DD279677A1 - Verfahren zur herstellung neuer, hochwirksamer antagonisten des plaettchen-aktivierenden faktors mit phospholipidstruktur - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung bisher nicht beschriebener Phospholipide und deren Charakterisierung als hochwirksame Antagonisten des Plaettchen-aktivierenden Faktors. Das Ziel der Erfindung ist es, durch ein geeignetes Verfahren neue PAF-Antagonisten mit hoher Wirksamkeit, guter Wasserloeslichkeit und Plasmastabilitaet herzustellen. Diese Aufgabe wird dadurch geloest, dass durch ein einfaches Verfahren Halogenester von Phospholipiden mit verschiedenen Pyridinen umgesetzt werden. Die so veraenderte Kopfgruppe bestimmt wesentlich die PAF-antagonistische Wirkung der Verbindungen. Die erfindungsgemaess hergestellten Substanzen koennen zur pharmakologischen Steuerung PAF-vermittelter Reaktionen sowie als Wirkstoffe von Antiphlogistika, Antiallergika, Antiasthmatika und Antithrombotika Anwendung finden.

Description

Charakterisierung der bekannten technischen Lösungen

Seit der Strukturaufklärung von PAF im Jahre 1979 und dessen Charakterisierung als physiologischer Mediator allergischer und entzündlicher Reaktionen gewinnen PAF-Antagoniston als potentielle Wirk- und Arzneistoffe zunehmend an Interesse. Die zur Zeit bekannten Antagonisten lassen sich in drei Gruppen einteilen:

1. PAF-Antagonisten natürlicher Hßrkunft wie BN 52020-52023 aus Ginkgo biloba (BRAQUET, GB Pat. 8418424 [19841; Ginkgolides -Chemistry, Biology, Pharmacology, and Clinical Perspectives, P. BRAQUET [Ed.|, J. R. Prous Science Publishers, Barcelona 1987), benzoiuranoide Neolignane wie Kadsurenon aus Piper futokadsurae (SHEN et al. Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. 82,672 [1985]), 2,3,4,5-tetrasubstituierte furanoide Lignane wie Veraguenesin aus Magnolia acuminata (SHEN et al., 2. World Conference on Inflammation, Monte Carlo 1986), Galgravin und Galbelgin aus Himantandra belgravena (BRAQUET et al. Trends Biochem. Sei.7,397 [1986]), 3,4-disubstituierte furanoide Lignane, wie Buseran aus Busera microphylla (BRAQUET et al. ibid), butanolide Lignane, wie Prestegan aus Steganotaenia aralisces (BRAQUET et al. in: New Horizons in Platelet Activating Factor Research, M. L. LEE und C. M. WINSLOW [Ed.], John Wiley & Sons, Chichester 1987) sowie die aus Mikroorganismen isolierten Gliotoxinderivate FR-491 /5 und FR-900452 (OKAMOTO et al., Chem. Pharm. Bull.34, 340 [1986], OKAMOTO et al. J.

Antibiotics 39,198 [1986)).

2. Synthetische Heterocyclen, wie eine Serie von Triazolobenzodiazepinen (KORNECKI et al. Science 226,1454 [1984), CASALS-STENZEL et al. J. Pharmacol. Expt. Ther.241,974 [1987]), 48740 RP, ein (3-Pyridyl)-1 H.SH-pyrrolo-d^-ci-thiazoliumderivat (FARBE et al. Eur. Pat. 115979 [1983]), Indenderivate (SHEN et al. Eur. Pat. 142801 (19831) sowie 2,5-Diaryltetrahydrofurane und analoge Verbindungen wie L-652731 und L-653150 (BIFTU et al. Eur. Pat. 144804 [1983])

3. PAF-Strukturanaloga wie CV-3988, welches einen Octadecylcarbamoylrest in C-1 Position, einen Methoxyrest in C-2 Position und eine Thiazoliumethylkopfgruppe in C-3 Position des Glycerols enthält (TERASHITA et al. Life Sei. 32,1975 [1983]), ONO-6240, ein i-O-Hexadecyl^-O-ethyl-glycero-S-O-heptamethylenthiazoliumsalz (MIYAMOTO et al. Eur. Pat. 146258 [1985]), RO-193704, RO-188736 und RO-187953, einr Serie von Glycerolipiden mit einem Octadecylcarbamoylrest in C-1 Position, einer Methoxy- oder einer Methoxycarbonyip, uppe in C-2 Position und einer phosphatfreien, als Ether gebundenen Thiazoliumbutylkopfgruppe (WINSLOW et al. Prostaglandins 30,697 [1985]), RU-45703, welches ebenfalls ein 1-0-Octadecyl-2-0-ethylglycerolipid darstellt und in C-3 Position mit einem Butylcholinrest verestert ist (WICHROWSKI et al., 6. International Conference on Prostaglandins and Related Compounds, Florence 1986).

Des weiteren sind mehrere von der PAF-Struktur abgeleitete Antagonisten mit glycerolfreiem Grundgerüst beschrieben worden, dazu zählen SRI-63073, welches durch ein Piperidingrundgerüst und eine Thiaminphosphatkopfgruppe gekennzeichnet ist (LEE et al. Prostaglandins 30,690 [1985)) sowie Derivate mit einem Üioxanongrundgerüst und einer Alkylpyridiniumkopfgruppe (BURRI et al. Prostaglandins 30,691 [1985]).

Die meisten der bisher beschriebenen natürlichen Produkte und Heterocyclen mit PAF-antagonistischer Wirkung sind in Wasser schwer löslich und aus diesem Grunde für pharmakologische Zwecke nur bedingt einsetzbar. Andererseits sind ihre Isolierung und Synthese zumeist mit äußerst hohem experimentellen Aufwand verbunden und liefern die Zielverbindungen in der Regel nur in niedrigen Ausbeuten, so daß sie den Anforderungen an ein technisch anwendbares Verfahren nur unzureichend genügen. Auch die beschriebenen PAF-Strukturanaloga mit antagonistischer Wirkung sind im allgemeinen schlecht wasserlöslich (CV-3988, SRI-63119 und die RO-Serie), worden im Plasma schnell abgebaut (RO-19400) und besitzen z.T. nur eine geringe Wirkungsstärke (SRI-63119 und SRI-63073). Außerdem besteht bei vielen dieser Verbindung ein wesentlicher verfahrenstechnischer Nachteil in der geringen chemischen Reaktivität des als Kopfgruppe einzufügenden Thiazols (CV-3988, ONO-6240, SRI-63119 sowie die RO-Serie), wodurch trotz Anwendung drastischer Reaktionsbedingungen nur geringe Ausbeuten erzielt werden.

Ziel der Erfindung

Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein technisch einfach zu realisierendes Verfahren zur Herstellung neuer PAF-Antagonisten mit Phospholipidstruktur, die sich durch hohe Wirkung, gute Wasserlöslichkeit und Plasmastabilität auszeichnen, zu entwickeln.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Aufgabe der Erfindung ist es, einen einfach zu realisierenden Syntheseweg zur Herstellung neuer, hochwirksamer PAF-Antagonisten aufzufinden. Als Ausgangsverbindungen dienen in an sich bekannter Weise herstellbare Halogenester von Phospholipiden.

Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel I,

₀-R¹

CH-R _(|)

CH₀O-P-O-(CH₀) —X 2 // \ 2 τι

O OH

wobei R¹ einen unsubstituierten, langkettigen Alkoxy rest mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen darstellt, für R² eine Methoxy-, Ethoxy-, Propoxy- oder Benzoxygruppe oder ein Methyl, Ethyl- oder n-Propyl bis n-Penty!rest oder eine Hydroxygruppe steht, R¹ und R² auch gegenseitig vertauscht sein können, für η die Zahlen 2 bis 10 stehen und X für Chlor, Brom und Iod steht, mit ortho-, meta-, oder parasubstituierten Pyridinen der allgemeinen Formel II,

(II)

wobei R³ eine Aminogruppc darstellt, die durch gleiche oder verschiedene n-Alkylreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die zusammen auch einen 3- bis 7gliederigen Ring bilden können, substituiert sein können, zu Verbindungen der allgemeinen Formel III,

CH₀O-P-O

² /A

wobei R¹, R² und R³ sowie η die oben angegebene Bedeutung besitzen, umgesetzt werden.

Oie Umsetzungen werden in wasserfreien Halogenkohlenwasserstoffen, wie Methylenchlorid, Chloroform, Trichloethylen oder in wasserfreien Lösungsmittelgemischen von Chloroform/Acetonitril (1:1) unter Feuchtigkeitsausschluß durchgeführt. Zur Erhöhung der Ausbeute wird die Menge des substituierten Pyridins bevorzugt in einem verschlossenen Gefäß im Temperaturbereich von 4O⁰C bis 60°C durchgeführt. Verbindungen der allgemeinen Forme! Ill, wobei R¹, R³ und η die oben angegebene Bedeutung besitzen und R² gleich OH ist und R¹ und R² auch gegenseitig vertauscht sein können, werden mit geeigneten Derivaten kurzkettiger Carbonsäuren, wie Essigsäure oder Propinsäure, zu Verbindungen der allgemeinen Formel IV₁

(IV)

O—P—O—CCH

wobei R¹, R³ und η die oben angegebene Bedeutung besitzen und für R⁴ ein Acetyloxy- oder Propionyloxyrest steht, umgesetzt. Geeignete Derivate sind Säureanhydride oder Säurechlorido u^en genannter Carbonsäuren. Die Umsetzungen erfolgen in wasserfreien organischen Lösungsmitteln wie Pyridin, 1 riethyl amin oder Chinolin sowie in Losungsmi'tnlgemischen von Chloroform/Pyridin bzw. Chloroform/Triathylamin (1:1). Bevorzugt werden Pyridin als Lösungsmittel und ein 8molarer Überschuß Säureanhydrid als Acylierungsreagenz eingesetzt. Die Umsetzungen werden im Temperaturbereich von 2O⁰C bis 4O⁰C durchgeführt.

Überraschender Weise zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen äußerst günstige pharmakologische Eigenschaften. Sie zeichnen sich durch gute Wasserlöslichkeit und hohe Plasmastabilität aus und hemmen bereits in niedrigen Konzentrationen PAF-vermittelte Reaktionen. Diese Ergebnisse waren beim gegenwärtigen Stand der Technik nicht zu erwarten. Die erfindungsgemäßen Verbindungen stellen somit eine wertvolle Bereicherung der auf diesem Gebiet bekannten Wirkstoffe dar. Nachfolgend wird die Erfindung an Alisführungsbeispielen erläutert.

Beispiel 1

i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^WDimethylaminoi-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, R₃ = p-N(CH₃)₂ und η = 2\

531 mg = 1 mmol getrocknetes I (Ri = 0-C₁₆H₃₃, R₂ = 0-C₂H₅, X = Br und η - 2) uni '45mg = 2 mmol Il (R³ = p-N(CH₃)₂| werden in 7,5ml getrocknetem Chloroform gelöst und im verschlossenen Gefäß i-_ui dem Wasserbad bei 50°C temperiert. Nach 12 Stunden zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle vollständige Umsetzung an. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 9 ml Methanol und 5 ml Wasser versetzt, geschüttelt und anschließend die organische Phase im Vakuum bis zur Trockne eingedampft. Der verbleibende Rückstand wird in einem Gemisch aus 9ml Methanol und 7,5ml Chloroform gelöst, mit 7,5ml 5%iger Ameisensäure versetzt und kräftig geschüttelt. Die organische Phase wird abgetrennt, mit 7,5ml Natriumacetatlösung (0,1 mmol/l) und 9ml Methanol versetzt geschüttelt und anschließend im Vakuum zur Trockne eingedampft. Das Rohprodukt wird säulenchromatographisch an 20g Kieselgel 60 (MEflCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) nls Elutionsmittel gereinigt und im Exsikkator über Phosphorpentoxid getrocknet. Man erhält 70% des reinen Endproduktes als weiße, stark hygroskopische Substanz

Elementaranalyse: C₃₀H₆₇N₂O₆P · H₂O (590,5)

Ber.: N 4,75 P 5,24

Gef.:N4,83P5,10

Beispiel 2

i-O-Hexadecyl^-O-n-propylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumethylester (III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = O-n-C₃H₇, R₃ = p-N(CH₃)₂ und η = 2]

545mg = 1 mmol getrocknetes I [(R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = O-n-C₃H₇, C = Br und η = 2) und 245mg = 2mmol Il [R³ = p-N(CH₃)₂) werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 20g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 65% des reinen Endproduktes als weiße, stark hygroskopische Substaru.

Elementaranalyse: C^H₅₉N₂O₆P · H₂O (604,5)

Ber.: ι\Μ.β4Ρ5,12

Gef.:N4,56P5,01

Beispiel 3

i-O-Dodecyi^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-fDimethylaminoJ-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-C₁₂H₂₅, R² = 0-C₂H₅, R³ = D-N(CHj)₂ und n = 2)

475mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = 0-C₁₂H₂₅, R² = 0-C₂H₅₁X = Br und η = 2) und 245mg = 2mmolll[R³ = p-N(CH₃)₂l werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 20g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes in Form einer weißen, stark hygroskopischen Substanz.

Elementaranalyse: C₂₆H₄₉N₂O₆P H₂O (534,4)

Ber.: N5,24 P5,80

Gef.: N 5,32 P 5,68

Beispiel 4

i-O-Hexadexyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-IAminol-pyridiniumethylester (III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, R³ = p-NH₂ und η = 21

531mg = 1mmol . ;rocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, X = Br und η = 2|und 188mg = 2mmoiriR³ = D-NH₂) werden unter mäßigem L.-wärmen in 7,5ml getrocknetem Chloroform gelöst und anschließend im verschlossenen Gefäß auf dem Wasserbad bei 4O⁰C temperiert. Nach 8 Stunden zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle vollständigen Umsatz an. Die trübe Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt, filtriert und danach mit 9ml Methanol und 5ml Wasser versetzt. Die Mischung wird kräftig geschüttelt, die organische Phase abgetrennt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der verbleibende Rückstand wird in einem Gemisch aus 9ml Methanol und 7,5ml Chloroform gelöst, mit 7,5ml 5%iger Ameisensäure versetzt, kräftig geschüttelt und die organische Phase abgetrennt. Diese wird mit 7,5ml Natriumacetatlösung (0,1 mmol/l) und 9 ml Methanol versetzt, geschüttelt, abgetrennt und im Vakuum eingedampft. Zur Reinigung wird der Rückstand an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:35:3) als Elutionsmittel aufgetrennt und im Exsikkator über Phosphorpentoxid getrocknet. Man erhält 75% des reinen Endproduktes als weiße analysenreine Substanz. Elementaranalyse: C₂₈H₆₃N₂O₆P · H₂O (562,5)

Ber.: N4,98P5,51

Gef.: N4,87 P5,58

Beispiel 5

i-O-Hexadecyl^-O-n-propylglycero-S-phosphorsäure^-fAminol-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = O-n-C₃H₇, R³ = p-NH₂ und η = 2]

545mg = 1mmo! getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃₁R² = O-n-C₃H₇,X - Brundn = 2|und188mg = 2mmolll[R³ = p-NH₂]werden analog Beispiel 4 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:35:o) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes als weiße kristalline Substanz.

Elementaranalyse: C₂₉H₆₅N₂O₆P H₂O (576,5)

Ber.: N4,86 P5,37

Gef.:N4,73P5,31

Beispiel 6

i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure-^IDimethylaminol-pyridiniumpropylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₆, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 3] 545mg = 1 mmol getrocknetes I |R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, C = Br und η = 3| und 245mg = 2mmol Il (R³ = p-N(CH₃)₂] werden in 7,5 ml getrocknetem Trichlorethylen gelöst und im verschlossenen Gefäß auf dem Wasserbad bei 6O⁰C temperiert. Nach 10 Stunden zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle vollständige Umsetzung an. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt, mit einem Gemisch aus 9ml Methanol und 5 ml Wasser versetzt, geschüttelt und anscnließend die organische Phase im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der weiße Rückstand wird in einem Gemisch aus 9ml Methanol und 7,5ml Chloroform gelöst, mit 7,5ml 5%iger Ameisensäure versetzt, kräftig geschüttelt und die organische Phase abgetrennt. Diese wird mit 7,5ml Natriumacetatlösung (0,1 mmol/l) und9ml Methanol versetzt, geschüttelt, abgetrennt und im Vakuum eingedampft. Das so erhaltene Rohprodukt wird säulenchromatographisch an 20g Kieselgel 60 (MERCK) mittels Chloroform/ Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel gereinigt und im Exsikkator über Phosphorpentoxici getrocknet. Man erhält 75% des reinen Endproduktes als weiße, hygroskopische Substanz. Elementaranalyse: C₃₁H₅₉N₂O₆P · H₂O (604,5) Ber.:N4,64P5,12 Gef.:N4,72P5,17

Beispiel 7

i-O-Hexadecyl^-Oethylglycero-S-phosphorsäure^Dimethylaminol-pyridiniumbutylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, R³ = p-N(CH₃)₂ und n = 4] 559mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆H₃₃₁R² = O-C₂H₅,X = Br und η = 4] und 245mg = 2mmolll[R³ = D-N(CH₃I₂] werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel werden 70% des reinen Endproduktes als weiße hygroskoDische Substanz erhalten.

Elementaranalyse: C₃₂H₆₁N₂O₆P · H₂O (618,5) Ber.:N4,53P5,01 Gef.:N4,44P4,94

Beispiel 8

i-O-Hexadecyl^-O-n-propylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminoJ-pyridiniumbutylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = O-n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 4) 573mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃₁R² = O-n-C₃H₇, X = Br und η = 4] und 245mg = 2rnmolll[R³ = p-N(CH₃)₂] werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel CO (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes als weiße, schwach hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₃H₆₃N₂O₆P · H₂O (632,5) Ber.:N4,43P4,90 Gef.:N4,63P4,81

Beispiel 9

i-O-Hexadecyl^-O-n-propylglycero-S-phosphorsäure^fDimethylaminol-pyridiniumpentylester [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = O-n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 5) 587mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆H₃₃₁R² = O-n-C₃H₇,X = Br und η = 5) und 245mg = 2mmolll[R³ = p-N(CH₃)₂l werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel werden 75% des reinen Endproduktes als weiße, schwach hygroskopische Substanz erhalten.

Elementaranalyse: C₃₄H₆₅N₂O₆P · H₂O (646,5) Ber.:N4,33P4,79 Gef.:N4,43P4,71

Beispiel 10

i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-fDimethylaminoJ-pyridiniumpentylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 5] 573mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, X-Br und η = 5! und 245mg = 2mmol Il [R³ = p-N(CH₃)₂] werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 75% des reinen Endproduktes als weiße, schwach hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₃H₆₃N₂O₆P- H₂O(33I',5) Ber.:N4,43P4,90 Gef.:N4,48P4,95

Beispiel 11

i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminoJ-pyridiniumhexylester Uli mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R' = 0-C₂H₆, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 6] 587mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃₁R² = 0-C₂H₅₁X = Br und η = 61 und 245mg = 2mmolll[R³= p-N(CH₃)₂| werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel werden 70% des reinen Endproduktes als weißes, schwach hygroskopisches Pulver erhalten.

Elementaranalyse: C₃₄H₆₅N₂O₆P · H₂O (646,5) Ber.:N4,33P4,79 Gef.:N4,29P4,64

Beispiel 12

i-O-Hexadecyl^-O-propylpropandiol-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumethylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 529mg = 1 mmo! getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₁₁, R² = n-C₃H₇,X = Br und η = 2]und24Bmg = 2mmolll[R³ = p-N(CH₃)₂| werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 30g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel werden 70% des reinen ^rndproduktes als weiße, stark hygroskopische Substanz erhalten.

Elementaranalyse: C₃₁H₅₉N₂O₆P · H₂O (588,5) Ben: N4,76 P5,26 Gef.: N4,86P5,13

Beispiel 13

i-O-Hexadecyl^-n-propylpropandiol-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumpropylster [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 3] 543mg = 1mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆Hj₃, R² = n-C₃H₇, X = Br und η = 3] und 245mg = 2mmolll[R³= D-N(CH₃I₂] werden analog Beispisl 6 umgesstzt. Man erhält nach säulenchromographischer Reinigung an 30g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes als weiße, stark hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₂H₆₁N₂O₅P · H₂O (602,3) Ber.:N4,65P5,14 Gef.: N 4,58 P 5,36

Beispiel 14

i-O-Hexadecyl^-n-propylpropandiol-S-phosphorsäure^Dimethylaminol-pyridiniumbutylester [III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 4] 557mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-Ci₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, X = Br und η = 41 und 245mg = 2m ,öl Il [R³ = p-N(CH₃)₂) werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 30g Kieselgci 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel werden 75% des reinen Endproduktes als weiße, hygroskopische Substanz erhalten.

Elementaranalyse: C₃₃H₆₃N₂O₅P · H₂O (616,3) Ber.: N 4,54 P 5,03 Gef.:N4,47P5,14

Beispiel 15

i-O-Hexadecyl^-n-propylpropandiol-S-phosphorsäure^-fDimethylaminol-pyridiniumoctylester [Ml mit R' = 0-Ci₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 8) 613mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = n-C₃H₇, X = Br und η = 81 und 245mg = 2 mmol Il [R³ = p-N(CH₃)₂) werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 30g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 75% des reinen Endproduktes als weiße, hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₇H₇₁N₂O₅P · H₂O (672,2) Ber.:N4,17P4,61 Gef.: N4,12P4,56

Beispiel 16

i-O-Hexadecyl^-n-pentylpropandiol-S-phosphorsäure^-fDimethylaminol-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = n-CsH,,, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 2] 557mg = 1 mmol getrocknetes I [R' 0-Ci₆H₃₃₁R² = n-C₅Hn,X = Br und η = 2| und 245mg = 2 mmol Il [R³ = D-N(CH₃I₂I werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 30g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes als weiße, stark hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₃H₆₃N₂O₅P · H₂O (616,6) Ber.: N4,54 P5,02 Gef.:N4,64P5,19

Beispiel 17

i-O-Hexadecyl^-O-benzylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-Ci₆H₃₃, R² = O-CH₃)₂1 und n = 2) 593mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-Ci₆H₃₃, R² = 0-CH₂-C₆H₅, X = Br und η = 2] und 245mg = 2mmolll[R³ = D-N(CH₃I₂I werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 30g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2'; als Elutionsmittel 50% des reinen Endproduktes als farblose, stark hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₅H₅₉N₂O₆P · H₂O (652,5) Ber.:N4,29P4,74 Gef.:N4,22P4,62

Beispiel 18

i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-fPiperidinoi-pyridiniumpentylester

[III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R' = 0-C₂H₅, R³=P"H (CH₂) ε _{und n =} 5]

573 mg = 1mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, X = Br und η = 51 und 325 mg = 2mmolll [R³=p-I (CH₂) si]

werden in 7,5ml Chloroform gelöst und im verschlossenen Gefäß auf dem Wasserbad bei 55⁰C temperiert. Nach 10 Stunden zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle vollständige Umsetzung an. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt, mit einem Gemisch aus 9ml Methanol und 5 ml Wasser versetzt und geschüttelt. De organische Phase wird in einem Gemisch aus 9ml Methanol und 7,5ml Chloroform aufgenommen, mit 7,5ml 5%iger Ameisensäure versetzt und kräftig geschüttelt. Die abgetrennte organische Phase wird mit 7,5ml Natriumacetatlösung (0,1 mmol/l) und 9ml Methanol versetzt, geschüttelt und anschließend im Vakuum eingedampft. Das erhaltene Rohprodukt wird säulenchromatographisch ar 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100/25/1) als Elutionsmittel gereinigt und im Exsikkator über Phosphorpentoxid getrocknet. Man erhält 75% des reinen Endproduktes als weiße hygroskopische Substanz. Elementaranalyse: C₃₆H₆₇N₂O₆P · H₂O (672,5) Ber.:N4,16P4,61 Gef.:N4,10P4,73

Beispiel 19 i-O-Hexadecyl^-O-ethylglycero-S-phosphorsäure^-fPyrrolidinol-pyridiniumpentylester

[III mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃,R² = 0-C₂H₆, R³=p-ff (CHs)₄ und η = 5)

673mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R² = 0-C₂H₅, X = Br und η - 5| und 325mg = 2 mm ο I Il

werden analog Beispiel 18 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:25:1) als Elutionsmittel werden 75% des reinen Endproduktes als weiße, hygroskopische Substanz erhalten. Elementaranalyse: C₃₅H₆₅N₂O₆P H₂O (658,5) Ber.:N4,25P4,70 Gef.:N4,14P4,82

Beispiel 20

i-O-Hexadecylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminoJ-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-C₁₆H₃₃, R² = p-N(CH₃)₂ und n = 2] 503mg -- 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-C₁₆H₃₃₁R² = OH, X = Br und η = 2] und 245mg = 2mmol Il [fl³ = p-N(CH₃)₂] werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselge¹ 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:35:3) als Elutionsmittel 65% des reinen Endproduktes als farblose, stark hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₂₈H₅₃N₂O₆P H₂O (562,5) Ber.: N 4,98 P 5,51 Gef.: N 4,84 P 5,55

Beispiel 21

2-O-Hexadecylglycero-3-phosphorsäure-^/l-(Dimethy^: mino)-pyridiniumethylester [III mit R¹ = OH.. R² = 0-C₁₆H₃₃, R³ = p-N(CH₃)₂ und = 2] 503mg = 1 mmol getrocknetes I [R' = OH, R² = O- ,₁₆H₃₃, X = Br und η = 2] und 245mg = 2mmolll[R³ = p-N(CH₃)₂l werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:35:3) als Elutionsmittel 70% des reinen Endproduktes als farblose, starV hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₂₈H₅₃N₂O₆P · H₂O (562,5) Ber.: N4,98 P5,51 Gef.:N4,93P5,64

Beispiel 22

i-O-Benzyl^-O-hexadecylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumethylester [III mit R' = 0-CH₂-C₆H₆, R² = 0-C₁₆H₃₃, R³ = p-N(CH₃)₂ und η = 2) 593mg = 1 mmol getrocknetes I [R¹ = 0-CH₂-C₆H₅, R² = 0-C₁₆H₃₃, X = Br und η = 2] und 245mg = 2mmol Il [R³ = p-N(CH₃)₂] werden analog Beispiel 1 umgesetzt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30/2) als Elutionsmittel werden 55% des reinen Endproduktes als farblose, sstark hygroskopische Substanz erhalten.

Elementaranalyse: C₃₅H₅₉N₂O₆P H₂O (652,5) Ber.:N4,29P4,74 Gef.:N4,34P4,82

Beispiel 23

i-O-Ethyl^-O-hexadexylglycero-S-phosphorsäure^-fDimethylaminol-pyridiniumpropylester

(III mit R' = 0-C₂H₅, R² = 0-C₁₆H₃₃, R³ = p-N(CH₃)₂ und n = 3]

545mg = 1 mmol getrocknetes I (R¹ = O-C₂H_E, R² - 0-C₁₆H₃₃, X = Br und n = 3) und 245mg = 2 mmol Il [R³ = p-N(CH₃)₂| werden analog Beispiel 6 umgesetzt. Man erhält nach säulenchromaiographischer Reinigung an 25g Kieselgel 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel 75% des reinen

Endproduktes als weiße, hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₁H₅₉N₂O₆P · H₂O (604,5)

Ber.: N4,64P5,12

Gef.:N4,58P5,22

Beispiel 24

i-O-Hexadecyl^-O-acetylglycero-S-phosphorsäure^-fDimethylamionl-pyridiniumpropylester

[IV mit R¹ = 0-C₁₆H₃₃, R³ = p-N(CH₃)₂, R⁴ = 0-CO-CH₃ und n = 3]

87mg = 0,15mmol getrocknetes III [R' = 0-C₁₆H₃₃₁R³ = p-N(CH₃)₂, R⁴ = OH und η = 3] werdjnin 190mg = 2,4mmol getrocknetem Pyridin suspendiert. Man fügt 122mg = 1,2 mmol Essigsäureanhydrid hinzu i.nd temperiert im verschlossenen Kolben 8 Stunden bei 40°C. Nach dieser Zeit zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle nahezu vollständigen Umsatz an. Man fügt 2 ml Wasser hinzu und erwärmt eine weitere Stunde auf 4O⁰C. Das Reaktioni jemisch wird über Nacht stehengelassen und dann iyophibilisiert. Der Rückstand wird säulenchromatographisch an 15g Kieselgol 60 (MERCK) mit Chloroform/Methanol/Wasser (100:30:2) als Elutionsmittel gereinigt. Man erhält 60% des reinen Endproduktes als weiße, stark

hygroskopische Substanz.

Elementaranalyse: C₃₁H₅₇N₂O₇P H₂O (618,8)

Ber.: N4,52 P5,00

Gef.: N 4,48 P 4,92

Beispiel 25

i-O-Acetyl^-O-hexadecylglycero-S-phosphorsäure^-IDimethylaminol-pyridiniumethylester

[IV mit R¹ = 0-CO-CH₃, R³ = p-N(CH₃)₂, R⁴ = 0-C₁₆H₃₃ und n = 2]

84mg = 0,15mmol getrocknetes III [R¹ = OH, R³ = p-N(CH₃)₂, R⁴ = 0-C₁₆H₃₃ und η = 2) werden in 190mg = 2,4mmol getrocknetem Pyridin suspendiert. Man fügt 122mg = 1,2mmol Essigsäureanhydrid hinzu und temperiert im verschlossenen Kolben 6 Stunden bei 40°C. Nach dieser Zeit zeigt die dünnschichtchromatographische Kontrolle vollständigen Umsatz an. Man fügt 2 ml Wasser hinzu und erwärmt eine weitere Stunde auf 40°C. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht stehengelassen und dann lyophilisiert. Das Lyophilisat wird aus Chlorofo'im/Aceton (1:6) umgefällt. Man erhält 90% des reinen Endproduktes als

weißes, stark hygroskopisches Pulver.

Elementaranalyse: C₃₀H₆₅N₂O₇P · H₂O (604,8)

Ber.: N4,63P5,12

Gef.: N4,58 P5,06

Charakterisierung der PAF-antagonistischen Wirkung

Nachfolgend wird die antagonistische Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen (allgemeine Formel III und IV) am Beispiel der Hemmung dor PAF-induzierten Thrombozytonaggregation beschrieben. Letztere wurde im menschlichen plättchenreichen Citratplasma mittels der von BORN beschriebenen Methode (J. Physiol. (London] 162,67-68 [1962]) unter Verwendung eines Zweikanalaggregometers vom Typ ELVI 840 (Elvi Logos, Mailand, Italien) durchgeführt. In Anwesenheit der erfindungsgemäßen Verbindungen beobachtet man eine konzentrationsabhängige Hemmung der PAF-induzierten Thrombozytenaggregation. Diese kann durch Erhöhung der PAF-Konzentration aufgehoben werden. SCHILD-Analyse der beobachteten Parallelverschiebung der Konzentrations-Wirkungs-Kurve zeigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen als kompetitive Antagonisten von PAF wirken. Als quantitatives Maß der Wirksamkeit sind in Tabelle 1 die entsprechenden K_B-Werte angegeben.

Im Unterschied dazu wird die durch andere Auslöser wie ADP, Collagen oder Arachidonsäure induzierte Thrombozytenaggregation durch die erfindungsgemäßen Verbindunger nur unwesentlich beeinflußt.

Tabelle 1:

Experimentell on menschlichen Thrombozyten ermittelte Ke-Werte

Verb. R' R² R¹ R⁴ rT K_B-Wert

(mol/i)

IiI	0-C16H33	0-C2H5	P-N(CH3I2
III	0-C16H33	O-n-C3H7	P-N(CH3),
III	0-C12H25	0-C2H5	p-N(CH3)2
III	0-C16H33	0-C2H5	P-NH2
III	0-C16H33	O-n-C3H7	P-NH2
III	0-C16H33	0-C2H5	P-N(CH3I2
!Il	0-C16H33	0-C2H5	P-N(CH3I2
III	0-C16H33	O-n-C3H7	P-N(CH3I2
III	0-C16H33	O-n-C3H7	P-N(CH3I2

2	3,2- 10"6
2	2,6-10"6
2	>10"5
2	5,0-10 6
2	5,4 · 10"6
3	4,4-10"'
4	3,6-10"'
4	6,3-10"'
5	1,1 -10"6

R'

R⁴

Kn-Wert (mol/l)

Ill III III III III III III

III III

III IV IV

0-C₁₆H₃₃ 0-C₁₆H₃₃ 0-C₁₆H₃₃ 0-C₁₆H₃₃

0-C₁₆H₃₃

0-C₁₆H₃₃ 0-C₁₆H₃₃ 0-C₁₆H₃₃

0-C₁₆H₃₃

0-C₁₆H₃₃

0-C2H5	P-N(CH3),
0-C2H5	P-N(CH3),
n-C3H7	P-N(CH3J2
n-C3H7	P-N(CH3J2
Fi-C3H7	P-N(CH3),
IV-C3H7	P-N(CH3),
FV-C5H11	P-N(CH3)2
0-CHr-C6H5	P-N(CH3I2

0-C₂H₅

0-C₂H₅

0-C16H33	OH
OH	0-C16H33
0-CH7-C6H5	0-C16H33
0-C2H5	0-C16H33
0-C16H33	-
0-CO-CH3	-

P-N(CH₃I₂ P-N(CH₃J₂ P-N(CH₃J₂ P-N(CH₃J₂ P-N(CH₃), P-N(CH₃), O-COCH3 0-C₁₆H₃₃

5	9,3-10"7
6	1,9-10"6
2	2,1 · 10"6
3	9,6-10"7
4	3,0-10"7
8	>10"5
2	>10"5
2	9.2-10"6

3,5-10

2,8-10"

>10"⁶ >10"⁵ >10"⁵ 6,3-10" 3,9- 10" 1,3- 10"

Claims (4)

1. Verfahren zur Herstellung neuer, hochwirksamer Antagonisten des Plättchen aktivierten Faktors aus der Phospholipidreihe, dadurch gekennzeichnet, daß Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel I,

ClI..,- -"R CII-R'

(D

o — P--o- ccIi_n > ^ x
ο on

wobei R' einen unsubstituierten, langkettigen Alkoxyrest mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen darstellt, für R² eine Methoxy-, Ethoxy-, Propoxy- oder Benzoxygruppe oder ein Methyl, Ethyl- oder n-Propyl bis n-Pentylrest oder eine Hydroxylgruppe steht, R¹ und R² auch gegenseitig vertauscht sein können, für η die Zahlen 2 bis 10 stehen und X für Chlor, Brom oder Iod steht, mit ortho-, meta- oder parasubstituierten Pyridinen der allgemeinen Formel II,

(II)

wobei R³ eine Aminogruppe darstellt, die gleich oder verschieden durch n-Alkylreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die zusammen auch einen 3- bis 7gliederigen Ring bilden können, substituiert sein kann, zu Verbindungen der allgemeinen Formel III,

CIl_n-K"¹'

(Ill)

wobei R¹, R² und R³ sowie η die oben angegebene Bedeutung besitzen, umgesetzt werden und nachfolgend die Verbindungen der allgemeinen Formel !II, für den Fall, daß R² gleich OH ist und R¹, R³ und η die oben angegebene Bedeutung besitzen und R¹ und R² auch gegenseitig vertauscht sein können, mit Derivaten kurzkettiger Carbonsäuren wie Essigsäure oder Propiniäure tj Verbindungen der allgemeinen Formel IV,

CII...O—P--O- CCII

wobei R¹, R³ und η die oben angegebene Bedeutung oesitzen und für R⁴ ein Acetyloxy- oder Propionyloxyrest steht, umgesetzt werden.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzungen unter Verwendung wasserfreier Halogenkohlenwasserstoffe, wie Methylenchlorid, Chloroform, Trichlorethylen oder wasserfreien l.ösungsmittelgemischen von Chloroform/Dimethylformamid bzw. Chloroform/ Acetonitril (1:1) unter Feuchtigkeitsausschluß durchgeführt werden.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzungen mit einem 2molaren Überschuß an substituiertem Pyridin und in einem Temperaturbereich von 40 bis 60⁰C durchgeführt werden.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Umsetzungen unter Verwendung wasserfreier basischer Lösungsmittel, wie Pyridin oder Triethylamin und mit Säureanhydridon oben genannter Säuren bei 40°C durchgeführt werden.

Anwendung der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung neuer, hochwirksamer Antagonisten des Plättchen aktivierenden Faktors (PAF) mit Phospholipidstruktur. PAF ist ein natürlich vorkommendes Phospholipid, welches als Mediator allergischer und entzündlicher Reaktionen von großer pathophysiologischer Bedeutung ist. Dementsprechend können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur pharmakologischen Steuerung PAF-vermittelter Reaktionen sowie als Wirkstoffe von Antiphlogistika, Antiallergika, Antia.-thmatika und Antithrombotika Anwendung finden.