CZ27030U1 - Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění - Google Patents

Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění Download PDF

Info

Publication number
CZ27030U1
CZ27030U1 CZ2014-29470U CZ201429470U CZ27030U1 CZ 27030 U1 CZ27030 U1 CZ 27030U1 CZ 201429470 U CZ201429470 U CZ 201429470U CZ 27030 U1 CZ27030 U1 CZ 27030U1
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
substituted
cycloalkyl
complexes
carbon
alkyl
Prior art date
Application number
CZ2014-29470U
Other languages
English (en)
Inventor
Zdeněk Trávníček
Jana Gáliková
Jan Hošek
Ján Vančo
Original Assignee
Univerzita Palackého
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého filed Critical Univerzita Palackého
Priority to CZ2014-29470U priority Critical patent/CZ27030U1/cs
Publication of CZ27030U1 publication Critical patent/CZ27030U1/cs

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Úřad průmyslového vlastnictví v zápisném řízení nezjišťuje, zda předmět užitného vzoru splňuje podmínky způsobilosti k ochraně podle § 1 zák. č. 478/1992 Sb.
CZ 27030 Ul
Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění
Oblast techniky
Předložené technické řešení se týká zlatných komplexů s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy9-deazapurinu a deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých onemocnění a nádorových onemocnění, konkrétně pak k léčbě adenokarcinomu prsu, osteosarkomu, karcinomu plic, maligního melanomu, karcinomu děložního čípku, karcinomu vaječníků, karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
Dosavadní stav techniky
Předložené komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) můžeme zařadit do skupiny elektroneutrálních sloučenin zlata (I), které jsou strukturně blízké komerčně používanému léčivu v protizánětlivé terapii Auranofmu, a to přítomností derivátu fosfanu, koordinovaného na centrální atom zlata v oxidačním stupni (+1). Syntéza Auranofmu,3,4,5-triacetyloxy-6-(acetyloxymethyl)-oxan-2-thio15 látotriethylfosfanj-zlatný komplex (vzorec A), je popsaná v patentech US 4200738, US 4115642, US 4125711, US 4125710, US 4122254, US 4133952 nebo US 4131732, zatímco jeho terapeutické využití je popsáno v patentovém spise WO 2010091381. Mezi další světově používaná protizánětlivá léčiva na bázi zlata v oxidačním stupni (+1) patří sodná sůl 2-merkaptobutandiolátozlatného komplexu (natrium-aurothiomalát, vzorec B) a polymemí komplex ((25,3S,47?,55)20 3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-oxan-2-thioláto)zlatný (aurothioglukosa, vzorec C).
C
Výše uvedená protizánětlivá léčiva na bázi zlata se vyznačují přítomností přes atom síry se koordinujícího ligandu v molekule, nebo jeho kombinací s derivátem fosfanu, koordinujícím se přes atom fosforu, jako je tomu v případě Auranofmu. V aktuálním patentovém dokumentu CZ
303649 a publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568 bylo prokázáno, že vysokou protizánětlivou aktivitu vykazují také zlatné komplexy s deriváty 6-benzylamino(purinu) a deriváty fosfanu. Naproti tomu bylo v publikaci J. Hošek et al. PlosONE 8, 2013, e82441 prokázáno, že i malá modifikace struktury takového /V-donorového ligandu může vést k zásadní modifikaci protizánětlivé aktivity nebo až k jejímu vymizení. Také z tohoto důvodu není dosud možné ve skupině zlatných komplexů definovat jak kvalitativní, tak kvantitativní vztahy mezi strukturou a protizánětlivou aktivitou, nelze tedy v obecné rovině predikovat, že komplexy splňující výše uvedené strukturní motivy budou vykazovat protizánětlivé účinky.
Auranofin, kromě protizánětlivých účinků, taktéž projevuje in vitro cytotoxicitu a in vivo antitumorovou aktivitu vůči leukemickým buňkám myší buněčné linie P388, in vitro cytotoxicitu
- 1 CZ 27030 Ul vůči melanomu B16, jakje popsáno v publikaci C. K. Mirabelli et al. Cancer Res. 45, 1985, 32, a vůči nádorovým buněčným liniím děložního čípku HeLa, viz publikace T. M. Simon et al. Cancer 44, 1979, 1965. Aplikací Auranofinu a jeho analogů pro léčbu nádorových onemocnění se zabývá také patentový spis WO 2012142615. Tyto poznatky vedly k dalšímu studiu in vitro cytotoxické aktivity a in vivo antitumorové aktivity u analogů Auranofinu (C. K. Mirabelli et al. J. Med. Chem. 29, 1986, 218), jako i u dalších lineárních komplexů Au(I) s deriváty fosfanu zahrnující 5-donorové ligandy jako thionukleobáze a dithiokarbamáty (E. R. T. Tiekink Inflammopharmacology 16, 2008, 138; E. R. T. Tiekink Crit. Rev. Oncol. Hematol. 42, 2002, 225), arylsulfanylpropenoáty (E. Barreiro, J. Inorg. Biochem. 102, 2008, 184), deriváty azakumarinu (J. S. Casas et al. Inorg. Chem. 46, 2007, 6236), naftalimidu (I. Ott et al. J. Med. Chem. 52, 2009, 763) a 2-methyl-l,4-naftochinonu (J. S. Casas et al. J. Inorg. Biochem. 100, 2006, 1858). Další skupinou protinádorově působících komplexních sloučenin zlata(I) s deriváty fosfanu představují komplexy zlata s chelátově vázaným difosfanem, např. chlorid-bis {ethan-1,2diylbis(difenylfosfan)}-zlatný(I), ([Au(dppe)2]Cl, vzorec D) a celá řada jeho analogů.
r~\
Ph2P^ zPPh2 Z A(
Ph2P 'PPh2 \_J
Cl
Práce (S. J. Bemers-Price et al. Cancer Res. 46, 1986, 5486) poukázala na signifikantní in vivo antitumorovou aktivitu komplexu [Au(dppe)2]Cl vůči různým modelům rakoviny u myší, což vedlo k dalšímu studiu cytotoxicity a antitumorové aktivity u podobných systémů (C. K. Mirabelli et al. J. Med. Chem. 30, 1987, 2181; S. J. Bemers-Price et al. Inorg. Chem. 26, 1987, 3074; S. J. Bemers-Price et al. Struct. Bonding (Berlin) 70, 1988, 27; S. J. Bemers-Price et al. J. Med. Chem. 33, 1990, 1386).
V některých případech bylo zjištěno, že komplexy zlata(I) a fosfanu vykazují cytotoxicitu vůči rakovinovým buněčným liniím, které jsou rezistentní k cisplatině, jak je popsáno např. v publikaci C. Marzano et al. Free Radical Biol. Med. 42, 2007, 872; E. Viry et al. Chem. Med. Chem. 3, 2008, 1667; J. J. Liu et al. J. Inorg. Biochem. 102, 2008, 303.
Další skupinu protinádorově aktivních zlatných komplexů jsou komplexy s kombinací heterocyklického V-donorového ligandu a derivátu fosfanu. Například v publikacích R. Gallassi et al. Dalton Trans. 41, 2012, 5307; M. Serratrice et al. Inorg. Chem. 51, 2012, 3161 a C. Abbehausen et al. Inorg. Chem. 52, 2013, 11280 byly popsány zlatné komplexy s deriváty pyrazolu, imidazolu a dalšími heterocyklickými ligandy a jejich in vitro cytotoxicita vůči lidským rakovinným buněčným liniím, jako jsou prsní karcinom MCF7, plicní adenokarcinom A549, karcinom hrubého střeva LoVo a LoVo MDR, karcinom vaječníku 2008 a 03*. Publikace N. A. Illán-Cabeza et al. Eur. J. Med. Chem. 64, 2013, 260 popisuje in vivo antitumorovou aktivitu komplexu [Au(MANUH-i)PPh3], kde MANUH představuje 6-amino-l-methyl-5-nitrosouracil, na modelu C6 gliomu. Z výše uvedeného přehledu vyplývá, že stejně jako v případě protizánětlivé aktivity, ani v případě protinádorově aktivity není dosud možné ve skupině zlatných komplexů definovat jak kvalitativní, tak kvantitativní vztahy mezi strukturou a antitumorovou aktivitou.
Předložené komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9deazapurinu a s deriváty fosfanu představují zcela novou, v literatuře doposud nepopsanou, skupinu biologicky aktivních komplexů zlata, které ve své struktuře obsahují molekulu 9deazahypoxanthinu a/nebo jeho derivátu.
-2CZ 27030 Ul
Příprava 9-deazahypoxantinu a jeho různých derivátů je popsaná v publikacích O.S. Sizova et al. Pharm. Chem. J. 16, 1982, 834; L.V. Éktova et al. Pharm. Chem. J. 22, 1988, 572; O.S. Sizova et al. Pharm. Chem. J. 18, 1984, 567; R.G. Glushkov et al. Pharm. Chem. J. 20, 1986, 415; V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13, 2009, 928; R. Novotná et al. Acta Crystallogr., Séct. C: Cryst. Struct. Commun. C69, 2013, 158 a v patentovém dokumentu EP 2532667. C9substituované deriváty 9-deazahypoxantinu patří do skupiny inhibitorů purin nukleosid fosforylasy (PNP-inhibitory), které představují novou skupinu potenciálních selektivních imunosupresiv na léčbu autoimunitních a lymfoproliferativních nádorových onemocnění (Bantia et al. Int. Immunopharmacol. 1, 2001, 1199). Zástupci této skupiny organických látek immucillinH (BCX-1777, 7-[(2S,3S,4Á,5Á)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)-pyrrolidin-2-yl]-l ,5dihydropyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on) a DADMe-immucillin-H (BCX-4208, 7-{[(37?,47?)-3hydroxy-4-(hydroxymethyl)-pyrrolidin-l -yljmethyl} -1,5-dihydro-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on) jsou v současné době ve fázi klinických testů na pacientech trpících nádorovým onemocněním lymfatického systému, viz publikace K. Clinch et al. J. Med. Chem. 52, 2009, 1126; T. Robak et al. Molecules, 14, 2009, 1183; T. Robak et al. Cum Pharm. Des., 18, 2012, 3373; K. Balakrishnan et al. Blood, 116, 2010, 886. Předložené komplexy zlata obsahují ve své struktuře w-substituované deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu. Příprava ω-substituovaných derivátů 6alkyloxy-9-deazapurinu je popsána ve spise WO 2009082247 jako i v publikaci V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13, 2009, 928.
Podstata technického řešení
Podstatou technického řešení jsou komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)j a vyjádřené strukturním vzorcem II,
kde
- symbol L představuje deprotonizovaný ω-substituovaný derivát 6-alkyloxy-9-deazapurinu vázaný na atom zlata přes atom dusíku N7,
- PR3 je derivát fosfanu,
- substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
- skupina Alk představuje alkyl nebo substituovaný alkyl, který je na ω-uhlíku substituován skupinou Rl, přičemž
- substituent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
-3CZ 27030 U1
- alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
- alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
- cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
- cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
- aryl představuje fenyl,
- heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
Také jsou podstatou technického řešení krystalosolváty komplexů zlata vzorce II, které mají vzorec [Au(L)(PR3)]-n5'o/v, v němž jsou
- L a PR3 definovány výše,
- n udává počet krystalosolvátových molekul, především 1 až 6, a
- Solv představuje molekulu použitého rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent, vybranou ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, 7V,/V-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.
Nedílnou součástí technického řešení je farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů vzorce II nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami určenými pro použití v lékařství, zejména pro použití pro léčbu zánětlivých a/nebo nádorových onemocnění, zejména pro léčbu adenokarcinomu prsu a/nebo osteosarkomu a/nebo karcinomu plic a/nebo maligního melanomu a/nebo karcinomu děložního cípku a/nebo karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo karcinomu prostaty.
-4CZ 27030 Ul
Přehled obrázků na připojených výkresech
Konkrétní příklady provedení technického řešení jsou doloženy připojenými výkresy, kde:
- Obr. 1 je 'H NMR spektrum komplexu [Au(L')(PPh3)] (1) (HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-í/7
- Obr. 2 je *H NMR spektrum komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2) (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-d7
- Obr. 3 je *H NMR spektrum komplexu [Au(L3)(PPh3)j (3) (HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-ylmethyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-ď7
- Obr. 4 je 'H NMR spektrum komplexu [Au(L4)(PPh3)j (4) (HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-ď7
- Obr. 5 je 1H NMR spektrum komplexu [Au(L5)(PPh3)] (5) (HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-ď7
- Obr. 6 je ’Η-^Ο gs-HMQC NMR spektrum komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2) (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin) rozpuštěného v DMF-ď7
- Obr. 7 je molekulová struktura komplexu [Au(L2)(PPh3)j (2), kde HL2 = 6-(isopropyloxy)-9deazapurin
- Obr. 8 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L*)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)J (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)] (4) a [Au(L5)(PPh3)] (5) ukazující na snížení sekrece prozánětlivého cytokinu TNF-α a jejich srovnání s Auranofmem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-yl-methyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<o,ooi)
- Obr. 9 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L*)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)j (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)j (4) a [Au(L5)(PPh3)j (5) ukazující snížení sekrece prozánětlivého cytokinu IL-1/? a jejich srovnání s Auranofmem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-yl-methyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001), ### signifikantní rozdíl v porovnání s Auranofmem (p<0,001)
- Obr. 10 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L5)(PPh3)j (5) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivého cytokinu TNF-α a jejich srovnání s Auranofmem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 - 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05), ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01)
- Obr. 11 je graf in vitro protizánětlivé aktivity komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2) a [Au(L5)(PPh3)j (5) ukazující ovlivnění transkripce genů prozánětlivého cytokinu IL-1/? a jejich srovnání s Auranofinem a vehikulem (maximální odpověď buněk na zánětlivý stimul (LPS)), HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin, * signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,05), ** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,01), *** signifikantní rozdíl v porovnání s vehikulem (p<0,001).
Příklady provedení technického řešení
V následující části je technické řešení doloženo, nikoli však limitováno, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah technického řešení je pak jednoznačně limitován nároky na ochranu.
-5CZ 27030 Ul
V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány instrumentálními metodami:
- elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),
- ID a 2D nukleární magnetická rezonance - *H, 13C, 'Η-'Η gs-COSY, ’H-13C gs-HMQC, !H-13C gs-HMBC experimenty (400 MHz NMR spektrometr, Varian),
- monokrystalová rentgenová strukturní analýza (difraktometr Xcalibur2+CCD detektor Sapphire2, Oxford Diffraction).
Pro určení in vitro protizánětlivého potenciálu testovaných komplexů zlata(I) byly použity makrofágům podobné buňky odvozené z lidské buněčné linie THP-1. Buňky THP-1 byly kultivovány v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) (tzv. kompletní médium) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Za účelem diferenciace byla připravena buněčná suspenze 5 χ 105 buněk/ml. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Diferenciace byla zpuštěna přidáním 1 μΐ 5 μg/ml 12-0tetradekanoyl-forbol-13-acetátu rozpuštěného v 5% DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly poté inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Diferencované buňky adherovaly na dno kultivační láhve. Médium s nediferencovanými buňkami bylo odsáto a nahrazeno čerstvým kompletním RPMI 1640 médiem bez 12-O-tetradekanoylforbol-13-acetátu. Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin. Poté bylo odsáto kultivační médium, buňky byly promyty fosfátovým pufrem (pH=7,4) a bylo k nim přidáno 100 μΐ kompletního kultivačního média bez bovinního séra; takto byly buňky inkubovány dalších 24 hodin. Takto připravené makrofágům podobné buňky byly použity na stanovení protizánětlivé aktivity testovaných komplexů.
Protizánětlivá aktivita byla testována na několika úrovních. První úrovní bylo stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-l/ř. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) bylo přidáno 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 24 hodin při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Po této inkubaci bylo odebráno kultivační médium, ve kterém se po centrifugací stanovil obsah prozánětlivých cytokinů TNF-α a IL-1/? metodou ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay).
Příklad 1: Příprava a charakterizace zlatných komplexů s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a trifenylfosfanu
Předložené komplexy zlata v oxidačním čísle (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9deazapurinu a trifenylfosfanem byly připraveny mírnou modifikací postupu syntézy popsané v patentovém spisu CZ 303 649 a v publikaci Z. Trávníček et al. J. Med. Chem. 55, 2012, 4568. Výchozí látky pro syntézu byly komerčně dostupné nebo byly připravené postupy uvedenými v publikacích O.S. Sizova et al. Pharm. Chem. J. 16, 1982, 834; L.V. Éktova et al. Pharm. Chem. J. 22, 1988, 572; O.S. Sizova et al. Pharm. Chem. J. 18, 1984, 567; R.G. Glushkov et al. Pharm. Chem. J. 20, 1986, 415; V. P. Kamath et al. Org. Process Res. Dev. 13, 2009, 928; R. Novotná et al. Acta Crystallogr., Séct. C: Cryst. Struct. Commun. C69, 2013, 158 a nebo v patentovém spisu EP 2532667.
[Au(L*)(PPh3)] (1): Prvkové složení pro C26H23N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 50,2 (50,3); H,
3,7 (3,8); N, 6,8 (6,3)%. ’H NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,28 (s, C2H, 1H), 7,78 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,64 (m, C8H, 1H), 6,54 (m, C9H, 1H), 4,54 (q, 6,8, Cl OH, 2H), 1,17 (t, 6,8, C11H, 3H). 13C NMR (DMF-J7, ppm, SiMe4): 156,66 (C6), 152,16 (C4), 147,42 (C2), 140,47 (C8), 134,67, 134,53 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,65, 132,67
-6CZ 27030 Ul (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,06, 129,94 (C23, C33, C43, PPh3), 129,75 (C20, C30, C40, PPh3), 122,67 (C5), 101,32 (C9), 61,43 (CIO), 14,68 (Cil).
[Au(L2)(PPh3)] (2): Prvkové složení pro C27H25N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 51,0 (50,9); H, 4,0 (4,0); N, 6,6 (6,4)%. !H NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 8,27 (s, C2H, 1H), 7,80 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,64 (d, 2,3, C8H, 1H), 6,54 (d, 2,3, C9H, 1H), 5,56 (m, C10H, 1H), 1,15 (d, 5,9, C11H, C12H, 6H). 13C NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 156,40 (C6), 152,17 (C4), 147,45 (C2), 140,36 (C8), 134,73, 134,60 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,67, 132,65 (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,08, 129,96 (C23, C33, C43, PPh3), 129,76 (C20, C30, C40, PPh3), 123,14 (C5), 101,32 (C9), 68,06 (CIO), 22,01 (Cil, 02).
[Au(L3)(PPh3)] (3): Prvkové složení pro C29H27N3O2PAu vypočteno (nalezeno): C, 50,2 (50,3); H, 3,7 (3,8); N, 6,8 (6,3)%. Ή NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,28 (bs, C2H, 1H), 7,79 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,71 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,66 (d, 2, C8H, 1H), 6,55 (m, C9H, 1H), 4,52-4,44 (m, C10H, 2H), 3,91 (m, C11H, 1H), 3,60-3,36 (m, C14H, 2H), 1,67-1,54 (m, C12H, C13H, 4H). 13C NMR (DMF-J7, ppm, SiMe4): 156,60 (C6), 152,26 (C4), 147,29 (C2), 140,71 (C8), 134,77, 134,64 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,60 (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,01, 129,90 (C23, C33, C43, PPh3), 129,72 (C20, C30, C40, PPh3), 122,70 (C5), 101,35 (C9), 76,96, 76,90 (Cl 1), 67,82, 67,77 (04, CIO), 28,45, 25,49 (02, 03).
Au(L4)(PPh3)]: Prvkové složení pro C3]H25N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 54,5 (54,5); H, 3,7 (3,8); N, 6,2 (5,9)%. Ή NMR (DMF-í/7, ppm, SiMe4): 8,32 (s, C2H, 1H), 7,68 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3, C8H, 1H), 7,64 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,4 (d, 7,5, C12H, C16H, 2H), 7,1 (m, C14H, 1H), 7,01 (m, C13H, C15H, 2H), 6,59 (d, 2,2, C9H, 1H), 5,68 (s, C10H, 2H). 13C NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 156,37 (C6), 152,46 (C4), 147,25 (C2), 140,84 (C8), 138,07 (Cil), 134,63, 134,50 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,56, 132,54 (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,00, 129,88 (C23, C33, C43, PPh3), 129,61 (C20, C30, C40, PPh3), 128,99 (Cil), 128,57 (03, 05), 127,92 (02, 06), 127,83 (04), 122,81 (C5), 101.46 (C9), 66,69 (CIO).
[Au(L5)(PPh3)] (5): Prvkové složení pro C32H27N3OPAu vypočteno (nalezeno): C, 55,1 (55,3); H, 3,9 (3,9); N, 6,0 (6,0)%. ’H NMR (DMF-íZ7, ppm, SiMe4): 8,31 (s, C2H, 1H), 7,75 (m, C21H, C25H, C31H, C35H, C41H, C45H, 6H, PPh3), 7,70 (m, C22H, C23H, C24H, C32H, C33H, C34H, C42H, C43H, C44H, 9H, PPh3), 7,68 (m, C8H, 1H), 7,17 (m, C13H, C14H, C16H, C17H, 4H), 7,07 (m, C15H, 1H), 6,58 (d, 1,6, C9H, 1H), 4,72 (t, 7,2, C10H, 2H), 2,89 (m, C11H, 2H). 13C NMR (DMF-</7, ppm, SiMe4): 156,49 (C6), 152,33 (C4), 147,29 (C2), 140,72 (C8), 138,73 (02), 134,70, 134,56 (C21, C25, C31, C35, C41, C45, PPh3), 132,64, 132,62 (C22, C24, C32, C34, C42, C44, PPh3), 130,05, 129,94 (C23, C33, C43, PPh3), 129,67 (C20, C30, C40, PPh3), 129,24, 129,05, 128,64 (03, 04, 06, 07), 126,54 (05), 122,80 (C5), 101,39 (C9), 66,31 (CIO), 35,42 (Cil).
Příklad 2: Molekulová struktura komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2), HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, stanovená za využití monokrystalové rentgenové strukturní analýzy, kde krystalografické parametry jsou uváděny v jednotkách Á, pro které platí převodní vztah: 1 Á = ÍO'10 m
Základní krystalografické parametry komplexu [Au(L2)(PPh3)] (2): mřížkové parametry: a (Á) 9,91540(17), b (Á) 13,4387(2), c (Á) 18,1518(3), a (°) 90, β (°) 91,3508(15), γ (°) 90, prostorová grupa: P2\/c, vazebné délky: Au(l)-N(7) 2,041(2), Au(l)-P(l) 2,2272(7) Á, vazebný úhel: N(7)Au(l)-P(l) 176,35(6)° (viz obrázek 7).
-7CZ 27030 UI
Příklad 3: In vitro cytotoxická aktivita zlatných komplexů a volných ligandů HL1’5 na lidské leukémické linii THP-1
Před samotným stanovením in vitro protizánětlivého potenciálu připravených komplexů zlata(I) se stanovila in vitro cytotoxicita u lidských leukemických buněk THP-1 použitím WST-1 testu.
Během tohoto testu živé (metabolicky aktivní) buňky redukují sůl 4-[3-(4-jodfenyl)-2-(4-nitrofenyl)-2H-5-tetrazolio]-l,3-benzendisulfonát (WST-1) na žlutý formazan. Tato reakce je řízená enzymem sukcinát-tetrazolium reduktasou, která je součástí respiračního řetězce v mitochondriích a je aktivní pouze v živých buňkách. Množství vzniklého formazanu je tedy přímo úměrné množství metabolicky aktivních buněk v médiu a může být kvantitativně zjištěno měřením absorío bance spektrofotometricky. THP-1 buněčná linie byla kultivována v plastových lahvích s RPMI 1640 médiem suplementovaným 2mM L-glutaminem, 10% fetálním bovinním sérem, penicilinem (100 U/ml) a streptomycinem (100 pg/ml) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Pro účely stanovení vlastní cytotoxické aktivity byla připravena buněčná suspenze 5 * 105 buněk/ml v kultivačním médiu RPMI 1640 (viz výše), které neobsahovalo bovinní sérum. Tato buněčná suspenze byla rozpipetována po 100 μΐ do 96-jamkové mikrotitrační destičky. Testované zlatné komplexy a ligandy byly nejprve rozpuštěny v dimethylsulfoxidu, a pak naředěny do koncentrace lOmM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Zásobní roztoky byly před každým testováním 10* zředěny kultivačním médiem bez séra a 1 μΐ tohoto roztoku byl přidán k buněčné suspenzi. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO2. Poté byl přidán roztok WST-1 a následovala inkubace po dobu 45 minut. Vzniklý formazan byl kvantifikován spektrofotometricky (Synergy HT, BioTek) při 440 nm a referenční vlnové délce 630 nm.
Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek potřebné k inhibici růstu 50 % nádorových buněk, byly vypočteny z dávkových křivek a jsou uvedeny v Tabulce 1.
Tabulka 1: Výsledky in vitro cytotoxicity komplexů 1 až 5 a volných ligandů HL1 až HL5 vůči lidské leukémické linii THP-1 a stanovené za využití WST-1 testu. Výsledky jsou vyjádřeny v hodnotách inhibiční koncentrace IC5o (μΜ) a porovnány s Auranofinem jako zvoleným standardem
Testovaná látka IC50 (μΜ) THP-1
[Au(L')(PPh3)](1) 0,84±0,05
[Au(L2)(PPh3)J (2) 0,78+0,03
[Au(L3)(PPh3)] (3) 0,96±0,05
[Au(L4)(PPh3)] (4) 1,69±0,14
[Au(L5)(PPh3)] (5) 1,39±0,11
Auranofin 0,88±0,04
HL1 >10
HL2 >10
HL3 >10
HL4 >10
HL5 >10
HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin; HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin; HL3 = 6-(tetrahydrofúran2-yl-methyloxy)-9-deazapurin; HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin; HL5 = 6-(fenethyloxy)-9deazapurin.
CZ 27030 Ul
Příklad 4: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivého cytokinů TNF-α ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L')(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L3)(PPh3)] (3), [Au(L4)(PPh3)] (4), [Au(L5)(PPh3)] (5) a Auranofmu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů TNF-α (HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-yl-methyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledné koncentrace TNF-α (pg/mL) u studovaných komplexů se rovnají 6264±104 (komplex 1), 5873±915 (komplex 2), 506H794 (komplex 3), 5239±815 (komplex 4), 4306±94 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 5254±865 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 8804±960 (viz obrázek 8).
Příklad 5: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů IL- 1β ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L’)(PPh3)] (1), [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L3)(PPh3)] (3) a [Au(L4)(PPh3)] (4), [Au(L5)(PPh3j] (5) a Auranofmu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na sekreci prozánětlivých cytokinů IL-1/? (HL1= 6-(ethoxy)-9-deazapurin, HL2 = 6-(isopropyloxy)-9deazapurin, HL3 = 6-(tetrahydrofuran-2-yl-methyloxy)-9-deazapurin, HL4 = 6-(benzyloxy)-9deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledné koncentrace IL-1/? (pg/mL) u studovaných komplexů se rovnají 478,2±51,7 (komplex 1), 315,9±12,1 (komplex 2), 329,4±41,4 (komplex 3), 253,4±13,6 (komplex 4), 304,8±33,2 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 210,5±15,8 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidán pouze LPS) je 703,2±130,2. (viz obrázek 9).
Příklad 6: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinů TNF-α ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinů TNF-α. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 2 hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Následně bylo inkubační médium odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komečně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptasy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese TNF-α po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou ΔΔΟΤ.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [Au(L2)(PPh3)] (2), [Au(L5)(PPh3)] (5) a Auranofmu byla použita výše popsaná metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivých cytokinů TNF-α (HL2 = 6(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
-9CZ 27030 Ul
Výsledná genová transkripce TNF-α (A.U.) u studovaných komplexů se rovná 51,90±12,49 (komplex 2), 40,46±5,49 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 43,59±8,41 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidám pouze LPS) je 79,72±14,62 (viz obrázek 10).
Příklad 7: Stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinu IL- \β ve srovnání s Auranofinem a vehikulem
Další úrovní testování protizánětlivé aktivity bylo posouzení vlivu testovaných látek na transkripci genů prozánětlivého cytokinu IL-1/?. K diferencovaným buňkám v 96-ti jamkové mikrotitrační destičce (objem média 100 μΐ na jamku) byl přidán 1 μΐ 30μΜ roztoku testovaných látek rozpuštěných v 10% (w/w) DMSO v RPMI 1640 médiu. Buňky byly s testovanými látkami preinkubovány hodinu. Následně byl k buňkám přidán 1 μΐ 100pg/ml lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli 0111:B4 rozpuštěným v RPMI 1640 médiu, který simuluje zánětlivou reakci aktivací TLR-4 receptoru, a buňky byly dále inkubovány 2 hodiny při 37 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO2. Následně bylo inkubační médium odsáto a buňky byly promyty ledovým PBS (pH 7,4). Přisedlé buňky byly rozloženy komečně dostupným lyzačním pufrem s obsahem inhibitorů RNas. Uvolněná mRNA byla převedena na cDNA pomocí reverzní transkriptasy. Množství získané cDNA bylo kvantifikováno metodou real-time PCR (qPCR), přičemž jako endogenní kontrola kvantifikace byla použita mRNA (respektive cDNA) genu pro β-aktin. Relativní změna genové exprese IL-1/? po působení zlatnými komplexy byla vypočtena metodou AACT.
Pro stanovení in vitro protizánětlivé aktivity studovaných komplexů [AuCl(L2)(PPh3)] (2), [AuCl(L5)(PPh3)j (5) a Auranofinu byla použita výše uvedená metoda na stanovení vlivu testovaných zlatných komplexů na transkripci genů prozánětlivého cytokinu IL- ly? (HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin, HL5 = 6-(fenethyloxy)-9-deazapurin). Statistická analýza byla provedena programem ANOVA a Tuckey testem pro vícenásobné porovnání.
Výsledná genová transkripce IL-1/? (a.u.) u studovaných komplexů se rovná l,305±0,120 (komplex 2), l,791±0,765 (komplex 5), hodnota pro Auranofin je 2,258±0,345 a pro vehikulum (buňky, ke kterým byl přidám pouze LPS) je 4,197±0,965 (viz obrázek 11).
Příklad 8: In vitro cytotoxická aktivita zlatných komplexů na zvolených lidských nádorových liniích
Pro stanovení in vitro protinádorové aktivity připravených komplexů zlata(I) byl použit MTT test. Jedná se o mikrotitrační metodu hodnotící životaschopnost buněk redukcí 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) za vzniku modrého formazanového barviva. Jelikož k této přeměně dochází pouze v živých buňkách, kde jejich počet odpovídá množství zredukovaného MTT, lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek. V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenas. Vznikající formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO za použití klasického spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: osteosarkom (HOS), prsní adenokarcinom (MCF7), karcinom plic (A549), maligní melanom (G361), karcinom děložního čípku (HeLa), karcinom vaječníku (A2780), karcinom vaječníku rezistentní na cisplatinu (A2780R) a karcinom prostaty (22Rvl). Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2mM L-glutamin, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A549, Hela, HOS, MCF7, v RPMI-1610 médiu (2mM L-glutamin, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury A2780, A2780R, LNCaP a v McCoy's médiu (2mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury G361. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO2 po dobu 24 hodin. Testované zlatné komplexy a ligandy byly rozpuštěny nejdříve v A/V-dimethylformamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily
-10CZ 27030 U1 jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny 1000x v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0 až 50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5 % CO2. Poté byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT fozmazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm.
V Tabulce 2 jsou uvedeny inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ).
Tabulka 2: Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 1 až 5 a volných ligandů HL1 ío až HL5 zjištěné pomocí MTT testu a vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace
IC5o(pM), a jejich porovnání s cisplatinou jako zvoleným standardem
Komplex MCF7 HOS A549 G361 HeLa A2780 A2780R
[Au(L1)(PPh3)] (1) 3,1±0,6 3,3±0 4 20,7±2,9 3,5±0,5 22,0±1,9 4,8±0,3
[Au(L2)(PPh3)] (2) 0,6±0,4 0,9±0,5 17,2±2,2 3,4±0,3 16,0±0,7 4,0±0,5
[AU(L3)(PPh3)J (3) 2,2+0,5 4±1,9 21,4±0,5 3,4±0,5 20,7±0,5 4,6±0,9
[Au(L4)(PPh3)] (4) 4,0±2,8 1,8±1,0 >20 3,5+0,6 14,3±0,5 4,6±0,7
[Au(L5)(PPh3)] (5) >50 2,9±0,2 18,3±1,5 3,5±0,6 22,8±1,4 4,4±0,8
cisplatina 17,9±3,5 20,5±0,3 >50 5,3±0,7 >50 21,6+0,6
HL1 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL2 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL3 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL4 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL5 >50 >50 >50 >50 >50 >50
HL1 = 6-(ethoxy)-9-deazapurin; HL2 = 6-(isopropyloxy)-9-deazapurin; HL3 = 6-(tetrahydrofuran2-ylmethyloxy)-9-deazapurin; HL4 = 6-(benzyloxy)-9-deazapurin; HL5 = 6-(fenethyloxy)-915 deazapurin; MCF7 = lidský prsní adenokarcinom;

Claims (2)

  1. G361 = lidský maligní melanom; HeLa = lidský karcinom děložního čípku;
    A2780 = lidský karcinom vaječníků; A2780R = lidský karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině', 22Rvl = lidský karcinom prostaty.
    NÁROKY NA OCHRANU
    1. Komplexy zlata v oxidačním stavu (+1) s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinu a deriváty fosfanu, a jejich krystalosolváty, zahrnující strukturní motiv I obecného vzorce [Au(L)(PR3)] a vyjádřené strukturním vzorcem II,
    -11 CZ 27030 Ul kde
    - symbol L představuje deprotonizovaný ω-substituovaný derivát 6-alkyloxy-9-deazapurinu vázaný na atom zlata přes atom dusíku N7,
    - PR3 je derivát fosfanu,
    - substituenty R jsou nezávisle vybrány ze skupiny alkyl, cykloalkyl, substituovaný alkyl, substituovaný cykloalkyl, aryl, nebo heteroaryl, a/nebo jejich libovolné kombinace,
    - skupina Alk představuje alkyl nebo substituovaný alkyl, který je na ω-uhlíku substituován skupinou Rl, přičemž
    - substituent Rl je vybrán ze skupiny atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl, kde termín:
    - alkyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 8, především pak z 1 až 6 atomů uhlíku,
    - alkenyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
    - alkynyl představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 12, především pak ze 3 až 6 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
    - cykloalkyl představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8, atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
    - cykloheteroalkyl představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,
    - cykloalkenyl představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,
    - cykloheteroalkenyl představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,
    - substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl,
    - aryl představuje fenyl,
    - heteroaryl představuje aryl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra.
  2. 2. Krystalosolváty komplexů zlata vzorce II podle nároku 1, které mají vzorec [Au(L)(PR3)]-«Si9/v, v němž jsou
    - L a PR3 definovány v nároku 1,
    - n udává počet krystalosolvátových molekul, výhodně 1 až 6, a
    -12CZ 27030 Ul
    - Solv představuje molekulu použitého rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent, vybra-
CZ2014-29470U 2014-04-15 2014-04-15 Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění CZ27030U1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-29470U CZ27030U1 (cs) 2014-04-15 2014-04-15 Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-29470U CZ27030U1 (cs) 2014-04-15 2014-04-15 Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ27030U1 true CZ27030U1 (cs) 2014-06-10

Family

ID=50977287

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2014-29470U CZ27030U1 (cs) 2014-04-15 2014-04-15 Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění

Country Status (1)

Country Link
CZ (1) CZ27030U1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Colina-Vegas et al. Half sandwich Ru (II)-acylthiourea complexes: DNA/HSA-binding, anti-migration and cell death in a human breast tumor cell line
Pucci et al. Improving the bioactivity of Zn (II)-curcumin based complexes
JP6087889B2 (ja) 治療的使用のための新規７−デアザプリンヌクレオシド
EA022163B1 (ru) ДВОЙНЫЕ ИНГИБИТОРЫ PI3 КИНАЗЫ/mTOR
EP2781520B1 (en) Three-ring pi3k and/or mtor inhibitor
EP3411046B1 (en) Rapaglutins, novel inhibitors of glut and use thereof
CN101074229A (zh) 7－氮杂靛玉红和7－氮杂异靛蓝衍生物制备及其药学用途
Khater et al. Anticancer evaluation of new organometallic ruthenium (ii) flavone complexes
WO2023045816A1 (zh) 作为axl抑制剂的苯并环庚烷类化合物
Wei et al. Synthesis and biological evaluation of indazole derivatives as anti-cancer agents
JPH11322610A (ja) サイクリン依存性キナーゼ阻害剤
CN116490188A (zh) 含氮杂环类衍生物的盐、晶型及其制备方法和应用
Xu et al. High activity, high selectivity and high biocompatibility BODIPY-pyrimidine derivatives for fluorescence target recognition and evaluation of inhibitory activity
CA2516786A1 (en) Treatment of excessive osteolyisis with indolinone compounds
WO2023280177A1 (zh) 靶向BCL9/β-连环蛋白互相作用的小分子化合物
Gürbüz et al. Silver (I) N-heterocyclic carbene complexes: Synthesis, characterization and cytotoxic properties
EP4192467A1 (en) Synthesis of novel imipridone derivatives and their evaluation for their anticancer activity
JP6055481B2 (ja) 卵巣癌のための併用療法
TWI732249B (zh) Fgfr抑制劑、其製備方法和應用
CZ27030U1 (cs) Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění
CZ2014258A3 (cs) Komplexy zlata s ω-substituovanými deriváty 6-alkyloxy-9-deazapurinů a deriváty fosfanu a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k terapii zánětlivých a nádorových onemocnění
DK2699240T3 (en) Acadesinderivater, products, and compositions therefore, their therapeutic uses and processes for their synthesis
KR20100040806A (ko) 피라졸로피리미디논 키나아제 억제제
CZ2014326A3 (cs) Komplexy zlata s deriváty hypoxantinu a s deriváty fosfanu a jejich použití pro přípravu léčiv v protizánětlivé a protinádorové terapii
CN112358518A (zh) 一种苯并咪唑衍生物bi277及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
FG1K Utility model registered

Effective date: 20140610

MK1K Utility model expired

Effective date: 20180415