DE112007000079T5

DE112007000079T5 - Neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate und ein Verfahren zu deren Herstellung

Info

Publication number: DE112007000079T5
Application number: DE112007000079T
Authority: DE
Inventors: Kamal Ahmed; Ramu Rondla; Bhasker Ramesh Khanna Gollapalli
Original assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Current assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Priority date: 2006-02-13
Filing date: 2007-02-12
Publication date: 2008-12-24
Anticipated expiration: 2027-02-13
Also published as: WO2007093873A1; US20070259858A1; GB2453402B; GB2453402A; JP2009526778A; GB0807702D0; DE112007000079B4; US7465724B2

Abstract

Neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der allgemeinen Formel V,

wobei n = 3; (va) oder 4; (vb), oder 5; (vc).

Description

Gebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate und ein Verfahren zu deren Herstellung. Insbesondere betrifft sie ein Verfahren zur Herstellung neuartiger Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Hybride als potentielle Antitumormittel.
Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die Synthese von Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Hybriden, verbunden bzw. verknüpft durch eine Alkandiyldioxy-Brücke mit Linkem unterschiedlicher Längen als mögliche Antikrebsmittel. Die Strukturformel der neuartigen Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4jbenzodiazepinanthrachinon Hybride (Va-c) ist wie folgt,
Formel Va-c wobei n = 3, 4, 5.
Hintergrund der Erfindung
Die Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine sind eine Familie DNA interaktiver Antitumorantibiotika, welche von den Streptomyces Arten abgeleitet sind. Beispiel natürlich auftretender Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine umfassen Anthramycin, Tomaymycin, Sibiromycin and DC-81. Diese Verbindungen zeigen ihre biologische Aktivität durch die kovalente Bindung über ihren N10-011 Imin-/Carbinolamin-Teil an die C2-Amin Position eines Guanidinrestes in der kleinen Rinne der DNA, was zu der Bevorzugung der Pu-G-Pu Sequenzen führt. (Kunimoto, S.; Masuda, T.; Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T und Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665.; Kohn, K. W. and Speous, C. L. J. Mol. Biol., 1970, 91, 551.; Hurley, L. H.; Gairpla, C. und Zmijewski, M. Biochem. Biophy. Acta., 1977, 475, 521.; Kaplan, D. J. und Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572.) Die Moleküle haben eine rechtgewundene Drehung, wenn sie von dem C-Ring in Richtung des A-Ringes betrachtet werden. Dies ermöglicht, dass die PBD die Krümmung der B-Form DNA spiegeln und Isohelical Kontakt mit den Wänden und dem Boden der kleinen Rinne beibehalten.
In den letzten Jahren hat sich ein zunehmendes Interesse an der Entwicklung neuer Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin Hybride gezeigt. Viele PBD Konjugate wurden aufgrund ihrer Antikrebs Aktivität synthetisiert und untersucht (Thurston, D. E.; Morris, S. J.; Hartley, J. A. Chem. Commun. 1996, 563.; Damayanthi, Y.; Reddy, B. S. P.; Lown, J. W. J. Org. Chem. 1999, 64, 290.; Kamal, A.; Reddy, B. S. N.; Reddy, G. S. K.; Ramesh, G Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1933, Kamal, A.; Reddy, B. S. N.; Reddy indische Patentanmeldung Nr. 209/DEL/2000 ). In jüngster Zeit wurden C-8 verbundene PBD Dimere mit C2/C2 Exo-Unsaturation entwickelt und synthetisiert (Gregson, S. J.; Howard, P. W.; Hartley, J. A.; Brooks, N. A.; Adam, L. J.; Jenkins, T. C.; Kelland, L, R. und Thurston, D. E., J. Med. Chem. 2001, 44, 737). Des weiteren wurden nicht vernetzte gemischte Imin-Amin PBD Dimere synthetisiert, welche eine deutliche DNA Bindefähigkeit und potentielle Antitumor Aktivität zeigen (Kamal, A.; Ramesh, G.; Laxman, N.; Ramulu, P.; Srinivas, O.; Neelima, K.; Kondapi, A. K.; Srinu, V. B.; Nagarajaram, H. M. J. Med. Chem. 2002, 45, 4679).
Während früherer Studien in diesem Labor wurde Antrachinon über seine Aminofunktionalität mit der C8 Position des A-Ringes der PBD verbunden, welche eine vielversprechende Antikrebsaktivität zeigten (Kamal, A.; Ramu, R.; Khanna, G. B. R.; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 4907, Kamal, A.; Ramu, R.; Khanna, G. B. R. internationale Patentanmeldung Nr. PCT/IN04/00212 , US Patentanmeldung Nr. 11/024,240).
In der vorliegenden Erfindung wurden die beiden PBD Einheiten an die 1,4-Positionen des Anthrachinons über ihre a-c8 Positionen über die Alkandiyldioxy-Brücke mit Linkern unterschiedlicher Länge verbunden, um neuartige Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine bereitzustellen, welche als Antikrebsmittel geeignet sind. Sie stellt auch ein Verfahren zur Herstellung der neuartigen Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine bereit, welche als Antitumormittel geeignet sind.
PBD Hybrid
Imin-Amid PBD Dimere
Gegenstand der Erfindung
Der Gegenstand der Erfindung ist es neuartige Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine anthrachinon Konjugate bereitzustellen.
Noch ein anderer Gegenstand der Erfindung ist es neuartige Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine anthrachinon Konjugate bereitzustellen, welche als Antitumormittel gegen menschliche Krebszelllinien geeignet sind.
Noch ein anderer Gegenstand der Erfindung ist es ein Verfahren zur Herstellung der neuartigen Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine anthrachinon Konjugate bereitzustellen.
Zusammenfassung der Erfindung
Demzufolge stellt die vorliegende Erfindung ein neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat der allgemeinen Formel V zu Verfügung,
wobei n = 3; (va) oder 4; (vb), oder 5; (vc).
In einer Ausführungsform der Erfindung wird das neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat der allgemeinen Formel V, durch die Gruppe der folgenden Verbindungen dargestellt:
1,4-Bis-{3-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]propyloxy}anthracen-9,10-dion (Va);
1,4-Bis-{4-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]butyloxy)anthracen-9,10-dion (Vb) und
1,4-Bis-{5-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (Vc).
In noch einer anderen Ausführungsform sind die Strukturformeln der charakteristischen Verbindungen wie folgt:
Formel Va
Formel Vb
Formel Vc
In noch einer anderen Ausführungsform weist das neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon eine In-Vitro Antikrebs/Antitumor Aktivität gegen menschlichen Krebszelllinien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzelllinien, auf.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Aktivität gegen HoP62 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 0,1 bis 1,4 μM.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen SiHa für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 0,8 bis 9,0 μM.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen MCF7 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 0,6 bis 0,9 μM,.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen Colo205 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 1,0 bis 10,0 μM.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen PC3 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 1,0 bis 1,4 μM.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen ZR-75-1 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 0,5 bis 1,5 μM.
In noch einer anderen Ausführungsform liegt die Konzentration der Verbindung Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon (Va-c), welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen A2780 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden, in dem Bereich von 0,6 bis 10,0 μM.
Die vorliegende Erfindung stellt des weiteren eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, umfassend neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate, deren Derivate, analoge Salze und Mischungen dieser, wahlweise mit pharmazeutisch geeigneten Trägern, Hilfsmitteln und Zusatzstoffen.
In noch einer anderen Ausführungsform der Erfindung weisen die in der pharmazeutische Zusammensetzung verwendeten neuartigen Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate, eine allgemeine Formel V auf:
wobei n = 3; (Va) oder 4; (Vb), oder 5; (Vc).
In noch einer anderen Ausführungsform weist die pharmazeutische Zusammensetzung eine In-Vitro Antikrebs/AntitumorAktivität gegenüber menschlichen Krebszelllinien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzell-Linien, auf.
Die vorliegende Erfindung stellt des weiteren ein Verfahren zur Herstellung der neuartigen Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der Formel V zur Verfügung, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfasst:

a. Reagieren von 1,4-Dihydroxy anthrachinon der Formel I mit Dibromoalkanen in einem aprotischen, Wasser mischbaren, organischen Lösungsmittel in Anwesenheit einer milden anorganischen Base, bei einer Refluxtemperatur, über eine Dauer von ungefähr 24 Stunden, gefolgt von dem Entfernen der anorganischen Base durch Filtrieren und Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Verdampfen unter reduziertem Druck um das 1,4-Bis-(3-Bromoalkoxy)-anthracen-9,10-dion der Formel IIa-c zu erhalten,
wherein n = 3; (IIa) oder 4; (IIb), oder 5; (IIc)
b. Reagieren von 1,4-Bis-(3-Bromoalkoxy)anthracen-9,10-dion der Formel IIa-c mit (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyd diethylthioacetal in einem trockenen organischen Lösungsmittel, in Anwesenheit einer milden anorganischen Base, bei einer Refluxtemperatur, für eine Dauer von ungefähr 24 Stunden, gefolgt von dem Entfernen der anorganischen Base durch Filtrieren und Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Verdampfen bei reduziertem Druck, um das gewünschte Produkt 1,4-Bis-{n-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy}anthracen-9,10-dion der Formel IIIa-c zu erhalten,
wobei n = 3; (IIIa) oder 4; (IIIb), oder 5; (IIIc)
c. Reduzieren der Verbindung 1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehydediethylthioacetal]alkyloxy}-anthracen-9,10-dion der Formel III unter Verwendung von Zinnchlorid, in einem alkoholischen Lösungsmittel unter Reflux über eine Dauer von 4 Stunden, Abkühlen der resultierenden Mischung auf eine Temperatur von 20 bis 25°C, und Entfernen des überschüssigen Alkohols durch Verdampfen und Einstellen des Rückstandes mit einer anorganischen Base auf einen pH-Wert von ungefähr 8, gefolgt von der Extraktion mit Ethylacetat und Waschen der kombinierten organischen Phase mit Salzlake und Verdampfen des Lösungsmittels um die gewünschte Verbindung Aminothioacetal 1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy}-anthracen-9,10-dion der Formel IVa-c zu erhalten,
Formel IV wobei n = 3; (IVa) oder 4; (IVb), oder 5; (IVc)
d. Reagieren von Aminothioacetalaminothioacetal 1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy}anthracen-9,10-dion der Formel IVa-c mit Quecksilber(II)-Chlorid in einer Mischung aus Wasser und Acetonitril, in Anwesenheit von und Calciumcarbonat, unter Rühren für eine Dauer von 8–10 Stunden, bei einer Temperatur in dem Bereich von 25–30°C und Verdünnen mit Ethylacetat, gefolgt von Filtrieren und Extrahieren des organischen Überstandes mit Ethylacetat, Waschen der resultierenden organischen Phase mit Natriumbicarbonat und Brine bzw. Salzlake und Verdampfen der organischen Schicht, gefolgt von einer Reinigung durch ein bekanntes Verfahren um das gewünschte Produkt der Formel Va-c zu erhalten.

In einer Ausführungsform der Erfindung ist die milde anorganische Base, welche in den Schritten (a) und (b) verwendet wird, Kaliumbicarbonat.
In noch einer anderen Ausführungsform der Erfindung wird das erhaltene neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat der allgemeinen Formel V durch die Gruppe der folgenden Verbindungen dargestellt:
1,4-Bis-{3-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one]propyloxy}anthracene-9,10-dione (Va); 1,4-Bis-{4-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]butyloxy)anthracen-9,10-dion (Vb) und 1,4-Bis-{5-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (Vc).
In noch einer anderen Ausführungsform wird das Bromoalkan, welches in Schritt (a) verwendet wird, aus der Gruppe gewählt, bestehend aus 1,3 Dibromopropan, 1,3 Dibromobutan, and 1,3 Dibromopentan.
In noch einer anderen Ausführungsform wird das aprotische organische Lösungsmittel, welches in Schritt (a) verwendet wird, aus Aceton und Acetonitril gewählt.
In noch einer anderen Ausführungsform wird die Verbindung der Formel IIa-c, welche in Schritt (b) verwendet wird, aus der Gruppe gewählt, bestehend aus 1,4-Bis-(3-Bromo propyloxy)-anthracen-9,10-dion, 1,4-bis-(3-bromobutyloxy)-anthracen-9,10-dion and 1,4-bis-(3-bromopentyloxy)-anthracen-9,10-dion.
In noch einer anderen Ausführungsform wird das das organische Lösungsmittel, welches in Schritt (b) verwendet wird, aus Acetonitril, Aceton und DMF ausgewählt.
In noch einer anderen Ausführungsform wird die Verbindung der Formel IIIa-c, welche in Schritt (c) verwendet wird, aus der Gruppe ausgewählt, bestehend aus 1,4-Bis-{3-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]propyloxy)anthracen-9,10-dion (IIIa), 1,4-Bis-{4-[(2S)-N-(4-25Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]butyloxy}-anthracen-9,10-dion (IIIb) and 1,4-Bis-{5-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-nitro-benzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]pentyloxy}-anthracen-9,10-dion (IIIc).
In noch einer anderen Ausführungsform wird der in Schritt (c) verwendete Alkohol aus Methanol und Ethanol gewählt.
In noch einer anderen Ausführungsform wird die Verbindung der Formel IVa-c, welche in Schritt (d) verwendet wird, gewählt aus 1,4-Bis-{3-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]propyloxy}-anthracen-9,10-dion (IVa), 1,4-bis-{4-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-amino-5 benzoyl)pyrrolidin-2- carboxaldehyddiethylthioacetal}butyloxy}-anthracen-9,10-dion (IVb), and 1,4-bis-{5-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)-pyrrolidin-2-carboxaldehyd diethyl thioacetal]pentyloxy}-anthracen-9,10-dion (IVc).
In noch einer anderen Ausführungsform weisen die neuartigen Bis-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der Formel V eine In-Vitro Antikrebs/AntitumorAktivität gegen menschlichen Krebszell-Linien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzell-Linien, auf.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung stellt ein Verfahren zur Herstellung von Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepineanthrachinon-anthrachinon der Formel V der Zeichnung zur Verfügung, welche der Beschreibung beigefügt ist,
wobei n = 3, 4 or 5.
Die Erfindung schließt die Reaktion von 1,4-Dihydroxyanthrachinon der Formel I mit Dibromoalkanen in einem aprotischen, in Wasser mischbaren, organischen Lösungsmittel in Anwesenheit einer milden organischen Base, bei einer Refluxtemperatur, für eine Dauer von 24 Stunden ein, Isolieren von 1,4-Bis-(n-Bromo Alkyloxy)-anthracen-9,10-dion der Formel II und Reagieren der Verbindung der Formel IIa-c mit (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyd diethylthioacetal in Anwesenheit milder anorganischer Basen, Isolieren der Verbindung der Formel III, Reduzieren dieser mit SnCl₂·2H₂O in Anwesenheit eines organischen Lösungsmittels bei einer Refluxtemperatur, Reagieren der obigen Aminoverbindung der Formel IV mit bekannten Entschützungsmitteln (deprotecting agents) auf herkömmliche Weise, um das neuartige Pyrrol[2,1-c][1,4]benzodiazepin der Formel V zu erhalten, wobei 'n' wie oben angegeben ist.
Der Vorläufer, (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyd diethylthioacetal wurde gemäß der Verfahren der Literatur hergestellt (Thurston, D. E.; Murthy, V. S.; Langley, D. R.; Jones, G, B. Synthesis, 1990, 81).
Die charakteristischen Verbindungen der Formel V der vorliegenden Erfindung sind unten angeführt:

1) 1,4-Bis-{3-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]propyloxy}anthracen-9,10-dion (Va);
2) 1,4-Bis-{4-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]butyloxy)anthracen-9,10-dion (Vb)
3) 1,4-Bis-{5-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (Vc).

Diese neuen Analoge der Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin Hybride haben eine erfolgversprechende Antikrebs Aktivität bei ausgewählten menschlichen Krebszelllinien gezeigt. Die synthetisierten Moleküle sind von immenser biologischer Bedeutung mit einer potentiellen Sequenz selektiven DNA Bindeeigenschaft. Dies führte zu dem Aufbau und der Synthese von neuen Artverwandten bzw. Kongener, wie in dem Schema dargestellt, umfassend:

1. Die Ether-Verbindung an der C-8 Position der DC-81 Zwischenverbindungen mit dem Antrachinonteil.
2. Refluxieren der Reaktionsmischung für 24–48 Stunden.
3. Synthese von C-8 verbundenen PBD Hybriden.
4. Reinigung durch Säulenchromatographie unter Verwendung unterschiedlicher Lösungsmittel, wie Ethylacetat, Hexan, Dichloromethan und Methanol.

Die folgenden Beispiele sind zur Erläuterung angeführt und sollen daher den Umfang der vorliegenden Erfindung nicht beschränken.
Beispiel 1
Zu einer Lösung aus 1,4 Dihydroxy anthrachinon (480 mg, 2 mmol) in Aceton (30 ml) wurden wasserfreies Kaliumcarbonat (1,1 g, 8 mmol) and 1,3 Dibromopropan (1,21 g, 6 mmol) zugegeben und die Mischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Der Fortschritt der Reaktion wurde durch TLC überwacht. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde Kaliumcarbonat durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, um das Rohprodukt zu erhalten. Dieses wurde durch Säulenchromatographie (30% EtOAc-Hexan) weiter gereinigt, um die Verbindung als einen gelben Feststoff (791 mg, 82%) bereitzustellen.
¹H NMR (CDCl₃): δ 2,40-2,52 (m, 4H), 3,85-3,91 (t, 4H, J = 6,51 Hz), 4,22-4,28 (t, 4H, J = 5,53 Hz), 7,34 (s, 2H), 7,71-7,77 (m, 2H), 8,15-8,18 (m, 2H).
FABMS: 482 (M⁺).
Zu einer Lösung aus 1,4-Bis-(3-Bromo propyloxy)-anthracen-9,10-dion (IIa) (482 mg, 1 mmol) in trockenem Acetonitril (30 ml) wurde wasserfreies K₂CO₃ (829 mg, 6 mmol) und (2S)-N-[4-hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethyl thioacetat (801 mg, 2 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde K₂CO₃ durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie (80% EtOAc-Hexan) gereinigt, um die Verbindung IIIa (807 mg, 72%) bereitzustellen.
¹H NMR (CDCl₃): δ 1,24-1,40 (m, 12H), 1.92-2,15 (m, 8H), 2,62-2,82 (m, 8H), 3,12-3,25 (m, 4H), 3,92 (s, 6H), 4,05-4,32 (m, 8H), 4,60-4,72 (m, 2H), 4,82 (d, 2H, J = 3.66 Hz), 6,75 (s, 2H), 7,24 (s, 2H), 7,61-7,74 (m, 4H), 8.02-8.18 (m, 2H).
FABMS: 1121 (M⁺).
Die Verbindung IIIa (1,121 g, 1 mmol), aufgelöst in Methanol (40 ml) und zugegebenem SnCl₂·H₂O (2,256 g, 10 mmol), wurde für 4 Stunden refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde gekühlt und das Methanol wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde vorsichtig mit gesättigter NaHCO₃ Lösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und anschließend mit Ethylacetat (2 × 30 ml) extrahiert. Die kombinierte organische Phase wurde mit Brine bzw. Salzlake (15 ml) gewaschen, über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet und unter Vakuum verdampft, um das Aminodiethylthioacetal IVa als ein gelbes Öl (895 mg, 82%) bereitzustellen und direkt in dem nächsten Schritt zu verwenden.
Eine Lösung aus Aminothioacetal 33a (1.19 g, 1 mmol), HgCl₂ (1.19 mg, 4,4 mmol) and CaCO₃ (480 mg, 4,8 mmol) in Acetonitril-Wasser (4:1) wurde langsam bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, bis die TLC das vollständige Verschwinden des Ausgangsmaterials anzeigte. Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (30 ml) verdünnt und durch ein Celite gefiltert. Die klare gelbe organische überstehende Flüssigkeit wurde mit Ethylacetat (2 × 20 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem NaHCO₃ (20 ml), Salzlake (20 ml) gewaschen und die kombinierte organische Phase wurde über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Die organische Phase wurde unter Vakuum verdampft und das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie (15% MeOH-EtOAc) gereinigt, um die Verbindung Va als einen gelben Feststoff (493 mg, 51%) bereitzustellen
¹H NMR (CDCl₃): δ 1,96-2,05 (m, 4H), 2,20-2,50 (m, 8H), 3,55-3,85 (m, 6H), 3,92 (s, 6H), 4,20-4,32 (m, 4H), 4,42-4,52 (m, 4H), 6,85 (s, 2H), 7,22 (s, 2H), 7,40 (s, 2H), 7,52 (d, 2H, J = 4.39 Hz), 7,65-7,71 (m, 2H), 8,02-8,15 (m, 2H).
FABMS: 968 (M⁺+1).
Beispiel 2
Zu einer Lösung aus 1,4-Dihydroxy anthrachinon (480 mg, 2 mmol) in Aceton (30 ml) wurden wasserfreies Kaliumcarbonat (1,1 g, 8 mmol) und 1,3 Dibromobutan (1,29 g, 6 mmol) zugegeben und die Mischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Der Fortschritt der Reaktion wurde mit TLC überwacht. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde Kaliumcarbonat durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, um das Rohprodukt zu erhalten. Dieses wurde weiter mittels Säulenchromatographie (30% EtOAc-Hexan) gereinigt, um die Verbindung IIb als einen gelben Feststoff (826 mg, 81%) bereitzustellen.
¹H NMR (CDCl₃, 200 MHz) 1,25-1,40 (m, 6H), 1,72-2,42 (m, 6H), 2,70-2,8 (m, 4H), 3,15-3,30 (m, 2H), 3,60 (t, 2H, J = 6,20 Hz), 3,95 (s, 3H), 4,20 (t, 2H, J = 4,96 Hz), 4,60-4,75 (m, 1H), 4,82 (d, 1H, J = 4,33 Hz), 6,78 (s, 1H), 7,68 (s, 1H).
Zu einer Lösung aus 1,4-Bis-(3-Bromobutyloxy)-anthracen-9,10-dion (IIb) (510 mg, 1 mmol) in trocknem Acetonitril (30 ml) wurden wasserfreies K₂CO₃ (829 mg, 6 mmol) and (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal (810 mg, 2 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde K₂CO₃ durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie (80% EtOAc-Hexan) gereinigt, um die Verbindung IIIb (805 mg, 70%) bereitzustellen.
¹H NMR(CDCl3): δ 1,25-1,40 (m, 12H), 2,0-2,32 (m, 16H), 2,62-2,80 (m, 8H), 3,12-3,25 (m, 4H), 3,92 (s, 6H), 4,08-4,40 (m, 8H), 4,60-4,71 (m, 2H), 4,82 (d, 2H, J = 3,62 Hz), 6,77 (s, 2H), 7,23 (s, 2H), 7,62-7,78 (m, 4H), 8,02-8,18 (m, 2H),
FABMS: 1150[M+1]⁺
Die Verbindung IIIb (1,15 g, 1 mmol), aufgelöst in Methanol (40 ml) und zugegebenen SnCl₂·2H₂O (2,256 g, 10 mmol) wurde für 4 Stunden refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde gekühlt und das Methanol unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde vorsichtig mit gesättigter NaHCO₃ Lösung auf einen pH Wert von 8 eingestellt und anschließend mit Ethylacetat (2 × 30 ml) extrahiert. Die kombinierte organische Phase wurde mit Salzlake (15 ml) gewaschen, über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet und unter Vakuum verdampft, um das Aminodiethylthioacetal IVb als ein gelbes Öl (895 mg, 80%) bereitzustellen und direkt in dem nächsten Schritt zu verwenden.
Eine Lösung aus Aminothioacetal IVb (1,12 mg, 1 mmol), HgCl₂ (1,19 mg, 4,4 mmol) und CaCO₃ (480 mg, 4,8 mmol) in Acetonitril-Wasser (4:1) wurde langsam bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, bis die TLC das vollständige Verschwinden des Ausgangsmaterials anzeigte. Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (30 ml) verdünnt und durch ein Celite gefiltert. Die klare gelbe überstehende Flüssigkeit wurde mit Ethylacetat (2 × 20 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem NaHCO3 (20 ml), Salzlake (20 ml) gewaschen und die kombinierte organische Phase wurde über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Die organische Schicht wurde unter Vakuum verdampft und das rohe Produkt wurde mittels Säulenchromatographie (15% MeOH-EtOAc) gereinigt, um die Verbindung Vb als einen gelben Feststoff (517 mg, 52%) bereitzustellen.
¹H NMR (CDCl₃): δ 1,96-2,35 (m, 16H), 3,50-3,84 (m, 6H), 3,92 (s, 6H), 4,12-4,38 (m, 8H), 6,82 (s, 2H), 7,23 (s, 2H), 7,42 (s, 2H), 7,56 (d, 2H, J = 4,39 Hz), 7,62-7,72 (m, 2H), 8,02-8,18 (m, 2H).
FABMS: 996[M+1]⁺
Beispiel 3
Zu einer Lösung aus 1,4-Dihydroxy anthrachinon (480 mg, 2 mmol) in Aceton (30 ml) wurden wasserfreies Kaliumcarbonat (1,1 g, 8 mmol) and 1,3 Dibromopentan (1,38 mg, 6 mmol) zugegeben und die Mischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Der Fortschritt der Reaktion wurde durch TLC angezeigt. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde Kaliumarbonat durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, um das Rohprodukt zu erhalten. Dieses wurde weiter durch Säulenchromatographie (30% EtOAc-Hexan) gereinigt, um die Verbindung IIc als einen gelben Feststoff bereitzustellen (904 mg, 84%).
¹H NMR (CDCls): δ 1,75-2,07 (m, 12H), 3,49 (t, 4H, J = 6,59 Hz), 4,08 (t, 4H, J = 6,13 Hz), 7,25 (s, 2H), 7,69-7,75 (m, 2H), 8,13-8,20 (m, 2H).
FABMS: 538 [M]⁺
Zu einer Lösung aus 1,4-Bis-(3-Bromo pentyloxy)-anthracen-9,10-dion (IIc) (538 mg, 1 mmol) in trockenem Acetonitril (30 ml) wurden wasserfreies K₂CO₃ (829 mg, 6 mmol) and (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2carboxaldehyddiethylthioacetal (801 mg, 2 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde für 24 Stunden refluxiert. Nach der Vervollständigung der Reaktion wurde K2CO3 durch Filtrieren entfernt und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck verdampft, das Rohprodukt wurde mittels Säulenchromatographie (80% EtOAc-Hexan) gereinigt, um die Verbindung IIc (824 mg, 70%) bereitzustellen.
¹H NMR (CDCl₃): δ 1,23-1,42 (m, 12H), 1,83-2,18 (m, 20H), 2,65-2,85 (m, 8H), 3,12-3,28 (m, 4H), 3,93 (s, 6H), 4,05-4,20 (m, 8H), 4,60-4,71 (m, 2H), 4,83 (d, 2H, J = 3,66 Hz), 6,77 (s, 2H), 7,24 (s, 2H), 7,60-7,73 (m, 4H), 8,02-8,18 (m, 2H).
FABMS: 1178[M+1]⁺
Die Verbindung IIIc (1.18 g, 1 mmol), aufgelöst in Methanol (40 ml) und zugegebenem SnCl₂·2H₂O (2,256 g, 10 mmol) wurde für 4 Stunden refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde gekühlt und das Methanol wurde unter Vakuum verdampft. Der Rückstand wurde sorgfältig mit gesättigter NaHCO₃ Lösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und anschließend mit Ethylacetat (2 × 30 ml) extrahiert. Die kombinierte organische Phase wurde mit Salzlake (15 ml) gewaschen, über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet und unter Vakuum verdampft, um das Aminodiethylthioacetal IVc ein gelbes Öl (963 mg, 84%) bereitzustellen und direkt in dem nächsten Schritt zu verwenden.
Eine Lösung aus Aminothioacetal IVc (1,15 mg, 1 mmol), HgCl₂ (1,19 mg, 4.4 mmol) und CaCO₃ (480 mg, 4,8 mmol) in Acetonitril-Wasser (4:1) wurde langsam bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, bis die TLC das vollständige Verschwinden des Ausgangsmaterials anzeigte. Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (30 ml) verdünnt und durch ein Celite filtriert. Die klare gelbe überstehende Flüssigkeit wurde mit Ethylacetat (2 × 20 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit gesättigtem NaHCO₃ (20 ml), Salzlake (20 ml) gewaschen und die kombinierte organische Phase wurde über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet. Die organische Schicht wurde unter Vakuum verdampft und das Rohprodukt wurde mittels Säulenchromatographie (15% MeOH-EtOAc) gereinigt, um die Verbindung Vc als einen gelben Feststoff (522 mg, 51%) bereitzustellen.
¹H NMR(CDCl₃): δ 1,95-2,32 (m, 20H), 3,53-3,82 (m, 6H), 3,92 (s, 6H), 4,07-4,13 (m, 8H), 6,76 (s, 2H), 7,23 (s, 2H), 7,44 (s, 2H), 7,58 (d, 2H, J = 4,40 Hz), 7,65-7,69 (m, 2H), 8,02-8,16 (m, 2H).
FABMS: 1024[M+1]⁺
Biologische Aktivität
In Vitro Zytotoxizität gegen menschliche Krebszelllinien:
Zytotoxizität: Verbindungen Va-c wurden bezüglich der primären Antikrebs Aktivität in ausgewählten menschlichen Krebszelllinien untersucht. Die Zytotoxizitätwerte einiger charakteristischer Verbindungen sind in Tabelle 1 dargestellt. Für jede Verbindung wurden die Dosis-Wirkungs-Kurven gegen jede Zelllinie bei einem Minimum von 5 Konzentrationen mit 10-facher Verdünnung gemessen. Ein Protokoll von 48 Stunden kontinuierlicher Arzneimittel- bzw. Wirkstoffaussetzung wurde verwendet und ein Sulforhodamin B (SRB) Proteinversuch wurde verwendet, um Lebensfähigkeit oder Wachstum der Zelle zu bestimmen. Die Konzentration, die eine Hemmung von 50% Zellwachstum im Vergleich zu der Kontrolle bewirkte, wurde berechnet. Tabelle 1: In Vitro Zytotoxizität der Verbindungen Va-c

Verbindung IC50^a μM

Hop62 SiHa MCF7 Colo205 PC3 ZR-75-1 A2780

Va < 1.0 0,8 0,6 < 1,0 0,6 0,5 0,6

Vb - 9,0 9,0 10 7,0 - 10,0

Vc 1,4 0,8 1,2 < 1,0 1,0 1,5 0,6

^aDosis der Verbindung, welche notwendig ist, um das Zellwachstum um 50% im Vergleich mit den unbehandelten Kontrollzellen zu hemmen Der Vergleich der Werte in Tabelle 1 zeigt die Bedeutung der Alkan-Spacer. Der 3 Kohlenstoff-Spacer der Verbindung Va verleiht eine geeignete Passung in der kleinen Rinne der Doppelhelix DNA und zeigt eine etwas höhere Aktivität in dieser Reihe der Verbindungen.

Zusammenfassung
Die vorliegende Erfindung stellt neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepinanthrachinon Konjugate der allgemeinen Formel V zur Verfügung, welche als potentielle Antitumormittel gegen menschliche Krebszelllinien verwendbar sind. Die vorliegende Erfindung stellt des weiteren ein Verfahren zur Herstellung der neuartigen Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der allgemeinen Formel V zur Verfügung.
Formel V wobei n = 3, 4, oder 5.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

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Zitierte Nicht-Patentliteratur

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Claims

Neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der allgemeinen Formel V,
wobei n = 3; (va) oder 4; (vb), oder 5; (vc).
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat der allgemeinen Formel V nach Anspruch 1, dargestellt durch die Gruppe der folgenden Verbindungen: 1,4-Bis-{3-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]propyloxy}anthracen-9,10-dion (Va); 1,4-Bis-{4-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]butyloxy)anthracen-9,10-dion (Vb) und 1,4-Bis-{5-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (Vc).
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat nach Anspruch 2, wobei die Strukturformeln der charakteristischen Verbindungen wie folgt sind:
Formel Va
Formel Vb
Formel Vc
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon wie in dem Anspruch beansprucht, welches eine In-Vitro Antikrebs/Antitumor Aktivität gegen menschliche Krebszelllinien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzelllinien, aufweist.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Aktivität gegen HoP62 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 0,1 bis 1,4 μM, liegt.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen SiHa für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 0,8 bis 9,0 μM, liegt.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen MCF7 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 0,6 bis 0,9 μM, liegt.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen Colo205 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 1,0 bis 10,0 μM, liegt.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen PC3 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 1,0 bis 1,4 μM, liegt.
Neuarties Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen ZR-75-1 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 0,5 bis 1,5 μM, liegt.
Neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon nach Anspruch 4, wobei die Konzentration der Verbindung, welche für die In-Vitro Antitumor Aktivität gegen A2780 für IC50 verwendet wird, für eine Aussetzungsdauer von wenigstens 48 Stunden in dem Bereich von 0,6 bis 10,0 μM, liegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung umfassend neuartiges Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate, deren Derivate, analoge Salze und Mischungen dieser, wahlweise mit pharmazeutisch geeigneten Trägern, Hilfsmitteln und Zusatzstoffen.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 12, wobei die verwendeten neuartigen Bis-Pyrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate, durch eine allgemeine Formel V dargestellt sind:
wobei n = 3; (Va) oder 4; (Vb), oder 5; (Vc).
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 12, welche eine In-Vitro Antikrebs/AntitumorAktivität gegenüber menschlichen Krebszelllinien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzell-Linien, aufweist.
Verfahren zur Herstellung der neuartigen Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepinanthrachinon Konjugate der Formel V, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfasst: a. Reagieren von 1,4-Dihydroxyanthrachinon der Formel I mit Dibromoalkanen in einem aprotischen, Wasser mischbaren, organischen Lösungsmittel in Anwesenheit einer milden anorganischen Base, bei einer Refluxtemperatur, über eine Dauer von ungefähr 24 Stunden, gefolgt von dem Entfernen der anorganischen Base durch Filtrieren und Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Verdampfen unter reduziertem Druck um das 1,4-Bis-(3-Bromoalkoxy)-anthracen-9,10-dion der Formel IIa-c zu erhalten,
wherein n = 3; (IIa) oder 4; (IIb), oder 5; (IIc) b. Reagieren von 1,4-Bis-(3-Bromoalkoxy)anthracen-9,10-dion der Formel IIa-c mit (2S)-N-[4-Hydroxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl]pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal in einem trockenen organischen Lösungsmittel, in Anwesenheit einer milden anorganischen Base, bei einer Refluxtemperatur, für eine Dauer von ungefähr 24 Stunden, gefolgt von der Entfernen der anorganischen Base durch Filtrieren und Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Verdampfung bei reduziertem Druck, um das gewünschte Produkt 1,4-Bis-{n-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy)anthracen-9,10-dion der Formel IIIa-c zu erhalten,
wobei n = 3; (IIIa) oder 4; (IIIb), oder 5; (IIIc) c. Reduzieren der Verbidnung 1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehydediethylthioacetal]alkyloxy}anthracen-9,10-dion der Formel III unter Verwendung von Zinnchlorid, in einem alkoholischen Lösungsmittel unter Reflux über eine Dauer von 4 Stunden, Abkühlen der resultierenden Mischung auf eine Temperatur von 20 bis 25°C, und Entfernen des überschüssigen Alkohols durch Verdampfung und Einstellen des Rückstandes mit einer anorganischen Base auf einen pH-Wert von ungefähr 8, gefolgt von der Extraktion mit Ethylacetat und Waschen der kombinierten organischen Phase mit Salzlake und Verdampfen des Lösungsmittels um die gewünschte Verbindung Amino thioacetal1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy}-anthracen-9,10-dion der Formel IVa-c zu erhalten,
Formel IV wobei n = 3; (IVa) oder 4; (IVb), oder 5; (IVc) d. Reagieren von Aminothioacetalaminothioacetal1,4-bis-{n-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]alkyloxy}anthracen-9,10-dion der Formel IVa-c mit Quecksilber(II)-Chlorid in einer Mischung aus Wasser und Acetonitril, in Anwesenheit von und Calciumcarbonat, unter Rühren für eine Dauer von 8–10 Stunden, bei einer Temperatur in dem Bereich von 25–30°C und Verdünnen mit Ethylacetat, gefolgt von Filtrieren und Extrahieren des organischen Überstandes mit Ethylacetat, Waschen der resultierenden organischen Phase mit Natriumbicarbonat und Brine bzw. Salzlake und Verdampfen der organischen Schicht, gefolgt von einer Reinigung durch ein bekanntes Verfahren um das gewünschte Produkt der Formel Va-c zu erhalten.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die milde anorganische Base, welche in den Schritten (a) und (b) verwendet wird, Kaliumbicarbonat ist.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei das erhaltene neuartige Bis-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugat der allgemeinen Formel V durch die Gruppe der folgenden Verbindungen dargestellt wird: 1,4-Bis-{3-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1,2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one]propyloxy}anthracene-9,10-dione (Va); 1,4-Bis-{4-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1 2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]butyloxy)anthracen-9,10-dion (Vb) und 1,4-Bis-{5-[7-Methoxy-8-oxy-(11as)-1‚2,3,11atetrahydro-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (Vc).
Verfahren nach Anspruch 15, wobei das Bromoalkan, welches in Schritt (a) verwendet wird, aus der Gruppe gewählt wird, bestehend aus 1,3 Dibromopropan, 1,3 Dibromobutan, and 1,3 Dibromopentan.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei das aprotische organische Lösungsmittel, welches in Schritt (a) verwendet wird, aus Aceton und Acetonitril gewählt wird.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die Verbindung der Formel IIa-c, welche in Schritt (b) verwendet wird, aus der Gruppe gewählt wird, bestehend aus 1,4-Bis-(3-Bromopropyloxy)-anthracen-9,10-dion, 1,4-bis-(3-bromobutyloxy)-anthracen-9,10-dion and 1,4-bis-(3-bromopentyloxy)-anthracen-9,10-dion.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei das organische Lösungsmittel, welches in Schritt (b) verwendet wird, aus Acetonitril, Aceton und DMF ausgewählt wird.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die Verbindung der Formel IIIa-c, welche in Schritt (c) verwendet wird, aus der Gruppe ausgewählt wird, bestehend aus 1,4-Bis-{3-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]-propyloxy)anthracen-9,10-dion (IIIa), 1,4-Bis-{4-[(2S)-N-(4-25Oxy-5-methoxy-2-nitrobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]butyloxy}-anthracen-9,10-dion (IIIb) and 1,4-Bis-{5-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-nitro-benzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]pentyloxy}anthracen-9,10-dion (IIIc).
Verfahren nach Anspruch 15, wobei der in Schritt (c) verwendete Alkohol aus Methanol und Ethanol gewählt wird.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die Verbindung der Formel IVa-c, welche in Schritt (d) verwendet wird, gewählt wird aus 1,4-Bis-{3-[(2S)-N-(4-Oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]propyloxy}anthracen-9,10-dion (IVa), 1,4-bis-{4-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-amino-5benzoyl)pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal}butyloxy}-anthracen-9,10-dion (IVb), and 1,4-bis-{5-[(2S)-N-(4-oxy-5-methoxy-2-aminobenzoyl)-pyrrolidin-2-carboxaldehyddiethylthioacetal]pentyloxy}-anthracen-9,10-dion (IVc).
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die neuartigen Bis-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-anthrachinon Konjugate der Formel V eine In-Vitro Antikrebs/AntitumorAktivität gegen menschlichen Krebszell-Linien, gewählt aus Lungen-, Zervix-, Brust-, Grimmdarm-, Prostata- und Eierstockzell-Linien, aufweisen.