CZ27032U1 - Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii - Google Patents
Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii Download PDFInfo
- Publication number
- CZ27032U1 CZ27032U1 CZ2014-29548U CZ201429548U CZ27032U1 CZ 27032 U1 CZ27032 U1 CZ 27032U1 CZ 201429548 U CZ201429548 U CZ 201429548U CZ 27032 U1 CZ27032 U1 CZ 27032U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- substituted
- cycloalkyl
- carbon
- gold
- complexes
- Prior art date
Links
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims description 81
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical class O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 21
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims description 15
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 8
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 title claims description 8
- 150000003002 phosphanes Chemical class 0.000 title claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 20
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 18
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 9
- -1 cycloheteroalkyl Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 7
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 claims description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 6
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000005346 substituted cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001301 oxygen Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 claims description 3
- 150000003003 phosphines Chemical class 0.000 claims description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000023913 breast extraskeletal osteosarcoma Diseases 0.000 claims 1
- 201000002858 breast osteosarcoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 19
- AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M auranofin Chemical compound CCP(CC)(CC)=[Au]S[C@@H]1O[C@H](COC(C)=O)[C@@H](OC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 229960005207 auranofin Drugs 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 15
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 14
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 13
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 13
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 13
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 11
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 7
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 4
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012982 x-ray structure analysis Methods 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 150000002344 gold compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical class [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical class C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1CC2(O)C(C=C(CO)CC3(O)C2C=C(C)C3=O)C4C(C)(C)C14OC(=O)C FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWYAFKLJNVXYJO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethyl)-1,7-dihydropurin-6-one Chemical compound C1(=CC=CC=C1)CCC=1NC(C=2NC=NC=2N=1)=O QWYAFKLJNVXYJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KNOYESMHZQNCOK-UHFFFAOYSA-N 2-benzyl-3,7-dihydropurin-6-one Chemical compound N1C=2N=CNC=2C(=O)N=C1CC1=CC=CC=C1 KNOYESMHZQNCOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RPVDWHOGJOXVJK-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-3,7-dihydropurin-6-one Chemical compound O=C1NC(CC)=NC2=C1NC=N2 RPVDWHOGJOXVJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M Aurothioglucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](S[Au])[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N O6-benzylguanine Chemical compound C=12NC=NC2=NC(N)=NC=1OCC1=CC=CC=C1 KRWMERLEINMZFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005524 O6-benzylguanine Drugs 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] Chemical compound [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229960001799 aurothioglucose Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N butanedioate;1h-tetrazol-1-ium Chemical compound [NH2+]1C=NN=N1.[NH2+]1C=NN=N1.[O-]C(=O)CCC([O-])=O OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K disodium aurothiomalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(S[Au])C([O-])=O VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001413 far-infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 230000031539 regulation of cell division Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229960001315 sodium aurothiomalate Drugs 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Předložené technické řešení spadá do oblasti léčiv a týká se komplexů zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití jako léčiv v protizánětlivé terapii a v léčbě nádorových onemocnění, zejména pak adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Dosavadní stav techniky
Strukturně lineární komplexy zlata v oxidačním stavu +1 představují významnou skupinu biologicky aktivních látek, z nichž již pět zástupců je v moderní medicíně komerčně využíváno k léčbě zánětlivých onemocnění, jako je například revmatoidní artritida. Ve Spojených státech amerických jsou užívanými protizánětlivými léčivy sodná sůl 2-merkaptobutandiolatozlatného komplexu (natrium-aurothiomalát, vzorec A) a komplex ((25,35,47?,55)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný (aurothioglukosa, vzorec B). Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech GB 421989, US 4599436, WO 20100091381, GB 293363, GB 397293 nebo GB 398020.
V Evropě jsou navíc používány zlatné sloučeniny sodná sůl bis(thiosulfato)zlatného komplexu (vzorec C) a sodná sůl 2-hydroxy-3-merkaptopropan-l-sulfonatozlatného komplexu (natriumthiopropanolsulfonát, vzorec D). Tyto látky jsou souhrnně označovány jako thioláty zlatné a jedná se o iontové, ve vodě rozpustné sloučeniny, které kromě bis(thiosulfato)zlatnanového aniontu obsahují polymemí komplexní anionty, přičemž ve všech sloučeninách je zlato lineárně koordinované dvěma atomy síry. Tato léčiva jsou podávána injekčně. Příklady jejich přípravy a uplatnění v protizánětlivé terapii jsou uvedeny v dokumentech US 4657763, GB 246809, GB 261048 nebo FR 2591106.
3Na+
SO3
S—Au—S' o3s'
Au—S
OH
SO3 Na+
Nejpozději, a to v 80. letech 20. století, bylo do klinické praxe uvedeno strukturně odlišné protizánětlivé léčivo Auranofin, 3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2-thiolatotriethylfosfan)zlatný komplex (vzorec E), což je jednojademý neutrální lipofilní komplex, který podobně
-1 CZ 27032 U1 jako výše zmíněná léčiva obsahuje S-donorový ligand, ale liší se přítomností organického derivátu fosfanu koordinujícím se přes atom fosforu. Příprava Auranofinu je popsaná v patentových spisech US 4200738, US 4115642, US 4125711, US 4125710, US 4122254, US 4133952 nebo US 4131732 a jeho terapeutické využití je popsáno ve spise WO 2010091381. Výhodou Auranofinu oproti výše uvedeným iontovým sloučeninám zlata uvedených ve vzorcích A až D je to, že jej lze podávat orálně.
Předložené Au(I) komplexy lze podobně jako Auranofin zařadit mezi jednojademé neutrální komplexy obsahující derivát fosfanu koordinovaný na zlato přes atom fosforu. Liší se ale druhým ligandem, kterým je A-donorová organická molekula odvozená od hypoxantinu, tj. 1 A-purin6(9A)-on. Předmětné komplexy navazují na vysoce protizánětlivě aktivní zlatné komplexy s různými A-donorovými ligandy odvozenými od purinu a deriváty fosfanu popsané v patentovém spise CZ 303649, publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568. Je zde nutné zdůraznit, že podobně jako u jiných systémů obsahujících organickou molekulu koordinovanou na přechodný kov, bylo i u komplexů zlata(I) obsahujících A-donorový ligand odvozený právě od 6benzylaminopurinu jednoznačně prokázáno, že i velmi malá strukturní změna v molekule organického ligandu může vést k velmi výrazné modifikaci biologické aktivity nebo k jejímu úplnému vymizení (J. Hošek et al. PlosONE 8, 2013, e82441). Vlastnosti koordinované organické molekuly a způsob její koordinace na atom zlata totiž výrazně ovlivňují biodistribuci celého komplexu, neboť různý způsob koordinace a substituce na základním skeletu mohou vést ke změnám v afinitě k biomolekulám a cílovým receptorům, průchodnosti biomembránami, tedy ke změnám, které se projeví ve výsledné biologické aktivitě. Proto nelze jednoznačně predikovat, jaké Au(I) komplexy uvedeného strukturního typu budou vykazovat ten či onen typ biologické aktivity.
Komplexní sloučeniny zlata v oxidačním stavu +1 jsou studovány nejen pro své prokázané proti zánětlivé účinky aplikované v praxi, ale v posledních desetiletích jsou předmětem bioanorganického výzkumu i pro svou potenciální protinádorovou aktivitu. Studie prokazující antitumorové působení Auranofinu in vitro na buněčných liniích děložního čípku HeLa (T. M. Simon et al. Cancer 44, 1979, 1965) a melanomu B16 a in vivo vůči leukémickým buňkám myší buněčné linie P388 (C. K. Mirabelli et al. Cancer Res. 45, 1985, 32) vedly k širšímu zkoumání protinádorové aktivity analogů Auranofinu (patentový spis WO 2012142615). Předmětem studia byly i Au(I) komplexy obsahující chromofor AuNP, kdy byla prokázána antitumorová aktivita u komplexů s deriváty fosfanu a A-donorovými heterocyklickými ligandy, jako například imidazol, pyrazol nebo deriváty 9-deazapurinu, jak je popsáno v publikacích R. Gallassi et al. Dalton Trans. 41, 2012, 5307; M. Serratrice et al. Inorg. Chem. 51, 2012, 3161; C. Abbehausen et al. Inorg. Chem. 52, 2013, 11280. Ovšem podobně jako v případě protizánětlivě aktivity, tak u protinádorového působení komplexů zlata v oxidačním stavu +1 také není doposud jednoznačně prokázán mechanismus účinku těchto sloučenin a definovány vztahy mezi strukturou a biologickou aktivitou u této skupiny látek. Není také možné teoreticky předpokládat terapeutickou účinnost nebo neúčinnost určitého strukturního typu zlatných komplexů, tedy není možné předem, bez provede-2CZ 27032 Ul ní patřičných experimentů, definovat kvalitativní ani kvantitativní vztah mezi strukturou a biologickou aktivitou.
Předložené zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu představují v literatuře doposud nepopsanou skupinu biologicky aktivních komplexů zlata.
Různě substituované deriváty hypoxantinu jsou studovány jako rostlinné růstové regulátory (patentový spis WO 2005107472 Al), dále také jako velmi účinné inhibitory cyklin dependentních kinas (patentové spisy WO 9902162) a 06-alkylguanin-DNA-alkyltransferas (AGT) (patentové spisy US 5352669, US 5691307, US 5958932, WO 2004031405, WO 2011028507), což jsou enzymy hrající klíčové role v regulaci procesů spojených s dělením buněk. Zástupce těchto látek, to 2-amino-O6-benzylhypoxantin (O6-benzylguanin) je v současné době v II. fázi klinických testů jako AGT inhibitor, konkrétně jako látka navyšující účinnost vybraného chemoterapeutika (temozolomidu, tj. 4-methyl-5-oxo-2,3,4,6,8-pentazabicyklo[4.3.0]nona-2,7,9-trien-9-karboxamid) pro léčbu maligního gliomu (J. A. Quinn et al. J. Clin. Oncol. 27, 2009, 1262). Příprava, charakterizace a biologická aktivita těchto látek je mimo zmíněné patentové spisy popsána například v publikacích R. W. Balsiger et al. J. Org. Chem. 25, 1960, 1573; Μ. Y. Chae et al. J. Med. Chem. 31, 1994, 342; R. S. McElhinney et al. J. Med. Chem. 41, 1998, 5265; C, A. Arris et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 2797; F. Seela et al. Helvetica Chim. Acta 81, 1998, 2244; T. G. Davies et al. Nátuře Struct. Biol. 9, 2002, 745; A. E. Gibson et al. J. Med. Chem. 45, 2002, 3381; R. J. Griffin et al. J. Med. Chem. 43, 2000, 4071; I. R. Hardcastle et al. J. Med. Chem. 47, 2004, 3710; T. E.
Spratt et al. Biochem. 31, 1992, 3689; R. Schirrmacher et al. Curr. Org. Synth. 2, 2005, 215;
Podstata technického řešení
Podstatou technického řešení jsou komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin-6(977)-onu) a s deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)j a vyjádřené strukturním vzorcem II,
R2
Au
L-Au-PR3 \
pr3
J kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent Rl je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen,
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, 35 substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl,
-3CZ 27032 Ul kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
Další podstatou technického řešení jsou krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)]-h5’o/v, ve kterém
- L a PR3 jsou definovány výše,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot především 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, Α,/V-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
Nedílnou podstatou technického řešení je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami pro použití v lékařství, zejména pro použití pro terapii zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, a to zejména pro léčbu adenokarcinomu prsu a/nebo
-4CZ 27032 Ul osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Přehled obrázků na připojených výkresech
Konkrétní příklady provedení technického řešení jsou doloženy připojenými výkresy, kde:
- Obr. 1 je infračervené spektrum komplexu [Au(L6)(PPh3)j (6) naměřené v oblasti 400 až 4000 cm'1; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin
- Obr. 2 je infračervené spektrum komplexu [Au(Li)(PPh3j] (1) naměřené v oblasti 200 až 600 cm'1; HLi = O6-ethylhypoxantin
- Obr. 3 je ’H NMR spektrum komplexu [Au(L9)(PPh3)j (9) rozpuštěného v DMF-í/7; HL9 = 2chlor-06-benzylhypoxantin
- Obr. 4 je molekulová struktura komplexu [Au(Li)(PPh3)j (1) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL] = 06ethylhypoxantin
- Obr. 5 je molekulová struktura komplexu [Au(L3)(PPh3)j (3) vyřešená užitím monokrystalové rentgenové strukturní analýzy; vodíkové atomy nejsou pro přehlednost zobrazeny; HL3 = 06allylhypoxantin
- Obr. 6 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(Lj)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)j (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)] (5), [Au(L6)(PPh3)j (6) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL] = 06-ethylhypoxantin; HL2 = (96-butylhypoxantin; HL3 = (96-allylhypoxantin; HL4 = (96-benzylhypoxantin; HL5 = 06fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-(96-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
- Obr. 7 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(Lj)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)j (3), [Au(L4)(PPh3)j (4), [Au(L5)(PPh3)j (5), [Au(L6)(PPh3)j (6) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů IL-l/J a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL! = (96-ethylhypoxantin; HL2 = (96-butylhypoxantin; HL3 = O6-allylhypoxantin; HL4 = (96-benzylhypoxantin; HL5 = 06fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-(96-methylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
- Obr. 8 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů TNF-a a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01)
- Obr. 9 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)j (2) a [Au(L7)(PPh3)j (7) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivých cytokinů IL-1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 06butylhypoxantin; HL7 = 2-chlor-O6-butylhypoxantin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05).
Příklady provedení technického řešení
V následující části je technické řešení doloženo, nikoli však limitováno, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah technického řešení je pak jednoznačně definován nároky na ochranu.
-5CZ 27032 Ul
V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálněchemickými metodami:
- elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),
- infračervená spektroskopie, kde byly oblasti 200 až 600 cm1 (far-IR) a 400 až 4000 cm'1 (midIR) provedeny technikou ATR (Nexus 670 FT-IR, Thermo Nicolet),
- hmotnostní spektrometrie provedená ESI+ technikou (LCQ Fleet, ThermoScientific),
- ID a 2D nukleární magnetická rezonance - 'H, 13C, ’Η-'Η gs-COSY, 'H-^C gs-HMQC, 'H-^C gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spektrometr, Varian),
- monokrystalová rentgenová strukturní analýza (difraktometr Xcalibur2+CCD detektor Sapphire2, Oxford Diffraction).
Příklad 1: Příprava a charakterizace komplexů zlata(I) s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanu
Zlatné komplexy s deriváty hypoxantinu a trifenylfosfanu byly syntetizovány za použití modifikovaného postupu popsaného v patentovém spisu CZ 303 649 a v publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568.
[Au(Lj)(PPh3)] (1): Výtěžek: 81 %, Elementární složení C25H22N4OPAU (HLi = 06ethylhypoxantin): vypočtené C: 48,24; H: 3,56; N: 9,00; získané: C: 47,78; H: 3,61; N: 9,44 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 187 (vyp. 187) [HL,+Na]+, 623 (623) [M+H]+. IR (vATR/cm ’): 3055w v(C-H)ar, 2980m v(C-H)al, 2917m v(C-H), 2848w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1549m, 1454m v(O-CH2), 1433s v(C=C)ar, 1377m, 1334m, 1318m v(C6-O), 1302m, 1175m, 1136m, IlOOs v(OC10), 585m, 544s v(Au-N), 498s, 448m, 328m v(Au-P). 'H NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 8,45 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,61 (q, C10H, 2H), 1,41 (t, C11H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 159,59 (C6), 158,43 (C4), 150,96 (C2), 146,41 (C8), 134,56-128,75 (PPh3), 119,92 (C5), 62,46 (CIO), 14,45 (Cil).
[Au(L2)(PPh3)] (2): Výtěžek: 83 %, Elementární složení C27H26N4OPAu (HL2 = 06butylhypoxantin): vypočtené C: 49,86; H: 4,03; N: 8,61; získané: C: 49,43; H: 4,02; N: 8,31 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 215 (vyp. 215) [HL2+Na+], 651 (vyp. 651) [M+H+], IR (vATO/cm’): 3048w, 2953m, 293 lm, 2869m, 1599s, 1540m, 1434s, 1367m, 1330m v(C6-O), 1277w, 1204w, 1099s v(O-C10), 751m, 690m, 584w, 542s v(Au-N), 499s, 443m, 400m, 327m v(Au-P). 'H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,46 (s, C2H, 1H), 8,36 (s, C8H, 1H), 7,70 (m, PPh3, 15H), 4,57 (m, Cl OH, 2H), 1,80 (q, C11H, 2H), 1,48 (sx, C12H, 2H), 0,92 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-fy, ppm): δ (SiMe4) 160,46 (C6), 151,10 (C2), 146,13 (C8), 135,20-129,60 (PPh3), 119,66 (C5), 67,91 (CIO), 30,52 (Cil), 20,04 (02), 14,41 (03).
-6CZ 27032 UI
[Au(L3)(PPh3)] (3): Výtěžek: 65 %, Elementární složení C26H22N4OPAU (HL3 = 06allylhypoxantin): vypočtené C: 49,22; H: 3,50; N: 8,83; získané: C: 48,89; H: 3,62; N: 8,35 %.
ESI+ MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL3+Na]+, 635 (635) [M+H]+. IR (vA™/cm''): 3056w ν(0-Η)„, 2959w, 2806w vs(O-CH2), 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1474w v(O-CH2), 1432s v(C=C)ar, 1300m v(C6-O), 1175m, 1133m, 1099s v(O-Cn), 989m, 746m, 690m, 643m, 584m, 543s v(AuN), 496s, 45lm, 433m, 396w, 326m v(Au-P), 253w. ]H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,41 (s, C2H, 1H), 8,27 (s, C8H, 1H), 7,78-7,07 (m, PPh3, 15H), 6,14 (m, C11H, 1H), 5,45 (d, C12Ha,
1H), 5,20 (d, C12Hb, 1H), 5,12 (d, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-ď7, ppm): δ (SiMe4) 159,05 (C6), 153,44 (C4), 150,00 (C2), 148,21 (C8), 135,43-129,49 (PPh3), 134,00 (Cil), 118,30 (C5), 117,54 (C12), 66,79 (CIO).
[Au(L4)(PPh3)] (4): Výtěžek: 72 %, Elementární složení C30H24N4OPAu (HL4 = 06benzylhypoxantin): vypočtené C: 52,64; H: 3,53; N: 8,19; získané: C: 52,74; H: 3,36; N: 7,95 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 249 (vyp. 249) [HL4+Na]+, 685 (685) [M+Hf. IR (vATR/cm’'): 3048m, 3069m, 3007m, 2934m, 2850m, 2806m v(C-H)ab 1657s, 1578s 1434n, 1359m, 1274s v(C6-O), 1185m, 1102m v(O-C„), 1055m, 942w, 748w, 689m, 578m, 543s v(Au-N), 510m, 496s, 451m,
442m, 433m, 395w, 371m, 327w v(Au-P), 275w. *H NMR (DMF-c/7, ppm): δ (SiMe4) 8,56 (s,
C2H, 1H), 8,50 (s, C8H, 1H), 7,72 (m, PPh3, 15H), 7,55-7,38 (m, Ph-hypoxantin, 5H), 5,46 (s, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-</7, ppm): δ (SiMe4) 159,92 (C6), 159,19 (C4), 154,83 (C2), 148,85 (C8), 135,39-130,30 (PPh3), 129,69-129,13 (Ph-hypoxantin), 69,57 (CIO).
-7CZ 27032 Ul
[Au(L5)(PPh3)] (5): Výtěžek: 57 %, Elementární složení C3iH26N4OPAu (HL5 = 06fenethylhypoxantin): vypočtené C: 53,30; H: 3,75; N: 8,02; získané: C: 52,91; H: 3,78; N:
7,71 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 263 (vyp. 263) [HL5+Na]+, 699 (699) [M+H]+. IR (vATR/cm'):
3056m v(C-H)ar, 2961m, 2796m v(C-H)ab 2581m, 1592s v(C=N)ar, 1548m, 1451m, 1434s v(C=C)ar, 1371m, 1335m, 1308s v(C6-O), 1260m, 1128m, 1099s v(O-Ci0), 997m, 958m, 798m, 744m, 689s, 582w, 545s v(Au-N), 500s, 450w, 436w, 329m v(Au-P), 255w. *H NMR (DMF-4 ppm): δ (SiMe4) 8,53 (s, C2H, 1H), 8,41 (s, C8H, 1H), 7,80-7,59 (m, PPh3, 15H), 7,53-7,30 (m,
Ph-hypoxantin, 5H), 5,49 (t, C10H, 2H), 3,52 (t, C11H, 2H). 13C NMR (DMFA ppm): δ (SÍMe4) 160,06 (C6), 159,26 (C4), 154,23 (C2), 148,62 (C8), 128,23-127,56 (Ph-hypoxantin), 119,57 (C5), 69,13 (CIO), 54,23 (Cl 1).
[Au(L6)(PPh3)] (6): Výtěžek: 75 %, Elementární složení C24Hi9N4OPClAu (HLé = 2-chlor-O6methylhypoxantin): vypočtené C: 44,84; H: 2,98; N: 8,72; získané: C: 44,97; H: 3,18; N: 9,16 %. ESI+ MS (methanol, m/z)·. 208 (vyp. 208) [HL6+Na]+, 643 (vyp. 643) [M+H]+. IR Mem ’): 3052w v(C-H)ar, 2979m v(CH3), 2900w v(C-H)al, 1593vs v(C=N)ar, 1533m, 1420s v(C=C)a„ 1371m, 1339s v(C6-O), 1291m, 1204s, 1118s v(O-C„), llOlm, 933m, 691s, 581m, 541s v(Au20 N), 513m, 500s, 456m, 449m, 423m, 346m v(Au-P), 256w. *H NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4)
-8CZ 27032 Ul
8,42 (s, C8H, 1H), 7,76-7,67 (m, PPh3, 15H), 4,56 (s, C10H, 3H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm): δ (SiMe4) 160,97 (C6), 157,52 (C4), 151,46 (C2), 148,25 (C8), 120,53 (C5), 64,17 (CIO).
[Au(L7)(PPh3)] (7): Výtěžek: 52 %, Elementární složení C27H25N4OPClAu (HL7 = 2-chlor-O6butylhypoxantin): vypočtené C: 47,35; H: 3,68; N: 8,18; získané: C: 47,65; H: 3,69; N: 7,84 %. ESI+ MS (methanol, m/z): 193 (vyp. 193) [HL7-C1+2H]+, 651 (651) [M+H]+. IR (vatr/ciii ’): 3052w, 2958m, 2870m v(C-H)ai, 1599s, 1533m, 1422m, 1370m, 1297m v(C6-O), 1202m, IlOOm v(O-Cn), 927m, 746m, 689m, 586w, 543s v(Au-N), 512m, 504s, 443w, 432w, 328w v(Au-P),
225w. ‘H NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 8,42 (s, C8H, 1H), 7,71 (m, PPh3, 15H), 4,56 (m,
C10H, 2H), 1,74 (q, C11H, 2H), 1,42 (sx, C12H, 2H), 0,84 (t, C13H, 3H). 13C NMR (DMF-J7, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 151,90 (C4), 150,13 (C2), 145,57 (C8), 135,40-129,49 (PPh3), 121,69 (C5), 66,96 (CIO), 30,02 (Cil), 20,16 (C12), 14,39 (C13).
[Au(L8)(PPh3)] (8): Výtěžek: 46 %, Elementární složení C26H2iN4OPC1Au (HL8 = 2-chlor-<96allylhypoxantin): vypočtené C: 46,69; H: 3,16; N: 8,38; získané: C: 46,32; H: 3,02; N: 8,68 %. ESP- MS (methanol, m/z): 199 (vyp. 199) [HL8+Na]+, 669 (vyp. 669) [M+H]+. IR (vatr/chi-1): 3057w v(C-H)ar, 2982m v(C-H)al, 1596vs v(C=N)ar, 1528m, 1432s v(C=C)ar, 1367m, 1299s v(C620 O), 1284m, lOOlm v(O-Cu), 943m, 689s, 589m, 543s v(Au-N), 505m, 449m, 427m, 327m v(AuP), 250w. ’H NMR (DMF-úř7, ppm): δ (SiMe4) 8,43 (s, C8H, 1H), 7,67-7,23 (m, PPh3,15H), 6,25 (m, C11H, 1H), 5,49 (d, C12Ha, 1H), 5,27 (d, C12Hb, 1H), 5,24 (d, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-J7, ppm): (SiMe4) 160,54 (C6), 155,02 (C4), 154,31 (C2), 149,15 (C8), 136,28-130,01 (PPh3), 133,51 (Cil), 120,89 (C5), 118,52 (02), 66,75 (CIO).
-9CZ 27032 Ul
[Au(L9)(PPh3)] (9): Výtěžek: 43 %, Elementární složení C3oH23N40PC1Au (HL9 = 2-chlor-<96benzylhypoxantin): vypočtené C: 50,12; H: 3,22; N: 7,79; získané: C: 50,43; H: 3,36; N: 7,52 %.
ESI+ MS (methanol, m/zý 301 (vyp. 301) [HL9+K+], 723 (vyp. 723) [M-C1'+H++K+]. IR (vatr/chí1): 3095m v(C-H)ar, 2892m, 1597s v(C=N)ar, 1436m v(C=C)ar, 1355m, 1297s v(C6-O), 1087m v(O-Cn), lOOlw, 692m, 581w, 542s v(Au-N), 506m, 458w, 442w, 328w v(Au-P). *H NMR (DMF-ďz, ppm): δ (SiMe4) 8,23 (s, C8H, 1H), 7,83-7,65 (m, PPh3, 15H), 7,56-7,38 (m, Phhypoxantin, 5H), 5,49 (s, Cl OH, 2H). 13C NMR (DMF-č/7, ppm): δ (SiMe4) 160,98 (C6), 159,59 ío (C4), 155,49 (C2), 150,13 (C8), 135,46-130,73 (PPh3), 129,75-129,13 (Ph-hypoxantin), 117,78 (C5), 70,18 (CIO).
Příklad 2: Molekulové struktury komplexů [Au(Li)(PPh3)] (1) a [Au(L3)(PPh3)] (3), HL] = 06ethylhypoxantin a HL3 = Ó6-allylhypoxantin, stanovené za využití monokrystalové rentgenové strukturní analýzy, kde krystalografické parametry jsou uváděny v jednotkách Á, pro které platí převodní vztah: 1 Á = ÍO10 m
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L!)(PPh3)] (1): mřížkové parametry: a 10,3007(2) Á, b 10,8432(2) Á, c 11,3338(2) Á, a 103,9686(14)°,^ 97,5474(13)°, γ 109,9333(15)°, prostorová grupa: P-l, vazebné délky: Aul-N9 2,048(2) Á, Aul-PÍ 2,234(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 172,730(11)° (viz obrázek 4).
- 10CZ 27032 Ul
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L3)(PPh3)] (3): mřížkové parametry: a 10,4415(3) Á, b 11,0883(2) A), c 11,1500(2) A, a 102,6310(15)°, β 111,338(2)°, γ 97,4988(18)°, prostorová grupa: PA, vazebné délky: Aul-N9 2,042(2) Á, Aul-PÍ 2,236(2) Á, vazebný úhel: N9-Aul-Pl 175,651(12)° (viz obrázek 5).
Příklad 3: In vitro cytotoxická aktivita komplexů zlata v oxidačním stavu +1 a derivátů hypoxantinu HL1.9 na lidské leukémické linii THP-1
Před určením in vitro protizánětlivé aktivity připravených komplexů zlata(I) byla stanovena in vitro cytotoxicita u lidských leukémických buněk THP-1 použitím WST-1 testu. Během tohoto testu živé (metabolicky aktivní) buňky redukují červené barvivo 4-[3-(4-jodfenyl)-2-(4-nitrofe10 nyl)-2H-5-tetrazolio]-l,3-benzendisulfonát (WST-1) na žlutý formazan. Tato reakce je řízená mitochondriálním enzymem sukcinát-tetrazolium reduktasou, který je aktivní pouze v živých buňkách. Množství vzniklého formazanu je přímo úměrné množství metabolicky aktivních buněk v médiu a může být kvantitativně zjištěno měřením absorbance spektrofotometricky. THP-1 buněčná linie byla kultivována v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným
2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (lOOU/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Pro účely stanovení vlastní cytotoxické aktivity byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml v kultivačním médiu RPMI 1640 (viz výše), které neobsahovalo bovinní sérum. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-jamkové mikrotitrační destičky. Testované zlatné komplexy a ligandy byly nejprve rozpuštěny v dimethylsulfoxidu, a pak naředěny do koncentrace 10 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Zásobní roztoky byly před každým testováním 10x zředěny kultivačním médiem bez séra a 1 μΐ tohoto roztoku byl přidán k buněčné suspenzi. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO2. Poté byl přidán roztok WST-1 a následovala inkubace po dobu 45 minut. Vzniklý formazan byl kvantifiko25 ván spektrofotometricky (Synergy HT, BioTek) při 440 nm a referenční vlnové délce 630 nm.
Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50 % nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v Tabulce 1.
Tabulka 1: Výsledky in vitro cytotoxicity komplexů 1 až 9 a derivátů hypoxantinu HLi až HL9 vůči lidské leukémické linii THP-1. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách inhibiční koncentrace IC50±SE (μΜ) a porovnány s Auranofmem jako zvoleným standardem.
IC50 ± SE
Testovaná látka [AuíMXPPhg)] (1) [Au(L2)(PPh3)] (2) [Au(L3)(PPh3)] (3) [Au(L4)(PPh3)] (4) [Au(L5)(PPh3)](5) [Au(L6)(PPh3)] (6) [Au(L7)(PPh3)] (7) [Au(L8)(PPh3)] (8) [Au(L9)(PPh3)] (9)
Auranofin HL,
HL2 hl3
Hl_4 hl5
THP-1
1,17±0,04 1,03±0,04 1,87±0,09 2,15±0,19 1,89±0,11 1,94+0,12 1,97±0,14 5,28+0,21 >10
0,88+0,04 >10 >10 >10 >10 >10
- 11 CZ 27032 Ul
| hl6 | >10 |
| hl7 | >10 |
| hl8 | >10 |
| hl9 | >10 |
HLi = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = 06-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-č?6-methylhypoxantin; HL7 = 2chlor-O6-butylhypoxantin; HL8 = 2-chlor-O6-allylhypoxantin; HL9 = 2-chlor-O6-benzylhypoxantin.
Příklad 4: Stanovení vlivu testovaných komplexů zlata v oxidačním stavu +1 na sekreci vybraných prozánětlivých cytokinů (TNF-α a IL-1/?) ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity testovaných komplexů zlata byly použity buňky podobné makrofágům odvozené z lidské buněčné linie THP-1. Buňky THP-1 byly kultivovány v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) (tzv. kompletní médium) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Za účelem diferenciace byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96ti jamkové mikrotitrační destičky. Diferenciace byla zpuštěna přidáním 1 μΐ 5 pg/ml 12-O-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu rozpuštěného v 5% DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Diferencované buňky adherovaly na dno kultivační láhve. Médium s nediferencovanými buňkami bylo odsáto a nahrazeno čerstvým kompletním RPMI 1640 médiem bez 12-D-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu. Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin. Poté bylo odsáto kultivační médium, buňky byly promyty fosfátovým pufrem (pH=7,4) a bylo k nim přidáno 100 μΐ kompletního kultivačního média bez bovinního séra; takto byly buňky inkubovány dalších 24 hodin. Takto připravené makrofágům podobné buňky byly použity na testování protizánětlivé aktivity, která byla stanovena na základě určení vlivu testovaných Au(I) komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/?. K diferencovaným buňkám THP-1 v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) bylo přidáno 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Dále byl k buňkám přidán 1 μΐ 100 pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Po této inkubaci bylo odebráno kultivační médium, ve kterém se po centrifugaci stanovil obsah prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? metodou ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání. Výsledky (viz Tabulka 2, Obrázek 6, Obrázek 7) byly srovnány s Auranofinem a vehikulem (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS).
V Tabulce 2 jsou uvedeny koncentrace prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? stanovené po inkubaci LPS-stimulovaných makrofágů THP-1 buněk s testovanými komplexy.
-12CZ 27032 Ul
| Tabulka 2: Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity komplexů 1 až 7 ukazující ovlivnění sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)). Výsledky jsou | ||
| vyjádřeny v ním médiu | hodnotách koncentrace c±SE (pg/ml) příslušeného cytokinů v kultivač- | |
| Testovaná látka | c ± SE (pg/ml) | c ± SE (pg/ml) |
| TNF-a | IL-1JS | |
| [AuíLOíPPMKD | 57651367 | 353,4132,6 |
| [Au(L2)(PPh3)] (2) | 4496+325 | 237,1+61,0 |
| [Au(L3)(PPh3)] (3) | 57451418 | 250,9+11,2 |
| [Au(L4)(PPh3)] (4) | 3516+255 | 238,6+33,5 |
| [Au(L5)(PPh3)] (5) | 55631620 | 270,3147,0 |
| (Au(L6)(PPh3)] (6) | 62001676 | 284,9141,5 |
| [Au(L7)(PPh3)] (7) | 47931536 | 220,2+22,3 |
| Auranofin | 52541499 | 210,519,1 |
| vehikulum | 88041392 | 703,2165,1 |
HLi = 06-ethylhypoxantin; HL2 = 06-butylhypoxantin; HL3 = 06-allylhypoxantin; HL4 = 06benzylhypoxantin; HL5 = (96-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; HL7 = 2chlor-ú6-butylhypoxantin.
ío Příklad 5: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1 -β ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinů TNF-α a genů prozánětlivého cytokinů IL-l/ř. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán μΐ 100 pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111 :B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Následně bylo inkubační médium 20 odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komerčně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptasy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese TNF-α po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou AACT.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L7)(PPh3)] (7) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1-/?(HL2 = 06butylhypoxantin, HL7 = 2-chlor-(96-butylhypoxantin). Statistická analýza byla provedena pro30 gramem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání (Tabulka 3, Obrázek 8, Obrázek 9)·
- 13 CZ 27032 U1
Tabulka 3: Výsledky in vitro protizánětlivé aktivity ukazující výslednou transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL1-/? ovlivněnou studovanými komplexy 2 a 7 ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
| Testovaná látka | genová transkripce (A.U.± SE) TNF-σ | genová transkripce (A.U.± SE) IL-1/J |
| [Au(L2)(PPh3)] (2) | 46,37±1,78 | 2,21 ±0,43 |
| [Au(L7)(PPh3)] (7) | 42,67±0,78 | 2,34±0,46 |
| Auranofin | 43,59±4,86 | 2,26+0,20 |
| vehikulum | 79,72±8,44 | 4,20±0,56 |
HL2 = 06-butylhypoxantin, HL7 - 2-chlor-O6-butylhypoxantin.
Příklad 6: In vitro cytotoxická aktivita Au(I) komplexů na vybraných lidských nádorových liniích
Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity připravených Au(I) komplexů byl použit MTT test, což je mikrotitrační metoda, která hodnotí životaschopnost buněk na základě redukce 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) na modré formazanové barvivo. K této redukci dochází pouze v živých buňkách, jejichž poěet tak odpovídá množství zredukovaného MTT, takže lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek.
V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenas. Vznikající formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO na klasickém spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: osteosarkom (HOS), prsní adenokarcinom (MCF7), karcinom plic (A549), maligní melanom (G361), karcinom děložního čípku (HeLa), karcinom vaječníků (A2780), karcinom vaječníků rezistentní na cisplatinu (A2780R) a karcinom prostaty (22Rvl). Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A549, Hela, HOS, MCF7, v RPMI-1610 médiu (2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A2780, A2780R, LNCaP a v McCoy's médiu (2mM L-glutamin, lOOU/ml penicilinu, 100 gg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury G361. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO2 po dobu 24 hodin. Testované látky byly nejprve rozpuštěny v A/N-dimethylformamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny 1000* v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0 až 50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5 % CO2. Poté byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT fozmazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.
V Tabulce 4 jsou uvedeny inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ).
-14CZ 27032 Ul
Tabulka 4: Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 4 až 6 a derivátů hypoxantinu HL4 až HL6 stanovené pomocí MTT testu a vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace IC50±SE (μΜ), a jejich porovnání s cisplatinou jako zvoleným standardem
ICsofSE (μΜ)
| Testovaná látka | MCF7 | HOS | A549 | G361 | HeLa | A2780 | A2780R | 22RV1 |
| [AuťUXPPha)] (4) | 3 7*1 4 | 11,3*2,0 | 16,8*2,1 | 3,9*1,5 | 14,2*1,5 | 3,6*0,4 | 5,3*1,1 | 3,8*0,4 |
| [Au(L5)(PPh3)] (5) | 6,3*2,4 | 6,6*2,9 | 19,3*2,5 | 3,4*0,2 | 19,8*2,8 | 4,2*0,7 | 5,2*1,0 | 4,4*0,8 |
| [Au(L,XPPh3)] (6) | 5,2*2 1 | 4,0*0,9 | 21,7*1,1 | 3,0*0,4 | 21,6*1,0 | 4,2*1,0 | 5,0*0,9 | 3,6*0,2 |
| cisplatina | 17,9*3,5 | 20,5*0,3 | >50 | 5,3*0,7 | >50 | 21,6*0,6 | 20,0*4,7 | 26,9*3,5 |
| HL, | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 | >50 |
| HL5 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 |
| HLe | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 | >25 |
HL4 = O6-benzylhypoxantin; HL5 = 06-fenethylhypoxantin; HL6 = 2-chlor-O6-methylhypoxantin; MCF7 = lidský prsní adenokarcinom; HOS = lidský osteosarkom; A549 = lidský karcinom plic; G361 = lidský maligní melanom; HeLa = lidský karcinom děložního čípku; A2780 = lidský karcinom vaječníků; A2780R = lidský karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině', 22Rvl = lidský karcinom prostaty.
Claims (4)
1. Komplexy zlata v oxidačním stavu +1 s deriváty hypoxantinu (l//-purin-6(97/)-onu) a s deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)j a vyjádřený strukturním vzorcem II, kde
- symbol L představuje deprotonizovaný derivát hypoxantinu vázaný přes atom dusíku N9 na atom zlata způsobem vyjádřeným v základním motivu I,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- substituent Rl je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, halogen,
- substituent R2 je nezávisle vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
- halogen představuje atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,
- 15 CZ 27032 Ul
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
2. Krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II podle nároku 1, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(L)(PR3)]-«5o/v, ve kterém jsou
- L a PR3 definovány v nároku 1,
- n znamená počet krystalosolvátových molekul a nabývá hodnot 1 až 6, a
- Solv je anorganická nebo organická molekula vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, ΛζΥ'-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.
4. Farmakologický prostředek podle nároku 3 pro použití pro léčbu zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčbu adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ27032U1 true CZ27032U1 (cs) | 2014-06-10 |
Family
ID=50977289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-29548U CZ27032U1 (cs) | 2014-05-12 | 2014-05-12 | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ27032U1 (cs) |
-
2014
- 2014-05-12 CZ CZ2014-29548U patent/CZ27032U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Colina-Vegas et al. | Half sandwich Ru (II)-acylthiourea complexes: DNA/HSA-binding, anti-migration and cell death in a human breast tumor cell line | |
| AU2015205885B2 (en) | Novel 7-deazapurine nucleosides for therapeutic uses | |
| Zhang et al. | Synthesis, molecular modeling and biological evaluation of chalcone thiosemicarbazide derivatives as novel anticancer agents | |
| CN103153983B (zh) | 结晶形((r)-(e)-2-(4-(2-(5-(1-(3,5-二氯吡啶-4-基)乙氧基)-1h-吲唑-3-基)乙烯基)-1h-吡唑-1-基)乙醇及其作为fgfr抑制剂的用途 | |
| Pevet et al. | Synthesis and pharmacological evaluation of thieno [2, 3-b] pyridine derivatives as novel c-Src inhibitors | |
| EP3237420B1 (en) | Erk inhibitors | |
| Liu et al. | Hybridization-based discovery of novel quinazoline-2-indolinone derivatives as potent and selective PI3Kα inhibitors | |
| HUE033482T2 (en) | CDC7 inhibitors | |
| Gibadullina et al. | New 2, 6-diaminopyridines containing a sterically hindered benzylphosphonate moiety in the aromatic core as potential antioxidant and anti-cancer drugs | |
| Liu et al. | GLUT1-mediated selective tumor targeting with fluorine containing platinum (II) glycoconjugates | |
| Sun et al. | Design, synthesis and biological evaluation of benzoylacrylic acid shikonin ester derivatives as irreversible dual inhibitors of tubulin and EGFR | |
| Anbar et al. | Evaluation of sulfonate and sulfamate derivatives possessing benzofuran or benzothiophene nucleus as inhibitors of nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases and anticancer agents | |
| CZ305585B6 (cs) | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii | |
| El Malah et al. | Click synthesis of novel 6-((1 H-1, 2, 3-triazol-4-yl) methyl)-6 H-indolo [2, 3-b] quinoxalines for in vitro anticancer evaluation and docking studies | |
| Bravo et al. | Phenyl-guanidine derivatives as potential therapeutic agents for glioblastoma multiforme: catalytic syntheses, cytotoxic effects and DNA affinity | |
| El Malah et al. | Click chemistry-based synthesis of new 1, 2, 3-triazolo-benzoquinoline-3-carbonitriles: anticancer screening and DFT studies | |
| Luo et al. | Discovery of 3-(2-aminobenzo [d] thiazol-5-yl) benzamide derivatives as potent anticancer agents via ROR1 inhibition | |
| Song et al. | Synthesis and bioactivity of novel xanthone and thioxanthone L-rhamnopyranosides | |
| CZ27032U1 (cs) | Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii | |
| Al-Sahaly et al. | Synthesis, Molecular Docking and Anticancer Activity of New Substituted Pyridine-1, 2, 3-Triazole Hybrid N-glycosides Via Click Chemistry | |
| Hajlaoui et al. | Novel 1, 2, 3-triazole linked chromene hybrids: microwave-assisted synthesis, cytotoxic activity, α-amylase inhibitory potential, molecular docking analysis, and in-silico ADMET profiling | |
| CN104987356A (zh) | 一种熊果酸-糖酵解抑制剂dca偶联物及其应用 | |
| Sun et al. | Novel 7-formyl-naphthyridyl-ureas derivatives as potential selective FGFR4 inhibitors: Design, synthesis, and biological activity studies | |
| US20180344862A1 (en) | Cytisine-linked isoflavonoid antineoplastic agents for the treatment of cancer | |
| Vecchio et al. | Highly selective metal mediated ortho-alkylation of phenol. First platinum containing organometallic chromane analogues |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20140610 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20180512 |