JPS60996B2 - 」かく」痰分析法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は人の略淡における病原体微生物の定量分析に関
するものである。

別の観点から言えば、本発明は噂漆試料をサポニン粘液
溶解剤で液化する新規の技術に関するものである。一般
に人間の肺炎患者の状態は、病原体微生物例えばバクテ
リアまたはウイルスあるいは化学的刺激剤または異物に
よっても引き起こされることのできる肺の急性炎症状態
から成る。

肺炎の推定診断で患者の原因を決定するためには肺液試
料が必要である。腕液の理想的な試料は均一系試料であ
り、これは外科的方法例えば気道内通管吸引法によって
得ることができる。一般的に、外科的技術は時間をくし
、、また患者にとっても危険である。気道内通管吸引法
による致死例がいくつか報告されている。例えば低張症
患老あるいは衰弱病例えば血液疾患の患者は気道内通管
吸引法によって深刻な併発症に特にかかりやすい。従っ
てほとんどの医者は肺液試料を得る方法として早期のせ
きによる略琢に頼っている。

この方法が簡単であり、また最も普通である。ただ残念
なことに、せき噂嬢は口、鼻、後咽頭および胃の中にい
る通常の生理的寄生菌ですでに汚染されている。さらに
、肺炎患者の略琢は非常に粘度が高く、また本来不均一
でもあるので再現性のある方法で分散させることが困難
である。略漆の定量分析は高粘性不均一噂嬢については
実施できない。というのは、一般に略淡のような試料の
定量分析では、試料を希釈してからそのごく少量部を種
種の増殖培地上で平板培養し、次に培地上に発生する微
生物のコロニーの型と数を測ることが必要であるからで
ある。一般にべトリ皿上で有効に数えることのできる最
大数は約３００である。さらに言えば、通常の略淡試料
では１『／のまでの量の汚染微生物の含有を受けいれて
いる。一方「肺炎の原因生物としての微生物は一般に約
１ぴ／のとより多い量が存在している。従って略淡試料
が定量分析できるためには病原体微生物が希釈試料中に
均一に分散するような方法で試料を希釈する必要がある
。従ってこうして希釈した略淡試料の少量を病原体微生
物の型と数で定量分析すれば略疹試料１必中の病原体微
生物の正確な数を正確に測定することができる。略焚試
料の外来汚染や不均一性の問題を軽減して熔漆の定量分
析を提供するために、消化酵素および化学的消化剤で略
疹試料を分解する試みがいくつかなされている。

そうした消化剤の中には従来試されてきたものもあるが
、消化剤には全て以下の欠点のうちの少くとも１つの欠
点がある。すなわち消化剤は高価であり、貯蔵有効期間
が短かく「温度に敏感であり、一部または多くの病原体
生物に対して毒性を示し、またさらに長い分解時間が必
要である。例えば多数の蛋白質分解酵素がうみ状および
粘液状の略漆の両方に試めされてきた。それらの酵素材
料の中では、トリプシン、ェラスターゼおよびキモトリ
プシンが最も効果的であり「ブロメライン、フアイシン
またはパパインのような酵素はかなりの高濃度の時にだ
け有効である。一方「プラスミンは曙漆粘度に関して見
るべき効果を示さない。これらの蛋白質分解酵素は全て
、うみ状曙漆に対するよりも粘度状曙漆に対する効果の
方が優れている。噂漆の定量分析に最も広く使われてい
る消化剤はＮ−アセチルシステインおよびクレランド（
ｃｌｅｌａｎｄ）試料（１１４ージチオーメソェリトリ
ット）の水溶液である。一般にクレランド試料は低濃度
では粘度溶解活性がＮ−アセチルシステインより高い。
しかしながらクレランド試薬は水溶液中で比較的短時間
のうちに一般にその粘液溶液活性を失う。さらにどちら
の試薬も噂漆の速やかな分解に必要な濃度では病原体微
生物に対して多少蓑性がある。従ってほとんどの略淡試
料は非定量的な画線法（一般に種種の増殖培地上で不均
一な略淡試料を画線することを含む方法）で処理する。

この方法は仮性陽・性培養の実数をもたらし、そして多
くの場合微生物の混入により病原性生物の過増殖をもた
らす。本発明によれば、ある精製サポニンは粘液溶解活
性を示し、略淡（うみ状および粘液状略淡の両方）の試
料を有効に減成し、病原体微生物をその中に均一に分散
させ、しかも病原体に害を与えないことを見出した。

本発明の一態様によれば、曙漆定量分析の新規技術が提
供される。

その新規の方法は、略琢試料を集めた後でそれと無毒性
サポニンの粘液溶解有効量とを接触させて事実上均一な
粘度をもつ略淡試料にし、全ての病原体が均一に分散す
るように試料を混ぜ、そしてこうして得られた試料につ
いて定量分析技術を実施する。本発明で使うことのでき
る無毒性サポニンは米国特許第３８８３４２５号明細書
に記載の方法によって精製することができる。

サポニンは植物界に広く分布するグリコシドであり、水
中油乳化剤を形成することができ、そして保護コロイド
として作用する。

サポニンの各分子は分子のアグリコン部分を構成するサ
ポゲニンと糖とから成る。サポゲニンはトリテルベノィ
ド（通常５環式構造、例えばキラ酸）またはステアロィ
ド構造（通常ジオスゲニンのようなスピロアセタール側
鎖を含む）である。

サポニングルコシドの糖部分には１種またはそれ以上の
糖例えばグルコース、シュークロース、キシロース、ベ
ントースあるいはメチルベントース等が含まれる。加水
分解すれば、サポニンからサポゲニンと１種またはそれ
以上の糖とが得られる。市販のサポニンは白色ないし褐
色の無定形粉末であり、刺激臭があり、不快な味とにお
し、がある。

この粉末は水に非常によく溶け、水と振ると非常によく
泡立つ。市販のサポニンは水および（または）他の有機
溶剤例えばアルコールで植物組織を抽出し、沈殿させて
再結晶等することによってサポニンを回収することによ
って調製する。

サポニンは植物界に広く分布している。例えばサポニン
はナデシコ料植物中に非常に広く分布している。サボニ
ン源としての特異な例はキラャ皮、パナマ木、ソープペ
リーおよび甘草等である。市販サポニンの製法は例えば
Ｋｉｎｇｚｅｔｔｅの『ＣｈｅｍにａＩ Ｅｎｃｙｃｌ
ｏｐｅｄｉａ』Ｄ．日。Ｈｅｙ第９版（１９６＆王）に
記載されており、粉末状のキラャ皮（Ｑｕｈｌａｒｉａ
ｓａｐｏＭｒｉａ）を熱アルコールで抽出するかまたは
キラャ皮の粉末状乾燥水性抽出物をアルコールと滋とう
させるかし、冷却してアルコールからサポニンを結晶化
させる方法が記載されている。サポニンは経口摂取の場
合には人間に対して事実上無害であるが、血管内に注射
した場合には強力な溶血剤として作用し、赤血球を溶解
する。

前記の特徴のため、サポニンは従来血液学の分野で赤血
球の存在が他の操作例えばヘモグロビンの定量や白血球
の計数を妨害する時に赤血球を溶解するために使用され
てきた。前記の米国特許第３８８３４２５号明細書に記
載があるとおり、供給源植物から抽出したサポニンの水
溶液（みかけの分子量は約６００より少なく、水溶液中
の分子寸法は約１４０〜６００である）から成分を除去
することによって前記サポニンから微生物毒素を除去す
る方法がある。

前記の米国特許に記載されている一つの方法は、市販さ
れている植物系サポニン抽出物の水溶液を作り、その水
溶液を実際の孔の平均直径が約１１Ａより小さくなくま
た約２４Ａよりも大きくない徴孔フィルター膜に通すこ
とから成る。前記の徴孔フィルター膜を通した水溶液は
殺菌性毒素を含んでおり、前記のフィルターはサポニン
材料を通さない。本発明者は前記のようにして精製した
サポニン植物抽出物が全ての型の略琢を有効に減成し、
また病原体微生物をいためることなくその病原体を有効
に分散させる点で効果的な粘液溶解剤であることを見出
した。

本発明方法を実施するにあたり、任意の従来技術によっ
て略淡試料を集める。

次にその曙漆と少量ではあるが粘液溶解に有効な量の前
記無毒性サポニンとを混合する。略淡と混ぜる際、サポ
ニンは水溶液であることが好ましい。水溶液の濃度は、
所望量の水溶液と略琢試料とを混ぜた時に試料を減成す
るのに充分なサポニンが存在すれば任意の適当な濃度で
あることができる。一般にはサポニンと噂漆との混合物
中に含まれるサポニンの量が約０．１〜約２０重量％で
あることが必要であり、好ましくは約１．０〜約１０重
量％、さらに約５〜約１の重量％であることが好ましい
。さらに、サポニンと略琢との混合物に病原体微生物に
対して無害な発泡抑制剤を約０．１〜約２の重量％好ま
しくは約５〜約１の重量％加えることが好ましい。

前記の発泡抑制剤として適当なものは商品名Ｄｏｗ ×
Ａｎｔｉｈａｍ ＢおよびＤｏｗ ＸＨＩＯの名で市
販されている材料である。これらの発泡抑制剤は例えば
ＴｒｉｔｏｎＸの商品名で市販されている型の滅菌処理
できる（例えばオートクレープで処理できる）非イオン
性乳化剤およびジメチルシロキサンのポリマーを含んで
いる。オートクレープによる滅菌処理に安定なので、Ｄ
ｏｗＸＨＩＯの商品名で市販されている材料が好ましい
。サポニンはうみ状および粘液状を問わず全ての型の略
淡を有効に減成し、粘度の均一な混合物を非常に遠く形
成する。次に略琢試料を充分に混ぜて微生物をその中に
均一に分散させる。

所望により、こうして得られた減成化曙漆試料の一部分
を種種の培地に直接平板培養して改良された略琢定量分
析を行うことできる。この改良法によれば、滅成化曙漆
を使用しない従来法では起こるような仮性陽性培養の実
数の誘導や汚染微生物による病原性生理的寄生菌の過増
殖は起らない。本発明による曙漆の改良定量分析におい
ては、病原体微生物に無害で分析操作を妨げない任意の
適当な希釈剤または通常のりん酸緩衝塩で所望どおり例
えば１：１００〜１：１０００にサポニン処理略淡を希
釈する。

こうして得られた希釈試料を充分に混ぜて、病原体微生
物を溶液中に確実に均一分散させる。次に希釈溶液試料
を通常の増殖培地に加え、インキュベーションする。こ
うして培地上に形成されるコロニーを同定し、計数し、
また略淡試料の希釈度から病原体微生物の全量および種
種の型を計算することができる。あるいは所望により、
非希釈試料を顕微鏡で検査することもできる。以下実施
例によって本発明をさらに詳細に説明する。

例１ 本実施例においてはサポニンの毒性と種種の公知の粘液
溶解剤の毒性とを比較する【以下の表１に記載したバク
テリアの各株は表１に記載の増殖培地で一瞬増殖する。

得られる増殖培地の濁り度は無菌生理的塩類溶液ないし
標準硫酸バリウムで１の‘当りバクテリア約１ぴに調節
する。次に、得られるブロス（ｂｒｏｔｈ）を栄養素ブ
ロスで１：２００に希釈する。続いて米国特許第３８８
３４２５号明細書に記載の方法で精製した４０％サポニ
ン水溶液（前記米国特許の方法によって水溶液から譲性
成分を除去したもので、水溶液中におけるみかけの分子
量は約６００より少ない）を表１に記載のバクテリア用
の増殖型ブロスに加える。そしてバクテリア増殖ブロス
懸濁液の各１の【を前記のサポニン溶液１の‘に加え、
サポニンの最終濃度を２の重量％とする。そして３７℃
で一晩インキュベーションする。標準および試験懸濁液
をグルコース１重量％を含む豊寒天培地または血液寒天
塔地上に画線する。毒性を検査したその他の化合物はク
レランド試薬（１・４−ジチオーメソェリトリット）、
Ｎ−アセチルシスティンおよびラウリル硫酸ナトリウム
である。これら粘液溶解剤は表１に記載の濃度でおよび
微生物の各増殖プロス中で調製し、サポニンと同様の方
法でその毒性を検査する。記載した量の粘液溶解剤を含
むブロス中でバクテリアが増殖する場合には、実験を繰
返して行い、２度目の実験でも増殖が行われるかどうか
を調べる。

１回目と２回目の実験で増殖が行われない場合には３度
目のバクテリア増殖実験を行う。

始めの２回の実験でバクテリアの増殖が見られたものに
おいても、３度目の実験を実施したものもある。以下の
表１において、十は増殖の見られたものであり、一は増
殖の見られない実験を示す。

従って以下のとおりである。十十十 ３回のうち３回と
も増殖が見られる。

−−− ３回のうち１回も増殖が見られない。−−十
３回のうち１回増殖が見られる。−十十 ３回のうち２
回増殖が見られる。

表１に結果を示す。

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三Ｓ総」総ーふ紙缶＞ぷいＡｏｎそＫトトＲ」辛蓮．）
きＨトも針やトー〈つトけ前記の表１から明らかなとお
り、精製サポニンは比較的高濃度であっても全ての供試
微生物を殺さないし、またその増殖を阻害することもな
い。

しかしながら、その他の供試粘液溶解剤は各各サポニン
よりかなりの低濃度でも何種類かの微生物の増殖を妨げ
る。また現在使われている粘液溶解剤はその推賞される
濃度（Ｎ−アセチルシスティン０．５％およびクレラン
ド試薬０．１％）においてさえ、何種類かの微生物に対
する毒性が認められる点に注目する必要がある。
Ｚ例２数種類の曙毅試料についてその試
料を無毒性サポニンに溶かしてから診断分析を行い、そ
の結果を代表的な病院で従来実施されている通常の略淡
分析法と比較する。

Ｚ始めに早朝の略琢試料を
集め、略淡を級に分類してその性質例えば豚種を観察す
るために湿った標本を作り、こすりつける。略淡は１級
から４級まで次のとおりに分類する。１級：だ液状−多
泡性、澄んでおり無色。

４功苦の２視野においてほとんどが上皮細胞である。

２級：粘液状−無色で透明ないし半透明。

大部分が好酸性および大食細胞。多形核細胞は６０％よ
り少ない。細胞は４ぴ音視野の１′沙〆下である
２３級：粘液うみ状−無色ない
し緑色を帯びる。

わずかに半透明。視野のほぼ１′２が細胞でうまる。４
級：うみ状−黄色ないし緑色を帯びる。

くもっている。多形核細胞が７０％以上。視野の１３′
２以上が細胞でうまる。各実験において細胞密度は、湿
ったスライド板試料の４０倍視野の何パーセントが細胞
でうまるかを観察することによって決定する。

細胞の診断は標本をパパニコロ−染色し、試料の細胞２
０の固を３計数し、多形核細胞（ＰＭＮ）、好酸性細胞
、好塩基性細胞、大食細胞、単核細胞およびリンパ細胞
を同定する。各曙漆試料を級に分類した後「略淡試料の
一部分で６個の準定量的画線を行うことを含む通常の４
分析を行う。

それらの画線は血液寒天平板培地（ＢＡ）、チョコレー
ト寒天平板堵地（ＣＨＯＣ）、好酸性メチレンフルー平
板培地（ＥＭＢ）、マンニット塩平板培地（ＭＡＮ）、
マンニット塩含有べニシリン平板培地（ＭＡＮ−ＰＥＮ
）およびサブロー十ジェンタミシ平板塔地（ＳＤＡ−Ｇ
ＥＮＴ）上に行い、各バクテリアを平板塔地上で増殖さ
せ、それらを同定する。各試料の残りの部分は１の重量
％サポニン（米国特許第３８３３４２５号明細書に記載
の方法で精製したもの）と０．１Ｍクエン酸ナトリウム
との同量および発泡抑制剤（Ａｎｔｉｆｏａｍ ＢＥｍ
ｕｌｓｂｎ＋ＤｏｗＣｏｍｉｎｇ）とを加えてサポニン
の最終濃度を５重量％にするようにして、分解する。サ
ポニンー略疹混合物を少くとも３硯沙間渦巻かくはんす
る。次に分解した略琢をそのままＢＡ、ＣＨＯＣ、ＥＭ
旧、ＭＡＮ、ＭＡＮ一ＰＥＮ、およびＳＤＡ−ＧＥＮＴ
各平板塔地上に画線する。

分解した略淡の一部分を生理的塩類港液びん中に入れて
１：１００希釈を２回行い、１ぴおよび１ぴ希釈液を作
る。例えば噂漆０．１Ｍを塩類溶液９．９の【中に入れ
て１び希釈液とし、またこの１ぴ希釈液０．１の‘を塩
類溶液９．９必中に入れて１び希釈液とする。次に１ぴ
希釈液びんから０．０１机耳を使ってＢＡ、ＣＨＯＣ、
ＥＭ脇、ＭＡＮ、ＭＡＮ＋ＰＥＮおよびＳＤＡ＋ＧＥＮ
Ｔ各平板培地上に画像し、最終確定希釈度を１ぴとする
。さらに、１ぴ希釈液びんから別に０．０１の上試料を
とり、ＳＤＡジェンタミシン培地上に画線して確定希釈
度を１ぴとする。各平板培地をインキュベーションして
２蝿時間後および４錨時間後に観察する。ＳＤＡ平板塔
地は一週間後にも観察する。各平板塔地は次のように解
釈する。｛ａ’ａ連鎖球菌およびナィセリア菌および偽
ジフテリア菌の１ぴ〜１０７の発生は正常寄生菌（鼻い
ん腔気道中に見られる微生物の正常な水準および型）と
解釈する。

｛ｂ）前項‘机こ記載した以外のその他の全ての非酵母
菌生物の１ぴあるいはそれ以上の発生は陽・性感梁と解
釈する。

‘ｃ｝ １組の平板塔地上にランダムに微生物１〜５種
が見られる時、１のま疑陽性と解釈する。

‘ｄ｝ １組の平板培地上にランダムに微生物１〜５種
が見られる時「１ぴおよびそれ以上は口そうカンシダ（
Ｃａｎｄｉ船Ａｌｂｉｃａｎｓ）にとっては疑陽性であ
り、その他全ての酵母菌にとっては陽性である。表２に
その結果を記載する。

ト Ｎ（ 塾超Ｃ 縄超 ミ史墨墨櫨櫨超蜜菱毎 槌鰐亨薫悪霊鰐課題憲章墨鯉 群 マとＳご 浮薄宏Ｓ益も選 出 トニ蟻や 世臼片蟻軽いＳ ・ Ｋ・ （ ーニ き翼 ト Ｃ ロＳ 客 × −Ｓ 手さ る
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′も蔭亀Ｎの き 蓋こ母 史ミ三？史 に 幹Ｅ寅 表２から明らかなように略淡試料８の節こ関して通常の
診断法と定量分析法（サポニン分解工程を含む）とを実
施し、２引例についてその結果が異なっている。

そのうちの２餅例では通常の診断法で陽性を発見できな
いのに対し、定量分析法では陽性を発見している。また
他の３例では通常診断法で陽・性とされたものに対して
、定量分析法は陽・性と考えるほどではないと判断して
いる。特に注副こ値するのは、定量分析法よるチョコレ
ート平板培地上での１０７／の【からインフルエンザ菌
患者７例が発見されているのに対し、通常の診断法では
過増殖のために検出できない。特にこの微生物は肺炎の
診断に極めて大きな意味をもつ。また通常の診断分析法
では、４例に関して２重感染を構成する他の微生物の過
増殖のために検出できない。前記の表２の結果における
大きな差は定量分析法で陽・性が示された酵母菌につい
て、通常の診断法では検出できないかまたは軽増殖と判
断されている。次に診断結果と患者の病歴との相関につ
いて、表３はのどから肺の部険までの若干の相関を示す
。

これら相関関係の結果を以下の表３に示す。表 ３患
者番号 増殖地 結
果１ のど が口そうカンジ
ダ・竪が口そうカンジダ・１×１０５、 略焚※ 変形菌および緑のう菌・１×１０５ロ
の ど 正常寄生菌曙 漆 へモフイラス・１０
８、肺炎樟菌・１０６、ノャスツレラ・１０６ｍ
曙漆 肺炎梓菌・１×１０９ のど が口そうカンジダ・中 Ｎ の ど 緑のう菌・隆 曙漆 緑のう菌・１×１０５ Ｖ の ど 連鎖球菌夕、ブドウ球菌、肺炎樺菌
・軽曙 漆 肺炎樟菌・１０５肺部検 肺炎梶菌
・車 町 のど が口そうカンジダ・軽 噂漆 が口そうカンジダ・＞１０６、 セラシアリケフアシエンス・１０５、 プソドモナス・１０５ 皿 の ど 腸内菌、大腸菌 曙梁 正常寄生菌 血 熔 漆 正常寄生菌 肺部検 ェンテロバクターアエロゲネス位
口 肺炎樺菌およびカンジダトロピアリス・車の
ど 肺炎樟菌およびカンジダトロピカリス舌 肺
炎椙菌および力ンジダトロピカリス略淡 肺炎樟菌・
１０８、腸内菌・１０７Ｘ の ど 乳酸菌
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびが口そうカンジ
ダ曙濠 肺炎梶菌・１０８、ェンテロバクタークロア
カエ・１０８、カンジダクルセイ・１０５、カンジダト
ロピカリス・１０４、トルロブシスグラブラ夕・１０５
虹 の ど 黄色ブドウ球菌・中 略漆 黄色ブドウ球菌・１×１０７ 皿 の ど 肺炎梶菌およびェンテロバクターア
ェロゲネス、が口そうカンジダ・重曙 漆 ェンテロ
バクターアェロゲネス・１０８、が口そうカンジダ・１
０５血液音防食 ェンブロバクターアェロゲネスお
よびフ。

ソドモナス柳 の ど 正常寄生菌 曙 淡 カンジダトロピカリス・１０４、トルロプシ
スグラブラタ・１０４※ 定量的咳漆分析 表３から明らかなように、噂淡と同じ微生物がのどにあ
る場合があり「 これは患者に転移増殖があるかあるい
は曙漆試料中に口腔汚染があるかのどちらかを示してい
る。

培養を繰返し計数変化を観察することにより前記の２つ
の可能性を区別することは医者には可能であろう。転移
増殖が見られる場合には肺感染の定着を防ぐために注意
することができる。さらに多くの場合、曙孫の定量分析
は重感染を検出するが、のど試料ののど分析では検出で
きない。この場合、鼻いん腔汚染は最４・であり、肺感
染の確率が高いという結論をデータ一が支持する。例３
本実施例は診断略琢試料におけるサポニンの粘液溶解作
用（粘度減成能）を示すためのものである。

噂漆試料は、（前記例２で定義した級によれば）２級略
琢２凧【である。試料の粘度を測定するために『 Ａ
Ｓｉｍｐｌｅ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｍｅａｓｍｍｇ
Ｓｐｕｔ皿ｍ Ｖｉｓｃｏｓｉつ 』 Ａ．０．Ｊ
ｅｎｓｓｅｎ 、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．ＤＳへ
５４ ２９０〜２９６（１９７３年）に記載されてい
るような粘度計を作る。この粘度計は１つのプラスチッ
クブロックから成り、その底面は平面である。この底面
上に半円形状の溝部分をうがち、その末端に垂直孔を設
け、頂上をＹ字形つぎ手と連結する。Ｙ字形つぎ手の１
方はプラスチックホースを介して空気流調節機と連結し
、他方はプラスチック管を介して水ノノメーター（ｎｏ
ｎｏｍｅｔｅｒ）に連結する。空気流出口部分を垂直孔
中の溝のすぐ上部に設ける。圧力変化はノノメー夕−の
水力ラムの高さ変化として測定する。粘度計を空にする
のに要する時間は秒単位で記録する。ある試料の粘度を
測定するにはまず焔漆をガラスプレート上に置く。定常
空気流を伴った粘度計を噂漆上に置き、粘度計の溝部分
につめる。粘度計の側面に設けてある空気流出口部分を
閉鎖する。粘度計を空にするのに要する時間および水力
ラムの高さの最大偏差を記録する。水力ラムの高さの上
を０．００８８１倍してＨｇの【（圧力）に変える。次
にＪｅｎｓｓｅｎの論文に従って式圧力×砂×Ｋ＝粘度 （この式でＫは粘度計の検度定数である）に代入する。

粘度計の検度は一次標準物質としてグリセリンを使うオ
ストワルド粘度計に対して行う。この粘度計ではＫ＝１
３．５×１ぴである。２級曙漆に関して前記例１および
２に記載の精製サポニンを加えた場合と加えない場合と
の粘度を次の表４に示す。

表 ４ 診断燈濠試料におけるサポニンの粘液溶解作用曙漆の性
質：２級略淡２雌センチポイズ Ａ．サポニン添加前の５種の異なる ８８１部分の
粘度 １，３３２１４，２９５１
９，９２９ ６，９６２ Ｘ＝８６７８ ｓ．ｄ．＝＝８３０６ Ｂ．１３％サポニン０．１雌添加後の １６６４
種の異なる部分の粘度 １７７１６１１７２ Ｘ；１６９ ｓ．ｄ．＝７ 表４から明らかなとおり、サポニンには略淡を効果的に
分解する作用があり、また全ての部分の粘度を事実上均
一にする。

以上本発明をその好ましい実施態様に関連して説明した
が、当業者が本明細書の記載から容易に想到できる種種
の変法は当然本発明の範囲内に含まれるものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 肺液試料を得てから病原体微生物の存在を分析する
   ことから成る気道中の病原性生物の存在を検出する方法
   において、 粘液溶解有効量の無毒性サポニンと前記肺
   液試料とを混ぜて前記肺液試料の粘度を事実上均一にし
   、こうして得られた試料を充分に混ぜて前記病原体微生
   物をその中に均一に分散させ、前記の試料を分析するこ
   とから成る、改良された前記の検出方法。 ２ 無毒性サポニンとして、植物から抽出し、そのサポ
   ニン抽出物の水溶液中におけるみかけの分子量が約６０
   ０よりも小さいサポニン抽出物の水溶液から成分を除去
   することによって無毒性にした無毒性サポニンを使う前
   項１に記載の方法。 ３ 前記無毒性サポニンと前記肺液試料との混合物の約
   ０．１〜約２０重量％の量で前記無毒性サポニンを前記
   肺液試料と混ぜる前項２に記載の方法。 ４ 前記無毒性サポニンと前記肺液試料との混合物の約
   ５〜約１０重量％の量で前記無毒性サポニンを前記肺液
   試料と混ぜる前項１に記載の方法。 ５ 水溶液中に含まれている前記無毒性サポニンを使う
   前項３に記載の方法。 ６ 病原体微生物に対して無毒の発泡抑制剤有効最少量
   をさらに含む前記無毒性サポニン水溶液を使う前項５に
   記載の方法。 ７ 前記サポニンで処理した後の前記試料の一部分を増
   殖培地に塗抹して前記試料を分析する前項６に記載の方
   法。 ８ 喀痰試料を得てから病原体微生物の存在を分析する
   ことから成る気道中の病原性生物の存在を検出する方法
   において、 粘液溶解有効量の無毒性サポニンと前記喀
   痰試料とを混ぜて前記試料の粘度を減成してから前記の
   試料を分析することから成る、改良された前記の検出方
   法。 ９ 無毒性サポニンとして、植物から抽出し、そのサポ
   ニン抽出物の水溶液中におけるみかけの分子量が約６０
   ０よりも小さいサポニン抽出物の水溶液から成分を除去
   することによって無毒性にした無毒性サポニンを使う前
   項８に記載の方法。 １０ 前記無毒性サポニンと前記喀痰試料との混合物の
   約０．１〜約２０重量％の量で前記無毒性サポニンを前
   記喀痰試料と混ぜる前項９に記載の方法。 １１ 前記無毒性サポニンと前記喀痰試料との混合物の
   約５〜約１０重量％の量で前記無毒性サポニンを前記喀
   痰試料と混ぜる前項８に記載の方法。 １２ 水溶液中に含まれている前記無毒性サポニンを使
   う前項９に記載の方法。 １３ 病原体微生物に対して無毒の発泡抑制剤有効最少
   量をさらに含む前記無毒性サポニン水溶液を使う前項１
   ２に記載の方法。 １４ 前記サポニンで処理した後の前記試料の一部分を
   増殖培地に塗抹して前記試料を分析する前項１３に記載
   の方法。