CZ305624B6 - Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění - Google Patents
Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305624B6 CZ305624B6 CZ2014-258A CZ2014258A CZ305624B6 CZ 305624 B6 CZ305624 B6 CZ 305624B6 CZ 2014258 A CZ2014258 A CZ 2014258A CZ 305624 B6 CZ305624 B6 CZ 305624B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- substituted
- complexes
- cycloalkyl
- alkyl
- group
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 150000003002 phosphanes Chemical class 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title abstract description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims abstract description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000005346 substituted cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 208000023913 breast extraskeletal osteosarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 201000002858 breast osteosarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract 2
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 claims abstract 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 68
- -1 cycloheteroalkyl Chemical group 0.000 claims description 36
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 claims description 32
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 28
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 19
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 4
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 150000003138 primary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 abstract 1
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 28
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 28
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 16
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 14
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 14
- 229960005207 auranofin Drugs 0.000 description 13
- AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M auranofin Chemical compound CCP(CC)(CC)=[Au]S[C@@H]1O[C@H](COC(C)=O)[C@@H](OC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O AUJRCFUBUPVWSZ-XTZHGVARSA-M 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 11
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- IRPYFWIZKIOHQN-XTZHGVARSA-N gold;[(2r,3r,4s,5r,6s)-3,4,5-triacetyloxy-6-sulfanyloxan-2-yl]methyl acetate;triethylphosphane Chemical compound [Au].CC[PH+](CC)CC.CC(=O)OC[C@H]1O[C@@H]([S-])[C@H](OC(C)=O)[C@@H](OC(C)=O)[C@@H]1OC(C)=O IRPYFWIZKIOHQN-XTZHGVARSA-N 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 4
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical compound [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- GVAAIIYTBMISNE-UHFFFAOYSA-N 9-deazahypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=CC=N[C]12 GVAAIIYTBMISNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 3
- 102000008233 Toll-Like Receptor 4 Human genes 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- DPODNOAEJISMHY-UHFFFAOYSA-N 2-diphenylphosphanylethyl(diphenyl)phosphane;gold(1+) Chemical compound [Au+].C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)CCP(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)CCP(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 DPODNOAEJISMHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000000464 effect on transcription Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 229950011423 forodesine Drugs 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003929 heteronuclear multiple quantum coherence Methods 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- IWKXDMQDITUYRK-KUBHLMPHSA-N immucillin H Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)N[C@H]1C1=CNC2=C1N=CNC2=O IWKXDMQDITUYRK-KUBHLMPHSA-N 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 2
- FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 1,4-naphthoquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=CC(=O)C2=C1 FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1CC2(O)C(C=C(CO)CC3(O)C2C=C(C)C3=O)C4C(C)(C)C14OC(=O)C FXEDIXLHKQINFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AHOWVSJPUQTRNN-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1-methyl-5-nitrosopyrimidine-2,4-dione Chemical compound CN1C(N)=C(N=O)C(=O)NC1=O AHOWVSJPUQTRNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFNHHLILYQEHKK-BDAKNGLRSA-N 7-[[(3r,4r)-3-hydroxy-4-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]methyl]-1,5-dihydropyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)CN1CC1=CNC2=C1NC=NC2=O AFNHHLILYQEHKK-BDAKNGLRSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M Aurothioglucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](S[Au])[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O XHVAWZZCDCWGBK-WYRLRVFGSA-M 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical compound CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical class N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005922 Phosphane Substances 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710101148 Probable 6-oxopurine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 102000030764 Purine-nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KVHLMBJDFYXHLH-UHFFFAOYSA-K [Au+3].C(CP(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)P(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1.C(CP(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)P(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1.[Cl-].[Cl-].[Cl-] Chemical compound [Au+3].C(CP(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)P(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1.C(CP(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)P(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1.[Cl-].[Cl-].[Cl-] KVHLMBJDFYXHLH-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] Chemical compound [Au+3].SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.SC(C([O-])[O-])CC.[Au+3] WTOMCQQKYWSYDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 1
- 229960001799 aurothioglucose Drugs 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N butanedioate;1h-tetrazol-1-ium Chemical compound [NH2+]1C=NN=N1.[NH2+]1C=NN=N1.[O-]C(=O)CCC([O-])=O OQUUTERJWTYTHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VURFVHCLMJOLKN-UHFFFAOYSA-N diphosphane Chemical compound PP VURFVHCLMJOLKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K disodium aurothiomalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(S[Au])C([O-])=O VXIHRIQNJCRFQX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012990 dithiocarbamate Substances 0.000 description 1
- 150000004659 dithiocarbamates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 229910052900 illite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L nonaaluminum;magnesium;tripotassium;1,3-dioxido-2,4,5-trioxa-1,3-disilabicyclo[1.1.1]pentane;iron(2+);oxygen(2-);fluoride;hydroxide Chemical compound [OH-].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[F-].[Mg+2].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2 VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 229910000064 phosphane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002572 propoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 description 1
- 229940046729 selective immunosuppressants Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 229960001315 sodium aurothiomalate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Komplexy zlata v oxidačním stavu (+I) s .omega.-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, obecného vzorce I a II, kde substituent R1 je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, subtituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl. Komplexy jsou určeny pro použití v lékařství pro výrobu léčiv pro léčení zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Description
(54) Název vynálezu:
Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění (57) Anotace:
Komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ωsubstituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, obecného vzorce I a II, kde substituent R1 je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, sub ti tuo váný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl. Komplexy jsou určeny pro použití v lékařství pro výrobu léčiv pro léčení zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění
Oblast techniky
Předložený vynález se týká zlatných komplexů s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9deazapurinu a deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých onemocnění a nádorových onemocnění, konkrétně pak k léčbě adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Dosavadní stav techniky
Předložené komplexy zlata v oxidačním stavu (+) můžeme zařadit do skupiny elektroneutrálních sloučenin zlata(I), které jsou strukturně blízké komerčně používanému léčivu v protizánětlivé terapii Auranofinu, a to přítomností derivátu fosfanu, koordinovaného na centrální atom zlata v oxidačním stupni (+1). Syntéza Auranofinu, 3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2thiolátotriethylfosfan)-zlatný komplex (vzorec A), je popsaná v patentech US4200738, US4115642, US4125711, US4125710, US4122254, US4133952 nebo US4131732, zatímco jsou terapeutické využití je popsáno v patentovém spise WO2010091381. Mezi další světově používaná protizánětlivá léčiva na bázi zlata v oxidačním stupni (+1) patří sodná sůl 2-merkaptobutandiolátozlatného komplexu (natrium-aurothiomalát, vzorec B) a polymemí komplex ((2S,3SAR,55)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný (aurothioglukosa, vzorec C).
Výše uvedená protizánětlivá léčiva na bázi zlata se vyznačují přítomností přes atom síry se koordinujícího ligandu v molekule, nebo jeho kombinací s derivátem fosfanu, koordinujícím se přes atom fosforu, jako je tomu v případě Auranofinu. V aktuálním patentovém dokumentu CZ303 649 a publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568 bylo prokázáno, že vysokou protizánětlivou aktivitu vykazují tak zlatné komplexy s deriváty 6-benzylamino(purinu) a deriváty fosfanu. Naproti tomu bylo v publikaci J. Hošek et al. PlosONE 8, 2013, e82441 prokázáno, že i malá modifikace struktury takového A-donorového ligandu může vést k zásadní modifikaci protizánětlivé aktivity nebo až k jejímu vymizení. Také z tohoto důvodu není dosud možné ve skupině zlatných komplexů definovat jak kvalitativní, tak kvantitativní vztahy mezi strukturou a protizánětlivou aktivitou, nelze tedy v obecné rovině predikovat, že komplexy splňující výše uvedené strukturní motivy budou vykazovat protizánětlivé účinky.
- 1 CZ 305624 B6
Auranofin, kromě protizánětlivých účinků, taktéž projevuje in vitro cytotoxicitu a in vivo antitumorovou aktivitu vůči leukemickým buňkám myší buněčné linie P388, in vitro cytotoxicitu vůči melanomu B16, jak je popsáno v publikaci C. K. Mirabelli et al. Cancer Res. 45, 1985, 32, a vůči nádorovým buněčným liniím děložního čípku HeLa, viz publikace T. M. Simon et al. Cancer 44, 1979, 1965. Aplikací Auranofinu a jeho analogů pro léčbu nádorových onemocnění se zabývá také patentový spis WO2012142615. Tyto poznatky vedly k dalšímu studiu in vitro cytotoxické aktivity a in vivo antitumorové aktivity u analogů Auranofínu (C. K. Mirabelli et al. J. Med. Chem. 29, 1986, 218), jako i u dalších lineárních komplexů Au(I) s deriváty fosfanu zahrnující .V-donorové ligandy jako thionukleobáze a dithiokarbamáty (E. R. T. Tiekink Inflammopharmacology 16, 2008, 138; E. R. T. Tiekink Crit. Rev. Oncol. Hematol. 42, 2002, 225), arylsulfanylpropenoáty (E. Barreiro, J. Inorg. Biochem. 102, 2008, 184), deriváty azakumarinu (J. S. Casas et al. Inorg. Chem. 46, 2007, 6236), naňalimidu (I. Ott et al. J. Med. Chem. 52, 2009, 763) a 2-methyl-l,4-naftochinonu (J. S. Casas et al. J. Inorg. Biochem. 100, 2006, 1858). Další skupinou protinádorově působících komplexních sloučenin zlata(I) s deriváty fosfanu představují komplexy zlata schelátoyě vázaným difosfanem, např. chlorid-bis{ethan-l,2-diylbis(difenylfosfan)}zlatný(l), ([Au(dppe)2]Cl, vzorec D) a celá řada jeho analogů.
Ph2P PPh2 Au θ1
Ph2P* PPh2 (D)
Práce (S. J. Bemers-Price et al. Cancer Res. 46, 1986, 5486) poukázala na signifikantní in vivo antitumorovou aktivitu komplexu [Au(dppe)2]Cl vůči různým modelům rakoviny u myší, což vedlo k dalšímu studiu cytotoxicity a antitumorové aktivity u podobných systémů (C. K. Mirabelli et al. J. Med. Chem. 30, 1987, 2181; S. J. Bemers-Price et al. Inorg. Chem. 26, 1987, 3074; S. J. Bemers-Price et al. Struct. Bonding (Berlin) Ί0, 1988, 27; S. J. Bemers-Price et al. J. Med. Chem. 33, 1990, 1386).
V některých případech bylo zjištěno, že komplexy zlata(I) a fosfanu vykazují cytotoxicitu vůči rakovinovým buněčným liniím, které jsou rezistentní k cisplatině, jak je popsáno např. v publikací C. Marzano et al. Free Radical Biol. Med. 42, 2007, 872; E. Viry et al. Chem. Med. Chem. 3, 2008, 1667; J. J. Liu et al. J. Inorg. Biochem. 102, 2008, 303.
Další skupinu protinádorově aktivních zlatných komplexů jsou komplexy s kombinací heterocyklického jV-donorového ligandu a derivátu fosfanu. Například v publikacích R. Gallassi et al. Dalton Trans. 41, 2012, 5307; M. Serratrice et al. Inorg. Chem. 51, 2012, 3161 a C. Abbehausen et al. Inorg. Chem. 52, 2013, 11280 byly popsány zlatné komplexy s deriváty pyrazolu, imidazolu a dalšími heterocyklickými ligandy a jejich in vitro cytotoxicita vůči lidským rakovinným buněčným liniím, jako jsou prsní karcinom MCF7, plicní adenokarcinom A549, karcinom hrubého střeva LoVo a LoVo MDR, karcinom vaječníku 2008 a C13*. Publikace N. A. Illán-Cabeza et al. Eur. J. Med. Chem. 64, 2013, 260 popisuje in vivo antitumorovou aktivitu komplexu [Au(MANUH-i)PPh3], kde MANUH představuje 6-amino-l-methyl-5-nitrosouracil, na modelu C6 gliomu. Z výše uvedeného přehledu vyplývá, že stejně jako v případě protizánětlivé aktivity, ani v případě protinádorově aktivity není dosud možné ve skupině zlatných komplexů definovat jak kvalitativní, tak kvantitativní vztahy mezi strukturou a antitumorovou aktivitou.
Předložené komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9deazapurinu a s deriváty fosfanu představují zcela novou, v literatuře doposud nepopsanou, sku
-2CZ 305624 B6 pinu biologicky aktivních komplexů zlata, které ve své struktuře obsahují molekulu 9-deazahypoxanthinu a/nebo jeho derivátu.
Příprava 9-deazahypoxantinu a jeho různých derivátů je popsaná v publikacích O.S. Sizova et al. Pharm. Chem. J. 16, 1982, 834; L. V. Éktova et al. Pharm. Chem. J. 22, 1988, 572; O. S. Sizova et al. Pharm Chem. J. 18, 1984, 567; R. G. Glushkov et al. Pharm. Chem. J. 20, 1986, 415; V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13, 2009, 928; R. Novotná et al. Acta Crystallogr., Sect. C: Cryst. Struct. Commun. C69, 2013, 928; R. Novotná et al. Acta Crystallogr., Sect. C: Cryt. Struct. Commun. C69, 2013, 158 a v patentovém dokumentu EP 2532667. C9-substituované deriváty 9-deazahypoxantinu patří do skupiny inhibitorů purin nukleosid fosforylasy (PNPinhibitory), které představují novou skupinu potenciálních selektivních imunosupresiv na léčbu autoimunitních a lymfoproliferativních nádorových onemocnění (Bantia et al. Int. Immunopharmacol. 1, 2001, 1199). Zástupci této skupiny organických látek immucillin-H (BCX-1777, 7[25,3//,47?,57?)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)-pyrrolidin-2-yl]-l,5-dihydropyrrolo[3,2d]pyrimidin-4-on) a DADMe-immucillin-H (BCX^4208, 7-{[37?,47?)-3-hydroxy-4-(hydroxymethyl)pyrrolidin-l-yl]methyl}-l,5-dihydro-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on) jsou v současné době ve fázi klinických testů na pacientech trpících nádorovým onemocněním lymfatického systému, viz publikace K. Clinch et al. J. Med. Chem. 52,2009, 1162; T. Robak et al. Molecules, 14, 2009, 1183; T. Robak et al. Curr. Pharm Des., 18, 2012, 3373; K. Balakrishnan et al. Blood, 116, 2010, 886. Předložené komplexy zlata obsahují ve své struktuře ω-substituované deriváty 6alkyloxy-9-deazapurinu. Příprava ω-substituovaných derivátů 6-alkyloxy-9-deazapurinu je popsána ve spise WO 2009082247 jako i v publikaci V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13,2009,928.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)] a vyjádřené strukturním vzorcem II,
L Au PR3 (I)
kde
- symbol L představuje deprotonizovaný ω-substituovaný derivát 6-alkyloxy-9-deazapurinu vázaný na atom zlata přes atom dusíku N7,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace, — skupina Alk představuje alkyl nebo substituovaný alkyl, který je na ω—uhlíku substituován skupinou Rl, přičemž
- substituent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cyklohete roalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
-alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl a funkční skupina,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
Také jsou podstatou vynálezu krystalosolváty komplexů zlata vzorce (II), kde u sloučenin obecného složení [Au(L)(PR3)] «So/v jsou
- L a PR3 definovány v nároku 1,
- n udává počet krystalosolvátových molekul, především 1 až 6, a
- Solv představuje molekulu použitého rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent, vybranou ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, AY'-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
Nedílnou součástí vynálezu je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce (II) nebo jejich krystalosolvátů, nebo farmaceutickou kompozici zlatných komplexů vzorce (II) nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami určený pro použití v lékařství, zejména pro použití pro výrobu léčiv pro léčení zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
-4CZ 305624 B6
Objasnění výkresů
Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde:
- Obr. 1 je ’HNMR spektrum komplexu [Au(L')(PPh3)] (1) (HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin) 5 rozpuštěného v DMF-ď7.
- Obr. 2 je ‘HNMR spektrum komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2) (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-J7.
- Obr. 3 je 'H NMR spektrum komplexu (Au(L3)(PPh3)] (3) (HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-J7.
-Obr. 4 je 'HNMR spektrum komplexu [Au(L4)(PPh3)] (4) (HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-J7.
- Obr. 5 je 'H NMR spektrum komplexu [Au(L5)(PPh3)] (5) (HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-d7.
- Obr. 6 je 'H-13C gs-HMQC NMR spektrum komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2) (HL2 = 6-(iso15 propyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-d7.
- Obr. 7 je molekulová struktura komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2) kde HL2 = 6-(isopropyloxy)-9deazapurin).
- Obr. 8 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L')(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)] (4) a [Au(L5)(PPh3)] (5) ukazující na snížení sekrece prozánět20 livého cytokinu TNF-α a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
-Obr. 9 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L')(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)] (4) a [Au(L5)(PPh3)] (5) ukazující snížení sekrece prozánětlivého cytokinu IL—1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deaza30 purin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001), ### signifikantní rozdíl v porovnání s Auranofinem (p<0,001)
- Obr. 10 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L5)(PPh3)] (5) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivého cytokinu TNF-α a jejich srovnání 35 s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2= 6-(iso- propyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05), ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01)
- Obr. 11 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L5)(PPh3)] (5) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivého cytokinu IL—1/7 a jejich srovnání s Aura40 nofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05), ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001)
Příklady uskutečnění vynálezu
V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně limitován patentovými nároky.
-5CZ 305624 B6
V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány instrumentálními metodami:
-elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),
- ID a 2D nukleární magnetická rezonance - ‘H, i3C, 'H-'H gs-€OSY, 'H-i3C gs-HMQC, 'H13C gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spektrometr, Varian),
- monokrystalová rentgenová strukturní analýza (difraktometr Xcalibur2+CCD detektor Sapphire2, Oxford Diffraction).
Pro určení in vitro protizánětlivého potenciálu testovaných komplexů zlata(I) byly použity makrofágům podobné buňky odvozené z lidské buněčné linie THP-1. Buňky THP-1 byly kultivovány v plastových lahvích sRPMI 1640 mediem suplementovaným 2mm L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) (tzv. kompletní medium) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Za účelem diferenciace byla připravena buněčná suspenze 5x 105 buněk/ml. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Diferenciace byla zpuštěna přidáním 1 μΐ 5 μg/ml 12-O-tetradekanoyl-forbol-13-acetátu rozpuštěného v 5% DMSO v RPMI 1640 mediu. Buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Diferenciované buňky adherzovaly na dno kultivační láhve. Medium s nediferencovanými buňkami bylo odsáto a nahrazeno čerstvým kompletním RPMI 1640 mediem bez 12-O-tetradekanoy 1-forbol13-acetátu. Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin. Poté bylo odsáto kultivační medium, buňky byly promyty fosfátovým pufrem (pH=7,4) a bylo knim přidáno 100 μΙ kompletního kultivačního media bez bovinního séra; takto byly buňky inkubovány dalších 24 hodin. Takto připravené makrofágům podobné buňky byly použity na stanovení protizánětlivé aktivity testovaných komplexů.
Protizánětlivá aktivita byla testována na několika úrovních. První úrovní bylo stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-\β. K. diferencovaným buňkám v96jamkové mikrotitrační destičce (objem media 100 μΐ na jamku) bylo přidáno 1 μΙ 30 μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 mediu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100 pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 mediu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR—4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Po této inkubaci bylo odebráno kultivační médium, ve kterém se po centrifugaci stanovil obsah prozánětlivých cytokinů TNF-cr a IL-1^metodou ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay).
Příklad 1: Příprava a charakterizace zlatných komplexů s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a trifenylfosfanu.
Předložené komplexy zlata v oxidačním čísle (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9deazapurinu a trifenylfosfanem byly připraveny mírnou modifikací postupu syntézy popsané v patentovém spisu CZ 303 649 a v publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568. Výchozí látky pro syntézu byly komerčně dostupné nebo byly připravené postupy uvedenými v publikacích O.S. Sizova et al. Phartn. Chem. J. 16, 1982, 834; L. V. Éktova et al. Pharm. Chem. J. 22, 1988, 572; O. S. Sizova e al. Pharm. Chem. J. 18, 1984, 567; R. G. Glushkov et al. Pharm. Chem. J. 20, 1986, 415; V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13, 2009, 928; R. Novotná et al. Acta Crystallogr., Sect. C: Cryst. Struct. Commun. C69, 2013, 158 a nebo v patentovém spisu EP 2532667.
-6CZ 305624 B6
[Au(L')(PPh3)] (1): Prvkové složení pro C26H23N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 50,2 (50,3); H, 3,7 (3,8); N, 6,8 (6,3)%. 'H NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,28 (s, C2H, 1H), 7,78 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,64 (m, C8H, 1H), 6,54 (m, C9H, 1H), 4,54 (q, 6,8, C10H, 2H), 1,17 (t, 6,8, C11H, 3H). 13C NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 156,66 (C6), 152,16 (C4), 147,42 (C2), 140,47 (C8), 134,67, 134,53 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,65, 132,67, (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,06, 129,94, (C23, C33, C43, PPh3), 129,75, (C20,C30, C40, PPh3), 122,67(C5), 101,32 (C9), 61,43 (CIO), 14,68 (Cil).
[Au(L2)(PPh3)] (2): Prvkové složení pro C27H25N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 51,0 (50,9); H, 4,0 (4,0); N, 6,6 (6,4)%. ’H NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,27 (s, C2H, 1H), 7,80 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,64 (d, 2,3, C8H, IH), 6,54 (m, 2,3 C9H, 1H), 5,56 (m, C10H, 1H), 1,15 (d, 5,9, C11H, C12H, 6H). 13C NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 156,40 (C6), 152,17 (C4), 147,45 (C2), 140,36 (C8), 134,73, 134,60 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,67, 132,65, (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,08, 129,96, (C23, C33, C43, PPh3), 129,76, (C20, C30, C40, PPh3), 123,14 (C5), 101,32 (C9), 68,06 (CIO), 22,01 (Cl 1, Cl2).
[Au(L3)(PPh3)] (3): Prvkové složení pro C29H27N3O2PAu vypočteno (nalezeno): C, 50,2 (50,3); H, 3,7 (3,8); N, 6,8 (6,3)%. ‘H NMR (DMF^/7, ppm, SiMe4): 8,28 (bs, C2H, 1H), 7,79 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,66 (d, 2, C8H, 1H), 6,55 (m, C9H, 1H), 4,524,44 (m, C10H, 2H), 3,91 (m, C11H, 1H), 3,60-3,36 (m, C14H, 2H), 1,67-1,54 (m, C12H, C13H, 4H). 13C NMR (DMF^/7, ppm, SiMe4): 156,60 (C6), 152,26 (C4), 147,29 (C2), 140,71 (C8), 134,77, 134,64 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,60, 132,67, (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,01, 129,90, (C23, C33, C43, PPh3), 129,72, (C20, C30, C40, PPh3), 122,70 (C5), 101,35 (C9), 76,96, 76,90 (Cl 1), 67,82, 67,77 (C14, CIO), 28,45, 25,49 (C12, C13).
[Au(L4)(PPh3)]: Prvkové složeni pro C3iH25N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 54,5 (54,5); H, 3,7 (3,8); N, 6,2 (5,9)%. 'H NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 8,32 (s, C2H, 1H), 7,68 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3, C8H, 1H), 7,64 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,4 (d, 7,5, C12H, C16H, 2H), 7,1 (m, C14H, 1H), 7,01 (m, C13H, C15H, 2H), 6,59 (d, 2,2 C9H, 1H), 5,68 (s, Cl OH, 2H). ,3C NMR (DMF-J7, ppm, SiMe4): 156,37 (C6), 152,46 (C4), 147,25 (C2), 140,84 (C8), 138,07 (Cil), 134,63, 134,50 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,56, 132,54, (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,00, 129,88, (C23, C33, C43, PPh3), 129,61, (C20, C30, C40, PPh3), 128,99 (Cil), 128,57 (Cl3, Cl5), 127,92 (Cl2, Cl6), 127,83 (Cl4), 122,81 (C5), 101,46 (C9), 66,69 (CIO).
[Au(L5)(PPh3)] (5): Prvkové složení pro C32H27N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 55,1 (55,3); H, 3,9 (3,9); N, 6,0 (6,0)%. ’H NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,31 (s, C2H, 1H), 7,75 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,70 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,68 (m, C8H, 1H), 7,17 (m, C13H, C14H, C16H, C17H, 4H), 7,07 (m, C15H, 1H), 6,58 (d, 1,6 C9H, 1H), 4,72 (t, 7,2 C10H, 2H), 2,89 (m, Cl IH, 2H). I3C NMR (DMF-rf7, ppm, SiMe4): 156,49 (C6), 152,33 (C4), 147,29 (C2), 140,72 (C8), 138,73 (C12), 134,70, 134,56 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,64, 132,62, (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,05, 129,94, (C23, C33, C43, PPh3), 129,67, (C20, C30, C40, PPh3), 129,24, 129,05, 128,64 (C13, C14, C16, C17), 126,54 (C15), 122,80 (C5), 101,39 (C9), 66,31 (CIO), 35,42(Cil).
Příklad 2: Molekulová struktura komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2), HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, stanovená za využití monokrystal o vé rentgenové strukturní analýzy, kde krystalografické parametry jsou uváděny v jednotkách Á, pro které platí převodní vztah: Á = 1010 m.
-7CZ 305624 B6
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2): mřížkové parametry: a (A) 9,91540(17), ó (A) 13,4387(2), c (Á) 18,1518(3), a(°) 90, β(°) 91,3508(15), y(°) 90, prostorová grupa: P2\lc, vazebné délky: Au(l )-N(7) 2,041(2), Au(l)-P(l) 2,2272(7) Á, vazebný úhel: N(7)Au(l)-P(l) 176,35(6)° (viz obrázek 7).
Příklad 3: In vitro cytotoxická aktivita zlatných komplexů a volných ligandů HL1 5 na lidské leukemické linii THP-1.
Před samotným stanovením in vitro protizánětlivého potenciálu připravených komplexů zlata(I) se stanovila in vitro cytoxicita u lidských leukemických buněk THP-1 použitím WST-1 testu. Během tohoto testu živé (metabolicky aktivní) buňky redukují sůl 4-[3-(4-jodofenyl)-2-(4nitrofenyl)-2H-5-tetrazolio]-l,3-benzendisulfonát (WST-1) na žlutý formazan. Tato reakce je řízená enzymem sukcinát-tetrazolium reduktázou, která je součástí respiračního řetězce v mitochondriích a je aktivní pouze v živých buňkách. Množství vzniklého formazanu je tedy přímo úměrné množství metabolicky aktivních buněk v médiu a může být kvantitativně zjištěno měřením absorbance spektrofotometricky. THP-1 buněčná linie byla kultivována v plastových lahvích s RPMI 1640 mediem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Pro účely stanovení vlastní cytotoxické aktivity byla připravena buněčná suspenze 5 x 105 buněk/ml v kultivačním mediu RPMI 1640 (viz výše), které neobsahovalo bovinní sérum. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96jamkové mikrotitrační destičky. Testované zlatné komplexy a ligandy byly nejprve rozpuštěny v dimethyl sulfoxidu, a pak naředěny do koncentrace 10 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Zásobní roztoky byly před každým testováním lOx zředěny kultivačním mediem bez séra a 1 μΐ tohoto roztoku byl přidán k buněčné suspenzi. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO2. Poté byl přidán roztok WST-1 a následovala inkubace po dobu 45 minut. Vzniklý formazan byl kvantifikován spektrofotometricky (Synergy HT, BioTek) při 440 nm a referenční vlnové délce 630 nm.
Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC5o (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50% nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v Tabulce 1.
Tabulka 1. Výsledky in vitro cytotoxicity komplexů 1 až 5 a volných ligandů HL1 až HL5 vůči lidské leukemické linii THP-1 a stanovené za využití WST-1 testu. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách inhibiční koncentrace IC50 (μΜ) a porovnány s Auranofínem jako zvoleným standardem.
| Testovaná látka | \r·’ / THP-1 | |
| [Au(L2)(PPh3)] (2) .......- [Au(L4)(PPh3)] (4) | 0,78±0,03 1,69±0,14 | O |
| Auranofin | 0,88±0,04 | |
| HL1 _...... | >10 ..... | |
| HL3............ ' | >10 | 'Illite |
| TiPíA '3 | ||
| HL5 | >10 |
W
-8CZ 305624 B6
HL1 - 6-(ethoxy)-9-deazapurin; HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin; HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin; HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin; HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin.
Příklad 4: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivého cytokinu TNF-a ve srovnání s Auranofinem a vehikulem.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L')(PPh3)] (1), [Au(L2XPPh3)] (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4XPPh3)] (4), [Au(L5XPPh3)] (5) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-« (HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledné koncentrace TNF-a (pg/ml) u studovaných komplexů se rovnají 6264±104 (komplex 1), 5873±915 (komplex 2), 5061±794 (komplex 3), 5239±815 (komplex 4), 4306±94 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 5254±865 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 8804±960 (viz obrázek 8).
Příklad 5: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů IL-l/3ve srovnání s Auranofínem a vehikulem.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L'XPPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L0(PPh3)] (3), [Au(L4XPPh3)] (4), [Au(L5XPPh3)] (5) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů IL—1 β (HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethylxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledné koncentrace IL-1/?(pg/ml) u studovaných komplexů se rovnají 478,2±51,7 (komplex 1), 315,9±12,1 (komplex 2), 329,4±41,4 (komplex 3), 253,4±13,6 (komplex 4), 304,8±33,2 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 210,5±15,8 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 703,2± 130,2 (viz obrázek 9).
Příklad 6: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinu TNF-a ve srovnání s Auranofínem a vehikulem.
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinu TNF-a. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem media 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1 μΙ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 mediu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100 μg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111.B4 rozpuštěným v RPMI 1640 mediu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 2 hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO3. Následně bylo inkubační médium odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komerčně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptázy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kon
-9CZ 305624 B6 trola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese TNF-a po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou AACT.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L5)(PPh3)] (5) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-a (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledná genová transkripce TNF-α (A.U.) u studovaných komplexů se rovná 51,90±12,49 (komplex 2), 40,46±5,49 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 43,59±8,41 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 79,72± 14,62 (viz obrázek 10).
Příklad 7: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinů IL-l/?ve srovnání s Auranofmem a vehikulem.
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinů IL-\β. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem media 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΙ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO vRPMI 1 μΙ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO vRPMI 1640 mediu. Buňky byly stestovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111 :B4 rozpuštěným v RPMI 1640 mediu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 2 hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5% CO2. Následně bylo inkubační médium odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komerčně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptázy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese IL-l/?po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou AACT.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L5)(PPh3)] (5) a Auranofinu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinů IL—1/? (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledná genová transkripce IL-l/?(a.u.) u studovaných komplexů se rovná l,305±0,120 (komplex 2), l,791±0,765 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 2,258±0,345 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 4,197±0,965 (viz obrázek 11).
Příklad 8: In vitro cytotoxická aktivita zlatných komplexů na zvolených lidských nádorových liniích.
Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity připravených komplexů zlata(l) byl použit MTT test. Jedná se o mikrotitrační metodu hodnotící životaschopnost buněk redukcí 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) za vzniku modrého formazanového barvivá. Jelikož ktéto přeměně dochází pouze v živých buňkách, kde jejich počet odpovídá množství zredukovaného MTT, lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek. V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenáz. Vznikající formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO za použití klasického spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly pro
- 10CZ 305624 B6 vedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: osteosarkom (HOS), prsní adenokarcinom (MCF7), karcinom plic (A549), maligní melanom (G361), karcinom děložního čípku (HeLa), karcinom vaječníků (A2780), karcinom vaječníků rezistentní na cisplatinu (A2780R) a karcinom prostaty (22Rvl). Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A549, Hela, HOS, MCF7, v RPMI1610 médiu (2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 gg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitanu sodného) pro buněčné kultury A2780, A2780R, LNCaP a v McCoy's mediu (2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitanu sodného) pro buněčné kultury G361. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO2 po dobu 24 hodin. Testované zlatné komplexy a ligandy byly rozpuštěny nejdříve v jV./V’-dimethylfonnamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny 1 OOOx v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0-50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5% CO2. Poté byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT formazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.
V Tabulce 2 jsou uvedeny inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ).
Tabulka 2: Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 1 až 5 a volných ligandů HL1 až HL5 zjištěné pomocí MTT testu a vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace IC50 (μΜ), a jejich porovnání s cisplatinou jako zvoleným standardem.
| ICsofrM) K°mpleX MCF7________HOS A549______ | G361 | HeLa | A2780 | A2780R |
| HfWCSl | ||||
| |Au(L’)(PPh3)] (2) 0,6±0,4 0,9±0,5 | 17,2±2,2 | 3,4±0,3 | 16,0±0,7 | 4,0±0,5 |
| MÉM | eestos | |||
| [Au(U)(PPh,)] (4) 4,Otí,8 1,8±1,0 | >20 | 3,5±0,6 | 14,3±0,5 | 4,6±0,7 |
| sews | WH» | |||
| cisplatins 17,9±3,5 20,5±0,3 | >50 | .......5,3±0,7 ...... | >50 | 21,6±0,6 |
| laoges | 53 z e i | |||
| HL2 >50 >50 | >50 | >50 | >50 | >50 |
| w n | ||||
| HL >50 >50 | >50 | >50 | >50 | >50 |
HLi= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, MCF7 = lidský prsní adenokarcinom;
HOS = lidský osteosarkom; A549 - lidský karcinom plic;
G361 = lidský maligní melanom; HeLa = lidský karcinom děložního čípku;
A2780 = lidský karcinom vaječníků; A2780R = lidský karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině·, 22Rvl = lidský karcinom prostaty
Claims (5)
- PATENTOVÉ NÁROKYL Komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)] a vyjádřené strukturním vzorcem 11,L Au — PR^R1 I(I) (II) kde- symbol L představuje deprotonizovaný ω-substituovaný derivát 6-alkyloxy-9-deazapurinu vázaný na atom zlata přes atom dusíku N7,- PRj je derivát fosfanu,- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,- skupina Alk představuje alkyl nebo substituovaný alkyl, který je na ω-uhlíku substituován skupinou Rl, přičemž- substituent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,- 12CZ 305624 B6- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cyklohete5 roalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,- aryl představuje fenyl,- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.1 0
- 2. Krystalosolváty komplexů zlata vzorce (II) podle nároku 1, kde u sloučenin obecného slože- ní [Au(LXPR3)]MSoJvjsou- L a PRj definovány v nároku 1,- n udává počet krystalosolvátových molekul, především 1 až 6, a- Solv představuje molekulu použitého rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent, vybra15 nou ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, AM-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
- 3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné 20 množství zlatných komplexů vzorce II podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 a/nebo farmaceutickou kompozici zlatných komplexů vzorce (II) podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů podle nároku 2 s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.
- 4. Farmakologický prostředek podle nároku 3 pro použití v lékařství.
- 5. Použití farmakologického prostředku podle nároku 3 pro výrobu léčiv pro léčení zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčení adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního čípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcino30 mu prostaty.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-258A CZ305624B6 (cs) | 2014-04-15 | 2014-04-15 | Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-258A CZ305624B6 (cs) | 2014-04-15 | 2014-04-15 | Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2014258A3 CZ2014258A3 (cs) | 2015-10-29 |
| CZ305624B6 true CZ305624B6 (cs) | 2016-01-13 |
Family
ID=54361298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-258A CZ305624B6 (cs) | 2014-04-15 | 2014-04-15 | Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ305624B6 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ306966B6 (cs) * | 2016-03-02 | 2017-10-18 | Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci | Dijodo-komplexy platiny s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv v protinádorové terapii |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0191624A2 (en) * | 1985-02-12 | 1986-08-20 | Engelhard Corporation | Gold-purine antitumor agents |
| CZ303649B6 (cs) * | 2011-07-11 | 2013-01-23 | Univerzita Palackého | Komplexy zlata s deriváty N6-benzyladeninu a deriváty fosfanu, zpusob jejich prípravy a pouzití techto komplexu jako léciv v protizánetlivé terapii |
-
2014
- 2014-04-15 CZ CZ2014-258A patent/CZ305624B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0191624A2 (en) * | 1985-02-12 | 1986-08-20 | Engelhard Corporation | Gold-purine antitumor agents |
| CZ303649B6 (cs) * | 2011-07-11 | 2013-01-23 | Univerzita Palackého | Komplexy zlata s deriváty N6-benzyladeninu a deriváty fosfanu, zpusob jejich prípravy a pouzití techto komplexu jako léciv v protizánetlivé terapii |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Rosopulos Y. et al.: Chemische Berichte 1985, 118 (3) * |
| Rubbiani R. et al.: ChemMedChem 2014, 9 (6), * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2014258A3 (cs) | 2015-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Colina-Vegas et al. | Half sandwich Ru (II)-acylthiourea complexes: DNA/HSA-binding, anti-migration and cell death in a human breast tumor cell line | |
| Lu et al. | Recent development of gold (I) and gold (III) complexes as therapeutic agents for cancer diseases | |
| Pucci et al. | Improving the bioactivity of Zn (II)-curcumin based complexes | |
| JP6087889B2 (ja) | 治療的使用のための新規７−デアザプリンヌクレオシド | |
| JP5485172B2 (ja) | 新規な細胞増殖抑制性７−デアザプリンヌクレオシド | |
| CN106866743B (zh) | 肿瘤靶向性金属配合物及合成方法与应用 | |
| CN103254239A (zh) | 一种芳基钌-β-咔啉配合物及其制备方法和应用 | |
| Annunziata et al. | A highly efficient and selective antitumor agent based on a glucoconjugated carbene platinum (ii) complex | |
| Ortego et al. | Group 11 complexes with amino acid derivatives: Synthesis and antitumoral studies | |
| Kızrak et al. | Amine-fnctionalized silver and gold N-heterocyclic carbene complexes: Synthesis, characterization and antitumor properties | |
| CN101074229A (zh) | 7－氮杂靛玉红和7－氮杂异靛蓝衍生物制备及其药学用途 | |
| Zhou et al. | Iridium (III)-BBIP complexes induce apoptosis via PI3K/AKT/mTOR pathway and inhibit A549 lung tumor growth in vivo | |
| Yaşar et al. | Synthesis, characterisation and cytotoxic properties of N-heterocyclic carbene silver (I) complexes | |
| Khater et al. | Anticancer evaluation of new organometallic ruthenium (ii) flavone complexes | |
| Vančo et al. | Gold (I) complexes of 9-deazahypoxanthine as selective antitumor and anti-inflammatory agents | |
| JPH11322610A (ja) | サイクリン依存性キナーゼ阻害剤 | |
| Wei et al. | Synthesis and biological evaluation of indazole derivatives as anti-cancer agents | |
| Xu et al. | High activity, high selectivity and high biocompatibility BODIPY-pyrimidine derivatives for fluorescence target recognition and evaluation of inhibitory activity | |
| Strobykina et al. | Triphenylphosphonium conjugates of 1, 2, 3-triazolyl nucleoside analogues. Synthesis and cytotoxicity evaluation | |
| Stefano et al. | Synthesis and comparative evaluation of the cytotoxic activity of cationic organometallic complexes of the type [Pt (η1-CH2-CH2-OR)(DMSO)(phen)]+(R= Me, Et, Pr, Bu) | |
| Singh et al. | Cancer stem cell activity of copper (II)-terpyridine complexes with aryl sulfonamide groups | |
| Gürbüz et al. | Silver (I) N-heterocyclic carbene complexes: Synthesis, characterization and cytotoxic properties | |
| CZ305624B6 (cs) | Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění | |
| Bravo et al. | Phenyl-guanidine derivatives as potential therapeutic agents for glioblastoma multiforme: catalytic syntheses, cytotoxic effects and DNA affinity | |
| Yin et al. | Design, synthesis and evaluation of structurally diverse ortho-acylphenol-diindolylmethane hybrids as anticancer agents |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20210415 |