DE19930177B4

DE19930177B4 - Intermolekular assoziierende Verbindungen und deren Verwendung

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Publication number: DE19930177B4
Application number: DE19930177A
Authority: DE
Inventors: Nikolai Vladimirovich Bovin; Alexandr Borisovich Tusikov; Alexandr Alexandrovic Chinarev; Maryia Alexandrovna Dicusar; Alexandra Sergeevna Gambariyan; Valentina Petrovna Marinina
Original assignee: Nikolai Vladimirovich Bovin; Alexandr Borisovich Tusikov; Chinarev, Alexandr Alexandrovich; Maryia Alexandrovna Dicusar; Alexandra Sergeevna Gambariyan; Valentina Petrovna Marinina
Current assignee: BOVIN, NIKOLAI, MOSKAU/MOSCOW, RU; CHINAREV, ALEXANDR ALEXANDROVICH, MOSKAU/MOSCOW, R; DICUSAR, MARYIA ALEXANDROVNA, MOSKAU/MOSCOW, RU; GAMBARIYAN, ALEXANDRA SERGEEVNA, MOSKAU/MOSCOW, RU; MARININA, VALENTINA PETROVNA, MOSKAU/MOSCOW, RU; TUSIKOV, ALEXANDR BORIOVICH, MOSKAU/MOSCOW, RU
Priority date: 1999-06-30
Filing date: 1999-06-30
Publication date: 2007-02-08
Anticipated expiration: 2019-07-01
Also published as: CA2376164C; DE19930177A1; JP2003503465A; WO2001002018A3; WO2001002018A2; AU6266900A; CA2376164A1; US7294615B1; EP1223984A2

Abstract

Verbindung der allgemeinen Formel (I) DOLLAR A X(B)¶m¶ DOLLAR A wobei DOLLAR A X für eine m-wertige Einheit steht und die DOLLAR A B gleich oder verschieden sind und für K-R stehen, DOLLAR A wobei DOLLAR A K für eine zweiwertige Molekülkette, und DOLLAR A R für Wasserstoff, einen zur spezifischen Bindung an einen Rezeptor geeigneten Liganden, ein Marker-Molekül oder eine katalytisch aktive Gruppe steht, und DOLLAR A m mindestens 2 ist, DOLLAR A mit der Maßgabe, dass DOLLAR A (1) in der Verbindung mindestens ein R nicht Wasserstoff ist, DOLLAR A (2) mindestens zwei K vorliegen, und DOLLAR A (3) X, die B und m so gewählt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase unter Ausbildung von Aggregaten, die auf der Oberfläche mehrere R präsentieren, die nicht Wasserstoff sind, möglich ist, und DOLLAR A (4) die Molmasse des Fragments X(K)¶m¶ weniger als 20000 beträgt, sowie Aggregate aus solchen Verbindungen insbesondere zur Anwendung bei therapeutischen und diagnostischen Verfahren.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft spezielle niedermolekulare Verbindungen, die geeignet sind durch intermolekulare Assoziation Aggregate zu bilden. Die vorliegende Erfindung betrifft ferner die Verwendung der niedermolekulare Verbindungen zur Herstellung von Aggregaten, die solche Verbindungen umfassen, sowie Mittel, die die niedermolekulare Verbindungen enthalten. Ferner werden spezielle Verwendungen der Verbindungen und Aggregate, insbesondere für therapeutische und diagnostische Zwecke, beschrieben.
Die simultane und spezifische Assoziation von mindestens zwei Liganden mit entsprechenden Rezeptoren führt zu multivalenten Wechselwirkungen zwischen zwei Einheiten, die diese Liganden bzw. Rezeptoren tragen. Derartige multivalente Wechselwirkungen sind in der Biologie sehr weit verbreitet, wobei die wechselwirkenden Einheiten Liganden, wie Oligosaccharide, Proteine, Nucleinsäuren, oder Lipide aufweisen können. Multivalente Wechselwirkungen sind gekennzeichnet durch eine Vielzahl von einzelnen schwachen monovalenten Bindungen, die in biologischen Systemen häufig gegenüber einer einzigen starken monovalenten Bindung bevorzugt sind (M. Mammen, S-K. Choi, G. M. Whitesides, Angew. Chemie, 110, 2908, 1998).
In biologischen Systemen werden multivalente Wechselwirkungen häufig dann ausgebildet, wenn Bindungen zwischen Einheiten mit wenig affinen Liganden und Rezeptoren ausgebildet werden. Bekannte Beispiele für Wechselwirkungen zwischen wenig affinen Liganden und Rezeptoren sind Kohlenhydrat-Protein- und Kohlenhydrat-Kohlenhydrat-Wechselwirkungen (A. Danguy, K. Kayser, N. V. Bovin, H.-J. Gabius, Trends Glycosc. Glycotech., 7, 261, 1995), die beispielsweise bei viralen und bakteriellen Infektionen, bei der Einleitung von Entzündungsprozessen, bei der Tumor-Metastasierung oder bei der Immunerkennung eine entscheidende Rolle spielen.
Natürliche multivalente Wechselwirkungen können insbesondere zu therapeutischen und diagnostischen Zwecken blockiert werden. Für die in-vitro Blockierung derartiger multivalenter Wechselwirkungen sind bisher sowohl monovalente als auch multivalente Inhibitoren eingesetzt worden.
Bei Derivaten von natürlichen Liganden als monovalente Inhibitoren zeigt sich in der Praxis, dass aufgrund der geringen Bindungsaffinität keine effiziente Inhibition multivalenter Wechselwirkungen erreicht werden kann. Zum Beispiel beträgt die Bindungskonstate bei der Wechselwirkung zwischen einem monovalenten Galaktosid und dem entsprechenden Lectin lediglich K_D ^~ 10^–4M (D. T. Connolly et al., J. Biol. Chem., 257, 939, 1982). Für eine therapeutische Anwendung müssten in einem solchen Fall sehr grosse Mengen Inhibitor eingesetzt werden. Eine Behandlungsmethode mit einem solchen Inhibitor wäre somit nicht wirtschaftlich.
Als multivalente Inhibitoren sind solche, bei denen mehrere Liganden kovalent an einen niedermolekularen Träger (L. L. Kiesling, N. L. Pohl, Chemistry & Biology, 3, 71, 1996; G. D. Glick, P. L. Toogood, D. C. Wiley, J. J. Skehel, J. R. Knowles, J. Biol. Chem., 266, 23660, 1991) oder an ein Dendrimer (D. Zanini, R. Roy, J. Org. Chem., 63, 3486, 1998) gebunden sind, bekannt. In diesen Fällen wird jedoch die spezifische Bindungsaffinität nur geringfügig erhöht.
Ferner sind auch multivalente Inhibitoren bekannt, bei denen die aktiven Liganden an einen polymeren Träger gebunden sind. Diese Verbindungen zeigen im Vergleich zu den entsprechenden monomeren Liganden eine erhöhte Effizienz. Am Beispiel der Wechselwirkung zwischen dem Influenza-Hämagglutinin, das an Neuraminsäure-Derivate an der Zelloberfläche bindet, wurde gezeigt, wie sich die Verwendung eines multivalenten Inhibitors auf Polymer-Basis auf diese Wechsel-wirkung auswirkt (monovalent: K_D ^~ 2 × 10^–4M, multivalent: K_D ^~ 3 × 10^–7 M; A. Spaltenstein et al., J. Am. Chem. Soc., 113, 686, 1991).
Trotz der verbesserten Wirksamkeit sind auch die bisher bekannten multivalenten polymeren Inhibitoren für einen therapeutischen Einsatz nicht geeignet. Die Nachteile sind hierbei auf die verwendeten polymeren Trägermoleküle und auf deren Eigenschaften zurückzuführen.
Bei der Verwendung von Polylysin oder von sulfatierten Polysacchariden als polymere Träger treten unspezifische ionische Wechselwirkungen mit Zelloberflächenstrukturen auf.
Polyacrylamide und andere Polymere, deren Polymeranteil ausschliesslich aus C-C-Bindungen besteht, haben den entscheidenden Nachteil, dass sie im Organismus zu toxischen Metaboliten abgebaut werden.
Hochpolymere (60-70 kDa) werden nicht mehr wirkungsvoll von der Niere filtriert, wobei ihr Abbau durch die Leber durch die Bildung von toxischen Metaboliten zu Unverträglichkeiten führen kann.
In den Patentanmeldungen EP 601417 und WO 95/34673 werden Kohlenhydratrezeptorblocker auf Polymerbasis beschrieben, die als Gesamtmolekül und als Abbauprodukte physiologisch verträglich sind. Diese Eigenschaften werden durch die Verwendung von biodegradablen Polymeren erreicht. Für einen Einsatz als Arzneimittel haben jedoch auch diese Produkte einen grundsätzlichen Nachteil, denn Polymere sind in der Praxis keine reinen und exakt definierten Verbindungen, sondern bestehen vielmehr aus komplexen Gemischen von Verbindungen unterschiedlicher molekularer Grösse. Durch diesen Umstand wird die Anwendung (Zulassung) eines solchen polymeren Inhibitors als Arzneimittel ausserordentlich erschwert.
Wichtig für ein Arzneimittel sind genaue Kenntnisse der Zusammenhänge zwischen der chemischen Struktur eines Wirkstoffs und seinen pharmakologischen Eigenschaften. Im Falle von Substanz-Gemischen müsste gezeigt werden, in welcher Art und Weise die Zusammensetzung eines Gemisches seine jeweiligen pharmakologischen Eigenschaften beeinflusst. Zudem muss ein Arzneimittel in seiner chemischen Zusammensetzung genau definiert sein und nachweislich in eben dieser hergestellt werden können. Beide Voraussetzungen können im Fall der polymeren multivalenten Inhibitoren mit den derzeit verfügbaren synthetischen und analytischen Methoden und unter einem technisch sinnvollen Aufwand nicht erfüllt werden.
Eine weitere Gruppe von multivalenten Inhibitoren bilden Verbindungen bei denen die Liganden an die Oberfläche von Liposomen gebunden sind. Liposome haben den Nachteil, dass ihre lipophilen Bestandteile unspezifische Wechselwirkungen eingehen können, z.B. durch den Einbau in Zellmembranen.
WO 98/14215 beschreibt Glycokonjugate als mulitvalente Inhibitoren der viralen Zelladhäsion. Diese Glycokonjugate assoziieren jedoch nicht in flüssiger Phase.
Daher ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung die Nachteile des Standes der Technik zu vermeiden und neue Verbindungen mit verbesserten Eigenschaften als mutivalente Inhibitoren biologischer Erkennungsprozesse bereitzustellen, wobei die Verbindungen spezifisch wirken und zur Verwendung als Arzneimittel geeignet sind.
Diese Aufgabe wird gemäß der Ansprüche gelöst mit einer Verbindung gemäß Patentanspruch 1. Die Erfindung stell ferner die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Aggregats gemäß Patentanspruch 9 bereit. Die Erfindung stellt weitere Verwendungen der erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß Anspruch 15 und 17 bereit.
Weitere bevorzugte Ausführungsformen sind Gegenstand der Unteransprüche.
In einer bevorzugten Ausführungsform beträgt die Molmasse des Fragments X(K)_m weniger als 10.000, noch bevorzugter weniger als 4.000.
Durch Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) entstehen Aggregate, die als hocheffiziente multivalente Inhibitoren biologischer Erkennungsprozesse wirken.
Bei den Verbindungen der Formel (I) sind X, die B und m so gewählt, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase, insbesondere auch unter wässrigen Bedingungen, vorzugsweise unter in vivo Bedingungen, unter Ausbildung von Aggregaten, die auf der Oberfläche mehrere R präsentieren, die nicht Wasserstoff sind, möglich ist.
Es wurde gefunden, dass durch die Ausbildung der erfindungsgemäßen Aggregate die Nachteile der bisher bekannten multivalenten Wirkstoffe vermieden werden können.
Es wurde insbesondere gefunden, dass die geringe Erhöhung der Bindungsaffinität gegenüber einem monovalenten Wirkstoff bei kovalenter Bindung mehrerer Liganden an einen niedermolekularen Träger oder an ein Dendrimer darauf zurückzuführen ist, dass solche Moleküle zwar mehrere Liganden präsentieren, diese aber nicht oder nur teilweise so angeordnet werden können, dass es zu einer thermodynamisch günstigen Wechselwirkung mit Rezeptoren kommt. Es wurde gefunden, dass die Wechselwirkung eines polyvalenten Wirkstoffs verbessert werden kann, indem die Ligandenanordnung mit der Rezeptorenanordnung dynamisch gekoppelt wird. Es wurde gefunden, dass diese dynamische Kopplung über eine intermolekulare Aggregatbildung erreicht werden kann, bei der sich spezielle Molekülbereiche des Wirkstoffs intermolekular assozieren und so eine Anpassung der Ligandenanordnung ermöglicht wird. Schließlich wurde gefunden, dass die dadurch ermöglichte Anpassung der Ligandenanordnung zu einer drastischen Erhöhung der Bindungsaffinität des polyvalenten Wirkstoffs führt.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung ermöglichen durch die Reversibilität der Aggregatbildung die polyvalente Wechselwirkung einer molekularen Einheit mit mehreren Rezeptoren unter nachträglicher Optimierung der Ligandenanordnung, wobei eine thermodynamisch günstige Anordung gefunden wird ohne dass es zu unerwünschten Nebenwirkungen, wie der Einlagerung der Verbindungen in die Zellmembran, kommt.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind kleine Moleküle für die eine Wirkung als Antigen nicht zu erwarten ist und auch die anderen bei polymeren polyvalenten Wirkstoffen auftretenden Nachteile vermieden werden.
Der molekulare Aufbau der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) ist im wesentlichen gekennzeichnet durch drei Strukturmerkmale:

– ein m-wertiges Fragment X,
– mehrere Molekülketten K, die kovalent an das Fragment X gebunden sind,
– mindestens eine terminale Gruppe R, die ein zur spezifischen Bindung an einen Rezeptor geeigneter Ligand, ein Marker-Molekül oder eine katalytisch aktive Gruppe ist.

Die Molekülketten K zeichnen sich durch eine chemische Struktur aus, die eine intermolekulare Assoziation in flüssiger Phase auch unter wässrigen, insbesondere in vivo Bedingungen unter Ausbildung von Aggregaten ermöglicht. Die Ausbildung der Aggregate beruht auf nicht-kovalenten Wechselwirkungen, wobei die nicht-kovalenten Wechselwirkungen ionische Wechselwirkungen, van der Waals-Wechselwirkungen, hydrophobe Wechselwirkungen oder bevorzugt Wasserstoffbrückenbindungen sein können. Der Aufbau von nicht-kovalenten Bindungen zwischen mehreren Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bewirkt eine Selbstassoziation und somit die Bildung von Aggregaten.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) weisen mindestens eine terminale Gruppe R auf, die beispielsweise von einem biologisch aktiven Liganden oder einem Marker abgeleitet ist. Die terminalen Gruppen R sind kovalent an die terminalen Enden der zur Assoziation dienenden Molekülketten gebunden. Die Bindung dieser Gruppen kann direkt oder über einen Spacer geschehen. Als Spacer kann ein zweiwertiges Molekülfragment dienen, das an der intermolekularen Assoziation durch nicht-kovalente Wechselwirkungen nicht teilnimmt, sondern lediglich dazu dient, die terminalen Gruppen R zu halten. Ein solcher Spacer ist formal Teil der Molekülkette K.
K in der Formel (I) steht für A¹-(A²-A³)_k-sp wobei
A¹ für (CH₂)_tY(CH₂)_u steht, wobei
Y für >C=O, >NH, -O-, -S- oder eine Bindung,
t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und
u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht,
A² für -NHCO-, -CONH-, -OCONH- oder SCONH- steht,
A³ für (CH₂)_r, O(CH₂)_r, NH(CH₂)_r, S(CH₂)_r, oder -(CHQ)- steht, wobei
r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und
Q für eine Alkyl-Gruppe steht,
sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und
k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht.
Besonders bevorzugt sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I), wobei
m für eine ganze Zahl von 2 bis 4 steht, und
X für CH_4-m, NH_3-m, N⁺H_4-m, >P- (wenn m = 3), >P⁺< (wenn m = 4), >B- (wenn m = 3), eine lineare Atomgruppe C₂H_6-m, >CH(CH₂)_zCH<, >C=C<, >N-N<, >N(CH₂)_zN< wobei z = 2–6, wenn m = 4), eine carbocyclische Atomgruppe C₆H_6-m, C₆H_12-m, oder eine heterocyclische Atomgruppe C₃N₃ (wenn m = 3), C₄N₂ (wenn m = 4) steht.
Es ist besonders bevorzugt, dass bei einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) mindestens 3 K vorliegen. Speziell sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bevorzugt, bei denen mindestens zwei, noch bevorzugter drei R nicht Wasserstoff sind.
Wenn mehr als eine terminale Gruppe R in einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) vorliegt, dann können diese Gruppen gleich oder verschieden sein.
Als Beispiele der für die spezifische Bindung an einen Rezeptor geeigneten Liganden, die als terminale Gruppen R der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) fungieren, seien natürlich vorkommende biologische Erkennungsstrukturen wie Mono- oder Oligosaccharide, Peptide, Mono- oder Oligonukleotide oder Nukleinbasen genannt. Es können aber auch synthetische Derivate dieser Verbindungen oder andere organische oder anorganische Verbindungen, die von biologischen Rezeptoren erkannt werden, verwendet werden. Als Liganden können ferner bekannte Verbindungen verwendet werden, die in freier Form als therapeutische Wirkstoffe zum Einsatz kommen. Beispielhaft seien genannt:

– Antitumormittel, wie z. B. Daunomycin, Doxorubicin, Vinblastin, Bleomycin;
– Antibiotika, wie z. B. Peniciline, Erythromycine, Azidamfenicol, Cephalotin und Griseofulvin;
– Antagonisten der Blutplättchenaktivierungsfaktoren;
– Leukotrien Antagonisten;
– Inhibitoren des Cyclooxygenase-Systems, wie z. B. Salicylsäureverbindungen;
– Lipoxygenase-Inhibitoren;
– Antiphlogistika, wie z. B. Indomethacin;
– Antirheumatica, wie z. B. Nifenazon;
– Therapeutische Radionuklide, wie z.B. Wismuth;
– Neuraminidase;
– Inhibitoren, wie z.B. Zanamivir.

Vorzugsweise werden Oligosaccharide verwendet, die auf Zelloberflächen als Bestandteil von Glycoproteinen, Glycolipiden oder Proteoglycanen vorkommen, sowie beliebige Teilstücke daraus.
Spezielle Oligosaccharide, die als terminale Gruppe R verwendet werden können sind wie folgt: Sialinsäure, Sialyllactose, Sialyllactosamin, Lactose, Galα1-3Gal, Galα1-3(Fucα1-2)Gal, GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal, Neu5Acα1-6GalNAc, SiaLe^A, SiaLe^X, HSO₃Le^A, HSO₃Le^X, Galα1-3Galβ1-4GlcNAc, Galα1-3Galβ1-4Glc, Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAc.
Die terminalen Gruppen R können auch von Markermolekülen abgeleitet sein. Solche Markermoleküle ermöglichen den Einsatz der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bei diagnostischen Anwendungen. Alle dem Fachmann bekannten Markermoleküle für in vitro diagnostische Testsysteme wie z. B. Biotin, Fluorescein, Rhodamin, Digoxygenin oder radioaktive Marker kommen für die Zwecke der vorliegenden Erfindung in Frage. Insbesondere dem Fachmann bekannte Marker für die in vivo Diagnose, wie radioaktive Marker, die ein gebundenes Radionuklid enthalten, z. B. Technetium, Röntgenkontrastmittel, die z. B. eine iodierte Verbindung beinhalten, oder Kernresonanzkontrastmittel, z. B. auf Basis von Gadoliniumverbindungen seien erwähnt.
Es wird vorgeschlagen, dass in einer bevorzugten Ausführungsform die terminalen Gruppen R so gewählt werden, dass Aggregate erhalten werden, die einerseits über geeignete Liganden durch polyvalente Wechselwirkungen mit geeigneten Rezeptoren wechselwirken und andererseits Markereinheiten enthalten. Dadurch werden die polyvalenten Wechselwirkungen einer Detektion zugänglich und die Verbindungen können in einem diagnostischen Verfahren eingesetzt werden.
Die Aggregate können in diesem Fall aus Verbindungen der Formel (I) aufgebaut sein, die sowohl Liganden- als auch die Markerreste enthalten. Vorzugsweise umfasst ein solches Aggregat nur eine spezielle Verbindung der allgemeinen Formel (I). Andererseits kann ein Aggregat aber auch mehrere verschiedene Verbindungen der Formel (I) umfassen, wobei die Verbindungen entweder Liganden oder Markerreste enthalten.
Die vorliegende Erfindung beschreibt ferner ein Aggregat der folgenden allgemeinen Formel (II), {X(B)_m}_n (II)wobei die
X(B)_m gleich oder verschieden sein können und für eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 8 definiert ist, stehen, und
n für 2 bis 100.000 steht,
und wobei die X(B)_m nicht-kovalent gebunden sind.
Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung ein Aggregat mit linearer, zyklischer, polyzyklischer, polyedrischer, kugelförmiger oder dendritischer Struktur bereit. Die Aggregate können aus zwei oder mehreren verschiedenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bestehen.
Die vorliegende Erfindung stellt auch Verbindungen der allgemeinen Formel (III) bereit. Die Verbindungen der allgemeinen Formel (III) entsprechen denjenigen der Formel (II), wobei alle terminalen Gruppen R für ein Wasserstoffatom stehen. Diese Verbindungen können mit den oben beschriebenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) eingesetzt werden, um die Eigenschaften der Aggregate zu verändern.
Speziell beschreibt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der allgemeinen Formel (III), X(B)_m (III)wobei
X für eine m-wertige Einheit steht und die
B gleich oder verschieden sind und für K-H stehen,
wobei
K für eine zweiwertige Molekülkette, und
m mindestens 2, ist,
mit der Maßgabe, dass

(1) X, die B und m so gewählt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase, insbesondere unter wässrigen Bedingungen, unter Ausbildung von Aggregaten, möglich ist, und
(2) die Molmasse des Fragments X(K)_m weniger als 20.000, insbesondere weniger als 4000, beträgt.

A¹-(A²-A³)_k-sp

¹

₂

_t

₂

_u

²

³

₂

_r

₂

_r

₂

_r

₂

_r

Jetzt wird die Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) beschrieben. Entsprechend dieser Herstellungsweise können auch die Verbindungen der Formel (III) hergestellt werden.
Die Synthese der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wird vorteilhafterweise jeweils ausgehend von den entsprechenden Tetraminen durch sukzessive Kettenverlängerung durchgeführt (Schema 1). Hierbei werden bekannte Methoden aus der Peptid-Chemie angewendet, wobei als N-Schutzgruppe die Boc-Gruppe verwendet wird. Die Amidbindungen werden vorzugsweise mit der Aktiv-Ester-Methode gebildet.
Schema 1

[H₂NCH₂-]₄C → [BocNH(CH₂)_pCONHCH₂-]₄C → [H₂N(CH₂)_pCONHCH₂-]₄C → → [H-AC_mGly_nNHCH₂-]₄C n = 0 bis 7, m = 0 bis 3

Die terminalen Gruppen werden vorteilhafterweise ebenfalls über die Aktiv-Ester-Methode an die gemäss Schema 1 synthetisierten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) geknüpft (Schema 2). Schema 2
Jetzt wird die Bildung der Aggregate in Einzelheiten und anhand der Figuren beschrieben. Es zeigen
1 Elutionsprofile der Aggregate {[Neu5Ac-Gab-AC_n-Ad-Gly₆-NHCH₂-]₄C}_x, HPLC, TSK-4000, 0.2M NaCl;
2 die relative Partikelgrössenverteilung des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x, 20°C H₂O;
3 den Einfluss der Temperatur und der Anwesenheit von Harnstoff auf die Partikelgrösse des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₇-NHCH₂-]₄C}_x
Die Aggregate sind hochmolekulare nicht-kovalente Polymere, die durch Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) entstehen (Schema 3).
Schema 3

X[A¹-(A²-A³)_k-sp-R]_m⟺{X[A¹-(A²-A³)_k-sp-R]_m}n

Diese intermolekulare Assoziation verläuft spontan und führt zur Bildung von stabilen und geordneten Strukturen. Der Verlauf dieses Prozesses hängt von der molekularen Struktur der eingesetzten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und von den äusseren Bedingungen ab. Die Molmassen, Grössen und Formen der hierbei gebildeten Aggregate werden ebenfalls von diesen Faktoren bestimmt.
Die nicht-kovalente Natur der Bindungen zwischen den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bedingt die Reversibilität der Aggregatbildung und ermöglicht bei einer Veränderung der äusseren Bedingungen eine Dissoziation der Aggregate zu Verbindungen der allgemeinen Formel (I) oder ihre Umwandlung in andere Aggregate, jeweils im Sinne der Bildung der thermodynamisch stabilsten Strukturen.
Die Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) zu Aggregaten kann sowohl in Lösungen als auch auf Oberflächen beobachtet werden.
Mittels Raster-Tunnel-Mikroskopie (STM) und Atomkraft-Mikroskopie wurde gezeigt, dass das Aggregat {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₃-NHCH₂-]₄C} auf einer Graphit-Unterlage geordnete Kettenstrukturen ausbildet.
Die Bildung von Aggregaten in Lösungen kann durch Lichtstreuungs-Experimente oder Gelpermeations-Chromatographie beobachtet werden.
Die Verbindung der allgemeinen Formel (I) Neu5Ac-Gab-AC_n-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (n = 1–3) assoziert bei Raumtemperatur in wässrigen und organischen Lösungsmitteln. Die Untersuchung der in Wasser gebildeten Assoziate mittels Gelpermeations-Chromatographie zeigte die Bildung von Aggregaten mit Molekulargewichten von ca. 2000 kD, wie es in 1 gezeigt wird.
Die Untersuchung der Assoziation der Verbindung der allgemeinen Formel (I) [Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C (44) in Wasser bei 20°C zeigte die Bildung von drei Typen von Aggregaten mit Partikelgrössen zwischen 25 und 2000nm (2). Beim Erwärmen der Probe auf 60°C wurde eine Abnahme des relativen Anteils der kleineren Partikel beobachtet, wobei gleichzeitig der relative Anteil der grösseren Partikel zunahm und die Gesamtanzahl der Teilchen abnahm. Eine Zunahme der Aggregat-Grösse mit der Temperatur wurde auch bei der Verbindung der allgemeinen Formel (I) (48) beobachtet. Diese Verbindung bildet in Wasser bei 60°C Teilchen mit Grössen bis zu 8000nm (3).
Zu den äusseren Bedingungen, die die Bildung der Aggregate und den Verlauf der intermolekularen Assoziation bestimmen, zählen neben der Temperatur, der pH-Wert und die Art und Zusammensetzung des Lösungsmittels. Durch Lichtstreuungs-Untersuchungen wurde gezeigt, dass die Verbindung [Gly₇-NHCH₂-]₄C (22a) in Wasser bei 20°C in nicht-assoziierter Form vorliegt, jedoch durch Zugabe einer 0.8 M NaHCO₃-Lösung eine Selbstassoziation der Verbindung erreicht wird. Durch Zugabe von HCl kann dann anschließend die Assoziation wieder rückgängig gemacht werden (vgl. Beispiel 9).
Die Bildung von Aggregaten wird auch durch die Anwesenheit von Komponenten beeinflusst, welche mit den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) Wechselwirkungen eingehen können. Dies können organische Moleküle sein, wie z. B. Verbindungen der Formel (III), Harnstoff (3), Trifluorethanol, Methanol, Aceton oder andere organische Lösungsmittel. Es können auch andere Verbindungen der allgemeinen Formel (I) bzw. (III) sein, die für sich alleine – unter den gegebenen Bedingungen – keine Assoziate ausbilden.
Bei Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und Aggregaten wird der Prozess der Selbstassoziation auch durch die Wechselwirkungen zwischen den Liganden und den entsprechenden Rezeptoren beinflusst. Dieser Einfluss kann z. B. darin bestehen, dass erst durch die Anwesenheit der Rezeptoren eine Assoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) hervorgerufen wird, und zwar unter Bedingungen bei denen sonst keine Assoziation dieser Verbindungen stattfinden würde. Durch die Reversibilität der Aggregatbildung ist es ebenso möglich, dass sich Aggregate in Anwesenheit von Rezeptoren unter Umlagerung oder Veränderung der Zusammensetzung so verändern, dass ein thermodynamisch günstiger Zustand des Gesamtsystems aus Aggregat und Rezeptor erreicht wird. Die Aggregate können sich daher an unterschiedliche Rezeptoranordnungen anpassen und so eine Wechselwirkung zwischen den Rezeptoren und Liganden optimieren. Diese Optimierung durch nachträgliche Anpassung der polyvalenten Wechselwirkungen stellt einen wesentlichen Vorteil gegenüber dem Stand der Technik dar.
Jetzt werden spezielle biologisch aktive Aggregate beschrieben. Durch die Selbstassoziation von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) mit biologisch aktiven Liganden entstehen biologisch aktive Aggregate, die als hocheffektive multivalente Inhibitoren von biologischen Erkennungsprozesse wirken. Die spezifische Aktivität eines solchen Inhibitors ist abhängig von der Affinität der terminalen Gruppen R, aber auch von der "Matrix" des Aggregats, d. h. der Struktur der als Träger verwendeten Verbindung der allgemeinen Formel (I).
Die Tabellen 2 und 3 zeigen den Einfluss der Matrix-Struktur auf die Inhibition der viralen Zelladhäsion von Influenza-Viren, gemessen in einem dem Fachmann bekannten Fetuin-Binding Assay. Dabei wird die Verstärkung der spezifischen Aktivität des Inhibitors um mehr als drei Grössenordnungen gegenüber der Aktivität des freien Liganden Neu5AcαBn im Falle des Aggregats {[Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x (44) deutlich. Tabelle 1 Inhibition der viralen Zelladhäsion von Influenza Viren, Stamm A/NIB/44/90M H3N2, FBI-test, Neu5AcαBn als a Referenz-Verbindung, spezifische Aktivität pro Neu5Ac-Gruppe
Tabelle 2 Inhibition der viralen Zelladhäsion von Influenza Viren Inhibition of Stamm A/Duck/Alberta/60/67 H12N5, FBI-test, 3'SL als a Referenz-Verbindung, spezifische Aktivität pro 3'SL-Gruppe
Ein weiteres Beispiel für die Erhöhung der biologischen Aktivität eines biologischen Liganden durch seine Bindung an ein Aggregat ist die Verbindung {[B_di-Ap-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x(49) als Inhibitor der Zytotoxizität von menschlichen Blutseren gegenüber der Schweinenieren-Nieren-Zellen PK15. Das Aggregat (49) zeigt eine um drei Grössenordnung höhere spezifische Aktivität als der freie Ligand Galα1-3Gal (B-disaccharid).
Verwendete Abkürzungen:

Np

para-Nitrophenyl

NOS

N-Oxysucinimidyl

Boc

tert-Butyloxycarbonyl

AC

6-Aminocaproyl

Ad

1,6-Hexandioyl

Ap

3-Aminopropyl

Gab

4-(Glycylamido)-benzyl

Sug

Kohlenhydratrest

SL

Sialyllactose

Bn

Benzyl

LC

Säulenchromatographie

DC

Dünnschichtchromatographie

Jetzt wird die Erfindung anhand von Beispielen in weiteren Einzelheiten beschrieben.
Materialien und Methoden:
¹H-NMR Spektren (δ, ppm, TMS) wurden mit einem Spektrometer des Typs WM-500 der Firma Bruker (USA) bei 303°K aufgenommen.
Massenspektren wurden mit einem Flugzeit-Spektrometer des Typs MSBCh (Sumy, Ukraine) aufgenommen (Ionisation durch Spaltprodukte von Californium-252 bei einer Beschleunigungsspannung von +15 eV.
Die Lichtstreuungs-Experimente wurden mit folgenden Geräten durchgeführt: Coultronics Coulter N4-MD (He-Ne Laser, λ = 632.8 nm, Messung der Streuung bei einem Winkel von 62.5° zum eintretenden Lichtstrahl), Spectra-Physics 164 (Argon Laser, λ = 528.7 nm und λ = 611.5 nm, Messung der Streuung bei einem Winkel von 90° zum eintretenden Lichtstrahl).
Kieselgel 60 (40-63 μm) (Merck) wurde für Säulenchromatographie verwendet. Sephadex der Typen LH-20, G-10, G-25 (Pharmacia, Schweden) und TSK-4000 (HPLC) wurden für Gelpermeations-Chromatographie gebraucht.
Für DC wurden Kieselgel 60 (Merck) und Kieselgel 60 Glassplatten mit Fluoreszenz- Indikator F254 (Merck) verwendet. Zur Detektion der Flecken auf den DC-Platten wurden folgende Methoden verwendet:

– Erwärmen nach Besprühen mit einer 7%igen H₃PO₄-Lösung (Kohlenhydratverbindungen);
– Erwärmen nach Besprühen mit einer 2%igen Ninhydrin-Lösung in Ethanol (Verbindungen mit primären Aminogruppen);
– Erwärmen nach einer Verweilzeit von 10 Minuten in einer Kammer über konz. HCl und anschliessenden Besprühen mit einer 2%igen Ninhydrin-Lösung in Ethanol (Verbindungen mit Boc-geschützten Aminogruppen);
– Verweilzeit von 10 Minuten in einer Kammer über konz. NH₃ (4-Nitrophenylester);
– Betrachten der Platten unter UV.

Für DC wurden folgende Eluenten-Systeme verwendet:

A – Toluol/Ethylacetat 2:1
B – Aceton/Ethylacetat/Methanol 10:4:1
C – CHCl₃/MeOH 7:1
D – CHCl₃/Ethylacetat/MeOH/AcOH 9:3:2:0,2
E – iPrOH/Ethylacetat/H₂O 2:3:1
F – EtOH/NH_3(aq) 2:1
G – iPrOH/Ethylacetat/H₂O 4:3:2
H – iPrOH/Aceton/H₂O 4:3:2

Herstellung bekannter Ausgangsverbindungen

Tetrakis-(aminomethyl)-methan-tetrahydrochlorid (1) wurde analog der Literatur hergestellt (E. B. Fleischer, A.E. Gebala, A. Levey, P.A. Tasker, J.Org.Chem., 36, 3042, 1971). DC: R_f = 0,6; Eluent – 25% Ammoniak/Wasser; Entwickler – Ninhydrin. Schmp. >300°C. ¹H NMR-Spektrum in D₂O (δ, ppm): 3,45 (s, CH₂).
4-Nitrophenyl-trifluoracetat (2) wurde analog der Literatur hergestellt (S. Sakakibara, N. Inukai, Bull.Chem.Soc.Jap., 37, 1231, 1964).
Di-(4-Nitrophenyl)-adipat (3) wurde analog der Literatur hergestellt (S. Sakakibara, N. Inukai, Bull.Chem.Soc.Jap., 37, 1231, 1964). R_f = 0,76, Eluent DA. ¹H NMR-Spektrum in CDCl₃ (δ, ppm): 1,871 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2,666 (m, 4H, 2 COCH₂), 7,255 und 8,240(m, 8H, J_2,3 9Hz, Ar).
Methyl [4-(tert-butyloxycarbonyl-glycilamido)benzyl 5-acetamido-4,7,8,8-tetra-O-acetyl-3,5-didesoxy-α-D-glycero-D-galakto-nonulopyranosid]oat
Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Boc (4) wurde analog der Literatur hergestellt (US Patent 5,571,836, 1996). ¹H NMR-Spektrum (CDCl₃, δ, ppm): 1,448 (s, 9H, CMe₃), 1,849, 1,994, 2,008, 2,111, 2,127 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,979 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac), 2,613 (dd, 1H, J₄ 4,6 Hz, J_3ax 12,9 Hz, H-3_eq Neu5Ac), 3,637 (s, 3H, COOCH₃), 3,882 (d, 2H, J 6 Hz, COCH ₂NH), 4,058 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4.074 (dd, 1H, J_9b 12,5 Hz, J₈ 5,9 Hz, H-9a Neu5Ac), 4,112 (dd, 1H, J₅ 10,6, J₇ 2,3 Hz, H-6 Neu5Ac), 4,299 (dd, 1H, J_9b 12,5 Hz, J₈ 2,7 Hz, H-9b Neu5Ac), 4,366 und 4,735 (d, 2x1H, J 12 Hz, OCH ₂Ar), 4,847 (ddd, 1H, J₅ 10 Hz, J_3ax 12,3 Hz, J_3eq 4,6 Hz, H-4 Neu5Ac), 5,24 (verb., 1H, NHBoc), 5,251 (d, 1H, J₅ 9,8 Hz, NH), 5,314 (dd, 1H, J₆ 2,3 Hz, J₈ 8,2 Hz, H-7 Neu5Ac), 5,424 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 7,258 und 7,445 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,144 (verb. s, 1H, NHAr).
Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ-NHCOCH₂NH₂ (12) wurde analog der Literatur hergestellt (L.M. Likhosherstov, O.S. Novikova, V.A. Derevitskaja, N.K. Kochetkov, Carbohydrate Research, 146, C1-C5, 1986; und I.D. Manger, T.W. Rademacher, R.A. Dwek, Biochemistry, 31, 10724, 1992). ¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): 1,82 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac, J₄ 12 Hz), 2,06 (s, 3H, NAc), 2,79 (dd, 1H, H-3_eq Neu5Ac, J_3ax 12,4 Hz, J₄ 4,6 Hz), 3,48 (m, 1H, H-2 Glc, J₃ 9 Hz), 3,61 (dd, 1H, H-2 Gal), 3,99 (dd, 1H, H-4 Gal), 4,14 (dd, 1H, H-3 Gal, J₂ 9,8 Hz, J₄ 3,1 Hz), 4,57 (d, 1H, H-1 Gal, J₂ 7,8 Hz), 5,09 (d, 1H, H-1 Glc, J₂ 9,3 Hz).
Galα1-3Galβ-O(CH₂)₃NH₂ (13) wurde analog der Literatur hergestellt (E. Yu. Korchagina, N. V. Bovin, Bioorganicheskaya Khimiya, 1992, 18, 283, Rus).

Die Verbindungen BocGlyNOS, BocGlyGlyNOS und BocAC-ONp wurde unter Verwendung von N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid analog der Literatur hergestellt (G. W. Anderson, J. E. Zimmerman, F. M. Callahan, J. Amer. Chem. Soc., 86, 1839, 1964; M. Bodanszky, V. du Vigneaud,, J. Amer. Chem. Soc., 81, 5688, 1959).
Beispiel 1.
Herstellung von Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Boc (5).
Zu 0,5mM der Verbindung (4) wurden 10ml CHCl₃ und 2ml CF₃COOH zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit 2ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 10ml CHCl₃ gelöst und mit 1,5mM 6-N-Boc-Amino-(4-nitrophenyl)-hexanoat und 0,31 NEt₃ versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und im Vakuum eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde über Kieselgel chromatographiert.
Die Verbindungen Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₂-Boc (6) und Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₃-Boc (7) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 4). Tabelle 3 (Beispiel 1)

¹H NMR-Spektren (CDCl₃, δ, ppm): Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Boc (5): 1,331, 1,468, 1,655 (m, 3CH₂), 1,402 (s, 9H, CMe₃), 2,264 (t, 2H, J 7,5 Hz, CH ₂CONHCH₂CO), 3,066 (m~quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH ₂NHBoc), 4,060 (d, 2H, J 5 Hz, COCH ₂NH), 4,364 und 4,733 (d, 2x1H, J 12 Hz, OCH ₂Ar), 4,571 (verb., 1H, NHBoc), 6,521 (verb., 1H, COCH₂NHCO), 7,253 und 7,460 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,547 (verb. s, 1H, NHAr). Neu5Acα-Fragment: (s. (4)). Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₂-Boc (6): 1,280, 1,338, 1,447, 1,482, 1,582, 1,655, 2,107 (m, 7CH₂), 1,403 (s, 9H, CMe₃), 2,276 (t, 2H, J 7,2 Hz, CH ₂CONHCH₂CO), 3,060 (m~quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH ₂NHBoc), 3,216 (m~quadr, 2H, J 6,4 Hz, CH ₂NH), 4,040 (d, 2H, J 5 Hz, COCH ₂NH), 4,353 und 4,728 (d, 2x1H, J 12 Hz, OCH ₂Ar), 4,651 (verb., 1H, NHBoc), 5,793 (t, 1H, J 5 Hz, CH₂NHCO), 6,714 (verb., 1H, COCH₂NHCO), 7,245 und 7,467 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 8,666 (verb. s, 1H, NHAr). Neu5Acα-Fragment: (s. (4)). Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₃-Boc (7): 1,283, 1,336, 1,447, 1,482, 1,594, 1,655, 2,117 (m, 11CH₂), 1,401 (s, 9H, CMe₃), 2,282 (t, 2H, J 7,2 Hz, CH₂CONHCH₂CO), 3,045 (m~quadr, 2H, J 6,6 Hz, CH ₂NHBoc), 3,214 (m~quadr, 4H, J 6,4 Hz, CH ₂NH), 4,040 (d, 2H, J 5 Hz, COCH ₂NH), 4,353 und 4,728 (d, 2x1H, J 12 Hz, OCH ₂Ar), 4,669 (verb., 1H, NHBoc), 5,876 (t, 1H, J 5,5 Hz, CH₂NHCO), 6,071 (verb., 1H, CH₂NHCO), 6,940 (verb., 1H, COCH₂NHCO), 7,242 und 7,483 (d, 2x2H, J 8,4 Hz, Ar), 9,033 (verb. s, 1H, NHAr). Neu5Acα-Fragment: (s. (4)).

Beispiel 2.
Herstellung von Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-ONp (9).
Zu 0,5mM der Verbindung (5) wurden 10ml CHCl₃ und 2ml CF₃COOH zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit 5ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 15ml Tetrahydrofuran gelöst und mit 5mM der Verbindung (3) und 0,3 ml NEt₃ versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, Das überschüssige NEt₃ wurde mit CH₃COOH neutralisiert, und das Reaktionsgemisch eingedampft. Der Rückstand wurde in CHCl₃ gelöst, die erhaltene Lösung wurde mit Wasser gewaschen und eingedampft. Das erhaltene Gemisch wurde über eine Kieselgelsäule chromatographiert (siehe Tabelle 4).
Die Verbindungen Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8), Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₂- Ad-ONp (10) and Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₃-Ad-ONp (11) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 4). Tabelle 4 (Beispiel 2)

¹H NMR-Spektren: Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8) (CDCl₃, δ, ppm): 1,774 (m, 2H, CH ₂CH₂COO), 1,843, 1,984, 2,00, 2,100, 2,117 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,966 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac), 2,335 und 2,393 (m, 2x1H, CH ₂CH₂CONH), 2,601 (t, 2H, J 6Hz, CH₂CH ₂COO), 2,604 (dd, 1H, H-3_eq Neu5Ac), 3,645 (s, 3H, COOCH₃), 3,688 (t, 2H, J 4,7Hz, CH₂CH ₂CONH), 4,049 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4,062 (dd, 1H, J₈ 6_Hz, H-9a Neu5Ac), 4,074 (d, 2H, J_NH 5,5Hz, COCH ₂NHCO), 4,111 (dd, 1H, J₅ 10,7, J₇ 2,3Hz, H-6 Neu5Ac), 4,298 (dd, 1H, J_9b 12,5Hz, J₈ 2,9Hz, H-9b Neu5Ac), 4,343 und 4,722 (d, 2x1H, J 12Hz, OCH ₂Ar), 4,839 (ddd, 1H, J₅ 10,2Hz, J_3ax 12,3Hz, J_3eq 4,6Hz, H-4 Neu5Ac), 5,307 (dd, 1H, J₈ 8,4Hz, J₆ 2,3Hz, H-7 Neu5Ac), 5,359 (d, 1H, J₅ 9,7Hz, NH), 5,406 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 6,616 (t, 1H, COCH₂NHCO), 7,243 und 7,450 (d, 2x2H, J 8,5Hz, p-C₆ H ₄NH), 7,221 und 8,208 (d, 2x2H, J 9Hz, p-C₆ H ₄NO₂), 8,586 (s, 1H, NHAr).
Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-ONp (9) (CDCl₃, δ, ppm): 1,341 (m, 2H, COCH₂CH₂CH ₂CH₂CH₂NH), 1,495 und 1,666 (m, 2x2H, COCH₂CH ₂CH₂CH ₂CH₂NH), 1,729 (m, 2H, CH ₂CH₂COO), 1,856, 1,991, 2, 010, 2,110 und 2,129 (s, 5x3H, 5 Ac), 1,976 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac), 2,138, 2,175 (m, 2x1H, CH ₂CH₂CONH), 2,182 und 2,267 (t, 2x2H, 2 CH ₂CONH), 2,601 (~t, 2H, J 6,8Hz, CH₂CH ₂COO), 2,611 (dd, 1H, J_3ax 12,8, J₄ 4,5Hz, H-3_eq Neu5Ac), 3,228 (m~quadr, 2H, J 6,6Hz, CH ₂NHCO), 3,645 (s, 3H, COOCH₃), 4,022 (d, 2H, J_NH 5,4Hz, COCH ₂NHCO), 4,050 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4,065 (dd, 1H, J₈ 6Hz, H-9a Neu5Ac), 4,113 (dd, 1H, J₅ 10,8, J₇ 2,3Hz, H-6 Neu5Ac), 4,295 (dd, 1H, J_9a 12,5Hz, J₈ 2,9Hz, H-9b Neu5Ac), 4,357 und 4,732 (d, 2x1H, J 12Hz, OCH ₂Ar), 4,848 (ddd, 1H, J₅ 10Hz, J_3ax 12,2Hz, J_3eq 4,5Hz, H-4 Neu5Ac), 5,170 (d, 1H, J₅ 10Hz, NH), 5,308 (dd, 1H, J₈ 8,6Hz, J₆ 2,3Hz, H-7 Neu5Ac), 5,413 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 5,708 (t, 1H, CH₂CH₂ NHCO), 6,483 (t, 1H, COCH₂ NHCO), 7,251 und 7,427 (d, 2x2H, J 8,7Hz, p-C₆ H ₄NH), 7,243 und 8,224 (d, 2x2H, J 9Hz, p-C₆ H ₄NO₂), 8,298 (s, 1H, NHAr).
Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₂-Ad-ONp (10) (D₆-DMSO, 6, ppm): 1,231, 1,376, 1,485 und 1,608 (m, CH₂), 1,757 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac), 1,678, 1,917, 1,974, 2,023 und 2,092 (s, 5x3H, 5 Ac), 2,570 (dd, 1H, J_3ax 12,4, J₄ 4,5Hz, H-3_eq Neu5Ac), 2,638 (t, 2H, J 7Hz, CH₂ CH ₂COO, 3,009 (m, 4H, 2CH ₂NHCO), 3,699 (s, 3H, COOCH₃), 3,859 (d, 2H, J_NH 5,9Hz, COCH ₂NHCO), 3,904 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4,027 (dd, 1H, J₈ 6,2Hz, H-9a Neu5Ac), 4,089 (dd, 1H, J₅ 10,8, J₅ 2,6Hz, H-6 Neu5Ac), 4,235 (dd, 1H, J_9a 12,4Hz, J₈ 3,1Hz, H-9b Neu5Ac), 4,322 und 4,645 (d, 2x1H, J 11,7Hz, OCH ₂Ar), 4,715 (ddd, 1H, J₅ 10Hz, J_3ax 12Hz, J_3eq 4,5Hz, H-4 Neu5Ac), 5,193 (dd, 1H, J₈ 8,4Hz, J₆ 2,Hz, H-7 Neu5Ac), 5,341 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 7,216 und 7,554 (d, 2x2H, J 8,4Hz, p-C₆ H ₄NH), 7,433 und 8,296 (d, 2x2H, J 9,2Hz, p-C₆ H ₄NO₂), 7,674 (t, 1H, J 5,5Hz, CH₂CH₂ NHCO), 7,706 (d, 1H, J₅ 9,8Hz, NH), 7,754 (t, 1H, J 5,8Hz, CH₂CH₂ NHCO), 8,081 (t, 1H, J 5,9Hz, COCH₂ NHCO), 9,961 (s, 1H, NHAr).
Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₃-Ad-ONp (11) (D₆-DMSO, δ, ppm): 1,214, 1,360, 1,478, 1,609 (m, CH₂), 2,639 (t, 2H, J 7Hz, CH₂ CH ₂COO), 2,999 (m, 6H, 3CH ₂NHCO), 3,864 (d, 2H, J_NH 5,9Hz, COCH ₂NHCO), 4,324 und 4,645 (d, 2x1H, J 11,7Hz, OCH ₂Ar), 7,212 und 7,568 (d, 2x2H, J 8,4Hz, p-C₆H₄NH), 7,435 und 8,295 (d, 2x2H, J 9,2Hz, p-C₆ H ₄NO₂), 7,700 (m, 2H, 2CH₂CH₂NHCO), 7,750 (t, 1H, J 5,8Hz, CH₂CH₂ NHCO), 8,122 (t, 1H, J 5,9Hz, COCH₂ NHCO), 10,047 (s, 1H, NHAr), Neu5Acα-Fragment: s. (10).

Beispiel 3.
Herstellung von Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ-NHCOCH₂NHCO(CH₂)₄COO(4-C₆H₄NO₂) (14).
119mg (0,172mM) der Verbindung (12) in 0,5ml DMSO wurde unter Rührung zu einer Lösung von 334mg (0,86mM) der Verbindung (3) in 2ml DMF zugegeben. Das Gemisch wurde 24 Stunden bei 20°C gerührt. Nach Zugabe von 200μl AcOH wurde das Reaktionsgemisch mit 15ml Wasser verdünnt. Die Lösung wurde filtriert und das Filtrat wurde auf ein Volumen von ~2ml eingedampft. Der Rückstand wurde auf eine Sephadex LH-20 Säule (1,5 × 50cm) gegeben und mit MeCN/H₂O (1:1, 0,2% AcOH) eluiert. Nach Isolation wurden 140mg (14) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 87%. DC: R_f 0,41 (Eluent H).
¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): 1,737 (m, 1H, CH ₂CH ₂CH₂CO), 1,779 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac, J₄ 12,5 Hz), 2,003 (s, 3H, NAc), 2,383 (t, 1H, J 7 Hz, CH₂CO), 2,733 (dd, 1H, H-3_eq Neu5Ac, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,5 Hz), 3,432 (m, 1H, H-2 Glc, J₃ 9 Hz), 3,556 (dd, 1H, H-2 Gal), 3,933 (dd, 1H, H-4 Gal), 4,090 (dd, 1H, H-3 Gal, J₂ 10 Hz, J₄ 3 Hz), 4,499 (d, 1H, H-1 Gal, J₂ 8 Hz), 4,985 (d, 1H, H-1 Glc, J₂ 9 Hz).
Die Verbindung Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (15) wurde auf analoge Weise ausgehend von (3) und Neu5Acα-OCH₂(p-C₆H₄)-NHCOCH₂NH₂ (US Patent 5,571,836, 1996) hergestellt.
¹H-NMR Spektrum (CD₃OD, δ, ppm): 1,968 (dd, 1H, H-3_ax Neu5Ac), 1,980 (m, 4H, CH ₂CH ₂CH₂CO), 2,205 (s, 3H, NCOCH₃), 2,565 und 2,874 (t, 2x2H, J 6,8 Hz, 2 CH₂CO), 2,976 (dd, 1H, J₄ 4,5 Hz, J_3ax 13 Hz, H-3_eq Neu5Ac), 3,743 (dd, 1H, J₆ 1,5 Hz, J₈ 9 Hz, H-7 Neu5Ac), 3,821 (dd, 1H, J₅ 10 Hz, H-6 Neu5Ac), 3,840 (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 6 Hz, H-9a Neu5Ac), 3,924 (ddd, 1H, H-4 Neu5Ac), 3,978 (ddd, 1H, H-5 Neu5Ac), 4,047 (dd, 1H, J₈ 2 Hz, H-9b Neu5Ac), 4,083 (ddd, 1H, H-8 Neu5Ac), 4,196 (s, 2H, COCH ₂NH), 4,653 und 4,973 (d, 2x1H, J 11 Hz, OCH ₂Ar), 7,474 und 7,707 (d, 2x2H, J 8,3 Hz, p-C₆ H ₄NH), 7,561 und 8,467 (d, 2x2H, J 8,8 Hz, p-C₆ H ₄NO₂).
Die Verbindung Galα1-3Galβ-O(CH₂)₃NHCO(CH₂)₄COO(p-C₆H₄NO₂) (16) wurde auf analoge Weise ausgehend von (3) und Galα1-3Galβ-O(CH₂)₃NH₂ (13) hergestellt.
¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): 1,78 (m, 4H, CH₂CH₂), 1,89 (m, 2H, CH₂), 2,36 (t, 2H, CH₂COO), 2,77 (m, 2H, NHCOCH ₂), 3,36 (m, 2H, CH₂N), 3,69 (t, 1H, J₃ 9 Hz, 2-Galβ), 3,76 (m, 1H, OCH'), 3,78 (m, 6,6'-Galα), 3,91 (dd, 1H, J₃ 10 Hz, 2-Galα), 4,00 (dd, 1H, 3-Galα), 4,01 (m, 1H, OCH), 4,06 (verb. d, 1H, 4-Galα), 4,20 (verb. d, 1H, 4-Galβ), 4,23 (verb. t, 1H, 5-Galα), 4,48 (d, 1H, J₂ 8 Hz, 1-Galβ), 5,19 (d, 1H, J₂ 4 Hz, 1-Galα), 8,38, 7,43 (d, 2x2H, J 9,5 Hz, Ar).
Beispiel 4.

Tetra-(N-tert.-butyloxycarbonyl-pentaglycilamidomethyl)methan
[BocGly₅-NHCH₂-]₄C (21).

1 mM der Verbindung (19) (siehe Tabelle 5) wurde in 4 ml CF₃COOH aufgenommen und zwei Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 4ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 5ml Wasser gelöst, mit 4 ml einer 2M HCl-Lösung versetzt und eingeengt. Das erhaltene Tetrahydrochlorid (19a) wurde im Vakuum getrocknet, in 0.5ml DMF suspendiert, mit 6 mM BocGlyGlyNOS und 0.5 ml NEt₃ versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und und das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt. Nach Trocknen im Vakuum wurde die Verbindung (21) als weißes Pulver in 69% Ausbeute erhalten (s. Tabelle 5).
Die Verbindungen (17)-(20), (22)-(25) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 5).

¹H-NMR-Spektren (Für die Zuordnung der ¹H-NMR-Signale wurden die Glycine innerhalb der Ketten nummeriert, diese Nummerierung beginnt jeweils am N-terminalen Ende der Ketten)
[BocGly-NHCH₂-]₄C (17). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): 1,366 (s, 9H, OCMe₃), 2,759 (verb. d, 2H, CCH₂), 3.494 (d, 2H, J_NH 6 Hz, CH₂ ^Gly), 7,368 (t, 1H, NH^Gly), 7,969 (verb. t, 1H, CCH₂NH), Massenspektrum: 783 (M+Na).
[HCl·Gly₂-NHCH₂-]₄C (18a). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): 2,952 (s, 2H, CCH₂), 3,966 (s, 2H, CH₂ ^Gly), 4,013 (s, 2H, CH₂ ^Gly).
[BocGly₃-NHCH₂-]₄C (19). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): 1,375 (s, 9H, OCMe₃),2,690 (verb. d, 2H, J_NH 6,5 Hz, CCH₂), 3,586 (d, 2H, J_NH 6 Hz, CH₂ ^Gly3) 3,725 (d, 2H, J_NH 5,5 Hz, CH₂ ^Gly1), 3,847 (d, 2H, J_NH 5,5 Hz, CH₂ ^Gly2) 6,976 (t, 1H, NH^Gly3), 7,811 (t, 1H, NH^Gly2), 7,975 (t, 1H, CCH₂ NH), 8,534 (t, 1H, NH^Gly1). Massenspektrum: 1239 (M+Na).
[BocGly₄-NHCH₂-]₄C (20). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): 1,374 (s, 9H, OCMe₃), 2,694 (verb. d, 2H, CCH₂), 3,575 (d, 2H, CH₂ ^Gly4), 3,707 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3,750 (d, 2H, CH₂ ^Gly3), 3,835 (d, 2H, CH₂ ^Gly2) 6,980 (t, 1H, NH^Gly4), 7,827 (t, 1H, CCH₂ NH), 8,048 (t, 1H, NH^Gly3), 8,096 (t, 1H, NH^Gly2), 8,590 (t, 1H, NH^Gly1). Massenspektrum: 1467 (M+Na).
[BocGly₅-NHCH₂-]₄C (21). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): 1,380 (s, 9H, OCMe₃), 2,688 (verb. d, 2H, CCH₂), 3,579 (d, 2H, J_NH 6 Hz, CH₂ ^Gly5) 3,718 (d, 2H, J_NH 5 Hz, CH₂ ^Gly1), 3,750 (d, 4H, J_NH~5 Hz, CH₂ ^Gly3,4) 3,840 (d, 2H, J_NH 5,5 Hz, CH₂ ^Gly2), 6,974 (t, 1H, NH^Gly5) 7,770 (t, 1H, CCH₂ NH), 8,006 (t, 1H, NH^Gly4), 8,075 und 8,102 (t, 1H, NH^Gly2,3) 8,550 (t, 1H, NH^Gly1). Massenspektrum: 1695 (M+Na), 1711(M+K).
[BocGly₇-NHCH₂-]₄C (22). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): 1,378 (s, 9H, OCMe₃), 2,688 (verb., 2H, CCH₂), 3,581 (d, 2H, CH₂ ^Gly7), 3,723 (verb. d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3,751 (m, 8H, CH₂ ^Gly3-6), 3,840 (verb. d, 2H, CH₂ ^Gly2), 6,970 (verb. t, 1H, NH^Gly7), 7,814 (verb. t, 1H, CCH₂ NH), 8,018 (verb. t, 1H, NH^Gly6), 8,081, 8,085, 8,092 und 8,118 (m, 4H, NH^Gly2-5) 8,545 (verb. t, 1H, NH^Gly1),
[HCl·AC-Gly₅-NHCH₂-]₄C (23a). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): 1,446 (m, 2H, CH₂), 1,689 (m, 2H, COCH₂CH ₂), 1,724 (m, 2H, CH ₂CH₂N), 2,398 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH₂), 2,967 (verb. s, CCH₂), 3,044 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂N), 3,994, 4,012, 4,049 (x2) und 4,096 (s, 10H, 5 COCH₂N).
[HCl·AC₂-Gly₅-NHCH₂-]₄C (24a). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): 1,336 und 1,382 (m, 4H, 2 CH₂), 1,548 (m, 2H, CH ₂CH₂N), 1,656 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 1,712 (m, 2H, CH ₂CH₂N⁺), 2,283 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH₂), 2,370 (t, 2H, J 7,4 Hz, COCH₂NHCOCH ₂), 2,955 (verb. s, CCH₂), 3,031 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂N⁺), 3,206 (t, 2H, J 6,6 Hz, CH₂N), 3,988, 4,00, 4,044 (x2) und 4,091 (s, 10H, 5 COCH₂N).
[HCl·AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C (25a). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): 1,34-1,42 (m, 6H, 3 CH₂), 1,551 (m, 4H, 2 CH ₂CH₂N), 1,653 (x2) und 1,689 (m, 6H, 3 COCH₂CH ₂), 1,717 (m, 2H, CH ₂CH₂N⁺), 2,270 und 2,288 (t, 4H, J 7,5 Hz, 2 COCH₂), 2,376 (t, 2H, J 7,5 Hz, COCH₂NHCOCH ₂), 2,952 (verb. s, CCH₂), 3,033 (t, 2H, J 7,5 Hz, CH₂N⁺), 3,208 (t, 4H, J 7 Hz, 2 CH₂N), 3,990, 4,004, 4,049 (x2) und 4,097 (s, 10H, 5 COCH₂N).

Beispiel 5.
Herstellung der geschützten Tetrasialoside
Herstellung von [Ac₄(OMe)Neu5Acα-OCH₂(p-C₆H₄)NHCOCH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NHCH₂CO)₅NHCH₂]₄C

[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (31).

1mM der Verbindung (21) (siehe Tabelle 6) wurde in 4 ml CF₃COOH aufgenommen und zwei Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 4ml Toluol versetzt, im Vakuum eingedampft und getrocknet. Der Rückstand wurde in 5ml Wasser gelöst, mit 4 ml einer 2_M HCl-Lösung versetzt und eingeengt. Das erhaltene Tetrahydrochlorid (21a) wurde im Vakuum getrocknet, in 0.5ml DMF suspendiert, mit 6 mM Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-ONp (8) und 0.5 ml NEt₃ versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und und das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie gereinigt (s. Tabelle 6). Nach Trocknen im Vakuum wurde die Verbindung (21) als farbloses amorphes Produkt in 65% Ausbeute erhalten.
Die Verbindungen (26)-(30), (32)-(36) wurden auf analoge Weise hergestellt (siehe Tabelle 6).

[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH₂-]₄C (26). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.534 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.171 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.891 (verb., 2H, CCH₂), 3.867 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.674 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.107 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH₂CH₂), 9.964 (s, 1H, ArNH); Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH₂-]₄C (27). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.509 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.147 und 2.231 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.674 (verb., 2H, CCH₂), 3.647 (m, 2H, Gly), 3.859 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.852 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.100 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH₂CH₂), 8.453 (t, 1H, J 6 Hz, NHGly), 9.962 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₂-NHCH₂-]₄C (28). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.495 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.150 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.694 (verb., 2H, CCH₂), 3.716 (d, 2H, CH₂ ^Gly2), 3.818 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.865 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.824 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 7.993 (t, 1H, J 6 Hz, NH ^Gly2), 8.096 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH₂CH₂), 8.544 (t, 1H, J 6 Hz, NH ^Gly1), 9.975 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₃-NHCH₂]₄C (29). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.498 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.143 und 2.158 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.693 (verb., 2H, CCH₂), 3.728 (m, 4H, 2 CH₂ ^Gly2,3), 3.841 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.862 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.820 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.049 und 8.059 (t, 2H, J 5.7 Hz, NH ^Gly2,3), 8.098 (t, 1H, J 5.8 Hz, NHCOCH₂CH₂), 8.547 (t, 1H, J 5.5 Hz, NH ^Gly1), 9.972 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₄-NHCH₂]₄C (30). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm), Matrix: 1.500 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.151 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.688 (verb., 2H, CCH₂), 3.720 (x2) und 3.753 (d, 6H, 3 CH₂ ^Gly2-4), 3.841 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.864 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.818 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.045 und 8.084 (x2) (t, 3H, J 6 Hz, NH^Gly2-4), 8.102 (t, 1H, J 6 Hz, NHCOCH₂CH₂), 8.555 (t, 1H, J 5.5 Hz, NH ^Gly1), 9.980 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-Glys-NHCH₂]₄C (31). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.502 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.147 und 2.159 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.688 (verb., 2H, CCH₂), 3.738 (x2) und 3.765 (x2) (m, 8H, 4 CH₂ ^Gly2-5) 3.857 (d, 2H, CH₂ ^Gly1) 3.877 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.818 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.074 (m, 5H, NHCOCH₂CH₂, NH ^Gly2-5) 8.551 (t, 1H, J 6 Hz, NH ^Gly1), 9.968 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-AC₂-Gly₅-NHCH₂]₄C (32). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm), Matrix: 1.224, 1.366 und 1.469 (m, 12H, 6 CH₂), 1.502 (m, 4H, 2 COCH₂CH ₂), 2.032 und 2.121 (m, 2 COCH₂), ), 2.147 und 2.159 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2.688 (verb., 2H, CCH₂), 3.00 (m, 4H, 2 CH₂NHCO), 3.738 (x2) und 3.765 (x2) (m, 8H, 4 CH₂ ^Gly2-5) 3.857 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.877 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 7.679 und 7.700 (verb. t, 2H, 2 NHCO), 7.818 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.074 (m, 5H, NHCOCH₂CH₂, NH ^Gly2-5) 8.551 (t, 1H, J 6 Hz, NH ^Gly1), 9.968 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂]₄C (33). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm) ist dem Spektrum der Verbindung (32) sehr ähnlich (die Signale sind zum Teil stärker verbreitert und die Integrale der Amidocapronsäure-Gruppen sind entsprechend größer).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Gly₅-NHCH₂]₄C (34). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.250, 1.382, 1.465 und 1.506 (m, 10H, 5 CH₂), 2.033 und 2.140 (m, 6H, 3 COCH₂), 2.697 (verb., 2H, CCH₂), 3.009 (m~q, 2H, J 6.4 Hz, CH ₂NHCO), 3.719 (x2) und 3.748 (x2) (m, 8H, 4 CH₂ ^Gly2-5), 3.843 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.862 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 4.327 und 4.648 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 7.216 und 7.555 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.698 (t, 1H, NHCO), 7.818 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.039, 8.072, 8.084 (x2), 8.110 (m, 5H, NHCOCH₂CH₂, NH ^Gly2-5), 8.547 (t, 1H, NH ^Gly1), 9.970 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₂-Ad-Gly₅-NHCH₂]₄C (35). ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO (δ, ppm): Matrix: 1.239, 1.375, 1.465 und 1.509 (m, CH₂), 2.026 und 2.142 (m, COCH₂), 2.711 (verb., 2H, CCH₂), 3.003 (m, 4H, 2 CH ₂NHCO), 3.718 (x2) und 3.746 (x2) (m, 8H, 4 CH₂ ^Gly2-5), 3.839 (d, 2H, CH₂ ^Gly1), 3.861 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 4.329 und 4.649 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 7.218 und 7.561 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.681 und 7.695 (m, 2H, 2 NHCO), 7.834 (verb. t, 1H, CCH₂NH), 8.077, 8.133 (x3), 8.177 (m, 5H, NHCOCH₂CH₂, NH ^Gly2-5), 8.587 (t, 1H, NH ^Gly1), 10.01 (s, 1H, ArNH). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).
[Ac₄(OMe)Neu5Ac-Gab-AC₃-Ad-Gly₅-NHCH₂]₄C (36). Das ¹H-NMR Spektrum in D₆-DMSO entspricht weitesgehend dem Spektrum der Verbindung (35), die Signale sind zum Teil stärker verbreitert. Matrix (δ, ppm): 1.239, 1.375, 1.465 und 1.509 (m, CH₂), 2.026 und 2.142 (m, COCH₂), 2.629 (verb., 2H, CCH₂), 3.00 (m, 6H, 3 CH ₂NHCO), 3.813 (verb., 2H, CH₂ ^Gly1), 3.861 (d, 2H, ArNHCOCH ₂), 4.329 und 4.649 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 7.218 und 7.561 (d, 2H, J 8 Hz, Ar), 7.693 (m, 3H, 3 NHCO), 7.904 (verb., 1H, CCH₂NH), 8.083 (x2), 8.158 und 8.215 (x2) (m, 5H, NHCOCH₂CH₂, NH ^Gly2-5), 8.538 (t, 1H, NH ^Gly1). Neu5Acα2-OCH₂C₆H₄-Fragment: 1.677, 1.918, 1.975, 2.024 und 2.094 (s, 15H, 5 COCH₃), 1.761 (dd, 1H, J₄ 12.2 Hz, H-3ax), 2.570 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3eq), 3.697 (s, 3H, COOCH₃), 3.904 (ddd, 1H, J₄ 10.3 Hz, H-5), 4.028 (dd, 1H, J₈ 6.3 Hz, H-9b), 4.087 (dd, 1H, J₅ 10.7 Hz, H-6), 4.233 (dd, 1H, J_9b 12.5 Hz, J₈ 3 Hz, H-9a), 4.320 und 4.643 (d, 2H, J 11.8 Hz, ArCH ₂), 4.711 (ddd, 1H, H-4), 5.192 (dd, 1H, J₈ 8.4 Hz, J₆ 2.4 Hz, H-7), 5.341 (ddd, 1H, H-8), 7.214 und 7.555 (d, 2H, J 8.6 Hz, Ar), 7.708 (d, 1H, J₅ 9.6 Hz, NH).

Beispiel 6.
Herstellung der freien Tetrasialoside
Herstellung von [Neu5Acα-OCH₂(p-C₆H₄)NHCOCH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NH(CH₂)₅CO)₃-(NHCH₂CO)₅-NHCH₂-]₄C (Ammonium Salz)

Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂]₄C (44).

Zu einer Lösung von 10 μM des geschützten Tetrasialosids (33) in 3ml absoluten MeOH wurden 80 μl 2N NaOH Lösung zugegeben, nach 3 Stunden wurden nochmals 1,5 ml Wasser und 80 μl 2N NaOH Lösung zugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, mit 80 μl AcOH versetzt und zur Trockne eingedampft. Das Produkt wurde mittels Gelchromatographie über Sephadex G-10 mit einer 0,05 M wässrigen NH₄OH-Lösung erhalten.
(siehe Tabelle 7).
Die Verbindungen (37)-(43), (45)-(47) wurden in analoger Weise erhalten (siehe Tabelle 7). Tabelle 7 (Beispiel 6)

* Bestimmt mittels Gelpermeations-Chromatographie
[Neu5Ac-Gab-Ad-NHCH₂-]₄C (37). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,633 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,293 und 2,358 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,943 (s, 2H, CCH₂), 4,003 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,493 und 4,718 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,388 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly-NHCH₂-]₄C (38). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,622 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,340 und 2,382 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,810 (s, 2H, CCH₂), 3,847 (s, 2H, CH₂ ^Gly) 4,016 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,492 und 4,707 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,402 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₂-NHCH₂-]₄C (39). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,626 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,341 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,831 (s, 2H, CCH₂), 3,894 und 3,991 (s, 4H, 2 CH₂ ^Gly1,2) 4,022 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,492 und 4,719 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,402 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₃-NHCH₂-]₄C (40). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,631 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,344 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,857 (s, 2H, CCH₂), 3,912, 3,931 und 4,024 (s, 6H, 3 CH₂ ^Gly1-3), 4,029 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,500 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,408 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₄-NHCH₂-]₄C (41). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,636 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,350 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,864 (s, 2H, CCH₂), 3,912, 3,934, 3,968 und 4,025 (s, 8H, 4 CH₂ ^Gly1-4), 4,032 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,497 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,408 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (42). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,638 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,355 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,878 (s, 2H, CCH₂), 3,921, 3,933, 3,974 (x2) und 4,032 (s, 10H, 5 CH₂ ^Gly1-5), 4,036 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,502 und 4,724 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,410 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-Ad-AC₂-Gly₅-NHCH₂-]₄C (43). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,286, 1,476 und 1,567 (m, 12H, 6 CH₂), 1,623 (m, 4H, COCH₂CH ₂CH ₂CH₂CO),2,179 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂CO), 2,245 und 2,367 (m, 4H, COCH ₂CH₂CH₂CH ₂CO), 2,299 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂CO), 2,882 (s, 2H, CCH₂), 3,133 (m, 4H, 2 CH₂N), 3,928, 3,940, 3,987 (x2) und 4,043 (x2) (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,502 und 4,730 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,418 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a). Aggregat [Neu5Ac-Gab-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C (44). ¹H-NMR Spektrum in D₂O ist dem Spektrum der Verbindung (43) sehr ähnlich,
Matrix (δ, ppm): 1,283, 1,476, 1,570 (m, 18H, 9 CH₂), 2,178 und 2,189 (t, 2x2H, J 7,4 Hz, 2 CH₂CO), 2,301 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂CO), 3,135 (m, 6H, 3 CH₂N), 3,928, 3,940, 3,987 (x2) und 4,043 (x2) (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,502 und 4,730 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,418 (m, 4H, Ar).
Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
[Neu5Ac-Gab-AC-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (45). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,334 (m, 2H, CH₂), 1,504 (m, 2H, CH ₂CH₂NH), 1,569 (m, 4H, COCH₂CH ₂CH ₂CH₂CO), 1,625 (m, 2H, CH ₂CH₂CO), 2,207 und 2,313 (m, 4H, COCH ₂CH₂CH₂CH ₂CO), 2,344 (t, 2H, J 7 Hz, CH₂CO), 2,885 (s, 2H, CCH₂), 3,156 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂N), 3,928, 3,942, 3,979, 3,984, 4,037 und 4,042 (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,506 und 4,729 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,420 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
Aggregat [Neu5Ac-Gab-AC₂Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (46). ¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,268, 1,504 und 1,630 (m, 12H, 6 CH₂), 1,572 (m, 4H, COCH₂CH ₂CH ₂CH₂CO), 2,185 (t, 2H, J 7 Hz, CH₂CO), 2,212 und 2,315 (m, 4H, COCH ₂CH₂CH₂CH ₂CO), 2,349 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂CO), 2,898 (s, 2H, CCH₂), 3,130 und 3,158 (t, 2x2H, J 7,4 Hz, 2 CH₂N), 3,934, 3,945, 3,987 (x2), 4,039 und 4,045 (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,509 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,422 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
Aggregat [Neu5Ac-Gab-AC₃-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C (47). Das ¹H-NMR Spektrum in D₂O ist dem Spektrum der Verbindung (46) sehr ähnlich, die Signale sind zum Teil stärker verbreitert.
Matrix (δ, ppm): 1,276, 1,461 und 1,630 (m, 18H, 9 CH₂), 2,186 (t, 2x2H, J 7 Hz, 2 CH₂CO), 2,349 (t, 2H, J 7,4 Hz, CH₂CO), 3,132 (m, 6H, 3 CH₂N), 3,934, 3,945, 3,987 (x2), 4,039 und 4,045 (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,509 und 4,725 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,422 (m, 4H, Ar).
Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).

Beispiel 7.
Herstellung des Aggregats {[Neu5Acα-OCH₂(p-C₆H₄)NHCOCH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NHCH₂CO)₇-NHCH₂-]₄C}_x (Ammonium-Salz)

{[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₇-NHCH₂-]₄C}_x (48).

6,1 mg, (3,25μM) des Tetrahydrochlorids (22a), hergestellt wie im Beispiel 4 beschrieben, wurden in 0,5 ml Wasser mit 18,8 mg (26 μM) der lyophilisierten Verbindung (15) versetzt. Der pH des Reaktionsgemisches wurde mit 1 M NaHCO₃-Lösung auf pH = 8 gestellt. Die Reaktionslösung wurde 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt, wobei der pH durch Zugabe von 1M NaHCO₃-Lösung auf pH = 8 gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde über eine Sephadex LH-20 Säule mit einer 0,05 M wässrigen NH₄OH-Lösung getrennt. Nach Einengen und Trocknen im Vakuum wurden 9,6mg des Produkts (48) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 71 %.
¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): Matrix: 1,638 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,358 (m, 4H, 2 COCH ₂CH₂), 2,878 (s, 2H, CCH₂), 3,918, 3,938, 3,978 (x4) und 4,034 (s, 14H, 7 CH₂ ^Gly1-7), 4,037 (s, 2H, ArNHCOCH ₂). 4,498 und 4,718 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,408 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).
Beispiel 8.
Herstellung von Aggregate
Herstellung von {Galα1-3Galβ-O(CH₂)₃NH-CO(CH₂)₄CO-(NH(CH₂)₅CO)₃-(NHCH₂CO)₅-NHCH₂-]₄C}_x

{[B_d _i-Ap-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x(49).

Zu einer Suspension von 5,6mg (2μM) des Tetrahydrochlorids (25a), hergestellt wie im Beispiel 4 beschrieben, in 0,5ml DMSO wurden 15,6mg (16) und 5 μl Et₃N zugegeben. Die Reaktionslösung wurde 3 Tage bei 40°C gerührt. Nach Zugabe von 0,2ml konz. NH₄OH-Lösung wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten gerührt und über eine Sephadex LH-20 Säule mit MeCN/H₂O 1:1 getrennt. Nach Einengen und Trocknen im Vakuum wurden 6.4mg des Produkts (49) erhalten, entsprechend einer Ausbeute von 69%.
¹H-NMR Spektrum (D₂O/CD₃OD 2:1, δ, ppm): 1,374, 1,562 und 1,645 (m, CH₂), 1,883 (m, 2H, OCH₂CH ₂CH₂N), 2,265 (t, 4H, J 7.5 Hz, 2 CH₂CO), 2,292 (m, 4H, 2 CH₂CO), 2,377 (t, 2H, J 7.5 Hz, CH₂CO), 2,955 (verb. s, CCH₂), 3,213 (t, 6H, 3 CH₂N), 3,348 (m, 2H, OCH₂CH₂CH ₂N), 3,697 (dd, 1H, H-2 Galβ), 3,756 (m, OCHCH₂CH₂N), 3,910 (dd, 1H, J₃ 10 Hz, H-2 Galα), 4,00, 4,046 und 4,097 (s, 10H, 5 COCH₂N), 4,205 (d, 1H, J₃ 3 Hz, H-4 Galβ), 4,255 (m, 1H, H-5 Galα), 4,462 (d, 1H, J₂ 8 Hz, H-1 Galβ), 5,184 (d, 1H, J₂ 4 Hz, H-1 Galα).
Herstellung von {Neu5Acα2-3Galβ1-4GlcβNHCOCH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NHCH₂CO)₅-NHCH₂

{[3'SL-NHCOCH₂NH-Ad-Gly₅-NHCH₂-]₄C]_x (50) wurde ausgehend von (21a) und (14) analog zur Verbindung (49) hergestellt.
DC: R_f 0.52 (Methanol/Acetonitril/Wasser 6:6:3). Ausbeute 65%.
¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): 1,622 (m, 4H, CH ₂CH ₂CH₂CO), 1,797 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3_ax Neu5Ac), 2,017 (s, 3H, COCH₃), 2,342 (m, 4H, 2 CH₂CO), 2,744 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3_eq Neu5Ac), 2,895 (verb. s, CCH₂), 3,452 (dd, 1H, H-2 Glcβ), 3,568 (dd, 1H, J₃ 10 Hz, H-2 Galβ), 3,954, 3,992 und 4,041 (s, 12H, 6 COCH₂N), 4,105 (dd, 1H, J₂ 10 Hz, J₄ 3 Hz, H-3 Galβ), 4,523 (d, 1H, J₂ 8 Hz, H-1 Galβ), 5,005 (d, 1H, J₂ 9 Hz, H-1 Glcβ).

Herstellung von [Neu5Acα2-3Galβ1-4GlcβNHCOOH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NHCH₂CO)₇-NHCH₂-]₄C}_x

{[3'SL-NHCOCH₂NH-Ad-Gly₇-NHCH₂-]₄C}_x (51) wurde ausgehend von (22a) und (14) analog zur Verbindung (48) hergestellt. Ausbeute 78%.
¹H-NMR Spektrum (D₂O, δ, ppm): 1,622 (m, 4H, CH ₂CH ₂CH₂CO), 1,797 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3_ax Neu5Ac), 2,017 (s, 3H, COCH₃), 2,342 (m, 4H, 2 CH₂CO), 2,744 (dd, 1H, J_3ax 12.5 Hz, J₄ 4.6 Hz, H-3_eq Neu5Ac), 2,895 (verb. s, CCH₂), 3,452 (dd, 1H, H-2 Glcβ), 3,568 (dd, 1H, J₃ 10 Hz, H-2 Galβ), 3,954, 3,992 und 4,041 (s, 16H, 8 COCH₂N), 4,105 (dd, 1H, J₂ 10 Hz, J₄ 3 Hz, H-3 Galβ), 4,523 (d, 1H, J₂ 8 Hz, H-1 Galβ), 5,005 (d, 1H, J₂ 9 Hz, H-1 Glcβ).

Beispiel 9
Induktion der Selbstassoziation von [Gly₇-NHCH₂-]₄C (22a).
Die Untersuchung der Lichtstreuung einer 50 mM Lösung der Verbindung (22a) in Wasser wurde mit einem Spectra-Physics 164 Argon Laser (Plasma Linien λ = 528.7 and 611.5 nm) durchgeführt, die Streuung wurde in einem Winkel von 90° zum eintretenden Lichtstrahl gemessen. Die hierbei bestimmte Teilchengrösse betrug <2.5 nm. Zu dieser Lösung wurden 50 μl einer 0.8 M NaHCO₃-Lösung zugegeben. Die Lichtstreuung wurde, wie oben beschrieben, vermessen, die hierbei bestimmte durchschnittliche Teilchengrösse betrug 200-400 nm.
Zu dieser Lösung wurden 50 μl einer 0.8 M HCl zugegeben, und die Probe mittels Lichtstreuung, wie oben beschrieben, untersucht. Die hierbei bestimmte Teilchengrösse betrug < 2.5 nm.
Beispiel 10
Inhibition der viralen Zell-Adhäsion von Influenza-Viren
Die spezifischen Bindungskonstanten der Inhibitor-Virus-Komplexe wurden mittels eines Fetuin-Binding-Assay, wie in der Literatur beschrieben, bestimmt (US Patent 5,571,836, 1996; PCT WO 98/14215). Tabelle 8, Beispiel 10 Influenza virus A/NIB/44/90M H3N2
Beispiel 11
Inhibition der Complement-abhängigen Zytotoxizität von menschlichen Blutseren gegenüber PK 15 Zellen durch das Aggregat {[B_di-Ap-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x (49)
Verdünnungsserien des B-Disaccharides Galα1-3Gal und des Aggregats {[B_di-Ap-Ad-AC₃-Gly₅-NHCH₂-]₄C}_x (49) mit menschlichem Blutserum wurden über Nacht bei 4°C inkubiert, und die Inhibition der Zytotoxizität wurde, wie in der Literatur beschrieben, nachgewiesen (R. Rieben, E. von Allmen, E.Y.Korchagina, U.E.Nydegger, F.A.Neethling, M.Kujundzic, E.Koren, N.V.Bovin, D.K.C.Cooper, Xenotransplantation, 2, 98, 1995). Nach Zugabe der Complement-Bestandteile in Form von 10% Kaninchen-Serum (Sigma) wurden die Proben 10 Minuten lang mit auf Terasaki-Platten gezogenen PK15-Zellen inkubiert. Anschliessend wurden die Zellen gewaschen und mit einem Zytotoxizitätskit ("live/dead" viability/cytotoxicity kit, Molecular Probes, Eugene, OR, USA) angefärbt. Durch Messung der Fluoreszenz-Intensitäten wurden die lebend/tod-Anteile bestimmt. Die Inhibition der Zytotoxizität wurde im Vergleich zu einer Serum-Probe, der keine Inhibitoren zugesetzt waren, berechnet. Bei folgenden Konzentrationen (berechnet als molare Konzentration der B-Disaccharid-Einheiten) wurde eine Inhibition der Zytotoxizität um 50% erreicht:

Galα1-3Gal (B-Disaccharide) 200 μM

{[B_di-Ap-Ad-AC₃-Glys-NHCH₂-]₄C}_x Aggregat (49) 0.5 μM
Beispiel 12
Die divalenten Matrizen der Formel [HCl·Gly_n-NHCH₂CH₂-]₂ (n = 2, 4) wurden ausgehend von 1,4-Diaminobutan analog der Synthese in Beispiel 4 hergestellt.
Herstellung von Bis-1.4-(hexaglycilamido)-butan [HCl·Gly₆-NHCH₂CH₂-]₂ (52).
Zu einer Lösung von 30 mg der Verbindung [HCl·Gly₄-NHCH₂CH₂-]₂ (48.6 μM) in 0.5 ml DMSO wurden 48 mg BocGlyGlyNOS (146 μM) und 0.1 ml Et₃N zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, wobei sich ein Niederschlag bildete. Nach Zugabe von 1 ml Wasser wurde der Niederschlag durch Zentrifugation abgetrennt, dreimal in jeweils 1 ml MeOH suspendiert und nochmals abzentrifugiert. Nach Trocknen im Vakuum wurde der Rückstand mit 0.5 ml Trifluoressigsäure versetzt. Nach zwei Stunden wurden zweimal jeweils 3 ml Toluol zugegeben und die Lösung eingeengt. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst und nach Zugabe von 0.1 ml einer 2 M HCl-Lösung bis zur Trockne eingedampft. Das Produkt wurde mittels Gelchromatographie über eine Sephadex LH-20 Säule (1 × 30 cm) mit einer 50%igen wässrigen Acetonitril-Lösung erhalten. Nach Gefriertrocknung der Produktfraktion erhielt man 26 mg (63%) der Verbindung (52).
¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): 1,455 (m, 4H, CH₂CH ₂CH ₂CH₂), 3,172 (m, 4H, 2CH₂N), 3,856, 3,872, 3,947, 3,960, 3,975 und 4,028 (s, 2H, COCH₂N).
Das Aggregat {[Neu5Acα-OCH₂(p-C₆H₄)NHCOCH₂NH-CO(CH₂)₄CO-(NHCH₂CO)₆-NHCH₂CH₂-]₂}_x(Ammonium-Salz) {[Neu5Ac-Gab-Ad-Gly₆-NHCH₂CH₂-]₂}_x(53) wurde analog der Verbindung (48) in Beispiel 7 hergestellt.
Ausbeute 72%.
¹H-NMR Spektrum in D₂O (δ, ppm): Matrix: 1,470 (m, 4H, CH₂CH ₂CH ₂CH₂], 1,649 (m, 4H, COCH₂CH ₂), 2,363 (m, 4H, 2COH ₂CH₂), 3.181 (m, 4H, 2CH₂N), 3,869, 3,941, 3,962, 3,977 (x3) und 4.045 (s, 2H, COCH₂N), 4,505 und 4,727 (d, 2H, J 11 Hz, ArCH₂), 7,415 (m, 4H, Ar). Neu5Acα-Fragment: 1,680 (dd, 1H, J₄ 12 Hz, H-3ax), 2,036 (s, 3H, NAc), 2,778 (dd, 1H, J_3ax 12,5 Hz, J₄ 4,6 Hz, H-3eq), 3,598 (dd, 1H, J₈ 9 Hz, H-7), 3,636 (dd, 1H, J₈ 6 Hz, H-9b), 3,695 (ddd, 1H, J₅ 9,8 Hz, H-4), 3,728 (dd, 1H, J₇ 1,5 Hz, J₅ 10,2 Hz, H-6), 3,782 (ddd, 1H, H-8), 3,822 (dd, 1H, H-5), 3,846, (dd, 1H, J_9b 12 Hz, J₈ 2,3 Hz, H-9a).

Claims

Verbindung der allgemeinen Formel (I) X(B)_m (I)wobei X eine m-wertige Einheit ist und für CH_4-m; NH_3-m; N⁺H_4-m; >P- (wenn m = 3); >P⁺< (wenn m = 4); >B- (wenn m = 3); eine lineare Atomgruppe C₂H_6-m; >CH(CH₂)_zCH<, >C=C<, >N-N<, >N(CH₂)_zN< (wenn m = 4), wobei z = 2 bis 6; eine carbocyclische Atomgruppe C₆H_6-m, C₆H_12-m, oder für eine heterocyclische Atomgruppe C₃N₃ (wenn m = 3) oder C₄N₂ (wenn m = 4) steht, und die B gleich oder verschieden sind und für K-R stehen, wobei K für eine zweiwertige Molekülkette der Formel A¹-(A²-A³)_k-sp steht, wobei A¹ für (CH₂)_tY(CH₂)_u steht, wobei Y für >C=O, >NH, -O-, -S- oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, A² für -NHCO-, -CONH-, -OCONH- oder SCONH- steht, A³ für (CH₂)_r, O(CH₂)_r, NH(CH₂)_r, S(CH₂)_r, oder -(CHQ)- steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine Alkylgruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht, und wobei R für Wasserstoff, einen zur spezifischen Bindung an einen Rezeptor geeigneten Liganden oder ein Marker-Molekül steht, und m 2 bis 4 ist, mit der Maßgabe, dass (1) in der Verbindung mindestens ein R nicht Wasserstoff ist, (2) X, die B und m so gewählt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase unter Ausbildung von Aggregaten, die auf der Oberfläche mehrere R präsentieren, die nicht Wasserstoff sind, möglich ist, wobei die intermolekulare Assoziation auf der Bildung von Wasserstoffbrücken-Bindungen beruht, und (3) die Molmasse des Fragments X(K)_m weniger als 20.000 beträgt.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Molmasse des Fragments X(K)_m weniger als 4.000 beträgt.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, wobei mindestens 3 K vorliegen.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei mindestens zwei R nicht Wasserstoff sind.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei mindestens drei R nicht Wasserstoff sind.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei der Ligand R ein Mono- oder Oligo-Saccharid, ein Peptid, ein Mono- oder Oligo-Nukleotid oder eine Nuklein-Base ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei R ein Saccharid ausgewählt aus der Gruppe, bestehehnd aus Sialinsäure, Sialyllactose, Sialyllactosamin, Lactose, Mannose, Galα1-3Gal, Galα1-3(Fucα1-2)Gal, GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal, Neu5Acα2-6GalNAc, SiaLe^A, SiaLe^X, HSO₃Le^A, HSO₃Le^X, Galα1-3Galβ1-4GlcNAc, Galα1-3Galβ1-4Glc, HSO₃GlcAβ1-3Galβ1-4GlcNAc, N-Acetyl-lactosamin oder Polylactosamin ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei X für CH_4-m, A¹ für CH₂, A² für NHCO, A³ für CH₂, k für 8, sp für (CH₂)₃CONHCH₂CONHC₆H₄-4-CH₂O- und R für Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAc steht.
Verwendung der Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Herstellung eines Aggregats der allgemeinen Formel (II): {X(B)_m}_n (II)wobei die X(B)_m gleich oder verschieden sein können und für eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 8 definiert ist, stehen, und n für 2 bis 100.000 steht, und wobei die X(B)_m nicht-kovalent gebunden sind.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das Aggregat eine lineare, zyklische, polyzyklische, polyedrische, kugelförmige oder dendritische Struktur aufweist.
Verwendung nach Anspruch 9 oder 10, wobei das Aggregat aus zwei oder mehreren verschiedenen Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 8 aufgebaut wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 9 bis 11, wobei das Aggregat durch Selbstassoziation von Verbindungen nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 8 hergestellt wird.
Verwendung nach Anspruch 12, umfassend bei einer Lösung der Verbindung eine Änderung des pH, der Temperatur oder eine Zugabe von organischen Lösungsmitteln.
Verwendung nach einem der Ansprüche 9 bis 12 durch Änderung der Struktur eines Aggregats wie es in einem der Ansprüche 9 bis 13 definiert wird, durch eine Änderung der Temperatur, des pH oder eine Zugabe von Harnstoff, Trifluorethanol oder von Peptiden.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder eines Aggregats wie in einem der Ansprüche 9 bis 11 definiert, zur Herstellung eines Mittels zur Anwendung in therapeutischen oder diagnostischen Verfahren.
Verwendung nach Anspruch 15, wobei das Mittel gegen Entzündungen, virale und bakterielle Infektionen, Influenza-Viren, Selektin-vermittelte Entzündungsprozesse, Tumor-Metastasen, oder zur Neutralisation von Antikörpern bei Autoimmunerkrankungen und Transplantationen verwendet wird.
Verwendung einer Verbindung wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 8 definiert wird oder eines Aggregats wie es in einem der Ansprüche 9 bis 11 definiert wird, zur Herstellung von funktionalisierten molekularen Oberflächen.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das Aggregat ferner eine Verbindung der allgemeinen Formel (III) umfasst, X(B)_m (III)wobei X für eine m-wertige Einheit steht und die B gleich oder verschieden sind und für K-H stehen, wobei K in der Formel (III) für eine zweiwertige Molekülkette A¹-(A²-A³)_k-sp steht, wobei A¹ für (CH₂)_tY(CH₂)_u steht, wobei Y für >C=O, >NH, -O-, -S- oder eine Bindung, t für eine ganze Zahl von 0 bis 6 und u für eine ganze Zahl von 0 bis 6 steht, A² für -NHCO-, -CONH-, -OCONH- oder SCONH- steht, A³ für (CH₂)_r, O(CH₂)_r, NH(CH₂)_r, S(CH₂)_r, oder -(CHQ)- steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1 bis 6 und Q für eine Alkylgruppe steht, sp für einen zweiwertigen Spacer oder eine Bindung steht, und k für eine ganze Zahl von 5 bis 100 steht, und m mindestens 2 ist, mit der Maßgabe, dass (1) X, die B und m so gewählt sind, dass eine intermolekulare Assoziation der K in flüssiger Phase, insbesondere unter wässrigen Bedingungen, unter Ausbildung von Aggregaten, möglich ist, und (2) die Molmasse des Fragments X(K)_m weniger als 20.000, insbesondere weniger als 4000, beträgt.