CZ391697A3

CZ391697A3 - Iontové molekulární konjugáty N-acylovaných derivátů poly-(2-amino-2-deoxy-D-glukozy) a polypeptidu

Info

Publication number: CZ391697A3
Application number: CZ973916A
Authority: CZ
Inventors: Shalaby W. Shalaby; Steven A. Jackson; Francis Ignatious; Jacques Pierre Moreau
Original assignee: Biomeasure Incorporated
Priority date: 1995-06-06
Filing date: 1996-05-24
Publication date: 1998-05-13
Also published as: AU5878996A; EP0830137B1; CN1192152A; NZ308909A; JPH11508289A; EP0830137A4; DE69629114D1; RU2172323C2; ATE245031T1; SK168397A3; EP0830137A1; CA2222995C; WO1996039160A1; CA2222995A1; AU717188B2; US5665702A; SI9620090A; DE69629114T2; PT830137E; HUP9901627A1

Description

Předkládaný vynález se týká ' kopolymeru obsahujícího N-acylovaný derivát a prostředku obsahujícího tento kopolyrner a polypeptid, který obsahuje přinejmenším jeden účinný ionogenní amin.

Dosavadní stav techniky

Polymerní systémy pro dopravu léků byly vyvinuty pro kontrolované uvolňování farmaceutických polypeptidu. Například, syntetické polyestery, jako je póly(DL-mléčná kyselina), póly(glykolová kyselina), póly(mléčná-glykolová kyselina) a póly (ε-káprolaktan), byly použity ve formě mikrokapsulí, filmu nebo tyčinek pro uvolňování biologicky aktivních polypeptidu. Viz např. U.S. patenty č. 4,767,628 a 4,675,189 a PCT přihláška č. WO 94/00148.

Kromě syntetických polymernich řetězců, byly také jako složky v podobných prostředcích se zpožděným uvolňováním použity přírodní polymery a jejich deriváty, které podléhají enzymatickému odbourávání. Jedním z příkladů takových přírodních polymerů jsou polymery založené na bázi chitinu, póly(N-acetylglukosaminu). Ale, protože chitin není ve vodě rozpustný, byly testovány rozpustné deriváty, které jsou založeny na částečně deacetylovaném chitinu, např. chitosan. Viz např. Sanford, P.A. a kol., editoři, Advances in Chitin & Chitosan (1992). Ačkoliv lze chitosan nalézt v některých houbách, výroba biodegradovatelného chitosanu se obecně provádí uměle. Viz Mima, a kol., J. Appl. Polym. Sci, 28: 1909-1917 (1983). Aby se změnily in vivo biologické ·· ·♦·· • ·

9 9 ·

9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 99

9999 999 9 · • ··*♦ · · · ···· ··* ·· ···· 99 99 charakteristiky polymeru byly také připraveny sytetické deriváty chitosanu. Viz Muzzarelli, a kol., Carbohydrate Res., 207: 199-214 (1980) .

Použití chitínu, stejně jako derivátů.chitinu, bylo navrženo v mnoha systémech dopravy léku. Viz např. Evropské patentové přihlášky č. 486, 959, 482,649, 525,813 Al a 544,000 Al, a U.S.

patent č, 5,271, 945.

Podstata vynálezu

Shrnutí vynálezu

V jednom aspektu se předkládaný vynález týká kopolymeru obsahujícího N-acylovaný derivát póly(2-amino-2-deoxy-Dglukosy), kde 1 až 50 i volných aminu póly(2~amino-2deoxý-D-glukosy) je acylováno první acylovou skupinou, přičemž

t.ato první acylová skupina skupiny sestávající

C. až C-.. karboxyalkylu, karboxyalkenylu, C až

C.. karboxyarylalkylu a je COE_;, kde E, je

vybráno	ze
C,	až	C..
.C,	až	c....

aminů karboxyarylalkenylu až 99 volných je acylováno druhou póly (2-amino-2-deoxy-D-glukosy·) skupinou, přičemž tato druhá acylová skupina je COE-, acylovou kde E. je vybráno ze skupiny sestávající z C- až

C alkylu,

C, až C

- alkenylu, C. až Cl. arylalkylu a C., až C arylalkenylu, s tím, derivátu je acylován že přinejmenším jeden z volných aminů první acylovou skupinou a až 30 volných hydroxylových skupin póly(2-amino-2-deoxy-D-glukosy) ' j skupinou.

acylováno první acylovou . skupinou nebo druhou acylovou

Kopolymer má, výhodou, molekulovou hmostnost

3000 až

0.00 dal tonu jak bylo stanoveno gelovou perméační chromatografíí nebo j iným analogickým způsobem.

V jiném preferovaném přes 90 volných aminů póly(2-amino-2-deoxy-D-glukosy) acylováno bud’ první acylovou skupinou. S výhodou je 10 % až skupinou nebo druhou acylovou volných aminu póly (2-amino-2-deoxy-D-glukosy) acylováno

ΦΦ φ-φφφ • · • »»· ·· φφ φφ

Φ φ · φ φ φ · · φ φ ·· ,,φ φ φ φ ···· · φ · φ φ φ φ φ φφ φφφφ φφ ·· první acylovou skupinou. Některé z volných hydroxylových skupin (např. 1 až 30 *) derivátu mohou být acylovány bud’ první acylovou skupinou nebo druhou acylovou skupinou.

V preferovaném provedení se jedná o kopolymer obecného vzorce (I):

kde·:

R je pro každou jednotlivou opakující se jednotku vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

R, je pro každou jednotlivou opakující se jednotku vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

R je vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H.;

R je vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

R je vybráno ze skupiny sestávající z COH a CH OR„;

• R j^e vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

n je 2 až 200 a pro 1 až 50 opakuj ících se jednotek . je R, první acylová skupina, a prc 50 až 99 opakujících se jednotek je R. první acylová skupina, s tím, že pro přinejmenším jednu z

9999

9

9 99 opakujících se jednotek je R. první acylová skupina.

Termíny COE a COE označují -C=O*E. a -C=O’E_;. Substituenty karboxyalkyl, karboxyalkenyl, karboxyarylalkyl a karboxyarylalkenyl obsahují 1 Příklady první acylové skupiny výčtem nijak omezeny, sukcinyl,

2-(C až ,C. alkenyl)sukcinyl, itakonyl. Příklady druhé acylové až 4 karboxylové skupiny, zahrnují, ale nejsou tímto

2-(C- až C,,. alkyl) sukcinyl, maley.1, ftalyl, glutaryl a skupiny zahrnují, ale nejsou tímto výčtem nijak omezeny, acetyl, benzoyl, propionyl a fenylacetyl

Předkládaný vynález se dále týká prostředku obsahujícího uvedený kopolymer a polypeptid, přičemž polypeptid obsahuje přinejmenším jeden účinný ionogenní amin, kdy přinejmenším 50 · hmotnostních, polypeptidu přítomného v prostředku je iontově vázáno k polymeru. S výhodou prostředek obsahuje 5 % až 50 7 hmotnostních polypeptidu.

Příklady vhodných polypeptidů zahrnují peptid uvolňující .růstový hormon (GHRP), peptid uvolňující luteinizačni hormon (LHRH), somatostatin, bombesin, peptid uvolňující gastrin .kalcitonin, bradykinin, galanin, hormon melanocyt (MSH), stimuluj icí růstový hormon uvolňující faktor (GRF), růstový hormon (GH)., amylin, tachykininy, sekretin, parathyroidní hormon (PTH), enkafelin, endothelin, peptid uvolňující kalcitóninový gen neuromediny, protein týkající se parathyroidního neurotensín, adrenokortikotrofní hormon hormonu (PTHrP), (ACTH), glukagon, peptid YY peptid uvolňující glukagon (G.LP) , vasoaktivní intestinální peptid (VIP), peptid aktivující pituitarní adenylátovou cyklasu (PACAP), motilin, substance P, neuropeptid

Termín biologicky aktivní analogy tak jak se používá v předkládaném vynálezu zahrnuje přirozeně se vyskytující, rekombinantni a syntetické peptidy, polypeptidy a proteiny,

0000 • 0 0 • · 00 * 0 0 • ♦ ·· ·· ♦· · ♦ •0 ·

0 0

00 «0 0000

00

0 0 · 0 0 00

000 0 0

0 0

00 které mají fyziologickou nebo terapeutickou aktivitu. Obecně tento termín zahrnuje všechny fragmenty a deriváty peptidu, proteinu nebo polypeptidů, který vykazuje kvalitativně podobný agonistický nebo antagonistický efekt jako nemodifikovaný nebo přirozeně se vyskytující peptid, protein nebo polypeptid, např. ty, ve kterých jeden nebo více aminokyselinových zbytků vyskytujících se v přirozených sloučeninách je nahrazeno nebo vynecháno, nebo ty, ve kterých byly N- nebo C- koncové zbytky strukturně upraveny. Termín účinný ionogenní amin označuje volný amin přítomný na polypeptidů, který je schopen tvorby iontové vazby s volnými karboxylovými skupinami na kopolymerů.

Uvolňování polypeptidů z prostředku lze upravit změnou chemické struktury prostředku. Zvýšení molekulové hmotnosti polymeru sníží rychlost uvolňování peptidu z konjugátu. Zvýšení počtu karboxylových skupin na polymeru zvýší množství polypeptidů iontově vázaného k prostředku a, následně, zvýší množství uvolněného peptidu z konjugátu.

Uvolňováni polypeptidů lze dále upravit (a) úpravou prostředku rozpustnými solemi dvoj vazných nebo vícevazných kovových iontu slabých kyselin (např. vápník, železo, hořčík nebo zinek); (b) pokrytím částic tenkou, absorbovatelnou vrstvou vyrobenou z glykolidového kopolymerů nebo silikonového oleje v kulovitém, válcovitém nebo plošném uspořádáni; nebo (c) mikrokapsulací prostředku v absorbovatelném glýkolidovém kopolymerů. V jednom z provedení prostředek obsahuje 0,01 i, hmotnostních, až 20 1, hmotnostních, vícevazného kovu.

V závislosti na volbě polypeptidů lze prostředky využít ,pro léčení mnoha onemocnění. Například, o somatostatinu, bombesinu, GRP, LHRH a jejich analogách bylo prokázáno, že léčí různé formy rakoviny. O růstových faktorech jako je GH, GRF a GHRP a jejich analogách bylo prokázáno, že stimulují růst; jak během dospívání tak ve stáří. O kalcitoninu, amylinu, PTH a PTHrP a jejich analogách bylo prokázáno, že léčí osteoporézu a další onemocnění kostí.

• · ·· ·· ·♦·· • · • · ··

Prostředky jsou navrženy pro parenterální podávání, např. intramuskulárními, subkutánními, intradurálními nebo intraperitoneálními injekcemi. S výhodou se prostředky podávají intramuskulárně.

Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou ve formě prachu nebo mikročástic, které se podávají jako suspenze s farmaceuticky přijatelným nosičem (např. voda s nebo bez nosiče, jako je mannitol nebo polysorbát). Prostředky lze také upravit do formy tyčinek pro parenterální implantaci pomocí trokaru, např. intramuskulární implantace.

Dávka prostředku podle předkládaného vynálezu pro léčení uvedených nemocí nebo poruch se mění v závislosti na způsobu podávání, věku a tělesné hmotnosti léčeného subjektu a je na rozhodnuti zkušeného lékaře nebo veterináře. Takové množství prostředku, které je stanoveno lékařem nebo veterinářem, se v tomto dokumentu označuje jako terapeuticky účinné množství.

V dalším aspektu se předkládaný vynález týká způsobu syntézy kopólym.eru, kdy tento způsob zahrnuje kroky: reakci chitosanu se slabou kyselinou, kdy vzniká polysacharid o nízké molekulové hmotnosti;

reakci 1 až 50 % volných aminů polysacharidu c .nízké molekulové hmotnosti s prvním acylačním činidlem, kdy první acylační činidlo je vybráno ze skupiny sestávající z C. až C,., pol ykarbcxya lkánu, C₄ až C._;polykarboxyalkenu, C až C·· polykarboxyarylalkanu, C_;, až. Cpolykarboxyarylalkenu, nebo jeho acylačního derivátu; a reakci 50 až 100 ? volných aminu polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti s druhým acylačním činidlem, kdy druhé acylační činidlo je vybráno ze skupiny sestávající z C. až C,. monokarboxýalkanu, C. až C - monokarboxyalkenu, C až C..monokarboxyary]alkanu, C až C. monokarboxyarylalkenu, nebo jeho acylačního derivátu. Reakce polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti jak s prvním acylačním činidlem, tak s druhým acylačním činidlem se měří činidlem detekujícím amin (např. fluorescamin) , aby se ověřilo, že 1 až 50 ( volných • · · · · • ··· · · • · · ·· • · ·· ···«··· · ·

M ···· • · · * · · • · · ·· • · ♦ · · · · • ♦ · · ···· ·· aminu polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti bylo acylováno prvním acylačním činidlem a 50 až 99 % volných aminu polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti acylováno druhým bylo

Bailey, P.D.,

An Introduction acylačním činidlem. Viz např.

to Peptide Chemistry (Wiley, NY) (1990);

Oppenheimer, H., a kol., Archives Biochem.

Biophys. .120:

Stein, S., Arch. Biochem.

Biophys. 155:

Reakci chitosanu se slabou kyselinou (např. kyselina dusitá) se polymer štěpí, čímž (např. 2500 až 80 se snižuje

0 dal tonu). V jeho molekulová hmotnost první acylační skupina druhé preferovaném provedení se činidlo nechají acylační reagovat s polysacharidem o nízké molekulové hmotnosti jedno po druhém, například, se buď nechá reagovat s prvním acylačním činidlem před druhým acylačním činidlem nebo s druhým acylačním činidlem před prvním acylačním činidlem nebo najednou.

Důsledkem acylace volných aminů acylaci některých volných hydroxylových skupin polysacharidu o nízké molekulové' hmotnosti. Rozsah acylace volných hydroxylových skupin lze upravit změnou pH nebo rozpouštědel nebo činidel použitých během acylačních reakcí nebo použitých

Příklady acylačních derivátu zahrnují, ale nejsou tímto (např. imid.azoly a pyrazoly) . Viz např.

Bodansky a kol., The

Practice of Peptide .1984) . Činidla

Synthesis, 87 až

150 (Sp.ri nger-Verl ag, polykarboxyalkan, polykarboxyalken, polykarboxyarylalkan a polykarboxyarylalken nebo jejich .acylační deriváty obsahují nebo jsou odvozeny z činidel obsahuj icích až 5 karboxylových skupin. Substituenty monokarboxyalkan, monokarboxyalken, monokarboxyarylalkan a monokarboxyarylalken obsahují nebo jsou odvozeny z činidel nejsou tímto výčtem obsahující cl skupinu. Příklady • ·· · 9 9 99

9 9 9 999

9 9 9 999 99

9 9 9 99

9999 9999 nijak omezeny, anhydrid kyseliny jantarové, anhydrid kyseliny kyseliny 2-(C, až C-„anhydrid alkenyl)jantarové, anhydrid kyseliny mal.einové, anhydrid kysellny glutarové, anhydrid kyseliny itakonové a anhydrid kyseliny fta love

Příklady druhých acylačních činidel zahrnuj i, al.e nejsou tímto výčtem nijak omezeny, anhydrid kyse.liny octové, anhydrid kyseliny benzoové,

N, Ν'-diacetyl-3,5-dimethylpyrazol,

N,N'-dracetylimidazol, anhydrid kyseliny fenyloctové, anhydrid kyseliny propionové a anhydrid butanové.

Ještě v dalším aspektu se předkládaný vynález týká způsobů syntézy prostředku, kdy tento způsob zahrnuje kroky:

reakci chitosanu se slabou kyselinou, kdy vzniká polysacharid o nízké molekulové hmotnosti;

až 50 volných aminu polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti s prvním acylačním činidlem, kdy první acylační činidlo je vybráno ze skupiny sestávající z C_t až C.

polykarboxyalkanu, C. až C_í4 polykarboxyalkenu, C až C polykarboxyarylalkanu, C_;· až C...

polykarboxyarylalkenu, nebo jeho acylačního derivátu; reakci az volných aminu polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti druhým acylačním činidlem, ;kdy druhé acylační činidlo je vybráno ze monokarboxyalkánu, C, až skupiny sestávající z C.

monokarboxyalkenu, Caž C až C, monokarboxyarylalkanu,

C..

monokarboxyarylalkenu, nebo jeho acylačního derivátu;

neutralizaci acylovaného polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti bází; a smíchání neutralizovaného acylovaného polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti s polypeptidovou solí, kdy tato polypeptidová sůl obsahuje přinejmenším jeden iono.genni amin, čímž vznikne iontový konjugát polypeptidu s kopolymerem.

Krok neutralizace, ,s výhodou, způsobí, že. polysacharid o nízké molekulové hmotnosti je emulgovatelný nebo rozpustný ve vodě. V preferovaných provedeních je báze anorganická báze (např. hydroxid sodný). Polvpeptidová sul je, s výhodou, sul slabé kyseliny (např. octan, laktát nebo citrát). Iontový konjugát lze izolovat filtraci nebo odstřeďováním výsledné směsi.

Konjugáty podle předkládaného vynálezu lze snadno upravit na inj ikovatelné mikrokuličky nebo mikročástice a implan.tovatelné filmy nebo tyčinky, aniž by bylo potřeba využít zpracováni, při kterém dochází k vzniku polyfázových emulzi. S výhodou se mikročástice vyrábějí tak, že se (a) rozpustí prostředek v aprotickém, s vodou mísitelném, Organickém rozpouštědle; (b) organické rozpouštědlo se smíchá s vodou; a (c) z vody se izolují mikročástice. V preferovaných provedeních je organické rozpouštědlo vybráno ze skupiny acetonu, acetonitrilu, tetrahydrofuranu, dimethylformamidu a dimeth.ylethylenglykolu.

Další předměty a výhody předkládaného vynálezu budou jasné z podrobného popisu vynálezu a z patentových nároku.

Podrobný popis vynálezu

Syntéza a použití kopolymerů a iontových konjugátů kopolymerů s polypeptidem podle předkládaného vynálezu jsou v rámci možností odborníka s běžnými zkušenostmi z dané 'problematiky Pokud není uvedeno jinak, všechny technické a vědecké termíny použité v tomto dokumentu mají význam jaký je běžný v problematice, které se předkládaný vynález týká. Všechny publikace, patentové přihlášky, patenty a další reference uvedené v předkládaném vynálezu jsou zde uvedeny jako reference.

Předpokládáme, že odborník vzdělaný v dané problematice dokáže na základě popisu předkládaného vynálezu tento vynález využit v jeho nej širším rozsahu. Následující konkrétní provedeni jsou, proto, uvedeny pouze jako ilustrace a žádným zpusqbem nijak neomezují předkládaný vynález.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Depolymerace chitosanu

Chitosan (Protan, lne., Portsmouth, NH) byl rozpuštěn ve vodné kyselině octové tak, že se míchal mechanickým míchadlem jeden den.

Během přidávání dusitanu sodného byl roztok probubláván plynným dusíkem.

Po pul hodině byl roztok podtlakově přefiltrován přes nálevku s fritou, aby se odstranily nerozpustné částice, které byly přítomny v původním roztoku chitosanu. K přefiltrovanému roztoku byl přidán vodný roztok NaOH a roztok byl intenzivně míchán v methanolu, čímž byl vysrážen polymer. Výsledná sraženina pak byla přefiltrována a pětkrát promyta dostatečným množstvím vody a methanolu. Sraženina °C po dobu dvou jednom konci řetězce pak byla sušena ve vakuové sušárně při dnu. Depolymerace chitosanu zanechává na aldehydickou skupinu. Aldehyd lze reakcí s NaBH_; zredukovat na primární hydroxy1. Produkt depolymerace byl analyzován pelovou permeační chromatografií (GPC), čímž byla stanovena molekulová hmotnost a distribuce molekulových hmotností (MWD) srovnáním s Pullulanovými referenčními standardy. NMR a IČ studie byly použity pro stanovení množství N-acetylace depolymerovaného produktu.

Příklad 2

Částečná sukcinylace depolymerovaného chitosanu

Depolynterovaný chitosan z přikladu 1 byl rozpuštěn v 0,1 M vodné kyselině octové. K tomuto roztoku byl přidán methanol a pak roztok anhydridu kyseliny jantarové v acetonu. Výsledný roztok byl míchán po dobu 21 hodin za laboratorní teploty. Po dokončení sukcinylace byl roztok vysrážen ve vodném acetonu. Získaná sraženina byla oddělena odstřeďováním a pětkrát promyta methane·Lem. Sraženina pak byla rozpuštěna v 0,5 Μ KOH a dialyzována proti vodě na pH 7. Dialyzovaný roztok pak byl ve vakuové sušárně odpařen, vysrážen vodným acetonem při 60 °C.

a vysušen

Aby byly získány monitorovat během různé stupně sukcinylace, lze rozsah reakce počtu neacylovaných acylace analýzou aminových skupin.

Počet neacylovaných aminových skupin lze stanovit z malého vzorku reakční ve kterém byla reakce ukončena, pomoci činidla detekujícího amin (např.

fluorescamin). Množství aminu pomocí standardních křivek pro lze měřit spektroforeticky kopolymer. Pak lze anhydrid dokud se nedosáhne žádaného procenta acylace. Přesný stupeň sukcinylace lze stanovit pomocí Ή NMR spetroskopie produktu a konduktometrické

Příklad 3

Acetylace N-sukcinylovaného chitosanu

Částečně suk.cinylovaný vzorek z příkladu 2 byl rozpuštěn v 0, 1 M vodné kyselině octové. K tomuto roztoku pak byl přidán methanol a anhydrid kyseliny octové a vzniklá reakční směs byla míchána po dobu jednoho dne za laboratorní teploty. Tento roztok pak byl vysrážen vodným acetonem. Získaná sraženina byla oddělena odstřeďováním a pětkrát promyta methanolem. Sraženina pak byla rozpuštěna v 0, 1 Μ KOH a dialyzována proti vodě na pH 7. Výsledný roztok pak byl lyofilizován, čímž byl získán finální produkt. Proces acylace lze měřit spektroforeticky jak je· diskutováno v příkladu 2 a přesný stupeň acylace čištěného produktu lze stanovit pomocí Ή ’ NMR. spetroskopie .a konduktometrické titrace.

Příklad 4

Příprava iontového konjugátu póly(N-acyl-D-glukosamin)J u 1 N-sukcinylovaného e vodě. K míchanému chitosanu z příkladu 3 byla roztoku polymeru byl přidán ·· ···· • · · • ··· • · • · ···· ··· ·· ·· •♦ · · •· · • ·· · • ·· ·· ···· ·· ·· c · · · •· ·· • ····· • ·· ···· vodný roztok soli kyseliny octové analogu somatostatinového polypeptidu SOMATULINE (D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]Thr-NH.; Kinerton, Dublin, Irsko). Vzniklá sraženina pak byla odfiltrována a vysušena ve vakuové sušárně při 40 °C.

Obsah polypeptidu ve výsledném iontovém konjugátu lze stanovit z rozdílu mezi výchozím množstvím přidaného peptidu a množstvím volného zbylého peptidu obsaženého ve filtrátu a promývacim roztoku. Obsah peptidu ve výsledném iontovém konjugátu lze stanovit srovnáním poměru uhlík / dusík v původním N-sukcinylovaném chitosanu s poměrem ve výsledném iontovém konjugátu. Pro stanovení molekulové hmotnosti a MWD lze použít GPC analýzu, pro stanovení tepelných vlastnosti pak diferenční skanovaci kalorimetrii (DSC) a NMR a IČ pro stanovení chemické identity.

Další provedeni

Je jasné, že ačkoliv byl vynález popsán ve spojení s podrobným popisem, byl tento popis určen pouze pro ilustraci a nijak neomezuje rámec vynálezu, který je definován v patentových nárocích. Do patentových nároku spadají i další aspekty, výhody a modifikace.

Průmyslová využitelnost

Iontové molekulární konjugáty podle předkládaného vynálezu jsou průmyslově využitelné pro výrobu léků s kontrolovaným uvolňováním.

Claims

1 až 50 % volných aminu póly(2-amino-2-deoxy-D-glukosy) je acylováno první acylovou skupinou, přičemž tato první acylová skupina je CQE^, kde je vybráno ze skupiny sestávající z Cy až Cj>j karboxyalkylu, až Cjj karboxyal kenylu, C^_ až C karboxyarylalkylu a až Cypý karboxyarylalkenylu a 50 až 99 % volných aminů póly(2-amino-2-deoxy-D-glukosy) je acylováno druhou acylovou skupinou, přičemž tato druhá acylová skupina je COE^, kde Eg je vybráno ze skupiny sestávající z až .-alkylu, alkenylu, 0^ až Cj^arylalkýlu a C^> až Cj^. arylalkenylu, s tím, že přinejmenším jeden z volných aminů póly(2-amino-2deoxy-D-glukosy) je acylován první acylovou skupinou a až do 30 volných hydroxylových skupin póly(2-amino-2-deoxyD-glukosy) je acylováno první acylovou skupinou nebo druhou acylovou skupinou.

2. Kopolymer podle nároku 1, který má molekulovou hmotnost 3000 až 90 000 dal tonu, jak bylo stanoveno gelovou permeační chromatografií .

3. Kopolymer podle nároku 1, kde přes 90 i volných aminu póly (2-amino-2-deoxy-D- -glukosy) je acylováno buď první acylovou skupinou nebo druhou acylovou skupinou. 4 . Kopolymer podle nároku 1, kde 10 t až 30 % volných aminů

póly(2-amino-2-deoxy-D-glukosy) je acylováno první acylovou skupinou.

• ·

5. Kopolymer podle nároku 1, kdy se jedná o kopolymer obecného vzorce (I) :

Rý je pro každou jednotlivou opakující se jednotku vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

R_ž je pro každou jednotlivou opakující se jednotku vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

je pro každou jednotlivou opakující se jednotku vybránoze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

R^ je vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

Rpje vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

Rýt je vybráno ze skupiny sestávající z COH a CH.OR,;

R^je vybráno ze skupiny sestávající z první acylové skupiny, druhé acylové skupiny a H;

n je 2 až 20G a . pro 1 i až 50 opakujících se jednotek je R-. první acylová skupina, a pro 50 - až 99 : opakujících se jednotek je R. druhá acylová skupina, s tím, že pro přinejmenším jednu z opakujících se jednotek ie R první acylová skupina.

6. Kopolymer podle nároku 1, ve kterém první acylová skupina je COE-, kde E· je C. až C karboxyalkyl.

• · • · • · · · · · • · · · • · · · · 4

4 4· ·

1 r • 4 4· • 4 4 4 444 ·· ·· 1. Kopolymer po.dle nároku 6, ve kterém první acylová skupina je sukcinyl. 8. Kopolymer podle nároku 7, ve kterém druhá acylová skupina je ačety1 a R je COH nebo CH OH 9. Prostředek, v y z n a č u ; jící s e t i m, že

obsahuje kopolymer podle nároku 1 a polypeptid, přičemž tento polypeptid obsahuje přinejmenším jeden účinný ionogenní amin, kdy přinejmenším 50 hmotnostních polypeptidů v prostředku je iontově vázáno k danému polymeru.

10. Prostředek podle t i m, že obsahuje 5 nároku 9, v y z hmotnostních ící až hmotnostních polypeptidů.

11. Prostředek, v y ii a

T_ tím, že obsahuje kopolymer podle nároku 5 a polypeptid, přičemž tento .polypeptid obsahuje přinejmenším jeden účinný ionogenní amin, kdy přinejmenším

50 5 hmotnostních polypeptidů v prostředku je iontově vázáno k da nému po.l yme r u .

12. Prostředek podle t i .m, že obsahuje až jící se hmotnostních polypeptidů.

13. Prostředek podle nároku 12, j .1 c e polypeptid je sómatostátin nebo analog s om <a t o stát i n u .

14. Prostředek podle nároku 10, vyznač

t. i m, že první acylová skupina je sukcinyl druhá acylová skupina je acetyl.

15. Způsob syntézy kopolymeru, il s -e t i m,.

že zahrnuje kroky:

reakce chitosanu se slabou kyselinou, kdy vzniká molekulové hmotnosti;

. reakce 1 aminu polysacharidů nízké ^až polykarboxyalkenu, acylačním činidlem, kdy

..první • φ nebo to polykarboxyarylalkanu, C^ až polykarboxyarylalkenu, jeho acylačního derivátu; a reakce 50 fy _ag 100 volných aminu polysacharidu o acylačním činidlem, kdy molekulové hmotnosti s druhým acylační činidlo je vybráno ze nízké druhé monokarboxyalkanu, Cj mono karboxyaryla1 kanu, ^cv jeho acylačního derivátu.

skupiny sestávající z C? až ^cAf nebo monokarboxyalkenu, C^ až až monokarboxýaryla1kenu,

16. Způsob podle nároku 15, vvzna t i m, že procentuální množství volných aminu, které jsou acvlovány se stanovuje pomocí činidla, kterým se detekuj í volné aminy.

17. Způsob podle nároku 15, vyzná m, že první acylační činidlo je anhydrid kyseliny jantarové, druhé acylační činidlo je anhydrid kyseliny octové tím, že zahrnuje kroky:

reakce chitosanu se slabou kyselinou, kdy vzniká nízké hmotnosti;

molekulové hmotnosti s prvním acylační činidlo je vybráno ze polykarboxyalkanu, C^ p o ]. y k a řb o x y a r y 1 a 1 k a n u, skupiny sestávající polykarboxyalkenu, aminu polysachari acylačním činidlem,

a o nízké kdy první z Cj až C_?íj θ’ až

nebo polykarboxyarylalkenu, to nízké molekulové hmotnosti s druhým acylačním činidlem, kdy druhé acylační činidlo je vybráno že skupiny sestávající z COOH,

C^. až C?^>

Cjy monokarboxyarylalkenu, nebo

a.ž monokarboxyalkanu, Cj až monokarboxyalkenu, ιηθΓ)οΚ3Γ1:οχν3Γν131}ί3ηυ, Cq až derivátu;

jeho acylačního acylovaného polysacharidu o nízké molekulové smícháni neutralizovaného acylovaného polysacharidu o nízké molekulové hmotnosti -s polypeptidovou solí, kdy tato polypeptidová sul obsahuje přinejmenším jeden ionogenni amin, čímž vznikne iontový konjugát polypeptidu s kopolymerem.

19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t í m, že procentuální množství volných aminu, které jsou acylovány se stanovuje pomocí činidla, kterým se detekují volné aminy.

20. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že první acylační činidlo je anhydrid kyseliny jantarové, druhé acylační činidlo je anhydrid kyseliny octové a slabá kyselina je kyselina dusitá.