CZ27032U1 - Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii - Google Patents

Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii Download PDF

Info

Publication number
CZ27032U1
CZ27032U1 CZ2014-29548U CZ201429548U CZ27032U1 CZ 27032 U1 CZ27032 U1 CZ 27032U1 CZ 201429548 U CZ201429548 U CZ 201429548U CZ 27032 U1 CZ27032 U1 CZ 27032U1
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
substituted
cycloalkyl
carbon
gold
complexes
Prior art date
Application number
CZ2014-29548U
Other languages
English (en)
Inventor
Zdeněk Trávníček
Radka Křikavová
Jan Hošek
Zdeněk Dvořák
Original Assignee
Univerzita Palackého
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého filed Critical Univerzita Palackého
Priority to CZ2014-29548U priority Critical patent/CZ27032U1/cs
Publication of CZ27032U1 publication Critical patent/CZ27032U1/cs

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Předložené technické řešení spadá do oblasti léčiv a týká se komplexů zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití jako léčiv v protizánětlivé terapii a v léčbě nádorových onemocnění, zejména pak adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Dosavadní stav techniky
Strukturně lineární komplexy zlata v oxidačním stavu +1 představují významnou skupinu biologicky aktivních látek, z nichž již pět zástupců je v moderní medicíně komerčně využíváno k léčbě zánětlivých onemocnění, jako je například revmatoidní artritida. Ve Spojených státech amerických jsou užívanými protizánětlivými léčivy sodná sůl 2-merkaptobutandiolatozlatného komplexu (natrium-aurothiomalát, vzorec A) a komplex ((25,35,47?,55)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný (aurothioglukosa, vzorec B). Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech GB 421989, US 4599436, WO 20100091381, GB 293363, GB 397293 nebo GB 398020.
V Evropě jsou navíc používány zlatné sloučeniny sodná sůl bis(thiosulfato)zlatného komplexu (vzorec C) a sodná sůl 2-hydroxy-3-merkaptopropan-l-sulfonatozlatného komplexu (natriumthiopropanolsulfonát, vzorec D). Tyto látky jsou souhrnně označovány jako thioláty zlatné a jedná se o iontové, ve vodě rozpustné sloučeniny, které kromě bis(thiosulfato)zlatnanového aniontu obsahují polymemí komplexní anionty, přičemž ve všech sloučeninách je zlato lineárně koordinované dvěma atomy síry. Tato léčiva jsou podávána injekčně. Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech US 4657763, GB 246809, GB 261048 nebo FR 2591106.
3Na+
SO3
S—Au—S' o3s'
Au—S
OH
SO3 Na+
Nejpozději, a to v 80. letech 20. století, bylo do klinické praxe uvedeno strukturně odlišné protizánětlivé léčivo Auranofin, 3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2-thiolatotriethylfosfan)zlatný komplex (vzorec E), což je jednojademý neutrální lipofilní komplex, který podobně
-1 CZ 27032 U1 jako výše zmíněná léčiva obsahuje S-donorový ligand, ale liší se přítomností organického derivátu fosfanu koordinujícím se přes atom fosforu. Příprava Auranofinu je popsaná v patentových spisech US 4200738, US 4115642, US 4125711, US 4125710, US 4122254, US 4133952 nebo US 4131732 a jeho terapeutické využití je popsáno ve spise WO 2010091381. Výhodou Auranofinu oproti výše uvedeným iontovým sloučeninám zlata uvedených ve vzorcích A až D je to, že jej lze podávat orálně.
Předložené Au(I) komplexy lze podobně jako Auranofin zařadit mezi jednojademé neutrální komplexy obsahující derivát fosfanu koordinovaný na zlato přes atom fosforu. Liší se ale druhým ligandem, kterým je A-donorová organická molekula odvozená od hypoxantinu, tj. 1 A-purin6(9A)-on. Předmětné komplexy navazují na vysoce protizánětlivě aktivní zlatné komplexy s různými A-donorovými ligandy odvozenými od purinu a deriváty fosfanu popsané v patentovém spise CZ 303649, publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568. Je zde nutné zdůraznit, že podobně jako u jiných systémů obsahujících organickou molekulu koordinovanou na přechodný kov, bylo i u komplexů zlata(I) obsahujících A-donorový ligand odvozený právě od 6benzylaminopurinu jednoznačně prokázáno, že i velmi malá strukturní změna v molekule organického ligandu může vést k velmi výrazné modifikaci biologické aktivity nebo k jejímu úplnému vymizení (J. Hošek et al. PlosONE 8, 2013, e82441). Vlastnosti koordinované organické molekuly a způsob její koordinace na atom zlata totiž výrazně ovlivňují biodistribuci celého komplexu, neboť různý způsob koordinace a substituce na základním skeletu mohou vést ke změnám v afinitě k biomolekulám a cílovým receptorům, průchodnosti biomembránami, tedy ke změnám, které se projeví ve výsledné biologické aktivitě. Proto nelze jednoznačně predikovat, jaké Au(I) komplexy uvedeného strukturního typu budou vykazovat ten či onen typ biologické aktivity.
Komplexní sloučeniny zlata v oxidačním stavu +1 jsou studovány nejen pro své prokázané proti zánětlivé účinky aplikované v praxi, ale v posledních desetiletích jsou předmětem bioanorganického výzkumu i pro svou potenciální protinádorovou aktivitu. Studie prokazující antitumorové působení Auranofinu in vitro na buněčných liniích děložního čípku HeLa (T. M. Simon et al. Cancer 44, 1979, 1965) a melanomu B16 a in vivo vůči leukémickým buňkám myší buněčné linie P388 (C. K. Mirabelli et al. Cancer Res. 45, 1985, 32) vedly k širšímu zkoumání protinádorové aktivity analogů Auranofinu (patentový spis WO 2012142615). Předmětem studia byly i Au(I) komplexy obsahující chromofor AuNP, kdy byla prokázána antitumorová aktivita u komplexů s deriváty fosfanu a A-donorovými heterocyklickými ligandy, jako například imidazol, pyrazol nebo deriváty 9-deazapurinu, jak je popsáno v publikacích R. Gallassi et al. Dalton Trans. 41, 2012, 5307; M. Serratrice et al. Inorg. Chem. 51, 2012, 3161; C. Abbehausen et al. Inorg. Chem. 52, 2013, 11280. Ovšem podobně jako v případě protizánětlivě aktivity, tak u protinádorového působení komplexů zlata v oxidačním stavu +1 také není doposud jednoznačně prokázán mechanismus účinku těchto sloučenin a definovány vztahy mezi strukturou a biologickou aktivitou u této skupiny látek. Není také možné teoreticky předpokládat terapeutickou účinnost nebo neúčinnost určitého strukturního typu zlatných komplexů, tedy není možné předem, bez provede-2CZ 27032 Ul ní patřičných experimentů, definovat kvalitativní ani kvantitativní vztah mezi strukturou a biologickou aktivitou.
Předložené zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu představují v literatuře doposud nepopsanou skupinu biologicky aktivních komplexů zlata.
Různě substituované deriváty hypoxantinu jsou studovány jako rostlinné růstové regulátory (patentový spis WO 2005107472 Al), dále také jako velmi účinné inhibitory cyklin dependentních kinas (patentové spisy WO 9902162) a 06-alkylguanin-DNA-alkyltransferas (AGT) (patentové spisy US 5352669, US 5691307, US 5958932, WO 2004031405, WO 2011028507), což jsou enzymy hrající klíčové role v regulaci procesů spojených s dělením buněk. Zástupce těchto látek, to 2-amino-O6-benzylhypoxantin (O6-benzylguanin) je v současné době v II. fázi klinických testů jako AGT inhibitor, konkrétně jako látka navyšující účinnost vybraného chemoterapeutika (temozolomidu, tj. 4-methyl-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabicyklo[4.3.0]nona-2,7,9-trien-9-karboxamid) pro léčbu maligního gliomu (J. A. Quinn et al. J. Clin. Oncol. 27, 2009, 1262). Příprava, charakterizace a biologická aktivita těchto látek je mimo zmíněné patentové spisy popsána například v publikacích R. W. Balsiger et al. J. Org. Chem. 25, 1960, 1573; Μ. Y. Chae et al. J. Med. Chem. 31, 1994, 342; R. S. McElhinney et al. J. Med. Chem. 41, 1998, 5265; C, A. Arris et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 2797; F. Seela et al. Helvetica Chim. Acta 81, 1998, 2244; T. G. Davies et al. Nátuře Struct. Biol. 9, 2002, 745; A. E. Gibson et al. J. Med. Chem. 45, 2002, 3381; R. J. Griffin et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 4071; I. R. Hardcastle et al. J. Med. Chem. 47, 2004, 3710; T. E.
Spratt et al. Biochem. 31, 1992, 3689; R. Schirrmacher et al. Curr. Org. Synth. 2, 2005, 215;
Podstata technického řešení
Podstatou technického řešení jsou komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin-6(977)-onu) a s deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)j a vyjádřené strukturním vzorcem II,
R2
Au
L-Au-PR3 \
pr3
J kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent Rl je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen,
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, 35 substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl,
-3CZ 27032 Ul kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
Další podstatou technického řešení jsou krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)]-h5’o/v, ve kterém
- L a PR3 jsou definovány výše,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot především 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, Α,/V-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
Nedílnou podstatou technického řešení je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami pro použití v lékařství, zejména pro použití pro terapii zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, a to zejména pro léčbu adenokarcinomu prsu a/nebo
-4CZ 27032 Ul osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Přehled obrázků na připojených výkresech
Konkrétní příklady provedení technického řešení jsou doloženy připojenými výkresy, kde:
- Obr. 1 je infračervené spektrum komplexu [Au(L6)(PPh3)j (6) naměřené v oblasti 400 až 4000 cm'1; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin
- Obr. 2 je infračervené spektrum komplexu [Au(Li)(PPh3j] (1) naměřené v oblasti 200 až 600 cm'1; HLi = O6-ethylhypoxantin
- Obr. 3 je ’H NMR spektrum komplexu [Au(L9)(PPh3)j (9) rozpuštěného v DMF-í/7; HL9 = 2chlor-06-benzylhypoxantin
- Obr. 4 je molekulová struktura komplexu [Au(Li)(PPh3)j (1) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL] = 06ethylhypoxantin
- Obr. 5 je molekulová struktura komplexu [Au(L3)(PPh3)j (3) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL3 = 06allylhypoxantin
- Obr. 6 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(Lj)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)j (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)] (5), [Au(L6)(PPh3)j (6) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL] = 06-ethylhypoxantin; HL2 = (96-butylhypoxantin; HL3 = (96-allylhypoxantin; HL4 = (96-benzylhypoxantin; HL5 = 06fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-(96-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
- Obr. 7 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(Lj)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)j (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)j (5), [Au(L6)(PPh3)j (6) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů IL-l/J a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL! = (96-ethylhypoxantin; HL2 = (96-butylhypoxantin; HL3 = O6-allylhypoxantin; HL4 = (96-benzylhypoxantin; HL5 = 06fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-(96-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
- Obr. 8 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů TNF-a a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01)
- Obr. 9 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)j (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů IL-1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05).
Příklady provedení technického řešení
V následující části je technické řešení doloženo, nikoli však limitováno, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah technického řešení je pak jednoznačně definován nároky na ochranu.
-5CZ 27032 Ul
V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálněchemickými metodami:
- elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),
- infračervená spektroskopie, kde byly oblasti 200 až 600 cm1 (far-IR) a 400 až 4000 cm'1 (midIR) provedeny technikou ATR (Nexus 670 FT-IR, Thermo Nicolet),
- hmotnostní spektrometrie provedená ESI+ technikou (LCQ Fleet, ThermoScientific),
- ID a 2D nukleární magnetická rezonance - 'H, 13C, ’Η-'Η gs-COSY, 'H-^C gs-HMQC, 'H-^C gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spektrometr, Varian),
- monokrystalová rentgenová strukturní analýza (difraktometr Xcalibur2+CCD detektor Sapphire2, Oxford Diffraction).
Příklad 1: Příprava a charakterizace komplexů zlata(I) s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanu
Zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanu byly syntetizovány za použití modifikovaného postupu popsaného v patentovém spisu CZ 303 649 a v publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568.
[Au(Lj)(PPh3)] (1): Výtěžek: 81 %, Elementární složení C25H22N4OPAU (HLi = 06ethylhypoxantin): vypočtené C: 48,24; H: 3,56; N: 9,00; získané: C: 47,78; H: 3,61; N: 9,44 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 187 (vyp. 187) [HL,+Na]+, 623 (623) [M+H]+. IR (vATR/cm ’): 3055w v(C-H)ar, 2980m v(C-H)al, 2917m v(C-H), 2848w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1549m, 1454m v(O-CH2), 1433s v(C=C)ar, 1377m, 1334m, 1318m v(C6-O), 1302m, 1175m, 1136m, IlOOs v(OC10), 585m, 544s v(Au-N), 498s, 448m, 328m v(Au-P). 'H NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 8,45 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,61 (q, C10H, 2H), 1,41 (t, C11H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 159,59 (C6), 158,43 (C4), 150,96 (C2), 146,41 (C8), 134,56-128,75 (PPh3), 119,92 (C5), 62,46 (CIO), 14,45 (Cil).
[Au(L2)(PPh3)] (2): Výtěžek: 83 %, Elementární složení C27H26N4OPAu (HL2 = 06butylhypoxantin): vypočtené C: 49,86; H: 4,03; N: 8,61; získané: C: 49,43; H: 4,02; N: 8,31 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 215 (vyp. 215) [HL2+Na+], 651 (vyp. 651) [M+H+], IR (vATO/cm’): 3048w, 2953m, 293 lm, 2869m, 1599s, 1540m, 1434s, 1367m, 1330m v(C6-O), 1277w, 1204w, 1099s v(O-C10), 751m, 690m, 584w, 542s v(Au-N), 499s, 443m, 400m, 327m v(Au-P). 'H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,46 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,57 (m, Cl OH, 2H), 1,80 (q, C11H, 2H), 1,48 (sx, C12H, 2H), 0,92 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-fy, ppm): δ (SiMe4) 160,46 (C6), 151,10 (C2), 146,13 (C8), 135,20-129,60 (PPh3), 119,66 (C5), 67,91 (CIO), 30,52 (Cil), 20,04 (02), 14,41 (03).
-6CZ 27032 UI
[Au(L3)(PPh3)] (3): Výtěžek: 65 %, Elementární složení C26H22N4OPAU (HL3 = 06allylhypoxantin): vypočtené C: 49,22; H: 3,50; N: 8,83; získané: C: 48,89; H: 3,62; N: 8,35 %.
ESI+ MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL3+Na]+, 635 (635) [M+H]+. IR (vA™/cm''): 3056w ν(0-Η)„, 2959w, 2806w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1474w v(O-CH2), 1432s v(C=C)ar, 1300m v(C6-O), 1175m, 1133m, 1099s v(O-Cn), 989m, 746m, 690m, 643m, 584m, 543s v(AuN), 496s, 45lm, 433m, 396w, 326m v(Au-P), 253w. ]H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,41 (s, C2H, 1H), 8,27 (s, C8H, 1H), 7,78-7,07 (m, PPh3, 15H), 6,14 (m, C11H, 1H), 5,45 (d, C12Ha,
1H), 5,20 (d, C12Hb, 1H), 5,12 (d, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-ď7, ppm): δ (SiMe4) 159,05 (C6), 153,44 (C4), 150,00 (C2), 148,21 (C8), 135,43-129,49 (PPh3), 134,00 (Cil), 118,30 (C5), 117,54 (C12), 66,79 (CIO).
[Au(L4)(PPh3)] (4): Výtěžek: 72 %, Elementární složení C30H24N4OPAu (HL4 = 06benzylhypoxantin): vypočtené C: 52,64; H: 3,53; N: 8,19; získané: C: 52,74; H: 3,36; N: 7,95 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 249 (vyp. 249) [HL4+Na]+, 685 (685) [M+Hf. IR (vATR/cm’'): 3048m, 3069m, 3007m, 2934m, 2850m, 2806m v(C-H)ab 1657s, 1578s 1434n, 1359m, 1274s v(C6-O), 1185m, 1102m v(O-C„), 1055m, 942w, 748w, 689m, 578m, 543s v(Au-N), 510m, 496s, 451m,
442m, 433m, 395w, 371m, 327w v(Au-P), 275w. *H NMR (DMF-c/7, ppm): δ (SiMe4) 8,56 (s,
C2H, 1H), 8,50 (s, C8H, 1H), 7,72 (m, PPh3, 15H), 7,55-7,38 (m, Ph-hypoxantin, 5H), 5,46 (s, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-</7, ppm): δ (SiMe4) 159,92 (C6), 159,19 (C4), 154,83 (C2), 148,85 (C8), 135,39-130,30 (PPh3), 129,69-129,13 (Ph-hypoxantin), 69,57 (CIO).
-7CZ 27032 Ul
[Au(L5)(PPh3)] (5): Výtěžek: 57 %, Elementární složení C3iH26N4OPAu (HL5 = 06fenethylhypoxantin): vypočtené C: 53,30; H: 3,75; N: 8,02; získané: C: 52,91; H: 3,78; N:
7,71 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 263 (vyp. 263) [HL5+Na]+, 699 (699) [M+H]+. IR (vATR/cm'):
3056m v(C-H)ar, 2961m, 2796m v(C-H)ab 2581m, 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1451m, 1434s v(C=C)ar, 1371m, 1335m, 1308s v(C6-O), 1260m, 1128m, 1099s v(O-Ci0), 997m, 958m, 798m, 744m, 689s, 582w, 545s v(Au-N), 500s, 450w, 436w, 329m v(Au-P), 255w. *H NMR (DMF-4 ppm): δ (SiMe4) 8,53 (s, C2H, 1H), 8,41 (s, C8H, 1H), 7,80-7,59 (m, PPh3, 15H), 7,53-7,30 (m,
Ph-hypoxantin, 5H), 5,49 (t, C10H, 2H), 3,52 (t, C11H, 2H). 13C NMR (DMFA ppm): δ (SÍMe4) 160,06 (C6), 159,26 (C4), 154,23 (C2), 148,62 (C8), 128,23-127,56 (Ph-hypoxantin), 119,57 (C5), 69,13 (CIO), 54,23 (Cl 1).
[Au(L6)(PPh3)] (6): Výtěžek: 75 %, Elementární složení C24Hi9N4OPClAu (HLé = 2-chlor-O6methylhypoxantin): vypočtené C: 44,84; H: 2,98; N: 8,72; získané: C: 44,97; H: 3,18; N: 9,16 %. ESI+ MS (methanol, m/z)·. 208 (vyp. 208) [HL6+Na]+, 643 (vyp. 643) [M+H]+. IR Mem ’): 3052w v(C-H)ar, 2979m v(CH3), 2900w v(C-H)al, 1593vs v(C=N)ar, 1533m, 1420s v(C=C)a„ 1371m, 1339s v(C6-O), 1291m, 1204s, 1118s v(O-C„), llOlm, 933m, 691s, 581m, 541s v(Au20 N), 513m, 500s, 456m, 449m, 423m, 346m v(Au-P), 256w. *H NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4)
-8CZ 27032 Ul
8,42 (s, C8H, 1H), 7,76-7,67 (m, PPh3, 15H), 4,56 (s, C10H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 160,97 (C6), 157,52 (C4), 151,46 (C2), 148,25 (C8), 120,53 (C5), 64,17 (CIO).
[Au(L7)(PPh3)] (7): Výtěžek: 52 %, Elementární složení C27H25N4OPClAu (HL7 = 2-chlor-O6butylhypoxantin): vypočtené C: 47,35; H: 3,68; N: 8,18; získané: C: 47,65; H: 3,69; N: 7,84 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 193 (vyp. 193) [HL7-C1+2H]+, 651 (651) [M+H]+. IR (vatr/ciii ’): 3052w, 2958m, 2870m v(C-H)ai, 1599s, 1533m, 1422m, 1370m, 1297m v(C6-O), 1202m, IlOOm v(O-Cn), 927m, 746m, 689m, 586w, 543s v(Au-N), 512m, 504s, 443w, 432w, 328w v(Au-P),
225w. ‘H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,42 (s, C8H, 1H), 7,71 (m, PPh3, 15H), 4,56 (m,
C10H, 2H), 1,74 (q, C11H, 2H), 1,42 (sx, C12H, 2H), 0,84 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 151,90 (C4), 150,13 (C2), 145,57 (C8), 135,40-129,49 (PPh3), 121,69 (C5), 66,96 (CIO), 30,02 (Cil), 20,16 (C12), 14,39 (C13).
[Au(L8)(PPh3)] (8): Výtěžek: 46 %, Elementární složení C26H2iN4OPC1Au (HL8 = 2-chlor-<96allylhypoxantin): vypočtené C: 46,69; H: 3,16; N: 8,38; získané: C: 46,32; H: 3,02; N: 8,68 %. ESP- MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL8+Na]+, 669 (vyp. 669) [M+H]+. IR (vatr/chi-1): 3057w v(C-H)ar, 2982m v(C-H)al, 1596vs v(C=N)ar, 1528m, 1432s v(C=C)ar, 1367m, 1299s v(C620 O), 1284m, lOOlm v(O-Cu), 943m, 689s, 589m, 543s v(Au-N), 505m, 449m, 427m, 327m v(AuP), 250w. ’H NMR (DMF-úř7, ppm): δ (SiMe4) 8,43 (s, C8H, 1H), 7,67-7,23 (m, PPh3,15H), 6,25 (m, C11H, 1H), 5,49 (d, C12Ha, 1H), 5,27 (d, C12Hb, 1H), 5,24 (d, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-J7, ppm): (SiMe4) 160,54 (C6), 155,02 (C4), 154,31 (C2), 149,15 (C8), 136,28-130,01 (PPh3), 133,51 (Cil), 120,89 (C5), 118,52 (02), 66,75 (CIO).
-9CZ 27032 Ul
[Au(L9)(PPh3)] (9): Výtěžek: 43 %, Elementární složení C3oH23N40PC1Au (HL9 = 2-chlor-<96benzylhypoxantin): vypočtené C: 50,12; H: 3,22; N: 7,79; získané: C: 50,43; H: 3,36; N: 7,52 %.
ESI+ MS (methanol, m/zý 301 (vyp. 301) [HL9+K+], 723 (vyp. 723) [M-C1'+H++K+]. IR (vatr/chí1): 3095m v(C-H)ar, 2892m, 1597s v(C=N)ar, 1436m v(C=C)ar, 1355m, 1297s v(C6-O), 1087m v(O-Cn), lOOlw, 692m, 581w, 542s v(Au-N), 506m, 458w, 442w, 328w v(Au-P). *H NMR (DMF-ďz, ppm): δ (SiMe4) 8,23 (s, C8H, 1H), 7,83-7,65 (m, PPh3, 15H), 7,56-7,38 (m, Phhypoxantin, 5H), 5,49 (s, Cl OH, 2H). 13C NMR (DMF-č/7, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 159,59 ío (C4), 155,49 (C2), 150,13 (C8), 135,46-130,73 (PPh3), 129,75-129,13 (Ph-hypoxantin), 117,78 (C5), 70,18 (CIO).
Příklad 2: Molekulové struktury komplexů [Au(Li)(PPh3)] (1) a [Au(L3)(PPh3)] (3), HL] = 06ethylhypoxantin a HL3 = Ó6-allylhypoxantin, stanovené za využití monokrystalové rentgenové strukturní analýzy, kde krystalografické parametry jsou uváděny v jednotkách Á, pro které platí převodní vztah: 1 Á = ÍO10 m
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L!)(PPh3)] (1): mřížkové parametry: a 10,3007(2) Á, b 10,8432(2) Á, c 11,3338(2) Á, a 103,9686(14)°,^ 97,5474(13)°, γ 109,9333(15)°, prostorová grupa: P-l, vazebné délky: Aul-N9 2,048(2) Á, Aul-PÍ 2,234(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 172,730(11)° (viz obrázek 4).
- 10CZ 27032 Ul
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L3)(PPh3)] (3): mřížkové parametry: a 10,4415(3) Á, b 11,0883(2) A), c 11,1500(2) A, a 102,6310(15)°, β 111,338(2)°, γ 97,4988(18)°, prostorová grupa: PA, vazebné délky: Aul-N9 2,042(2) Á, Aul-PÍ 2,236(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 175,651(12)° (viz obrázek 5).
Příklad 3: In vitro cytotoxická aktivita komplexů zlata v oxidačním stavu +1 a derivátů hypoxantinu HL1.9 na lidské leukémické linii THP-1
Před určením in vitro protizánětlivé aktivity připravených komplexů zlata(I) byla stanovena in vitro cytotoxicita u lidských leukémických buněk THP-1 použitím WST-1 testu. Během tohoto testu živé (metabolicky aktivní) buňky redukují červené barvivo 4-[3-(4-jodfenyl)-2-(4-nitrofe10 nyl)-2H-5-tetrazolio]-l,3-benzendisulfonát (WST-1) na žlutý formazan. Tato reakce je řízená mitochondriálním enzymem sukcinát-tetrazolium reduktasou, který je aktivní pouze v živých buňkách. Množství vzniklého formazanu je přímo úměrné množství metabolicky aktivních buněk v médiu a může být kvantitativně zjištěno měřením absorbance spektrofotometricky. THP-1 buněčná linie byla kultivována v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným
2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (lOOU/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Pro účely stanovení vlastní cytotoxické aktivity byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml v kultivačním médiu RPMI 1640 (viz výše), které neobsahovalo bovinní sérum. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-jamkové mikrotitrační destičky. Testované zlatné komplexy a ligandy byly nejprve rozpuštěny v dimethylsulfoxidu, a pak naředěny do koncentrace 10 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Zásobní roztoky byly před každým testováním 10x zředěny kultivačním médiem bez séra a 1 μΐ tohoto roztoku byl přidán k buněčné suspenzi. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO2. Poté byl přidán roztok WST-1 a následovala inkubace po dobu 45 minut. Vzniklý formazan byl kvantifiko25 ván spektrofotometricky (Synergy HT, BioTek) při 440 nm a referenční vlnové délce 630 nm.
Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50 % nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v Tabulce 1.
Tabulka 1: Výsledky in vitro cytotoxicity komplexů 1 až 9 a derivátů hypoxantinu HLi až HL9 vůči lidské leukémické linii THP-1. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách inhibiční koncentrace IC50±SE (μΜ) a porovnány s Auranofmem jako zvoleným standardem.
IC50 ± SE
Testovaná látka [AuíMXPPhg)] (1) [Au(L2)(PPh3)] (2) [Au(L3)(PPh3)] (3) [Au(L4)(PPh3)] (4) [Au(L5)(PPh3)](5) [Au(L6)(PPh3)] (6) [Au(L7)(PPh3)] (7) [Au(L8)(PPh3)] (8) [Au(L9)(PPh3)] (9)
Auranofin HL,
HL2 hl3
Hl_4 hl5
THP-1
1,17±0,04 1,03±0,04 1,87±0,09 2,15±0,19 1,89±0,11 1,94+0,12 1,97±0,14 5,28+0,21 >10
0,88+0,04 >10 >10 >10 >10 >10
- 11 CZ 27032 Ul
hl6 >10
hl7 >10
hl8 >10
hl9 >10
HLi = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = 06-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-č?6-methylhypoxantin; HL7 = 2chlor-O6-butylhypoxantin; HL8 = 2-chlor-O6-allylhypoxantin; HL9 = 2-chlor-O6-benzylhypoxantin.
Příklad 4: Stanovení vlivu testovaných komplexů zlata v oxidačním stavu +1 na sekreci vybraných prozánětlivých cytokinů (TNF-α a IL-1/?) ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity testovaných komplexů zlata byly použity buňky podobné makrofágům odvozené z lidské buněčné linie THP-1. Buňky THP-1 byly kultivovány v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) (tzv. kompletní médium) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Za účelem diferenciace byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96ti jamkové mikrotitrační destičky. Diferenciace byla zpuštěna přidáním 1 μΐ 5 pg/ml 12-O-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu rozpuštěného v 5% DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Diferencované buňky adherovaly na dno kultivační láhve. Médium s nediferencovanými buňkami bylo odsáto a nahrazeno čerstvým kompletním RPMI 1640 médiem bez 12-D-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu. Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin. Poté bylo odsáto kultivační médium, buňky byly promyty fosfátovým pufrem (pH=7,4) a bylo k nim přidáno 100 μΐ kompletního kultivačního média bez bovinního séra; takto byly buňky inkubovány dalších 24 hodin. Takto připravené makrofágům podobné buňky byly použity na testování protizánětlivé aktivity, která byla stanovena na základě určení vlivu testovaných Au(I) komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/?. K diferencovaným buňkám THP-1 v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) bylo přidáno 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Dále byl k buňkám přidán 1 μΐ 100 pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Po této inkubaci bylo odebráno kultivační médium, ve kterém se po centrifugaci stanovil obsah prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? metodou ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání. Výsledky (viz Tabulka 2, Obrázek 6, Obrázek 7) byly srovnány s Auranofinem a vehikulem (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS).
V Tabulce 2 jsou uvedeny koncentrace prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? stanovené po inkubaci LPS-stimulovaných makrofágů THP-1 buněk s testovanými komplexy.
-12CZ 27032 Ul
Tabulka 2: Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity komplexů 1 až 7 ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)). Výsledky jsou
vyjádřeny v ním médiu hodnotách koncentrace c±SE (pg/ml) příslušeného cytokinů v kultivač-
Testovaná látka c ± SE (pg/ml) c ± SE (pg/ml)
TNF-a IL-1JS
[AuíLOíPPMKD 57651367 353,4132,6
[Au(L2)(PPh3)] (2) 4496+325 237,1+61,0
[Au(L3)(PPh3)] (3) 57451418 250,9+11,2
[Au(L4)(PPh3)] (4) 3516+255 238,6+33,5
[Au(L5)(PPh3)] (5) 55631620 270,3147,0
(Au(L6)(PPh3)] (6) 62001676 284,9141,5
[Au(L7)(PPh3)] (7) 47931536 220,2+22,3
Auranofin 52541499 210,519,1
vehikulum 88041392 703,2165,1
HLi = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = 06-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = (96-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; HL7 = 2chlor-ú6-butylhypoxantin.
ío Příklad 5: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1 -β ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinů TNF-α a genů prozánětlivého cytokinů IL-l/ř. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán μΐ 100 pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111 :B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Následně bylo inkubační médium 20 odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komerčně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptasy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese TNF-α po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou AACT.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L7)(PPh3)] (7) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1-/?(HL2 = 06butylhypoxantin, HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin). Statistická analýza byla provedena pro30 gramem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání (Tabulka 3, Obrázek 8, Obrázek 9)·
- 13 CZ 27032 U1
Tabulka 3: Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity ukazující výslednou transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1-/? ovlivněnou studovanými komplexy 2 a 7 ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Testovaná látka genová transkripce (A.U.± SE) TNF-σ genová transkripce (A.U.± SE) IL-1/J
[Au(L2)(PPh3)] (2) 46,37±1,78 2,21 ±0,43
[Au(L7)(PPh3)] (7) 42,67±0,78 2,34±0,46
Auranofin 43,59±4,86 2,26+0,20
vehikulum 79,72±8,44 4,20±0,56
HL2 = 06-butylhypoxantin, HL7 - 2-chlor-O6-butylhypoxantin.
Příklad 6: In vitro cytotoxická aktivita Au(I) komplexů na vybraných lidských nádorových liniích
Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity připravených Au(I) komplexů byl použit MTT test, což je mikrotitrační metoda, která hodnotí životaschopnost buněk na základě redukce 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) na modré formazanové barvivo. K této redukci dochází pouze v živých buňkách, jejichž poěet tak odpovídá množství zredukovaného MTT, takže lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek.
V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenas. Vznikající formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO na klasickém spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: osteosarkom (HOS), prsní adenokarcinom (MCF7), karcinom plic (A549), maligní melanom (G361), karcinom děložního čípku (HeLa), karcinom vaječníků (A2780), karcinom vaječníků rezistentní na cisplatinu (A2780R) a karcinom prostaty (22Rvl). Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A549, Hela, HOS, MCF7, v RPMI-1610 médiu (2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A2780, A2780R, LNCaP a v McCoy's médiu (2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 gg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury G361. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO2 po dobu 24 hodin. Testované látky byly nejprve rozpuštěny v A/N-dimethylformamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny 1000* v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0 až 50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5 % CO2. Poté byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT fozmazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.
V Tabulce 4 jsou uvedeny inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ).
-14CZ 27032 Ul
Tabulka 4: Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 4 až 6 a derivátů hypoxantinu HL4 až HL6 stanovené pomocí MTT testu a vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace IC50±SE (μΜ), a jejich porovnání s cisplatinou jako zvoleným standardem
ICsofSE (μΜ)
Testovaná látka MCF7 HOS A549 G361 HeLa A2780 A2780R 22RV1
[AuťUXPPha)] (4) 3 7*1 4 11,3*2,0 16,8*2,1 3,9*1,5 14,2*1,5 3,6*0,4 5,3*1,1 3,8*0,4
[Au(L5)(PPh3)] (5) 6,3*2,4 6,6*2,9 19,3*2,5 3,4*0,2 19,8*2,8 4,2*0,7 5,2*1,0 4,4*0,8
[Au(L,XPPh3)] (6) 5,2*2 1 4,0*0,9 21,7*1,1 3,0*0,4 21,6*1,0 4,2*1,0 5,0*0,9 3,6*0,2
cisplatina 17,9*3,5 20,5*0,3 >50 5,3*0,7 >50 21,6*0,6 20,0*4,7 26,9*3,5
HL, >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL5 >25 >25 >25 >25 >25 >25 >25 >25
HLe >25 >25 >25 >25 >25 >25 >25 >25
HL4 = O6-benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; MCF7 = lidský prsní adenokarcinom; HOS = lidský osteosarkom; A549 = lidský karcinom plic; G361 = lidský maligní melanom; HeLa = lidský karcinom děložního čípku; A2780 = lidský karcinom vaječníků; A2780R = lidský karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině', 22Rvl = lidský karcinom prostaty.

Claims (4)

1. Komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin-6(97/)-onu) a s deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)j a vyjádřený strukturním vzorcem II, kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent Rl je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen,
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,
- 15 CZ 27032 Ul
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
2. Krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II podle nároku 1, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)]-«5o/v, ve kterém jsou
- L a PR3 definovány v nároku 1,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, ΛζΥ'-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.
4. Farmakologický prostředek podle nároku 3 pro použití pro léčbu zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčbu adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
CZ2014-29548U 2014-05-12 2014-05-12 Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii CZ27032U1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) 2014-05-12 2014-05-12 Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) 2014-05-12 2014-05-12 Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ27032U1 true CZ27032U1 (cs) 2014-06-10

Family

ID=50977289

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) 2014-05-12 2014-05-12 Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ27032U1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Colina-Vegas et al. Half sandwich Ru (II)-acylthiourea complexes: DNA/HSA-binding, anti-migration and cell death in a human breast tumor cell line
AU2015205885B2 (en) Novel 7-deazapurine nucleosides for therapeutic uses
Zhang et al. Synthesis, molecular modeling and biological evaluation of chalcone thiosemicarbazide derivatives as novel anticancer agents
CN103153983B (zh) 结晶形((r)-(e)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-二氯吡啶-4-基)乙氧基)-1h-吲唑-3-基)乙烯基)-1h-吡唑-1-基)乙醇及其作为fgfr抑制剂的用途
Pevet et al. Synthesis and pharmacological evaluation of thieno [2, 3-b] pyridine derivatives as novel c-Src inhibitors
EP3237420B1 (en) Erk inhibitors
Liu et al. Hybridization-based discovery of novel quinazoline-2-indolinone derivatives as potent and selective PI3Kα inhibitors
HUE033482T2 (en) CDC7 inhibitors
Gibadullina et al. New 2, 6-diaminopyridines containing a sterically hindered benzylphosphonate moiety in the aromatic core as potential antioxidant and anti-cancer drugs
Liu et al. GLUT1-mediated selective tumor targeting with fluorine containing platinum (II) glycoconjugates
Sun et al. Design, synthesis and biological evaluation of benzoylacrylic acid shikonin ester derivatives as irreversible dual inhibitors of tubulin and EGFR
Anbar et al. Evaluation of sulfonate and sulfamate derivatives possessing benzofuran or benzothiophene nucleus as inhibitors of nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases and anticancer agents
CZ305585B6 (cs) Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii
El Malah et al. Click synthesis of novel 6-((1 H-1, 2, 3-triazol-4-yl) methyl)-6 H-indolo [2, 3-b] quinoxalines for in vitro anticancer evaluation and docking studies
Bravo et al. Phenyl-guanidine derivatives as potential therapeutic agents for glioblastoma multiforme: catalytic syntheses, cytotoxic effects and DNA affinity
El Malah et al. Click chemistry-based synthesis of new 1, 2, 3-triazolo-benzoquinoline-3-carbonitriles: anticancer screening and DFT studies
Luo et al. Discovery of 3-(2-aminobenzo [d] thiazol-5-yl) benzamide derivatives as potent anticancer agents via ROR1 inhibition
Song et al. Synthesis and bioactivity of novel xanthone and thioxanthone L-rhamnopyranosides
CZ27032U1 (cs) Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii
Al-Sahaly et al. Synthesis, Molecular Docking and Anticancer Activity of New Substituted Pyridine-1, 2, 3-Triazole Hybrid N-glycosides Via Click Chemistry
Hajlaoui et al. Novel 1, 2, 3-triazole linked chromene hybrids: microwave-assisted synthesis, cytotoxic activity, α-amylase inhibitory potential, molecular docking analysis, and in-silico ADMET profiling
CN104987356A (zh) 一种熊果酸-糖酵解抑制剂dca偶联物及其应用
Sun et al. Novel 7-formyl-naphthyridyl-ureas derivatives as potential selective FGFR4 inhibitors: Design, synthesis, and biological activity studies
US20180344862A1 (en) Cytisine-linked isoflavonoid antineoplastic agents for the treatment of cancer
Vecchio et al. Highly selective metal mediated ortho-alkylation of phenol. First platinum containing organometallic chromane analogues

Legal Events

Date Code Title Description
FG1K Utility model registered

Effective date: 20140610

MK1K Utility model expired

Effective date: 20180512