispiel_7_
β- Butansulton wird mit 4,4'Diaeetamino-3,3*-Dihydroxybiphenyl verlagert, wie im Beispiel 5 für γ-Propansulton beschrieben, und das erhaltene Produkt wird wie im Beispiel 6 beschrieben hydrolisiert. Hierbei erhält man o, d-(4,4' -Diamino-3,3'Biphenyldioxy)dibutansulfonsäure als farblose Kristalle, welche
bei Erhitzung bei etwa 270 C zerfallen.
Beispiel^ 8_
2-0x0-2,3,4,5-Tetrahydro-l-H-l-Benzazepin (32,2 g) werden in 300 ml kristallisierter Essigsäure aufgelöst. Unter Umrührung wird eine Lösung von Jodmonochlorid (32,5 g) in 200 ml Essigsäure hinzugegeben. Die Mischung muss 2 Tage bei Zimmertemperatur stehen und wird mit einer grossen Menge Wasser verdünnt. Das ausgefällte Produkt wird abgesaugt, mit Wasser gewaschen und aus einer Mischung von Äthanol und Wasser umkristallisiert. Das erhaltene 7-Jod-2-Oxo-2,3,4,5-Tetrahydro-l-H-l-Ben zazepin schmilzt bei 187 - 188 C.
Be_ispiel_9. 1CS838/1832
Wenn man im Beispiel 8) 2-Oxo-l,2,3,4,5,6-Hexahydre-l--Ben2;azoein einsetzt
statt 2-Oxo-2,3,4, 5-Tetrahydro-l-H-l-Benzazepin erhält man in entsprechender Weise S-Jod^-Oxo-l^.S^.S.ö-Hexahydro-l-Benzazocin.
Beispie I^ 10
7-Jod-2-Oxo-2,3,4,5-Tetrahydro-l-H-l-Benzazepin aus Beispiel 8 (10 g) wird unter Rifcklauf 6 Stunden lang mit 160 ml Essigsäureanhydrid gekocht. Die Lösung wird im Vakuum eingedunstet wobei man ein dickes Öl erhält, welches bei Behandlung mit Methanol kristallines N-Acetyl-7-Jod-2-Oxo -2,3,4, 5-Tetrahydro-l-H-l-Benzazepin ergibt mit einem Schmelzpunkt von 116 - 117 C.Ausbeute etwa 9,5 g.
Beispiel_ll
Auf entsprechende Weise erhält man N-Acetyl-8-Jod-2-Oxo-l, 2,3,4,5,6 -Hexahydro-1-Benzazocin aus 8-Jod-2-Oxo-l,2,3,4, 5,6-Hexahydro-l-Benzazocin.
Beispiel^ 12
9,4 g N-Acetyl-7-Jod-2-Oxo-2,3,4,5-Tetrahydro-l-H-Benzazepin, 100 ml wasserfreies Dimethylformamid und 20 g Kupferpulver werden unter Rücklauf 3 Stunden umgerührt, wonach weitere 20 g Kupferpulver hinzugegeben werden und die Mischung während weiterer etwa 12 Stunden umgerührt wird. Feste Substanz wird abfiltriert und mit Dimethylformamid gewaschen. Die gemeinsamen Filtrate werden im Vakuum zu kleinem Volumen eingedunstet. Bei Zusatz von Wasser erhält man eine feste Substanz (4,6 g), die in einer 50-prozentigen Methanol-Wassermischung gelöst wird. Die Lösung wird filtriert und mit ein wenig NatriumhydroxydEaing versetzt, wobei Verunreinigungen ausgefällt und abfiltriert werden. Das gebildete 7, 7' -Bi(2-Oxo-2,3,4, 5-Tetrahydro-l-H-l-Benzazepin) wird aus dem Filtrat durch Zusatz von 2 N Chlorwasserstoff säure als farblose Kristalle ausgefällt, die nach Umwandlung bei ca 178 C ohne festgestellten Schmelzpunkt bei über 300 C zerfallen.
Beispiel^ 13_
In entsprechender Weise wird 8,8' -Bi-(2-Oxo-l, 2,3,4,5,6-Hexahydro-l-Benzazocin hergestellt. * Q 9838/1832
Beispiel_14 j$
Das 7,7'-Bi-Benzazepinderivat von Beispiel 12 (1 g) wird 7 Stunden lang bei 150 C in einem Autoklaven mit 140 g gesättigter Bariumchloridlösung erwärmt. Nach Abkühlung wird Natriumkarbonatlösung hinzugegeben, das ausgefällte Bariumkarbonat abfiltriert und die gebildete γ, γ' -(4,4' -Diamino-3,3'-Biphenyl)dibuttersäure aus dem Filtrat durch Zusatz von Essigsäure auf etwa pH 5 ausgefällt. Das Produkt zerfällt ohne festgestellten Schmelzpunkt bei etwa 120°C.
Beispiel^ 15_
8,8'-Bi-(2-Oxo-l,2,3,4,5,6-Hexahydro-l-Benzazocin) (10 g) wird unter Rücklauf 12 Stunden lang mit konz. Chlorwasserstoffsäure (200 ml) gekocht. Die Lösung wird auf kleines Volumen eingedunstet, mit Wasser verdünnt wonach der pH auf 5-6 eingestellt wird durch Zusatz von einer konzentrierten Natriumacetatlösung. Die ausgefällte O © -(4,4'-Diamino-3,3'-Biphenyl>divaleriansäure wird abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Man erhält ein grauweisses Kristallpulver, welches sich an der Luft leicht verfärbt und ohne festgesetzten Schmelzpunkt zerfällt.
1 09838/ 1Ö32

Claims (1)

  1. PAtENTANSPRUCHE
    Verbindungen mit der allgemeinen Formel
    X-A -(O) (0) - A - X
    η η
    und deren Salze mit Säuren oder Basen, z.B. di-Hcl bzw. di-Na, wobei
    η = 0 oder 1
    A - niedrigere Alkylkette mit wenigstens 3 Kohleatomen zwischen -(O) - und X
    X = Carboxyl- oder Sulfonsäure Chromogen in Form einer Verbindung mit der allgemeinen Formel
    X-A-(O) η
    und ihre Salze, z.B. di-HClbzw. di-Na, wobei
    η = O oder 1
    A ■ niedrigere A Ikylkette mit wenigstens 3 Kohleatomen zwischen -(O) - und - X
    X = Carboxyl- oder Sulfonsäure Chromogen in Form von γ,γ'-(4,4'-Diamino-3,3'-Biphenyldioxy)d!buttersäure
    Chromogen in Form von γ,-/-(4,4'-Dinmino-S.S'-Biphenyldioxyjdipropan-
    5. Chromogen gemäss Patentanspruch 2, durch Analogieveriahren hergestellt,
    gekenntzeiehnet dadurch, dass Biphenylderivate Gruppen enthaltend die in Aminogruppen überführt werden können durch Hydrolyse oder Reduktion als Ausgangsmaterial verwandt werden.
    1 09838/1832
    Verfahren für den analytischen Nachweis von Stoffen, z.H. Zuckerarien, welche durch spezifische Oxydoreduktasen Wasserstoffperoxyd bilden, in System von Oxydoreduktase, Peroxydase und Chromogen bestimmbar, gekenntzeichnet dadurch dass das Chromogen aus einer Verbindung mit der allgemeinen Formel besteht
    X-A -(O) (OL - A - X
    und ihre Salze, z.B. di-HCl bzw. di-Na, wobei
    η = 0 oder 1
    A - niedrigere Alkylkette mit wenigstens
    3 Kohleatomen zwischen -(O)- und - X
    X = Carboxyl- oder Sulfonsäure
    Verfahren für den analytischen Nachweis von Stoffen, z.B. Zuckerarten, welche mittels spezifischer Oxydoreduktasen Wasserstoffperoxyd bilden, in einem System bestimmbar, welches Oxydoreduktase, Peroxydase und Chromogen enthält, gekenntzeichnat dadurch dass das Chromogen aus
    γ,γ' -(4,4' -Diamino-3,3' -Biphenyldioxy)dilnttersäure besteht.
    Verfahren für den analytischen Nachweis von Stoffen, z.B. Zuckerarten, welche mittels spezifischer Oxydoreduktasen Wasserstoffperoxyd bilden, in einem System bestimmbar, welches Oxydoreduktase, Peroxydase und Chromogen enthält, gekennzeichnet dadurch, dass das Chromogen aus
    γ, γ" -(4,4' -Diamino-3,3' -Biphenyldioxy)diipropan-Sulfonsäure besteht.
    1 U 9 8 3 8 / 1 S 3 2
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