CZ305585B6 - Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii - Google Patents
Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305585B6 CZ305585B6 CZ2014-326A CZ2014326A CZ305585B6 CZ 305585 B6 CZ305585 B6 CZ 305585B6 CZ 2014326 A CZ2014326 A CZ 2014326A CZ 305585 B6 CZ305585 B6 CZ 305585B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- substituted
- cycloalkyl
- alkyl
- gold
- complexes
- Prior art date
Links
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 81
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 14
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 13
- 150000003002 phosphanes Chemical class 0.000 title claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 10
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 10
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title description 17
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 20
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000005346 substituted cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims abstract description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 21
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- -1 cycloheteroalkyl Chemical group 0.000 claims description 9
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000003003 phosphines Chemical class 0.000 claims description 8
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 claims description 6
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001301 oxygen Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 claims description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000023913 breast extraskeletal osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002858 breast osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DAUXLKFOFAZKPU-UHFFFAOYSA-N 3,7-dihydropurin-6-one Chemical class OC1=NC=NC2=C1NC=N2.O=C1NC=NC2=C1NC=N2 DAUXLKFOFAZKPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 abstract description 6
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 abstract description 4
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 abstract 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 abstract 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 abstract 1
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 15
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 14
- AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M auranofin Chemical compound CCP(CC)(CC)=[Au]S[C@@H]1O[C@H](COC(C)=O)[C@@H](OC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M 0.000 description 13
- 229960005207 auranofin Drugs 0.000 description 13
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 11
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 11
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012982 x-ray structure analysis Methods 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 150000002344 gold compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical class [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1CC2(O)C(C=C(CO)CC3(O)C2C=C(C)C3=O)C4C(C)(C)C14OC(=O)C FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWYAFKLJNVXYJO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethyl)-1,7-dihydropurin-6-one Chemical compound C1(=CC=CC=C1)CCC=1NC(C=2NC=NC=2N=1)=O QWYAFKLJNVXYJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RPVDWHOGJOXVJK-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-3,7-dihydropurin-6-one Chemical compound O=C1NC(CC)=NC2=C1NC=N2 RPVDWHOGJOXVJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000006306 4-iodophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1I 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M Aurothioglucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](S[Au])[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N O6-benzylguanine Chemical compound C=12NC=NC2=NC(N)=NC=1OCC1=CC=CC=C1 KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005524 O6-benzylguanine Drugs 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] Chemical compound [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229960001799 aurothioglucose Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N butanedioate;1h-tetrazol-1-ium Chemical compound [NH2+]1C=NN=N1.[NH2+]1C=NN=N1.[O-]C(=O)CCC([O-])=O OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K disodium aurothiomalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(S[Au])C([O-])=O VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001413 far-infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000004476 mid-IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 230000031539 regulation of cell division Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001315 sodium aurothiomalate Drugs 0.000 description 1
- RHFLPBUBPRJMCO-UHFFFAOYSA-J sodium;dioxido-oxo-sulfanylidene-$l^{6}-sulfane;gold(3+) Chemical compound [Na+].[Au+3].[O-]S([O-])(=O)=S.[O-]S([O-])(=O)=S RHFLPBUBPRJMCO-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical compound [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Komplexy zlata v oxidačním stavu +I s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR.sub.3.n.)] a vyjádřené strukturním vzorcem II, kde - symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I, - PR.sub.3.n. je derivát fosfanu, - substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace, - substituent R1 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen, - substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl. Komplexy jsou určeny pro léčbu adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Description
Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii
Oblast techniky
Předložený vynález spadá do oblasti léčiv a týká se komplexů zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu ajejich použití jako léčiv v protizánětlivé terapii a v léčbě nádorových onemocnění, zejména pak adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Dosavadní stav techniky
Strukturně lineární komplexy zlata v oxidačním stavu +1 představují významnou skupinu biologicky aktivních látek, z nichž již pět zástupců je v moderní medicíně komerčně využíváno k léčbě zánětlivých onemocněni, jako je například revmatoidní artritida. Ve Spojených státech amerických jsou užívanými protizánětlivými léčivy sodná sůl 2-merkaptobutandiolatozlatného komplexu (natrium-aurothiomalát, vzorec A) a komplex ((2S,3S,4R,50)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný (aurothioglukosa, vzorec B). Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech GB 421989, US 4 599 436, WO 2010/0091381, GB 293363, GB 397293 nebo GB 398020.
V Evropě jsou navíc používány zlatné sloučeniny sodná sůl bis(thiosulfáto)zlatného komplexu (vzorec C) a sodná sůl 2-hydroxy-3-merkaptopropan-l-sulfonátozlatného komplexu (natriumthiopropanosulfonát, vzorec D). Tyto látky jsou souhrnně označovány jako thioláty zlatné ajedná se o iontové, ve vodě rozpustné sloučeniny, které kromě bis(thiosulfáto)zlatnanového aniontu obsahují polymemí komplexní anionty, přičemž ve všech sloučeninách je zlato lineárně koordinované dvěma atomy síry. Tato léčiva jsou podávána injekčně. Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech US 4 657 763, GB 246809, GB 261048 nebo FR 2591106.
3Na+
SO3
S—Au—s' o3s' (C)
- 1 CZ 305585 B6
Nejpozději, a to v 80. letech 20. století, bylo do klinické praxe uvedeno strukturně odlišné protizánětlivé léčivo Auranofin, 3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2-thiolátotriethylfosfanjzlatný komplex (vzorec E), což je jednojademý neutrální lipofilní komplex, který podobně jako výše zmíněná léčiva obsahuje >S'-donorový ligand, ale liší se přítomností organického derivátu fosfanu koordinujícím se přes atom fosforu. Příprava Auranofmu je popsaná v patentových spisech, US 4 200 738, US 4 115 642, US 4 125 711, US 4 125 710, US 4 122 254, US 4 133 952 nebo US 4 131 732 a jeho terapeutické využití je popsáno ve spise WO 2010/091381. Výhodou Auranofmu oproti výše uvedeným iontovým sloučeninám zlata uvedených ve vzorcích A až D je to, že jej lze podávat orálně.
/— CH3
Λ
Předložené Au(I) komplexy lze podobně jako Auranofin zařadit mezi jednojademé neutrální komplexy obsahující derivát fosfanu koordinovaný na zlato přes atom fosforu. Liší se ale druhým ligandem, kterým je Λ'-donorová organická molekula odvozená od hypoxantinu, tj. l//-purin6(9//)-on. Předmětné komplexy navazují na vysoce protizánětlivé aktivní zlatné komplexy s různými /V-donorovými ligandy odvozenými od purinu a deriváty fosfanu popsané v patentovém spise CZ 303649, publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 55, 2012, 4568. Je zde nutné zdůraznit, že podobně jako u jiných systémů obsahujících organickou molekulu koordinovanou na přechodný kov, bylo i u komplexů zlata(I) obsahujících /V-donorový ligand odvozený právě od 6-benzylaminopurinu jednoznačně prokázáno, že i velmi malá strukturní změna v molekule organického ligandu může vést k velmi výrazné modifikaci biologické aktivity nebo k jejímu úplnému vymizení (J. Hošek et al. PlosONE 8, 2013, e82441). Vlastnosti koordinované organické molekuly a způsob její koordinace na atom zlata totiž výrazně ovlivňují biodistribuci celého komplexu, neboť různý způsob koordinace a substituce na základním skeletu mohou vést ke změnám v afinitě k biomolekulám a cílovým receptorům, průchodnosti biomembránami, tedy ke změnám, které se projeví ve výsledné biologické aktivitě. Proto nelze jednoznačně predikovat, jaké Au(I) komplexy uvedeného strukturního typu budou vykazovat ten či onen typ biologické aktivity.
Komplexní sloučeniny zlata v oxidačním stavu +1 jsou studovány nejen pro své prokázané protizánětlivé účinky aplikované v praxi, ale v posledních desetiletích jsou předmětem bioanorganického výzkumu i pro svou potenciální protinádorovou aktivitu. Studie prokazující antitumorové působení Auranofmu in vitro na buněčných liniích děložního čípku HeLa (T. M. Simon et al. Cancer 44, 1979, 1965) a melanomu B16 a in vivo vůči leukemickým buňkám myší buněčné linie P388 (C. K. Mirabelli et al. Cancer Res. 45, 1985, 32) vedly k širšímu zkoumání protinádorové aktivity analogů Auranofmu (patentový spis WO 2012/142615). Předmětem studia byly i Au(I) komplexy obsahující chromofor AuNP, kdy byla prokázána antitumorová aktivita u komplexů s deriváty fosfanu a /V-donorovými heterocyklickými ligandy, jako například imidazol, pyrazol nebo deriváty 9-deazapurinu, jak je popsáno v publikacích R. Gallassi et al. Dalton Trans. 41, 2012, 5307; M. Serratrice et al. Inorg. Chem. 51, 2012, 3161; C. Abbehausen et al. Inorg. Chem. 52, 2013, 11280. Ovšem podobně jako v případě protizánětlivé aktivity, tak u protinádorového působení komplexů zlata v oxidačním stavu +1 také není doposud jednoznačně prokázán mechanismus účinku těchto sloučenin a definovány vztahy mezi strukturou a biologic-2CZ 305585 B6 kou aktivitou u této skupiny látek. Není také možné teoreticky předpokládat terapeutickou účinnost nebo neúčinnost určitého strukturního typu zlatných komplexů, tedy není možné předem, bez provedení patřičných experimentů, definovat kvalitativní ani kvantitativní vztah mezi strukturou a biologickou aktivitou.
Předložené zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu představují v literatuře doposud nepopsanou skupinu biologicky aktivních komplexů zlata.
Různě substituované deriváty hypoxantinu jsou studovány jako rostlinné růstové regulátory (patentový spis WO 2005/107472 Al), dále také jako velmi účinné inhibitory cyklin dependentních kinas (patentové spisy WO 9902162) a O6-alkylguanin-DNA-alkyltransferas (AGT) (patentové spisy US 5 352 669, US 5 691 307, US 5 958 932, WO 2004/031405, WO 2011/028607), což jsou enzymy hrající klíčové role v regulaci procesů spojených s dělením buněk. Zástupce těchto látek, 2-amino-O6-benzylhypoxantin (O6-benzylguanin) je v současné době v II. fázi klinických testů jako AGT inhibitor, konkrétně jako látka navyšující účinnost vybraného chemoterapeutika (temozolomidu, tj. 4-methyl-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabicyklo[4.3.0]nona-2,7,9-trien-9karboxamid) pro léčbu maligního gliomu (J. A. Quinn et al. J. Clin. Oncol. 27, 2009, 1262). Příprava, charakterizace a biologická aktivita těchto látek je mimo zmíněné patentové spisy popsána například v publikacích R. W. Balsiger et al. J. Org. Chem. 25, 1960, 1573; Μ. Y. Chae et al. J. Med. Chem. 37, 1994, 342; R. S. McElhinney et al. J. Med. Chem. 41, 1998, 5265; C. A. Arris et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 2797; F. Seela et al. Helvetica Chim. Acta 81, 1998, 2244; T. G. Davies et al. Nátuře Struct. Biol. 9, 2002, 745; A. E. Gibson et al. J. Med. Chem. 45, 2002, 3381; R. J. Griffin et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 4071; I. R. Hardcastle et al. J. Med. Chem. 47, 2004, 3710; Τ. E. Spratt et al. Biochem. 31, 1992, 3689; R. Schirrmacher et al. Curr. Org. Synth. 2, 2005,215;
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin6(977)-onu) a s deriváty fosfanu, ajejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)] a vyjádřené strukturním vzorcem II
kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent R1 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen
-3CZ 305585 B6
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
Další podstatou vynálezu jsou krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)]-«5'o/v, ve kterém
- L a PR3 jsou definovány výše,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot především 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, MV-dimethylformamid, dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
Nedílnou podstatou vynálezu je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami pro použití v lékařství, zejména pro použití pro výrobu léčiv pro léčení
-4CZ 305585 B6 zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, a to zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Objasnění výkresů
Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde:
- Obr. 1 je infračervené spektrum komplexu [Au(L6)(PPh3)] (6) naměřené v oblasti 400 až 4000 cm-1; HLň = 2-chlor-06-methylhypoxantin.
- Obr.2 je infračervené spektrum komplexu [Au(Li)(PPh3)j (1) naměřené v oblasti 200 až 600 cm“1; HLi = 06-ethylhypoxantin.
- Obr. 3 je 1H NMR spektrum komplexu [Au(L9)(PPh3)j (9) rozpuštěného v DMF-ď7; HL9 = 2chlor-O6-benzylhypoxantin.
- Obr. 4 je molekulová struktura komplexu [Au(Li)(PPh3)j (1) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL] = 06ethylhypoxantin.
- Obr. 5 je molekulová struktura komplexu [Au(L3)(PPh3)] (3) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL3 = 06allylhypoxantin.
- Obr. 6 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L])(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)] (5), [Au(L6)(PPh3)] (6), a [Au(L7)(PPh3)j (7), ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL] = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = O6-allylhypoxantin; HL4 = O6-benzylhypoxantin; HL5 = O6-fenetylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001).
- Obr. 7 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(Li)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)] (5), [Au(L6)(PPh3)] (6), a [Au(L7)(PPh3)] (7) ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů IL-l/?a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HLi = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = O6-allylhypoxantin; HL4 = 06-benzylhypoxantin; HL5 = 06fenetylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001).
- Obr. 8 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06-butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01).
- Obr. 9 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)j (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7), ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů IL— I /? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06-butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-06-butylhypoxantin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05).
-5CZ 305585 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně definován patentovými nároky.
V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálněchemickými metodami:
- elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),
- infračervená spektroskopie, kde byly oblasti 200 až 600 cm 1 (far-IR) a 400 až 4000 cm“1 (mid-IR) provedeny technikou ATR (Nexus 670 FT-IR, Thermo Nicolet),
- hmotnostní spektrometrie provedená ESI+ technikou (LCQ Fleet, ThermoScientific)
- ID a 2D nukleární magnetická rezonance - 'H, 13C, ’Η-’Η gs-COSY, 'H-^C gs-HMQC, *H13C gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spektrometr, Varian),
- monokrystalová rentgenová strukturní analýza (difraktometr Xcalibuer2+CCD detektor Sapphire2, Oxford Diffraction).
Příklad 1: Příprava a charakterizace komplexů zlata(I) s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanu.
Zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanem byly syntetizovány za použití modifikovaného postupu popsaného v patentovém spisu CZ 303 649 a v publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568.
[Au(L!)(PPh3)] (1): Výtěžek: 81 %, Elementární složení C25H22N4OPAU (HLi = 06-ethylhypoxantin): vypočtené C: 48,24; H: 3,56; N: 9,00; získané: C: 47,78; H: 3,61; N: 9,44 %. ESI+ MS (methanol, m/z)·. 187 (vyp. 187) [HL,+Na]+, 623 (623) [M+H]+. IR (vATR/cm1): 3055w víC-H)^, 2980m v(C-H)ai, 2917m v(C-H), 2848w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1549m, 1454m v(O-CH2), 1433s v(C=C)ar, 1377m, 1334m, 1318 m v(C6-O), 1302m, 1175m, 1136m, IlOOs v(O-Cio), 585m, 544s v(Au-N), 498s, 448m, 328m v(Au-P). ’H NMR (DMF-<77, ppm): δ (SiMe4) 8,45 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,61 (q, C10H, 2H), 1,41 (t, C11H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 159,59 (C6), 158,43 (C4), 150,96 (C2), 146,41 (C8), 134,56128,75 (PPh3), 119,92 (C5), 62,46 (CIO), 14,45 (Cil).
[Au(L2)(PPh3)] (2): Výtěžek: 83%, Elementární složení C27H26N4OPAu (HL2 = 06-butylhypoxantin): vypočtené C: 49,86; H: 4,03; N: 8,61; získané: C: 49,43; H: 4,02; N: 8,31 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 215 (vyp. 215) [HL2+Na+], 651 (vyp. 651) [M+H ], IR (vATR/cm_1): 3048w, 2953m, 293lm, 2869m, 1599s, 1540m, 1434s, 1367m, 1330m v(C6-O), 1277w, 1204w, 1099s,
-6CZ 305585 B6 v(O-C10), 75lm, 690m, 584w, 542s, v(Au-N), 499s, 443m, 400m, 327m v(Au-P). *H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,46 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,57 (m, C10H, 2H), 1,80 (q, C11H, 2H), 1,48 (sx, C12H, 2H), 0,92 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 160,46 (C6), 151,10 (C2), 146,13 (C8), 135,20-129,60 (PPh3), 119,66 (C5),
67,91 (CIO), 30,52 (Cil), 20,04 (C12), 14,41 (C13).
[Au(L3)(PPh3)] (3): Výtěžek: 65%, Elementární složení C26H22N4OPAu (HL3 = (96-allylhypo10 xantin): vypočtené C: 49,22; H: 3,50; N: 8,83; získané: C: 48,89; H: 3,62; N: 8,35 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL3+Na+], 635 (635) [M+H+], IR (vATR/cm_1): 3056w v(C-H)ar, 2959m, 2906w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1474w v(O-CH2), 1432s víCCK, 1300m v(C6-O), 1175m, 1133m, 1099s, v(O-Cn), 989m, 746m, 690m, 643m, 584m, 543s, v(Au-N), 496s, 45 lm, 433m, 396w, 326m v(Au-P), 253w. ]H NMR (DMF^/7, ppm): δ (SiMe4) 8,41 (s,
C2H, 1H), 8,27 (s, C8H, 1H), 7,78 - 7,07 (m, PPh3, 15H), 6,14 (m, C11H, 1H), 5,45 (d, C12Ha, 1H), 5,20 (d, C12Hb, 1H), 5,12 (d, Cl OH, 2H). 13C NMR (DMF-<77, ppm): δ (SiMe4) 159,05 (C6), 153,44 (C4), 150,00 (C2), 148,21 (C8), 135,43 - 129,49 (PPh3), 134,00 (Cil), 118,30 (C5), 117,54 (C12), 66,79 (CIO).
[Au(L4)(PPh3)] (4): Výtěžek: 72%, Elementární složení C30H24N4OPAu (HL4 = 06-benzylhypoxantin): vypočtené C: 52,64; H: 3,53; N: 8,19; získané: C: 52,74; H: 3,36; N: 7,95 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 249 (vyp. 249) [HL4+Na+], 685 (685) [M+Hj. IR (vatr/ctN'): 3048m, 3069m,
3 0 07m, 2934m, 2850m, 2806m v(C-H)a,, 1657s, 1578s, 1434n, 1359m, 1274s v(C6-O), 1185m,
1102m, v(O-Cn), 1055m, 942w, 748w, 689m, 578m, 543s, v(Au-N), 510m, 496s, 451m, 442m,
-7CZ 305585 B6
433m, 395w, 371m, 327w v(Au-P), 275w. ’H NMR (DMF-^/7, ppm): δ (SiMe4) 8,56 (s, C2H, IH), 8,50 (s, C8H, IH), 7,72 (m, PPh3, 15H), 7,55 - 7,38 (m, Ph-hypoxantin, 5H), 5,46 (s, C10H, 2H). I3C NMR (DMF-</7, ppm): δ (SiMe4) 159,92 (C6), 159,19 (C4), 154,83 (C2), 148,85 (C8), 135,39 - 130,30 (PPh3), 129,69 - 129,13 (Ph-hypoxantin), 69,57 (CIO).
[Au(L5)(PPh3)] (5): Výtěžek: 57%, Elementární složení C3iH26N4OPAu (HL5 = (96-fenetylhypoxantin): vypočtené C: 53,30; H: 3,75; N: 8,02; získané: C: 52,91; H: 3,78; N: 7,71 %. ESI+ MS ío (methanol, m/z): 263 (vyp. 263) [HL5+Na]+, 699 (699) [M+H]+. IR (vATR/cm_1): 3056m v(C-H)ar,
296lm, 2796m v(C-H)al 258 lm, 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1451m, 1434s v(C=C)ar, 1371m,
1335m, 1308s v(C6-O), 1260m, 1128m, 10,99s v(O-Cio), 997m, 958m, 798m, 744m, 689s,
582w, 545s v(Au-N), 500s, 450w, 436w, 329m v(Au-P), 255w. 'H NMR (DMF-č/7, ppm): δ (SiMe4) 8,53 (s, C2H, IH), 8,41 (s, C8H, IH), 7,80 - 7,59 (m, PPh3, 15H), 7,53 - 7,30 (m, Ph15 hypoxantin, 5H), 5,49 (t, C10H, 2H), 3,52 (t, Cl IH, 2H). 13C NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4)
160,06 (C6), 159,26 (C4), 154,23 (C2), 148,62 (C8), 128,23-127,56 (Ph-hypoxantin), 119,57 (C5), 69,13 (CIO), 54,23 (Cil).
[Au(L6)(PPh3)] (6): Výtěžek: 75%, Elementární složení C24Hi9N4OPAu (HL6 = 2-chlor-č)6methylhypoxantin): vypočtené C: 44,84; H: 2,98; N: 8,72; získané: C: 44,97; H: 3,18; N: 9,16 %.
-8CZ 305585 B6
ESI+ MS (methanol, m/z): 208 (vyp. 208) [HLĎ+Na]+, 643 (vyp. 643) [M+H]+. IR (vATR/cm ’): 3052w víC-H)^, 2979m v(CH3), 2900w v(C-H)al 1593vs v(C=N)ar, 1533m, 1420s víOC)^, 1371m, 1339s v(C6-C), 1291m, 1204s, 1118s v(O-C„), lOlOlm, 933m, 691s, 581m, 541sv(AuN), 513m, 500s, 456m, 449m, 423m, 346m v(Au-P), 256w. NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4)
8,42 (s, C8H, 1H), 7,76 - 7,67 (m, PPh3, 15H), 4,56 (s, C10H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 160,97 (C6), 157,52 (C4), 151,46 (C2), 148,25 (C8), 120,53 (C5), 64,17 (CIO).
[Au(L7(PPh3)] (7): Výtěžek: 52%, Elementární složení C27EI25N4OPAu (HL7 = 2-chlor-O6_ butylhypoxantin): vypočtené C: 47,35; H: 3,68; N: 8,18; získané: C: 47,65; H: 3,69; N: 7,84 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 193 (vyp. 193) [HL7-C1+2H]+, 651 (651) [M+H]+. IR (vATR/cm’): 3052w, 2958m, 2870m v(C-H)aj 1599s, 1533m, 1422m, 1370m, 1297m v(C6-C), 1202m, IlOOm v(O-Cn), 927m, 746m, 689m, 586w, 543s v(Au-N), 512m, 504s, 443w, 432w, 328w v(Au-P),
225w. 'H NMR (DMF-4-, ppm): δ (SiMe4) 8,42 (s, C8H, 1H), 7,71 (m, PPh3, 15H), 4,56 (s,
C10H, 3H), 1,74 (q, C11H, 2H), 1,42 (sx, C12H, 2H), 0,84 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-d?, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 151,90 (C4), 150,13 (C2), 145,57 (C8), 135,40 - 129,49 (PPh3), 121,69 (C5), 66,96 (CIO), 30,02 (Cil), 20,16 (C12), 14,39 (Cl3).
[Au(L8(PPh3)] (8): Výtěžek: 46%, Elementární složení C26H2iN4OPC1Au (HL8 = 2-chlor-06allylhypoxantin): vypočtené C: 46,69; H: 3,16; N: 8,38; získané: C: 46,32; H: 3,02; Ν: 8,68%. ESI+ MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL8+Na]+, 669 (vyp. 669) [M+H]+. IR (vATR/cm
3 0 5 7w v(C-H)ar, 2982m v(C-H)al, 1596vs víC-N)^, 1528m, 1432s v^C)^, 1367m, 1299s v(C6-O), 1284m, lOOlm v(O-Cn), 943m, 689s, 589m, 543s v(Au-N), 505m, 449m, 427m, 327m v(Au-P), 250w. ’H NMR (DMF-c/7, ppm): δ (SiMe4) 8,43 (s, C8H, 1H), 7,67 - 7,23 (m,
-9CZ 305585 B6
PPh3, 15H), 6,25 (m, C11H, 1H), 5,49 (d, C12Ha, 1H), 5,27 (d, C12Hb, 1H), 5,24 (d, Cl OH, 2H). 13C NMR (DMF-J ppm): δ (SiMe4) 160,54 (C6), 155,02 (C4), 154,31 (C2), 149,15 (C8), 136,28- 130,01 (PPh3), 133,51 (Cil), 120,89 (C5), 118,52 (C12), 66,75 (CIO).
[Au(L9(PPh3)] (9): Výtěžek: 43%, Elementární složení C3oH23N4OPClAu (HL9 = 2-chlor-O6benzylhypoxantin): vypočtené C: 50,12; H: 3,22; N: 7,79; získané: C: 50,43; H: 3,36; N: 7,52 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 301 (vyp. 301) [HL9+K]+, 723 (vyp. 723) [M-CF+H+Kj. IR ío (vATR/cm’’): 3095m víC-H)^, 2892m, 1597s v(C=N)ar, 1436m ν(ϋ=Ο)„, 1355m, 1297s v(C6-O),
1087m v(O-Cn), lOOlw, 692m, 581w, 542s, v(Au-N), 506m, 458w, 458w, 442w, 328w v(AuP). 'H NMR (DMF-ó/7, ppm): δ (SiMe4) 8,23 (s, C8H, 1H), 7,83 - 7,65 (m, PPh3, 15H), 7,56 7,38 (m, Ph-hypoxantin, 5H), 5,49 (s, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 159,59 (C4), 155,49 (C2), 150,13 (C8), 135,46 - 130,73 (PPh3), 129,75 - 129,13 (Ph15 hypoxantin), 117,78 (C5), 70,18 (CIO).
Příklad 2: Molekulové struktury komplexů [Au(Li)(PPh3)] (1) a [Au(L3)(PPh3)] (3), HLi = 06ethylhypoxantin a HL3 = (96-allylhypoxantin, stanovené za využití monokrystalové rentgenové strukturní analýzy, kde krystalografické parametry jsou uváděny v jednotkách Á, pro které platí převodní vztah: 1 Á= 10 l()m.
-10CZ 305585 B6
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(Li)(PPh3)] (1): mřížkové parametry: a 10,3007(2) Á, b 10,8432(2) Á, c 11,3338(2) Á, a 103,9686(14)°, β 97,5474(13)°, γ 109,9333(15)°, prostorová grupa: P-\, vazebné délky: Aul-N9 2,048(2) Á, Aul-Pl 2,234(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 172,730(1 l)°(viz obrázek 4).
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L3)(PPli3)] (3): mřížkové parametry: a 10,4415(3) A, b 11,0883(2) Á, c 11,1500(2) Á, a 102,6310(15)°, β 111,338(2)°, /97,4988(18)°, prostorová grupa: P-l, vazebné délky: Aul-N9 2,042(2) Á, Aul-Pl 2,236(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 175,651(12)°(viz obrázek 5).
Příklad 3: ln vitro cytotoxická aktivita komplexů zlata v oxidačním stavu +1 a derivátů hypoxantinu HLj_9 na lidské leukemické linii THP-1.
Před určením in vitro protizánětlivé aktivity připravených komplexů zlata(I) byla stanovena in vitro cytotoxicita u lidských leukemických buněk THP-1 použitím WST-1 testu. Během tohoto testu živé (metabolicky aktivní) buňky redukují červené barvivo 4-[3-(4-jodřeny 1)-2-(4nitrofenyl)-27/-5-tetrazolio]-l,3-benzensulfonát (WST-1) na žlutý formazan. Tato reakce je řízená mitochondriálním enzymem sukcinát-tetrazolium reduktasou, který je aktivní pouze v živých buňkách. Množství vzniklého formazanu je přímo úměrné množství absorbance spektrofotometricky. THP-1 buněčná linie byla kultivována v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 μg/ml) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Pro účely stanovení vlastní cytotoxické aktivity byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml v kultivačním médiu RPMI 1640 (viz výše), které neobsahovalo bovinní sérum. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-jamkové mikrotitrační destičky. Testované zlatné komplexy a ligandy byly nejprve rozpuštěny v dimethyl sulfoxidu, a pak naředěný do koncentrace 10 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Zásobní roztoky byly před každým testováním lOx zředěny kultivačním médiem bez séra a 1 μΐ tohoto roztoku byl přidán k buněčné suspenzi. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO2. Poté byl přidán roztok WST-1 a následovala inkubace po dobu 45 minut. Vzniklý formazan byl kvantifikován spektrofotometricky (Synergy HT, BioTek) při 440 nm a referenční vlnové délce 630 nm.
Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50% nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v tabulce 1.
- 11 CZ 305585 B6
Tabulka 1. Výsledky in vitro cytotoxicity komplexů 1-9 a derivátů hypoxantinu HL]-HL9 vůči lidské leukemické linii THP-1. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách inhibiční koncentrace IC50±SE (μΜ) a porovnány s Auranofinem jako zvoleným standardem.
| Testovaná látka | • WSO j. wv. 3 THP-1 |
| [Au(U)(PPba)3 (1) | 1,17±0,04 |
| [Au(L2)(PPh3)j (2) | 1,03±0,04 |
| [Au(L3)(PPh3)] (3) | 1.87±0,09 |
| [Au(L_4)(PPh«)] (4) | 2,15±0,19 |
| [Au(Ls)(PPhj)] (5) | 1,89±0,11 |
| [Au(L6)(PPh3)] (6) | 1,94±0,12 |
| [Au(L7)(PPh3)J (7) | 1,97±0,14 |
| [Au(L0)(PPh3)j (8) | 5,28±0,21 |
| [Au{L9)(PPh3)] (9) | >10 |
| Auranofin | 0,88±0,04 |
| HL, | ' >10 |
| HL.2 | >10 |
| hl3 | >10 |
| HL.4 | >10 |
| hl5 | >10 |
| hl6 | >10 |
| hl7 | >10 |
| HLS | >10 |
| HL.9 | >10 |
HLi = O6-ethylhypoxantin; HL2 = O6-butylhypoxantin; HL3 = O6-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenetylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin; HL8 = 2-chlor-06-allylhypoxantin; HL9 = 2-chlor-O6-benzylhypoxantin.
Příklad 4: Stanovení vlivu testovaných komplexů zlata v oxidačním stavu +1 na sekreci vybraných prozánětlivých cytokinů (TNF-rza IL-1/7) ve srovnání s Auranofilem a vehikulem.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity testovaných komplexů zlata byly použity buňky podobné makrofágům odvozené z lidské buněčné linie THP-1. Buňky THP-1 byly kultivovány v plastových lahvích sRPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100pg/ml) (tzv. kompletní medium) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Za účelem diferenciace byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Diferenciace byla zpuštěna přidáním 1 μΐ 5 pg/ml 12-O-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu rozpuštěného v 5% DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Diferencované buňky adherovaly na dno kultivační láhve. Médium s nediferencovanými buňkami bylo odsáto a nahrazeno čerstvým kompletním RPMI 1640 médiem bez 12-ČMetradekanoylforbol-13-acetátu. Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin. Poté bylo odsáto kultivační médium, buňky byly promyty fosfátovým pufrem (pH=7,4) a bylo k nim přidáno 100 μΐ kompletního kultivačního média bez bovinního séra; takto byly buňky inkubovány dalších 24 hodin. Takto připravené makrofágům podobné buňky byly použity na testování protizánětlivé aktivity, která byla stanovena na základě určení vlivu testovaných Au(I) komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/7. K diferencovaným buňkám THP-1 v 96-ti jamkové mikrotitrační
- 12CZ 305585 B6 destičce (objem média 100 μΐ na jamku) bylo přidáno 1 μΐ 30 μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Dále byl k buňkám přidán 1 μΐ 100 gg/ml lipopolysacharidu (LPS) zEscherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Po této inkubaci bylo odebráno kultivační médium, ve kterém se po centrifugaci stanovil obsah prozánětlivých cytokinů TNF-tr a IL—1/7 metodou ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání. Výsledky (viz. tabulka 2, obrázek 6, obrázek 7) byly srovnány io s Auranofinem a vehikulem (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS).
V Tabulce 2 jsou uvedeny koncentrace prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1 β stanovené po inkubaci LPS-stimulovaných makrofágů THP-1 buněk s testovanými komplexy.
Tabulka 2. Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity komplexů 1-7 ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-čz a IL—1/7 ajejich srovnání s Auranofmem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)). Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách koncentrace c±SE (pg/ml) příslušného cytokinu v kultivačním médiu.
| Testovaná látka | c ± SE (pg/ml) TNF-σ | c±SE (pg/ml) IL-1j8 |
| [AudOíPPha)] (1) | 57651367 | 353,4132,6 |
| [Au(L2)(PPh3)] (2) | 44961325 | 237,1161,0 |
| [Au(L3)(PPh3)] (3) | 57451418 | 250,9111,2 |
| [Au(L4)(PPh3)] (4) | 35161255 | 238,6133,5 |
| [Au(L5)(PPh3)] (5) | 55631620 | 270,3147,0 |
| [Au(L6)(PPh3)j (6) | 62001676 | 284,9141,5 |
| [Au(L7)(PPh3)](7) | 47931536 | 220,2122,3 |
| Auranofin | 52541499 | 210,519,1 |
| vehikulum | 88041392 | 703,2+65,1 |
HL! = O6-ethylhypoxantin; HL2 = (96-butylhypoxantin; HL3 = (96-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenetylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-(96-methylhypoxatin; HL7 = 225 chlor-(96—butyl hypoxantin.
Příklad 5: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci prozánětlivých cytokinů TNF-aa IL-l/?ve srovnání s Auranofilem a vehikulem.
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinu TNF-řz a genů prozánětlivého cytokinu IL-1 β. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30 μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán μΐ 100 gg/ml lipopolysacharidu (LPS) zEscherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Následně bylo inkubační médium odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komerčně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mKNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptasy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (re- 13 CZ 305585 B6 spektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese TNF-α po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou ΛΛΟΓ.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L7)(PPh3)] (7) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL—1/7 (HL2 = 06butylhypoxantin, HL7 = 2-chlor-06-butylhypoxantin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání (tabulka 3, obrázek 8, obrázek 9).
Tabulka 3. Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity ukazující výslednou transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-čz a II-l/? ovlivněnou studovanými komplexy 2 a 7 ve srovnání s Auranofinem a vehikulem.
| Testovaná látka | genová transkripce (A.U.± SE) TNF-o | genová transkripce (A.U.± SE) IL-1/J |
| [Au(L2)(PPh3)] (2) | 46,37±1,78 | 2,21 ±0,43 |
| [Au(L7)(PPh3)] (7) | 42,67±0,78 | 2,34±0,46 |
| Auranofin | 43,59±4,86 | 2,26±0,20 |
| vehikulum | 79,72±8,44 | 4,20±0,56 |
HL2 = 06-butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin.
Příklad 6: In vitro cytotoxická aktivita Au(I) komplexů na vybraných lidských nádorových liniích.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity připravených Au(I) komplexů byl použit MTT test, což je mikrotitrační metoda, která hodnotí životaschopnost buněk na základě redukce 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) na modré formazanové barvivo. K této redukci dochází pouze v živých buňkách, jejichž počet tak odpovídá množství zredukovaného MTT, takže lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek. V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenas. Vznikající formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO na klasickém spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: osteosarkom (HOS), prsní adenokarcinom (MCF7), karcinom plic (A549), maligní melanom (G361), karcinom děložního čípku (HeLa), karcinom vaječníku (A2780), karcinom vaječníku rezistentní na cisplatinu (A2780R) a karcinom prostaty (22Rvl). Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A549, Hela, HOS, MCF7, vRPMI-1610 médiu (2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitanu sodného) pro buněčné kultury A2780, A2780R, LNCaP a v McCoy's médiu (2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitanu sodného) pro buněčné kultury G361. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO2 po dobu 24 hodin. Testované látky byly nejprve rozpuštěny v Ν,Ν-dimethylformamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny lOOOx v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0-50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5%
- 14CZ 305585 B6
CO?. Poté byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT formazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.
V Tabulce 3a jsou uvedeny inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ).
Tabulka 3a. Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 4-6 a derivátů hypoxantinu HL4-HL6 stanovené pomocí MTT testu a vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace ÍC5o±SE (μΜ), ajejich porovnání s cisplatinoujako zvoleným standardem.
ICsolSE (μΜ)
Testovaná latka [Au(L4)(PPh3)] (4) [Au(L5)(PPh3)] (5) [Au(LeXPPh3)](6) cisplatina HL„ hl5 HLe
| MCF7 | HOS | A549 | G361 | HeLa | A2780 | A2780R | 22RV1 |
| JÁSúMO | tt,3±2,0 | 16,8*2,1 | 3.9*1.5 | 14.2*1,5 | 3,6*0,4 | 5,3*4,! | 3,8*0,4 |
| 6,3±2,4 | 6,6±2,9 | 19,3*2,5 | 3,4*0,2 | 19.8*2,8 | 4,2*0,7 | 5,2*1,0 | 4,4*0,8 |
| 5,2±2,1 | 4,0±0,9 | 21,7*1,1 | 3,0*0,4 | 21,6*1,0 | 4,2*1,0 | 5,0*0,9 | 3,6*0,2 |
| 17,9±3,5 | 20,5±0,3 | >50 | 5,3*0,7 | >50 | 21,6*0,6 | 20,0*4,7 | 26,9*3.5 |
| >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 |
| >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 |
| >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 |
HL4 = O6-benzylhypoxantin; HL5 = O6-fenetylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypo15 xantin; MCF7 = lidský prsní adenokarcinom; HOS = lidský osteosarkom; A549 = lidský karcinom plic; G361 = lidský maligní melanom; HeLa = lidský karcinom děložního čípku; A2780 = lidský karcinom vaječníků; A2780R = lidský karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině;
22Rvl = lidský karcinom prostaty
Claims (4)
1. Komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin-6(9//)-onu) a s deriváty fosfanu, ajejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)] a vyjádřený strukturním vzorcem II,
L-Au—PR3 («) kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
35 - PR3 je derivát fosfanu,
- 15 CZ 305585 B6
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent RI je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen,
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
2. Krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II podle nároku 1, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)] n5o/v, ve kterém jsou
- L a PR3 definovány v nároku 1,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot především 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, A/TV-dimethylformamid, dimethyl sulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
-16CZ 305585 B6
3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.
5 4. Použití farmakologického prostředku podle nároku 3 pro výrobu léčiv pro léčeni zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-326A CZ2014326A3 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-326A CZ2014326A3 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ305585B6 true CZ305585B6 (cs) | 2015-12-23 |
| CZ2014326A3 CZ2014326A3 (cs) | 2015-12-23 |
Family
ID=54883655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-326A CZ2014326A3 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2014326A3 (cs) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107043404A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-08-15 | 中山大学肿瘤防治中心 | 新型膦金配合物及其抗肿瘤应用 |
| RU2708626C1 (ru) * | 2018-12-25 | 2019-12-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биохимической Физики Им. Н.М. Эмануэля Российской Академии Наук (Ибхф Ран) | Применение полиакрилата золота в качестве ингибитора роста клеток меланомы человека |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ303649B6 (cs) * | 2011-07-11 | 2013-01-23 | Univerzita Palackého | Komplexy zlata s deriváty N6-benzyladeninu a deriváty fosfanu, zpusob jejich prípravy a pouzití techto komplexu jako léciv v protizánetlivé terapii |
-
2014
- 2014-05-12 CZ CZ2014-326A patent/CZ2014326A3/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ303649B6 (cs) * | 2011-07-11 | 2013-01-23 | Univerzita Palackého | Komplexy zlata s deriváty N6-benzyladeninu a deriváty fosfanu, zpusob jejich prípravy a pouzití techto komplexu jako léciv v protizánetlivé terapii |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Colacio E. et al.: Inorganic Chemistry 1991, 30 * |
| Colacio E. et al.: Inorganic Chemistry 1996, 35 (14) * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107043404A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-08-15 | 中山大学肿瘤防治中心 | 新型膦金配合物及其抗肿瘤应用 |
| RU2708626C1 (ru) * | 2018-12-25 | 2019-12-10 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биохимической Физики Им. Н.М. Эмануэля Российской Академии Наук (Ибхф Ран) | Применение полиакрилата золота в качестве ингибитора роста клеток меланомы человека |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2014326A3 (cs) | 2015-12-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6087889B2 (ja) | 治療的使用のための新規７−デアザプリンヌクレオシド | |
| JP5940547B2 (ja) | 結晶（（ｒ）−（ｅ）−２−（４−（２−（５−（１−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）エトキシ）−１ｈ−インダゾール−３−イル）ビニル）−１ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノールおよびｆｇｆｒ阻害剤としての使用 | |
| CN103254239B (zh) | 一种芳基钌-β-咔啉配合物及其制备方法和应用 | |
| AU2009204568B2 (en) | Novel cytostatic 7-deazapurine nucleosides | |
| CN113227092A (zh) | 化合物及其用于治疗癌症的使用方法 | |
| CA3005089A1 (en) | 2-substituted quinazoline compounds comprising a substituted heterocyclic group and methods of use thereof | |
| EP3630745A2 (en) | Covalent inhibitors of kras | |
| WO2017015562A1 (en) | Substituted quinazoline compounds and their use as inhibitors of g12c mutant kras, hras and/or nras proteins | |
| WO2016164675A1 (en) | Substituted quinazoline compounds and methods of use thereof | |
| Liu et al. | Synthesis and evaluation of the epithelial-to-mesenchymal inhibitory activity of indazole-derived imidazoles as dual ALK5/p38α MAP inhibitors | |
| EP3663285B1 (en) | Formylpyridine derivative having fgfr4 inhibitory activity, preparation method therefor and use thereof | |
| CZ305585B6 (cs) | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii | |
| CZ27032U1 (cs) | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii | |
| CZ305624B6 (cs) | Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění | |
| CN114957249A (zh) | 一种不可逆共价结合cdk抑制剂及其制备方法和应用 | |
| UA142117U (uk) | 4-[3-(5-бромо-2-гідроксифеніл)-5-феніл-3,4-дигідропіразол-2-іл]-5н-тіазол-2-он, що проявляє протипухлинну дію |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20220512 |