DE1617444C2 - Verfahren zur Gewinnung von Hellebrigenin - Google Patents
Verfahren zur Gewinnung von HellebrigeninInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur Gewinnung von Hellebrigenin aus Hellebrin oder
Desglucohellebrin.
Hellebrigenin ist das Aglykon des zu den Bufadienoliden gehörenden Herzglykosids Hellebrin. Durch Abspaltung
von einem Mol Glucose entsteht hieraus das Desglucohellebrin, durch weitere Abspaltung von einem
Mol Rhamnose das Aglykon Hellebrigenin. Hellebrigenin besitzt ebenso wie das Desglucohellebrin eine starke
Herzwirkung. Besonders günstig ist der rasche Wirkungseintritt und eine hohe perorale Resorptionsquote.
Es besteht daher ein therapeutisches Interesse an der Verwendung von Hellebrigenin als Arzneimittel.
Schwierigkeiten bei den herkömmlichen Herstellungsverfahren für das Hellebrigenin stehen jedoch
einer allgemeineren Anwendung entgegen. Die Gewinnung von Hellebrigenin ist bis jetzt nach den beiden
folgenden Verfahren möglich.
Nach dem älteren Verfahren von J. Schmutz
(Pharm. Acta HeIv., 22, S. 373 [1947]) wird Hellebrin
zunächst durch Strophanthobiase in Desglucohellebrin und Glucose gespalten und das so erhaltene Desglucohellebrin
dann mit konzentrierter Salzsäure in Aceton zu Hellebrigenin und Rhamnose hydrolysiert. Die
Ausbeute beträgt nach diesem Verfahren jedoch nicht mehr als 5%, bezogen auf den Hellebringehalt der
Droge.
Das zweite Verfahren (deutsche Auslegeschrift 11 76 794) geht ebenfalls von Hellebrin bzw. hellebrinhaltigen
Drogenextrakten aus. Die Spaltung erfolgt hier in einer Stufe durch Salzsäure in Acton. Trotzdem wird
nur eine Hellebrigeninausbeute von 10 bis 15%, bezogen auf den Hellebringehalt der Droge, erreicht.
Demgegenüber wird erfindungsgemäß ein Verfahren zur Gewinnung von Hellebrigenin aus Hellebrin oder
Desglucohellebrin bzw. hellebrin- oder desglucohellebrinhaltigen Drogen bzw. Extrakten vorgeschlagen,
nach dem die Überführung in das Hellebrigenin dadurch gelingt, daß die Drogen bzw. die Extrakte mit Cellulase
behandelt werden.
Dieses Herstellungsverfahren ist überraschend, da es bekannt ist, daß z. B. die mit den Herzglykosiden
vergesellschafteten Enzyme stets nur den endständigen Zucker, nämlich Glucose, abspalten, in keinem Falle
jedoch die Bindung zwischen dem Aglykon und dem Desoxyzucker angreifen (A. S t ο 11, J R e η ζ, Enzymologia,
7, S. 362 [1939]). So führt auch bei dem bekannten Verfahren zur Gewinnung von Hellebrigenin
die Anwendung des Enzyms Strophanthobiase nur zu Desglucohellebrin und gemäß der deutschen Auslegeschrift
12 21 764 spaltet bei dem genuinen Herzglykosid Erysimosid, bei dem die Zuckerkette ebenfalls aus einem
Desoxyzucker und Glucose besteht, Cellulase wiederum nur den äußersten Glucoserest unter Bildung des
Desglucoerysimosids (Helveticosid) ab. Bei Einwirkung von Erysimum-Enzym (Chemicke Zvesti, XVI, 3,
Bratislava, 1962) oder kommerzieller j9-Glucosidase (eigene Versuche der Anmelderin) auf Hellebrin
entsteht ebenfalls immer nur das Desglucohellebrin.
Die Spaltung des Hellebrins oder Desglucohellebrins bzw. von hellebrin- oder desglucohellebrinhaltigen Drogen bzw. Extrakten mittels Cellulase ermöglicht nun in einfacher und zeitsparender Weise eine praktisch verlustfreie Gewinnung des Hellebrigenins. Insbesondere wird die bei der Salzsäurebehandlung zwangläufige Bildung von 5,6-Anhydrohellebrigenin vermieden. Die Ausbeute an Hellebrigenin beträgt im Durchschnitt 60 bis 70% der Theorie. Die Umsetzung ist z. B. bei einer Temperatur von 32°C in 24 bis 48 Stunden nahezu beendet.
Die Spaltung des Hellebrins oder Desglucohellebrins bzw. von hellebrin- oder desglucohellebrinhaltigen Drogen bzw. Extrakten mittels Cellulase ermöglicht nun in einfacher und zeitsparender Weise eine praktisch verlustfreie Gewinnung des Hellebrigenins. Insbesondere wird die bei der Salzsäurebehandlung zwangläufige Bildung von 5,6-Anhydrohellebrigenin vermieden. Die Ausbeute an Hellebrigenin beträgt im Durchschnitt 60 bis 70% der Theorie. Die Umsetzung ist z. B. bei einer Temperatur von 32°C in 24 bis 48 Stunden nahezu beendet.
Wichtig für die Umsetzung ist das Vorliegen einer ausreichenden Fermentaktivität. Das Vorliegen einer
ausreichenden Fermentaktivität wird zweckmäßig durch den Beginn bzw. Fortgang der Spaltung an Hand
von Proben dünnschichtchromatographisch ermittelt, da die für die Spaltung des Hellebrins zur Verfugung
stehende Enzymkonzentration durch andere, ebenfalls cellulaseverbrauchende und je nach Art der Droge in
wechselndem Gehalt vorliegende Bestandteile Schwankungen unterworfen ist. Falls daher bei Zusatz einer
bestimmten Menge Cellulase keine Spaltung einsetzt oder eine solche nicht in befriedigender Weise verläuft,
ist einfach die Menge an Cellulase zu erhöhen, bis ein normaler Verlauf der Spaltung beobachtet wird.
Bei einer reinen Lösung von 1 g Hellebrin erweist sich z.B. eine Cellulasemenge zwischen 1 und 10g als
günstig. Als Cellulase kann z. B. eine kommerzielle Cellulase aus Aspergillus niger mit gutem Erfolg
verwendet werden.
Die Enzymbehandlung wird zweckmäßig bei einer Temperatur zwischen 20 und 50°, vorzugsweise
zwischen 30 und 40°, vorgenommen. Das Ende der Spaltung wird dabei am besten dünnschichtchromatographisch
ermittelt.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren kann entweder reines Hellebrin bzw. Desglucohellebrin oder ein in
üblicher Weise vorgereinigter Hellebrin- oder desglucohellebrinhaltiger
Extrakt oder auch eine in üblicher Weise aufgearbeitete hellebrin- bzw. desglucohellebrinhaltige
Droge eingesetzt werden. Die Spaltung kann dabei in Lösung, in Suspension oder in Form einer
Maische durchgeführt werden.
Die Weiterverarbeitung des Reaktionsproduktes erfolgt in bekannter Weise, z. B. kann sich eine
chromatographische Reinigung, z. B. unter Verwendung von Kieselgel, anschließen. Die Reinigung kann jedoch
auch nach anderen Methoden, beispielsweise unter Verwendung von Ionenaustauschern, erfolgen.
1 g Hellebrin wird in 1000 ml Wasser gelöst, mit 2 ml
Toluol und 5 g Cellulase (aus Aspergillus niger) versetzt und 24 Stunden bei 32° inkubiert. Das Reaktionsgemisch
wird erschöpfend mit Chloroform/Methanol (99 + 1) extrahiert. Die Chloroformphase wird über
Natriumsulfat getrocknet und eingedampft.
Der Rückstand wird auf einer Kieselgelsäule chromatographiert und mit Chloroform/Methanol (9+1)
eluiert. Die Hellebrigeninfraktionen werden entsprechend dem dünnschichtchromatographischen Befund
zusammengefaßt und eingedampft.
Ausbeute: 400 mg (69% der Theorie).
Ausbeute: 400 mg (69% der Theorie).
Claims (1)
- Patentanspruch:Verfahren zur Gewinnung von Hellebrigenin aus Hellebrin oder Desglucohellebrin bzw. hellebrin- oder desglucohellebrinhaltigen Drogen bzw. Extrakten, dadurch gekennzeichnet, daß man die Drogen bzw. die Extrakte mit Cellulase behandelt.
Priority Applications (7)
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Applications Claiming Priority (1)
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Publications (1)
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