DD213927A5 - Verfahren zur herstellung von (3-benzothienyl)-glycylamidocephalosporin-derivaten - Google Patents

Abstract

Beschrieben wird ein Verfahren zur Herstellung neuer (3-Benzothienyl)glycylamidocephalosporin-Derivate mit der aus dem Formelblatt hervorgehenden Formel(I),worin R hoch1 fuer eine Benzothienylgruppe oder eine 4,5,6,7-Tetrahydrobenzothienylgruppe mit den aus den Formelblatt hervorgehenden beiden Formeln steht, wobei R hoch7 u.R hoch 8 Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, C tief1-C tief4-Alkyl, C tief1-C tief4-Alkoxy, Nitro, Amino, C tief1-C tief4-Alkanoylamino, C tief1-C tief4-Alkylsulfonylamino oder zusammen Methylendioxy sind, A und B jeweils Wasserstoff sind oder sich zusammengenommen zu einer Doppelbindung ergaenzen, R hoch2 Wasserstoff, eine Aminoschutzgruppe, Hydroxy oder Methoxy ist und R hoch 3 Wasserstoff ist, R hoch 4 Wasserstoff, Methoxy oder Methylthio ist, R hoch 5 Wasserstoff, Methoxy, Methyl, Halogen, Methoxymethyl oder Vinyl ist und R hoch 6 Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe ist, und von pharmazeutisch annehmbaren Salzen hiervon, durch an sich bekannte Umsetzung bekannter oder an sich bekannter Ausgangsmaterialien. Bevorzugte Verbindungen dieser Art sind Natrium-D-7-(3-benzothienylglycylamido) -3-chlor-3-cephem-4-carboxylat, das Hydrochlorid der entsprechenden freien Saeure oder 7-(6-Chlor-3-benzothienylglycylamido)-3-methyl-3-cephem-4-carbonsaeure.

Description

Verfahren zur Herstellung von (3-Benzothienyl)glycylamidocephalosporin-Derivaten

Anwendungsgebiet der Erfindung:

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung neuer (3-Benzothienyl)glycylamidocephalosporin-Derivate, bei denen es sich um eine neue Klasse von Cephalosporinen handelt, die oral gegen grampositive Bakterien wirksam sind.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen:

Die Cephalosporinantibiotika sind eingehend untersucht worden, und mehrere Vertreter aus dieser Klasse werden routinemäßig zur Bekämpfung bakterieller Erkrankungen ver-

wendet, die durch ein breites Spektrum grampositiver und gramnegativer Mikroorganismen hervorgerufen werden. Der Großteil dieser Verbindungen ist oral nicht wirksam, so daß er intramuskulär oder intravenös verabreicht wird, was die Zuhilfenahme von medizinisch geschultem Personal erfordert. Ferner sind diese Verbindungen gegenüber einem breiten Spektrum an Mikroorganismen wirksam, und sie werden daher im allgemeinen nicht gezielt eingesetzt.'. Obigen Ausführungen zufolge besteht immer noch Bedarf an Cephalosporinantibiotika, die oral wirksam sind und über ein bestimmtes Ausmaß an Spezifität gegenüber einer oder mehreren Gruppen an Mikroorganismen verfügen. Ziel der Erfindung ist daher die Bereitstellung einer neuen Verbindungsgrup-

pe, die diesem Bedarf gerecht wird.

Darlegung des Wesens der Erfindung:

Das obige Ziel wird nun erfindungsgemäß erreicht durch (3-Benzothienyl)glycylamidocephalosporin-Derivate der Formel (I)

,2

I _₄.X / \ (i)

R-" Λ

ι ι ι

COOR³ ο

worin R für

κ ^- j oaer κ

Λ R

7 8 steht, wobei R" und R unabhängig Wasserstoff, Halogen,

25 Hydroxy, C,-C>-Älkyl, C,-C.-Alkoxy, Nitro, Amino, C,-C--Alkanoylamino oder C,-C.-Alkylsulfonylamino bedeuten oder

7 8 14

R und R zusammengenommen Methylendioxy bilden,

A und B jeweils Wasserstoff sind oder sich zusammengenommen zu einer Doppelbindung ergänzen, 2 30 R. Wasserstoff, eine Aminoschutzgruppe, Hydroxy oder

Methoxy ist und 3 R Wasserstoff ist oder 2 3

R und R zusammen für

M

stehen, wobei M und L unabhängig C₁-C.-Alkyl sind,

4 R Wasserstoff, Methoxy oder Methylthio ist,

R Wasserstoff, Methoxy, Methyl, Halogen, Methoxymethyl oder Vinyl ist,

R Wasserstoff oder eine Carboxyschutzgruppe ist,

mit der Maßgabe, daß R nur dann Hydroxy oder Methoxy ist, wenn sich A und B zusammen zu einer Doppelbindung ergänzen, und daß A und B beide Wa res als Wasserstoff ist,

und daß A und B beide Wasserstoff sind, wenn R etwas ande-

und durch pharmazeutisch annehmbare Salze hiervon. Diese Verbindungen sind oral wirksame Antibiotika.

Zu bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen gehören die Verbindungen der Formel (I), worin R für

7 8 steht, wobei R und R die oben angegebenen Bedeutungen haben. Innerhalb dieser Gruppe sind wiederum.die Verbin-

düngen bevorzugt, bei denen R Wasserstoff, eine Aminoschutzgruppe, Hydroxy oder Methoxy ist und R für Wasser- - stoff oder eine Carboxyschutzgruppe steht. Zu einer weiteren bevorzugten Gruppe gehören die Verbindungen der Formel (I), worin R für

30 /\

β *-

7 8 steht, wobei R und R wie oben definiert sind. Besonders bevorzugt innerhalb dieser Gruppe sind die Verbindungen, worin A, B, R , R , R und R° insgesamt Wasserstoff sind.

Zu einer besonders bevorzugten Gruppe gehören die Verbindungen der folgenden Formel

worin R , R und R wie oben definiert sind. Am meisten bevorzugt sind die Verbindungen, worin R Wasserstoff, Halogen, Hydroxy oder Methoxy ist, R Methyl oder Chlor ist ¹S und R Wasserstoff ist, oder die pharmazeutisch annehmbaren Salze hiervon, wie die Natrium- oder Kaliumsalze.

Zur Erfindung gehören ferner auch pharmazeutische Formulierungen aus einem Benzothienylglycylamidocephalosporin-Derivat der Formel (I) oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz hiervon in Verbindung mit einem pharmazeutischen Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff hierfür. Bevorzugt sind hierbei zur oralen Verabreichung geeignete Formulierungen.

Eine weitere Ausführungsform ist auf ein Verfahren zur Behandlung von Bakterieninfektionen bei Tieren gerichtet, das darin besteht, daß man dem jeweiligen Tier eine wirksame Menge einer antibakteriellen Verbindung der Formel

(I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon verabreicht. Ein bevorzugtes Verfahren dieser Art besteht in einer oralen Verabfolgung eines solchen Benzothienylglycylcephalosporin-Derivats zur Behandlung von Erkrankungen, die durch grampositive Mikroorganismen verursacht

35 werden.

Zur Erfindung gehört ferner ein Verfahren zur Herstellung

_ 5 -

einer Verbindung der Formel (I), das dadurch gekennzeichnet ist, daß man (A) eine Verbindung der Formel (II)

⁵ ^k /\

R⁴ · · · * ·>—ψ ψ

COCR⁶ 10

mit einem Acylierungsmittel der Formel (III)

B R² \ / N (III)

15 ' ₁ I

R¹-C-C-OH

I Il

AO

oder einem aktivierten Derivat hiervon, worin A, B, R , R , R , R und R wie oben definiert sind, acy- ^ liert und gegebenenfalls eventuell vorhandene Amino- oder Carboxyschutzgruppen entfernt,

(B) eine geschützte Säure der Formel (I), worin R für eine Carboxyschutzgruppe steht, deblockiert und so eine Verbindung der Formel (I) bildet, worin R Was-

25 serstoff ist,

(C) eine Aminoschutzgruppe R von einer Verbindung der

Formel (I) entfernt und so eine Verbindung der Formel (I) bildet, worin R Wasserstoff ist,

(D) falls man eine Verbindung herstellen möchte, worin R und R zusammen eine Gruppe der Formel

V^L

bilden, eine Verbindung der Formel (I), worin R und R jeweils Wasserstoff sind, mit einem Keton der Formel

M-C-L

Il

worin M und L wie oben definiert sind, umsetzt, oder 5

(E) eine Verbindung der Formel (I), worin A und B zusam-

2 men eine Doppelbindung bilden und R Hydroxy oder Methoxy ist, reduziert und so eine Verbindung der Formel"

(I) bildet, worin A, B und R Wasserstoff sind, und

(F) gewünschtenfalls, eine Verbindung der Formel (I) in ein

Salz überführt oder

(G) gewünschtenfalls ein Salz einer Verbindung der Formel (I) in das freie Amin oder die Säure überführt.

In den obigen Formeln steht R für eine 3-Benzothienyl-

15 , _ . gruppe der Formel

oder für eine 3-(4,5,6,7-Tetrahydrobenzothienyl)gruppe der Formel ..'-..

25 /\

a 4 X*

I Ii

Diese Benzothienyl- und Tetrahydrobenzothienylgruppen können unsubstituiert sein, beispielsweise dann, wenn R. und

R jeweils Wasserstoff sind, monosubstituiert sein, bei-

7

spielsweise dann, wenn einer der Substituenten R oder R Wasserstoff ist und einer eine andere Bedeutung als Wasserstoff hat, oder disubstituiert sein, beispielsweise dann,

7 8

wenn R und R jeweils etwas anderes als Wasserstoff sind.

R kann sich in den Stellungen 2, 4, 5, 6 oder 7 des bi-

1 .78·

cyclischen Ringsystems befinden. R und R bedeuten definitionsgemäß unter anderem C,-C -Alkyl, C₁-C.-Alkoxy, Halogen, C,-C.-Alkanoylamino und C,-C -Alkylsulfonylamino. Der Ausdruck C₁-C_A~Alkyl umfaßt bekanntlich sowohl geradketti-1 .4 *

ge als auch verzweigtkettige Niederalkylgruppen.. wie Methyl, Ethyl, Isopropyl, n-Propyl, Isobutyl oder t-Butyl. In ähnlicher Weise bezieht sich C,-C.-Alkoxy auf Niederalkylgruppen, die über ein Sauerstoffatom an den bicyclischen

Benzothienyl- oder Tetrahydrobenzothienylring gebunden 10

sind. Zu Beispielen fur C-. -C .-Alkoxygruppen gehören Meth-.

oxy, Ethoxy, n-Propoxy, n-Butoxy und Isobutoxy. Der Ausdruck Halogen bezieht sich auf Fluor, Chlor, Brom und Iod. Zu bevorzugten Halogengruppen gehören Chlor und Fluor.

15 7 8

R und R bedeuten ebenfalls C,-C -Alkanoylamino oder C, — C.-Alkylsulfonylamino. Zu typischen Alkanoylaminogruppen gehören Formylamino, Acetylamino und Isobutyrylamino. Typische C,-C.-Alkylsulfonylaminogruppen sind Methylsulfonylamino, Ethylsulfonylamino und n-Butyl,sulfonylamino.

7 8 Befinden sich R und R an benachbarten Kohlenstoffatomen, dann können sie zusammen eine Methylendioxygruppe bilden, nämlich beispielsweise einen Substituenten R , wie · ··

• β

V 'V

R bedeutet einen Substituenten am Glycylstickstoffatom, wie beispielsweise Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe. Die Angabe Aminoschutzgruppe bezieht sich auf irgendwelche bekannte Substituenten, die sich an einem Aminostickstoffatom befinden können und die sich gewünschtenfalls leicht abspalten lassen. Solche Schutzgruppen werden oft während der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet, und dienen zur Verbesserung der

Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln und Verminderung der Wahrscheinlichkeit unerwünschter Nebenreaktionen, zu denen es infolge der Anwesenheit einer freien Aminogruppe

kommt. Die Verbindungen, bei denen R eine Schutzgruppe ist, dürften zwar erwartungsgemäß eine biologische Wirksamkeit aufweisen, doch dürften die Verbindungen biologisch

2 am wirksamsten sein, bei denen R Wasserstoff ist. Dxe

2 Verbindungen, worm R eine Aminoschutzgruppe ist, eignen sich in erster Linie als Zwischenprodukte zur Synthese der bevorzugteren freien Aminoverbindungen.

Die genaue Art der Aminoschutzgruppe ist erfindungsgemäß nicht kritisch, und es lassen sich alle bekannten Schutzgruppen verwenden. Typische Aminoschutzgruppen werden von J.W. Barton in "Protective Groups in Organic Chemistry", J.F. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y. (1973), Kapitel 2 und von Greene in "Protective Groups in Organic Synthesis", John'Wiley and. Sons, New York, N.Y. (1981), Kapitel 7, beschrieben. Beide Literaturstellen werden hiermit im Zusammenhang mit erfindungsgemäß geeigneten Aminoschutzgruppen eingeführt.

Zu den am häufigsten verwendeten Aminoschutzgruppen gehören C,-C,_Q-Alkanoylgruppen, wie Formyi, Acetyl, Chlorace-

^° tyl, Dichloracetyl, Propionyl, Hexanoyl, 3,3-Diethylhexanoyl oder i'-Chlorbutyryl, C-, -C, --Alkoxycarbonylgruppen und C₅-C,^-Aryloxycarbonylgruppen, wie t-Butoxycarbonyl, Benzyloxycarbonyl, Allyloxycarbonyl, 4-Nitrobenzyloxycarbonyl und Cinnamoyloxycarbonyl, Halogen-C, -C-, „-alkoxycarbonyl, wie 2, 2 , 2-Trichlorethoxycarbonyl, und C-, -C, -Arylalkylgruppen und Alkenylgruppen, wie Benzyl, Phenethyl, Allyl oder Trityl. Andere herkömmlich verwendete Aminoschutzgruppen sind aus ß-Ketoestern, wie Methyl- oder Ethylacetoacetat, hergestellte Enamine.

R kann in obigen Formeln zusätzlich zur Bedeutung Wasserstoff oder Aminoschutzgruppe zusammen mit R ein Ringsy-

_ 9 stem bilden, wodurch sich Verbindungen der Formel

COOFf

ergeben, worin R , R , R , R , M und L wie oben definiert sind. Typisch für diese Verbindungen sind die Acetonide, beispielsweise Verbindungen, worin M und L jeweils Methyl sind. Solche Verbindungen eignen sich besonders als antibakterielle Mittel mit langanhaltender Wirksamkeit..

R ist in obiger Formel Wasserstoff, ein Säureadditionssalzkation, wie Ammonium, oder ein Alkalimetallkation, beispielsweise Lithium, Natrium oder Kalium, oder eine Carboxyschutzgruppe. Der Ausdruck "Carboxyschutzgruppe" bezieht sich auf die bekannten Gruppen, die gewöhnlich zur Blockierung oder zum Schutz der Carbonsäurefunktion eines Cephalosporinmoleküls während chemischer Umsetzungen an anderen funktionalen Stellen im Molekül verwendet werden und die sich gewünschtenfalls durch Anwendung üblicher Techniken, wie durch Hydrolyse oder Hydrogenolyse, leicht entfernen lassen. Zu typischen Carboxyschutzgruppen gehören die Gruppen, wie sie von E..Haslam in "Protective Groups in Organic Chemistry", J.F. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y. (1973), Kapitel 5 und von Greene in "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y. (1981), Kapitel 5, beschrieben werden, und diese Literaturstellen werden hiermit eingeführt. Zu Beispielen für gewöhnlich verwendete Carboxyschutzgruppen gehören C,-C,„-Alkylgruppen, wie Me-

- ίο -

thyl, t-Butyl oder Decyl, Halogen-C,-C₁₀-alky1, wie 2,2,2-Trichlorethyl oder 2-Iodethyl, C,.-C, ^-Arylalkyl, wie Benzyl, 4-Methoxybenzyl, 4-Nitrobenzyl, Triphenylmethyl oder Diphenylmethyl, C,-C-. „-Alkanoyloxymethvl, wie Acetoxyme-

thyl oder Propionoxymethyl, und andere Gruppen, wie Phenacyl, 4-Halogenphenacyl, Allyl,DimethylalIyI, Tri(C,-Chalky! )silyl, wie Trimethylsilyl, ß-p-Toluolsulfonylethyl, ß-p-Nitrophenylthioethyl, 2,4,6-Trimethylbenzyl, ß-Methylthioethyl, Phthalimidomethyl, 2,4-Dinitrophenylsulfenyl oder 2-Nitrobenzhydryl.

Die erfindungsgemäßen Benzothienylglycylcephalosporin-Derivate können durch mehrere Verfahren hergestellt werden. Ein bevorzugtes Verfahren besteht in einer Umsetzung eines 7-Aminocephalosporinkerns der Formel (II) mit einer Benzothienylglycylverbindung der Formel (III) oder einem aktivierten Derivat hiervon nach folgendem Reaktionsschema:

1 It . HsM. / \

ÖöOR^s (III)

Hierin sind A,- B, R¹, R², R⁴, R⁵'und R⁶ wie oben definiert. Zu typischen Benzothienylglycinderivaten, die. normalerweise bei solchen direkten Kupplungsreaktionen verwendet werden, gehören die Verbindungen der folgenden Formeln

30 .

_e /Λ 9 ⁴

IJ^ oder

R^a 7

7 8 2 worin R , R , R und Y folgende Bedeutungen haben:

H H H

H 5-Cl · H

6-OCH-

2-OCH₃

7-OCH₂CH₃

4-0CH₃

2-Cl 2-Br 4-F

7-CH₃

7-1

4-CH₃ 2-CH₃ 7-CH₂CH₃

H H

H H H

H H H

H 4-Cl

5-Br

5-OCH₃ 6-NO

H •H

4-Acetylamin

H 5-CH₃CH₃

H 6-F

6-Methylsulfonylamino

5-Cl H

Chloracetyl Fcrmyl H

Formyl

Trichloracetyl t-Butoxycarbonyl

4-Chlorbutyryl t-Butoxycarbonyl

Benzyl

Tr ime thylsiIy1 p-Nitrobenzyl

Acetyl

Benzyloxycarbonyl t-Buty1oxycarbony1 AlIyIoxycarbony1

2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl

Formyl Acetyl Benzoyl

AlIyIoxycarbony1

-C=CHCOOCH j

CH₃

OH Cl

Cl (als Hydro- chlorid)

OCHO OH OH

OH CI

Br

OCHO OCOCH₃ OH Br Cl OH Cl

Br (Hydrobromid)

Cl

OH ' " HCHO Cl (Hydrochlorid)

OCOCH₃ Cl

Die Angabe aktiviertes Derivat bezieht sich auf ein Derivat, das die Carboxyfunktion des Acylierungsmittels der Formel (III) gegneüber einer Kupplung mit einer primären Aminogruppe reaktionsfähig macht, so daß die Amidbindung gebildet wird, die die Acylseitenkette an den Kern bindet, Geeignete aktivierte Derivate, Verfahren zu ihrer Herstel-

lung und ihre Anwendung als Acylierungsmittel für ein primäres Amin sind dem Fachmann geläufig. Bevorzugte aktivierte Derivate sind (a) Säurehalogenide (beispielsweise Säurechloride oder Säurebromide) oder (b) Alkanoyloxyderivate, wie Formyloxy- oder Acetoxymischanhydride (beispielsweise Y=HCHO oder COCH ). Zu anderen Methoden für eine Aktivierung der Carboxyfunktion gehört eine Umsetzung der Carbonsäure mit einem Carbodiimid (beispielsweise N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid oder N,N'-Diisopropylcarbodiimid) unter Bildung eines reaktionsfähigen Zwischenprodukts, das im Reaktionsgemisch mit der 7-Aminogruppe umgesetzt wird. Diese Reaktion wird später noch näher beschrieben.

Die Benzothienylgylcinderivate sind entweder im Handel erhältlich oder durch Verfahren zugänglich, wie sie dem organischen Chemiker allgemein bekannt sind. Die GB-PS 1 399 089 beschreibt beispielsweise die Synthese von 3-Benzothienylglyöxylsäuren und -oximen,_und letztere lassen sich ohne weiteres zu Benzothienylglycinen umwandeln.

In US-PS 3 976 680 wird ein Verfahren zur Herstellung optisch reiner Benzothienylglycine beschrieben. Zur Herstellung von Benzothienylglycxnderivaten lassen sich alle diese Verfahren verwenden. Ein hierzu bevorzugter Synthseweg besteht jedoch in einer Umsetzung eines Benzothiophens oder eines Tetrahydrobenzothiophens mit einer CX-Hydroxyglycinverbindung in Gegenwart von Trifluoressigsäure. Dieses Verfahren ergibt in hoher Ausbeute direkt ein 3-Benzothienylglycin oder ein 3-Tetrahydrobenzothienylglycin, das sich zur Herstellung der erfindungsgemäßen

30 Verbindungen verwenden läßt.

Genau so wie die als. Ausgangsmaterialien benötigten Benzothienylglycine sind auch die zur Synthese der erfin- ' dungsgemäßen Verbindungen erforderlichen Cephalosporinkerne ohne weiteres erhältlich oder unter Anwendung bekannter Verfahren herstellbar. Die 3-Halogencephalosporinkerne können beispielsweise durch die in US-PS

3 925 372 beschriebenen Verfahren hergestellt werden, 3-Methylcephalosporine sind durch Ringerweiterung von Penicillinsulfoxiden und anschließende Abspaltung der Seitenketten erhältlich. Der 3-Vinylcephemkern läßt sich nach 5

dem in US-PS 3 994 884 beschriebenen Verfahren herstel- -

len.

Typische Cephalosporinkerne der Formel (II), die zur Synthese erfindungsgemäßer Verbindungen verwendet werden können, gehen aus folgender Aufstellung hervor.

	HaN	Γ	A	R6
			/ \	H
			*	t-Butyl
			COOR5	p-Nitrobenzyl
Δ. R*			R5	Methyl
H			CH3	H
H			CH3	2,2,2-Tr'ichlor
H			Cl	ethyl
CH3°			H	Benzyl
CH3S			CH3	Allyl
H				Trimethylsilyl
				t-Butyl
H			-CH=CH2	Na
H			OCH3
CH3O			Br
CH3S			H
H		T
\

Die Kupplung eines Benzothienylglycinderivats mit einem 7-Aminocephalosporinkern läßt sich unter Anwendung üblicher Acylierungstechniken erreichen. Hierzu kann man beispielsweise ein Benzothienylglycylacylierungsmittel, wie das Säurehalogenid, oder ein Alkanoyloxyderivat, wie ein Formyloxy- oder Acetoxyanhydrid, mit einem Cephalosporin-

kern unter Anwendung herkömmlicher Acylierungsbedingungen umsetzen. Während solcher Acylierungsreaktionen ist

es im allgemeinen bevorzugt, daß R eine Aminoschutzgruppe ist und R eine Carboxyschutzgruppe bedeutet. Durch diese Schutzgruppen sollen unerwünschte Nebenreaktionen minimal gehalten und die Löslichkeitseigenschaften der jeweiligen Reaktanten verbessert werden.

Zur Durchführung der Acylierungsreaktion vereinigt man im allgemeinen etwa äquimolare Mengen eines Benzothienylglycylacylierungsmittels der Formel (III) (nämlich eines -^:" Säurehalogenids oder eines gemischten Säureanhydrids) mit dem 7-Aminocephalosporinkern. Die Acylierungsreaktion wird normalerweise in einem wechselseitigen Lösungsmit-

tel, wie Benzol, Chloroform, Dichlormethan, Toluol, N,N-Dimethylformamid oder Acetonitril, durchgeführt und ist gewöhnlich nach etwa 1 bis etwa 12 Stunden beendet, wenn man bei einer Temperatur von etwa -2O⁰C bis etwa 60⁰C arbeitet. Gewünschtenfalls kann man bei dieser Umsetzung

^O als Säurefänger eine etwa äquimolare Menge einer Base, wie Pyridin, Triethylamin, Anilin oder Natriumcarbonat, verwenden. Das Produkt kann aus dem Reaktionsgemisch durch Entfernung des Lösungsmittels, beispielsweise durch Verdampfung unter verringertem Druck, isoliert werden und unter Anwendung üblicher Techniken, wie Chromatographie, Kristallisation, Lösungsmittelextraktion oder sonstiger verwandter Methoden, erforderlichenfalls weiter gereinigt werden.

Ein anderes und bevorzugtes Verfahren zur Kupplung eines Benzothienylglycinderivats an einen 7-Aminocephalosporinkern macht von einem Kupplungsreagens Gebrauch, wie es bei Peptidsynthes.en üblich ist. Zu typischen verwendbaren Kupplungsreagenzien gehören Carbodiimide, wie N,N'- Diethylcarbodiimid, Ν,Ν-Diisopropylcarbodiimid und N,N-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), Carbonylkupplungsreagenzien, wie Carbonyldiimidazol, Isoxazoliniumsalze, wie

N-Ethyl-5'-phenylisoxazolinium-3'-sulfonat, und Chinolinverbindungen, wie N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin (EEDQ).

Zur Kupplung eines 7-Aminocephalosporinkerns mit einem Benzothienylglyoinderivat unter Verwendung eines Peptid- kupplungsreagens vereinigt man im allgemeinen etwa äquimolare Mengen aus einer 7-Aminoceph-3-em-4-carbonsäure, einem Benzothienylglycin und einem Peptidkupplungsreagens

nach folgendem Reaktionsschema miteinander:

R⁴'

T" ^ ^v" ^T " T [ Τ kupplungs-

I NHR

15 ^mi" ^\/ ^mittel

ODOR⁶

20 R" j

iooR⁽

Hierin sind R , R , R , R und R wie oben definiert.

Während solcher Kupplungsreaktionen ist R vorzugsweise eine Aminoschutzgruppe und R vorzugsweise Wasserstoff oder eine Carboxyschutζgruppe. Die eventuell vorhandenen Schutzgruppen lassen sich dann durch übliche Verfahren entfernen, wodurch man zum jeweiligen antibiotischen Wirkstoff gelangt.

Die Kupplungsreaktion wird normalerweise in einem gegenseitigen Lösungsmittel, wie Dichlormethan, Aceton, Wasser, Acetonitril, Ν,Ν-Dimethylformamid oder Chloroform durchgeführt und ist gewöhnlich innerhalb von etwa 10 bis etwa 90 Minuten beendet, wenn bei einer Temperatur von etwa -20°C bis etwa 6 0⁰C gearbeitet wird. Längere

Reaktionszeiten schaden dem Produkt nicht und können gewünschtenfalls angewandt werden. Das Produkt, nämlich ein Benzothienylglycylcephalc— sporin-Derivat, läßt sich ohne weiteres durch Entfernung des Reaktionslösungsmittels isolieren, beispielsweise durch dessen Verdampfung unter verringertem Druck. Das Produkt kann auch .durch andere übliche b

Verfahren gereinigt werden, wie Säure-Base-Extraktion, Chromatographie, Salzbildung und dergleichen.

Ein anderes Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen macht Gebrauch von einem Benzothienyloxim der Formel

A 0

1 ' "

R-C-C-OH

N-B

' 2

15. R

oder einem aktivierten Derivat hiervon, worin R wie oben definiert ist, A. und B zusammengenommen eine Bindung bil-

2 2

den und R Hydroxy oder Methoxy ist. Steht R für Hydroxy, dann ist dieser Substituent während der Kupplungsreaktion im allgemeinen durch Trimethylsilyl, p-Nitrobenzyl oder eine ähnliche Hydroxyschutzgruppe geschützt. Solche Benzothienyloximderivate lassen sich durch alle oben beschriebenen Verfahren an einen Cephalosporinkern kuppeln, wodurch man eine Verbindung der folgenden Formel erhält

30 · I I ! I₅

OH (oder CCH₃) J·—A . k-R°

COOR³

worin R , R , R und R wie oben definiert sind. Diese Verbindungen sind als Zwischenprodukte geeignet, weil sie sich durch übliche Methoden ohne weiteres unter Bildung

d.er bevorzugten erfindungsgemäßen Benzothienylgylcylverbindungen reduzieren lassen. Zusätzlich sind die Oxime der obigen Formel, worin R Wasser hiervon wertvolle Antibiotika.

obigen Formel, worin R Wasserstoff ist, oder die Salze

Verbindungen, die an der Benzothienylgycyl- oder der Tetrahydrobenzothienylglycyl-Seitenkette eine Nitrogruppe tragen, können durch Abwandlung in andere erfindungsgemäße Verbindungen überführt werden. So läßt sich beispielsweise der Nitrosubstituent durch übliche Reduktions- oder Hydrierungsverfahren in das entsprechende aminosubstituierte Benzothienylglycylcephal.osporin-Derivat überführen, aus dem sich gewünschtenfalls durch Acylierung mit einem C,-C.-Alkanoylhalogenid oder -anhydrid oder einem C-, -C -Alkyl^xo sulfonylhalogenid das entsprechende erfindungsgemäße Alkanoylamino- oder Alkylsulfonylaminobenzothienylglycylamidocephalosporin herstellen läßt.

In ähnlicher Weise können die erfindungsgemäßen Verbindüngen, worin R und R zusammengenommen die Gruppe

bilden, hergestellt werden, indem man ein Keton der Formel

0 .

M-C-L

mit einer erfindungsgemäßen Verbindung, worin R und R jeweils Wasserstoff sind, im allgemeinen in Gegenwart einer katalytischer. Menge einer Säure, wie Methansulfonsäure oder dergleichen, umsetzt. Die so hergestellten cyclischen Verbindungen, beispielsweise die bevorzugten Acetonide, worin M und L jeweils Methyl sind, sind besonders wertvolle orale Antibiotika, da sie ihre Wirksamkeit über eine lange Zeitdauer beibehalten.

Andere erfindungsgemäße Verbindungen, von denen zu erwarten ist, daß sie Antibiotika mit besonders langanhaltender

Wirksamkeit sind, sind die Verbindungen, worin R eine Alkanoyiaminoschutzgruppe ist, wie Formyl oder Acetyl. SoI-

ehe Verbindungen werden zweckmäßigerweise einfach dadurch hergestellt, daß man ein Benzothienylglycylamido-

cephalosporin, worin R Wasserstoff ist, mit einem C-,-C,_Q-Alkanoylacylierungsmittel, beispielsweise mit Formylchlorid oder Essigsäureanhydrid, umsetzt. Diese N-acylierten Produkte dürften nicht nur direkt als Antibiotika, sondern auch als sogenannte Vorarzneimittel wirksam sein, da sie im Tiersystem zum Stamm Benzothienylglycylderivat hydrolysiert werden.

Die erfindungsgemäßen Cephalosporine enthalten in ihren Benzothienylglycylseitenketten ein asymmetrisches Kohlenstoffatom, falls A beispielsweise Wasserstoff ist, so daß diese Verbindungen in Form optischer Isomerer vorkommen, nämlich der D- und der L-Isomeren der Seitenketten. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können als D,L-Gemisch zur Behandlung von Bakterieninfektionen bei Tieren- verwendet werden oder die Isomeren lassen sich gewünschtenfalls auftrennen und einzeln einsetzen. Beide Isomere sind zwar wirksame antibakterielle Mittel, doch dürfte ein Isomeres stärker als das andere wirksam sein, nämlich das D-Isomere, welches daher erfindungsgemäß bevorzugt ist.

Eine Auftrennung oder Auflösung der Isomeren läßt sich durch Anwendung üblicher Verfahren entweder am erfindungsgemäßen Cephalosporinprodukt oder an der als Ausgangsmaterial verwendeten Benzothienylglycinseitenkette erreichen. Zur Auftrennung der Isomeren bedient man sich im allgemeinen einer Hochleistungschromatographie, enzymatischen Auflösung, Kristallisation oder chemischen Auflösung. Ein be-

35. sonders bevorzugtes Verfahren zur Bildung von D-(3-Benzothienyl)glycin besteht in einer Umsetzung des D,L-Gemisches mit Benzaldehyd und optisch aktiver Weinsäure nach

·*· dem in US-PS 3 976 680 beschriebenen Verfahren. Ein anderes bevorzugtes Verfahren zur Auftrennung besteht im Einsatz eines Arnidohydrolaseenzyms für eine N-Acyl-L-aminosäure, wie dies beispielsweise in US-PS 3 386 888 beschrie-

5 ben ist.

Bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind, wie bereits

oben erwähnt, die Verbindungen,.bei denen R in obiger Formel Wasserstoff ist. Diese Verbindungen sind primäre Ami-' ne und weisen daher einen basischen Charakter auf, so daß sie durch Reaktion mit Säuren ohne weiteres Salze bilden. Die pharmazeutisch annehmbaren Salze sind zur Behandlung von Bakterieninfektionen bevorzugte Salzformen. Unter pharmazeutisch annehmbaren Salzen werden solche Salze verstanden, die sich bei der chemotherapeutischen Behandlung warmblütiger Tiere verwenden lassen. Zu typischen Säuren, die gewöhnlich zur Bildung von Salzen verwendet werden, gehören anorganische Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure, und auch organische Säuren, wie Essigsäure, Trifluoressigsäure, Bernsteinsäure,.Methansulfonsäure, Oxalsäure oder p-Toluolsulfonsäure. Die erfindungsgemäßen Verbindungen,

2 6

bei denen sowohl R als auch R Wasserstoff sind, bilden leicht ein inneres Säureadditionssalz, nämlich ein Zwitterion.

Bei den Verbindungen, bei denen R Wasserstoff ist, handelt es sich um 4-Carbonsäuren. Solche Verbindungen sind sauer und bilden leicht Salze mit organischen und anorganischen Basen. Zu pharmazeutisch annehmbaren Salzen gehören daher auch diese Basenadditionssalze.

Beispiele für typische Klassen von Benzothienylglycylcephalosporinen und spezielle Verbindungen gemäß der Erfindung gehen aus folgender Aufstellung hervor.

y. J

Bevorzugte Verbindungen der Formeln

-CH-C-N

«3er

COOR

"11—^Jf—QH-C-NH

NHs R ' " t—

COOR⁶

H	H	H
H	H	H
H	H-	H
H	4-Cl	H
2-OH	H	CH3O
4-Br	7-CH3	H
2-CH3	6-OCH2CH3	CH3S
5-F	6-F	H
H	6-NO2	H
H	6-NH2	H
H	6-NHCOCH3	CH3O

CH3	H
Cl	- H
CH=CH2	H
H	Na
CH2OCH3	H
OCH3	H
Br	NH
CH3	H
3	K+
CH3	H
F	H

ι-Η (D

>ι X! 4-1 O

CQ -P

I Ch

CN

S3 U

O ·Η Ό

U U U CN

Γ-Η

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	CO	CO	U	CO	CO <
CN	S3	S3		S3	S3 tt!
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U	U

W-4 ί*Η

CO	co
S3	S3
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ES

CN

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U γΗ CN U S3 S3

CN O I

UO

U O S3 S3

co co r~i S3 S3 OUU I I I

Verbindungen der Formeln

H-C—NK

5t fl

oder J₈ ÄHR

H-C—NK

^0/ ί

OOR⁶

H H	H H	C00-t-Butyl COOCH2CH=CH2
H	6-OCH3	COCH3
2-Cl	6-OCH3	COOCH2CCl3
4-CH3	H	CH20
5-Br	6-Br	C(0)3
H	6-OH	CHO
6,7-Methylen- dioxy		Si(CILJ0

CII₃O

CH3	H
Cl	H
H	H
OCH3	CH2CCl3
CH2OCH3	p-Nitrobenzyl
Br	CH3
CH=CH2	CH2OCOCH3

Si(CH₃)₃

COOCHs-<

>-N0i

CH,

Verbindungen der Formeln

<y

COOR

oder

0^:

\ ι

:00R"

2-Cl 2-Br 4-C1 5-NH₂ 5-NIiCOCH-

6-F 7-OCH₃

H 5-Cl

5,6-Methylendioxy

OH

OCH.

OH

OCH.

OCH-

OH

OCH,

OCH,

OH

OCH,

OCH,

II

CH₃O

CH₃S

II

CH3	H
Cl	H
CH2OCH3	H
H	t-Butyl
CH=CH2	p-Nitrobenzyl
F CH3	CH^CCl^ Na+
CH3	CH3
Cl	CH2CH=CH2
OCH3	CH(Cl)2
CH„	H

Verbindungen der Formeln

l—k

OOR

/³X

"Ή

H	H	CH3
H	5-F	CH3
H	6-OCH3	CH3
2-Cl	H	CH3
2-OCH3	5-CH3	CH2CH

6-F

CH, CH, CH, CH, CH, CH,

H H	CH3 Cl	H Na+
CH3O	OCH3	t-Butyl
CH3S	H	H
H	CH3	CH(O)2
H	CH=CH2	CH2CH=CH2

- 25 "*" Ausf ührungsbeispiele:

Die Erfindung wird im folgenden anhand von Beispielen weiter erläutert.

Herstellung 1

3-Benzothienylglycin -,Q A. Herstellung des Oxims

Eine Lösung von 97 g 1-Benzothiophen (Thianaphthen) in 70 ml Essigsäureanhydrid wird auf 60⁰C erwärmt und unter Rühren in einem Anteil mit 17,5 ml Bortrifluoriddiethyl- !_ etherat versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 90 Minuten gerührt und dann zu 300 ml Wasser gegeben. Das wäßrige Gemisch wird mehrmals mit Diethylether extrahiert, und die Etherextrakte werden vereinigt und zur Trockne eingeengt, wodurch man nach Destillation zu 69 g 3-Acetylbenzothio-

₂₀ Phen gelangt.

11 g des obigen 3-Acetylbenzothiophens werden in 80 ml Pyridin gelöst und auf 60⁰C erwärmt. Das Reaktionsgemisch wird anteilweise mit 9,92 g Selendioxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird auf 120⁰C erwärmt und dann auf 90⁰C abgekühlt und 45 Minuten bei dieser Temperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann zu 80 ml Wasser gegeben, und das als Lösungsmittel vorhandene Pyridin wird durch Verdampfung entfernt. Das wäßrige Gemisch wird mit Phosphorsäure auf pH 2,0 angesäuert, und das Produkt wird in Diethylether extrahiert. Durch Entfernung des Lösungsmittels durch Verdampfung und Kristallisation des Produkts aus Benzol erhält man 3,85 g 3-Benzothienylglycolsäure mit einem Schmelzpunkt von 89 bis 91°C.

Eine Umsetzung der obigen Verbindung mit Hydroxylamin in Methanol ergibt 3,9 3 g Oi-Hy dr oxy imino-CC-( 3-benzothienyl) -

essxgsaure.

Zur Verwendung als Zwischenprodukte bei der Synthese erfindungsgemäßer Verbindungen werden auch die folgenden Verbindüngen hergestellt:

oC-Methoxyimino-a-(6-fluor-3-benzothienyl)essigsäure,

Schmelzpunkt = 150 bis 151⁰C,

&-Methoxyimino-&-(4-fluor-3-benzothienyl)essigsaure, (X-Methoxyimino-CX-( 5-f luor-3-benzothienyl) essigsäure., OS-Methoxyimino-0ü-(7-f luor-3-benzothienyl)essigsaure, Ethyl-a-hydroxyimino-Ct-(4-methoxy-3-benzothienyl)acetat,

Ausbeute = 49 % (1,1 g) ,

Ethyl-CC-oxo-CL- ( 6-nitro-3-benzothienyl) acetat, Schmelz-

¹⁵ punkt = 158 bis 160⁰C,

Ethyl-Oi-oxo-CC- ( 5-nitro-3-benzothienyl) acetat, Schmelzpunkt = 198 bis .200⁰C,

Ethyl-06-OXO-Oi-( 4"-nitro-3-benzothienyl)acetat, Schmelzpunkt =120°C,

Ethyl-CX-oxo-ot-( 7-nitro-3-benzothienyl) acetat, Schmelzpunkt = 140°C,

Od-Methoxyimino-Oi- ( 6-methoxy-3-benzothienyl) essigsaure, Ausbeute = 90 %, Ethyl-06-hydroxyimino-c£-( 5-chlor-3-benzothienyl)acetat, Ethyl-Oi-methoxyimino-ci- ( 4-chlor-3-benzothienyl) acetat und .

Ethyl-06-methoxyimino-CX- ( 6-chlor-3-benzothienyl) acetat.

B- Reduktion des Oxims 30

Eine Suspension von 4,0 g 5 %-igem Palladium-auf-Kohle in 200 ml Methanol wird unter Rühren in einem Anteil mit 3,93 g <X.-Hydroxyimino-CC-( 3-benzothienyl) essigsaure versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden bei 24°C unter Wasserstoff bei einem Druck von etwa 4,2 bar gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann durch Zusatz von 21 ml In Chlorwasserstoff säure verdünnt und 5 Minuten weitergerührt. Der

pH-Wert des Reaktionsgemisches wird mit konzentriertem Na-. triumhydroxid auf 4,3 eingestellt, und der gebildete Niederschlag wird gesammelt und an der Luft getrocknet, wodurch man zu 1,35 g 3-Benzothienylglycin mit einem Schmelzpunkt von 195 bis 198⁰C gelangt.

Die verschiedenen oben erwähnten substituierten Oxime werden durch katalytische Hydrierung oder durch Umsetzung mit Zink und einer Säure, wie Ameisensäure, reduziert, wodurch man die entsprechenden substituierten 3-Benzothienylglycine erhält.

Herstellung 2 15 Ethyl—'Ct-oxo-cC-i 6-amino-3-benzothienyl )acetat

Eine Suspension von 1,1 g 5 %-igem Pall.adium-auf-Kohle in 100 ml Ethanol wird unter Rühren bei einem Druck von 4,2. . bar Wasserstoff in einem Anteil mit einer Lösung von 1,1 g Ethyl-06-OXO-OiM 6-nitro-3-benzothienyl )'acetat in 25 ml Tetrahydrofuran versetzt. Das Reaktionsgemisch wird unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar 45 Minuten bei 25°C gerührt, worauf man das. Gemisch filtriert und das Lösungsmittel vom Filtrat verdampft, wodurch man Ethyl-o^- oxo-CC-{6-amino-3-benzothienyl)acetat erhält..Durch Umsetzung mit Methoxylamin und anschließende Hydrolyse und Hydrierung gelangt man zu {6-Amino-3-benzothienyl)glycine

Herstellung 3

N- { 3-Chlorpropylcarbonyl) -3-benzot.hienylglycin

Eine Lösung von 621 mg (3 mMol) 3-Benzothienylglycin in 15 ml Dichlormethan, die 0,92 ml (6,6 mMol) Triethylamin und 717 mg Chlortrimethyls-ilan enthält, wird unter Erwär

men auf 50⁰C 30 Minuten gerührt und dann auf 5°C abgekühlt. Das Reaktionsgemisch wird tropfenweise mit einer Lösung von 0,336 ml (3 irJVlol) 4-Chlorbutyrylchlorid in 5 ml Dichlormethan versetzt und nach erfolgter Zugabe noch eine weitere ° Stunde bei 5⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird auf 25⁰C erwärmt und eine weitere Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann zweimal mit je 10 ml Wasser gewaschen, getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft, wodurch man ein Öl erhält. Das Öl wird aus 0,7 ml Aceton und 2,7 ml Wasser kristallisiert und aus Ethylacetat umkristallisiert, wodurch man zu 150 mg N-(3-Chlorpropylcarbonyl)-3-benzothienylglycin mit einem Schmelzpunkt von 167 bis 168°C gelangt.

15 Herstellung 4

Methylacetoacetatenamin von Benzothienylglycin

Eine Suspension von 20,7 g (100 mMol) D,L-3-Benzothienylglycin in 375 ml Isopropanol wird in einem Anteil unter Rühren mit 3,9 3 g (100 mMol) Natriumhydroxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird eine Stunde auf Rückflußtemperatur erhitzt, auf etwa 50⁰C abgekühlt und durch Zugabe von 2,8 ml (26 mMol) Methylacetoacet.at in einem Anteil verdünnt. Das Reaktionsgemisch wird weitere 90 Minuten auf Rückflußtemperatur erhitzt, worauf man es auf 25⁰C abkühlt und 16 Stunden rührt. Der ausgefallene Feststoff wird durch Filtration gesammelt und an der Luft getrocknet, wodurch man zu 30,0 6 g (Ausbeute = 9 2 %) des Methylacetoacetatenamins von Natrium-D,L-3-benzothienylglycin gelangt.

NMR-Spektrum (DMSO-d₆): 6= 1,70 (s, 3H), 6=3,48 (s, 3H), δ = 4,2 (s, IH), δ = 7,1 bis 7,4 (m, 3H), δ = 7,7 bis 8,2 (m, 2H), δ = 9,62 (d, IH).

Ferner werden auch folgende aminogeschützte Benzothienylglycine hergestellt.

N-t-Butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin, Ausbeute = 92 %, N-Allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin, Ausbeute = 86 %, N-Chloracetyl-(3-benzothienyl)glycin, Ausbeute = 83 %,

N-(p-Nitrobenzyloxycarbonyl)-(3-benzothienyl)glycin, Aus-5

beute = 76 .%,

N-t-Butoxycarbonyl-(S-chlor-S-benzothienyl)glycin, Ausbeute = 66 %, N-t-Butoxycarbonyl-(5-methoxy-3-benzothienyl)glycin.

Die folgenden Herstellungen zeigen ein bevorzugtes Verfahren zur Bildung von Benzothienylglycinen.

Herstellung 5

N-Allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin

Eine Lösung von 5,15 g (29,4 mMol) DiL-N-Allyloxycarbonyl-CX-hydroxyglycin und 3,95 g (29,4 mMol) Benzo/b7thiophen in 40 ml Trifluoressigsäure wird 18 Stunden bei "22,5⁰C ge-

rührt. Das Reaktionsgemisch wird dann durch Verdampfung unter verringertem Druck zu einem Öl eingeengt, und das Öl wird in einem Gemisch aus 100 ml Ethylacetat und 100 ml Wasser gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt, und die wäßrige Schicht wird weitere zweimal mit je 50 ml fri-

^ΔΌ schem Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte werden vereinigt, mit Wasser gewaschen und dann zweimal mit je 100 ml 10 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat extrahiert. Die wäßrigen Extrakte werden vereinigt, zu 100 ml frischem Ethylacetat gegeben und durch Zusatz von konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,0 angesäuert. Die organische Schicht wird abgetrennt, und die wäßrige saure Schicht wird zweimal mit je 50 ml frischem Ethylacetat extrahiert. Die organischen Anteile werden vereinigt, getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft, wodurch man zu 7,55 g (Ausbeute = 88 %) N-Allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin gelangt.

Analyse für C₁₄H₁₃NO₄S

Berechnet: C 57,92 H 4,50 N 4,81 O 21,97 S 11,27 Gefunden: C 57,98 H 4,57 N 4,54 O 21,80 S 11,27

+

Massenspektrum M :Berechnet = 291, Gefunden = 291

pK -Wert (66 % wäßriges DMF): 5,70 • IR-Spektrum (KBr): 3313, 1711, 1683, 1543, 1420, 1312 cm"¹.

In ähnlicher Weise werden die folgenden Benzothienylgly-

10

eine hergestellt:

N-AlIyIoxycarbonyl-(5-methoxy-3-benzothienyl)glycin, N-Ethoxycarbonyl-(5-methoxy-3-benzothienyl)glycin, Ausbeute = 4,62g(21 %),

15

N-Ethoxycarbonyl-(5-benzoyloxy-3-benzothienyl)glycin (anschließend hydrolisiert zum N-Ethoxycarbonyl-(5-hydroxy-3-benzothienyl)glycin), N-Chloracetyl-(5-methoxy-3-benzothienyl)glycin.

Herstellung 6

D-{3-Benzothienyl)glycin

~'\ Eine Lösung von 4,3 g (19,4 mMol) des Methylesters von D,L-(3-Benzothienyl)glycin in 65 ml Acetonitril, die 2,6 ml (25,7 mMol) Benzaldehyd und 2,88 g (19,4 mMol) (-)-Weinsäure enthält, wird 10 Minuten in einem siedenden Wasserbad erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird auf 24⁰C abgekühlt und 26 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, und der Filterkuchen wird unter Vakuum bei 40⁰C getrocknet, wodurch man zu 6,0 95 g (Ausbeute = 8 5 %) des (-)-Weinsäuresalzes von D-(3-Benzothienyl)glycinmethylester mit einem Schmelzpunkt von 174 bis 176⁰C gelangt.

Das so gebildete Produkt wird in 250 ml Dichlormethan suspendiert, und das Gemisch wird zu 250 ml 5 %-igem wäßrigem (Gew./Vol.) Natriumbicarbonat gegeben. Das Gemisch

wird 10 Minuten gerührt, worauf man die organische Schicht abtrennt, mit frischem Wasser wäscht, trocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eindampft und so zu 3,42 g (Ausbeute = 98 %) D-(3-Benzothienyl)glycinmethylester ge-

langt

&25^ο ₌ __173/8o

Der so gebildete Ester (3,299 g, 14,93 mMol) wird in 13,7 ml 2,22n Natriumhydroxid gelöst. Das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten gerührt, wobei man die Temperatur durch periodisches Eintauchen in kaltes Wasser auf etwa 25⁰C hält. Das Reaktionsgemisch wird durch Zusatz einer 2n Chlorwasserstoff säure auf pH 4,6 angesäuert und durch Zugabe von etwa 100 ml Wasser verdünnt. Das wäßrige saure Gemisch wird während etwa 90 Minuten auf etwa 5⁰C gekühlt, worauf man den Niederschlag durch Filtration abtrennt und unter Vakuum bei 60⁰C trocknet. Auf diese Weise gelangt man zu 3,09 g (Ausbeute = 96 %) D-(3-Benzothienyl)glycin mit einem Schmelzpunkt von 203 bis 20 7°C. /^7⁵° ⁼ -182,6°.

Herstellung 7

Enzymatische Auflösung von D,L-3-Benzothienylglycin · .

Unter Befolgung des allgemeinen Verfahrens von US-PS 3 386 888 setzt man 10,0 g, D^-N-Chloracetyl-S-benzothienylglycin mit einer N-Acyl-L-aminosäureamidohydrolase um, die auf einer 3 χ 85 cm messenden chromatographisehen Säule immobilisiert ist. Die Chromatographie wird bei 37°C unter Elution mit 2000 ml eines 0,1 molaren Puffers aus Kaliumhydrogenphosphat vom pH 7,0, der 10 ml 0,1 molares Kobaltchlorid-hexahydrat enthält, durchgeführt, den man durch Zugabe von 5n Natriumhydroxid auf pH 7,08 einstellt. Die Fließgeschwindigkeit wird auf 1,13 ml pro Minute eingestellt, und die Chromatographie ist innerhalb von 28 Stunden und 15 Minuten beendet. Die

Fraktionen, die aufgrund einer Dünnschichtchromatographie und einer Aminosäureanalyse ein Produkt enthalten, werden vereinigt und durch Zusatz von konzentrierter Chlorwasserstoff säure auf pH 2,0 eingestellt. Die saure Lösung wird

mehrmals mit Ethylacetat extrahiert, worauf man die Extrakte vereinigt, mit Wasser wäscht, trocknet und zur Trockne einengt. Auf diese Weise erhält man 4,4 g D-N-Chloracetyl-3-benzothienylglycin

^⁷589 ⁼ ~^l22'°°' /^365 ⁼ -490,8°.

Herstellung 8

&-Methoxyimino-&-(6-methoxy-3-benzothienyl)essigsäure

Eine Lösung von Natrium-3-methoxythiophenoxid in 150 ml Ethanol (hergestellt durch Umsetzung von 14 g 3-Methoxythiophenol mit 5,94 g Natriummethoxid) wird unter Rühren tropfenweise während 10 Minuten mit 27,7 g Ethyl-2-met±ioxyijru\no-3-oxo-4-brombutyrat versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden bei 25°C gerührt, worauf man das Lösungsmittel durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt und so zu einem Öl gelangt. Das Öl wird in Ethylacetat gelöst und mehrmals mit Wasser gewaschen. Die organische Schicht wird getrocknet, und das Lösungsmittel wird durch Verdampfung entfernt, wodurch man 16,28 g Ethyl-2-methoxyimino-3-oxo-4-(3-methoxyphenylthio)butyrat erhält.

NMR-Spektrum (CDCl₃):.5 = 1,32 (t, 3H), 3,7 9 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 4,34 (q, 2H), 6,7 bis 7,3 (m, 4H).

Man gibt 5 g der obigen Verbindung zu 40 ml Methansulfonsäure und rührt die Lösung 15 Minuten bei 25°C. Das Reaktionsgemisch wird hierauf zu 400 ml Eiswasser gegeben, und das wäßrige Gemisch wird mehrmals mit Diethylether extrahiert. Die Etherextrakte werden vereinigt, mit Wasser und mit wäßrigem Natriumbicarbonat gewaschen, getrocknet und zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft, wodurch man

* 4,31 g Ethyl-cx-methoxy imino-Q¹-- ( 6-methoxy-3-benzothienyl) acetat erhält.

NMR-Spektrum (CDCl₃): 6 =.1/36 (t, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 4,3 (q, 2H), 6,8 bis 7,2 (m, 3H), 8,3 (d, IH)

Eine Lösung von 2,65 g der so hergestellten Verbindung in 5 0 ml Ethanol, die 3,6 ml 5n Natriumhydroxid enthält, wird 3,5 Stunden bei 25⁰C gerührt. Das Lösungsmittel wird dann durch Verdampfung und Bildung eines Öls entfernt,, das man in Ethylacetat und Wasser löst. Die wäßrige Schicht wird.

-^J . abgetrennt, und die organische Schicht wird mit wäßrigem Natriumbicarbonat extrahiert. Die wäßrigen Anteile werden vereinigt, mit In Chlorwasserstoffsäure auf pH 1,8 angesäuert und mit frischem Ethylacetat extrahiert. Der organische Extrakt wird getrocknet und eingeengt, wodurch man zu 1,39 g C<-Methoxyimino-<X-( 6-methoxy-3-benzothienyl) essigsaure gelangt.

NMR-Spektrum (DMSO-d,.): 5= 3,82 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 7,04 bis 8,41 (m, 4H).

Herstellung 9 Ot-Methoxyimino-<?*-( 6-f luor-3-benzothienyl) essigsäure

Eine Lösung von 25,60 g Ethyl-OC-{6-fluor-3-benzothienyl)-acetat in 100 ml Ethanol, die 107 ml 1-molares ethanolisches Natriumethoxid und 17,5 ml n-Butylnitrit enthält, wird etwa 20 Stunden bei 24⁰C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird durch Zusatz von 3 00 ml Ethanol und 9,2 ml konzentrierter Essigsäure verdünnt und eine weitere Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann eingeengt,, worauf man das Konzentrat mit Wasser verdünnt und das Produkt in

gg Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatlösung wird mit wäßrigem Natriumbicarbonat gewaschen, getrocknet und vom Lösungsmittel befreit, wodurch man nach Kristallisation aus η-Hexan und Diethylether zu 7,99 g Ethyl-Ct-hydroxyimi-

no-C£-(6-fluor-3-benzothienyl)acetat mit einem Schmelzpunkt von 168 bis 171°C gelangt. Es wird auch eine zweite Ernte von 10,25 g gewonnen. Ausbeute = 64 %.

Durch Umsetzung von 7,82 g der so hergestellten Verbindung mit 4,16 ml Dimethylsulfat und 5,53 g Kaliumcarbonat erhält man 3,59 g (48 %) Ethyl-&-methoxyimino-C<H6-fluor-3-benzothienyl)acetat mit einem Schmelzpunkt von 84,5 bis

Eine Lösung von 3,50 g Ethyl-C*-methoxyimino-0<.-( 6-f luor-3-benzothienyl)acetat in 75 ml Ethanol, die 40 ml 0,5n Natriumhydroxid enthält, wird 19 Stunden bei 24°C gerührt. Die Lösung wird dann auf ein Volumen von etwa 50 ml eingeengt und mit 50 ml Wasser versetzt. Die wäßrige Lösung wird mit Dichlormethan gewaschen, filtriert und dann durch Zusatz von 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 angesäuert. Der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt, wodurch man 3,02 g (95 %) C<.-Methoxyimino-#-{ 6-f luor- ^O 3-benzothienyl)essigsäure mit einem Schmelzpunkt von 150 bis 151°C erhält.

In ähnlicher Weise werden folgende Verbindungen hergestellt: 25

Cc-Methoxyimino-Ci- ( 4-fluor-3-benzothienyl) essigsäure, (X-Methoxyimino-C*·- ( 5-f luor-3-benzothienyl) essigsäure und a.-Methoxyimino-Ct- ( 7-f luor-3-benzothienyl) essigsäure.

30 Beispiel 1

p-Nitrobenzyl-7-/N-(3-chlorpropylcarbonyl)-3-benzothieny1/-glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 1,56 g (5 mMol) N-(3-Chlorpropylcarbonyl)-3-benzothienylglycin (hergestellt wie bei. der Herstellung 3 beschrieben) in 75 ml Acetonitril und 25 ml Tetrahydro-

furan, die 750 mg (5 mMol) Hydroxybenzotriazol-monohydrat enthält, wird bei 25°C gerührt und dabei in einem Anteil mit 1,24 g (6 mMol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid versetzt.

Das Reaktionsgemisch wird 2,5 Stunden gerührt und dann 5

filtriert. Das Filtrat wird in einem Anteil zu einer Losung von 1,65 g (5 mMol) p-Nitrobenzyl-T-amino-S-methyl-S-cephem-4-carboxylat in 50 ml Acetonitril gegeben, die 50 ml Tetrahydrofuran enthält. Das Reaktionsgemisch wird 17 Stunden bei 25⁰C gerührt, worauf man den gebildeten Niederschlag durch Filtration sammelt und so.zu 834,8 mg (Ausbeute = 27 %) p-Nitrobenzyl-7-/N-(3-chlorpropylcarbonyl)-3-benzothienyjVglycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat gelangt..

NMR-Spektrum (DMSO-d,): δ = 1,95 (m, 2H), 2,02 (br s, 3H), 2,30 (m, 2H), 3,2 bis 3,75 (m,. 4H), 5,12 (d, J=4,5 Hz₇ IH), 5,42 (s, 2H), 5,78 (dd, J=4,5 Hz, 8,1 Hz, IH), 6,09 (d, J=9Hz, IH), 7,4 bis 8,4 (m, 9H), 8,68 (d, J=9 Hz, IH), 9,38

(d, J=8,l Hz, IH). 20

Beispiel 2

p-^Nitrobenzyl-D,L-7-/N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat

25 . '

Eine Lösung von 3,86 g (10 mMol) D,L-N-p-Nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin (hergestellt wie in der Herstellung 4 beschrieben) und 2,60 g (10,5 mMol) N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin in 25 ml Acetonitril wird 5 Minuten bei 25°C gerührt und dann mit einer Lösung von 3,84 g (11 mMol) p-Nitrobenzyl-V-amino-S-methyl-S-cephem-4-carboxylat in 200 ml Tetrahydrofuran versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden bei 25⁰C gerührt und dann zur Entfernung der Lösungsmittel eingedampft, wodurch ein weißer Feststoff zurückbleibt. Der Feststoff wird in 1000 ml Dichlormethan gelöst, worauf man die Lösung mit Wasser, zweimal mit 150 ml 5 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat,

zweimal mit 5 %-iger Chlorwasserstoffsäure, erneut mit Wasser und schließlich mit Kochsalzlösung wäscht. Die Lösung wird getrocknet und dann zur Entfernung des Lösungsmittels eingedampft, wodurch man 5,49 g (Ausbeute = 76 %) p-Nitro-

benzyl-D,L-7-/N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)-glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

NMR-Spektrum (DMSO-d_g): 5 = 2,01 und 2,06 (zwei Singuletts, 3H, D- und L-Isomere), 3,2 bis 3,8 (m, 2H), 5,0 und 5,16 (zwei d, IH), 5,21.(s, 2H), 5,3 (s, 2H), 5,6 bis 5,9 (m, 2H), 7,2 bis 8,5 (m, 13H), 9,2 bis 9,4 (m, IH).

Beispiel· 3

p-Nitrobenzyl-D,L-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)-glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 19,25 g (55 mMol) p-Nitrobenzyl-7-amino-3-methyl-3-cephem~4-carboxylat in 350 ml Tetrahydrofuran und

3 50 ml Acetonitril wird unter Rühren in einem Anteil mit einer Lösung von 15,35 g (50" mMol) D,L-N-feButoxycarbonyl-( 3-benzothienyl)glycin in 350 ml Tetrahydrofuran versetzt, die 13 g N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin enthält. Das Reaktionsgemisch wird 5,5 Stunden bei 25°C gerührt und dann zur Entfernung des Lösungsmittels unter verringertem Druck eingedampft, wodurch man ein Öl erhält. Das Öl wird in 500 ml Ethylacetat gelöst, worauf man die Lösung mit 150 ml Wasser, zweimal mit je 150 ml 5 %-igem Natriumbicarbonat, zweimal mit je 150 ml 5 %-iger Chlorwasserstoffsäure, erneut mit 150 ml Wasser und schließlich mit 150 ml Kochsalzlösung wäscht- Die Lösung wird getrocknet, und das Lösungsmittel wird durch Verdampfung entfernt, wodurch man 30,45 g (Ausbeute =95 %) p-Nitrobenzyl-D, L-7-/N-t-butoxycarbonyl-( 3-benzothienyl )glycyl-

35 amid£/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

1 Analyse für

Berechnet: C 56,41 H 4,73 N 8,77

Gefunden: C 56,45 H 4,88 N 8,61

IR-Spektrum (KBr): 1774, 1522, 1348 cm"¹

UV-Spektrum (CH OH): A₃₃₅ £ 32000, ^₃₅₅ £ 21000

NMR-Spektrum (DMSO-dg): δ = 1,4 (s, 9H), 2,01 und 2,05 (zwei s, 3H), 3,28 (s, IH), 3,48 (ro, 2H), 5,10 (zwei d, IH), 5,38 (s, 2H), 5,70 {m, IH), 7,3 bis 8,3 (m, 9H), 9,18 (m, 2H).

Beispiel 4

p-Nitrobenzyl-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 406 mg (1,1 mMol) p-Nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat in 10 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Acetonitril wird unter Rühren in einem Anteil zu einer Lösung von 307 mg (1 mMol) N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin in 10 ml Tetrahydrofuran gegeben, die 259 mg(1,05 mMol) N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin enthält. Das Reaktionsgemisch wird 20 Stunden

²S bei 25⁰C gerührt, und das Lösungsmittel wird dann durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man ein Öl erhält. Das Öl wird in 100 ml Ethylacetat gelöst, und die Lösung wird mit 5 0 ml Wasser, zweimal mit je. 50 ml 5 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat, zweimal mit je 50 ml 5 %-iger Chlorwasserstoffsäure und schließlich mit weiteren 50 ml Wasser gewaschen. Die organische Schicht wird getrocknet und durch Verdampfung zur Trockne eingeengt, wodurch man 510 mg (Ausbeute = 79%) p-Nitro- · benzyl-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido-

35 3-chlor-3-cephem-4-carboxylat erhält.

NMR-Spektrum (DMSO-d ): S= 1,40 (s, 9H), 3,81 (AB,2H),

5,21 (d, J=4,5 Hz, IH), 5,44 (s, 2H), 5,77 (d, J=9 Hz, IH), 5,85 (dd, J=4,5 Hz, 9Hz, IH), 7,26 bis 8,3 (m, 10 H), 9,33 (d, J=9 Hz, IH).

5 -

Beispiel5

p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-S-chlor-S-cephem-4-carboxy1at

Eine Lösung von 620 mg (0,96 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/N-tbutoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/'-S-chlor-S-cephem-4-carboxylat in 25 ml Acetonitril, die 250 mg (1,2 mMol) p-Toluolsulfonsäure enthält, wird 10 Minuten bei 25⁰C gerührt und dann 16 Stunden bei 5°C stehengelassen. Das Reaktionslösungsmittel wird durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-S-chror-S-cephem-^-earboxylatp-toluolsulfonsäuresalz erhält.

NMR-Spektrum (DMSO-dg): 6 = 2,3 (s, 3H), 3,65,3,92 (AB, J=I8 Hz, 2H), 5,2 (d, J = 5,4 Hz, IH), 5,44 (s, 2H); 5,90 (dd, J=5,4 Hz, 8,1 Hz, IH), 7,05 bis 8,30 .(m, 13H), 9,68 (d, J=8,l Hz, IH).

Das so gebildete Produkt wird in 25 ml Ethylacetat und 25 ml 10 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat gewaschen. Die organische Schicht wird abgetrennt, getrocknet und durch Verdampfung vom Lösungsmittel befreit, wodurch man 230 mg p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-S-chlor-S-ce-

30 phem-4-carboxylat erhält.

Beispiele

7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-chlor-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Suspension von 230 mg 5 %-igem Palladium-auf-Kohle

in 20 ml Ethanol wird 30 Minuten bei 25°C unter einem Wasserstoff druck von etwa 4,2 bar gerührt. Das gerührte Reaktionsgemisch wird in einem Anteil mit einer Lösung von

230 mg p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-3-5

chlor-3-cephem-4-carboxylat (von Beispiel 5) in 50 ml Methanol versetzt, das 1 ml In Chlorwasserstoffsäure und 2,5 ml Tetrahydrofuran enthält. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden bei 25⁰C unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann filtriert

und das FiItrat auf etwa 2 ml eingeengt. Die Lösung wird mit 10 ml Wasser verdünnt, und ihr pH wird mit In Natriumhydroxid auf 7,5,eingestellt. Das Gemisch wird filtriert und durch Zugabe von In Chlorwasserstoffsäure auf pH 4,25 eingestellt. Der ausgefallene Feststoff wird durch Filtra-,

tion gesammelt, wodurch man 60 mg 7-{3-Benzothienyl)glycylamido-3-chlor-3-cephem-4-carbonsäure (mit einem durch. Hochleistungsflüssigkeitschromatographie bestimmten Gehalt von 78 % an D-Isomerem) erhält.

NMR-Spektrum (DMSO-dg): δ = 3,38, 3,74 (AB, J=17,1 Hz, 2H), 5,02 (d, J=4,5 Hz, IH), 5,31 (s, IH), 5,65 (m, IH), 7,2 bis 8,1 (m, 5H), 8,6 (m, IH).

Beispiel 7 25 -

p-Nitrobenzyl-7-<3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 9,6 g (15 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamidoZ-S-methyl-S-cep 4-carboxylat (hergestellt nach dem Verfahren von Beispiel 3) in 210 ml Acetonitril, die 3,42 g (18 mMol) p-Toluolsulfonsäure-monohydrat enthält, läßt man 3 Tage bei 25°C stehen. Der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt und als p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycyiamido-3-methy1-3-cephem-4-carboxylat-p-toluolsulfonsäuresalz identifiziert. Das Salz wird in 60 ml 10 %-igem wäß-

rigem Natriumbicarbonat gelöst, und die Lösung wird mehrmals mit Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte werden vereinigt, mit Wasser, gewaschen, getrocknet und durch Verdampfung unter verringertem Druck zur Trockne eingeengt,

wodurch man zu 7,9 g (Ausbeute = 76 %) p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat gelangt.

NMR-Spektrum (DMSO-d,): 5 = 1,99 und 2,04 (zwei Singuletts, 3H, D- und L-Isomere), 3,2 bis 3,6 (m, 2H), 4,9 (s, 2H),

5.1 (d, IH), 5,36 (s, 2H), 5,7 (m, IH), 7,3 bis 8,25 (m, 10H) .

Beispiele

7-(3-Benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem^-carbonsäure

Eine Lösung von 5,2 g p-Nitrob.enzyl-7-(3-benzothienyl)-glycylamido-3-cephem-4-carboxylat (von Beispiel 7) in 150 ml Methanol, das 10 ml In Chlorwasserstoffsäure und

5.2 g 5 %-iges Palladium-auf-Kohle enthält, wird 90 Minuten unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar bei 25°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, und das Filtrat wird unter Bildung einer gummiartigen Masse zur Trockne eingeengt. Die gummiartige Masse wird in 4 0 ml Wasser und 40 ml Ethylacetat gelöst. Das Gemisch wird durch Zusatz von In Natriumhydroxid auf pH 7,0 neutralisiert, und die organische Schicht wird entfernt und verworfen. Die wäßrige Schicht wird durch Zusatz von In Chlorwasserstoff säure auf pH 4,25 angesäuert. Die wäßrige Lösung wird lyophilisiert, wodurch man 1,62 g D,L-7-{3-Benzothienyl )glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure erhält. Die Isomeren werden durch Hochleistungsflüssigkeits-Chromatographie aufgetrennt (299,2 mg an D₇ 131,7 mg an L, 106,6 mg an D,L).

NMR-Spektrum (DMSO-d ) des D-Isomeren: δ = 1,94 (s, 3H),

w 3,20 und 3,43 (AB, J=19,5 Hz, 2H), δ 4,96 (d, J=4,84 Hz,

IH), w 5,07 (s, IH), δ 5,62 (dd, J=4,4 Hz, IH), δ 7,2 bis 8,1 (m, GH).

Beispiel 9

7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Suspension von 1,4 g 10 %-igem Palladium-auf-Kohle in 50 ml Ethanol wird 30 Minuten unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar bei 25⁰C gerührt. Die Suspension wird dann durch Zusatz einer Lösung von 1,38 g p-Nitro-

benzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat in 150 ml Methanol, die 20 ml In Chlorwasserstoff säure enthält, verdünnt. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar bei 25°C gerührt.'Der Katalysator wird durch Filtration ® entfernt, und das Filtrat wird unter Bildung einer gummiartigen Masse zur Trockne eingeengt. Die gummiartige Masse wird in 50 ml Wasser suspendiert, und der pH wird durch Zusatz von In Natriumhydroxid auf 7,0 eingestellt. Die unlöslichen Bestandteile werden durch Filtration entfernt, ^A° und das Filtrat wird durch Zusatz von In Chlorwasserstoffsäure auf pH 4,6 angesäuert. Durch Lyophilisierung des wäßrigen Gemisches gelangt man zu 64,3 mg (5,9 %) 7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure. Das NMR-Spektrum (DMSO-d,) is-t mit dem in Beispiel 8 ange-

30 gebenen Spektrum identisch. Beispiel 10

p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamidq-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat

Sine Lösung von 1,54 g (2,5 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/N-(3-

chlorpropylcarbonyl)-S-benzothienyjVglycylarnido-B-methyl-3-cephem-4-carboxylat (hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben) in 250 ml Aceton, 125 ml Wasser und 200 ml Tetrahydrofuran wird 5 Stunden auf Rückflußtemperatur erhitzt und dann auf 25°G abgekühlt. Die organischen Lösungsmittel werden durch Verdampfung entfernt, worauf man das wäßrige Gemisch durch Zusatz von 2 ml In Chlorwasserstoff säure ansäuert und dann filtriert. Das FiItrat wird mit In Natriumhydroxid auf pH 7,0 verdünnt, und der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt und getrocknet, wodurch man 6 56 mg (Ausbeute = 51,6 %) p-Nitrobenzyl-7-(3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

NMR-Spektrum (GDCl₃): δ = 2,10 (s, 3H), 3,01 bis 3460 (AB, 2H), 4,91 (d, IH), 4,96 (d, IH), 5,25 (s, 2H), 5,75 (dd, IH), 7,20 bis 8,20 (m, 9H).

Durch Hydrogenolyse der sogebildeten Verbindung gelangt man zu 7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel' 11

D,L-Allyl-7-/N-allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl.) glycylamides/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 5,82 g (20 mMol) D^-N-Allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin (hergestellt wie beider Herstellung 5) in 200 ml Tetrahydrofuran, die 5,18 g (21 rnMol) N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin enthält, wird in einem Anteil zu einer Lösung von 5,6 g (24 mMol) Allyl-7-amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat in 200 ml Acetonitril gegeben. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden bei 25⁰C gerührt und dann durch Verdampfung des Lösungsmittels zu einem Öl eingeengt. Das Öl wird in einem Liter Ethylacetat gelöst, worauf man die Lösung einmal mit 500 ml Wasser,

zweimal mit je 250 ml 5 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat, zweimal mit 5 %-iger Chlorwasserstoffsäure, erneut mit 250 ml Wasser und schließlich mit 250 ml Kochsalzlösung wäscht. Die Lösung wird getrocknet, und das Lösungsmittel

wird zur Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man 10,47 g (Ausbeute = 99 %) D,L--Ällyl-7-/N-allyloxycarbonyl-( 3-benzothienyl )glycylarp.ido_/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

Analyse für C₂₅H₃ N₃O₅S₂ Berechnet: C 56,91 H 4,70 N 7,96 Gefunden: C 57,09 H 4,94 N 7,79

NMR--Spektrum (DMSO-d,): 5 =2,00 und 2,05 (zwei Singuletts, υ

3H, D- und L-Isomere), 3,18 bis 3,80 (m, 2H), 4,45 bis 6,10 (m, 13H), 7,3 bis 8,1 (m, 6H), w = 9,1 bis 9,35 (m, IH).

B e i s ρ .i e 1 12

20 ' .

D- und L-7-(3-Benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-

4-carbonsäure

Eine Lösung von 72 mg (0,32 mMol) Bleitetraacetat in 50 ml Aceton, die 419 mg (1,6 mMol) Triphenylphosphin enthält, .

wird 30 Minuten bei 25 C gerührt, worauf man sie auf 5 C abkühlt und mit 30 ml Aceton versetzt, das 6,74 g (12,8 mMol) D,L-Allyl-7-N-allyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat (von Beispiel 11)

enthält. Das kalte Reaktionsgemisch v/ird 10 Minuten ge-30

rührt und dann in einem Anteil mit 7,36 ml (28,2 mMol) Tributylzinnhydrid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird eine Stunde bei 0⁰C bis 5⁰C gerührt, worauf man es durch Zugabe von 5 rnl In Chlorwasserstoffsäure verdünnt und weitere 10 Minuten rührt. Das Reaktionsgemisch wird zu 25 ml Wasser gegeben und zweimal mit je 50 ml η-Hexan gewaschen, worauf man seinen pH mit In Natriumhydroxid auf 4,5 einstellt. Das durch Einengung der Lösung unter Verdampfung

de's organischen Lösungsmittels ausgefallene Produkt wird durch Filtration gesammelt und lyophilisiert, wodurch man 4,12 g (Ausbeute = 80 %) D,L-7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure erhält. Eine Probe des so gebildeten Produkts (3,625 g) wird durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie weiter gereinigt, wodurch man zu 522,5 mg des L-Isomeren und 1,075 g D-7-(3-Benzothienyl)-glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt.

10 Analyse für C_{1 O}H, -,N₀O .S-.

1 ο 1 / j 4 Δ

Berechnet: C 53,58 H 4,25 N 10,41 Gefunden: -C 53,94 H 4,22 N 10,62

Beispiel 13 15

7-/&-Methoxyimino-C6-(6-fluor-3-benzothienyl)acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 2,70 g (10,7 mMol) a-Methoxy-O,-(6-fluor-3-benzothienyl)essigsäure (aus der Herstellung 1) in 60 ml Benzol, die 2,8 ml Oxalylchlorid und vier Tropfen N,N-Dimethylformamid enthält, wird 2 Stunden unter Stickstoff bei 25⁰C gerührt. Sodann wird das Lösungsmittel durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man a-Methoxy-C*--( 6-f luor-3-benzothienyl) acetylchlorid erhält. Das Säurechlorid wird in 60 ml Aceton gelöst und tropfenweise während 5 Minuten unter Rühren zu einer kalten (5⁰C) Lösung von 2,41 g (11,3 mMol) 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure in 60 ml Aceton und 120 ml Wasser gegeben, die 2,84 g (33,8 mMol) Natriumbicarbonat enthält- Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden bei 5⁰C gerührt, worauf man es auf 25°C erwärmt und weitere. 2 Stunden rührt. Das Reaktionsgemisch wird mit In Chlorwasserstoffsäure auf pH 7,5 verdünnt und 12 Stunden bei 0⁰C stehengelassen. Das Aceton wird vom Reaktionsgemisch durch Verdampfung entfernt, worauf man das wäßrige Gemisch mit In Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 ansäuert und die wäßrige saure Schicht mehrmals mit Dichlormethan extrahiert. Die organischen Extrak-

te werden vereinigt, mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet, worauf man das Lösungsmittel durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt und so zu 5,02 g (100 %) 7-/0t-Methoxyimino-CC- ( 6-f luor-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt.

NMR-Spektrum (CDCl₃): δ = 2,24 (s, 3H), 4,04 und 4,15 (zwei Singuletts, 3H), 5,08 und 5,11 (zwei dd, IH).

¹⁰ IR-Spektrum (CHCl₃): 1774 cm"¹ ß-Lactam. Beispiele 14 bis 16

Unter Befolgung des allgemeinen Verfahrens von Beispiel ° werden folgende Verbindungen hergestellt:

7-/t£-Methoxyimino-0c-( 7-f luor-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

²⁰ IR-Spektrum (CHCl₃): 1782 cm"¹ ß-Lactam.

7-/i&-Methoxyimino-0£— ( 4-f luor-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

²⁵ Analyse für ^cr9^H ₁₆ ^N3°5^S2^F Berechnet: C 50,77 H 3,59 N 9,35 F 4,23 Gefunden: C 50,93 H 3,75 N 9,07 F-4,44

NMR-Spektrum (CDCl₀): 6= 2,22 (s, 3H), 4,04 (s, 3H),

OQ J

5,09 (d, IH), 5,9 (dd, IH), 6,98 bis 7,63 (m, 6H).

7-/t£-Methoxyimino-Ct- ( 5-f luor-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

³⁵ IR-Spektrum (CHCl₃): 1778 cm"¹ ß-Lactam.

NMR-Spektrum (CDCl₃): 6 = 2,23 (s, 3H), 4,09 (s, 3H), 5,1

und 5,13 (zwei dd, IH), 5,9 und 5,94 (zwei dd, IH). Beispiel 17

D-7-(6-Fluor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine kalte (5⁰C) Lösung von 5,01 g (11,1 mMol) 7-/cx-Methoxyimino-CX-(6-fluor-3-benzothienyl)acetamid£/-3-methyl-3-

¹^ cephem-4-carbonsäure in 50 ml Methanol, die 25 ml Wasser und 50 ml Ameisensäure enthält, wird unter Rühren anteilweise während 25 Minuten mit 2,70 g (41,3 mMol) Zinkstaub versetzt. Nach beendeter Zugabe wird das Reaktionsgemisch weitere 2 Stunden gerührt und dann filtriert. Das Filtrat wird durch Verdampfung des Lösungsmittels unter verringertem Druck eingeengt, wodurch sich eine gelbe gummiartige Masse ergibt. Die gummiartige Masse wird mit Diethylether behandelt,'wodurch man nach Trocknung unter Vakuum 5:,36 g D,L-7-( 6-Fluor-3-benzothienyl) glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure erhält. 1 g des Produkts wird durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie über Siliciumdioxidgel unter Elution mit einem Gradienten aus Acetonitril und Essigsäure gereinigt, wodurch man zu 149 mg L, 60 mg D,L und 318 mg D-7-(6-Fluor-3-benzothienyl)glycylamido-3-

25 methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt. Analyse für das D-Isomere für C₁₀H₁-N₀O-S_nF

Xo Ib j 4 Δ

Berechnet: C 51,30 H 3,83 N 9,97 F 4,51

Gefunden: C 49,27 H 3,97 N 9,14 . F 4,48 30

IR-Spektrum (CHCl-): 1763 cm ^x ß-Lactam. Beispiele 18 bis 21

^° Nach dem allgemeinen Verfahren von Beispiel 17 werden folgende Verbindungen hergestellt:

D-7-(5-Fluor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

IR-Spektrum (GHCl-): 1761 cm ß-Lactam 5 ^J

NMR-Spektrum (DMSO-d_g): 6 = 2,01 (s, 3H), 3,35 (dd, 2H), 2,8 bis 4,2 (breit,3H), 5,0 (s, 2H), 5,62 (d, IH), 7,23 (m, IH), 7,75 bis 8,10 (m, 3H), 9,2 (breit, IH).

D-7-(4-Fluor-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carbonsäure

NMR-Spektrum (DMSO-dg): δ = 1,99 (s, 3H), 2,9 bis 4,0 (breit m, 5H), 5,01 (s, IH), 5,02 (d, IH), 5,61 (d, IH), 7,05 bis 7,90 (m, 4H), 8,91 (breit, IH).

D-7-(7-Fluor-"3-benzothienyl)glycylamido-3-methy1-3-cephem-4-carbonsäure

NMR-Spektrum (DMSO-dg): 6 = l,99(s, 3H), 5,0 (m, 2H), 5,65 (d, IH), 7,2 bis 7,95 (m,4H).

L-7-(7-Fluor-3-benzothienyl).glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure 25

IR-Spektrum (CHCl₃): 1761 cm ß-Lactam Analyse für C,-H..N FO.S»

Berechnet: C. 51,30 H 3,83 N 9,97 F 4,51 30 Gefunden: C 49,79 H 3,71 N 9,64 F 4,21

Beispiel 22

7-/fcS.-Methoxyimino-(X- ( 6-methoxy-3-benzothieny Vacetamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 610 mg (3,7 mMol) α-Methoxyimino-Ct-(6-meth-

oxy-3-benzothienyl)essigsaure (von der Herstellung 8) in 50 ml Benzol, die 1,1 ml (12,6 mMol) Oxalylchlorid und zwei Tropfen N,N-Dimethy!formamid enthält, wird eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird 5

durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man zu a-Methoxyimino-ft-(6-methoxy-3-benzothienyl)-acetylchlorid als Öl gelangt.

Das gebildete Produkt wird in 40 ml Aceton gelöst und die Lösung wird während 30 Minuten tropfenweise unter Rühren zu einer kalten (10⁰C) Lösung von 830 mg (3,85 mMol) 7-Amino-3-methyl-3~cephem-4-carbonsäure in 40 ml Aceton und 75 ml Wasser gegeben, die 932 mg (11,1 mMol) Natriumbicarbonat enthält. Das Reaktionsgemisch wird nach beendeter

° Zugabe auf 25⁰C .erwärmt und weitere 90 Minuten gerührt. Sodann wird das organische Lösungsmittel durch Verdampfung entfernt, worauf man das wäßrige Gemisch mit Ethylacetat überschichtet und mit In Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,5 ansäuert.. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und durch Verdampfung zur Trockne eingeengt, wodurch man zu 856 mg 7-/fcX-Methoxyimino-CX-( 6-methoxy-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl.-3-cephem-4-carbonsäure gelangt.

Analyse fur	C	)H1	9N3°<	5S2	4	,12	N	9	,11
Berechnet:	C	52	,06	H	4	,14	N	8	,77
Gefunden:	51	,79	H

NMR-Spektrum (DMSO-d,): δ = 2,02 (s, 3H), 3,34,3,54 (AB, cn ο

J=18,03 Hz, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 5,13 (d, J= 4,4 Hz, IH), 5,74 (dd, J=4,4 Hz, 7,9 Hz, IH), 7,05 (dd, J=2,4 Hz, 8,79 Hz, IH), 7,59 (d, J= 2,4 Hz, IH), 7,65 (s, IH), 8,41 (d, J=8,79 Hz, IH), 9,73 (d, J=7,9 Hz, IH).

- 49 Beispiel 23

D-7-(6-Methoxy-3-benzothienyl)glycylamido-B-methyl-S-ce-

phem-4-carbonsäure 5

Eine kalte Lösung (5⁰C) von 309 mg (0,67 mMol) 7-/#-Methoxyimino-iX-(6-methoxy-3-benzothienyl )~acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (von Beispiel 22) in 0,5 ml N,N-Dimethylformamid und 10 ml Ameisensäure wird unter Rühren in einem Anteil mit 170 mg (2,6 mMol) Zinkstaub versetzt. Das Reaktionsgemisch wird eine Stunde gerührt und dann durch Celite als Filterhilfe filtriert. Der Filterkuchen wird zweimal mit je 10 ml Methanol, einmal mit 10 ml Wasser und erneut mit 10 ml Methanol gewaschen. Das ° Filtrat wird dann durch Verdampfung des Lösungsmittels unter verringertem Druck eingeengt, worauf man das Produkt mit 25 ml Diethylether behandelt und dann in 20 ml Wasser suspendiert und lyophilisiert, wodurch man zu 290 mg D,L-7-{6-Methoxy-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt. Dieses Produkt wird zur Auftrennung der Isomeren durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie gereinigt, wodurch man 42,4 mg D-7-(6-Methoxy-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäu-

re erhält. 25

NMR-Spektrum (D₂O): δ = 1,82 (s, 3H), 2,97, 3,40 (AB, J= 17,9Hz, 2H),3,92 (s, 3H), 5,00 (d, J=4,3 Hz, IH), 5,62 (s, IH), 5,70 Cd, J=4,3 Hz, IH), 7,16 bis 7,84 (m, 4H).

30 Beispiele 24 bis 29 ·

Unter Befolgung der oben angegebenen allgemeinen Verfahren werden folgende Benzothienylglycylcephalosporine.hergestellt: 35

7-(5-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carbonsäure,

7-(6-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem^- carbonsäure,

7-(4,7-Dichlor-3-benzothienyl)glycy!amido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure,

7-(5-Methoxy-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carbonsäure,

7-(6-Hydroxy-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carbonsäure,

7-(6-Methylsulfonylamino-3-benzothienyl)glycylamido-3-me-¹^ thyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 30

D-7-(3-Benzöthienyl)glycylamido-S-methyl-B-cephem-'l-carbonsä.ure

Man überführt D-(3-Benzothienyl)glycin (1,035 g (5 mMol) von der Herstellung 6) zu D-N-t-Butoxycarbonyl-3-benzothienylglycin durch Umsetzung mit 1,2 ml (5,2 mMol) Di-tbutyldicarbonat in 2 5 ml Tetrahydrofuran und 25 ml Wasser (Ausbeute = 98 %, 1,508 g) . Unter Befolgung des Verfahrens von Beispiel 3 setzt man 1,38 g (4,5 mMol) D-N-t-Butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycin mit 1,73 g (4,0 mMol) p-. Nitrobenzyl^-amino-S-methyl-S-cephem^-carboxylat in Gegenwart von 1,17 g (4,7 mMol) EEDQ um, wodurch man 2,67 3 g (Ausbeute = 93 %) p-Nitrobenzyl-D-7~/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

Eine Lösung von 2,55 g (4 mMol) der so gebildeten Verbindung in 180 mg Acetonitril wird unter Rühren in einem Anteil mit 20 ml Acetonitril versetzt, das 1,67 g (8,8 mMoi) p-Toluolsulfonsäure enthält. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden bei 24°C gerührt. Der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt (1,688 g), worauf man das FiI-trat auf 25 ml einengt und das Konzentrat dann 48 Stunden bei 0⁰C kühlt. Durch Filtration erhält man einen weiteren

Niederschlag (0,576 g). Die gesammelten Feststoffe werden vereinigt, wodurch man zu 2,26 g (Ausbeute = 78 %).P-Ni-' trobenzyl-D-7-(3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-

4-carboxylat-p-toluolsulfonat-monohydrat gelangt. Das Pro-5

dukt ist aufgrund einer NMR-Analyse praktisch 100 % reines

D-Isomeres.

NMR-Spektrum (DMSO-d_g): δ = 1,97 (s,3H), 2,28 (s, 3H),

3,30,3,52 (AB, J=19,3 Hz, 2H), 3,32 (s, 2H), 5,05 (d, J= 10

4,5 Hz, IH), 5,36 (s, 2H),. 5,46 (br s, IH), 5,79 (dd, J= 4,5 Hz, 8,1 Hz, IH), 7,1 bis 8,3 (m, 9H), 8,7 (br s, 3H), 9,58 (d, J=8,l Hz, IH).

Ein Gemisch von 2,20 g (3,03 mMol) des obigen.Tosylatsal-

zes in 250 ml Dichlormethan und 200 ml 5 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat wird 5 Minuten gerührt. Die organische Schicht wird abgetrennt, getrocknet und durch Verdampfung unter verringertem Druck vom Lösungsmittel befreit, wodurch man 1,607 g (Ausbeute = 98,5 %) p-Nitrobenzyl-D-7-(3-benzc-

thienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem^-carboxylat erhält.

Das Produkt wird in 100 ml Methanol und 21 ml Ethanol gelöst und dann in Gegenwart von 2,2 g 5 %-igem Palladium-auf Kohle bei Raumtemperatur 3 Stunden unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar hydriert. Das Reaktionsgemisch wird

zur Entfernung des Katalysators filtriert, und der Katalysator wird zuerst mit 10 ml Methanol, das 10 ml Wasser enthält, und dann dreimal mit je 10 ml Methanol gewaschen. Das FiItrat, wird auf ein Volumen von etwa 20 ml eingeengt, worauf man mit 10 ml Wasser verdünnt und mit 40 ml Ethyl-

^ου acetat überschichtet. Der pH wird durch Zusatz von In Chlorwasserstoffsäure auf 7,0 eingestellt, und die wäßrige Schicht wird abgetrennt und auf pH 4,6 angesäuert. Die Lösung wird 12 Stunden bei 5⁰C stehengelassen, worauf man den gebildeten weißen Niederschlag durch Filtration s'ammelt und an der Luft trocknet. Auf diese Weise gelangt man zu 875 mg (Ausbeute = 73 %) D-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure. Eine Hochleistungsflüs-

sigkeitschromatographie ergibt, daß das Produkt 100 % reines D-Isomeres ist.

Analyse für C, „H -,N O S₂

Berechnet: C 53,58 H 4,25 N 10,41

Gefunden: C 53,20 H 4,44 N 9,88

NMR-Spektrum (D^O/DCl): .5 = 2,01 (s, 3H), 3,09, 3,33 (AB,

J=18,l Hz,.2H), 5,01 Cd, J=4 , 6 Hz, IH), 5,64 (d, J=4,4 Hz, 10

IH), 5,75 (s, IH), 7,5 bis 8,0 (m, 5H).

Beispiel 31

Eine Suspension von 717 mg (1,0 mMol) p-Nitrobenzyl-D,L-7-

/N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat (von Beispiel 2) in 10 ml Ethanol und 100 .ml Tetrahydrofuran, die 1,0 g 5 %-iges Palladium-a-uf-Kohle und 4,0 ml In Chlorwasserstoffsäure enthält, wird 3' Stunden bei 24°C unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar gerührt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, und das Filtrat wird mit Wasser verdünnt, worauf man das Ganze auf etwa 20 ml einengt, dreimal mit je 30 ml Ethylacetat wäscht und dann durch Zusatz von In Chlorwasserstoffsäure auf pH 4,3 ansäuert. Durch Lyophili-

sierung des sauren Reaktionsgemisches gelangt man zu D, L-

7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (Ausbeute = 15 %). Ein NMR-Spektrum (D O/DCl) ergibt, daß das Produkt aus etwa 60 % D- und 40 % L-Isomerem besteht

30

Beispiel -32

Auftrennung der D- und L-Isortieren durch Chromatographie

2g p-Nitrobenzyl-D,L-7-/N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat von Beispiel 2 werden in 500 ml Dichlormethan gelöst und

- 9

mit 15 g Siliciumdioxidgel 60 aufgeschlämmt. Das Lösungsmittel, wird entfernt, und das Gemisch wird auf eine 8 χ 15 cm messende und mit 300 g Siliciumdioxidgel 60 in Toluol gepackte Säule gegeben. Die Säule wird mit einem Gradienten von 2 15 %-igem Ethylacetat in Toluol (Vol/Vol) bis zu 2 1 20 %-igem Ethylacetat in Toluol und schließlich mit 4 1 25 %-igem Ethylacetat in Toluol eluiert. Alle 2 Minuten werden 25 ml-Fraktionen gesammelt. Durch NMR-Analyse und dünnschichtchromatographische Analyse ergibt sich, daß die Fraktionen 198 bis 209 p-Nitrobenzyl-D-V-ZN-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamidcy-S-methyl-S-cephem-4-carboxylat (347 mg, Ausbeute = 35 %) enthalten. Die Fraktionen 210 bis 245 enthalten 1,163 g des D,L-Gemisches.

Die Fraktionen 246 bis 276 enthalten 158 mg des L-Isomeren. 15

Der Versuch wird unter Verwendung einer Säule wiederholt, die mit 350 g Siliciumdioxidgel 60 gepackt ist, wobei man mit einem Gradienten von 2 1 10 %-igem (Vol/Vol) Ethylacetat in Toluol bis zu 2 1 20 %-igem Ethylacetat in Toluol und schließlich mit 4 1 20 %-igem Ethylacetat in Toluol eluiert. Die Fraktionen 201 bis 226 werden vereinigt und zur Trockne eingeengt, wodurch man 492 mg (Ausbeute =49 %) p-Nitrobenzyl-D-T-^N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält.

Beispiel 33

D-7-(3-Benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-^-carbonsäure

Eine Lösung von 772 mg (1,07 mMol) p-Nitrobenzyl-D-7-/N-p-nitrobenzyloxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat (von Beispiel 32) in 90 ml Tetrahydrofuran und 12 ml Ethanol, die 4,5 ml In Chlorwasserstoffsäure und 1,2 g 5 %-iges Palladium-auf-Kohle enthält, wird 3 Stunden bei 25°C unter einem Wasserstoffdruck von etwa 4,2 bar gerührt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, und das FiItrat wird eingeengt, mit Wasser ver-

10

dünnt und dann lyophilisiert, wodurch man 273 mg D-7--(3-Benzothieny1)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure erhält. Das NMR-Spektrum ist mit dem in Beispiel 8 angegebenen Spektrum identisch.

Beispiel 34

p-Nitrobenzyl-D-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-vinyl-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 451 mg (1,25 mMol) p-Nitrobenzyl-7-amino-3-vinyl-3-cephem-4-carboxylat (hergestellt wie in US-PS 3 994 884 beschrieben) in 10 ml Tetrahydrofuran, die 415 mg (1,35 mMol) D-N-t-Butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)-

15

glycin und 358 mg (1,45 mMol) N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin enthält, wird 16 Stunden bei 25°C gerührt-. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockne eingeengt, worauf man das zurückbleibende Öl in 5 0 ml Ethylacetat und 50 ml 10 %-igem wäßrigem Natriumbicarbonat löst. Die

20

organische Schicht wird abgetrennt, worauf man sie einmal

mit 10 ml gesättigtem Natriumbicarbonat, einmal mit Wasser, zweimal mit je 10 ml In Chlorwasserstoffsäure, erneut mit Wasser und schließlich mit 10 ml Kochsalzlösung wäscht. J Die Lösung wird getrocknet, und das Lösungsmittel wird

nc

durch Verdampfung entfernt, wodurch man zu 700 mg (Ausbeut =86 %) p-Nitrobenzyl-D-7-/N-t-butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido_/-3-vinyl-3-cephem-4-carboxylat gelangt.

30

Analyse für	C	57	0Ν4°ί	3S2	4	,65	N	8	,61
Berechnet:	C	57	,22	H	4	,78	N	8	,55
Gefunden:		,52	H

35

- 55 Beispiel 35

D-7-(3-Benzothienylglycylamido)-S-säure

Eine Lösung von 460 mg (0,7 mMol) p-Nitrobenzyl-D-7-/N-tbutoxycarbonyl-(3-benzothienyl)glycylamido/-3-viny1-3-cephem-4-carboxylat in 2,5 ml Wasser und 20 ml Methanol, die 5 ml 98 %-ige Ameisensäure enthält, wird in einem Anteil unter Rühren mit 300 mg Zinkstaub versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 30 Minuten beschallt und filtriert. Das FiI-trat wird mit 5 ml Wasser versetzt und dreimal mit je 20 ml Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte werden vereinigt, mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und durch Verdampfung vom Lösungsmittel befreit, wodurch man 540 mg eines rötlichen Feststoffs erhält. Der Feststoff wird in 20 ml Dichlormethan gelöst, und die Lösung wird 12 Stunden bei 25⁰C stehengelassen. Das Gemisch wird filtriert, und das Filtrat wird zur Trockne eingeengt, wodurch man 320 mg 7-D-/N-t-Butoxycarbonyl-(3-benzothienyl)-glycylamido/-3-vinyl-3-cephem-4-carbonsäure erhält,

NMR-Spektrum (.DMSO-dg): 5 = 1,38 (s, 9H), 3,2 bis 4,2 (m, 2H), 5,0 bis 5,9 (m, 5H), 6,6 bis 7,1 (m, IH), 7,2 bis 8,1 (m, 5H), 9,25 (d, IH).

Das obige Produkt wird in 10 ml Dichlormethan gelöst, das

1 ml Trifluoressigsäure enthält. Das Reaktionsgemisch wird

2 Stunden bei 25⁰C gerührt und dann, zur Trockne eingeengt, wodurch man zu 330 mg eines orangen Schaums gelangt. Der Schaum wird in 10 ml Acetonitril gelöst,, und die Lösung wird durch tropfenweisen Zusatz von Diisopropylether verdünnt. Der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt und an der Luft getrocknet, wodurch man 190 mg D-7-{3-Benzothienylglycylamido)-3-vinyl-3-cephem-4-carbonsäure-trifluoracetat erhält.

- 56 UV-Spektrum (EtOH): λ =225, £= 28000

ΙΐΙαΧ

IR-Spektrum (KBr): 1769' cm ß-Lactam

⁵ Analyse für C„, H₁ N^O-S-F.,

Berechnet: C 47,63 H 3,43 N 7,94 F 10,76 Gefunden: C 47,86 H 3,51 N 8,18 F 10,53

Beispiel 36 10

D-I-(4-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Man setzt Cfc-Methoxyimino-CX-( 4-chlor-3-benzothienyl) essig-

säure mit Oxalylchlorid und N,N-Dimethylformamid in Benzol unter Bildung von <X-Methoxyimino-co-{ 4-chlor-3-benzothienyl)acetylchlorid um. Eine Lösung von 1,47 g (5,45 mMol) dieses Säurechlorids in 30 ml Aceton gibt man tropfenweise während 10 Minuten unter Rühren zu einer kalten (5°C) Lö-

sung von 1,22 g (5,7 mMol) 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure in 30 ml Wasser und 30 ml Aceton, die 1,37 g (16,35 mMol) Natriumbicarbonat enthält. Das Reaktionsgemisch wird nach beendeter Zugabe 30 Minuten bei 0⁰C bis 5°C gerührt, worauf man es auf 20⁰C erwärmt und weitere 2 Stunden rührt» Das Reaktionsgemisch wird auf ein Volumen von etwa 30 ml eingeengt, mit 20 ml Wasser verdünnt und mehrmals mit Ethylacetat gewaschen. Das wäßrige Gemisch wird mit 50 ml frischem Ethylacetat überschichtet und durch Zusatz von In Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,5 angesäuert. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit frischem Wasser und mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und unter Entfernung des Lösungsmittels eingedampft, wodurch man zu 2,1 g (Ausbeute = 83 %) 7-/Ct-Methoxyimino-(X-(4-chlor-3-benzothienyl)acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-

35 carbonsäure gelangt.

NMR-Spektrum (DMSO-d_c): δ = 2,03 (s, 3H), 3,51 (breites s,

2H), 3,98 und 4,10 (zwei Singuletts, 3H), 5,11 (d, IH), 5,68 (dd, IH), 7,3 bis 8,1 (m, 4H), 8,78 und 8,95 (zwei d, IH)..

Eine kalte (5⁰C) Lösung von 2,02 g (4,33 mMol) des obigen Methoxims in 21,5 ml Methanol, 21,5 ml Ameisensäure und 13,5 ml Wasser wird unter Rühren anteilweise während 30 Minuten mit 1,05 g (16 mMol) Zinkstaub versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 30 Minuten bei 5⁰C gerührt, worauf man es auf 25°C erwärmt und weitere 5 Stunden rührt. Das Reaktionsgemisch wird 16 Stunden bei O⁰C stehengelassen und dann filtriert. Die Lösungsmittel werden vom Filtrat entfernt, wodurch man zu 1,79 g (Ausbeute = 95 %) eines weißen Pulvers gelangt, das als D,L-7-(4-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert wird. Durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie unter Verwendung eines Trägers aus einem C,_O-Umkehrphasen-Siliciumdioxidgel und Elution mit 2 % Essigsäure und einem Gradienten von 5 % bis 25 % (Vol/Vol) Acetonitril-Wasser unter anschließender Einengung und Lyophilisierung der geeigneten Fraktionen gelangt man zu folgendem:

Beispiel 36A: 169 mg L-7-(4-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und

Beispiel 36B: 190 mg D-7-(4-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-c'ephem-ⁱ-4-carbonsäure.

NMR-Spektrum (DMSO-d_g): δ = 2,01 (s, 3H), 3,1 bis 3,7 (m, 2H), 4,7 bis 5,9 (m, 7H), 7,3 bis 8,1 (m, 4H).

Beispiel 37

Unter Befolgung des allgemeinen Verfahrens von Beispiel überführt man 2,8 g (10,39 mMol) a-Methoxyimino-CM 6-chlor-3-benzothienyl)essigsäure, in das Säurechlorid und setzt · dieses mit 2,33 g (10,91 mMol) 7-Amino-3-methyl-3-cephem-

4-carbonsäure um, wodurch man zu 385 g (Ausbeute = 80 %) 7-/t< -Methoxyimino-CA- ( 6-chlor-3-benzothienyl) acetamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt.

NMR-Spektr.um (CDCl₃): δ = 2.02 und 2,21 (zwei s, 3H), 3,1 bis 3,85 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 5,06 (d', IH), 5,86 (dd, IH), 7,2 bis 7,8 (m, 4H), 8,3 bis 8,7 (m, 2H).

Durch Reduktion von 3,8 3 g (8,2 mMol) des bei obiger Um- ^O setzung erhaltenen Methoxims mit 3,04 g Zinkstaub in wäßriger Ameisensäure und Methanol erhält man nach entsprechender Isolierung 4,6 g eines weißen Pulvers. Dieses Produkt wird über eine mit C₁ ,,-Umkehrphasensiliciumdioxidgel gefüllte Säule chromatographiert. Durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie ergibt sich folgendes:

Beispiel 37A: 80 mg L-7-(6-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Beispiel 37B: 49 mg D-7-(6-Chlor-3-benzothienyl)glycylami-

do-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure.

NMR-Spektrum (DMSO-d,.): δ = 1,95 (s, 3H), 3,05 bis 3,65

(m, 2H), 4,5 bis 6,0 (m, 6H), 7,3 bis 8,2 Cm, 4H). 25 Beispiel 38

7-(5-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-S-methyl-S-cephem-4-carbonsäure

Man setzt Chloraceton mit 4-Chlorthiophenol zu (4-Chlorphenyl)thiomethylmethylketon um und cyclisiert diese Verbindung durch Umsetzung mit Polyphosphorsäure unter BiI-dung von S-Chlor-S-methylbenzothiophen. Diese Verbindung wird durch photochemische Umsetzung mit N-Bromsuccinimid unter Bildung von 5-Chlor-3-brommethylbenzothiophen bromiert, das man durch Umsetzung mit Natriumcyanid in 5-Chlor-3-cyanomethylbenzothiophen überführt. Durch Hydroly-

- 59 -

se und Veresterung dieser Verbindung erhält man Methyl-cX-[S-Chlor-S-benzothienyl)acetat. Der Ester wird mit Natriummethoxid und n-Butylnitrit umgesetzt, wodurch man zu Methyl-Oc-hydroxyimino-CX- ( 5-chlor-3-benzothienyl) acetat gelangt. Durch Reduktiqn dieses Oxims durch Umsetzung mit Zink und Ameisensäure und anschließende Umsetzung mit Dit-butylcarbonat erhält man N-t-Butoxycarbonyl-(5-chlor-3-benzothienyl)glycin.

NMR-Spektrum (CDCl₃): 5 = 1,1 bis 1,5 (breites s, 9H), 5,4 bis 5,7 (breites s, IH), 7,2 bis 8,0 (m, 4H).

Eine Lösung von 766 mg. (2,2 mMol) N-t-Butoxycarbonyl-(5-chlor-3-benzothienyl)glycin und 84 4 mg (2,4 mMol) p-Nitrobenzyl-7-amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat in 380 ml Acetonitril, die 544 mg (2,2 mMol) N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin enthält, wird eine Stunde bei 0⁰C und zwei Stunden bei 25°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wird durch Verdampfung des Lösungsmittels zur Trockne eingeengt, und das Produkt wird in 200 ml Ethylacetat gelöst. Die organische Lösung wird mit In Chlorwasserstoffsäure, mit gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat und mit Wasser gewaschen. Die Lösung wird getrocknet, und das Lösungsmittel wird durch Verdampfung unter verringertem Druck entfernt, wodurch man 1,28 g (Ausbeute = 87 %) p-Nitrobenzyl-D,L-7-/N-t-butoxycarbonyl-(5-chlor-3-benzothienyl)glycylamid£/-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat erhält. .

NMR-Spektrum (CDCl₃): δ = 1,48 (s, 9H), 2,13 und 2,19

(zwei s, 3H), 3,1 bis 3,5 (m, 2H), 4,9 und 5,01 (zwei Sätze an Dupletts, IH), 5,3 (breites s, 2H), 5,5 bis 5,9 (m, 3H)/ 6,9 bis 8,3 (m, 9H).

Eine Suspension von 1,8 g 5 %-igem Palladium-auf-Kohle in 30 ml Methanol und 10 ml Ethanol wird 30 Minuten bei 25°C unter einem Wasserstoffdruck von etwa 3,9 bar geschüttelt.

Eine Lösung von 1,28 g der obigen Verbindung in 100 ml Tetrahydrofuran wird zu obigem Reaktionsgemisch gegeben, und das Gemisch wird 45 Minuten bei 25⁰C unter einem Wasserstoff druck von etwa 4 bar geschüttelt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert, und das Lösungsmittel wird vom FiI-trat entfernt. Das Produkt wird in 50 ml Diethylether und 50 ml Wasser gelöst. Das Gemisch wird auf pH 7,7 alkalisch gestellt, und die organische Schicht wird abgetrennt. Die wäßrige Schicht wird mit frischem Diethylether gewaschen

^-® und dann durch Zusatz von In Chlorwasserstoff säure auf pH 2,0 angesäuert. Die wäßrige Schicht wird dreimal mit je 50 ml Ethylacetat extrahiert, und die Extrakte werden vereinigt, getrocknet und zur Trockne eingeengt, wodurch man 700 mg (Ausbeute = 70 %) D,L-7-/N-t-Butoxycarbonyl-(5-chlor-3-benzothienyl)glycylamid<V-3-methyl-3-cephem-4-car- bonsäure erhält.

NMR-Spektrum (CDCl₃): δ = 1,43 (s, 9H), 2,09 und 2,12 (zwei s, 3H), 3,1.bis 3,5 (m, 2H), 4,8 bis 5,3 (m, IH), 5,4 bis 6,1 (m, 3H), 7,0 bis 8,4 (m, 7H).

Eine Lösung von 700 mg der obigen Verbindung in 8 ml Trifluoressigsäure wird 5 Minuten bei 25°C gerührt. Die Lösung wird zu 20 ml Wasser gegeben, und der pH wird durch Zusatz von In Natriumhydroxid auf 6 eingestellt. Der gebildete Niederschlag wird durch Filtration gesammelt und an der Luft getrocknet, wodurch man zu D,L-7-{5-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure gelangt. Die Isomeren werden durch Chromatographie über eine mit C-. ,,-Umkehrphasen-Siliciumdioxidgel gefüllte Säule

1 O

aufgetrennt, die man mit einem Gradienten von 1 % Essigsäure, 0 % bis 30 % Acetonitril und 99 % bis 69 % Wasser eluiert. Die geeigneten Fraktionen werden vereinigt, durch Verdampfung von Lösungsmitteln auf ein geringeres Volumen eingeengt und lyophilisiert, wodurch man zu folgendem gelangt:

Beispiel 38A: L-7-(5-Chlor-3-benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und

Beispiel 38B: D-7- ( 5-Chlor-3-benzothienyl ) gl.ycylamido-3-' methyl-3-cephem-4-carbonsäure.

NMR-Spektrum (DMSO-dg): δ = 1,9 2 (s, 3H), 3,06 bis 3,58 (q, 2H), 4,8 bis 5,0 (breites d, 2H), 5,57 (d, IH), 7,2 bis

8,1 (m, 5H). 10

Die erfindungsgemäßen Benzothienylglycylcephalosporine sind wertvolle antibiotische Substanzen oder Zwischenprodukte hierfür. Die Verbindungen sind besonders wirksam gegen eine breite Vielfalt grampositiver Bazillen, und sie eignen sich insbesondere zur Behandlung von Infektionen im oberen Atmungstrakt und ähnlichen Krankheiten, die von H. influenza, S. aureus, S. pyogenes und dergleichen hervorgerufen werden. Ferner sind die Verbindungen auch zur Behandlung von Krankheiten wirksam, die von anaeroben Kokken verursacht werden, wie Peptostreptococcus anaerobius, Peptostreptococcus intermedius, Peptostreptococcus productus, Peptococcus osaccharolyticus, Peptococcus prevotii, Peptococcus avaerobius, Bacteroides fragilis, Propionibacterium acnes, Fusobacterium necrophorum und der-

25 gleichen.

Eine typische und bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist 7-(3-Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure, nämlich die Verbindung von Beispiel 9. Die antibakterielle Wirksamkeit dieser Verbindung ist in vitro durch übliche Agar-Verdünnungsversuche gegenüber einer Reihe grampositiver und gramnegativer Mikroorganismen bestimmt worden. Die folgenden Tabellen zeigen typische minimale Hemmkonzentrationen (MHK-Werte) in μg/ml für mehrere erfindungsgemäße Verbindungen gegenüber den angegebenen Mikroorganismen. Zum Vergleich sind auch die MHK-Werte für mehrere bekannte Verbindungen erwähnt.

	Stamm	Durch	TABELLE I	9	erhaltene	MHK-Werte (Vg/ml)	1 8 64 8	4 32 128 32	0,5 16 128 .8	21	22
	Xl. 1 V41 X400 S13E	Ampi cillin	Agar-Verdünnung	1 16 64 8			8 4	32 8	4 2	32 128 128 128	1 8 64 8
Organismus	EPIl 222	0,25 32 128 64	Cepha lexin	8 2			0,25	J.	0,125	128 64	8 4
Staph. aureus	C203	8 0,25	4 128 128 128	0,125	Verbindung uon Beispiel 17 18 19 20	1	4 .	0,5	8	0,5
Staph. epi	PARK	0,03	32 8	0,5	1 8 64 8	128 128	128 128	128 128	16	0,5
Strep. A	X66 2041	0,03	0,5	128 64	4 2	4 1	16 4	4 0,5	128 128	64 64
Strep. PN	CL. 76	4 2	2	2 0,5	0,125	128 64 64	128 128 128	128 128 128	64 8	8 2
Strep. D	NlO EC14 TKM	0,5 16	128 128	128 32 32	0,5	4 128 128	16 128 128	4 128 128	128 128 128	128 64 128
H. influ.	X26 KAE X68	8 4 128	8 8	2 128 128	128 64		64 128 128	1 128 128
E. coli		16 128 . 16	8 4 8	2 0,5
Klebsieila		4 128 8	128 64 64
	2 128 128

TABELLE I (Fortsetzung)

	Stamm	Ampi cillin	Durch Agar-rVerdünnung erhaltene MHK-Werte (\Lq/ml)	9	Verbindung 17	von Bei: 18	spiel 19	20
Organismus	Xl. 1 V41 X4OO S13E	0,25 32 128 64	Cepha lexin	2 16 32 16	64 128 128 128	16 128 128 128	16 64 128 64	1 8 16 8
Staph· aureus	EPIl 222	8 0,25	4 128 128 128	8 2	128 64	128 8	64 32	4 2
Staph. epi	C2O3	0,03	32 8	0,125	16	8	4	0,5
Strep. A	PARK	0,03	0,5	0,125	8	8	16	1
Strep. PN	X66 2041	4 2	2	64 32	128 128	128 128	128 128	128 32
Strep. D	CL. 76	0,5 16	128 128	8 1	128 4	128 16	128 2	8 1
H. influ.	NlO EC14 TEM	8 4 128	CO CO	128 128 128	128 128 128	128 128 128	128 128 128	128 128 128
E. coli	X26 KAE X68	16 128 16	8 4 8	8 128 128	128 128 128	128 128 128	64 128 128	4 128 128
Klebsieila		4 128 8

21

22

8	1
32	4
64	8
16	4
16	4
16	2
1	0,25
2	0,25
64	64
64	32
32	8
2	0,5
64	64
64	64
64	64
16	2
64	64
64	64

t 1

TABELLE II

MHK-Werte ^g/ml) gegenüber einem erweiterten Spektrum an Organismen

Verbindung von Beispiel Organismus Stamm 9 17 18 19 20

22

Staph. epi	EPIl	8	4	8	32	16	16	I
	270	4	2	4	16	8	8	(Ti
	219	1	0,5	1	4	2	2	►Ρ»
	2.69	2	2	4	16	4	4	I
	285	2	1	2	8 :	4	4
	286	1	0,25	1	1	1	1
Staph. aureus	S224	1	1	1	4	2	2
	S225	1	1	1	4	2	2
	S226	2	1	2	. 4	2	2
	S227	1	1	2	4	2	2
	S228	1	0,5	1	4	2	2
	S229	2	1	2	8	2	4
	S230	1	1	1	4	2	2
	S23X	1	0,5	1	2	1	1
	S234	2	1	2	4	2	2
	S237	X	1 .	2	4	2	2
	S238	2	1	2	8	4	4
	S239	2	1	2	β	2	2

Organismus

TABELLE II (Fortsetzung) MHK-Werte (\iq/val) gegenüber einem erweiterten Spektrum an Organismen

Stamm Verbindung von Beispiel 18 19

20

H. influenzae

CL,

HESS

STEL

312

B465

1930

4842

3.683

M366

M370

M371

105

158

164

171

169

1 64

1 64

0,5 64

64 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1 1

2 64

1 64

0,25 64

1.

16 4

16

64

64

16

64 4 4 4 4 4 4 4

16 1 8

64 4

64 4 2 1

64 2 2 2 2 2 2 4

TABELLE III

Suszeptibilität von anaeroben Bacteroides-Isolaten in Form von durch Agar-Verdünnung erhaltenen MHK-Werten (jj,g/ml), die 24 Stunden nach Inkubation

ermittelt werden

	Stamm	Moxalactam	Ve	rbmdung von	Beispiel	19	20
Anaerobe Bakterien	1877	2	9	17	18	8	16
Bacteroides fragilis	103	4	8	.8	16	32	64
	104	0,5	32	16	64	16	8
	106	1	4	2	16	8	16
	107	1	4	4	16	8	32
	108	0,5	8	8	16	16	8
	110	0,5	4	4	16	8	32
	111	8	8	4	16	64	128
	9	0,5	64	32	128	8	16
	1874	8	4	4	8	32	64
Bacteroides corrodens			32	16	64
Bacteroides	1438	2				16	16
thetaiotaomicron	1900A	64	4	8	16	32	32
		16	32	32

- 67 -

Die ausgezeichnete Wirksamkeit der Verbindungen gegenüber anaeroben Bakterien und gegenüber Haemophilus influenzae ist an erweiterten Versuchen unter Verwendung zusätzlicher Stämme von Mikroorganismen gezeigt worden. Die Verbindung von Beispiel 9 ist mit bekannten Antibiotika verglichen worden, und sie hat sich dabei als wesentlich stärker wirksam erwiesen als die Vergleichsverbindungen. Die Tabelle IV zeigt gegenüber einer breiten Vielzahl von Stämmen von Bacteroides fragilis und Haemophilus influenzae erhaltene typische MHK-Werte.

C. )

TABELLE IV

MHK-Werte (μq/ϊίιl) gegenüber einem erweiterten Spektrum von anaeroben Mikroorganismen und von Haemophilus influenzae

Mikroorganismus	Stamm	Cephalexin	Cefaclor	Verbindung A	Verbindung B
Bacteroides fragilis	10817	16	64	0,5	4
	180-821	16	64	0,5	2
	10695	64	32	0,5	16
	107268	16	16	2	16
	107266	32	16	0,5	4
	10750	64	>64	8	64
	10774	>64	>64	1	64
	10837·	16	>64	0,5	16
	10732	32	16	0,5	4
	10683	>64	16	0,5	16
	10668	>64	64	0,5	64
	108133	32	32	0,5	16
	Mittelwert	40	39	1,2	27
	Standard abweichung	22	23	2,1	26
	Geometrischer Mittelwert	34	32	0,7	15

	TABELLE IV	(Fortsetzung)	Verbindung A	2 Verbindung B
Mikroorganismus Stamm	Cephalexin	Cefaclor	1	2
Haemophilus influenzae 101	8	2	16	16
102	16	16	0,5	2
103	16	2	1	2
104	16	1	0,5	2
105	4	1	1	1
106	8	2	1	4
107	8	2	2	ι
108	8	1	1	1
109	16	2	0,5	4
110	8	1	0,5	1
111	16	1	2	8
112	16	2	0,5	2
113	8	2	_2
114	__8	JL	2,1	3
Mittelwert	22	3	3,9 1,1	4 2
Standard abweichung Geometri scher Mittelwert	42 12	4 2

7~(3~Benzothienyl)glycylamido-3-methyl-3-cephem-4~ carbonsäure 7-(2-Benzothienyl )glycylamido-3~methyl-3-cephem~4- carbonsäure

Die in obigen Tabellen enthaltenen Daten machen deutlich, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen über eine starke antibakterielle Wirksamkeit verfügen.

Zusätzlich zu dieser starken antibakteriellen Wirksamkeit gegenüber einer breiten Vielfalt von Mikroorganismen, insbesondere von grampositiven Organismen und anaeroben Bakterien, haben sich die erfindungsgemäßen Verbindungen auch als sehr vorteilhafte Pharmakokinetika bei Tieren er-I^ wiesen. Verabreicht man beispielsweise 7-(3-Benzothienylglycylamido)-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure an Ratten in einer intravenösen Dosis von 20 mg/kg, dann liegt die Plasmakonzentration nach einer Stunde bei 25,0 μg/ml, und nach 4 Stunden bei 10,5 μg/ml.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen verfügen ferner auch über eine gute Stabilität gegenüber ß-Lactamasen. Die folgende Tabelle V zeigt die Ergebnisse vergleichender Untersuchungen an mehreren Cephalosporine:!· (niedrigere Zahlen bedeuten eine größere Stabilität gegenüber der angegebenen ß-Lactamase).

TABELLE V 25 Stabilität gegenüber ß-Lactamase

Organism'us 265A PS185 TEM 1082E 1313G

	Cefaclor	138	71	23	65	4605
30	Cephalexin	72	37	1	6	254
	7-{3-3enzothienyl- glycylamido)-3-me- thyl-3-cephem-4- carbonsäure	14	25	3	25	210

Das günstige pharmakokinetische Verhalten der erfindungsgemäßen Verbindungen in Verbindung mit ihrer ausgezeichneten antibakteriellen Wirksamkeit und oralen Absorption .

macht diese zu besonders interessanten Mitteln für die.Behandlung einer Reihe von auf Bakterien zurückzuführende Erkrankungen. Die Verbindungen eignen sich insbesondere zur Behandlung ambulanter Patienten, und vor allem solcher Pa-

tienten, die an schwachen Infektionen im oberen Atmungstrakt leiden, die durch grampositive Mikroorganismen hervorgerufen werden. . "

Zur Erfindung gehört daher auch ein Mittel zur Behandlung von Tieren, die an bakteriellen Erkrankungen leiden oder bei denen man die Gefahr der Entwicklung einer bakteriellen Infektion vermutet. Zur Durchführung dieses Verfahrens zur Bekämpfung von Bakterien verabreicht man einem Tier, das einer solchen Behandlung bedarf, eine antibakteriell

¹^ wirksame Menge eines Benzothienylglycylcephalosporin-Antibiotikums. Das Verfahren kann therapeutisch oder prophylaktisch angewandt werden. Die Menge an zu verabreichendem antibiotischem Wirkstoff ist abhängig von der jeweils für die Anwendung ausgewählten Verbindung, der Stärke der Erkrankung, die behandelt oder vor der geschützt werden soll, dem jeweils zu behandelnden Patienten und verwandten Faktoren, mit denen man es gewöhnlich bei solchen Behandlungen zu tun hat. Normalerweise werden die Verbindungen jedoch in einer Dosis von etwa 0,5 bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht des Tiers, und vorzugsweise in einer Menge von etwa 1 bis etwa 10 mg/kg, verabreicht. Solche Mengen können einmal täglich oder auch öfter verabfolgt werden, wie dies zur Behandlung der jeweiligen Erkrankung oder des Patienten, der einer Behandlung bedarf,, erforderlich ist.

Eine typische Tagesdosis für einen mittleren erwachsenen Menschen beträgt etwa 200 bis etwa 500 mg/Tag.

Die erfindungsgemäßen antibiotisch wirksamen Verbindungen sind sowohl bei oraler als auch bei' parenteraler Verabreichung wirksam, und sie lassen sich daher in jeder für einen solchen Verabreichungsweg gewünschten. Weise formulieren. Derartige Formulierungen stellen eine weitere Aus-

führungsforra der Erfindung dar. Die erfindungsgemäßen Formulierungen enthalten etwa 0,1 bis etwa 95 Gew.-% eines erfindungsgemäßen wirksamen Benzothienylglycylcephalosporin-Antibiotikums in Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff hierfür. Typische Formulierungen enthalten etwa 10 bis etwa 60 Gew.-% Wirkstoff, und insbesondere etwa 20 bis etwa 50 % Wirkstoff.

Zur Bildung oral verabreichbarer Arzneiformen kann man. die Verbindungen mit irgendeinem für orale Formulierungen herkömmlich verwendeten Verdünnungsmittel, Hilfsstoff und Träger vermischen und zu Tabletten, Pillen oder Dragees formen oder in Gelatinekapseln einschließen. Zu typischen herkömmlicherweise verwendeten Trägern, Verdünnungsmitteln und Hilfsstoffen gehören Kartoffelstärke, Maisstärke, Saccharose, Dextrose, mikrokristalline Cellulose, Dicalciumphosphat, Alginsäure oder Akazie, Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, Bindemittel, wie Tragacanth oder GeIatine, und Aromastoffe, wie Pfefferminzöl, Kirsch- oder Himbeeraroma, Gaultherienöl, und dergleichen. Die Verbindungen können auch als Sirupe oder Elixiere unter Verwendung herkömmlicher Verdünnungsmittel, wie Fettölen, Methylparaben oder Propylparaben, geeigneter Farbstoffe und Aromastoffe formuliert sein. Ferner können die Verbindungen auch zur Form eines Bukkaiverschlusses, einer Lozenge oder einer sonstigen Vorrichtung formuliert sein, die sich für eine verzögerte, gesteuerte Freigabe des Wirkstoffs über eine verlängerte Zeitdauer eignet.

30 ^

Die erfindungsgemäßen Antibiotika können auch so formuliert sein, daß sie sich parenteral, wie intravenös, intramuskulär oder subkutan, oder auch transdermal verabreichen lassen. Solche Zusammensetzungen enthalten normalerweise etwa 0,1 bis· etwa 20/DGew.-% Wirkstoff. Zu typischen Hilfsstoffen, Verdünnungsmitteln und Trägern für parenterale Formulierungen gehören beispielsweise isotonische Koch-

·*· salzlösung, verdünnte wäßrige Dextrose oder alipahtische Polyhydroxyalkohole oder Gemische hiervon, wie Glycerin, Propylenglykol oder Polyethylenglykol. Parenteral verabreichbare Lösungen enthalten auch Konservierungsmittel, ° wie Phenethy!alkohol, Methylparaben, Propylparaben oder Thimercsal. Erforderlichenfalls kann man auch etwa 0,05 bis etwa 0,20 Gew.-% eines Antioxidationsmittels, wie Natriummetabisulfit oder Natriumbisulfit, mit verwenden. Für intravenöse Verabreichung werden vorzugsweise Formulierungen mit einer Anfangskonzentration bis hinab zu etwa 0,05 bis etwa 0,25 mg Wirkstoff pro ml angewandt, während zur intramuskulären Injektion vorzugsweise mit einer Wirkstoffkonzentration von etwa 0,25 bis etwa 0,50 mg/ml gearbeitet wird.

Typische geeignete Formulierungen gehen aus den folgenden Beispielen hervor.

Beispiel 39 20

Formulierung für eine oral verabreichbare Suspension

Bestandteile Menge

25 Natrium-D-7-(3-benzothienylglycylamido)-

3-chlor-3-cephem-4-carboxylat 500 mg

Sorbitlösung (70 % N.F.) 40 ml

Natriumbenzoat 150 mg

Saccharin 10 mg

Kirscharoma 50 mg 30

Destilliertes Wasser auf 100 ml

Man gibt die Sorbitlösung zu 40 ml destilliertem Wasser und suspendiert das Benzothienylglycylcephalosporin darin. Sodann werden Saccharin, Natriumbenzoat und Aroma zugesetzt und gelöst. Das Volumen wird mit destilliertem Wasser auf 100 ml eingestellt. Jeder ml dieses Sirups enthält

^ 5 mg des Benzothienylglycylcephalosporin-Antibiotikums. Diese orale Formulierung eignet sich vor allem zur pädiatrischen Anwendung.

⁵Bei spiel 40

Herstellung einer 250 mq-Kapsel

Bestandteile Menge

10 15

7-(ö-Chlor-S-benzothienylgylcylamido)-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure

Lactose Maisstärke

250	mg
150	mg
100	mg
500	4 mg

Die Bestandteile werden gleichförmig miteinander vermischt und in Gelatinekapseln eingeschlossen. Solche Kapseln lassen sich oral verabreichen, beispielsweise ein- oder zweimal täglich.

AD ^j

Beispiel 41

Herstellung einer zur parenteralen Verabreichung geeigneten Lösung

In einer Lösung aus 700 ml Propylenglykol und 200 ml destilliertem Wasser zur Injektion löst man 20,0 g D-7-(3-Benzothienylglycylamido)-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbon- säure-hydrochlorid. Der pH der Lösung wird mit Chlorwasserstoff säure auf 5,5 eingestellt und ihr Volumen mit destilliertem Wasser auf 1000 ml gebracht.. Die Formulierung wird sterilisiert, in 5,0 ml-Ampullen abgefüllt, die jeweils . 2/0 ml Formulierung (was 40 mg Wirkstoffgehalt entspricht) enthalten, und unter Stickstoff verschlossen.

17. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man 7-/D-(6-Chlor-3-benzothienyl)-glycylamidoZ-S-meth-yl-S-cephem^-carbonsaure _O(3_{er e}±_n pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.

18. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 7-/D-(5-Chlor-3-benzothienyl)-glycylamidc_:/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.

19. . Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon, dadurch gekennzeichnet , daß sie nach einem Verfahren gemäß einem der

Ansprüche 1 bis 18 hergestellt worden ist. 25

Hierzu 1 Seite Formeln

X-5882

Formelblatt

R'

R

(I)

CCOR⁶

• *

JW

cder R'

-as. ·

Claims (16)

1. Patentanspruch

   1. Verfahren zur-Herstellung von {3-Benzothienyl)glycylamidocephalosporin-Derivaten der Formel (I)

   ? Γ

   (f

   i-R⁵

   COOf

   COR

   (I)

   worm R¹ für

   R·'

   ι oder

   R⁷-

   7 fi

   steht, wobei R und R unabhängig Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, C, -C -Alkyl, C^-C.-Älkoxy, Nitro,. Amino, C, -C.Al kanoylamino oder C,-C.-Alkylsulfonylamino bedeuten

   7 8
   oder R und R zusammengenommen Methylendioxy bilden,

   A und B jeweils Wasserstoff sind oder sich zusammengenommen zu einer Doppelbindung ergänzen, 2
   R Wasserstoff, eine Aminoschutzgruppe, Hydroxy oder Meth-

   oxy ist und

   R Wasserstoff ist, oder 2 3

   R und R zusammen für

   stehen, wobei· M und L unabhängig C,-C -Alkyl sind,

   R Wasserstoff, Methoxy oder Methylthio ist,

   R Wasserstoff, Methoxy, Methyl, Halogen, Methoxymethyl

   oder Vinyl ist,

   R Wasserstoff oder eine Carboxyschutzgruppe ist, mit der Maßgäbe, daß R nur dann Hydroxy oder Methoxy ist, wenn sich A und B zusammen zu einer Doppelbindung ergänzen, und daß A und B beide Wasserstoff sind, wenn R etwas anderes als Wasserstoff ist,

   und von pharmazeutisch annehmbaren Salzen hiervon, dadurch gekennzeichnet, daß man (A) eine Verbindung der Formel (II)

   15 Lk L· (Ii

   · COOP³.

   mit einem Acylierungsmittel der Formel (III) 20

   B R²

   V / ·

   , I (HD

   R^-C-C-OH,

   oder einem aktivierten Derivat hiervon, worin A, B, R , R , R", R und R wie oben definiert sind, acyliert und gegebenenfalls eventuell vorhandene Amino- oder Carboxyschutzgruppen entfernt,

   (B) eine geschützte Säure der Formel (I), worin R für eine Carboxyschutzgruppe steht, deblockiert und so eine Verb:
   ist.

   Verbindung der Formel (I) bildet, worin R Wasserstoff

   (C) eine Aminoschutzgruppe R von einer Verbindung der Formel (I) entfernt und so eine Verbindung der Formel (I)

   bildet, worin R Wasserstoff ist,

   (D) falls man eine Verbindung herstellen möchte, worin R und R zusammen eine Gruppe der Formel

   bilden, eine Verbindung der Formel (I), worin R und R jeweils Wasserstoff sind, mit einem Keton der For-

   mel

   M-C-L

   Il

   worin M und L wie oben definiert sind, umsetzt, oder

   .(E) eine Verbindung der Formel (I), worin A und B zusammen eine Doppelbindung bilden und R Hydroxy oder Methoxy ist, reduziert und so- eine Verbindung der For-

   2 mel (I) bildet, worin A, B und R Wasserstoff sind,und

   (F) gewünschtenfalls eine Verbindung der Formel (I) in ein

   Salz überführt, oder

   (G) gewünschtenfalls ein Salz einer Verbindung der Formel (I) in das freie Amin oder die Säure überführt.
2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man Verbindungen der Formel (I), wor-

   2 3

   m R und R zusammengenommen die Gruppe

   ML 30 V

   bilden, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon

   herstellt. 35
3. 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man -eine Verbindung der Formel (I),

   worin A. und B zusammengenommen sich zu einer Doppelbindung

   ergänzen und R Methoxy ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
4. 4. Verfahx-en nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (I), worin R für

   J I

   steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
5. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der

   Formel (I), worin R für 20

   ;x Λ/

   Re

   steht, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
6. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 oder 5, da-

   durch gekennzeichnet , daß man eine Verbin-

   7 8

   dung der Formel (I), worin R oder R unabhängig Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, C,-C .-Alkoxy_r Nitro oder Amino ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
   35
7. 7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (I),

   I 7 R

   worin R oder R unabhängig Wasserstoff oder Halogen ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
8. 8. Verfahren nach Anspruch 6 oder 7, dadurch g e -

   ° kennzeichnet, daß man eine Verbindung der For-

   7 8

   mel (I), worin R und R jeweils Wasserstoff sind, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
9. 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (I), worin R Methyl, Chlor, Methoxy, Wasserstoff, Methoxymethyl oder Vinyl ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
10. 10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der Formel (I), worin R Methyl oder Chlor i-st, ode: annehmbares Salz hiervon herstellt.

    worin R Methyl oder Chlor i-st, oder ein pharmazeutisch
11. 11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (I), worin R Wasserstoff ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
12. 1.2. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (I), worin R Wasserstoff ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
13. 13. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man 7-/D-(3-Benzothienyi)glycylamid_o/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ein pharmazeu^- tisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
14. 14. Verfahren nach'Anspruch 1, dadurch, gekennzeichnet, daß man 7-/D-(6-Fluor-3-benzothienyl)-glcylamido_/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
15. 15. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 7-/D-(5-Fluor-3-benzothienyl)glycylamido/-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon herstellt.
16. 16. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 7-/D-(3-Benzothienyl)glycylamido/-3-chlor-3-cephem-4-carbonsäure oder ein pharmazeutisch

    annehmbares Salz hiervon herstellt. 10