CZ303649B6

CZ303649B6 - Komplexy zlata s deriváty N6-benzyladeninu a deriváty fosfanu, zpusob jejich prípravy a pouzití techto komplexu jako léciv v protizánetlivé terapii

Info

Publication number: CZ303649B6
Application number: CZ20110415A
Authority: CZ
Inventors: Trávnícek@Zdenek; Vanco@Ján; Popa@Igor; Silha@Tomás
Original assignee: Univerzita Palackého
Priority date: 2011-07-11
Filing date: 2011-07-11
Publication date: 2013-01-23
Also published as: CZ2011415A3

Abstract

Podstatou resení jsou komplexy zlata v oxidacním stavu +I s deriváty N6-benzyladeninu a s deriváty fosfanu a jejich krystalosolváty obecného vzorce II, jenz obsahuje strukturní motiv I, kde symbol L predstavuje deprotonizované deriváty N6-benzyladeninu obecného vzorce III vázaného na atom zlata základního motivu I pres atom dusíku N9 adeninu a PR.sub.3 .n.je derivát fosfanu, zpusob jejich prípravy, farmaceutický prostredek s jejich obsahem a jejich pouzití pro lécbu onemocnení v patogenezi, kterého se úcastní zánetlivé procesy.

Description

Komplexy zlata s deriváty N6-benzy laděn inu a deriváty fosfanu, způsob jejich přípravy a použití těchto komplexů jako léčiv v protizánětlivé terapii

Oblast techniky

Předložený vynález, spadající do oblasti protizánětlivých léčiv na bázi komplexů zlata, se týká zlatných komplexů s deriváty N6-benzy laděn inu a deriváty fosfanu, jejich způsobu přípravy a jejich použití v lékařské praxi jako léčiv a farmaceutických kompozic, které tyto komplexy obsahují jako účinnou látku.

Dosavadní stav techniky

Komplexy zlata v oxidačním stavu +1 tvoří významnou skupinu látek v oblasti výzkumu sloučenin používaných v protizánětlivé terapii, protože představují možnou alternativu k již používaným komplexním sloučeninám zlata, jako jsou např. sodná sůl 2-merkaptobutandiolátu zlatného (triviální název: polymemí natřium-aurothiomalát, obecného složení [CaH^.xjOaSAuNa_x]_n, kde x=l-2, jde o směs dvou solí, disodné a sodné, s obsahem Au 44,5 až 46,0 % a Na 10,8 až 11,8 %; ATC kód M01CB01, CAS: 12244-57-4) obecného vzorce A, polymemí [((2S,3S,4R,5S)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný] komplex (triviální název: aurothioglukóza, ATC kód M01CB04; CAS; 12192-57-3) obecného vzorce B nebo [3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2-thioIáto-(triethylfosfan)zlatný] komplex (triviální název: auranofín, ATC kód M01C03; CAS: 34031-32-8) obecného vzorce C.

Všechny tyto látky jsou celosvětově užívané v protizánětlivé terapii. Syntéza auranofinu obecného vzorce C je popsána například v patentech US 4 200 738, US 4 115 642, US 4 125 711 nebo US 4 125 710 (Method for preparing auranofín).

(D)

- 1 CZ 303649 B6

Předložené zlatné komplexy s deriváty N6-benzyladeninu (HL) a s deriváty fosfanu navazují na dříve publikované komplexy přechodných kovů s deriváty N6-benzyladeninu vykazující protinádorovou aktivitu s obecnými vzorci [Ru(H⁺HL)(DMSO)Cl₄], [Pt(cbdc)(HL)₂], [Pt(ox)(HL)₂], a c7.v- [Pt(HL)₂Cl₂). Příprava a použití komplexů na bázi platiny odvozených od karboplatiny nebo oxaliplatiny jsou popsány v patentu CZ 302 618 (Cyklobutan-1,I-dikarboxylátokomplexy platiny s deriváty Nč-benzyladeninu, způsob jejich přípravy a použití těchto komplexů jako léčiv v protinádorové terapii), ve spise WO 2011—029 415 (Platinum cyc lo butane-1,1 dicar boxy le complexes with N6~benzyladenine dreivatives, process of their preparation and use of these complexes as medicaments in antitumor therapy), v patentu CZ 302 623 (Qxalátokomplexy platiny s deriváty N6-benzy laděn inu, způsob jejich přípravy a použití těchto komplexů jako léčiv v protinádorové terapii) a ve spise WO 2010-121 575 (Oxalato complexes of platinum with N6benzyladenine in antitumor therapy). Dílčí výsledky týkající se přípravy, charakterizace a studia protinádorové aktivity výše uvedených komplexů přechodných kovů pak byly publikovány např. ve statích: Trávníček, Z.; Matiková-Mafarová, M.; Novotná, R.; Vančo, J.; Štěpánková, K.; Suchý, P.: J. Inorg. Biochem. 2011, 105, 937 až 948; Dvořák, Z.; Štarha, P.; Trávníček, Z.: Toxicol. in Vitro 2011, 25, 652 až 656; Vrzal, R.; Štarha, P.; Dvořák, Z.; Trávniček, Z.: J. Inorg.

Biochem. 2010, 104, 1130 až 1132; Trávníček, Z.; Štarha, P.; Popa, I.; Vrzal, R.; Dvořák, Z.: Eur. J. Med. Chem. 2010, 45, 4609 až 4614; Dvořák, L.; Popa, I,; Štarha, P,; Trávníček, Z.; Eur. J. Inorg. Chem. 2010, 3441 až 3448; nebo Maloft, M.; Trávníček, Z.; Marek, R.; Strnad, M.: J. Inorg. Biochem. 2005, 99, 2127 až 2138.

Deriváty N6-benzyladeninu patří do skupiny rostlinných růstových regulátorů nazývaných cytokininy. Některé z těchto sloučenin se vyskytují přirozeně, obecně se však dají připravit laboratorně. Některé z nich pak vystupují jako velmi účinné inhibitory cyklindependentních kináz, tedy látek ovlivňujících buněčný cyklus (Mok, D. W. S.; Mok, M. C. Ann. Rev. Plant. Physiol. Plant Mol. Biol. 2001, 52, 89 až li8, Roelen, H.; Veldman, N.; Spek, A. L.; Von Frijtag Drabbe Kunzel, J.; Mathot, R. A. A.; Ijzerman, A. P. J. Med. Chem. 1996, 39, 1463 až 1471, Holmes, R. E.; Robins, R. K. J. Am. Chem. Soc. 1960, 82, 3773 až 3779, Lenobel, R.; Otyepka, My Strnad, M. Bioorg. Med. Chem. Lett 2003, 13, 2993 až 2996, Brun, V; Legraverend, M.; Grierson, D. S. Tetrahedr. Lett. 2001, 42, 8161 až 8164, Brun, V.; Legraverend, M.; Grierson, D. S. Tetrahedr. Lett. 2001, 42, 8165 až 8167). Syntéza, charakterizace a biologické, farmaceutické, popřípadě jiné využití těchto látek jsou popsány ve spisech CZ 1999-273 Al (Substituované dusíkaté heterocyklickě deriváty, způsob jejich přípravy, tyto deriváty pro použití jako léčiva, farmaceutická kompozice a kombinovaný farmaceutický přípravek tyto deriváty obsahující a použití těchto derivátů pro výrobu léčiv), CZ 294 535 (Heterocyklické sloučeniny na bázi N6— substituovaného adeninu, způsoby jejich přípravy, jejich použiti pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující), CZ 2002—2353 Al (Deriváty purinu, způsob jejich přípravy a jejich použiti), CZ 294 538 (Substituční deriváty N6-benzyladenosinu, způsob jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující), CZ 2007-691 Al (Substituované 6-(alkylbenzylamino)purinové deriváty pro použití jako antagonisté cytokininových receptorů a přípravky obsahující tyto sloučeniny), TW 440450 (A hair cosmetics containing 6-benzylaminopurine) a CN 101856028 (Plant growth regulátor containing benzylaminop urine and brassinolide).

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty N6-benzyladeninu a s deriváty fosfanu a jejich kry stal o sol váty obecného vzorce II, jež obsahuje strukturní motiv I, kde symbol L představuje deprotonizované deriváty N6-benzyladeninu obecného vzorce III

-2CZ 303649 B6

vázaného na atom zlata základního motivu I přes atom dusíku N9 adeninu, a PR₃ je derivát fosfanu kde substítuent Rje alkyl, alkenyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo funkční skupina a nebo jejich libovolné kombinace, kde termín: -alkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 18 atomů uhlíku,

- alkenyl jako takový nebo jako součást jiných skupin představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 8 atomů uhlíku, obsahující jednu nebo více dvojných vazeb,

- cykloalkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně anelovaných a spirocyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl nebo aryl,

-substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují alkyl, cykloalkyl, substituované substituenty z množiny halogen, (kde halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu), alkyl, cykloalkyl a funkční skupina,

-aryl, jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje fenyl, a to včetně skupin s anelovanými cykly nezávisle vybranými ze skupiny cykloalkyl, aryl nebo heteroaryl,

- heteroaryl, jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, síra, nebo selen,

- funkční skupina jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialkylamino, alkenylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, karboxy, alkylkarboxy, karboxyalkyl, hydroxy lamino, nitro, amido, nitroso, sulfonyl, sulfinyl, sulfamido, thio, alkylthio, substítuent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen, alkyl, alkenyl a alkynyl, substituovaný alkyl nebo funkční skupina, kde termín:

- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu

- 3 CZ 303649 B6

-alkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 8 atomů uhlíku,

- alkenyl a alkynyl jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují rozvětvené nebo nerozvětvené uhlovodíkové řetězce z 1 až 8 atomů uhlíku, obsahující jednu nebo více dvojných nebo trojných vazeb ajejich kombinaci,

- substituovaný alkyl, jako takový nebo jako součásti jiných skupin představuje alkyl, substituovaný substituenty z množiny halogen, alkyl a funkční skupina,

-funkční skupina jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialkylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, alkylkarboxy, hydroxyamino, nitro, amido, sulfamido, thio, alkylthio.

Další podstatou vynálezu jsou komplexy z lata, kde krystalosolváty mají obecné složení [Au(L)~ (PRjjj-nSolv, ve kterém (n) znamená počet krystalových molekul a nabývá hodnot I až 6, a (Solv) je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární, sekundární nebo terciární alkohol, aceton, dimethylsulfoxid, diethylether, nebo samostatný ligand L, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

Ve výhodném provedení se pak sloučenina obecného vzorce II připraví tak, že nejdříve reaguje jeden molámí ekvivalent derivátu Nó benzyladeninu rozpuštěného při teplotě přibližně 25 °C v minimálním množství rozpouštědla ze skupiny primárních nebo sekundárních nebo terciárních alkoholů nebo acetonu, s jedním molámím ekvivalentem sloučeniny [AuCl(PRa)], rozpuštěné v minimálním množství rozpouštědla ze skupiny primárních, sekundárních nebo terciárních alkoholů nebo acetonu a přidáním vodného roztoku l M NaOH (0,5 ml), poté se reakční směs míchá přibližně jednu hodinu a vzniklý nerozpustný chlorid sodný je od reakční směsi oddělen filtrací, čirý filtrát je pak míchán po dobu přibližně tří hodin při teplotě asi 25 °C, a následně je vzniklý produkt zahuštěn na rotační odparce a rozpuštěn v benzenu, když v koncovém purifikaěním kroku se takto rozpuštěný produkt po kapkách přidává do hexanu, kde se vysráží produkt, který je odfiltrován, promyt použitými rozpouštědly a vysušen v exsikátoru nad silikagelem (Schéma 2).

Nedílnou podstatou vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů, jak výše uvedeno s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami pro použití k výrobě léčiv pro léčbu onemocnění, patogenezi kterých se účastní zánětlivé procesy.

V dalším jsou nové sloučeniny obecného vzorce II a způsob jejich přípravy a použití osvětleny na konkrétních příkladech, které mají pouze ilustrační charakter a nijak neomezují rozsah vynálezu, kteiý je jednoznačně určen definicí patentových nároků.

Přehled obrázků na výkresech

Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde

-Obr. 1: FT-IR spektrum [Au(L|)(PPh3)]-H₂O (plná čára) a N6-(2-fIuorbenzyl)adeninu (HL|) (čárkovaná čára) v oblasti 450 až 4000 cm'¹ s přiřazením maxim charakteristických pro jednotlivé atomové skupiny komplexu.

-4 CZ 303649 B6

- Obr. 2: FT-IR spektrum [Au(L₆)(PPhi)] (plná čára) a N6-(3 -methylben2yl)adeninu (HLň) (čárkovaná čára) v oblasti 450 až 4000 cm“¹ s přiřazením maxim charakteristických pro jednotlivé atomové skupiny komplexu.

-Obr. 3: FT-IR spektrum [Au(L₈)(PPhi)]H₂O (plná čára) a N6-(3-methoxybenzyl)adeninu 5 (HLg) (Čárkovaná Čára) v oblasti 450 až 4000 cm“¹ s přiřazením maxim charakteristických pro jednotlivé atomové skupiny komplexu.

- Obr. 4: FT-IR spektrum [Au(Li)(PPh.O] (plná čára) a N6-(2-fluorbenzyl)adeninu (HL|) (čárkovaná čára) v oblasti 250 až 620 cm’¹ s přiřazením maxim charakteristických pro valenční vibrace Au-N a Au-P.

io -Obr. 5: FT-IR spektrum [Au(L₆)(PPh3)] (plná čára) a N6-(3-methylbenzyl)adeninu (HL₆) (čárkovaná čára) v oblasti 200 až 600 cm’¹ s přiřazením maxim charakteristických pro valenční vibrace Au-N a Au-P.

-Obr. 6: FT-IR spektrum [Au(Lg)(PPh3)]H₂O (plná čára) a N6-(3-methoxybenzyl)adeninu (HL₈) (čárkovaná čára) v oblasti 200 až 600 cm“ s přiřazením maxim charakteristických pro valenční vibrace Au-N.

- Obr. 7: Ramanovo spektrum [Au(L|)(PPh3)]-H2O v oblasti 200 až 3500 cm¹ a přiřazení maxim charakteristických pro vybrané atomové skupiny.

- Obr. 8: Ramanovo spektrum [Au(L₆)(PPh3)] v oblasti 200 až 3500 cm“¹ a přiřazení maxim charakteristických pro vybrané atomové skupiny.

- Obr. 9: Ramanovo spektrum [Au(L₈)(PPh₃)]H2O v oblasti 200 až 3500 cm“¹ a přirazení maxim charakteristických pro vybrané atomové skupiny.

-Obr. 10: Znázornění průběhu termického rozkladu komplexu [Au(L])(PPh₃)]-H2O metodami termogravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (DTA).

-Obr. 11: Znázornění průběhu termického rozkladu komplexu [Au(L₆)(PPh3)], metodami termo25 gravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (DTA).

-Obr. 12: Znázornění průběhu termického rozkladu komplexu [Au(L₈)(PPh3)]-H₂O metodami termogravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (DTA).

- Obr. 13: Znázornění 'H-NMR (A), ^l9F-NMR (B) a ^3IP-NMR (C) spekter [Au(L₁)(PPh₃)]-H₂O rozpuštěného v DMFí/₇.

- Obr. 14: Znázornění 'H-NMR spektra [Au(L6)(PPh₃)] rozpuštěného v DMFí/₇.

- Obr. 15: Znázornění 'H-NMR spektra [Au(L₈)(PPh₃)] rozpuštěného v DMFí/₇.

-Obr. 16: Znázornění ^l3C-NMR spektra [Au(L|)(PPh₃)], rozpuštěného v DMFí/₇ s chemickými posuny a koordinačními posuny v závorce (Δδ = 6_komp]ex - 6|_igand).

-Obr. 17: Znázornění ¹³C-NMR spektra [Au(L,6)(PPh3)], rozpuštěného v DMFíT s chemickými 35 posuny a koordinačními posuny v závorce (Δδ = 6_kompi_ex - 6|j_gand).

-Obr. 18: Znázornění ^l3C-NMR spektra [Au(L₈)(PPh3)]-H₂O, rozpuštěného v DMFí/₇ s chemickými posuny a koordinačními posuny v závorce (Δδ — 5k_ompi_ex - 6u_gand).

Příklady provedení vynálezu

V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně limitován patentovými nároky,

V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálně45 chemickými metodami:

- Elementární analýza s procentovým zastoupením prvků C, H a N (Flash 2000 CHNO-S Analyser, Thermo Scientifie).

- 5 CZ 303649 B6

- Infračervená spektroskopie (FT-IR), kde oblast 400 až 4000 cm“¹ provedena, technikou KBr tablet a oblast 150 až 600 cm^-1 provedena Nujolovou nebo ATR technikou (ThermoNicolet Nexus 670 FT-IR a FT-IR spektrometer Perkin-EImer Spektrum One).

- Ramanova spektroskopie, kde měřená oblast je 150 až 4000 cm“¹ (Nicolet NXR 9650 s NXE

Genie).

- Hmotnostní spektrometrie provedená ESI+ technikou (LCQ Fleet, ThermoScientific).

- Termická analýza provedená metodami termogravimetrie (TG) a diferenční termické analýzy (DTA) (Exstar TG/DTA 6200, Seiko Instruments).

-Nukleární magnetická rezonance (NMR) - 'H, ^I3C, ¹⁹F a ^3IP experimenty (Varian 400 MHz (Ϊ NMR), kde Δδ — b^omplex ~ SligandVynález využívá zlatný komplex, [AuX(PR₃)], jako výchozí zlatnou sloučeninu, kde R jsou vybrané substituenty (viz výše) a X - Cl, Br nebo I. Komplexy lze připravit postupem popsaným v dostupné literatuře (Sutton, Β. M.; McGusty, E.; JValz, D. T; DiMartino, M. J.; J. Med.Chem.

1972, 15, 1095 až 1098, McAuliffe, Ch. A., Parish, R. V., Randall, P. D„ Dalton Trans, 1979,

1730 až 1735, Bowmaker, G. A., Dyason, J. C., Heafy, P. C„ Engelhardt, L. M., Pakawatchai, C., White, A., Dalton Trans. 1987, 1089) nebo následným postupem už pro konkrétní případ, kde X = Cl. Do roztoku kyseliny tetrachlorzlatité, H[AuC1₄], (1 mmol) ve směsi etheru nebo tetrahydrogenfuranu (THF) (v/v 1:1) je přidán příslušný derivát fosfanu (2 mmol) ve směsi etheru/20 THF (v/v 1:1). Směs se míchá pri chlazení a po jedné hodině vzniká bílá sloučenina. Produkt byl odfiltrován, promyt etherem a vysušen (Schéma 1). Procentové zastoupení prvků C, Η, N, Cl ve formě: vypočtena hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro [AuCl(PPh₃)]; Či₈Hi₅AuCIP: C, 43,7 (43,9); H, 3,0 (3,1); Cl 7,1 (7,5)%. IR (Nujol, cm’¹): 215, 298, 309, 352, 387, 423, 457. IR (KBr, cm⁴): 2951, 2814, 1598, 1587, 1574, 1563, 1502, 1457, 1441, 1401, 1312, 1298, 1232, 1175,

1124, 1095, 1046.

ether/THF

H[AuClJ 3H₂O + 2 PR₃ -* [AuCI(PR₃)] hodiny

0°C

Schéma 1: Znázornění obecného reakčního schématu pro přípravu komplexů [AuCl(PR₃)].

Příklad 1: Příprava monohydrátu (N6-(2-fluorbenzyl)adenin-A:¹N9)-(trifenylfosfan)zlatného komplexu, [Au(L,)(PPh₃)]-H₂O.

V 80 ml acetonu bylo za teploty místnosti rozpuštěno 0,179 g (1 mmol) N6-(2-fluorbenzyl)adeninu (HL]). Do vzniklého roztoku byl přidán roztok 0,494 g (1 mmol) [AuCl(PPh₃)] v 10 ml acetonu a vodný roztok 1M NaOH (0,5 ml). Směs byla míchána po dobu jedné hodiny a vzniklý chlorid sodný, NaCl, byl odfiltrován. Čirý roztok byl míchán další přibližně 3 hodiny pri teplotě přibližně 25 °C, po této době byl roztok na rotační odparce odpařen při 40 °C za vzniku světle žluté látky.

-6CZ 303649 B6

PR₃

Schéma 2: Obecné znázornění přípravy komplexů zlata s deriváty N6—benzyladeninu a deriváty 5 fosfanu, složení [Au(L)(PR₃)].

V koncovém purifikačním kroku byla látka [Au(Li)(PPh₃)]H2O rozpuštěna v benzenu a po kapkách přidána do hexanu, kde se vysrážela. Takto vysrážená bílá látka byla odfiltrována, promyta studenou destilovanou vodou a vysušena v exsikátoru nad silikagelem Vzorek 5.

io

(Vzorec 5)

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro C₃₀H₂₄N₅AuFP: C, 51,3 (51,6); H, 3,4 (3,7); N, 9,9 (10,1)%. ESI+ hmotnostní spektra (methanol, m/z) 244 (243), 702 (701). IR (Nujol, cm '): 549m, 510m, 447w, 338m. IR (KBr, cm '): 3428w, 3250w, 3209w, 305lw, 2925w, 2852w, 1613s, 1528w, 1436m, 1350w, 1265w, I199m, 1122m, 75 ls, 693s, 608w. Raman (cm^-1): 3169w, 3055vs, 2900w, 1614s, 1586s, 1564w, 1444w, 1317vs, 1257w, 1154m, 1028w, 998vs, 927w, 847w, 736w, 584m, 549w, 392w. 'H NMR (400,00 MHz, DMF-í/?, ppm): δ (tetramethylsilan-SiMe4) 8,15 (bs, C2H, IH), 7,96 (bs,

C8H, IH), 7,77 (m, C2H, C6H, 6H, PPh₃), 7,70 (m, C3H, C4H, C5H, 9H, PPh₃), 7,55 (bs, N6H,

- 7CZ 303649 B6

162,05, 160,05 (Cil; -2,88), 155,39 (C6; 0,30), 151,53 (C2; 1.64), 148,52 (C8; 8,42), 145,25 (C4), 135,06, 134,92 (C2, C2', C2, C6, C6', C6), 131,09, 130,06 (C14), 130,67, 130,47 (C15), 130,46, 130,34 (C3, C3', C3”, C5, C5', C5), 129,21 (CIO), 129,82, 129,28 (Cl, Cl', Cl), 129,12, 129,04 (C4, C4', C4), 124,02, 124,79 (03; -0,01), 120,96 (C5), 115,64, 115,43 (02;

-0,05), 39,15 (C9).

Příklad 2: Příprava (N6-(3-methylbenzyl)adenin-K^lN9)-(trifenylfosfan)zlatného komplexu, [Au(L₆)(PPh₃)].

V 80 ml acetonu bylo za teploty místnosti rozpuštěno 0,175 g (1 mmol) N6-(3-methylbenzyl)adeninu (HL₆). Do vzniklého roztoku byl přidán roztok 0,494 g (1 mmol) [AuCl(PPh₃)J v 10 ml acetonu a vodný roztok 1M NaOH (0,5 ml). Směs byla míchána po dobu jedné hodiny a vzniklý chlorid sodný, byl odfiltrován. Čirý roztok byl míchán další přibližně 3 hodiny při teplotě přibližně 25 °C, po této době byl roztok na rotační odparce odpařen při 40 °C za vzniku světle žluté látky. V koncovém purifikačním kroku byla látka [Au(L₆)(PPh₃)] rozpuštěna v benzenu a po kapkách přidána do hexanu, kde se vysrážela. Takto vysrážená bílá látka byla odfiltrována, promyta studenou destilovanou vodou a vysušena v exsikátoru nad silikagelem (Vzorec 6).

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro C₃iH₂7N_sAuP: C, 53,3 (53,6); H, 3,8 (3,8); N, 10,0 (10,1)%. ESI+ hmotnostní spektra (methanol, m/z) 239 (238), 698 (697). IR (Nujol, cm ): 565 w, 545vs, 510sw, 443w, 352m, 325w. IR (KBr, cm’¹): 3423w, 3262w, 3205w, 3051w, 3018w, 2968w, 1610s, 1557w, 1480w, 1451m,

1315w, 1201 w, 1024w, 997w, 893w, 694m. Raman (cm¹): 3144w, 3055s, 2990w, 2916w, 1612s, 1556w, 1464w, 1318vs, 1258w, 1102w, 999vs, 736m, 696w, 580w, 550w, 499w, 4t8w, 365w, 322w. ’H NMR (400,00 MHz, DMF-í/₇, ppm): δ (tetramethylsilan-SiMe₄) 8,14 (s, C2H,

1H), 7,92 (bs, C8H, 1H), 7,78 (m, C2H, C6H, 6H, PPh₃), 7,70 (m, C3H, C4H, C5H, 9H, PPh₃), 7,50 (bs, N6H, 1H), 7,21 (s, C11H, 1H), 7,20 (m, C15H, 1H), 7,11, (t, 7,5, C14H, 1H), 7,01 (d, 7,5, C13H, 1H), 4,97 (bs, C9H, 2H). ^!3C NMR (75,43 MHz, DMF-í/₇, ppm): δ (SiMe₄); Δδ: 154,06 (C6), 151,57 (C2; -1,32), 148,31 (C8; 8,28), 145,15 (C4), 139,51 (CIO), 139,25 (C12(, 135,92 (C2, C2', C2, C6, C6', C6), 130,47, 130,35 (C3, C3', C3, C5, C5', C5; -7,95, -8,12), 129,38, 129,26 (C4, C4', C4; -0,05), 128,14 (C14), 128,04 (03), 128,02 (Cil), 125,67 (C15), 121,16 (C5), 44,58 (C9).

N

H

19' (Vzorec 6)

20'

-8CZ 303649 B6

Příklad 3: Příprava monohydrátu (N6-(3-methoxybenzyl)adenin-K^lN9) (triťenylfosťan)zlatného komplexu, [Au(L₈(PPhi)]-H₂O.

V 80 ml acetonu bylo za teploty místnosti rozpuštěno 0,175 g (1 mmol) N6-(3-methoxybenzyl)adeninu (HL₈). Do vzniklého roztoku byl přidán roztok 0,491 g (l mmol) [AuCl(PPhý)] v 10 ml acetonu a vodný roztok IM NaOH (0,5 ml). Směs byla míchána po dobu jedné hodiny a vzniklý chlorid sodný, byl odfiltrován. Čirý roztok byl míchán další přibližně 3 hodiny při teplotě přibližně 25 °C, po této době byl roztok na rotační odparce odpařen při 40 °C za vzniku světle ío Žluté látky. V koncovém purifikačním kroku byla látka [Au(L₈)(PPh()]-H₂O rozpuštěna v benzenu a po kapkách přidána do hexanu, kde se vysrážela. Takto vysrážená bílá látka byla odfiltrována, promyta studenou destilovanou vodou a vysušena v exsikátoru nad silikagelem Vzorec 7.

(Vzorec 7)

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro C₃iH₂9N₅AuO₂P: C, 50,8 (50,6); H, 3,9 (3,8); N, 9,5 (9,8)%. ESI+ hmotnostní spektra (methanol, m/z) 254 (253), 714 (713). IR (Nujol, cm^-1): 584w, 544s, 509m, 499m, 480w, 45 lw. IR (KBr, cm¹): 3284w, 3195w, 3157w, 3121w, 3050w, 3028w, 2997w, 1613s, 1553m, 1527m,

1450m, 1436m, 186w, 1300m, 1264w, 1201m, 1156m, 1102m, 1076w, 1027w, 996wm, 925w,

743m, 712mw, 69lm, 646m, 612w, 543w, 500w. Raman (cm¹): 3058s, 2976w, 1616s, 1550w, 1449w, 1382w, 1359m, 1309w, 1262w, 1227w, 1184w, 1160w, llOlw, 1078m, lOOOs, 789m, 776m, 693w, 599w, 395w, 260w. ^lH NMR (400,00 MHz, DMF-í/₇, ppm): δ (SiMe₄) 8,18 (s, C2H, IH), 8,04 (bs, C8H, IH), 7,75 (m, C2H, C6H, 6H, PPh,), 7,70 (m, C3H, C4H, C5H, 9H,

PPh_?), 7,56 (t, 1,8, C11H, IH), 7,40 (d, 7,6, C15H, IH), 7,39 (t, 7,7, C14H, IH), 7,27 (dd, 7,8, 1,8, C13H, IH), 4,95 (bs, C9H, 2H). ¹³C NMR (75,43 MHz, DMF-rf₇, ppm): δ (SiMe₄); Δδ: 155,15 (C6; -0,20), 152,32 (C2; -0,92), 148,18 (C8), 146,05 (C4), 144,43 (CIO; 0,45), 135,02, 134,89 (C2, C2', C2, C6, C6', C6), 133,00 (Cl2), 130,35 (C14), 130,44, 130,32 (C3, C3', C3, C5, C5', C5), 130,07 (Cl, CV, Cl), 129,38, 129,26 (C4, C4', C4), 127,32 (Cil), 126,44 (Cl5), 125,70 (Cl3), 121,01 (C5), 44,98 (C9).

-9 CZ 303649 B6

Příklad 4: Protizánětlivá aktivita (Au(I) komplexů, stanovená na karageninovém modelu zánětu.

Pro stanovení protizánětlivé aktivity připravených komplexů byla použita standardní screeningová metoda dle (Ottemess, I. G. and Moore, P. F. 1988. Carrageenan foot edema test. Methods Enzymol. 162:320 až 327), založená na plethysmometrickém sledování změny objemu dolní části zadní končetiny potkana po podání rozpustné formy λ-karageninu intraplantámí subkutánní injekcí. Změny objemu dolní končetiny u zvířat premed i kovaných testovanými komplexy zlata (i.p., v dávce 10 mg/kg) byly srovnány s kontrolou (i.p. podané vehikulum) a skupinou premedikovanou auranofinem (ve stejné dávce jako testované látky, i.p. 10 mg/kg), strukturně podobným léčivem používaným klinicky v chrysoterapii a indomethacinem, standardně užívaným nesteroidním protizánětlivým léčivem, podaným i.p, v dávce 5 mg/kg. Výsledky byly podrobeny statistické analýze metodou ANOVA a statistická významnost výsledků byla hodnocena na úrovních p<0,001 (♦**), p<0,005 (**) a p<0,01 (*).

Získanými výsledky testování protizánětlivé aktivity (Graf 1) bylo jednoznačně prokázáno, že látky [Au(L!)(PPh₃)]-H₂O (p<0,001) a [Au(L₆)(PPh₃)] (p<0,001) a [Au(L₃)(PPh₃)] {N6-(2chlorbenzyl)adenin (HL₃)} (p<0,01) působí protizánětlivé a signifikantně snižují velikost otoku u premedikovaných zvířat ve srovnání s kontrolní skupinou. Látky [Au(Li)(PPh₃)]H₂O a [Au(L₆)(PPh₃)] navíc ve stejné dávce vykazují signifikantně vyšší účinek jako klinicky používané léčivo auranofín (u [Au(Li)(PPh₃)]-H₂O p<0,001, [Au(L₆)(PPh₃)] p<0,001). U látky [Au(L,)(PPh₃)]-H₂O byla také objevena signifikantně vyšší protizánětlivá aktivita (p<0,01) jako u indomethacinu (standardně používaného nesteroidního protizánětlivého léčiva podaného i.p. v dávce 5 mg/kg). U látky [Au(L₃)(PPh₃)] nebyla touto metodou prokázána výrazná protizánětlivá aktivita, pravděpodobně z důvodu nízké rozpustnosti látky ve zvolném vehikulu (25% roztok dimethylsulfoxidu p.a. ve vodě pro injekci) a nízké biologické dostupnosti po i.p, podání.

Testováním komplexních sloučenin zlata v oxidačním stupni +1, které jsou předmětem tohoto vynálezu, byla prokázána u látek [Au(Li)(PPh₃)]-H₂O a [Au(L₆(PPh₃)] vysoká protizánětlivá aktivita a tím také schopnost těchto látek pozitivně a efektivně terapeuticky ovlivnit zánětlivé procesy.

- 10CZ 303649 B6

Graf 1: Změny objemu dolní končetiny potkanů premedikovaných látkami [Au(Li)(PPh₃)]-H2O, [Au(L₆)(PPh0], [Au(LO(PPhO] a auranofinem v dávce lOmg/kg, indomethacinem v dávce 5 mg/kg a vehikulum (25% DMSO) při plethysmometrickém hodnocení protizánětlivé aktivity.

Claims

1. Komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty N6-benzyladeninu a s deriváty fosfanu a jejich krystalosolváty obecného vzorce II, jenž obsahuje strukturní motiv I, kde symbol L představuje deprotonizované deriváty N6-benzyladeninu obecného vzorce III vázaného na atom zlata základního motivu I přes atom dusíku N9 adeninové skupiny, a PR₃ je derivát fosfanu kde substítuent Rje alkyl, alkenyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný

20 cykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo funkční skupina a nebo jejich libovolné kombinace, kde termín: -alkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 18 atomů uhlíku,

- alkenyl

25 jako takový nebo jako součást jiných skupin představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 18 atomů uhlíku, obsahující jednu nebo více dvojných vazeb,

30 - substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují alkyl, cykloalkyl, substituované substituenty z množiny halogen, (kde halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu), alkyl, cykloalkyl a funkční skupina,

-IICZ 303649 B6

- aryl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje fenyl, a to včetně skupin s anelovanými cykly nezávisle vybranými ze skupiny cykloalkyl, aryl nebo heteroaryl,

-- heteroaryl

5 jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, síra, nebo selen,

- funkční skupina jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialky lamino, alkenylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, karboxy, alkylkarboxy, karboxyalkyl, hydroxylamino, io nitro, amido, nitroso, sulfonyl, sulfinyl, sulfamido, thio, alkylthio, substituent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen, alkyl, alkenyl a alkynyl, substituovaný alkyl nebo funkční skupina, kde termín:

- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,

15 - alkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 8 atomů uhlíku,

- alkenyl a alkynyl jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují rozvětvené nebo nerozvětvené uhlo20 vodíkové řetězce z 1 až 8 atomů uhlíku, obsahující jednu nebo více dvojných nebo trojných vazeb a jejich kombinaci,

- substituovaný alkyl jako takový nebo jako součásti jiných skupin představuje alkyl, substituovaný substituenty z množiny halogen, alkyl a funkční skupina,

25 -funkční skupina jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialkylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, alkylkarboxy, hydroxyamino, nitro, amido, sulfamido, thio, alkylthio.

2. Komplexy zlata podle nároku 1, kde krystalosolváty mají obecné složení [Au(L)30 (PR₃)]-«Solv, ve kterém (n) znamená počet krystalových molekul a nabývá hodnot 1 až 6, a (Solv) je anorganická nebo organická molekula vyhraná ze skupiny voda, primární nebo sekundární nebo terciární alkohol, aceton, dimethylsulfoxid, diethylether, nebo samostatný ligand L, a to bud’ samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

35

3. Způsob přípravy zlatných komplexů podle nároku 1, vyznačující se tím, žese sloučenina obecného vzorce II připraví tak, že nejdříve reaguje jeden molámí ekvivalent derivátu N6-benzy laděn inu rozpuštěného při teplotě 25 °C v minimálním množství rozpouštědla ze skupiny primárních nebo sekundárních nebo terciárních alkoholů, nebo acetonu, s jedním molárním ekvivalentem sloučeniny [AuCl(PR₃)], rozpuštěné v minimálním množství rozpouštědla ze

40 skupiny primárních, sekundárních nebo terciárních alkoholů nebo acetonu a přidáním vodného roztoku 1M NaOH (0,5 ml), poté se reakční směs míchá jednu hodinu a vzniklý nerozpustný chlorid sodný je od reakční směsi oddělen filtrací, čirý filtrát je pak míchán po dobu tri hodin při teplotě 25 °C, a následně je vzniklý produkt odpařen na rotační odparce při teplotě 40 °C a pevný zbytek rozpuštěn v benzenu, když v koncovém purifí kačním kroku se takto rozpuštěný produkt

45 po kapkách přidává do hexanu, kde se vysráží produkt, který je odfiltrován, promyt použitými rozpouštědly a vysušen v exsikátoru nad silikagelem.

4. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství zlatných komplexů podle nároku 1 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými

50 látkami.

- 12CZ 303649 B6

5. Použití farmaceutického prostředku podle nároku 4 k výrobě léčiv pro léčbu onemocnění v patogenezi, kterých se účastní zánětlivé procesy.