DE19700774A1

DE19700774A1 - Antiadhäsive Sulfatid-Mimetika

Info

Publication number: DE19700774A1
Application number: DE19700774A
Authority: DE
Inventors: Alexander Dr Toepfer; Gerhard Dr Kretzschmar
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1997-01-13
Filing date: 1997-01-13
Publication date: 1998-07-16
Also published as: WO1998030573A1

Description

Die Erfindung betrifft Mimetika der sogenannten Sulfatide (3-O-sulfatierte Galactosylceramide) bei denen das natürliche Ceramid durch eine einfache dialkylierte Einheit substituiert ist. Die Anknüpfung dieses Aglycons kann sowohl O-, S- oder C-glycosidisch erfolgen. Desweiteren können diese Mimetika statt einer, auch mehrere Sulfat- oder andere saure Gruppen enthalten. Die Erfindung betrifft außerdem die Herstellung dieser Verbindungen sowie deren Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln und Diagnostika.

Die Zirkulation von Blutzellen wie z. B. Leukozyten, Neutrophilen, Granulozyten und Monozyten ist auf molekularer Ebene ein vielstufiger, sehr komplexer Prozeß, der nur in Teilschritten bekannt ist (Review: T. A. Springer, Cell 76, 301-314, 1994).

Jüngste Forschungsergebnisse zeigten, daß die in der Immunüberwachung entscheidende Rezirkulation der Lymphozyten sowie die Lokalisierung von Neutrophilen und Monozyten an Entzündungsherden sehr ähnlichen molekularen Mechanismen gehorchen. So kommt es bei akuten und chronischen Entzündungsprozessen zur Adhäsion der Leukozyten an Endothelzellen und Auswanderung in den Entzündungsherd und in die sekundären lymphatischen Organe.

An diesem Vorgang sind zahlreiche spezifische Signalmoleküle wie z. B. Interleukine, Leukotriene und Tumornekrosefaktor (TNF), deren G-Protein gekoppelte Rezeptoren und insbesondere gewebespezifische Zelladhäsionsmoleküle beteiligt, die eine genau kontrollierte Erkennung der Immun- und Endothelzellen gewährleisten. Zu den wichtigsten hierbei beteiligten Adhäsionsmolekülen, die im folgenden als Rezeptoren bezeichnet werden sollen, gehören die Selektine (E-, P- und L-Selektine), Integrine und die Mitglieder der Immunglobulin-Superfamilie.

Die drei Selektinrezeptoren bestimmen die Anfangsphase der Leukozytenadhäsion. E-Selektin wird auf Endothelzellen einige Stunden nach der Stimulierung beispielsweise durch Interleukin-1 (1L-1β) oder Tumornekrosefaktor (TNF-α) exprimiert, während P-Selektin in Blutplättchen und Endothelzellen gespeichert wird und nach Stimulierung durch Thrombin, Peroxidradikale oder Substanz P u. a. auf den Zelloberflächen präsentiert wird. L-Selektin wird dauerhaft auf Leukozyten exprimiert, wird im Verlauf der Entzündung jedoch rasch wieder von den Leukozyten abgespalten.

Die in der Anfangsphase entzündlicher Prozesse durch Selektin-Rezeptoren vermittelte Adhäsion von Leukozyten an Endothelzellen ist eine natürliche und notwendige Immunantwort auf diverse Entzündungsreize und Verletzungen des vasculären Gewebes. Der Verlauf einer Reihe von akuten und chronischen Erkrankungen wird jedoch durch die übermäßige Adhäsion von Leukozyten und deren Infiltration in das betroffene Gewebe sowie durch die Schädigung gesunden Gewebes im Sinne einer Autoimmunreaktion ungünstig beeinflußt. Dazu zählen beispielsweise Rheuma, Reperfusionsverletzungen wie myokardiale Ischämie/Infarkt (MI), akute Lungenentzündung nach operativem Eingriff, traumatischer Schock und Schlaganfall, Psoriasis, Dermatitis, ARDS (Atemnotsyndrom bei Erwachsenen) sowie die nach chirurgischen Eingriffen (Beispiel Angioplastie und By-Pass Operationen) auftretende Restenose.

Der natürliche Ligand mit der Struktur des komplexen Oligosaccharids Sialyl Lewis- X (SLeX) wurde schon erfolgreich in Tierversuchen bei P-Selektin abhängigen Lungenverletzungen (M. S. Mulligan et al., Nature 1993, 364, 149) und bei myokardialen Reperfusionsverletzungen (M. Buerke et al., J. Clin. Invest. 1994, 93, 1140) verwendet. In ersten klinischen Prüfungen bei Myokarinfarkt mußten jedoch Dosen von mehreren Gramm dieses Wirkstoffes verabreicht werden, da derselbe nur eine sehr geringe Bioverfügbarkeit besitzt (Mitteilung der Firma Cytel Corp/La Jolla, CA., publiziert in Scrip No 2137, 14 Juni 1996, Seite 22). Diese hohe Wirkstoffdosis steht auch im Einklang mit der bekanntermaßen schwachen Affinität der natürlichen SLeX/A-Liganden zu den Selektin-Rezeptoren in statischen in vitro- Testsystemen: So inhibiert SLeX in allen bekannten in vitro-Testsystemen die Zelladhäsion an Selektinrezeptoren erst bei einer relativ hohen Konzentration im Bereich von IC₅₀ ca. 1 mM oder darüber (Jacob et al., Biochemistry 1995, 34, 1210).

Neben SLeX/A-Liganden inhibieren auch verschiedene anionische Polymere wie Heparin, Fucoidan und Dextransulfat die P-Selektin vermittelte Zelladhäsion (Skinner, M. P., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 164, 1373-1379, 1989 und J. Biol. Chem., 266, 5371-5374, 1991). Außerdem binden die sogenannten Sulfatide (3-O-sulfatierte Galactosylceramide), die von aktivierten Granulozyten produziert werden, an P-Selektin (Aruffo, A. et al., Cell 67, 35-44, 1991).

Fig. 1: Sulfatid

Ziel dieser Arbeiten ist die Bereitstellung wirksamerer Inhibitoren der Leukozytenadhäsion, die sich vom Sulfatid (Fig. 1) ableiten. Sulfatidanaloga mit Sulfat- oder Carboxymethylgruppen an verschiedenen Hydroxygruppen der Galactose oder Glucose und einem α- oder β-glycosidischen Ceramid sind bereits synthetisiert und biologisch untersucht worden (EP 671 406, EP 671 407 und AU 9537864-A; Bristol-Myers Squibb). Auch ein Mimetikum welches bis auf das Ceramidaglycon mit dem natürlichen Sulfatid identisch ist wurde bereits beschrieben (US 5,486,536; University of Michigan; ohne Daten). Die 3-O sulfatierte Galactose weist am anomeren Zentrum einen 2,2-Dialkylethylrest auf.

Der Nachteil dieser Sulfatidanaloga liegt in der aufwendigen Synthese des Aglycons, besonders im Falle des Ceramids.

Alle bisher beschriebenen Sulfatidanaloga haben ferner den Nachteil, daß diese Verbindungen eine glycosidische und damit säurelabile Bindung aufweisen.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Bereitstellung von Sulfatidmimetika, welche statt des Ceramids einen 1,2-dialkylierten Glycerinbaustein als Aglycon aufweisen und säurestabil sind. Diese sollten außerdem wesentlich einfacher und billiger herstellbar sein.

Die gestellte Aufgabe wird gelöst durch eine Verbindung der Formel 1

worin bedeuten
R¹, R² unabhängig voneinander -(CH₂)_n-CH₃ wobei
n eine ganze Zahl von 10 bis 30,
R³-R⁶ unabhängig voneinander OH, OSO₃H, OCH₂COOH, CH(COOH)₂, O(CH₂)₂CH(COOH)₂ oder nicht-toxische Salze der entsprechenden Säuren, mit der Maßgabe, daß mindestens ein Rest R³-R⁶ ungleich OH ist, wobei die Hydroxy-Grup pen mit Schutzgruppen wie beispielsweise Benzyl, Benzyliden oder Isopropyliden versehen sein können, und
X O, S, (CH₂)₂O oder CH₂O.

Nachfolgend sind Beispiele für Verbindungen mit den genannten, bevorzugten Eigenschaften angeführt, welche vorzugsweise mit den sauren Gruppen -OSO₃H, -OCH₂COOH, -CH(COOH)₂ und -O-(CH₂)₂CH(COOH)₂ substituiert sind.

Besonders bevorzugt bedeuten R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ und X Sauerstoff. Wahlweise bedeuten R³ und R⁴ oder R³ und R⁶ OSO₃H.

1. Eine Verbindung der Formel 1a, die sich dadurch auszeichnet, daß

X Sauerstoff,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ OSO₃H und

R⁵ und R⁶ OH bedeuten.
2. Eine Verbindung der Formel 1b, die sich dadurch auszeichnet, daß

X Sauerstoff,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ OSO₃H und

R⁵ und R⁶ OH-Benzyliden bedeuten.
3. Eine Verbindung der Formel 1c, die sich dadurch auszeichnet, daß

X Sauerstoff,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ OSO₃H und

R⁵ und R⁶ OH bedeuten.
4. Eine Verbindung der Formel 1d, die sich dadurch auszeichnet, daß

X Sauerstoff,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁶ OSO₃H und

R⁴ und R⁵ OH bedeuten.

Eine weitere bevorzugte Ausgestaltung der vorliegenden Erfindung ist eine Verbindung der Formel I, in welcher X CH₂O und R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ bedeuten:
5. Eine Verbindung der Formel 1e, die sich insbesondere dadurch auszeichnet, daß

X CH₂O,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ O-Benzolyl und

R⁵ und R⁶ OCH₂COOH bedeuten.
6. Wahlweise bedeuten R³ und R⁴ OH, wobei die übrigen Variablen die unter Nr. 5 genannten Bedeutungen haben.
7. Eine Verbindung, die sich dadurch auszeichnet, daß

X CH₂O,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³, R⁴ und R⁵ OH und

R⁶ CH(COOH)₂ bedeuten.
8. Wahlweise können R³, R⁴ und R⁵ O-Benzyl bedeuten, wobei die übrigen Variablen die unter Nr. 7 angegebenen Bedeutungen haben (Verbindung 1f).
Vorzugsweise bedeuten X Schwefel und R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ in Formel I.
9. Eine Verbindung der Formel 1g, die sich insbesondere dadurch auszeichnet, daß

X Schwefel,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ O(CH₂)₂CH(COOH)₂ und

R⁵ und R⁶ O-Benzyliden bedeuten.
10. Eine Verbindung, die sich dadurch auszeichnet, daß ferner

X Schwefel,

R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃

R³ und R⁴ O(CH₂)₂CH(COOH)₂ und

R⁵ und R⁶ OH bedeuten.

Die eingangs gestellte Aufgabe wird ferner gelöst durch ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel 1, welches sich dadurch auszeichnet, daß man einen peracetylierten Glycosyldonor, vorzugsweise ein peracetyliertes Galactosyltrichloracetimidat, vorzugsweise das Imidat 2a, mit einem Alkohol der Formel III,

oder einen Mercaptan der Formel V,

wobei die
Variablen R¹ und R² die genannten Bedeutungen haben, vorzugsweise mit den leicht erhältlichen Verbindungen 3 oder 5, zum entsprechenden O-Glycosid bzw. S-Glycosid umsetzt (beispielsweise Verbindungen 4 bzw. 6).

Nach Abspaltung der Acetylschutzgruppen wird ein Teil der freien Hydroxylgruppen entweder direkt oder nach entsprechender Schützung der übrigen Hydroxylgruppen mit den sauren Gruppen, vorzugsweise -OSO₃H, -OCH₂COOH, -CH(COOH)₂ oder -O-(CH₂)₂CH(COOH)₂, versehen, wonach gegebenenfalls die eingeführten Schutzgruppen wieder abgespalten werden.

Zur Herstellung der C-glycosidisch verknüpften Verbindungen (s. Nr. 5 bis 8) wird vorzugsweise ein 1-O-Acetyl-substituierter und im übrigen perbenzylierter Glycosyldonor, beispielsweise Verbindung 2b Fig. 3), mit Trimethylsilylcyanid umgesetzt, wonach man das anomere Cyanid, beispielsweise Verbindung 7 (Fig. 3), zu einem Methylester umsetzt (beispielsweise Verbindung 8 in Fig. 3), der zu einem C-1-Hydroxymethylglycosid (z. B. Verbindung 9 in Fig. 3) reduziert und mit einem zweikettigen Alkyldonor, beispielsweise Verbindung 10 (in Fig. 3), alkyliert wird. Nach Abspaltung der Benzylschutzgruppen (beispielsweise durch Hydrogenolyse) werden die freien Hydroxylgruppen mit den bevorzugten sauren Gruppen funktionalisiert.

Ausgehend von 2b läßt sich beispielsweise C-1-Hydroxymethyl-2,3,4,6-tetra-O- benzyl-β-D-galactopyranosid 9 herstellen, welches mit dem Bromid 10 (oder dem entsprechenden Tosylat oder Triflat) zum C-Glycosid 11 alkyliert wird.

Die Verbindungen 4, 6 und 11 werden zu den Verbindungen 12, 15 und 19 entschützt und zu den Verbindungen der Formel I derivatisiert.

Sollen statt der soeben vorgestellten β-Glycoside, die entsprechenden α-Glycoside synthetisiert werden, so wird zur Synthese der O- und S-Glycoside statt des peracetylierten Donors 2a, der entsprechende perbenzylierte Donor verwendet. Die verschiedenen Möglichkeiten zur Steuerung der anomeren Konfiguration bei Glycosylierungen sind hinreichend bekannt.

Auch bei der Synthese der C-Glycoside, beispielsweise über das anomere Cyanid 7 (Fig. 3), kann durch Veränderung der experimentellen Parameter - bei der Cyanideinführung - wie Lösungsmittel, Katalysator und Temperatur sowie der Wahl der Abgangsgruppe, die gewünschte anomere Konfiguration des Cyanids erhalten werden. Bei der anschließenden Behandlung des anomeren Cyanids mit methanolischer Natriummetanolatlösung ist zu beachten, daß aufgrund der CH-Aci dität der C-glycosidischen Cyanide und Carbonsäureester, beispielsweise der Verbindungen 7 und 8 (Fig. 3) bei zu hohem pH-Wert das a-Cyanid (z. B. 7α) zum β-Ester (z. B. 8β, Fig. 3) isomerisiert. Dieser Effekt, der bei der gezielten Synthese der β-C-Glycoside durchaus erwünscht ist, läßt sich bei der Synthese der α-C-Gly coside dadurch ausschließen, daß mit ausreichend verdünnter Methanolatlösung gearbeitet wird.

Die in den Abbildungen vorgestellten Entschützungsreaktionen wie Debenzylierung und Deacetylierung sowie die Einführung verschiedener Schutzgruppen (z. B. Benzyliden, Isopropyliden) und saurer Gruppen (z. B. Sulfat, Carboxymethyl, Malonyl) sind dem Fachmann hinreichend bekannt und bedürfen keiner besonderen Erläuterung.

Die Affinität der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I an Selektine kann anhand der nachfolgend beschriebenen Zelladhäsionsassays überprüft werden.

Primärassays zur Untersuchung der Wirkung der Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung auf die Zellanheftung an rekombinante, lösliche Selek tin-Fusionsproteine.

Um die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen auf die Interaktion zwischen den E- und P-Selektinen (alte Nomeklatur ELAM-1 bzw. GMP-140) mit ihren Liganden zu testen, wird ein Assay verwendet, der jeweils nur für eine dieser Interaktionen spezifisch ist. Die Liganden werden in ihrer natürlichen Form als Oberflächenstrukturen auf promyelozytischen HL60 Zellen angeboten. Da HL60 Zellen Liganden und Adhäsionsmoleküle unterschiedlichster Spezifität aufweisen, kann die gewünschte Spezifität des Assays nur über den Bindungspartner erbracht werden. Als Bindungspartner wurden gentechnisch hergestellte lösliche Fusionsproteine aus der jeweils extrazytoplasmatischen Domäne von E- bzw. P-Se lektin und der konstanten Region eines humanen Immunglobulins der Subklasse IgG1 verwendet.

Herstellung von L-Selektin-IgGl

Zur Herstellung von löslichem L-Selektin-IgG1 Fusionsprotein wurde das von Walz et al., 1990 publizierte genetische Konstrukt "ELAM-Rg" verwendet. Zur Expression wurde die Plasmid DNA in COS-7 Zellen (ATCC) mittels DEAE-Dex tran transfiziert (Molekularbiologische Methoden: siehe Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Seidman, J. G., Struhl, K. und Smith, J. A. 1990. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, New York). Sieben Tage nach der Transfection wird der Kulturüberstand gewonnen, durch Zentrifugation von Zellen und Zellfragmenten befreit und auf 25 mM Hepes pH 7,0, 0,3 mM PMSF, 0,02% Natriumazid gebracht und bei +4°C aufgehoben. (Walz, G., Aruffo, A., Kolanus, W., Bevilacqua, M. und Seed, B. 1990. Recognition by ELAM-1 of the sialyl-Lex determinant on myeloid and tumor cells. Science 250, 1132-1135.)

Herstellung von P-Selektin-IgG1

Zur Herstellung des löslichen P-Selektin-IgG1 Fusionsproteins wird das von Aruffo et al., 1991 publizierte genetische Konstrukt "CD62Rg" verwendet. Die weitere Vorgehensweise entspricht der unter A1 dargestellten Herstellung von L-Selektin- IgG1.

Aruffo, A., Kolanus, W., Walz, G., Fredman, P. und Seed, B. 1991. CD621- P-Selectin recognition of myeloid and tumor cell sulfatides. Cell 67, 35-44.

Herstellung von CD4-IgG1

Zur Herstellung des löslichen CD4-IgG1 Fusionsproteins wird das von Zettlemeissl et al., 1990 publizierte genetische Konstrukt "CD4:IgG1 hinge" verwendet. Die weitere Vorgehensweise entspricht der unter A1 dargestellten Herstellung von L-Selektin-IgG1. (Zettelmeissl, G., Gregersen, J.-P., Duport, J. M., Mehdi, S., Reiner, G. und Seed, B. 1990. Expression and characterization of human CD4: Immunoglobulin Fusion Proteins. DNA and Cell Biology 9, 347-353.)

Durchführung des HL60 Zelladhäsionsassays auf rekombinanten, löslichen Adhäsionsmolekülen

1. 96er Mikrotitertestplatten (Nunc Maxisorb) werden mit 100 µl eines in 50 mM Tris pH 9,5 verdünnten (1 + 100) Ziege anti human IgG Antikörpers (Sigma) 2 Std. bei Raumtemperatur inkubiert. Nach Entfernen der Antikörperlösung wird einmal mit PBS gewaschen.
2. 150 µl des Blockierungspuffers werden für 1 Std. bei Raumtemperatur in den Näpfchen belassen. Die Zusammensetzung des Blockierungspuffers ist:
0,1% Gelatine, 1% BSA, 5% Kalbserum, 0,2 mM PMSF, 0,02% Natriumazid. Nach Entfernen des Blockierungspuffers wird einmal mit PBS gewaschen.
3. In die Näpfchen werden je 100 µl Zellkulturüberstand von entsprechend transfektierten und exprimierenden COS-Zellen pipettiert. Die Inkubation erfolgt 2 Std. bei Raumtemperatur. Nach Entfernen des Zellkulturüberstandes wird einmal mit PBS gewaschen.
4. In die Näpfchen werden 20 µl Bindungspuffer gegeben. Der Bindungspuffer hat die Zusammensetzung: 50 mM Hepes, pH 7,5; 100 mM NaCl; 1 mg/ml BSA;
2 mM MgCl₂; 1 mM CaCl₂; 3 mM MnCl₂; 0,02% Natriumazid; 0,2 mM PMSF. Dazu werden 5 µl der Testsubstanz pipettiert, durch Schwenken der Platte vermischt und 10 Min. bei Raumtemperatur inkubiert.
5. 50 ml einer HL60 Zellkultur mit 200.000 Zellen/ml werden 4 Min. bei 350 g zentrifugiert. Das Pellet wird in 10 ml RPMI 1640 resuspendiert und die Zellen erneut zentrifugiert. Zur Markierung der Zellen werden 50 µg BCECF- AM (Molecular Probes) in 5 µl wasserfreiem DMSO aufgelöst; anschließend werden 1,5 ml RPMI 1640 auf die BCECF-AM/DMSO-Lösung gegeben. Mit dieser Lösung werden die Zellen resuspendiert und 30 Min. bei 37°C inkubiert. Nach zweiminütiger Zentrifugation bei 350 g wird das markierte Zellpellet in 11 ml Bindungspuffer resuspendiert und die resuspendierten Zellen in 100 µl Aliquots in die Mikrotiterplatten-Näpfchen verteilt. Die Platte wird 10 Min. bei Raumtemperatur stehen gelassen, um die Zellen auf den Boden der Testplatte sedimentieren zu lassen. Dabei haben die Zellen Gelegenheit an das beschichtete Plastik zu adhärieren.
6. Zum Abstoppen des Tests wird die Mikrotiterplatte im 45° Winkel gänzlich in den Stoppuffer getaucht (25 mM Tris, pH 7,5; 125 mM NaCl; 0,1% BSA; 2 mM MgCl₂; 1 mM CaCl₂; 3 mM MnCl₂; 0,02% Natriumazid). Durch Invertierung wird der Stoppuffer aus den Näpfchen entfernt und die Prozedur noch zweimal wiederholt.
7. Die Messung der in den Näpfchen festhaftenden, BCECF-AM-markierten Zellen erfolgt in einem Cytofluorimeter (Millipore), bei einer Empfindlichkeitseinstellung von 4, einer Anregungswellenlänge von 485/22 nm und einer Emissionswellenlänge von 530/25 nm.

Leukozyten-Adhäsion - Prüfung der Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen in vivo (Intravitalmikroskopie an der Ratte)

Bei entzündlichen Prozessen und anderen, die Zytokine aktivierenden Zuständen spielt die Gewebszerstörung durch einwandernde oder die Mikrozirkulation blockierende Leukozyten eine entscheidende Rolle. Die erste und für den weiteren Krankheitsprozeß entscheidende Phase ist die Aktivierung von Leukozyten innerhalb der Blutbahn, insbesondere im prä- und postkapillaren Bereich. Dabei kommt es, nachdem die Leukozyten den Axialstrom des Blutes verlassen haben, zu einem ersten Anheften der Leukozyten an der Gefäßinnenwand, d. h. am Gefäßendothel. Alle darauf folgenden Leukozyteneffekte, d. h. die aktive Durchwanderung durch die Gefäßwand und die anschließende orientierte Wanderung im Gewebe, sind Folgereaktionen (Harlan, J. M., Leukocyte-endothelial interaction, Blood 65, 513-525, 1985).

Diese rezeptorvermittelte Interaktion von Leukozyten und Endothelzellen wird als ein initiales Zeichen des Entzündungsprozesses angesehen. Neben den schon physiologisch exprimierten Adhäsionsmolekülen kommt es unter der Einwirkung von Entzündungsmediatoren (Leukotriene, PAF) und Zytokinen (TNF-alpha, Interleukinen) zur zeitlich gestuften, massiven Expression von Adhäsionsmolekülen auf den Zellen. Sie werden derzeit in drei Gruppen eingeteilt: 1. Immunglobulin- Gensuperfamilie, 2. Integrine und 3. Selektine. Während die Adhäsion zwischen Molekülen der Ig-Gensuperfamilie und den Protein-Protein-Bindungen abläuft, stehen bei der Kooperation zwischen Selektinen Lektin-Kohlehydrat-Bindungen im Vordergrund (Springer, T. A., Adhesion receptors of the immune system. Nature 346, 425-434, 1990; Huges, G., Cell adhesion molecules - the key to an universal panacea, Scrips Magazine 6, 30-33, 1993; Springer, T. A., Traffic signals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration; The multistep paradigm. Cell 76, 301-314, 1994).

Methode

Die induzierte Adhäsion von Leukozyten wird mit einer intravitalmikroskopischen Untersuchungstechnik im Mesenterium der Ratte quantifiziert (Atherton A. and Born G. V. R., Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphnuclear leukocytes to blood vessel walls. J. Physiol. 222, 447-474, 1972). Unter Inhalations-Äthernarkose wird eine Dauernarkose durch intramuskuläre Injektion von Urethan (1,25 mg/kg KG) eingeleitet. Nach Freipräparation von Gefäßen (V. femoralis zur Injektion von Substanzen und A. carotis zur Blutdruckmessung) werden Katheter in diese eingebunden. Danach wird das entsprechende transparente Gewebe (Mesenterium) nach den in der Literatur bekannten Standardmethoden freigelegt und auf dem Mikroskoptisch ausgelagert und mit 37°C warmen Paraffinöl überschichtet (Menger, M. D. and Lehr, H., A. Scope and perspetives of intravital microscopy-bridge over from in vitro to in vivo, Immunology Today 14, 519-522, 1993). Die Applikation der Testsubstanz erfolgt i. v. am Tier (10 mg/kg). Die experimentelle Erhöhung der Blutzell-Adhäsion wird durch systemische Verabreichung von Lipopolysaccharid (LPS, 15 mg/kg) 15 Minuten nach Applikation aus Testsubstanz durch Zytokin-Aktivierung ausgelöst (Foster S. J., Mc Cormick L. M., Ntqlosi B. A. and Campbell D., Production of TNF-alpha by LPS-stimulated murine, rat and human blood and its pharmacological modulation, Agents and Actions 38, C77-C79, 1993, 18. 01. 1995). Die dadurch verursachte erhöhte Adhäsion von Leukozyten am Endothel wird direkt vitalmikroskopisch oder mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen quantifiziert. Alle Meßvorgänge werden per Videokamera aufgenommen und auf einem Videorekorder gespeichert. Über einen Zeitraum von 60 Minuten wird alle 10 Minuten die Anzahl der rollenden Leukozyten (d. h. alle sichtbar rollenden Leukozyten, die langsamer als die strömenden Erythrozyten sind) und die Anzahl an haftenden Leukozyten am Endothel (Verweildauer länger als 5 Sekunden) erfaßt. Nach Beendigung des Versuches werden die narkotisierten Tiere schmerzfrei durch systemische Injektion von T61 exzitationsfrei eingeschläfert. Zur Auswertung werden die Ergebnisse jeweils von 8 behandelten mit 8 unbehandelten Tieren (Kontrollgruppe) verglichen (Angabe der Ergebnisse in Prozenten).

Reperfusionsmodell zur Untersuchung des Einflusses der Adhäsion von Neutrophilen im Verlauf der Ischämie/Reperfusion am offenen Kaninchen-Herzen:
Die Herzen werden bei konstantem Druck nach der Langendorff-Technik mit Nährlösung sowie mit/ohne Leukozyten bzw. Wirkstoff perfundiert. Danach wird eine Ischämie durch Unterbinden der linken Koronarartherie (30 min) hervorgerufen. Nach Reperfusion (30 min) wird die Leukozytenakkumulierung histologisch ausgewertet. Im Versuchsverlauf werden außerdem an 256 Elektroden Potentiale und Arrhythmien gemessen (Gesamtversuchsdauer ca. 90 min). Bei 6 von 7 unbehandelten mit Leukozyten perfundierten Herzen treten ausgeprägte Arrhythmien aufgrund der Leukozyteninfiltration auf, während die mit einem Wirkstoff (RGDS-Peptide, Chondroitinsulfat) behandelten Herzen verminderte Leukozyten Akkumulierung und Arrhythmien entwickeln. Die untersuchte Verbindung 3a war im Bereich von ca. 1 µM hochwirksam (starke Verminderung der Arrhythmien).

Die Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung sowie deren physiologisch verträglichen Salze eignen sich aufgrund ihrer wertvollen pharmakologischen Eigenschaften sehr gut zur Anwendung als Heilmittel bei Säugern, insbesondere dem Menschen.

Die vorliegende Erfindung betrifft daher ferner ein Arzneimittel enthaltend wenigstens eine Verbindung gemäß Formel I sowie deren Verwendung für die Herstellung eines Arzneimittels zur Therapie oder Prophylaxe von Krankheiten, welche mit einer übermäßigen, durch Selektinrezeptoren vermittelten Zelladhäsion in dem von der Krankheit betroffenen Gewebe einhergehen, beispielsweise Rheuma, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, wie Reperfusionsverletzungen, Ischämie oder Herzinfarkt.

Die Arzneimittel eignen sich im besonderen zur Behandlung von akuten und chronischen Entzündungen, die sich pathophysiologisch durch eine Störung der Zellzirkulation, beispielsweise von Lymphozyten, Monozyten und neutrophilen Granulozyten, kennzeichnen lassen. Hierzu zählen Autoimmunerkrankungen wie akute Polyarthritis, rheumatoide Arthritis und Insulin-abhängige Diabetes (Diabetes mellitus IDDM) akute und chronische Transplantatabstoßungen, Schocklunge (ARDS, adult respiratory distress syndrome), entzündliche und allergische Hauterkrankungen wie beispielsweise Psoriasis und Kontakt-Ekzeme, Herz-Kreislauf-Erkrankungen wie Myokardinfarkt, Reperfusionsverletzungen nach Thrombolyse, Angioplastie oder By-Pass-Operationen, septischer Schock und systemischer Schock. Eine weitere potentielle Indikation ist die Behandlung metastasierender Tumoren, denn Tumorzellen tragen Oberflächenantigene, die sowohl Sialyl-Lewis-X als auch Sialyl-Lewis-A-Strukturen als Erkennungsepitope besitzen. Darüberhinaus können diese Arzneimittel, die stabil im sauren Milieu des Magens sind, zur antiadhäsiven Therapie von Helicobacter pylori und verwandten Mikroorganismen ggf. auch in Kombination mit Antibiotika eingesetzt werden. Ferner ist mit Hilfe dieser Arzneimittel eine Therapie der cerebralen Form der Malaria denkbar.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden im allgemeinen intravenös, oral oder parenteral oder als Implantate verabreicht, aber auch eine rektale Anwendung ist prinzipiell möglich. Geeignete feste oder flüssige galenische Zubereitungsformen sind beispielsweise Granulate, Pulver, Tabletten, Dragees, (Mikro-)Kapseln, Zäpfchen, Sirupe, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole, Tropfen oder injizierbare Lösungen in Ampullenform sowie Präparate mit protrahierte Wirkstoff-Freigabe, bei deren Herstellung üblicherweise Trägerstoffe und Zusätze und/oder Hilfsmittel wie Spreng-, Binde-, Überzugs-, Quellungs-, Gleit- oder Schmiermittel, Geschmacksstoffe, Süßungsmittel oder Lösungsvermittler Verwendung finden. Als häufig verwendete Träger- oder Hilfsstoffe seien z. B. Magnesiumcarbonat, Titandioxid, Laktose, Mannit und andere Zucker, Talkum, Milcheiweiß, Gelatine, Stärke, Vitamine, Cellulose und ihre Derivate, tierische und pflanzliche Öle, Poly ethylenglykole und Lösungsmittel, wie etwa steriles Wasser, Alkohole, Glycerin und mehrwertige Alkohole genannt.

Vorzugsweise werden die pharmazeutischen Präparate in Dosierungseinheiten hergestellt und verabreicht. Feste Dosierungseinheiten sind Tabletten, Kapseln und Suppositorien.

Für die Behandlung eines Patienten sind je nach Wirksamkeit der Verbindung, Art der Applikation, Art und Schwere der Erkrankung, Alter und Körpergewicht des Patienten, unterschiedliche Tagesdosen notwendig. Unter Umständen können jedoch auch höhere oder niedrigere Tagesdosen angebracht sein. Die Verabreichung der Tagesdosis kann sowohl durch Einmalgabe in Form einer einzelnen Dosierungseinheit oder aber mehrerer kleiner Dosierungseinheiten als auch durch Mehrfachgabe unterteilten Dosen in bestimmten Intervallen erfolgen. Die zu verabreichende Tagesdosis kann außerdem von der Anzahl der während des Krankheitsverlaufs exprimierten Rezeptoren abhängig sein. Es ist vorstellbar, daß im Anfangsstadium der Krankheit nur wenige Rezeptoren auf der Zelloberfläche exprimiert werden und demzufolge die zu verabreichende Tagesdosis geringer ist als bei stark erkrankten Patienten.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel werden dadurch hergestellt, daß man eine Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung mit üblichen Träger- sowie gegebenenfalls Zusatz- und/oder Hilfsstoffen in die bzw. eine geeignete Darreichungsform bringt.

Ferner ist die Verwendung von Verbindungen gemäß der Formel I für die Herstellung eines Mittels zur Diagnose einer Krankheit, welche mit einer übermäßigen, durch Selektinrezeptoren vermittelten Zelladhäsion in dem von der Krankheit betroffenen Gewebe einhergeht, denkbar.

Beispiele für die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen.

Beispiel 1 a) Synthese von 3-hydroxy-1,2-di-hexadecyloxy-propan (3)

Eine Mischung aus NaH (3,55 g, 148,2 mmol), (R)-3-Benzyloxy-1,2-propandiol (9 g, 49,4 mmol) und Dimethylformamid (675 ml) wird 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird 1-Bromhexadecan (42,2 ml, 138,32 mmol) zugetropft. Nach 18 h wird Eiswasser zugegeben, dreimal mit Diethylether extrahiert und die vereinigten organischen Extrakte dreimal mit Wasser gewaschen. Es wird über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und chromatografiert (Hexan Hexan/Essigester 50 : 1 → 20 : 1- 10 : 1). Man erhält (R)-3-Benzyloxy-1,2-di-hexadecyloxy-propan (30,8 g; 99%). Diese Verbindung wird in Methanol/Dioxan/Essig-säure (2 : 3 : 0,01; 255 ml) gelöst, mit Pd/C (10%; 5 g) versetzt und 18 h in einer Wasserstoffatmosphäre unter Normaldruck hydriert. Es wird filtriert, eingeengt und der Rückstand chromatografiert (Hexan/Essigester 6 : 1 → 5 : 1). Man erhält Verbindung 3 (21,38 g, 81%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 0.88 (2t, 6H, 2CH₃), 1.28 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.58 (m, 4H, 2 (CH)₂), 2.19 (dd₁ 1H, OH), 3.40-3.77 (m, 9H, 4 O(CH)₂, O(CH)).

b) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-2,3,4,6-tetra- O-acetyl-β-D-galactopyrnnosid (4)

Zu einer Mischung aus O-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-D-galactopyranosyl)- trichloracetimidat (3 g, 6,1 mmol) und Verbindung 3 (4,1 g, 7,6 mmol) in Dichlormethan (30 ml) gibt man eine 1 M Trimethylsilyltrifluormethan sulfonat-Lösung (0,61 ml). Nach 30 min wird mit Natriumhydrogencarbont (0,5 g) neutralisiert, filtriert, eingeengt und der Rückstand chromatografiert (Hexan/Essigester 10 : 1 → 7 : 1 → 5 : 1). Man erhält Verbindung 4 (4,14 g, 78%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 0.88 (2t, 6H, 2CH₃), 1.26 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.55 (m, 4H, 2 (CH)₂), 1.98, 2.05, 2.05, 2.15 (4s, 12H, 4 OAc), 3.36-3.66 (m, 8H), 3.88 (m, 2H), 4.16 (m, 2H), 4.52 (d,1H, 1-H), 5.02 (dd, 1H, 3-H), 5.19 (dd, 1H, 2-H), 5.38 (dd, 1H, 4-H).

c) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-β-D-galactopyranosid (12)

Verbindung 4 (3,3 g, 3,8 mmol) wird in Methanol gelöst und mit einer 1 M Natriummethanolatlösung (1,2 ml) versetzt. Nach 2 h wir mit 1 M Essigsäure neutralisiert und eingeengt. Verbindung 12 wird ohne Reinigung direkt in die nächste Stufe eingesetzt.
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ = 0.87 (2t, 6H, 2CH₃), 1.25 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.50 (m, 4H, 2 (CH)₂), 4.13 (d,1H, 1-H).

d) Synthese von 2, 3-di-hexadecyloxy-propyl-O-4,6-O-benzyliden-δ-D- galactopyranosid (13)

Eine Mischung aus Verbindung 12 (1,5 g, 2,1 mmol), Acetonitril (250 ml), Benzaldehyddimethyacetal (2,36 ml, 15,75 mmol) und p-Toluolsulfonsäure (300 mg) wird 5 h bei 50°C gerührt. Man läßt auf Raumtemperatur abkühlen, neutralisiert mit Kaliumcarbonat (500 mg), filtriert und engt das Filtrat im Vakuum ein. Der Rückstand wird chromatografiert (Toluol/Aceton 4 : 1). Man erhält Verbindung 13 (1,14 g, 68%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 0.88 (2t, 6H, 2CH₃), 1.25 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.55 (m, 4H, 2 (CH)₂), 4.33 (d,1H, 1-H), 5.55 (s, 1H, CHPh), 7.35-7.50 (m, 5H, Ph).

e) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-4,6-O-benzyliden-2,3-di-O- oxysulfonyl-β-D-galactopyranosid (1b)

Eine Mischung aus Verbindung 13 (0,32 g, 0,40 mmol) und SO₃-Pyridin-Komlex (0,64 g, 4,0 mmol) in Pyridin (10 ml) wird 3 h bei Raumtemperatur gerührt. Zur Aufarbeitung gibt man Wasser (5 ml) und Natriumhydrogencarbonat (0,5 g) zu. Nach beendeter Gasentwicklung wird eingeengt, der Rückstand in Methanol (5 ml) aufgenommen, filtriert und eingeengt. Nach Chromatografie (Dichlormethan/Methanol 7 : 1) erhält man Verbindung 1b (0,28 g, 74%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃1CD₃OD): δ = 0.89 (2t, 6H, 2CH₃), 1.28 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.57 (m, 4H, 2 (CH)₂), 3.96 (dd, 1H), 4.14, 4.26 (2d, 2H), 5.62 (s, 1H, CHPh), 7.35, 7.45 (2m, 5 H, Ph).

f) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-4,6-O-benzyliden-2,3-di-O- oxysulfonyl-β-D-galactopyranosid (1a)

Verbindung 1b (157 mg, 0,165 mmol) wird in Essigsäure/Methanol 1 : 1 (10 ml) gelöst und mit Palladiumkohle (10%, 200 mg) versetzt. Die Mischung wird in einer Wasserstoffatmosphäre 18 h gerührt. Zur Aufarbeitung werden Wasser (20 ml) und Methanol (20 ml) zugegeben, auf 40-50°C erwärmt und filtriert. Der Filter wird mit warmem Methanol nachgespült. Das Filtrat wird eingeengt, der Rückstand mit warmem Methanol (20 ml) aufgenommen, filtriert und bei 0°C auskristallisiert. Man erhält Verbindung 1a (108 mg, 76%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃/CD₃OD): δ = 0.88 (2t, 6H, 2CH₃), 1.26 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.53 (m, 4H, 2 (CH)₂).
Massenspektrum (TSQ 700, Finnigan/MAT), Electrospray ionization (ESI): (M-H)⁻ = 862.

Beispiel 2 a) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-3,4-O-isopropyliden-(3-D- galactopyranosid (14)

Eine Mischung aus Verbindung 12 (2,03 g, 2,89 mmol), Dimethoxypropan (120 ml) und p-Toluolsulfonsäure (150 mg) wird 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Zur selektiven Abspaltung der gemischten Acetale werden Wasser (75 ml) und p- Toluolsulfonsäure (150 mg) zugegeben. Nach 2 h werden Essigsäureethylester (1200 ml) und gesättigte Natriumhydrogencarbonatlösung (400 ml) zugegeben und 30 min gerührt. Die organische Phase wird abgetrennt und mit Natriumhydrogencarbonatlösung (3 × 150 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Flash-Chromatografie (ToluollEssigsäureethylester 2 : 1) liefert Verbindung 14 (1,85 g, 86%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 0.88 (2t, 6H, 2CH₃), 1.26 (m, 52H, 26 (CH)₂),1.28, 1.34(2 s, 6 H, isoprop.), 1.56 (m, 4H, 2 (CH)₂), 2.45 (bd, 1H, OH), 3.01 (bs, 1H, OH), 4.23 (d,1H, 1-H)

b) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-3,4-O-isopropyliden-2,6-di-O- oxysulfonyl-δ-D-galactopyranosid (1d)

Verbindung 1d wird wie bei 1b beschrieben aus Verbindung 14 hergestellt.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃1CD₃OD): δ = 0.89 (2t, 6H, 2CH₃), 1.28 (m, 52H, 26 (CH)₂),1.33, 1.51(2 s, 6H, isoprop.), 1.57 (m, 4H, 2 (CH)₂), 3.88 (dd, 1H), 4.32 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 4.51 (dd, 1H), 4.74 (d,1H, 1-H).

c) Synthese von 2,3-di-hexadecyloxy-propyl-O-2,6-di-O-oxysulfonyl-β-D- galactopyranosid (1c)

Eine Lösung aus Vebindung 1d (1,4 g, 1,55 mmol) wird in einer Mischung aus Trifluoressigsäure/wasser (1 : 1, 84 ml) 4 h bei 40°C gerührt. Die Mischung wird eingeengt und mittels Flash-Chromatografie (Dichlormethan/Methanol 20 : 1 → 10 : 1 → 5 : 1) gereinigt. Man erhält Verbindung 1c (1,18 g, 88%).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃/CD₃OD): δ = 0.89 (2t, 6H, 2CH₃), 1.28 (m, 52H, 26 (CH)₂), 1.57 (m, 4H, 2 (CH)₂).

Beispiel 3 a) Synthese von 3-Mercapto-1,2-di-hexadecyloxy-propan (5)

Die primäre Hydroxy-Gruppe von Verbindung 3 wird mit Trifluormetansulfonsäureanhydrid in Pyridin umgesetzt und das so erhaltene Triflat mit Kaliumthioacetat umgesetzt. Die S-Acetyl-Gruppe wird mit Natriummethanolat in Methanol abgespalten. Man erhält Verbindung 5.

b) Synthese von 2,3-Di-hexadecyloxy-propyl-S-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D- galactothiopyranosid (6)

Verbindung 6 wird aus 2a und 5 analog zu Verbindung 4 hergestellt.

c) Synthese von 2,3-Di-hexadecyloxy-propyl-S-β-D-galactothiopyranosid (15)

Verbindung 15 wird aus 6 analog zu Verbindung 12 hergestellt.

d) Synthese von 2,3-Di-hexadecyloxy-propyl-S-4,6-O-benzyliden-β-D- galactothiopyranosid (16)

Verbindung 16 wird aus 15 analog zu Verbindung 13 hergestellt.

e) Synthese von 2,3-Di-hexadecyloxy-propyl-S-2,3-di-O-2-allyloxy-ethyl-4,6-O- benzyliden-β-D-galactothiopyrnnosid (18)

Verbindung 18 wird durch Alkylierung von 16 mit 17 in Dimetylformamid mit Natriumhydrid hergestellt.

f) Synthese von 2,3-Di-hexadecyloxy-propyl-S-4,6-O-benzyliden-2,3-di-O-2- malonyl-ethyl-β-D-galactothiopyranosid (1g)

Verbindung 1g wird durch Deallylierung, Tosylierung, Malonylierung und alkalische Verseifung aus Verbindung 18 hergestellt.

Beispiel 4 a) Synthese von (2,3,4,6-Tetra-O-benzyl-D-galactopyranosyl)-cyanid(7)

Verbindung 7 wird durch Umsetzung von 2b mit Trimethylsilylcyanid unter der Katalyse von Bortrifluorid-Etherat in Acetonitril hergestellt.

b) Synthese von C-1-Hydroxymethyl-2,3,4,6-tetra-O-benzyl-(3-D- galactopyranosid (9)

Cyanid 7 wird mit Natriummethanolatlösung behandelt und anschließend mit 1M Salzsäure angesäuert. Man erhält den Methylester 8. Dieser wird mit etherischer Lithiumaluminiumhydrid-Lösung bei 0°C zu Verbindung 9 reduziert.

c) Synthese von C-1-2,3-Di-hexadecyloxy-propyloxymethyl-2,3,4,6-tetra-O- benzyl-β-D-galactopyranosid (11)

C-Glycosid 11 wird durch Alkylierung von 9 mit 10 erhalten. Verbindung 10 wird durch Bromierung von Verbindung 3 erhalten.

d) Synthese von C-1-2,3-Di-hexadecyloxy-propyloxymethyl-(3-D- galactopyranosid (19)

Verbindung 19 wird durch Hydrogenolyse von 11 mit 10%iger Palladiumkohle in einer Wasserstoffatmosphäre unter Normaldruck erhalten.

e) Synthese von C-1-2,3-Di-hexadecyloxy-propyloxymethyl-2,3,4-tri-O-benzyl-β- D-galactopyranosid (20)

Verbindung 20 wird durch selektive 6-O-Tritylierung von 19, Benzylierung der verbliebenen freien OH-Gruppen und anschließende Abspaltung der 6-O- Tritylgruppe erhalten.

f) Synthese von C-1-2,3-Di-hexadecyloxy-propyloxymethyl-6-bromo-2,3,4-tri-O- benzyl-β-D-galactopyranosid (21)

Verbindung 21 wird durch Bromierung von Verbindung 20 hergestellt.

g) Synthese von C-1-2,3-Di-hexadecyloxy-propyloxymethyl-6-malonyl-2,3,4-tri- O-benzyl-β-D-galactopyranosid (1f)

Verbindung 1f wird durch Malonylierung von Verbindung 21 mit Malonsäuredimethylester und anschließende alkalische Verseifung hergestellt.

Beispiel 15 Hemmung der Zelladhäsion in vitro

IC₅₀-Werte für E-Selektin [mM] und für P-Selektin [mM]:

Claims

1. Eine Verbindung der Formel I
worin bedeuten
R¹, R² unabhängig voneinander -(CH₂)_n-CH₃
n eine ganze Zahl von 10 bis 30,
R³-R⁶ unabhängig voneinander OH, OSO₃H, OCH₂COOH, CH(COOH)_2,O(CH₂)₂CH(COOH)₂ oder nicht toxische Salze der entsprechenden Säuren, mit der Maßgabe, daß mindestens ein Rest R³-R⁶ ungleich OH ist, wobei die Hydroxy-Gruppen mit Schutzgruppen wie beispielsweise Benzyl, Benzyliden oder Isopropyliden versehen sein können, und
X O, S, (CH₂)₂O oder CH₂O.

2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
X Sauerstoff und R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ bedeuten.

3. Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁴ OSO₃H bedeuten.

4. Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
R⁵ und R⁶ OH bedeuten.

5. Verbindung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
R⁵und R⁶ O-Benzyliden bedeuten.

6. Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁶ OSO₃H bedeuten.

7. Verbindung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß
R⁴ und R⁵ OH bedeuten.

8. Verbindung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁶ O-Isopropyliden bedeuten.

9. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
X CH₂O und
R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ bedeuten.

10. Verbindung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁴ O-Benzoyl und
R⁵ und R⁶ OCH₂COOH bedeuten.

11. Verbindung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁴ OH und
R⁵ und R⁶ OCH₂COOH bedeuten.

12. Verbindung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß
R³, R⁴ und R⁵Benzyl und
R⁶ CH(COOH)₂ bedeuten.

13. Verbindung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß
R³, R⁴ und R⁵OH und
R⁶ CH(COOH)₂bedeuten.

14. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
X Schwefel und
R¹ und R² -(CH₂)₁₅-CH₃ bedeuten.

15. Verbindung nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁴ O(CH₂)₂CH(COOH)₂ und
R⁵ und R⁶ O-Benzyliden bedeuten.

16. Verbindung nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß
R³ und R⁴ O(CH₂)₂CH(COOH)₂ und
R⁵ und R⁶ OH bedeuten.

17. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8 und 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß man einen peracetylierten Glycosyldonor mit dem Alkohol der Formel III,
oder dem Mercaptan der Formel V,
glycosyliert, wobei R¹ und R² die in Anspruch 1 genannten Bedeutungen haben, die Acetylgruppen abspaltet und einen Teil der freien Hydroxylgruppen entweder direkt mit sauren Gruppen oder aber mit Schutzgruppen versieht und die übrigen freien Hydroxylgruppen (oder einen Teil davon) mit sauren Gruppen versieht, wonach gegebenenfalls die eingeführten Schutzgruppen wieder abgespalten werden.

18. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 und 9 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß man einen perbenzylierten Glycosyldonor mit Trimethylsilylcyanid umsetzt, das anomere Cyanid anschließend zum Methylester umsetzt und diesen zum C-1-Hy droxymethylglycosid reduziert, wonach die primäre Hydroxylgruppe mit einem zweikettigen Alkyldonor alkyliert wird und nach Abspaltung der Benzylschutzgruppen die freien Hydroxylgruppen zu sauren Gruppen funktionalisiert werden.

19. Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 16 zur Verwendung als Arzneimittel.

20. Arzneimittel enthaltend wenigstens eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 16.

21. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 16 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Therapie oder Prophylaxe einer Krankheit, welche mit einer übermäßigen, durch Selektinrezeptoren vermittelten Zelladhäsion in dem von der Krankheit betroffenen Gewebe einhergeht.

22. Verwendung nach Anspruch 21 dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit eine Herz-Kreislauf-Erkrankung ist.

23. Verwendung nach Anspruch 21 dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit eine Autoimmunerkrankung wie rheumatoide Arthritis oder Osteoarthritis ist.

24. Verwendung nach Anspruch 21 dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit eine Tumorerkrankung wie Leukämie, Lungenkarzinom, Adenokarzinom oder Mammakarzinom ist.

25. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 16 für die Herstellung eines Mittels zur Diagnose einer Krankheit, welche mit einer übermäßigen, durch Selektinrezeptoren vermittelten Zelladhäsion in dem von der Krankheit betroffenen Gewebe einhergeht.