CZ300249B6 - Inhibitory faktoru VIIa, zpusob jejich prípravy a farmaceutický prostredek, který je obsahuje - Google Patents

Abstract

Peptidové inhibitory faktoru VIIa se silným antitrombotickým úcinkem obecného vzorce R.sup.1.n.-A-B-D-E.sub.n.n.-R.sup.2.n., ve kterém R.sup.1.n. znamená R.sup.12.n.C(O), kde R.sup.12.n. je (C.sub.2.n.-C.sub.6.n.)-alkenyloxyskupina nebo (C.sub.2.n.-C.sub.6.n.)-alkenylaminoskupina, A je zbytek (L)-4-amidinofenylalaninu, B je zbytek kyseliny (L)-glutamové nebo její soli nebo esteru, D a E.sub.n.n. mohou být ruzné aminokyseliny, jejichž význam je uveden v nárocích a R.sup.2.n. je C-koncová amidoskupina, která muže být dále substituována. Farmaceutická kompozice obsahující tyto slouceniny a jejich použití jako inhibitoru aktivovaného krevního koagulacního faktoru VIIa.

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových sloučenin, způsobu jejich přípravy, jejich použití a farmaceutických kompozic obsahujících tyto sloučeniny, které mají silný antitrombotický účinek prostřednictvím reverzibilní inhibice aktivovaného krevního koaguíačního faktoru Vila (FVIIa).

Dosavadní stav techniky

Vznik trombu je normálně následkem poranění tkáně, které spouští koagulační kaskádu a zpo15 maluje nebo zabraňuje toku krve při hojení poranění. Jiné faktory, které se přímo netýkají poranění tkáně, jako ateroskleróza a zánět, mohou také spustit koagulační kaskádu a mohou vést k patologickým následkům.

Koagulace krve je složitý proces, který se skládá z postupně zesílené řady aktivačních reakcí 20 enzymů, při kterých jsou plasmatické zymogeny postupně aktivované omezenou proteolýzou.

Mechanicky byla koagulační kaskáda krve rozdělena na vnitřní a vnější systémy, které se setkávají při aktivaci faktoru X; následná tvorba trombinu pokračuje jednoduchou společnou cestou (viz schéma 1).

Vňirfrií Vnější

Protrombirt ~^;:——> Trombin . ·. ' · 1

Y

Fibrincgen.. · -^:. Fibrin

Schéma 1: Koagulační kaskáda krve

Současné důkazy naznačují, že vnitřní systém hraje důležitou roli při udržení a nárůstu tvorby fibrinu, zatímco vnější cesta je rozhodující při počáteční fázi koagulace krve (H. Cole, Aust. J. Med. Sci. 16, 87 (1995); G. J. Brože, Blood Coagulatíon and Fíbrinolysis 6, dodatek 1, 7 až 16 (1995)). Obecně je přijímáno, že koagulace krve je fyzicky iniciována při tvorbě tkáňového faktoru(TF)/komplex faktoru Vila. Jak je tento komplex jednou vytvořený, rychle zahajuje koagula35 ci pomocí aktivačních faktorů IX a X. Nově vytvořený aktivovaný faktor X, tj. faktor Xa, pak vytváří jedna k jedné komplex s faktorem Va a fosfolipidy za vzniku protrombinázového kom-1CZ 300249 B6 plexu, který je zodpovědný za konverzi rozpustného fibrinogenu na nerozpustný fíbrin prostřednictvím aktivace trombinu z jeho prekurzorů protrombinu. S postupem časuje aktivita komplexu faktor Vlla/tkáňový faktor (vnější systém) potlačena proteinovým inhibitorem typu Kunitzovy proteázy, TFPI, který, když tvoří komplex s faktorem Xa, může přímo inhibovat proteolytickou aktivitu faktoru VIIa/tkáňového faktoru. Aby se udržela koagulace za přítomnosti inhibovaného vnějšího systému, tvoří se prostřednictvím aktivity vnitřního systému zprostředkované trombinem další faktor Xa. Tudíž má trombin dvojí autokatalytickou úlohu; zprostředkovává svou vlastní produkci a konverzi fibrinogenu na Fíbrin.

io Autokatalytická povaha tvorby trombinu je důležitou pojistkou proti nekontrolovanému krvácení, a to zajišťuje, že jakmile je přítomna prahová hladina protrombinázy, koagulace krve bude pokračovat do svého dokončení. Schopnost vytvářet krevní sraženiny je životně důležitá pro přežití. Při jistých chorobných stavech však je tvorba krevních sraženin v oběhovém systému sama o sobě zdrojem úmrtnosti. Nicméně je u takových chorobných stavů nežádoucí úplně inhibovat koa15 guíaci, protože by mohlo nastat život ohrožující krvácení. Takže je žádoucí vyvinout činidlo, které zpomaluje koagulaci inhibicí faktoru Vila bez přímé inhibice trombinu.

Při mnohých klinických aplikacích existuje velká potřeba prevence intravaskulárního srážení krve nebo antikoagulační léčby. Současně dostupné léky nejsou při mnohých klinických aplika20 cích uspokojivé. Například téměř u 50 % pacientů, kteří prodělali úplnou náhradu kýče lni ho kloubu, se vyvine hluboká žilní trombóza (DVT). V současné době uznávané léčení zahrnuje fixní dávky heparinu o nízké molekulové hmotnosti (LMWH) a proměnlivé dávky heparinu. Dokonce i při tomto režimu podávání léků se u 10 az 20 % pacientů vyvine hluboká žilní trombóza a u 5 až 10 % se vyvinou krvácivé komplikace.

Jiná klinická situace, kdy jsou potřeba lepší antikoagulanty, se týká pacientů prodělávajících transluminální koronární angioplastiku a pacientů ohrožených infarktem myokardu nebo trpících nestabilní angínou. Současná obecně uznávaná léčba, která se skládá z podávání heparinu a aspirinu, je během 24 hodin po výkonu spojena s 6 až 8% náhlým uzávěrem krevních cév. Stupeň krvácivých komplikací vyžadujících léčbu transfúzí je, díky léčbě heparinem, také přibližně 7 %. Mimoto, i kdyby byl opožděný uzávěr významný, podávání heparinu po ukončení výkonu má malý význam a může být škodlivé.

Nej rozšířenější používané inhibitory koagulace krve jsou heparin a příbuzné sulfatované poly35 sacharidy, heparin o nízké molekulové hmotnosti a heparinsulfát. Tyto molekuly vykonávají své antikoagulační účinky podporou vazby přirozeného regulátoru koagulace, antitrombinu III, k trombinu a faktoru Xa. Inhibiční aktivita heparinu je primárně zaměřena proti trombinu, který je inaktivován přibližně 100-krát rychleji, než faktor Xa. Hirudin a hiřulog jsou dva další antikoagulanty specifické pro trombin, které jsou v současné době v klinických zkouškách. Avšak tyto antikoagulanty, které inhibují trombin, jsou také spojené s krvácí vými komplikacemi. Preklinické studie u paviánů a psů ukázaly, že cílové enzymy zapojené v raných stupních koagulační kaskády, jako jsou faktor Xa nebo faktor Vila, zabraňují tvorbě sraženin aniž vyvolají vedlejší krvácivé účinky pozorované u přímých inhibitorů trombinu (T. Yokoyama, A. B. Kelly, U. M. Marzec, S. R. Hanson, S. Kunitada, L. A. Harker, Circulation, 92, 485 až 491 (1995);

L. A. Harker, S. R. Hanson, A. B. Kelly, Tromb. Hemostas, 74, 464 až 472 (1995); C. R. Benedict, J. Ryan, J. Tod, K. Kuwabara, P. Tyburg jr., J. Cartwright, D. Stem, Blood, 8Ί, 2059 až 2066(1993)).

Specifická inhibice katalytického komplexu faktor Vlla/tkáňový faktor, která používá mono50 klonální protilátku (mezinárodní patentová přihláška WO 92/06711) a protein, jako je chlormethylketon inaktivující FVITa (mezinárodní patentová přihláška WO 96/12800 a WO 97/47651), je extrémně účinným prostředkem kontroly tvorby trombu způsobeného náhlým poraněním arterie nebo trombotickými komplikacemi souvisejícími s bakteriální septikémií. Existuje také experimentální důkaz naznačující, že inhibice aktivity faktoru VÍIa/TF inhibuje vznik restenózy po balónové angioplastice (L. A. Harker, S. R. Hanson, J. N. Wilcox, A. B.Kelly,

-2CZ 300249 B6

Haemostasis, 26, sv. i, 76 až 82 (1996)). Studie krvácivosti byly prováděny na paviánech a ukázaly, že inhibiee komplexu faktoru Vlla/tkáňového faktoru je nej bezpečnější s ohledem na terapeutickou účinnost a nebezpečí krvácení ze všech testovaných antikoagulacních přístupů, včetně inhibiee trombinu, krevních destiček a faktoru Xa (L. A. Harker, S. R. Hanson, A. B.

Kelly, Tromb. Hemostas., 74,464 až 472 (1995)).

Specifický inhibitor faktoru Vila by měl být v lékařské praxi značně využitelný. Zvláště by měl být inhibitor faktoru Vila účinný za okolností, kde současné léky, jako je heparin a příbuzné sulfátované polysacharidy, nejsou účinné nebo jsou účinné pouze omezeně. Existuje tedy potřeba io nízkomolekulámích inhibitorů koagulace krve specifických vůči faktoru Vila, které by byly účinné, ale neměly nežádoucí vedlejší účinky. Předkládaný vynález splňuje tento požadavek tím, že poskytuje deriváty obecného vzorce I inhibující aktivitu faktoru Vila a nabízí výhody uvedené výše.

Podstata vynálezu

Sloučeniny obecného vzorce I jsou inhibitory koagulačního faktoru Vila. Tento vynález se také týká způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce I, způsobů inhibiee aktivity faktoru Víla a inhibiee krevní koagulace, použití sloučenin obecného vzorce Γ při léčbě a profylaxi nemocí, které mohou být léčeny nebo se jim může předejít inhibicí aktivity faktoru Vila, jako jsou tromboembolické nemoci včetně trombózy, restenózy, infarktu a angíny, a použití těchto sloučenin obecného vzorce I při přípravě léků, které lze použít při léčení těchto onemocnění. Vynález se dále týká kompozic obsahujících sloučeninu vzorce I ve směsi nebo jiné kombinaci s inertním nosičem, zejména farmaceutických kompozic obsahujících sloučeninu vzorce I společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo přísadami a/nebo pomocnými látkami nebo aditivy.

Předkládaný vynález poskytuje sloučeniny, které specificky inhibují aktivitu faktoru Vila. Zvláště jsou předmětem podle předkládaného vynálezu sloučeniny obecného vzorce I

R’-A-B-D-E„-R² ([), ve kterém

R¹ je R^I2C(O), kde

R¹² je (Cr-Csj-alkenyloxyskupina nebo (C₂-C₆)-alkenylaminoskupina, kdy každá obsahuje jednu dvojnou vazbu, kdy alkenylová skupina je lineární nebo rozvětvená; '

A je zbytek (L)-4-amidinofěnylalaninu;

B je zbytek (L)~glutamové kyseliny nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru;

D je NH~CHR^S!-C(O), kde

R⁸² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a zbytky vybrané ze skupiny, kterou tvoří (C,-C₆)~alky 1, fenyl, fenyl-(C₁-C2)-alkyl a heteroaryl4Ci-C₂)-alkyl, kdy tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří amino, aminokarbonyl, amidino, guanidino, amino50 alkyl, hydroxy, merkapto, které mohou být všechny substituované chránící skupinou, a acetimido, nitro a kyano, a kde alkylová skupina v substituentech je nasycená, lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, a kde chránící skupina je vybraná ze skupiny, kterou tvoří terc-butoxykarbonyl, benzyloxykarbonyl, allyloxykarbonyl, nitro, benzyI, methyl, trityl a acetylaminomethyl;

-3CZ 300249 B6

E, je (NH-CHR^,2-C(O))„, kde n je nula, jedna nebo dva, zbytky R⁷², které jsou na sobě nezávislé a jsou stejné nebo různé, jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a zbytky C₃-C₈)-alkyI, fenyl, fenyl-(C_t-Č2)-alkyl a heteroaryl-(Ci-C2)-alkyl, přičemž tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde (C₃-C₈)-alkyl je lineární, rozvětvený nebo cyklický alkyl nebo cykloalky 1-(0^6^)-alkyl, a kde substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkyloxy, halogen, trifluormethyl, nitro, kyano, alkylsulfonyt, alkylkarbonyl, fenylkarbonyl a 2~fenyl-1,3-úithiolan-2-yl, a kde alkylová skupina v substituentech je nasycená, lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku;

R² jeNR²¹R²², kde ¹⁵

R²¹ je atom vodíku, (Ci-C₄)-alkyl nebo fenyl-(C]-C₄)-alkyl,

A A

R je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a skupiny (Cj-Cný-alkyl, (Q-Cnj-aryl, (Ci~C4)-alkyl substituované jedním nebo dvěma (Q-Cnj-arylovými zbytky, (Ci~C₄)-alkyl sub20 stituovaný monocyklickým nebo bicyklickým heteroarylovým zbytkem obsahujícím jeden nebo dva heteroatomy vybrané ze skupiny, kterou tvoří N, O a S, a (Ci-C₄)-alkyl substituovaný heterocykloalkylovou skupinu, kde tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde (Cj-C_i2)-alkyl je lineární, rozvětvený nebo cyklický alkyl nebo cykloalky 1-(Ci-C₄)^alkyl, a kde substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří halogen, trifluormethyl, hydroxy, nitro, kyano, alkyloxy, alkylendioxy, dialkylamino, alkylsulfonyl, aminosulfonyl a =O, a kde alkylové a alkylenové skupiny v substituentech jsou nasycené, lineární nebo rozvětvené a obsahují 1 až 6 atomů uhlíku;

heteroaryl je aromatická skupina obsahující 5 až 13 kruhových atomů uhlíku, ze kterých jsou jeden, dva nebo tři atomy uhlíku nahrazeny heteroatomy vybranými ze skupiny, kterou tvoří N, O a S;

heterocykloalkyl je monocyklická cyklická alkylová skupina obsahující 4 až 7 kruhových atomů uhlíku, ze kterých jsou jeden nebo dva atomy uhlíku nahrazeny heteroatomy vybranými ze sku35 piny, kterou tvoří N, O a S;

ve všech jejích stereoizomerních formách nebo směs stereoizomerů v jakémkoli poměru, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl. ⁴⁰

Podrobný popis vynálezu

Předkládaný vynález se týká peptidů vzorce I

R'-A-B-D-E_n-R² (I), kde R , R , A, B, D, E a n jsou definovány výše, což jsou sloučeniny, které inhibují aktivitu faktoru VUa, ale v podstatě neinhibují aktivitu jiných proteáz zahrnutých do procesu koagulace krve. Ve sloučeninách vzorce I jsou obsaženy strukturní jednotky (například ve skupinách A, B, D nebo E nebo ve skupině R¹ představují jednu, dvě nebo tři aminokyseliny), kterými jsou aminokyseliny nebo jejich deriváty nebo analoga aminokyselin nebo mimetické struktury a které jsou peptidicky vázané k sousední skupině prostřednictvím vazeb C(0)-N vznikajících mezi karboxylovou skupinou jedné z těchto aminokyselin a aminoskupinou jiné aminokyseliny. Jak je v chemii peptidů běžné, dvouvazný zbytek aminokyseliny nebo skupiny, jako A, B, D nebo E,

-4CZ 300249 B6 které jsou přítomny ve vzorci I, se získá z příslušné aminokyseliny formálním odtržením atomu vodíku z aminoskupiny a hydroxylové skupiny karboxylové skupiny.

Podle předkládaného vynálezu znamená termín „aminokyselina“ v nej širším smyslu přírodní aminokyseliny, které jsou přeneseny z genetického kódu a obsahují proteinové stavební bloky, včetně (pokud není uvedeno jinak) L-aminokyselin a D-aminokyselin, a také chemicky modifikovaných aminokyselin, jako jsou analoga aminokyselin, přírodní aminokyseliny, které obvykle nejsou součástí proteinů, jako je norleucin a chemicky syntetizovaných sloučenin, o kterých je odborníkům pracujícím v této oblasti známé, že mají vlastnosti aminokyselin. Například analoga io nebo mimetika fenylalaninu nebo prolinu, která umožňují stejná konformační omezení peptidových sloučenin jako Phe nebo Pro, patří do definice „aminokyselin“ a jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známá. Tato analoga a mimetika se podle vynálezu označují jako „funkční ekvivalenty“ aminokyselin. Další příklady aminokyselin a analog aminokyselin jsou uvedeny v Roberts a Vellaccio (The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, eds. Gross a Meienhofer, díl

5, str. 341, Academie Press, lne., New York 1983, což je zde uvedeno jako odkaz). Zkratky aminokyselin, analog aminokyselin a mimetických struktur a také zkratky používané v přihlášce, jsou uvedené v tabulce 1.

Tabulka 1: Zkratky používané v přihlášce

Sloučenina/zbytek Zkratka

Kyselina octová AcOH

Acetylaminomethyl Acm

Alanin Ala

---Allyloxykarbonyl Alloc p-Amidinofenylalanin pAph

2-Aminomáselná kysel ina 2-Abu

Arginin Arg

Aspargin Asn

Aspartová kyselina Asp benzylová kyselina Bzl terc.-Butyloxykarbonylová skupina Boc terc.-Butylová skupina tBu

Cyklohexylglycin Chg

Cyklohexylová skupina Chx

Cyklohexylalanin Cha

Cystein Cys

2,4-Diaminomáselná kyselina Dab

2,3-Diaminopropionová kyselina Dap

Diehlorrnethan DCM

Diisopropylkarbodiimid DIC

Diisopropylethylamin DIE A

Ν,Ν-Dimethylformamid DMF

Dimethylsulfoxid DMSO

9-Fluorenylmethyloxykarbonyl FmoC

Glutamová kyselina Glu

Glutamin Gin

Glycin Gly

Histidin His

N-Hydroxybenzotriazol HOBt

4-Hydroxymethylfenoxyoctová kyselina HMPA

Isoleucin Ile

Leucin Leu

Lysin Lys

5CZ 300249 B6

Methylová skupina Me

N-Methylimidazol NMI

N-Methylmorfolin NMM

2,2,5,7,8-Pentamethyl-chroman-6-sulfonyl PMC

Omithin Om

Fenylová skupina Ph

Fenylalanin Phe

Fenylglycin Phg

Prolin Pro io Serin Ser

Tetrahydrofuran THF

Tetramethylfluorformamidínohexafluorfosfát TFFH threonin Thr

Trifluoroctová kyselina TFA , trityl Trt

Tryptofan Trp

Valin Val

Pokud není uvedeno jinak, aminokyseliny popsané zkratkami výše mají konfiguraci L. Atnino20 kyseliny, které mají konfiguraci D, jsou označeny předponou D s použitím třípísmenného kódu (například D-Ala, D-Cys, D-Asp, D-Trp, D-pAph). Zkratky jako například, Phe(4-CN) a Phe[4-C(-S-CH₂-CH₂-S-)-Ph] označují zbytek fenylalaninu, který v poloze 4 fenylové skupiny nese kyanoskupinu nebo 2-fenyl-l,3-dithiolan-2-ylovou skupinu. Zkratka, jako například Dap[-C(=NH)-NH2]_> znamená zbytek aminokyseliny 2,3-diaminopropionové kyseliny, ve které je aminoskupina v postranním řetězci, tj. aminoskupina v poloze 3, substituovaná amidinovou , skupinou -C(=NH)-NH₂- (karbamimidoylovou.skupinou), čím vznikne guanidinová skupina NH-C(=NH)-NH₂ připojená k poloze 3 propionové kyseliny. Zkratky jako například Om[C(=NH)-NH2] nebo Cys(Me) znamenají zbytek omíthinu, kde aminoskupina v postranním řetězci nese amidinovou skupinu nebo zbytek cysteinu, kde merkaptoskupina nese methylovou skupi30 nu.

Termíny TOTU, HATU a BOP znamenají O-[kyan(ethoxykarbonyl)methylenamino]-l, 1,3,3tetramethyluroniumtetrafluorborát, O-(7-azabenzotrÍazol-l-yl)-l ,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfát a l-benzotriazolyloxytris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfát.

Podle předkládaného vynálezu znamená termín „specifický“ v souvislosti s inhibitorem aktivity faktoru Víla, že sloučenina vzorce I může inhibovat aktivitu faktoru Vila, aniž by v podstatě inhibovala aktivitu jiných specifikovaných protéáz, včetně plasminua trombinu (zá použití stejné koncentrace inhibitoru). Tyto proteázy jsou zahrnuty do koagulace krve a fibrinolýzové kaskády.

Podle předkládaného vynálezu znamená termín „substituent“ jakoukoli chemickou skupinu, která je substituovaná na peptidickém řetězci nebo na postranním řetězci peptidu, analogu peptidu, mímetické nebo organické sloučenině podle předkládaného vynálezu. Substituentem může být jakákoli skupina, která je odborníkům v této oblasti známá (viz například, Giannis a Kolter,

Angew. Chem. Int., vyd. EngL, 32, 1244 až 1267 (1993), která je zde uvedena jako odkaz).

Podle předkládaného vynálezu znamená termín „alkylová skupina“ v nej širším smyslu nasycený nebo nenasycený, lineární, rozvětvený nebo cyklický řetězec obsahující asi 1 až 13 atomů uhlíku, přičemž samozřejmě nenasycené skupiny obsahují minimálně 2 atomy uhlíku a cyklické alkylové skupiny obsahují nejméně 3 atomy uhlíku. Nenasycená skupina může obsahovat jednu nebo více dvojných vazeb a/nebo trojných vazeb. Termín „alkylová skupina“ tedy zahrnuje například následující skupiny: methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, isobutylová skupina, sek-butylová skupina, terc-butylová skupina, 1methylbutylová skupina, 2,2-dimethylbutylová skupina, 2-methylpentylová skupina, 2,255 dimethylpropylová skupina, n-pentylová skupina a n-hexylová skupina, alkylenové skupiny,

-6CZ 300249 B6 cyklické řetězce uhlíkových atomů jako je cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina a cykloheptylová skupina, stejně jako kombinace lineárních nebo rozvětvených řetězců a cyklických řetězců uhlíkových atomů jako je methy 1cyklohexylová skupina, cyklohexylmethylová skupina, 1-cyklohexylethylová skupina, 2-cyklo5 hexylethylová skupina, cyklopentylmethylová skupina, 1-cyklopentylmethylová skupina, 2cyklopentylethylová skupina, cyklopropylmethylová skupina, 1-cyklopropylethylová skupina, 2cyklopropylethylová skupina nebo cyklopropylmethylenová skupina. Alkylová skupina tedy zahrnuje cyklické alkylové skupiny, které nesou jeden nebo více alkylových substituentů. Dalšími příklady alkylových skupin jsou níže uvedené příklady nenasycených skupin. Dále je třeba io rozlišovat, že alkylová skupina definovaná podle vynálezu může být substituovaná jedním nebo více stejnými nebo různými substituenty, například jedním, dvěma, třemi nebo čtyřmi substituenty, které mohou být přítomny v jakékoli vhodné poloze.

Termín „alkylová skupina“ s výhodou znamená nasycený, lineární nebo rozvětvený řetězec obsa15 hující 1 až 6 atomů uhlíku, nenasycený lineární nebo rozvětvený řetězec obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo cyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 atomů uhlíku, zejména 3 až 6 atomů uhlíku nebo 4 až 6 kruhových atomů uhlíku. Pokud jde o nenasycené alkylové skupiny, jsou výhodné alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů,uhlíku a alkinylová skupina obsahující 2 až, 6 atomů uhlíku. Příklady nenasycených alkylových skupin jsou alkenylové a alkinylové skupiny, jako jsou vinylová alkenylové a alkinylové skupiny jako jsou vinylová skupina, prop-l-enylová skupina, prop-2-enylová skupina (=allylová skupina), but-2-enylová skupina, buten-3-ylová skupina, 3-methylbut-2-enylová skupina, ethinylová skupina, prop-2-ίnylová skupina, but-2inylová skupina a podobné.

Podobně termín „acylová skupina“ znamená v nejširším významu nasycený nebo nenasycený,

- lineární, rozvětvený nebo cyklický řetězec obsah ující.l až 13 atomů uhlíku nebo ary love skupiny^ obsahující 5 až 13 atomů uhlíku, které jsou připojené ke karbonylové skupině -C(O)- a jsou vázané prostřednictvím jmenované karbonylové skupiny. Acylová skupina se může považovat za odvozenou od odpovídajících sloučenin obsahujících karboxylovou skupinu C(O)-OH formálním odtržením hydroxylové skupiny. Termín „acylová skupina“ tedy zahrnuje například skupiny, jako je formylová skupina, acetylová skupina, benzoylová skupina a podobně. Výhodná skupina acylových skupin zahrnuje níže uvedené nasycené nebo nenasycené, lineární, rozvětvené nebo cyklické řetězce, které mají výhodný počet atomů uhlíku, které dále obsahují karbonylovou skupinu, prostřednictvím které jsou vázané.

Termín „arylová skupina“ znamená aromatické skupiny obsahující 5 až 13 atomů uhlíku v kruhu a nejméně jedna „kruhová“ skupina obsahuje konjugovaný π elektronový systém. S výhodou termín- „arylová skupina“ znamená aromatickou skupinu obsahující 6 až 10 atomů uhlíku v kruhu. Mezi příklady ary lových skupin patří například fenylová skupina, naftylová skupina, jako je

1-naftylová skupina a 2-naftylová skupina, fluorenylová skupina, bifenylylová skupina ajejich analoga a deriváty, z nichž všechny mohou být popřípadě substituovány jedním nebo více, například jedním, dvěma, třemi nebo čtyřmi stejnými nebo různými substituenty, které mohou být přítomny v jakékoliv požadované vhodné poloze. Například monosubstituovaná fenylová skupina se může substituovat v poloze 2, 3 nebo 4, dvojnásobně substituovaná fenylová skupina v polohách 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- nebo 3,5Termín „arylalkylová skupina“ znamená alkylovou skupinu, která je definovaná výše, substituovanou jednou nebo více, například jednou nebo dvěma, stejnými nebo různými arylovými skupinami. Mezi vhodné arylalkylové skupiny patří benzylová skupina, fenetylová skupina, jako je 150 fenetylová skupina a 2-fenetylová skupina, difenylmethylová skupina, difenetylová skupina, jako je 1,2-difenethylová skupina a 2,2—dí fenetylová skupina, fenylpropylová skupina, jako je 1fenylpropylová skupina, 2-fenylpropylová skupina a 3-fenyl propy lová skupina, difenyípropy lová skupina, jako je 2,3-difenyipropylová skupina a 3,3-difenylpropylová skupina, naftylmethylová skupina, naftyléthylová skupina, jako je 1-naftylethylová skupina a 2-naftylethylová skupi55 na, naftylpropylová skupina, jako je 1-naftylpropylová skupina, 2-naftylpropylová skupina a 3-7CZ 300249 B6 naftylpropylová skupina, 1,2,3,4-tetrahydro-l-naftylová skupina, l,2,3,4~tetrahydro-2-naftylová skupina a podobné, z nichž všechny mohou být popřípadě substituované.

Termíny „heteroalkýlová skupina“, „heteroalkenylová skupina“, „heteroalkinylová skupina“, „heteroarylalkylová skupina“ a „heteroarylová skupina“ znamenají podle předkládaného vynálezu alkylovou skupinu, arylalkylovou skupinu a arylovou skupinu, kde jeden nebo více atomů uhlíku, například jeden, dva nebo tři atomy uhlíku, jsou nahrazeny stejnými nebo různými heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry. Dále, termín „heterocykloalkylová skupina“ znamená cyklickou alkylovou skupinu, ve které je jeden nebo více kruhových atomů uhlíku nahrazeno heteroatomy. S výhodou znamená tennín „heterocykloalkylová skupina“ cyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 kruhových atomů uhlíku, ze kterých jsou 1, 2 nebo 3 nahrazeny stejnými nebo různými heteroatomy vybranými ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry. Všechny tyto skupiny mohou být vázány prostřednictvím kterékoli vhodné polohy, včetně vhodných kruhových atomů dusíku, pokud jde o dusíkaté heteroeykly.

Mezi vhodné heteroarylové skupiny, heteroarylalkylové skupiny, heteroalkylové skupiny a heterocykloal kýlové skupiny patří, například 2-pyridylová skupina, 3-pyridylová skupina, 4-pyridylová skupina, 2-thienylová skupina, 3-thienylová skupina, tndolylová skupina, imidazolylová skupina, furylová skupina, piperonylová skupina, 2—pyridylmethylová skupina, 3-pyridylmethylová skupina, 4-pyridylmethylová skupina, 1 —(2—pyridyl)ethylová skupina, 1-(3-pyridyl)ethylo20 vá skupina, l-(4~pyridyl)ethylová skupina, 2-(2-pyridyl)ethylová skupina, 2-(3-pyridyl)ethýlová skupina, 2-(4-pyridyl)ethylová skupina, pikolylová skupina, pyrrolidinylová skupina, piperidinylová skupina, tetrahydro fůry lová skupina, tetrahydrofuran-2-yl methylová skupina, morfolinylová skupina, 4-morfo líny lová skupina, 2-(4-morfolinyl)ethylová skupina, piperazinylová skupina, 2-(4-methylpiperazin-l-yl)ethylová skupina a podobné, z nichž všechny mohou být . 25 popřípadě substituovány jedním nebo více, například jedním, dvěma, třemi nebo čtyřmi stejnými nebo různými substituenty. Peptidy podle předkládaného vynálezu se mohou modifikovat na N-konci a/nebo na C-konci reakcí s vhodnými činidly nebo zavedením (nebo přítomností) skupiny chránící aminoskupinu nebo karboxylovou skupinu. N-konec peptidú nebo analogu peptidú se může chemicky modifikovat tak, že se N-koncová aminoskupina substituuje například acylovou skupinou (například acetylovou skupinou, cyklopentylkarbonylovóu skupinou, isochinolinkarbonylovou skupinou, furoylovou skupinou, tosylovou skupinou, benzoylovou skupinou, pyrazinkarbonylovou skupinou nebo jinými takovými skupinami), reakcí s isokyanátem, chloroformiátem, alkylačním činid- .

lem nebo zavedením jiné takové skupiny, přičemž všechny tyto skupiny mohou být substituovány substituenty popsanými výše. Je třeba poznamenat, že „aminoskupina“ se podle vynálezu používá ve smyslu jakékoli volné aminoskupiny, včetně primární, sekundární nebo terciární aminoskiipiny, přítomné na peptidú. Pro vyjasnění znamená „N-konec“ α-aminoškupinu první aminokyseliny přítomné na peptidú psaném obvyklým způsobem.

N-konec peptidú podle předkládaného vynálezu se může chránit jeho vazbou ke skupině chránící aminoskupinu. Termín „skupina chránící aminoskupinu“ znamená obecně chemickou skupinu, která se může reagovat s volnou aminoskupinou, včetně například α-aminoskupiny přítomné na N-konci peptidú podle předkládaného vynálezu. Po takové reakci skupina chránící aminoskupinu chrání jinak reaktivní aminoskupinu proti nežádoucím reakcím, ke kterým by mohlo dojít například během syntézy nebo z důvodu aktivity exopeptidázy na konečné sloučenině. Modifikací aminoskupiny se může také dosáhnout dalších výhod, mezi které patří například zvýšení rozpustnosti nebo aktivity sloučeniny. Různé skupiny chránící aminoskupinu jsou uvedeny podle předkládaného vynálezu nebojsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé a patří mezi ně napří50 klad acylová skupina, jako je acetylová skupina, terč-butyl oxy karbony lová skupina, allyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina nebo benzoylová skupina, stejně jako aminoacylové skupiny, které samotné mohou být modifikovány skupinou chránící aminoskupinu. Jiné skupiny chránící aminoskupinu jsou popsány například v publikaci The Peptides, vyd. Gross and Meienhofer, sv. 3, (Academie Press, lne., New York (1981)); a Greenem a Wutsem v publi55 kaci Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vyd., vyd. John Wiley & Sons, New York, str.

-8 CZ 300249 B6

309 až 405, 1991, z nichž každá je zde uvedena jako odkaz. Produkt jakékoliv takové modifikace N-koncové aminoskupiny peptidu nebo peptidového analoga podle tohoto vynálezu je zde nazýván jako „derivát N-konce“.

Podobně může být karboxylová skupina, jako je karboxylová skupina přítomná na C-konci peptidu chemicky modifikovaná za použití skupiny chránící karboxylovou skupinu. Termíny „karboxylová skupina“ a „C-konec“ se používají způsobem, který odpovídá termínů „aminoskupina“ a „N-konec“ definovaným výše. Karboxylová skupina jako je ta, přítomná na C-konci peptidu, se může modifikovat redukcí C-koncové karboxylové skupiny na alkohol nebo na aldehyd nebo io přípravou orálně využitelného esteru nebo substitucí karboxylové skupiny substituentem, jako je thiazolylová skupina, cyklohexylová skupina nebo jiná skupina. Orálně využitelné estery jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé a obsahují například alky loxymethy lové skupiny jako je methoxym ethylová skupina, ethoxy methylová skupina, isopropoxymethylová skupina a podobně; l-(alkyloxy)ethylové skupiny obsahující valkoxylové části 1 až 4 atomy uhlíku, jako je methoxyethylová skupina, ethoxyethylová skupina, propoxyethylová skupina, isopropoxyethylová skupina a podobně; 2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethylové skupiny, jako je 5-methyl-2oxo-1,3”dioxolen-4-ylmethylová skupina, 5-fenyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethylová skupina a podobně; (alkylthio)methylové skupiny obsahující v alkylové části 1 až 3 atomy uhlíku, jako je methylthiomethylová skupina, ethylthiomethylová skupina, isopropylthiomethylová skupina a podobně; acyloxymethylové skupiny, jako je pivaloyloxymethylová skupina, acetoxymethylová skupina a podobně; ethoxykarbonylmethylová skupina; 1-acyloxy-l-substituované methylové skupiny, jako je 1-acetoxyethylová skupina; 3-ftalidylové nebo 5,6-dimethylftalidylové skupiny; l-((alkyloxy)karbonyloxy)ethylové skupiny obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, jako je l-(ethoxykarbonyloxy)ethylová skupina; a l-((alkyloxy)karbonyloxy)ethylové skupiny obsa25 hující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, jako je 1-(methylaminokarbonyloxy)ethylová skupina. Peptidy podle předkládaného vynálezu mohou být dále modifikovány připojením skupiny chránící karboxylovou skupinu. Skupiny chránící karboxylovou skupinu jsou v oboru dobře známé a po vazbě k peptidu, chrání karboxylovou skupinu proti nežádoucím reakcím (viz, například, Greene a Wuts, viz. výše, str. 224 až 276 (1991), která je zde zahrnuta jako odkaz). Odbor30 níkovi v této oblasti je zřejmé, že takové modifikace, jako jsou popsány výše, které mohou být provedeny na N-koncové aminoskupině nebo C-koncové karboxyskupině peptidu, mohou být podobně provedeny na jakékoliv reaktivní aminoskupině nebo karboxylové skupině přítomné například v postranním řetězci aminokyseliny nebo analogu aminokyseliny v peptidu podle tohoto vynálezu. Způsoby provádění takových modifikací jsou popsány podle vynálezu nebo jsou odborníkovi v této oblasti známé.

Výběr L- nebo D-aminokyseliny obsažené ve sloučenině podle předkládaného vynálezu může částečně záviset na požadovaných vlastnostech peptidu. Začlenění jedné nebo více D-aminókyselin může například propůjčit sloučenině zvýšenou stabilitu in vitro nebo in vivo. Začlenění jedné nebo více D-aminokyselin může také zvýšit nebo snížit farmakologíckou aktivitu sloučeniny. V některých případech může být žádoucí, aby sloučenina zůstala aktivní pouze krátkou dobu. V těchto případech může začlenění jedné nebo více L-aminokyselin do sloučeniny umožnit endogenní peptidáze rozložit sloučeninu u pacienta in vivo, a tím omezit expozici pacienta aktivní sloučenině. Odborník pracující v této oblasti může určit vhodné vlastnosti, které má slou45 cenina podle vynálezu mít, na základě věku a celkového zdravotního stavu pacienta. Obecně se předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce I ve všech jejich stereoizomemích formách a směsí dvou nebo více stereoizomerů ve všech poměrech, například čistých enantiomerů, čistých diastereoizomerů, směsí dvou enantiomerů ve všech poměrech, včetně racemátů, směsí diastereoizomerů, cis izornerů, trans izornerů, E izornerů nebo Z izornerů. Předkládaný vynález se také týká sloučenin vzorce I ve všech tautomemích formách. Dále se předkládaný vynález týká proléčiv sloučenin vzorce I, například esterů, amidů, aldehydů nebo alkoholů, které lze získat z karboxylových skupin, jak již bylo zmíněno, nebo acylových derivátů, jako jsou alkylkarbonylové deriváty obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, alkyloxykarbonylové deriváty obsahující v alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku nebo ary laiky loxy karbony lové deriváty obsahu55 jící v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, které lze získat z acetyl o vatě Iných skupin včetně ami-9CZ 300249 B6 noskupin, iminoskupin, guanidinoskupin a amidinoskupin a předkládaný vynález se také týká aktivních metabolitů sloučenin obecného vzorce 1.

Ve sloučeninách vzorce I, je skupina R? skupina R^t2C(O). Konkrétní skupinu významů pro sku5 pinu R¹² tvoří alkenyloxyskupina nebo alkenylaminoskupina, jako alkenyloxyskupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku nebo alkenylaminoskupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, kdy každá tato skupina obsahuje jednu dvojnou vazbu, například allyloxyskupina nebo allylaminoskupina. Dále je R¹² s výhodou alkenyloxyskupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku. Alkenylová skupina v R¹² je lineární nebo rozvětvená.

Skupina A ve sloučenině vzorce I, kterou je dvouvazný zbytek 4-amidinofenylalaninu -NHCHf-CH₂AZ₆H4-(4-C(=NH)-NH2)]-C(O)-_? je s výhodou zbytek (L)-4-amidinofenylalaninu (= zbytek (S)-4-amidinofenylalaninu). Skupina B, kterou je dvouvazný zbytek glutamové kyseliny -NH-CH[-CH₂-CH₂C(O)OH]-C(O)- nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo ester, je s výhodou zbytek (L)-glutamové kyseliny (= zbytek (S)-glutamové kyseliny) nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo ester.

On

Substituovaná skupina R může nezávisle na sobě nést jeden nebo více, například jeden, dva nebo tři stejné nebo různé zbytky, které jsou s výhodou vybrány ze skupiny, kterou tvoří amino20 skupina, aminokarbonylová skupina, amidinoskupina, guanidinoskupina, aminoalkylová skupina, hydroxylová skupina, merkaptoskupina, které mohou být všechny substituované chránící skupinou a acetimidoskupina (-C(=NH)-CH₃), nitroskupina a kyanoskupina. Pokud jde o nitroskupiny, ve sloučeninách vzorce I podle předkládaného vynálezu jsou přítomny s výhodou maximálně dvě nitroskupiny. Vhodné chránící skupiny pro skupiny uvedené výše jsou odborníkům pracují25 cím v této oblasti známé a jsou uvedeny ve výše popsaných odkazech, jako je Greene a Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d vyd., (John Wiley & Sons, New York, 1991), což je zde uvedeno jako odkaz. Příklady chránících skupin jsou výše uvedené skupiny chránící aminoskupinu, jako je terc-butyloxykarbonylová skupina, benzyloxykarbonylová skupina allyloxykarbonylová skupina, které mohou být také chránícími skupinami na amidinoskupinách a guanidi30 noskupinách, nitroskupina, která se může použít pro chránění guanidinoskupiny nebo skupiny, jako je benzylová skupina, methylová skupina, tritylová skupina nebo acetylaminomethylová skupina, které se mohou použít pro chránění skupin, jako je hydroxylová skupina, merkaptoskupina a další, S výhodou je R⁸² vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, alkylová skupina, jako je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, arylová skupina, jako fenylová skupina, ary laiky lová skupina, jako fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 2 atomy uhlíku a hěteroarylalkylová skupina, jako heteroarylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 2 atomy uhlíku, které mohou být všechny nesubstítuované nebo substituované a ve kterých je heteroarylová skupina s výhodou Zbytek mOnócyklického nebo bicykl ického kruhového systémů obsahujícího jeden nebo dva stejné nebo různé kruhové heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry. Výhodněji je R⁸² je nesubstituovaná nebo substituovaná skupina definovaná výše.

Zvláště výhodně je skupina D zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Arg, Dap, Dab, Om, Lys, Dap[-C(-NH)-NH₂], Dab[-C(=NH)-NH2], Lys[~C(=NH)-NH₂], Lys[-C(=NHbCH₃], Orn[45 C(=NH)-CH₃], Dab[-C(=NH)-CH₃], Dap[-C(=NH)-CH₃], Dab(Alloc), Asn, Gin, Met, Ser,'Thr,

Ser(Bzl), Thr(Bzl), Cys(Me), Cys(Bzl), Cys(Acm), Arg(NO₂), His, Trp, Phg, Gly, Ala, Val, Ile, Leu, Phe, Phe(4-NO₂), Phe(4-NH-C(=NH)-NH₂), 2-Abu, Ala(3-CN), Ala[3-C(=NH)-NH₂], 2Abu(4-CN) a 2-Abu[4-C(=NH)-NH₂]. Podskupinu zbytků, ze kterých je vybrána zvláště výhodná skupina D, tvoří Arg, Dap, Dab, Om, Lys, Dap[-C(=NH)-NH₂], Dab[-C(=NH)-NH₂],

Lys[-C(=NH)-NH₂], Asn, Ser, Thr, Ser(Bzl), Arg(NO₂), Trp, Phg, Ala, Val, Ile, Leu, Phe, 2Abu, Ala(3-CN), Ala[3-C(=NH)-NH₂], 2-Abu(4-CN) a 2-Abu[4-C(=NH)-NH₂].

Číslo n je s výhodou nula, jedna nebo dva, výhodněji nula nebo jedna.

-10CZ 300249 B6

Substituovaná skupina R⁷² může nezávisle na sobě nést jeden nebo více, například jeden, dva nebo tři, stejné nebo různé zbytky, které jsou s výhodou vybrány ze skupiny, kterou tvoří alkylová skupina, alkyloxyskupina, atom halogenu, trifluormethylová skupina, nitroskupina, kyanoskupina, alkylsulfonylová skupina, alkyl karbony lová skupina, fenylkarbonylová skupina a 2-fenyl5 1,3—dithiolan—2—ylová skupina, které mohou být dále substituovány. Podskupinu substituentů, které mohou být přítomny v R⁷² tvoří alkylová skupina, alkyloxyskupina, atom halogenu, trifluormethylová skupina, nitroskupina, kyanoskupina, alkylsulfonylová skupina a alkylkarbonylová skupina, které mohou být dále substituovány. R⁷² je nesubstituovaná nebo substituovaná skupina definovaná výše. R⁷² je s výhodou alkylová skupina, zejména alkylová skupina obsahující 3 io až 8 atomů uhlíku, včetně cyklické alkylové skupiny, jako eykloalkylalkýlová skupina, jako je cykloalkylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 2 atomy uhlíku, nebo arylová skupina, zejména fenylová skupina, nebo arylalkylová skupina, zejména fenylalkylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 2 atomy uhlíku, nebo heteroaryl alkylová skupina, zejména heteroarylalkytová skupina obsahující v alkylové části 1 až 2 atomy uhlíku, kde všechny tyto skupiny mohou být nesubstituované nebo substituované a kde heteroarylová skupina je s výhodou monocyklický pětičlenný nebo šestičlenný aromatický kruh obsahující jeden nebo dva stejné nebo různé kruhové heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku a atom síry. Skupina nebo skupiny E, zejména v případě, kdy n je jedna, jsou s výhodou vybrány ze skupiny, kterou tvoří Phe, který je nesubstituovaný nebo substituovaný na fenylové skupině, Cha a Chg. Zvláště výhodně je E vybrána ze skupiny, kterou tvoří Cha, Chg a Phe[4-C(-S-CH₂-CH₂-S-)-Ph).

Substituované skupiny R mohou nezávisle na sobě nést jeden nebo více, například jeden, dva nebo tři stejné nebo různé zbytky, které jsou s výhodou vybrané ze skupiny, kterou tvoří atom halogenu, zejména atom fluoru, atom chloru, atom bromu, hydroxylová skupina, trifluormethylo25 vá skupina, nitroskupina, kyanoskupina, dialkylaminoskupina, alkyloxyskupina, jako methyloxyskupina, alkylendioxyskupina, alkylsulfonylová skupina, aminosulfonylová skupina a oxoskupina (=0) a kde alkylové a alkylenové skupiny v substituentech jsou nasycené, lineární nebo rozvětvené a obsahují 1 až 6 atomů uhlíku.

Zvláště výhodně je R²² skupina vybraná ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku, benzylová skupina, naftylmethylová skupina, pyridylmethylová skupina, fenylethylová skupina, naftylethylová skupina, pyridylethylová skupina, fenyl propy lová skupina, naftylpropylová skupina, pyrídylpropylová skupina, fluorenylová skupina, difenyl methy lová skupina, d i fenyl ethylová skupina a difenyl propy lová skupina, které mohou být nesubstituované nebo substituované jedním nebo více, například jedním, dvěma, třemi nebo čtyřmi stejnými nebo různými substituenty, které jsou s výhodou vybrané ze skupiny, kterou tvoří atom fluoru, atom chloru, atom bromu, hydroxylová skupina, methoxyskupina, methylendioxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, dialkylaminoskupina, alkylsulfonylová skupina, aminosulfonylová skupina a trifluormethylová skupina, které mohou být dále substituované. Skupinu zvláště výhodných sloučenin vzorce I tvoří sloučeniny,

A A A AA kde současně číslo n je jiné, než nula, R je skupina NHR a R je atom vodíku. Další skupina zvláště výhodných sloučenin je tvořena sloučeninami, ve kterých je současně n nula, R² je skupina NHR²² a R²² je jiná, než atom vodíku, přičemž v této skupině sloučenin je D s výhodou skupina Asn.

Výhodnými sloučeninami vzorce I jsou sloučeniny, kde jedna nebo více skupin nebo zbytků má výhodné významy, přičemž předmětem podle předkládaného vynálezu jsou všechny kombinace výhodných významů, které jsou předmětem podle vynálezu.

Skupinu výhodných sloučenin podle předkládaného vynálezu tvoří sloučeniny vzorce I, kde

R¹ je skupina R¹²C(O), kde R¹² je taková, jak bylo definováno, A je taková, jak bylo definováno výše,

B je taková, jak bylo definováno výše a s výhodou B je skupina NH-CHR⁹⁷~C(O), kde R⁹⁷ je ethylová skupina, která je substituovaná v poloze 2 hydroxykarbonylovou skupinou nebo její solí

-11 CZ 300249 B6 nebo alkyloxykarbonylová skupina, jako alkyloxykarbonylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku,

D je skupina NH-CHR⁸²-C(O), kde R⁸² je taková, jak bylo definováno výše,

E_n je skupina (El-E2-E3)_n, kde

n	je nula, jedna nebo dva,
El	je skupina NH,
E2	je skupina CHR72, kde skupiny R72, které jsou na sobě nezávislé a jsou stejné nebo
10	různé, jsou stejné, jako bylo definováno výše,
E3	je skupina C(O), a
R2 je stejná, jako bylo definováno výše,

ve všech jejich stereo izomemích formách nebo jejich směsi v jakémkoli poměru a jejich farmaceuticky přijatelné soli, amidy a estery.

Skupinu zvláště výhodných sloučenin tvoří sloučeniny vzorce I, kde

R^l je allyloxykarbonylová skupina nebo allylaminokarbonylová skupina,

A je (L)-A- amidinofenylalaninová skupina,

B je zbytek (L)-glutamové kyseliny nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru (L)25 glutamové kyseliny,

D je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Arg, Dap, Dab, Om, Lys, Dap[-C(=NH)-NH₂], Dab[-C(=NH.)-NH₂], Lys[-C(=NH)-NH₂], Lys[-C(=NHH3H₃], Om[-C(=NH)-CH₃], Dab[C(=NH)-CH₃], Dap[-C(=NH)-CH₃], Dab(Alloc), Asn, Gin, Met, Ser, Thr, Ser(Bzl), Thr(Bzl),

Cys(Me), Cys(Bzl), Cys(Acm), Arg(NO₂), His, Trp, Phg, Gly, Ala, Val, Ite, Leu, Phe, Phe(4NO₂), Phe(4-NH-C(=NH)-NH₂), 2-Abu, Ala(3-CN), Ala[3-C(=NH)-NH₂], 2-Abu(4-CN) a 2Abu[4-C(=NH>NH₂], n je nula nebo jedna,

É je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Cha, Chg a Phe[4-C(-S-CH₂-<H₂-S-)-Ph],

R² je skupina NHR²²,

R²² je atom vodíku nebo zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří benzylová skupina, naftylmethylová skupina, pyridylmethylová skupina, fenylethylová skupina, naftyl ethylová skupina, pyridylethylová skupina, fenylpropylová skupina, naftyl propy lová skupina, pyridylpropylová skupina, fluorenylová skupina, d i fenyl methy lová skupina, d i fenylethylová skupina a difenylpropylová skupina, které jsou nesubstituované nebo substituované jedním nebo více stejnými nebo různými substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří atom fluoru, atom chloru, atom bromu, hydroxylová skupina, methoxyskupina, methylendioxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, dialkylaminoskupina, alkylsulfonylová skupina, aminosulfonylová skupina a trifluormethylová skupina, kde alkylová skupina v substituentech je nasycená, lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, ve všech stereoizomemích formách nebo jejich směsi v jakémkoli poměru a jejich farmaceuticky přijatelné soli, amidy a estery.

-12CZ 300249 B6

Mezi specifické příklady sloučenin podle předkládaného vynálezu patří například sloučeniny uvedené v tabulce 2 níže a v příkladech provedení vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli, amidy a estery.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou připravit například pomocí způsobu syntézy na pevné fázi podle postupu, který zahrnuje al) kondenzaci sloučeniny vzorce Fmoc-E_n-OH, kde n je jedna, dva nebo tři, k můstku citlivému ke kyselině vázanému k pryskyřici nebo obecně k pevnému nosiči, odštěpení chránící skupiny io Fmoc, kondenzaci sloučeniny vzorce Fmoc-Dl-D2-C(O)OH k získané volné aminoskupině a znovu odštěpení chránící skupiny Fmoc, nebo pro přípravu sloučeniny vzorce I, kde n je nula, kondenzaci sloučeniny vzorce Fmoc-DlD2-C(O)OH k můstku citlivému na kyselinu vázanému k pryskyřici nebo obecně k pevnému 15 nosiči a odštěpení chránící skupiny Fmoc, a2) kondenzaci sloučeniny vzorce Fmoc-Bl-B2-C(O)OH k volné aminoskupině získané v kroku al) a odštěpení chránící skupiny Fmoc, a3) kondenzaci sloučeniny vzorce R^l-Al-A2-C(O)OH k volné aminoskupině získané v kroku a2)a a4) odštěpení sloučeniny získané podle kroků al) až a3) od pryskyřice pomocí trifiuoroetové kyseliny.

Pryskyřice nebo můstek, použité při tomto způsobu, mohou být takového typu, že karboxylová * skupina ve sloučenině, která se kondenzuje k pryskyřici nebo můstku (v tomto pořadí) se transformuje na amidovou skupinu C(O)NH₂, například Knorrův můstek nebo Řinkova amidová pryskyřice. Příprava sloučeniny, ve které je číslo n dvě nebo tři, může být také prováděna po krocích, kdy se sestavují jednotky V kroku al) se místo sloučeniny obecného vzorce Fmoc-E_n-OH, ve kterém n je dvě nebo tři, nejprve kondenzuje sloučenina obecného vzorce Fmoc-En-OH, ve kterém n je jedna, k můstku citlivému na kyselinu, vázanému k pryskyřici, pak se odštěpí chránící skupina Fmoc a k získané volné aminoskupině se kondenzuje druhá sloučenina obecného vzorce Fmoc-E_n-OH, ve kterém n je jedna. Pro přípravu sloučeniny, ve které je n tři, se pak odštěpí chránící skupina Fmoc a k získané volné aminoskupině se kondenzuje třetí sloučenina obecného vzorce Fmoc-E_n-OH, ve kterém n je jedna. Nakonec se odštěpení chránící skupina Fmoc a následují kroky od a2) až do a4).

Další způsob přípravy sloučenin obecného vzorce 1 zahrnuje bl) kondenzaci postranního řetězce karboxylové kyseliny sloučeniny obecného vzorce FmocB1-CHR⁹⁷-C(O)OPG, kde R⁹⁷ je 2-hydroxykarbonylethylová skupina a PG je chránící skupina, k můstku typu benzylalkoholu, citlivému na kyselinu, vázanému k pryskyřici funkcionalizované aminoskupinou, b2) odštěpení chránící skupiny PG, b3) kondenzaci sloučeniny obecného vzorce H₂N-D2-D3“En-R², kde n je nula, jedna, dvě nebo tři, k volné karboxylové skupině získané v kroku b2), ⁵⁰ b4) odštěpení chránící skupiny Fmoc, b5) kondenzaci sloučeniny vzorce R'-A1-A2-C'(O)OH k volné aminoskupině získané v kroku b4) a

- 13CZ 300249 B6 bó) odštěpení sloučeniny získané podle kroků bl) až b5) z pryskyřice pomocí trifluoroctové kyseliny.

Podobně jako u modifikace prvního způsobu popsaného výše, může být v tomto způsobu struk5 tumí jednotka H₂N-D2-D3-E_n-R² vázána k pryskyřici po jednotlivých krocích. Podle dalšího způsobu podobného tomuto způsobu se mohou sloučeniny vzorce I, také připravit nejprve kondenzací karboxylové skupiny, která je přítomna v postranním řetězci ve skupině D2 skupiny D, tj. která je přítomna v jedné ze skupin R⁸¹ a R⁸², k můstku vázanému k pryskyřici. Analogicky jako výše u sloučeniny vzorce Fmoc-B1^CHR⁹⁷-C(O)OPG, může taková sloučenina například mít obecný vzorec Fmoc-NH-CR^S1R^S2-C(0)OPG, kde R⁸² je taková, jako je definováno výše s výhradou, že obsahuje skupinu C(O)OH a R⁸¹ je taková, jako je definováno výše. Například, R⁸¹ může být atom vodíku a R⁸² může být hydroxykarbonylmethylová skupina a sloučenina obecného vzorce Fmoc™NH-CR⁸¹R⁸²-C(O)OPG tak může být chráněným derivátem kyseliny aspartové. Po odstranění chránící skupiny ze skupiny C(O)OPG, jejíž karbonylová skupina je , skupina D3 ve vzorci I, se získaná volná karboxylová skupina kondenzuje se sloučeninou, jako je

HjN-En-R² nebo H-R². Potom, po odstranění chránící skupiny Fmoc, se získaná aminoskupina kondenzuje se sloučeninou vzorce Fmoc-Bl-B2-C(0)OH a, po odstranění chránící skupiny z aminoskupiny, se produkt kondenzuje se sloučeninou vzorce R¹-A1-A2-C(O)OH. Znovu mohou být použitá pryskyřice nebo můstek takového typu, že se karboxylová skupina ve slouče20 nině, která se kondenzuje k pryskyřici nebo k můstku, transformuje na amidovou skupinu C(O)NH₂. Například za použití amidové pryskyřice se jednotka kyseliny aspartové vázaná k pryskyřici může převést na asparaginovou jednotku konečné sloučeniny.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou chemicky syntetizovat za použití například automatického syntetizéru (viz. příklad 1). Selektivní modifikace reaktivní skupiny, jako je skupina přítomná na postranním řetězci aminokyseliny nebo reaktivní skupina na N-konci nebo na C-konci peptidu, může sloučenině podle předkládaného vynálezu propůjčit žádoucí vlastnosti, jako je zvýšená rozpustnost nebo zlepšené inhibiční vlastností. Když se použijí způsoby syntézy na pevné fázi, může se chemické složení sloučenin upravovat při tom, když je vznikající peptid vázaný k pryskyřici nebo poté, co se peptid odštěpí od pryskyřice za získání sloučeniny například s derivatizovaným N-koncem, jako je sloučenina s acylovaným N-koncem, například acetylovaná sloučenina. Podobné úpravy se mohou také provést na karboxylové skupině sloučeniny, kdy se může například C-koncová karboxylová skupina amidovat.

Sloučeniny se mohou také připravit kondenzací chráněné aminokyseliny podle způsobů, které jsou běžné v medicinální chemii, organické chemii v roztoku a odstraněním chránicí skupiny z cílové molekuly pomocí postupů, které jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé. Obecně jsou vhodné reakce pro syntézu sloučenin obecného vzorce 1 pomocí způsobů na pevné fázi nebo způsobu v roztoku a experimentální podrobnosti, jako jsou vhodná kondenzační činidla, jako jsou karbodiimidy, TOTU nebo HATU, nebo rozpouštědla a reakční teploty, jsou odborníkům pracujícím v této oblasti známé a je možné je také nalézt ve standardních odkazech uvedených podle vynálezu a také v příkladech uvedených níže.

Syntetizované sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou čistit za použití standardních postupů, jako je vysokotlaká kapalinová chromatografle na reverzní fází (RP-HPLC; viz. příklad 1) nebo pomocí jiných způsobů separace, založených například na velikosti, náboji nebo hydrofobičnosti sloučeniny. Podobně se mohou pro charakterizaci struktury sloučenin podle předkládaného vynálezu použít dobře známé způsoby, jako je aminokyselinová sekvenční analýza nebo hmotová spektroskopie (MS) (viz. příklad 1).

.

Různé sloučeniny obsahující různá uspořádání substituentů vykazují různou úroveň inhibiční aktivity vzhledem k faktoru Vila. Výběr substituentů má například vliv na vazebnou afinitu sloučenin. Tyto sloučeniny se syntetizují podle postupů popsaných v příkladech. Testování inhibiční aktivity peptidů se provádí pomocí testu popsaného v příkladu 22. Za použití těchto způsobů může odborník v této oblasti syntetizovat sloučeninu podle předkládaného vynálezu, včetně jejich

-14CZ 300249 B6 modifikací, a určit inhibiční aktivitu sloučeniny vůči faktoru Vila. Kompozice podle předkládaného vynálezu se mohou připravit ve formě homogenní kompozice nebo jako směs sloučenin obsahujících různé kombinace substituentů. Flexibilita umožněná výběrem substituentů dovoluje vyšší stupeň kontroly biologických a fyzikálně chemických vlastností sloučenin a kompozic podle předkládaného vynálezu.

Předkládaný vynález poskytuje sloučeniny, které specificky inhibují aktivitu faktoru Vila. Tyto sloučeniny mají s výhodou hodnotu Ki < 500 nM, výhodněji < 50 nM pro aktivitu vůči faktoru Vila a v podstatě ne inhibují aktivitu jiných proteáz zahrnutých do koagulace a fibrinolyzní kasío kády vzhledem k inhibieí faktoru Vila (za použití stejné, koncentrace inhibitoru). Mezi tyto další proteázy patří například faktor Xa, trombin a plasmin.

Následující tabulka 2 ukazuje hodnoty inhibiční aktivity vybraných sloučenin obecného vzorce I vzhledem k.faktoru Vila (způsob určování Ki viz. příklad 22), což také ilustruje předkládaný vynález.

Tabulka 2: Inhibiční aktivita vybraných sloučenin obecného vzorce I vůči faktoru Vila

20	A1loc-pAph-Glu-Arg-Cha-NH2 Allylaminokarbonyl-pAph-Glu-Arg-Cha-NH2 Alloc~pAph-Gln-Arg-Chg-NH2 Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH2]-Cha-NH2	Ki (μΜ) 0,046 0,042 0,238 0,012
25	Alloc-pAph-Glu-Ala[3-C(=NH>NH2]~Cha-NH2 Alloc-pAph-Glu-Asn-Cha-NH2 A1 loc-pAph~G Íu-Dab-Cha-N H2 Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH2]-NH2 Alloc-pAph-Glu-Gly-Cha-NH2	0,03 0,021 0,055 0,26 0,12
30	Alloc-pAph-Glu-Thr(Bzl)-NH-(CH3)2-CH(Ph)2 AUoc-pAph-Glu-NH-(CH2)2-Ph Alloc-pAph-Glu-Asn-NH-CH2-Chx Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-CH3]-Cha-NH2 Alloc-pAph-Glu-Dab[-C(-NH)-CH3]-Cha-NH2	0,17 0,38 0,15 0,11 0,012
35	Alloc-pAph-Glu-2-Abu(4-CN)-Cha-NH2 Alloc-pAph-G1u-Ala(3-CN)-Cha-NH2 Alloc~pAph-Glu-Asn-l-naftylmethylatnid . 1 ... A1 loc-pAph-Glu-Asn-l-( 1 -nafty l)ethy lamid A1 loc-pAph-Glu-Asn-2-nafty tmethy lam id	0,063 0,12 0,031 , 0,021 0,027
40	Alloc-pAph-Glu-Asn-3,4-dichlorbenzylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(3-chlorfenyl)ethylamid Alloc-pAph-Glu-Arg(NO2)-Cha-NH2 Alloc-pAph-Glu-Cys(Bzl)-Cha-NH2 Alloc-pAph-Glu-Trp-Cha-NH2	0,026 0,023 0,014 0,026 0,017
45	Alloc~pAph-Glu-Phg-Cha-NH2 Alloc-pAph-Glu-Asn-9-fluorenylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-3,5-bistrifluormethylbenzylamÍd Alloc-pAph-Glu-Phe(4-guanidino)-Cha-NH2 A lloc-pAph-Glu-D-Phe(4-guanidí no)-Cha-N H2	0,017 0,023 0,033 0,12 IU
50	A11oc-pAph-Olu-Om[-C(=NH)-CH3]-Char-NH2 Alloc-pAph-Glu-Dab[^(=NHH^H3pCha-NH2 Álloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH2]Phe[4-C(-S-{CH2)2-S-)- Ph]-NH2 Alloc-pAph-Glu-Gln-NH2	0,13 0,19 0,015 1,5

-15CZ 300249 B6

Alloe—pAph-Glu—Orn—Nll₂ 6,2

Alloc-pAph-Clu-Cily-Cha-NTh 0,12

Alloc-pAph-Glu-Cys(Acm}Á2ha-NH2 0,12

Alloc-pAph-Glu-Cys(Me)-Cha-NH₂ 0,20

Alloc-pAph-Glu-Cys(Bzl)-Cha-NH2 . 0,026

AUoc-pAph-Glu-Thr(BzlbCha-NH₂ 0,019

Alloc-pAph-Glu-Dab(Alloc)-Cha-NH₂ 0,15

Alloc-pAphÁjlu-His“Cha-NH₂ 0,14

Alloc-pAph-Glu-Met-Cha-NH₂ 0,11

Alloc-pAph-Glu-Phe(4-NO₂p3ha-NH₂ 0,046 ' Alloc-pAph-Glu-D-Lys[-C(=NH)-NH₂]-Cha-NH₂ 22

Alloe-pAph-Glu-D-Arg-Cha-NH₂ 12

Alloc-pAph-Glu-Asn-3,4-methylendioxybenzylamid 0,12

Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(4-morfolinyl)ethylamid 0,41

Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(2-naftyl)ethylamid 0,052

Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(l-oaftyl)ethylamid 0,022

Alloc-pAph-Glu-Asn-2-tetrahydrofuranmethylamid 0,17

AIIoc-pAph-Glu-Asn-3-methylbutylamid 0,11

Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(2-pyridyl)ethytamid 0,071

Alloc-pAph-Glu-Asn-l,2,3,4-tetrahydro-l-naftylamid 0,045

Alloc-pAph-Glu-Asn-N,N-dibenzylamid 0,41

Alloc-pAph-Glu-Asn-N-methyl-N-(l -nafty I methyl )am i d l ,7

Alloc-pAph-Glu-Asn-2.2-difenethylamid 0,049

Alloc-pAph-Glu-Asn-2,4-difluorbenzyIamid 0,051

Alloe-pAph-Glu-Asn-2-(4- sulfamoylfenyl)ethylamid 0,35

Alloc-pAph-Glu-Asn-4-dirnethylaminobenzylamid 0,11

Alloc-pAph-Glu-Asn4CH₃-)Cha-NH₂ 0,062

Alloc-pAph^Glu-Asn-3-fenylpropylamid 0,026

Alloc-pAph-Ájlu-Asn-3,3-difenylpropylamid 0,024

Alloc-pAph-Glu-Asn-4-methoxybenzylamid 0,083

Alloc-pAph-Glu-Asn-3,4—dichlorbenzylamid 0,026

Inhibiční aktivita výše uvedených sloučenin vůči trombinu se může vyjádřit pomocí hodnot Ki, které jsou obecně značně vyšší, než výše uvedené hodnoty inhibiční aktivity vůči faktoru Vila, například asi 200krát nebo asi 500krát nebo asi lOOOkrát vyšší, než hodnoty inhibiční aktivity vůči faktoru Vila. Také inhibiční aktivita sloučenin uvedených výše vůči faktoru Xa se může vyjádřit pomocí hodnot Ki, které jsou obecně značně vyšší, než výše uvedené hodnoty inhibiční aktivity vůči faktoru Vila, například asi lOOkrát vyšší, než inhibiční aktivity vůči faktoru Víla. 40 Tyto výsledky ukazují, že sloučeniny vzorce I jsou vhodné jako inhibitory faktoru Vila, ale v podstatě ne inhibují aktivitu faktoru Xa nebo serinových proteáz, jako je trombin, které jsou zahrnuty do procesu koagulace krve a fibrinolýzy.

Sloučenina podle předkládaného vynálezu se může s výhodou použít jako antikoagulační činidlo, které se může uvést do styku s krevním vzorkem, aby se předešlo koagulaci. Účinné množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu se může například uvést do styku s čerstvě odebraným vzorkem krve, aby se předešlo koagulaci tohoto krevního vzorku. Podle předkládaného vynálezu znamená termín „účinné množství“ v souvislosti se sloučeninou podle předkládaného vynálezu, množství sloučeniny, které inhibuje aktivitu faktoru Vila. Odborníkům pracujícím v této oblasti bude zřejmé, že účinné množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu se může určit pomocí způsobů popsaných podle vynálezu (viz. příklad 22) nebo jiným způsobem, který je odborníkům v této oblasti známý. Vzhledem k popsané využitelnosti sloučeniny podle předkládaného vynálezu bude odborníkům v této oblasti zřejmé, že činidlo, jako je heparin, se může nahradit sloučeninou podle předkládaného vynálezu. Toto použití sloučeniny podle předkládaného vynálezu může vést například k úspoře nákladů ve srovnání s jinými antikoagulačními činidly.

-16CZ 300249 B6

Kromě toho se sloučenina podle předkládaného vynálezu může pacientům podávat při léčení mnoha klinických stavů, včetně například léčení kardiovaskulárních onemocnění nebo komplikací spojených například s infekcí nebo chirurgickým zákrokem. Mezi kardiovaskulární onemocně5 ní patří například restenóza po angioplastice, syndrom dýchacího stresu dospělých, poruchy více orgánů, mrtvice a roztroušená nitrocévní srážlivosti krve. Příklady podobných komplikací souvisejících s chirurgickými zákroky zahrnují například hlubokou žilní a proximální žilní trombózu, ke které může dojít po operaci. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou tedy vhodné jako léčiva pro snížení nebo inhibicí nežádoucí koagulace u pacientů.

Protože sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou inhibovat aktivitu faktoru Vila, mohou být obecně vhodné pro snížení nebo inhibicí srážení krve u pacientů. Podle předkládaného vynálezu znamená termín „pacient“ obratlovce, včetně savců, jako je člověk, u kterých je do koagulační kaskády zahrnut faktoru Vila.

Srážení krve u pacientů se může snížit nebo inhibovat podáváním terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu pacientovi. Podle předkládaného vynálezu znamená termín „terapeuticky účinné množství“ dávku sloučeniny, která se musí podat pacientovi, aby se inhibovala aktivita faktoru Vila u tohoto pacienta. Přesněji terapeuticky účinné množství slou20 ceniny podle předkládaného vynálezu inhibuje katalytickou aktivitu faktoru Vila buď přímo, v protrombinázovém komplexu nebo jako rozpustná podjednotka, nebo nepřímo, inhibicí hromadění faktoru Vila do protrombmázového komplexu. Výhodné sloučeniny mohou inhibovat aktivitu faktoru Vila při Kl < 500 nM a výhodnější sloučeniny při Ki < 50 nM. Terapeuticky účinné množství se může určit za použití způsobů popsaných například v příkladu 22 nebo jiným způso25 bem, který je odborníkům v této oblasti známý.

Při praktickém provedení terapeutického způsobu podle vynálezu bude příslušná dávka poskytující terapeuticky účinné množství kompozice, která se má podávat pacientovi, záviset na různých okolnostech, včetně například povahy a závažnosti onemocnění, režimu podávání a věku a íyzic30 kých vlastnostech pacienta. Příslušná dávka se může stanovit zá použití klinických postupů, které jsou odborníkům v oblasti medicíny známé. Předkládaný vynález tedy poskytuje způsob specifické inhibiee aktivity faktoru Vila uvedením faktoru Vila do styku se sloučeninou vzorce R -AB-D-E_n-R². Předkládaný vynález dále poskytuje způsob snížení nebo inhibiee vzniku krevní sraženiny u pacienta podáváním terapeuticky účinného množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu.

Sloučenina podle předkládaného vynálezu se bude obecně podávat pacientovi jako kompozice' obsahující jednu nebo více sloučenin vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič·. Termín „farmaceuticky přijatelný nosič“ znamená médium nebo kompozici, která je netoxická pro pacienta nebo má přijatelnou toxicitu, jaká je stanovena příslušnou kontrolní institucí. Podle předkládaného vynálezu zahrnuje termín farmaceuticky přijatelný nosič jakýkoli standardní farmaceutický nosič, jako je škrob, laktóza, tuky, vosky a tak dále nebo kapaliny, jako je například fosfátem pufrovaný šalin, voda, emulze, jako je emulze olej ve vodě nebo voda v oleji a/nebo obvyklé přísady, například různé typy zvlhčujících činidel. Vhodné farmaceutické nosiče a prostředky, které je obsahují, jsou popsané v publikaci Martin; Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 15. vyd. (Mack Publishing Co., Easton, 1975), která je zde zahrnuta jako odkaz. Takové kompozice budou obvykle obsahovat terapeuticky účinné množství sloučeniny podle tohoto vynálezu společně s vhodným množstvím takového nosiče, aby se dosáhlo správné dávky pro podávání pacientovi. Sloučeniny podle vynálezu mohou být tedy vhodné jako léky pro inhibicí aktivity faktoru

Vila a srážení krve u pacienta.

Farmaceutické kompozice nebo léky podle tohoto vynálezu se mohou podávat orálně, například ve formě pilulek, tablet, lakovaných tablet, potahovaných tablet, granulí, tvrdých a měkkých želatinových tobolek, roztoků, sirupů, emulzí, suspenzí nebo aerosolových směsí. Podávání však může také být prováděno rektálně, například ve formě čípků nebo parenterálně, například nitro-17CZ 300249 B6 žitně, nitrosvalově nebo podkožně, ve formě injekčních roztoků nebo infuzních roztoků, míkrotobolek, implantátů nebo tyčinek, nebo přes kůži nebo místně, například ve formě mastí, roztoků nebo tinktur nebo jinými způsoby, například ve formě aerosolů nebo nosních sprejů. Množství aktivní složky obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo derivátu v jednotkové dávce farmaceutické kompozice je obvykle od asi 0,5 mg do asi 1000 mg, s výhodou asi 1 mg až 500 mg, ale v závislosti na typu farmaceutické kompozice může být množství také vyšší. Denní dávka sloučenin obecného vzorce I, které se mají podávat, může být ve formě jedné denní dávky nebo se může rozdělit do několika, například, dvou, tří nebo čtyř, částečných dávek.

ío

Farmaceuticky přijatelné nosiče mohou také obsahovat například jiná média, sloučeniny nebo modifikace sloučenin obecného vzorce I inhibujících aktivitu faktoru Víla, které zesilují jeho farmakologickou funkci. Farmaceuticky přijatelné médium může obsahovat, například farmaceuticky přijatelnou sůl. Kyselá adiční sůl sloučeniny vzorce I se může připravit například s anorga15 nickou kyselinou, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromo vodí ková, kyselina fosforečná, kyselina sírová nebo kyselina chloristá nebo s organickou karboxylovou kyselinou, jako je kyselina octová, kyselina šťavelová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina mravenčí, kyselina mléčná, kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina jantarová nebo kyselina malonová, nebo organickou sulfonovou kyselinou, jako je methansulfonová kyselina nebo p-toluensulfonová kyselina. Kyselinová skupina ve sloučenině obecného vzorce I, například karboxylová skupina, může být přítomna jako kationt solí kovu, který je odvozen od alkalických kovů a kovů alkalických zemin jako je sodík, lithium, draslík, vápník nebo hořčík, nebo i netoxické amoniové soli, včetně kvartérních amoniových solí a kyselých adičních solí s aminy, například jako amoniová, methylamoniová, dimethylamoniová, trimethylamoniová, tetramethylamoniová, ethylamoniová, triethylamoniová nebo tetraethylamoniová sůl.

Příklady modifikací, které zvyšují farmakologickou účinnost sloučeniny, zahrnují například esterifikaci, jako je příprava alkylesteru obsahujícího 1 až 6 atomů uhlíku, s výhodou alkylesteru obsahujícího 1 až 4 atomy uhlíku, kde alkylová skupina je přímá nebo rozvětvená. Mezi další přijatelné estery patří například cykloalkyl estery obsahující 5 až 7 atomů uhlíku a ary laiky le stery, jako jsou benzylestery. Tyto estery se mohou připravit ze sloučenin popsaných podle vynálezu za použití běžných postupů, které jsou známé z oblasti chemie peptidů.

Farmaceuticky přijatelné modifikace mohou také zahrnovat například vznik amidů peptidů. Tyto amidové modifikace, které je možné provést na sloučeninách podle předkládaného vynálezu, zahrnují například ty, které jsou odvozeny od amoniaku, primárních alkylaminů obsahujících 1 až 6 atomů uhlíku a sekundárních dialkylaminů obsahujících v každé alkylové části 1 až 6 atomů uhlíku, kde alkylové skupiny jsou přímé nebo rozvětvené nebo arylaminy, které jsou různě substituované, V případě sekundárních aminů může být amin také ve formě pětiělenného až šesti40 členného heterocyklu, který může kromě amidového atomu dusíku obsahovat nesubstituovaný nebo substituovaný atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry. Způsoby přípravy těchto aminů jsou odborníkům v této oblasti známé.

V jiném provedení podle předkládaného vynálezu se mohou sloučeniny podle vynálezu použít při testech za účelem identifikace přítomnosti faktoru Vila nebo za účelem izolace faktoru Vila v podstatě v čisté formě, S výhodou se sloučeniny podle předkládaného vynálezu značí například radioizotopy a značené sloučeniny se detekují za použití běžných způsobů používaných pro detekci příslušné značky. Kromě toho se může sloučenina podle předkládaného vynálezu použít s výhodou jako sonda pro detekci umístění nebo množství aktivity faktoru Vila in vivo, in vitro nebo ex vivo,

Je zřejmé, že modifikace, které v podstatě neovlivňují aktivitu různých provedení podle vynálezu, jsou také součástí podle předkládaného vynálezu. Následující příklady jsou tedy určeny pouze pro ilustraci a v žádném případě neomezují rozsah podle vynálezu.

-18CZ 300249 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Postup syntézy peptidů a obecné syntetické postupy

Výchozí látky používané při syntéze se získají od chemických výrobců jako jsou Aldrich, Sigma, Fluka, Nova Biochem a Advanced Chemtech. Během syntézy se funkční skupiny používaných io derivátů aminokyselin chrání chránícími skupinami, aby se zabránilo vedlejším reakcím během kondenzačních kroků. Příklady vhodných chránících skupin a jejich použití jsou popsány v publikaci The Peptides, viz. výše, 1981 a ve sv. 9, vyd. Undenfriend and Meienhofer, 1987, která je zde zahrnuta jako odkaz.

K přípravě sloučenin podle tohoto vynálezu se používá obvyklá syntéza peptidů na pevné fázi. Tyto postupy jsou popsány například v Steward a Young, Solid Phase Peptide Synthesis, vyd. Freeman & Co., San Francisco, 1969, která je zde zahrnuta jako odkaz.

Pokud není uvedeno jinak, syntetizují se peptidy na pryskyřici TentaGel S NH₂ (Rapp Polymere,

Túbingen, Německo). Můstek citlivý na kyselinu, p-[(R,S)-a-[l-(9H-fluoren~9-yl)methoxyformamido]-2₎4-dimethoxybenzyl]fenoxyoctová kyselina (Knorrův můstek), se kondenzuje k pevnému nosiči (Bernatowicz a kol., Tetr. Lett. 30, 4654 (1989), který je zde zahrnut jako odkaz). Alternativně se peptidy syntetizují na polystyrénové pryskyřici zesítčné 1 % divinylbenzenu modifikovaného můstkem citlivým na kyselinu (Rinkova pryskyřice) (Rink, Tetr. Lett.,

28, 3787 (1987); Sieber, Tetr. Lett., 28, 2107 (1987), z nichž každý je zde uveden jako odkaz).

Když se peptidy syntetizují nejprve kondenzací postranního řetězce karboxylové kyseliny sloučeniny obecného vzorce Fmoc-Bl-CHR⁹⁷-C(O)OPG k pryskyřici, používá se TentaGel SNH₂ pryskyřice modifikovaná připojením HMPA můstku. Kondenzace se provádí za použití N,Ndiisopropylkarbodiimidu (DIC) za přítomnosti ekvivalentního množství HOBt, s výjimkou

Alloc-pAph-OH, kde se používají 2 ekvivalenty HOBt. Všechny kondenzace se provádí buď v Ν,Ν-dimethy Iformamidu (DMF), nebo DMF/DMSO (směs 1/1) při teplotě místnosti (RT). Dokončení kondenzace se sleduje ninhydrinovým testem. Druhá (dvojnásobná) kondenzace se provádí, když kondenzace v prvním kroku nebyla úplná.

Odstranění chránící skupiny Fmoc se provede za použití 50% piperidínu v dimethylformarnidu po dobu 2 až 10 minut. Uvolněné množství skupiny Fmoc se stanoví zabsorbance při 300 nm roztoku po odstranění chránící skupiny, objemu promývacích činidel a hmotnosti pryskyřice použité při syntéze;

Cyklus každého kondenzačního kroku se provádí následujícím způsobem:
Krok	Akce/reakční činidlo	Rozpouštědlo
1.	0,5 g funkcionalizované peptidové pryskyřice
2.	trojnásobný přebytek derivátu aminokyseliny/HOBt/DIC	4 ml DMF
3.	Kondenzace (min. 1 h)
4.	Promytí (3x5 ml)	DMF
5.	Ninhydrinový test
6.	Odstranění chr. skupiny (2+10 min.) Piperidin/DM.F	5 ml 50 %
7.	Promytí (6x5 ml)	DMF
8.	Při opakování se začne krokem 2

Po dokončení připojení peptidů na pryskyřici se provede, pokudje to potřeba, konečné odstranění chránící skupiny Fmoc. Peptidová pryskyřice se potom postupně promyje dimethylformamidem a dichlormethanem a potom se odštěpí peptid a zbaví chránící skupiny směsí tetrahydrofuran/thioanisol (95/5) po dobu 1,5 h, pokud se neuvádí jinak. Pryskyřice se promyje dichlormethanem

-19CZ 300249 B6 a dichlormethan použitý k promytí se smísí s kyselinou trifluoroctovou z kroku odstranění chránící skupiny. Roztok se potom odpařuje, produkt se vysráží bezvodým diethyletherem a pevná sraženina se izoluje filtrací nebo odstředěním a suší se ve vakuu nad kuličkami pevného hydroxidu draselného. Pevná látka se znovu rozpustí ve směsi vody a acetonitrilu a lyofílizuje se.

Vysušený peptid se čistí pomocí vysoce účinné kapalinové chromatografie (HPLC) za použití vhodného gradientu 0,1 % TFA ve vodě a acetonitrilu (ACN). Po spojení frakcí obsahujících požadovaný produkt se roztok peptidů lyofílizuje a peptid se potom identifikuje pomocí elektrosprejové hmotnostní spektrometrie (MS) a/nebo nukleární magnetické resonance (NMR) a/nebo analýzou aminokyselin, aby se potvrdilo, že se syntetizovala správná sloučenina.

io

Pokud jde o vysoce účinnou kapalinovou chromatografickou analýzu (HPLC), vzorek produktu se analyzuje za použití Beckmanova HPLC systému (skládajícího se ze systému dávkování rozpouštědla 126, programovatelného detektoru 166 modul 507e Autosampler, kontrolovaných paměťovou jednotkou se softwarem od Gold Noveau) a kolony YMC ODS-AM 4,6 x 250 mm při 230 nm a průtoku 1 ml/min.

Při čištění produktu se vzorek surového lyofílizovaného peptidů rozpustí ve směsi 0,1% vodné kyseliny trifluoroctové obsahující 10 až 50 % ACN. Peptidový roztok se obvykle filtruje přes injekční stříkačku připojenou k filtru 0,45 pm „ACRODISC“ 13 CR PTFE (Gelman Sciences;

Ann Arbor MI). Vhodný objem roztoku filtrovaného peptidů se nanese na polopreparativní kolony C 18 (Vydac Protein and Peptide C 18, 218TP1022 (22x250 mm); The Separation Group; Hesperia CA nebo YMC ODS-A kolony (20x250 mm), YMC, lne., Wilmington, NC). Průtok gradientu nebo izokratické směsi 0,1 % TFA pufru a ACN (HPLC grade) jako elučního činidla se udržuje za použití Beckmanova HPLC chromatografu „SYSTEM GOLD“ (Beckman, System

Gold, Programmable Solvent Module 126 a Programmable Detector Module 166, řízených softwarem „SYSTEM GOLD“). Eluce peptidů se sleduje UV detekcí při 230 nm. Po identifikaci píku odpovídajícího syntetizované sloučenině pomocí MS, se sloučenina jímá, lyofílizuje a biologicky testuje, MS se provádí za použití přístroje VG Platform (Fisons Instruments) v režimu ES+. Pokud jde o NMR, typické vzorky se měří v perdeuterodimethylsulfoxidu DMSO-d₆ (Aldrich) za použití přístroje Bruker Avance DPX 300.

, Příklad 2

Syntéza Alloc-pAph-OH

Stejný postup se může použít na syntézu sloučeniny Alloc-D-pAph-OH.

Alloc-Phe(4-CN)-OH

5,7 g (30 mmol) H-Phe(4-CN)-OH se rozpustí ve 100 ml 1M hydroxidu sodného a chlazení ledem se přidává 2M hydroxid sodný, aby se dosáhlo pH=10. Za energického míchání se pomalu přidá 7,5 ml) allylchlorformiátu (pH se udržuje pomocí 2M hydroxidu sodného na 10). Reakční směs se míchá při 0 °C 15 minut a při teplotě místnosti po 30 minut, acídífíkuje se kyselinou chlorovodíkovou na pH=2, extrahuje se třikrát ethylacetátem, suší se nad síranem horečnatým a odpaří se, Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetát/hexan a získá se bílá pevná látka. Výtěžek: 7,0 g (85%).

Alloc-Phe[4-C(=S)-NH₂]-OH

2,74 g Alloc-Phe(4-CN)-OH se rozpustí ve směsi (50 ml) pyridinu a (20 ml) triethylaminu a po dobu 30 minut se nechá probublávat sirovodík. Reakční směs se přes noc udržuje při teplotě místnosti a odpaří se. Po sušení ve vysokém vakuu se získá 3,21 g tuhé pěny surového thioamídu, který se okamžitě převede na methylthioimidát.

-20CZ 300249 B6

Alloc-Phe[4C(=NH)-SCH3]-OH-HI g AlJoc-Phe[4-C(=S)-NH2]-OH se rozpustí v 50 ml acetonu a přidá se 5 ml methyljodídu. Reakční směs se udržuje přes noc při teplotě místnosti, odpaří se těkavá rozpouštědla (rychle, max. 35 °C) a zbytek se zpracuje diethyletherem. Po 1 h při 0 °C se slije ether, produkt se promyje diethyletherem a suší se ve vakuu. Získá se žlutá pevná pěna, která se okamžitě převede na amidin.

Alloc-pAph-OH io

Všechna výše získaná sloučenina Alloc-Phe[4-C(=NH)SCH3]~OH-HI se rozpustí v 50 ml methanolu s 300 μΐ kyseliny octové a přidá se 0,5 g octanu amonného. Směs se zahřívá 3 hodiny na 55 °C, odpaří se a přidá se 10 ml acetonu. Po 2 hodinách při 0 °C se pevný produkt filtruje, promyje se trochou chladného acetonu, trochou chladného methanolu a diethy letheru a suší se ve vakuu a získá se žlutavá pevná látka. Výtěžek: 0,53 g.

Příklad 3

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Arg-Cha-NH₂

K 1 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se naváže Knorrův amidový můstek. Podle obecných postupů uvedených v příkladu 1, se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fnioc^Cha-OlL FmoC“Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph. Peptid se odštěpí a působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po dobu 3 hodin se odstraní chránící skupiny a zpracuje se tak, jak se popisuje v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC podle postupu popsaného v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 729,1, vypočteno 729,4.

Příklad 4

Syntéza sloučeniny allyl-NH-C(O)-pAph-Glu-Arg-Cha-NH₂

K 0,5 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se naváže Knorrův amidový můstek. Podle obecných postupů uvedených v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-ΌΗ, Fmoc-Arg(Pmc>OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Fmoc-Phe(4-CN), Po odstranění N-koncové Fmoc chránící skupiny se pryskyřice po 2 hodin zpracovává roztokem 1 mmol allylsokyanátu ve 3 ml dimethylformamidu. Pryskyřice se potom promyje dimethylform40 amidem a směsí triethylamin/pyridin (1/2) a reaguje se přes noc s nasyceným roztokem sirovodíku ve směsi pyridin/tri ethy lamin. Pryskyřice se promyje acetonem a thioamidová pryskyřice se nechá reagovat se 3 ml 10% roztoku methyljodídu v acetonu po dobu 6 hodin. Methylthioimidátová pryskyřice se promyje acetonem, methanolem a reaguje se s roztokem 0,2 g octanu amonného, 100 μΐ kyseliny octové ve 3 ml methanolu při 55 °C po dobu 3 hodin. Pryskyřice se pro45 myje methanolem, dimethylformamidem a dichlormethanem a odštěpí se peptid a pomocí směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 3 hodiny se odstraní chránící skupina a zpracuje se tak, jak se popisuje v příkladu 1. Surová látka se čistí použitím HPLC jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 728,3, vypočteno 728,4.

Příklad 5

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Arg-Chg-NH₂

-21 CZ 300249 B6

K 1 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se naváže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů z příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny; FmocChg-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph. Peptid se odštěpí a působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 3 hodiny a zpracuje se tak, jak se popi5 suje v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 715,8, vypočteno 715,4.

Příklad 6 ¹⁰

Syntéza sloučeniny Alloc-D-pAph-Glu^Arg-Cha-NH₂

K 1 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyse15 liny: Fmoc-Cha-OIL Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-D-pAph-OH (syntetizuje se podle stejného postupu, jako Alloc-pAph-OH v příkladu 2). Peptid se odštěpí působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 3 hodiny a zpracuje se tak, jak se popisuje v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 729,2, vypočteno 729,4.

Příklad 7

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Phe(4-guanidino)-“Cha-NH2

K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,23 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Phe(4-NH-C(=NBoc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAphOH. Peptid se odštěpí působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 777,1, vypočteno 777,4.

Příklad 8

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(^;:;;NH)-NH₂]-Cha-NH₂ ' K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,23 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyse40 liny: Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Dap[-C(=N-Boc)-NH-Boc]-OH, Fmoc_Glu(OtBu)-OH, a AllocpAph-OH. Peptid se odštěpí působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 729,1, vypočteno 729,4.

Příklad 9

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH₂]-Cha-NH₂

K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Dap(Alloc)-OH a Fmoc^Glu-OtBu)-OH. S připojenou N-koncovou chránící skupinou Fmoe se pryskyřice promyje směsí DMF/NMM/AcOH (5/0,5/1) a míchá se konstantně pod proudem argonu, skupina Alloc se odehrání přidáním 100 mg Pd(P-(Ph)₃)₄ po

-22CZ 300249 B6 dobu 3 hodin. Pryskyřice se promyje dimethylformamidem a působí se na ní po dobu 1 hodiny roztokem 150 ml 2-methylnaftylacethioimidátu ve 4 ml směsi ethanol/dimethylsulfoxid (3/1). Po promytí dimethylformamidem se odstraní chránící skupina Fmoc (1 + 5 min.) a kondenzuje se N-konec sloučeniny Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupina působe5 ním směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 700,1, vypočteno 700,4.

io Příklad 10

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Ala[3^C(=NH)-NH2]-Cha-NH2

K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek.

Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-OH, Fmoc-Ala(3-CN)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-Phe-(4-CN)-OH. Směs pyridinu a triethylaminu (2/1) se při teplotě místnosti sytí 15 až 30 minut sirovodíkem a tento roztok se přidává k pryskyřici předem promyté směsí pyridin/triethylamin (2/1). Po stání přes noc se pryskyřice promyje acetonem a působení se na ní přes noc roztokem 20 % methyl20 jodidu v acetonu. Pryskyřice se potom promyje acetonem a methanolem. Methylthioimidát vázaný k pryskyřici se potom zahříváním ve vodní lázni na 55 °C po dobu 3 hodin převede na amidin pryskyřice roztokem 10 ekv. octanu amonného v methanolu obsahujícím 5 % kyseliny octové. Po této závěrečné konverzi se pryskyřice promyje methanolem, dimethylformamidem a dichlormethanem. Peptid se odštěpí a chránící skupina se odstraní působením směsi kyselina trifluoroc25 tová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu l. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 685,9, vypočteno 686,4.

Příklad 11

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Asn-Cha-NH₂

K 0,125 g Rinkovy pryskyřice (substituce 0,78 mmol/g), po odstranění chránící skupiny Fmoc se podle obecných způsobů popsaných v příkladě 1 kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-X^ha-OH, Fmoc-Asn-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a chránící skupina se odstraní působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu⁷!: Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 686,9, vypočteno

687,3.

Příklad 12

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Dab-Cha“NH₂

K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-OH. Fmoc-Dab(Boc)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupiny působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC jak se popisuje v příkladu l a charakterizuje se pomocí MS. (M+HjY nalezeno 673,2, vypočteno 673,4.

-23CZ 300249 B6

Příklad 13

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Ala[3-C(=NH}-NH2]-NH2

K 0,25 g pryskyřice TentaGel S NH₃ (substituce 0,26 mmol/g) se váže Knorrův amidový můstek. Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc”Ala(3~CN)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-Phe(4-CN)-01I. Směs pyridinu a triethylaminu (2/1) se při teplotě místnosti sytí 15 až 30 minut sirovodíkem a tento roztok se přidává k pryskyřici předem promyté směsí pyridin/triethylamin (2/1). Po stání přes noc se pryskyio řiče promyje acetonem a přes noc se reaguje s roztokem 20 % methy tj od idu v acetonu. Pryskyřice se potom promyje acetonem a methanolem. Methylthioimidát vázaný k pryskyřici se potom převede na amidin pryskyřice zahříváním na vodní lázni o teplotě 55 °C po dobu 3 hodin s roztokem lOekv, octanu amonného v methanolu obsahujícím 5% kyseliny octové. Po této závěrečné konverzi se pryskyřice promyje methanolem, dimethylformamidem, dichlormethanem.

Peptid se odštěpí a chránící skupina se odstraní působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺; nalezeno 533.3, vypočteno 533,2.

Příklad 14

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Gly-Cha-NH2

K 0,150 g Rinkovy pryskyřice (substituce 0,78 mmol/g), po odstranění chránící skupiny Fmoc, se podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Cha-OH. Fmoc-Gly-OH, Fmoc^Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupina působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí pomocí HPLC jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 630,1, vypočteno 630,3.

Příklad 15

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu--A$n-(Ph-CH2-CH₂-)Gly-NH2

Pokud jde o N-substituované glyciny, používá se způsob podle Zuckerman a kol. (J. Am. Chem. Soc.,' 1:14, 10646 (1992), který je zde zahrnut jako odkaz). KOJ g pryskyřice Rink (substituce 0,78 mmol/g), po odstranění chránící skupiny Fmoc, se přes symetrický anhydrid kondenzuje ve směsi dichlormethan/dimethylformamid kyselina bromoctová. Po 10 minutách se pryskyřice promyje dichlormethanem a kondenzace se ještě jednou opakuje. Po promytí dichlormethanem a dimethylfbrmamidem se pryskyřice přes noc reaguje s ÍM roztokem 2-fenethylaminu vdimethylsulfoxidu. Po promytí dimethylformamidem se pryskyřice, která nyní nese zbytek (PhCH₂-CH₂-)NH-CH₂-C(O), připojená k můstku, reaguje se symetrickým anhydridem sloučeniny

Fmoc-Asn(Trt)-OH v směsi dichlormethan/dimethylformamid. Po odstranění chránící skupiny Fmoc se podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupiny působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1 hodinu a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC tak, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 694,9, vypočteno 695,3.

Příklad 16

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-G1u-Thr(Bzl)-NH-~CH₂-CH₂-CH(Ph)2

-24CZ 300249 B6

H-Thr(Bzl)-NH-CH₂CH₂-CH(Ph)2HCl

0,62 g (2 mmol) sloučeniny Boc-Thr(Bzl)-OH se rozpustí v 10 ml dichlormethanu, přidá se

2 mmol triethylaminu a roztok se ochladí na 0 °C. Za míchání se pomalu přidají 2 mmol isobutylchloroformiátu. Odstraní se chladicí lázeň, roztok se míchá po 15 minut a přidá se 2,5 mmol

3,3-difenylpropy laminu ve 2 ml dimethylformamidu a smčs se míchá při teplotě místnosti po 1 hodinu. Roztok se odpaří, rozpustí se v ethylacetátu a extrahuje se 0,5M roztokem hydrogensíranu draselného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, suší se nad io síranem hořečnatým a odpaří se. Olejový produkt se rozpustí v 10 ml dichlormethanu a přidá se 10 ml 4M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Po 10 minutách se odpaří rozpouštědla, výsledný hydrochlorid se vysráží diethyletherem, odfiltruje se, promyje se diethyletherem a suší se ve vakuu a získá se bílá pevná látka. MS analýza: (M+H)⁺: nalezeno 403,1, vypočteno 403,2.

Alloc-pAph-Glu-Thr(Bzl)-NH-CH₂-CH₂-CH(Ph)₂

K 0,5 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže kyselina 4-hydroxymethylfenoxyoctová (3 ekv., aktivovaná směsí DIC/HOBt po dobu 1,5 h). K pryskyřici se přes postranní řetězec připojí sloučenina Fmoc-Glu(OH)-O-allyl pomocí působení směsi DIC/HOBt/NMI v dimethylformamidu přes noci Allylová chránící skupina se odstraní protřepáváním pryskyřice s Pd(PPh₃)₄ ve směsi DMF/AcOH/NMM (10/2/1) v argonové atmosféře po dobu 4 h. Chránící skupiny zbavená karboxylová skupina se aktivuje roztokem 0,5 mmol BOP, 0,5 mmol HOBt,

1,5 mmol DIEA a 0,5 mmol H-Thr(Bzl>-NH-CH₂-CH₂-CH(Ph)₂-HCl v 1,5 ml dimethylformamidu po 2 hodiny. Po odstranění chránící skupiny Fmoc, se podle obecných způsobů popsaných v příkladě 1, kondenzuje Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupiny působením směsi kyselina trifluoroctová/thioanisol (95/5) po 1,5 hodiny a zpracuje se tak, jak je popsáno v příkladu 1. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC, jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 805,0, vypočteno 805,4.

Příklad 17

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu~Dab-NH-CH₂-CH2-Ph

K0,2g pryskyřice TentaGel SNH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže 4-hydroxymethylfenoxyoctová kyselina (2,5 ekv., aktivovaná směsí DIC/HOBt po dobu 4 h). Hydroxylová skupina se substituuje bromem reakcí pryskyřice se směsí (5 ekv.) CBr₄/(5 ekv.) PPh₃ v dichlormethanu 4 hodiny. Na pryskyřici derivatizovanou bromem se působí přes noc 2M roztokem fenethylaminu v dichlormethanu. Sloučenina Fmoc-Dab(Boc)-OH se kondenzuje k pryskyřici použitím TFFH/40 DIEA (acylfluoríd generovaný in šitu). Podle obecných způsobů popsaných v příkladu 1 se kondenzují následující chráněné aminokyseliny: Fmoc-431u-(OtBu)-OH a Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránící skupiny působením směsi kyselina trifluoroctová/triisopropylsilan (99/1) po 2 hodiny. Kyselina trífluoroctová se odpaří, peptid se rozpustí ve směsi H₂O/ACN a lyofilizuje. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC, jak se popisuje v příkladu 1, a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 624,2, vypočteno 624,3.

Příklad 18

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-NH-CH₂-CH₂-CN

K 0,2 g pryskyřice TentaGel S NH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže 4-hydroxymethylfenoxyoctová kyselina (3 ekv., aktivovaná směsí DIC/HOBt po dobu 1,5 hodiny). K pryskyřici se přes postranní řetězec připojí sloučenina Fmoc-Glu(OH)-0-allyl pomocí působení směsi DIC/HOBt/NMI v dimethylformamidu přes noc. Allylová chránící skupina se odstraní protřepáváním pryskyřice s Pd(PPh₃)₄ ve směsi DMF/AcOH/NMM (10/2/1) v argonové atmosféře po dobu 4

-25CZ 300249 B6 hodin. Karboxylová skupina zbavená chránící skupiny se aktivuje roztokem (3 ekv.) DIC/(3 ekv.) HOBt po 10 minut a k pryskyřici se 3 hodiny reaguje s3 ekvivalenty 2-kyanoethylaminu v dimethylformamidu. Po odstranění chránicí skupiny Fmoc, Se podle obecných způsobů popsaných v příkladě 1, kondenzuje Alloc-pAph-OH. Peptid se odštěpí a odstraní se chránicí skupina působením směsí kyselina trifluoroctová/triisopropylsilan (99/1) po 1 hodinu. Kyselina trifluoroctová se odpaří a peptid se rozpustí v H₂O/ACN a lyofilizuje se. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC, jak se popisuje v příkladu 1, a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 473,1, vypočteno 473,2.

Příklad 19

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Glu-Asn-NH-CH₂-Chx

K 0,1 g pryskyřice TentaGel SNH₂ (substituce 0,26 mmol/g) se váže amidový můstek Knorr. Sloučenina Fmoc-Asp(OH)-0-allyl se kondenzuje k můstku přes postranní řetězec a chránicí allylová skupina se odstraní jako v příkladě 18. Ochrany zbavená karboxylová skupina se aktivuje pomocí směsi 5 ekvivalentů DIC/5 ekvivalentů HOBt a na 2,5 hodiny se přidá 5 ekvivalentů cyklohexylmcthylaminu v dimethylformamidu. Po odstranění chránicí skupiny Fmoc se konden20 zují Fmoc-Glu(OtBu)-OH a Alloc-pAph-OH podle obecného způsobu popsaného v příkladu 1. Peptid se odštěpí a odstraní se chránicí skupina působením směsi kyselina trifluoroctová/triisopropylsilan (99/1) po 2 hodiny. Kyselina trifluoroctová se odpaří a peptid se rozpustí v H₂O/ACN a lyofilizuje se. Surová sloučenina se čistí použitím HPLC jak se popisuje v příkladu 1 a charakterizuje se pomocí MS. (M+H)⁺: nalezeno 629,9, vypočteno 630,3.

Příklad 20

Syntéza sloučeniny Alloc-pAph-Xjlu-Asn-NH-CH₂-CH₂-Ph hydrochlorid 5—terč—butyl—1 -methylesteru 2-(S)-[2-(S)allyloxykarbonylamino-3-(4-karbamimidyolfenyl)propionylamino]pentandiové kyseliny

K 3,48 g (10,6 mmol) hydrochloridu 2-(S)-allyikarbonylamino-3-(4-karbamimidoylfenyl)35 propionové kyseliny a 2,7 g (10,6 mmol) hydrochloridu 5-terc-butyl-l-methylesteru 2-(S)aminopentandiové kyseliny v 20 ml dimethylformamidu se při -15 °C přidá 3,83 g (11,67 mmol) TOTU a 2,7 ml (21,2 mmol) N-ethylmorfolinu. Směs se míchá 1 hodinu a potom se nechá ohřát na teplotu místnosti: Po odpaření se k zbytku přidá ethylacetát a organická vrstva se extrahuje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, roztokem hydrogensíranu draselného a vodou,

Organická vrstva se odpaří. Výtěžek: 2,8 g (50 %). MS: m/z = 491,3 (M+H)\

5-terc-Butylester 2-(S)-[2-(S)-allyloxykarbonylamíno-3-(4-karbamimidoylfenyl)propionylaminojpentandiové kyseliny

K3,06g (5,8 mmol) hydrochloridu 5-terc-butyl-l-methylesteru 2-(S)-[2-(S)-allyloxykarbonylamino-3-(4-karbamimidoylfenyl)propionylamino]pentandiové kyseliny ve 100 ml vody a 30 mí tetrahydrofuranu se přidá 0,49 g (11,6 mmol) hydrátu hydroxidu lithného. Roztok se míchá při teplotě místnosti po 12 hodin, odpaří se a suší se vymrazením. Zbytek se čistí chromatografícky na Sephadex LH20 za použití směsi (17/1/2) n-butanol/ledová kyselina octová/voda jako eluentu. Čisté frakce se spojí. Rozpouštědlo se odpaří, zbytek se převede do vody a vodný roztok se lyofilizuje. Výtěžek: 2,7 g (97 %). MS: m/z = 477,4 (M+H)⁺.

Hydrochlorid 4-(S)-[2-(S)-allyloxykarbonylamino-3-(4-karbamimidoylfenyl)propionylamino]-4-(2-karbamoyl-l-(S)-(2-fenethylkarbamoyl)ethylkarbamoyl)butanové kyseliny (Alloc-pAph-Glu-Asn-NH-CH₂-CH₂-Ph)

-26CZ 300249 B6

K48mg (0,1 mmol) 5-terc-butylesteru 2-(S)-[2-(S)-ally]oxykarbonylamino-3-(4-karbaniimidoylfenyl)propionylammo]pentandiové kyseliny a 27 mg (0,1 mmol) hydrochloridu 2~(S)amino-Nl-fenethylsukcinamidu v 5 ml dimethylformamidu se při 0 °C přidá 39 mg (0,1 mmol)

HATU a 24,2 mg (0,2 mmol) kollidinu. Směs se míchá 1 hodinu a potom se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po odpaření se zbytek čistí chromatograficky na Sephadex LH20 za použití směsi n-butanol/ledová kyselina octová/voda (17/1/2) jako elučního činidla. Čisté frakce se spojí. Rozpouštědlo se odpaří, zbytek se převede do vody a vodný roztok se suší lyofilizací. Výtěžek: 45 mg (66 %). MS: m/z = 638,4 (M+H)⁺.

io

Příklad 21

Syntéza sloučeniny A11oc-pAph-Glu-Asn-NH-(3-chlorbenzyl)

K 50 mg (0,105 mmol) 5-terc-butylesteru 2-(S)-[2-(S)-allyloxykarbonylamino-3-(4-karbamimidoylfenyl)propionylamino]pentandiové kyseliny a 61 mg (0,16 mmol) trifluoracetátu 2(S)-amino-N!-(3-chlorbenzyt)sukcinamidu v 5 ml dimethylformamidu se při 0 °G přidá 36 mg (0,11 mmol) TOTU a 57 μΐ (0,4 mmol) N-ethylmorfolinu. Směs se míchá po 1 hodinu a pak se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po odpaření se zbytek chromatograficky čistí na Sephadex LH20 za použití směsi (17/1/2) n-butanol/ledová kyselina octová/voda jako elučního činidla. Čisté frakce se spojí. Rozpouštědlo se odpaří, zbytek se převede do vody a vodný roztok se suší lyofilizací. Získá se 28 mg (41 %) 4-(S)-[2-(S)-7allyloxykarbonylaminO“3-(4-karbamimidoylfenyl)propionylamino]^H2-karbamoyl-l-(S)-(3-chlorbenzylkarbamoyl)-ethylkarbamoyl)25 butanové kyseliny (Alloc-pAph-Glu-Asn-NH-(3-chlorbenzyl nebo Alloc-pAph-Glu-Asn-3chlorbenzylamid). MS: m/z = 658,3 (M+H)⁺.

Další příklady sloučenin, které se připraví analogicky k výše uvedeným příkladům, jsou uvedeny v tabulce 2 výše.

Příklad 22 .

Stanovení Ki pro inhibicí faktoru VHa

Inhibiční aktivita (Ki) každé sloučeniny vůči faktoru VHa/aktivita tkáňového faktoru se určí za použit chromogenního testu popsaného dříve (J. A. Ostrém, F. Al-Obeidi, P. Safar, A, Šafářova,

S. K, Striňgeř, M. Patek, Μ. T. Cross, J. Spoonamore, J. C. LoCascio, P. Kasireddy, D. S.Thorpe,N. Sepetov, M. Lebl, P. Wildgose, P. Strop, Discovery of novel, potent, and speci40 fic family of factor Xa inhibitors via combinatorial chemistry. Biochemistry, 37, 1053 až 1059 (1998)), Kinetické testy se provádí při 25 °C v mikrotitračních destičkách (Costar Corp., Cambridge, MA) za použití kinetického čtecího zařízení destiček (Molecular Devices Spectramax 250). Typická zkouška zahrnuje 25 μΐ lidského faktoru Vila a TF (5nM a lOnM, konečná koncentrace) kombinovaných s 40 μΐ roztoků inhibitoru v 10% pufru DMSO/TBS-PEG (50mM

Tris, 15 mM NaO, 5 mM CaCl₂; 0,05 % PEG 8k, pH 8,15), Po 15 minutách preinkubační doby, se zkouška iniciuje přidáním 35 μΐ chromogenního substrátu S-2288 (D-Ile-Pro-Arg-pNA, Pharmacia Hepar lne, konečná koncentrace 500 μΜ), Zdánlivé inhibiční konstanty se vypočítají ze směrnice závislosti na čase v lineární fázi, typicky mezi 1 a 5 minutami po přidání substrátu do testovaného vzorku. Skutečná Ki se následně pro každou sloučeninu určuje pomocí korekce koncentrace substrátu (S) a Km za použití vzorce Ki=Ki zdán./(l+(S)/Km) (I. H. Segal, Enzyme Kinetics, vyd. John Wiley & Sons, New York, str. 100 až 125,1975).

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, obecného vzorce I, ve kterém n je nula nebo jedna a R je NHR²², kde R²² je takovájak bylo definováno v nároku 1.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1 a/nebo 2, obecného vzorce I, ve kterém R¹ je allyloxykarbonyl

   20 nebo allylaminokarbonyí.
4. 4. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 3, obecného vzorce I, ve kterém D je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Arg, Dap, Dab, Om, Lys, Dap[--C(=NH)-NH2], Dab[C(=NH)-NH₂], Lys[-C(=NH.)-NH₂], Lys[-C(=NH)-CH₃], 0m[-C(=NH>-CH3], Dab[-C(=NH)25 CH₃], Dap[-C(=NH)-CH/ Dab(Alloc), Asn, Gin, Met, Ser, Thr, Ser(Bzl), Thr(Bzl), Cys(Me),

   Cys(Bzl), Cys(Acm), Arg(NO₂), His, Trp, Phg, Gly, Ala, Val, Ile, Leu, Phe, Phe(4-NHC(=NH)-NH₂), Phe(4-NO₂), 2-Abu, Ala(3-CN), Ala[3-C(=NH)-NH₂], 2-Abu(4-CN) a 2Abu[4-C(=NH)-NH2].

   30 5. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 4, obecného vzorce I, ve kterém E je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Cha, Chg a Phe[4^C(-S-CH₂-<H₂-S-)-Ph].
5. 5 farmaceuticky přijatelná sůl.

   5 heteroaryl je aromatická skupina obsahující 5 až 13 kruhových atomů uhlíku, ze kterých jsou jeden, dva nebo tři atomy uhlíku nahrazeny heteroatomy vybranými ze skupiny, kterou tvoří N, O aS;

   heterocykloalkyl je monocyklická cyklická alkylová skupina obsahující 4 až 7 kruhových atomů ío uhlíku, ze kteiých jsou jeden nebo dva atomy uhlíku nahrazeny heteroatomy vybranými ze skupiny, kterou tvoří N, O a S;

   ve všech jejích stereoízomemíeh formách nebo směs stereoizomerů v jakémkoli poměru, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

   5 1. Sloučenina obecného vzorce I

   R'-A-B-D-E„-R² (I), ve kterém

   R¹ je R^I2C(O), kde

   R¹² je (C₂-C₆)-alkenyloxyskupina nebo (C₂-C6>-alkenylaminoskupina, kdy každá obsahuje jednu dvojnou vazbu, kdy alkenylová skupinaje lineární nebo rozvětvená;

   A je zbytek (L)-4-amidinofenylalaninu;

   B je zbytek (L)-glutamové kyseliny nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo esteru; .

   «

   20 D jeNH-CHR⁸²-C(O), kde

   R⁸² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a zbytky vybrané ze skupiny, kterou tvoří (Ci-C₆)-alkyl, fenyl,, fenyl-fCj-C^balkyl a heteroaryl-(C[-C₂)-alkyl, kdy tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde substituenty jsou

   25 nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří arnino, aminokarbonyl, amidino, guanidino, aminoalkyl, hydroxy, merkapto, které mohou být všechny substituované chránící skupinou, a acetimido, nitro a kyano, a kde alkylová skupina v substituentech je nasycená, lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, a kde chránící skupinaje vybraná ze skupiny, kterou tvoří terc-butoxykarbonyl, benzyloxykarbonyl, allyloxykarbonyl, nitro, benzyl, methyl, trityl a acetyl30 aminom ethyl;

   E„ je (NH-CHR⁷²-C(O))„, kde n je nula, jedna nebo dva, zbytky R⁷², které jsou na sobě nezávislé a jsou stejné nebo různé, jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a zbytky (C₃-C₈)-alkyl, fenyl, fenyl-(C|-C₂)-alkyl a heteroaryHCi-C₂)alkyl, přičemž tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde (C₃-C₈(Haikyi je lineární, rozvětvený nebo cyklický alkyl nebo cykloalkyl-(Ci40 C₂)-alkyl, a kde substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří alkyl, alkyloxy, halogen, trifluormethyl, nitro, kyano, alkylsulfonyl, alkylkarbonyl, fenylkarbonyl a 2-fenyl-1,3dithiolan-2-yl, a kde alkylová skupina v substituentech je nasycená, lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku;

   45 R² jeNR^2lR²², kde

   R²¹ je atom vodíku, (Ci-C₄)-alkyl nebo fenyl-(Ci-C4)-alky1,

   R²² je vybrána ze skupiny, kterou tvoří atom vodíku a skupiny (C1-C12)-alkyl, (C₆-Cj₃)-aryl,

   50 (C|-C₄)-a]kyl substituované jedním nebo dvěma (C$-C_]2)-arylovými zbytky, (C]-C4)-alkyl substituovaný monocyklickým nebo bicykl ickým hetcroary lovým zbytkem obsahujícím jeden nebo dva heteroatomy vybrané ze skupiny, kterou tvoří N, O a S, a (Ci-C₄)-alkyI substituovaný heterocykloalkylovou skupinou, kde tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, kde (Cj-C1₂>-alky 1 je lineární, rozvětvený nebo cyklický alkyl

   55 nebo cykloalkyl-(Ci-C4)-alkyl, a kde substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou

   -28CZ 300249 B6 tvoří halogen, trifluormethyl, hydroxy, nitro, kyano, alkyloxy, alkylendioxy, dialkylamino, alkylsulfonyl, aminosulfonyl a =0, a kde alkylové a alkylenové skupiny v substituentech jsou nasycené, lineární nebo rozvětvené a obsahují 1 až 6 atomů uhlíku;
6. 6. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 5, obecného vzorce I, ve kterém

   35 R¹ je allyloxykarbonyl nebo allylaminokarbonyí;

   D je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Arg, Dap, Dab, Om, Lys, Dap[-C(=NH)-NH₂], Dab[-C(=NH)-NH₂], Lys[-C(=NH)-NH₂], Lys[-C(=NH)-CH₃], Orn[-C(=NH>-CH₃], Dab[C(=NH)-CH₃], Dap[-C(=NH)-CH₃], Dab(Alloc), Asn, Gin, Met, Ser, Thr, Ser(Bzl), Thr(Bzl),

   40 Cys(Me), Cys(Bzl), Cys(Acm), Arg(NO₂), His, Trp, Phg, Gly, Ala, Val, Ile, Leu, Phe, Phe(4NO₂), Phe(4-NH-C(=NH>NH₂), 2-Abu, Ala(3CN), Ala[3-C(=NH)-NH₂], 2-Abu(4-CN) a 2Abu[4-C(=NH)-NH₂];

   n je nula nebo jedna;

   E je zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří Cha, Chg a Phe[4-C(-S-CH₂-CH₂-S-)-Ph];

   R² je NHR²²;

   50 R²² je vodík nebo zbytek vybraný ze skupiny, kterou tvoří benzyl, naftylmethyl, pyridy Imethy 1, fenýlethyl, nafíylethyl, pyridylethyl, fenylpropyl, naftylpropyl, pyridylpropy 1, fluorenyl, difenylmethyl, difenylethy 1 a difenylpropyl, přičemž tyto zbytky jsou nesubstituované nebo substituované jedním, dvěma nebo třemi substituenty, které jsou nezávisle na sobě vybrány ze skupiny, kterou tvoří F, CI, Br, hydroxy, methoxy, methylendioxy, nitro, kyano, dialkylamino, alkylsulfo-29CZ 300249 B6 nyl, aminosulfonyl a trifluormethyl, kde alkylová skupina v substituentech je nasycená lineární nebo rozvětvená a obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku;

   v jakékoli své stereoizomemí formě nebo směsi stereoizomerů v jakémkoli poměru, nebo její
7. 7. Sloučenina vzorce I podle jednoho nebo více nároků 1 až 6, kterou je

   Al loc-pAph-Glu-Arg-Cha-N H₂,

   Allylaminokarbonyl-pAph-Glu-Arg-Cha-NH?, ío Alloc-pAph-Glu-Arg-Chg-NH₂,

   Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH₂]-Cha-NH₂

   Alloc-pAph~Glu-Ala[3-C(=NH)-NH₂]-Cha-NH₂

   Alloc-pAph-Glu~Asn-Cha-NH₂

   Alloc-pAph-Glu-Dab-Cha-NH₂

   15 Al loc-p Aph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH₂]-NH₂

   Alloc-pAph-Glu-Glý-Cha-NH₂ Alloc-pAph-Glu-Thr(Bzl)-NH-(CH?)₂-CH(Ph)₂ Alloc-pAph-Glu-Dab-NH-(CH₂)₂-Ph Alloc-pAph-Glu~Asn-NH-CH₂-Chx

   20 Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-CH₃]-Cha-NH₂ Alloc-pAph-Glu-Dab[-C(=NH)-NH₂]-Cha-NH₂ Alloc-pAph-Glu-2-Abu(4-CN)-^jCha-NH₂ AUoe-pAph-Glu-Ala(3-CN)-Cha-NH₂.

   Alloc-pAph-Glu-Asn-l-naftylmethylamid

   25 Alloc-pAph-Glu-Asn-l-(l-naftyl)ethylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-2-naftylmethylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-3,4-dichlorbenzylamid Alloc-pAph-<ilu-Asn-2-{3-chlorfenyl)ethylamid Alloc-pAph-Glu-Arg(NO₂)-Cha-NH₂

   30 Alloc-pAph-Glu-Cys(Bzl)-Cha-NH2 Al loc-p A ph-Glu-T rp-Cha-N H₂ Alloc-pAph-Glu-Phg-Cha-NH₂ Allóc-pAph-Glu-Asn-9-fluorenylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-3,5-bistrifluormethylbenzylamid

   35 Alloc-pAph-Glu-Dap[-C(=NH)-NH₂]-Phe[4-C(-S-(CH₂)₂-S-)-Ph]-NH₂ Alloc-pAph-Glu-Cys(Bzl)-Cha-NH₂ Alloc-pAph-Glu-Thr(Bzl)-Cha-NH₂ ' Alloc-pÁph-Cilu-Phe(4-NO₂)-Cha-NH;

   Alloc-pAph-Glu-Asn-3,4-methylendioxybenzy1amid

   40 Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(2-naftyl)ethy1amid Alloc-pAph-Glu-Asn-2-(l-naftyl)ethylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-2_(2-pyridyl)ethylamÍd Alloc-pAph-Glu-Asn-2,2-difenylethylamid Alloc-pAph-Glu-Asn-2,4-difluorbenzylamid nebo

   45 AUoc-pAph-Glu-Asn-4-dimethylaminobenzylamid nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo ester.
8. 8. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro

   50 použití jako léčivo.
9. 9. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny podle jednoho nebo více nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, a farmaceuticky přijatelný nosič.

   55 '

   -30CZ 300249 B6
10. 10. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro použití jako inhibitor faktoru Vila.
11. 11. Sloučenina podle jednoho nebo více nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl pro 5 použití při inhibicí nebo snížení srážení krve, zánětlivé odezvy, tromboembolických onemocnění nebo cévní restenózy.