SU416969A3 - - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к методу анализа соединений , например Сахаров, и может найти применение дл  аналитических целей.

Известен метод анализа аналогичных соединений , сиособных образовывать в процессе реакции с оксидазой, специфичной дл  исследуемого сахара, перекись водорода. Последн   используетс  дл  превращени  хромогена, например О-дианизидина или О-толндина, который в восстановленной форме не способен поглощать в видимой части спектра, в окисленную форму, поглощающую видимый свет. Под вли нием энзима пероксидазы хромоген окисл етс  пропорционально количеству выделившейс  перекиси водорода, что влечет за собой пропорциональное изменение цвета.

Использование дл  этой цели О-дианизидина или О-толидина св зано с некоторыми трудност ми . Так дл  них характерна низка  растворимость , дл  восстановленной формы, около 100 мг/л, а дл  окисленной около 10 мг/л. Вследствие этого цвет должен фиксироватьс  в течение короткого отрезка времени. Врем , гребуемое дл  развити  окраски в определ емой области, чрезмерно длительное (50- 60 мин). Кроме того, окраска окисленного Одианизидина чувствительна к свету и быстро уменьшаетс  вплоть до 25%, что дает неточные результаты.

Предлагаемое в качестве хромогена соединение общей формулы

где или 1;

А - алкильна  цепь, имеюща , по крайней мере, 3 атома углерода;

X - сульфо- или карбонова  кислота, или его соль с кислотами или основани ми, например соответственно ди-НС1 или ди-Na, дл  анализа соединений, например Сахаров, которые под действием специфической оксиредуктазы образуют перекись водорода, удовлетвор ет повышенным требовани м современной аналитической практики.

В качестве вещества дл  сравнени  в аналитических определени х примен ли глюкозу вместе с ее специфической оксидазой - глюкозоксидазой , включаемой вместе со стандартными составными част ми реагента в следующую стандартную смесь:

Хромоген, ммоль0,2

Пероксидаза, ед300

Специфическа  оксидаза, ед 3000

Фосфатный буфер

(до рН 7), М0,1

Дистиллированна  вода, мл до 1000

Испытуемые растворы содержали глюкозу IB (кондентращи х 25, 50, 100, 200, 300 и 400 мг на 100 мл.

После приготовлени  реагентов в соответствии с изложенным проводили определени  биологических, содержащих белок материалов , -например «рови. В этих случа х первоначально осаждали белки, нап1риме|р, с помопдью 0,33 М буферного раствора, содержащего глицин с хлорной кислотой (рН 2,7), после чего образец .разбавл ли в соотношении 1 :21. Перед окончательным определением этот раствор разбавл ли указанным раствором реагента в соотношении 1:11. После этого развитие окраски измер ли в диапазоне волн 450 «м. Когда схему разбавлени  примен ли к испытуемым растворам, получали растворы со следующим содержанием глюкозы 2,2; 4,2; 6,8; 13,0 и 17,3 мг/л.

Пример 1. Приготовление реагента в соответствии со стандартным составом, содержащего 0,2 ммоль 7.7(4,4-диамино-3,3-дифепилдиокси ) димасл ной кислоты-ди-НС1.

В качестве хро.могена соединение апробируют стандартной методикой по отношению к различным испытуемым растворам. Максимальное развитие окраски в диапазоне волн 450 нм наступает в течение 25 мин при 25°С и соответственно в течение 15 мин при 37°С. Растворимость в воде соли нового хромогена, полученной в результате присоединени  кислоты , хороша  и поэтому осаждени  его не

происходит. Стойкость окраски хромогена при максимальной экстинкции позвол ет вести отсчет произвольное врем  (в пределах 4 час). Этот период  вл етс  наиболее продолжительным из изученных.

В случае применени  автоматических анализаторов желательно, чтобы резина или различные пластические материалы, составл ющие часть трубчатой системы, «е Мен ли бы окраски при действии раствора реагента. Образцы различных труб помещают в такой раствор на 25 час. Эти образцы, подгруженные в реагент, содержащий хромоген, остаютс  бесцветными , тогда как образцы труб, помещенные в раствор, содержащий 0-дианизидин станов тс  бурыми. В некоторых случа х происход т реакции между хромогеном и материалом трубы и последующие анализы дают неправильные данные.

Пример 2. Приготовление реагента в соответствии со стандартным составом, содержащего 0,2 ММоль 7,7-(4,4-диамино-3,3-дифенилдиокси )дипропансульфокислоты. Полученные данные аналогичны результатам, приведенным в примере 1.

Испытани  остальных соединений показывают , что свойствами, типичными дл  двух хромогенов из примеров 1 и 2, обладают также и другие хромогены, отвечающие приведенной общей формуле. Сравнение свойств обычно примен ющихс  производных бензидина и предлагаемых хромогенов приведено в таблице .