DE19711111C2 - In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren - Google Patents

In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren

Info

Publication number
DE19711111C2
DE19711111C2 DE19711111A DE19711111A DE19711111C2 DE 19711111 C2 DE19711111 C2 DE 19711111C2 DE 19711111 A DE19711111 A DE 19711111A DE 19711111 A DE19711111 A DE 19711111A DE 19711111 C2 DE19711111 C2 DE 19711111C2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
use according
process step
detection
sds
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE19711111A
Other languages
English (en)
Other versions
DE19711111A1 (de
Inventor
Herbert Lochs
Alexander Swidsinski
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Pharma AG
Original Assignee
Schering AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering AG filed Critical Schering AG
Priority to DE19711111A priority Critical patent/DE19711111C2/de
Priority to PCT/EP1998/001223 priority patent/WO1998039473A1/de
Priority to EP98912439A priority patent/EP0977888A1/de
Priority to AU67275/98A priority patent/AU721826B2/en
Priority to CA002293704A priority patent/CA2293704A1/en
Publication of DE19711111A1 publication Critical patent/DE19711111A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE19711111C2 publication Critical patent/DE19711111C2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung eines in vitro - Nachweises von intraepithelialen Darmbakterien, Bestandteilen derselben und Reaktionsprodukten des Wirtes auf diese, zur Erkennung von Darmtumoren und deren Vorstufen.
Maligne Tumoren sind wegen ihrer schlechten Prognose eine ernste Bedrohung der menschlichen Gesundheit. Die Therapiemöglichkeiten der Mehrzahl bösartiger Tumoren sind zur Zeit noch beschränkt und vom Krankheitsstadium abhängig. Eine Früherkennung der Krankheit, sowie deren Vorstufen gehört daher zu den vorrangigen Zielen der klinisch wissenschaftlichen Forschung. Die Karzinogenese wird als eine Wechselwirkung endogener (genetischer) und exogener Faktoren betrachtet. Während genetische Veränderungen der Zelle bisher wenig Möglichkeiten zur therapeutischen Intervention boten, erhofft man vom Verständnis der exogenen Karzinogene einen unmittelbaren Nutzen. Am Anfang galt die Aufmerksamkeit vor allem chemischen und radioaktiven Substanzen, da die Wirkung dieser Karzinogene in Zellkulturen und Tierexperimenten leicht zu verfolgen ist. Mit der Entdeckung karzinogener Viren rückten die infektiösen Ursachen der Tumorentstehung in den Vordergrund des Interesses.
Viren sind nicht die einzigen Erreger mit karzinogener Potenz. Eine Verbindung zwischen bestimmtem Karzinomarten und einer chronischen Infektion mit Schistosoma oder Leberegel ist seit langem bekannt.
Die Rolle der Bakterien wurde dagegen erst kürzlich aufgedeckt. So wurde Helicobacter pylori als erstes Bakterium dem Karzinogen der Gruppe I zugeordnet (WHO/IARC Kongreß in Lyon, 1994 und Logan RPH, Helicobacter pylori and gastric cancer, Lancet 1994, 334, 1078-79).
Die Beziehung zwischen einer permanenten Besiedelung des Magens durch Helicobacter pylori und dem Magenkarzinom gilt als gesichert. Kolorektale Karzinome sind gleich dem Magenkrebs eine der vorherrschenden Geschwulstkrankheiten weltweit. Die epidemiologischen Besonderheiten der Ausbreitung kolorektaler Karzinome haben schon in den siebziger Jahren zu der Vermutung geführt, das gastrointestinale Bakterien ursächlich mit den kolorektalen Karzinomen zusammenhängen (Aries VC, Crowther JS, Drasar MJ, Hill MJ and Williams REO, Bacteria and the etiology of cancer of the large bowel, GUT 10, 334, 1969).
Trotz einer intensiven und zielgerichteten Forschung konnte die postulierte Beziehung zwischen Magendarmbakterien und Karzinogenese bisher nur für Helicobacter pylori gesichert werden. Der Grund dafür ist eine extreme Komplexität der Darmflora. Diese weist im Koloninhalt Bakteriendichten bis zu 1013/g Trockengewicht auf. Die Aufmerksamkeit galt jedoch bisher überwiegend intraluminalen Bakterien. Ob ein Pathogen, das die Dickdarmmukosa permanent besiedelt bei der Entstehung kolorektaler Karzinome eine Rolle spielt, ist nicht bekannt. Dies konnte mit den klassischen bekannten bakteriologischen Methoden nicht beantwortet werden.
Es wird nun die Verwendung eines in vitro - Nachweises von intraepithelialen Darmbakterien, Bestandteilen derselben und Reaktionsprodukten des Wirtes auf diese, zur Erkennung von Darmtumoren und Vorstufen von Darmtumoren beschrieben.
Die Verwendung ist dadurch gekennzeichnet, daß man für den in vitro Nachweis folgende Schritte durchführt:
  • a) Biopsieproben in einer wässrigen Lösung schüttelt und diese anschließend erneut in wässriger Lösung aufnimmt,
  • b) Verfahrensschritt a) mehrmals wiederholt, die Überstände verwirft,
  • c) die Rückstände bei Raumtemperatur in eine SDS - haltigen Lösung überführt und zur Auflösung des Gewebes und der DNA-Fraktion, vorsichtig und langsam schüttelt oder rotiert,
  • d) die DNA mit Phenol und Glaskügelchen aufreinigt und anschließend in Wasser resuspendiert,
  • e) die so erhaltene DNA mit universellen 16 sRNA Primern amplifiziert und anschließend die Stärke des PCR-Produktes der Probe mit der Stärke von PCR-Produkten standardisierter Bakterienlösungen bestimmter Dichte vergleicht,
  • f) positive PCR-Produkte kloniert und sequenziert und schließlich
  • g) die in der Biopsie gefundenen DNA-Sequenzen mit den bekannten bakteriellen DNA-Sequenzen aus DNA-Datenbanken vergleicht.
Der Nachweis kann vielfältig modifiziert werden. Es können speziesspezifische Primer für die PCR angewandt werden. Es können Virulenzfaktoren gezielt in der Biopsieprobe oder sogar in Stuhlproben nachgewiesen werden. Es kann ferner eine in situ Hybridisierung durchgeführt werden. Ferner kann ein immunhistochemischer und elektronenmikroskopischer Nachweis von Bakterien in der Mukosa durchgeführt werden. Ebenfalls denkbar sind nuklearmedizinische Methoden wie Szintigraphie oder Atemtest.
Die in Verfahrensschritt a) des Nachweises verwendete wässrige Lösung ist vorzugsweise eine physiologische Kochsalzlösung.
Die in Verfahrensschritt c) des Nachweises verwendete SDS - haltige Lösung ist vorzugsweise eine 0,5-5%ige SDS/physiologische Kochsalzlösung.
Vorzugsweise beträgt die Zeit für das Schütteln der Biopsieproben in Verfahrensstufe a) des Nachweises 10-120 s, besonders bevorzugt 30-60 s.
Vorzugsweise werden die Biopsieproben in Verfahrensstufe a) des Nachweises in 100- 1000 µl physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen, besonders bevorzugt in 500 µl. Vorzugsweise wird der Verfahrensschritt a) des Nachweises 5-20 mal wiederholt, besonders bevorzugt 7-10 mal.
Vorzugsweise werden die Fraktionen in Verfahrensschritt c) des Nachweises in ein Volumen von 100-50 µl 0,5-5%ige SDS/physiologische Kochsalzlösung gegeben, wobei besonders bevorzugt eine 1%ige Lösung ist.
Die bevorzugte Zeit des Schüttelns und Rotierens in Verfahrensstufe c) des Nachweises beträgt 10-24 Stunden, besonders bevorzugt 12 Stunden.
Vorzugsweise wird in Verfahrensstufe d) des Nachweises in einem Volumen von 10-50 µl Wasser resuspendiert, besonders bevorzugt in einem Volumen von 20 µl Wasser.
Die Verwendung betrifft insbesondere den Nachweis von E. coli Bakterien in Dickdarmbiopsien.
Der in vitro Nachweis kommt auch bei der Untersuchung von Proben anderer Körperkompartimenten wie Lymphe und Körperflüssigkeiten wie Blut, Flüssigkeiten des Magen-Darm-Traktes und Flüssigkeiten benachbarter Gewebe des Magen und des Darmes zur Anwendung. Reaktionsprodukte des Wirtes auf den Befall mit E. coli oder anderen für den Tumorbefall charakteristischen Bakterien können mittels gebräuchlicher analytischer Methoden, zum Beispiel einem Immunoassay, nachgewiesen werden.
Die erfindungsgemäße Verwendung des in vitro Nachweises bezieht sich auf E. coli, Bestandteile von E. coli, Reaktionsprodukte des Wirtes auf E. coli und verwandte Bakterien in der Darmmucosa oder anderen Kompartimenten des Körpers außerhalb des Magen-Darmlumens.
Die folgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindungsgemäße, ohne diese auf die Beispiele einzuschränken.
Beispiel
Gewebe von Biopsien wurden in physiologische Kochsalzlösung gegeben und zwei Stunden bei 4°C bis zur weiteren Verwendung gehalten. Jede Probe wurde kräftig mit einem Zerkleinerer (Vortexstab) 1 Minute lang in einem 1,5 ml Plastik - Tube zerkleinert und anschließend in 500 µl frische physiologische Kochsalzlösung gegeben. Dieser Vorgang wurde 8mal wiederholt. Danach wurde die Probe bei Raumtemperatur in einer 1 %igen SDS - Kochsalzlösung inkubiert und über Nacht abzentrifugiert. Aus dem Überstand wird DNA mit Phenol extrahiert, unter Verwendung eines GeneClean Kits weiter aufgereinigt uns schließlich in 30 µl Wasser, das für die Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) verwendet wird, resuspendiert.
Das 5' - Ende der 16S rmA Gene (600 bp) wurde mittels PCR unter Verwendung eines Universal - Primers für Bakterien amplifiziert:
Die 13 zusätzlichen Nukleotide (unterstrichen) wurden für die Klonierung an das 5' - Ende gebunden.
Um falsche positive PCR - Ergebnisse zu vermeiden, wurden vor- und nach-PCR - Stufen in verschiedenen Aufbauten und parallele Kontrollexperimenten unter Weglassen von template DNA durchgeführt.
Die Bakterienmenge in den Proben wurde mittels elektrophoretischem Vergleich der PCR - Proben zu PCR - Standard - Lösungen von Bakterien mit 105, 104, 103, 102 und 10 colony forming units (cfus) pro µl nach 25 and 30 Thermozyklen gemessen. Für die Sichtbarmachung wurde das Agarosegel mit Ethidiumbromid behandelt. Lösungen mit 10 cfus/µl gaben kein PCR - Signal. Proben - PCR - Signale mit 102 cfus/µl waren zu schwach für weitere Stufen und wurden als negativ betrachtet.
Für die Bestimmung der Bakterienzusammensetzung in der Probe mit positivem PCR - Signal wurden amplifizierte 16S rRNA Sequenzen in ein pCMV-LIC Vektor gemäß einem ligationsunabhängigem Klonierungsprotokoll kloniert. In einem Sequencer wurden für jede Biopsie zwischen 40 bis 200 Klone sequenziert. Die Bakteriensequenzen wurden analysiert und wie zuvor beschrieben mit 16S rRNA Primärstrukturen aus Datenbanken verglichen.
Beispiel 2
Zum Nachweis der Ausführbarkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens wurden von Menschen Biopsien entnommen.
Hierzu wurden 82 Menschen konsekutiv kolonoskopiert. Die entnommenen Dickdarmbiopsien wurden auf das Vorkommen intraepithelialer Keime untersucht. Es wurden drei Gruppen gebildet:
  • 1. Normalgruppe:
    42 Menschen mit makroskopisch und histologisch unauffälligen kolonoskopischen Befund
  • 2. Adenomgruppe:
    22 Menschen mit tubulovillösen Adenomen
  • 3. Karzinomgruppe:
    18 Menschen mit Karzinomen, davon 11 bei Zustand nach Kolonresektion vor weniger als drei Jahren, wobei vier der resezierten Patienten rezidivfrei waren
Keiner der Untersuchten hatte eine familiäre Polyposis oder bekam zwei Wochen vor der Untersuchung Antibiotika. Von jedem Untersuchten wurden 1 bis 7 Biopsien entnommen. Diese Biopsien wurden mit dem erfindungsgemäßen Verfahren auf intraepitheliale und verwandte E. coli Bakterien untersucht.
Wenn möglich wurden Biopsien sowohl aus der tumorverdächtigen als auch aus der normalen Mukosa entnommen.
Das Geschlecht, das Durchschnittsalter und die Altersstruktur der Untersuchten in den drei Gruppen ist wie folgt:
Die quantitative Bestimmung der Bakterienkonzentration erfolgte in 103, 56 und 47 Biopsien von Untersuchten aus der Normal-, Adenom- und Karzinomgruppe.
In 37 von 42 Untersuchten der Normalgruppe wurden keine Bakterien gefunden (0 bis 100 cfu/µl). Dagegen befanden sich Bakterienkonzentrationen zwischen 103 und 105 cfu/µl in mindestens einer Biopsie bei allen untersuchten der Karzinomgruppe und bei 21 von 22 Untersuchten der Adenomgruppe. Bakterien wurden ebenfalls in 23 der 44 Biopsien aus der normalen Mukosa der Untersuchten aus der Adenomgruppe und 31 der 37 Biopsien aus der Karzinomgruppe gefunden.
PCR positive Biopsien aus der normalen Mukosa und aus Tumorgewebe von Untersuchten wurden wie folgt ermittelt:
5, 26 und 32 PCR-Produkte aus den Biopsien der Normal-, Adenom- und Karzinomgruppen wurden kloniert und sequenziert. In der Normalgruppe wurden je eine Probe pro Untersuchtem sequenziert. In den Adenom/Karzinomgruppen wurden alle positiven PCR-Produkte aus dem Tumor kloniert und sequenziert. Von den Stufenbiopsien aus normalen Kolonabschnitten der Tumorgruppen wurde jeweils die Probe mit der maximalen Bakterienkonzentration ausgewählt, kloniert und sequenziert. 80% aller sequenzierter Klone in 17 von 21 Untersuchten aus der Adenomgruppe und 17 von 18 Untersuchten aus der Karzinomgruppe enthielten die E. coli Sequenz. In der folgenden Tabelle sind die Ergebnisse der quantitativen PCR und die Resultate der Sequenzanalyse klonierter PCR Produkte aufgeführt.
Aus den Ergebnissen ist ersichtlich, daß sowohl in Biopsien normal aussehender Schleimhaut als auch in Biopsien von Tumorgewebe der Untersuchten mit Kolonkarzinom und Kolonadenom intraepitheliale Bakterien vorhanden sind.

Claims (18)

1. Verwendung eines in vitro - Nachweises von intraepithelialen Darmbakterien, Bestandteilen derselben und Reaktionsprodukten des Wirtes auf diese, zur Erkennung von Darmtumoren und Vorstufen von Darmtumoren.
2. Verwendung eines in vitro Nachweises von E. coli, Bestandteilen von E. coli, Reaktionsprodukten des Wirtes auf E. coli und verwandten Bakterien in der Darmmucosa oder anderen Kompartimenten des Körpers außerhalb des Magen- Darmlumens zur Erkennung von Darmtumoren.
3. Verwendung gemäß den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man für den in vitro Nachweis folgende Schritte durchführt:
  • a) Biopsieproben in einer wässrigen Lösung schüttelt und diese anschließend erneut in wässriger Lösung aufnimmt,
  • b) Verfahrensschritt a) mehrmals wiederholt, die Überstände verwirft,
  • c) die Rückstände bei Raumtemperatur in eine SDS - haltigen Lösung überführt und zur Auflösung des Gewebes und der DNA-Fraktion, vorsichtig und langsam schüttelt oder rotiert,
  • d) die DNA mit Phenol und Glaskügelchen aufreinigt und anschließend in Wasser resuspendiert,
  • e) die so erhaltene DNA mit universellen 16 sRNA Primern amplifiziert und anschließend die Stärke des PCR-Produktes der Probe mit der Stärke von PCR-Produkten standardisierter Bakterienlösungen bestimmter Dichte vergleicht,
  • f) positive PCR-Produkte kloniert und sequenziert und schließlich.
  • g) die in der Biopsie gefundenen DNA-Sequenzen mit den bekannten bakteriellen DNA-Sequenzen aus DNA-Datenbanken vergleicht.
4. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die in Verfahrensschritt a) verwendete wässrige Lösung eine physiologische Kochsalzlösung ist.
5. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die in Verfahrensschritt c) verwendete SDS - haltige Lösung eine 0,5-5%ige SDS/­ physiologische Kochsalzlösung ist.
6. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Zeit für das Schütteln der Biopsieproben in Verfahrensstufe a) 10-120 s beträgt.
7. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Zeit für das Schütteln der Biopsieproben in Verfahrensstufe a) 30-60 s beträgt.
8. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Biopsieproben in Verfahrensstufe a) in 100-1000 µl physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen werden.
9. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Biopsieproben in 500 µl physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen werden.
10. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Verfahrensschritt a) 5-20 mal wiederholt wird.
11. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß der Verfahrensschritt a) 7-10 mal wiederholt wird.
12. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Fraktionen in Verfahrensschritt c) in ein Volumen von 100-500 µl 0,5-5%ige SDS/physiolo­ gische Kochsalzlösung gegeben werden.
13. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Fraktionen in Verfahrensschritt c) in ein Volumen von 100-50 µl %ige SDS/­ physiologische Kochsalzlösung gegeben werden.
14. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Zeit des Schütteins und Rotierens in Verfahrensstufe c) 10-24 Stunden beträgt.
15. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 14, dadurch gekennzeichnet, daß die Zeit des Schütteins und Rotierens in Verfahrensstufe c) 12 Stunden beträgt.
16. Verwendung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß in Verfahrensstufe d) in einem Volumen von 10-50 µl Wasser resuspendiert wird.
17. Verwendung gemäß den Ansprüchen 3 und 16, dadurch gekennzeichnet, daß in Verfahrensstufe d) in einem Volumen von 20 µl Wasser resuspendiert wird.
18. Verwendung gemäß den Ansprüchen 1-17 in Proben von Körperkompartimenten wie Lymphe und Körperflüssigkeiten wie Blut, Flüssigkeiten des Magen-Darm- Traktes und Flüssigkeiten benachbarter Gewebe des Magen und des Darmes.
DE19711111A 1997-03-06 1997-03-06 In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren Expired - Lifetime DE19711111C2 (de)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19711111A DE19711111C2 (de) 1997-03-06 1997-03-06 In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren
PCT/EP1998/001223 WO1998039473A1 (de) 1997-03-06 1998-03-04 In vitro nachweis zur erkennung von darmtumoren
EP98912439A EP0977888A1 (de) 1997-03-06 1998-03-04 $i(IN VITRO) NACHWEIS ZUR ERKENNUNG VON DARMTUMOREN
AU67275/98A AU721826B2 (en) 1997-03-06 1998-03-04 In vitro determination for detection of tumors of the intestine
CA002293704A CA2293704A1 (en) 1997-03-06 1998-03-04 In vitro analysis for detection of tumours of the intestine

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19711111A DE19711111C2 (de) 1997-03-06 1997-03-06 In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE19711111A1 DE19711111A1 (de) 1998-09-17
DE19711111C2 true DE19711111C2 (de) 1999-09-02

Family

ID=7823689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19711111A Expired - Lifetime DE19711111C2 (de) 1997-03-06 1997-03-06 In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0977888A1 (de)
AU (1) AU721826B2 (de)
CA (1) CA2293704A1 (de)
DE (1) DE19711111C2 (de)
WO (1) WO1998039473A1 (de)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7101668B2 (en) 2000-04-18 2006-09-05 National University Of Singapore Molecular markers
PL1761779T3 (pl) 2004-08-13 2008-04-30 Indivumed Gmbh Zastosowanie transtyretyny jako biomarkera gruczolaka jelita grubego; sposób wykrywania i układ testowy

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19523553A1 (de) * 1994-06-29 1996-01-04 Reckitt & Colmann Prod Ltd Helicobacter pylori Carboanhydrase-artiges Protein

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19523553A1 (de) * 1994-06-29 1996-01-04 Reckitt & Colmann Prod Ltd Helicobacter pylori Carboanhydrase-artiges Protein

Also Published As

Publication number Publication date
DE19711111A1 (de) 1998-09-17
WO1998039473A1 (de) 1998-09-11
EP0977888A1 (de) 2000-02-09
CA2293704A1 (en) 1998-09-11
AU6727598A (en) 1998-09-22
AU721826B2 (en) 2000-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0851937B1 (de) Verfahren zur reinigung, stabilisierung oder isolierung von nukleinsäuren aus biologischen materialien
DE60029092T2 (de) Verfahren zur detektion von nukleinsäuren, welche auf krebs hinweisen
DE2915082C3 (de) Verfahren und Verwendung eines Reagenzsatzes zum Nachweis und zur Charakterisierung von Nukleinsäuren und ihren Sequenzen
Ubaldi et al. Sequence analysis of bacterial DNA in the colon of an Andean mummy
DE3650317T2 (de) Test zum nachweis von kampylobakter.
DE2735411C2 (de) Verfahren zur Herstellung von acellulären Impfstoffen auf Ribonucleinsäurebasis
Schiøler et al. Biliary calculi in chronic Salmonella carriers and healthy controls: a controlled study
DE10136273A1 (de) Molekulare Marker beim hepatozellulären Karzinom
DE69121975T2 (de) Spezifischer Nachweis von Mycobacterium Tuberculosis
DE19711111C2 (de) In vitro Nachweis zur Erkennung von Darmtumoren
Laitinen et al. Cellular Infiltrates in Asthma and in Chronic Obstructive Pulmonary Disease1, 2
Bornside et al. Bacterial flora of the human small intestine
DE3923341A1 (de) Neisseria gonorrhoeae-nachweis
JPS60996B2 (ja) 」かく」痰分析法
Clark et al. Transbronchial lung biopsy: A review of 85 cases.
DE19716346C1 (de) Verfahren zum Nachweis von Cytokeratinen
EP3322817B1 (de) Oligonucleotide und deren verwendung
Nicklas et al. Prevalence and biochemical properties of, V factor-dependent Pasteurellaceae from rodents
Comstock Early studies of tuberculosis
Dencker et al. Examination for aerobic and anaerobic bacteria in human portal blood collected by transumbilical catheterization
DE69821341T2 (de) Sonden zum nachweis von infektion durch klebsiella pneumoniae
DE19727932A1 (de) Verfahren und Testkit zum Nachweis bösartiger Tumore
DE3006217A1 (de) Verfahren zum nachweis von krebserkrankungen und reagens zur durchfuehrung des verfahrens
SU1442188A2 (ru) Способ диагностики туберкулеза легких
Zaiman et al. Electrocardiographic changes occurring in Trichinella-infected rats prior to larviposition and migration

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8330 Complete disclaimer