RU2097033C1 - Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов - Google Patents
Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2097033C1 RU2097033C1 RU94037136/14A RU94037136A RU2097033C1 RU 2097033 C1 RU2097033 C1 RU 2097033C1 RU 94037136/14 A RU94037136/14 A RU 94037136/14A RU 94037136 A RU94037136 A RU 94037136A RU 2097033 C1 RU2097033 C1 RU 2097033C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cathepsin
- platelet aggregation
- inhibitors
- imidazole
- induced
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии. Сущность изобретения: имидазолсодержащие соединения общей формулы
а именно, метиловый эфир гистидина дихлоргидрат и лауроилгистамин ингибируют катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для контроля гемостаза, а также фармакологических средств для предотвращения тромбообразования, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях. 1 табл.
а именно, метиловый эфир гистидина дихлоргидрат и лауроилгистамин ингибируют катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для контроля гемостаза, а также фармакологических средств для предотвращения тромбообразования, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях. 1 табл.
Description
Изобретение относится к биохимии крови, регуляции системы гемостаза, а именно к новым низкомолекулярным синтетическим ингибиторам тромбообразования.
Катепсин G представляет собой сериновую протеазу, которая выделяется активированными лейкоцитами при воспалительных заболеваниях и обладает антимикробными свойствами. Однако эта протеаза является мощным индуктором агрегации тромбоцитов, что может привести к тромботическим осложнениям при воспалительных заболеваниях. Поэтому поиск новых ингибиторов катепсин-G-индуцированной активации тромбоцитов актуален для решения проблем контроля гемостаза и борьбы с тромботическими осложнениями при воспалении и инфекциях.
Наибольший интерес в этом отношении представляют низкомолекулярные соединения с простым способом получения.
Известны низкомолекулярные ингибиторы тромбообразования, представляющие собой модифицированные простациклины, теофилины и три-тетрапептиды, однако они не ингибируют катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов.
Наиболее близким по действию к заявляемым соединениям является ингибитор катепсина G-эглин. Последний представляет собой низкомолекулярный белок, состоящий из 70-и аминокислот, выделенный из пиявок Hirudo medicinalis. Недостатком этого ингибитора является подавление исключительно протеазной активности, но не индуцированной катепсином G агрегации тромбоцитов. Кроме того, процесс выделения эглина из природного источника пиявок сложен, многостадиен, (включая многократную колоночную и гель-хроматографии) и энергоемок вследствие необходимости многократной лиофилизации белка.
Нами предлагаются новые низкомолекулярные ингибиторы катепсина G общей формулы (I), обладающие способностью подавлять тромбообразование, с простым способом их получения.
Конкретно предлагаемые вещества представляют собой дихлоргидрат метилового эфира гистидина (H-His-OMe•2HCl) и N-лауроилгистамин (Lau-HA). Дихлоргидрат метилового эфира гистидина получают этерификацией гистидина метиловым спиртом в кислой среде и выпускается рядом фирм, производящих химические реактивы для пептидного синтеза. N-лауроилгистамин получают ацилированием гистамина хлорангидридом лауриновой кислоты в органическом растворителе с высоким выходом и следующими константами: Т. пл. 121-125oC. ИК-спектр в вазелиновом масле, ν см-1: 1570 (амид I), 1460 (амид II), 1H-ЯМР (CD3OD), d м. д. 0,92 (т, 3Н, w -CH); 1,30 (м, 16Н, 8*CH2); 1,56 (т, 2H, b-CH2); 2,17 (т, 2Н, a-CH2); 2,92 (т, 2Н, a-CH2-HA); 3,50 (т, 2Н, b-CH2-HA); 7,30 (c, 1H, CH-4-Im); 8,80 (c, 1H, CH-2-Im). Найдено, С 69,67; H 10,57; N 14,29. C17H31N3O. Вычислено, С 69,52; H 10,56; N 14,31.
Катепсин G был выделен из нейтрофилов периферической крови человека по методу, описанному ранее. Катепсин G и тромбин (Sigma) были использованы в качестве индукторов агрегации тромбоцитов. Тромбоциты выделяли из венозной крови методом центрифугирования. В качестве антикоагулянта был использован 3,8%-ный водный раствор цитрата натрия в соотношении 1 9 с кровью. Среда для суспендирования тромбоцитов содержала HEPES-буфер 10 мМ, NaCl 150 мМ, KCl 2,7 мМ, NaH3PO4 0,37 мМ, MgCl2 1 мМ, CaCl2 1 мМ, глюкозы 5 мМ, pH 7,4 с аспиразой 0,1 мг/мл. Число тромбоцитов в исследуемых пробах составляло 3•10 в 1 мл. Агрегацию тромбоцитов в суспензии регистрировали на двухканальном агрегометре Labor APACT, Hamburg. Содержание в тромбоцитах цитоплазматического Ca ([Ca]цит) определяли с помощью флуоресцентного кальциевого зонда Fura-2AM, Calbiochem, USA флуориметрическим методом [10] Флуоресценцию регистрировали на спектрофлуориметре Hitachi-3000, Japan. Статическую обработку проводили, используя критерий Стьюдента.
Катепсин G в диапазоне концентраций 0,1 мкМ -10,0 мкМ вызывал развитие прямой дозозависимой агрегации тромбоцитов, которая по форме кривой, величинам амплитуды и максимальной скорости была близка к агрегации клеток, вызванной тромбином (1,0 ед/мл) (см. таблицу). Исходя из этого, при изучении влияния HisOMe•2HCl и LauHA на активированные тромбоциты, катепсин G и тромбин использовались в вышеуказанных концентрациях. В контрольной серии экспериментов была проведена оценка влияния HisOMe•2HCl и LauHA на функциональное состояние неактивированных тромбоцитов. Опыты показали, что HisOMe•2HCl (0,001 мМ 1,0 мМ), равно как и LauHA (0,001 мМ-1,0 мМ) не вызывали развития агрегации тромбоцитов в течение 15-минутной инкубации. Добавление HisOMe•2HCl в суспензию тромбоцитов за 5 мин до их стимуляции катепсином G или тромбином препятствовало агрегации клеток. Наиболее выраженный ингибирующий эффект отмечался при использовании максимальной из исследованных концентраций HisOMe•2HCl, составляющий 1 мМ. HisOMe•2HCl полностью подавлял развитие катепсин- G-индуцированной агрегации тромбоцитов, вызванной тромбином, на фоне HisOMe•2HCl снизилась менее значительно, в среднем на 58% (P<0,01) и 46% (P<0,05) соответственно. Следует отметить, что тромбин-индуцированная агрегация тромбонов в условиях инкубации с HisOMe•2HCl имела двухволновую форму в отличие от одноволновой в контрольной серии экспериментов (в отсутствии HisOMe•2HCl). Уменьшение концентрации HisOMe•2HCl до 0,1 мМ, а также времени инкубации тромбоцитов до 2 мин снижало величину его ингибирующего влияния на катепсин G-, так и тромбининдуцированную агрегацию клеток. LauHA в концентрации 1 мМ также подавлял развитие агрегации тромбоцитов, вызванный катепсином G. Так после 5-минутной инкубации тромбоцитов с LauHA амплитуда катепсин-G-индуцированной агрегации снижалась на 43% (P<0,01), а максимальная скорость на 56% (P<0,01). Величина ингибирующего влияния LauHA на агрегацию тромбоцитов, стимулированных катепсином G, в зависимости от времени инкубации (от 2 до 10 мин) достоверно не изменялась. В то же время нами не было отмечено достоверного снижения показателей агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, на фоне LauHA. В этих условиях имела место лишь тенденция к снижению амплитуды агрегации в среднем на 16%
Можно считать, что предлагаемые ингибиторы тромбоцитарной активности, индуцированной катепсином G, обладают прямыми антитромбоцитарными свойствами в отличие от антипротеазных свойств эглина. По сравнению с эглином предлагаемые нами ингибиторы являются более простыми для получения. Кроме того, LauHA позволяет селективно ингибировать катепсин- G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, не оказывая влияния на тромбинстимулированное тромбообразование. HisOMe•2HCl полностью подавляет катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ингибируя в то же время и тромбининдуцированное тромбообразование. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для выяснения механизмов нарушения гемостаза, а также в качестве лекарственных фармакологических препаратов, препятствующих тромбообразованию, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях.
Можно считать, что предлагаемые ингибиторы тромбоцитарной активности, индуцированной катепсином G, обладают прямыми антитромбоцитарными свойствами в отличие от антипротеазных свойств эглина. По сравнению с эглином предлагаемые нами ингибиторы являются более простыми для получения. Кроме того, LauHA позволяет селективно ингибировать катепсин- G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, не оказывая влияния на тромбинстимулированное тромбообразование. HisOMe•2HCl полностью подавляет катепсин-G-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ингибируя в то же время и тромбининдуцированное тромбообразование. Предлагаемые ингибиторы могут найти применение в качестве реагентов для выяснения механизмов нарушения гемостаза, а также в качестве лекарственных фармакологических препаратов, препятствующих тромбообразованию, особенно при инфекционных и воспалительных заболеваниях.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94037136/14A RU2097033C1 (ru) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94037136/14A RU2097033C1 (ru) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU94037136A RU94037136A (ru) | 1996-10-20 |
RU2097033C1 true RU2097033C1 (ru) | 1997-11-27 |
Family
ID=20161236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU94037136/14A RU2097033C1 (ru) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2097033C1 (ru) |
-
1994
- 1994-09-30 RU RU94037136/14A patent/RU2097033C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Гринштейн Дж., Виннц М. Химия аминокислот и пептидов. - М.: Мир, 1965, с. 548. 2. Синтез молекулярных систем на основе парафинов и их димеров, содержащих донорно-акцепторные заместители, с целью создания на их основе соединений для медицины, науки и техники: Отчет МИТХТ им.М.В.Ломоносова.// Всероссийский научно-технический и информационный центр "Сборник рефератов НИР и ОКР". - М., 1994, сер. 17, N 5 - 6, с. 34 - 35, реферат N 02940002701, 31.05.94. 3. E.Seemuller et al. Eglin: Elastase-cathepsin inhibitor from Leeches "Method in enzymology", 1981, v. 80, part. C, p. 804 - 817. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU94037136A (ru) | 1996-10-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5672582A (en) | Thrombin inhibitors | |
Colman | Surface-mediated defense reactions. The plasma contact activation system. | |
EP0635008B1 (de) | Piperazide von substituierten phenylalanin-derivativen als thrombin inhibitoren | |
AU723658B2 (en) | Reversible cysteine protease inhibitors | |
DE69534383T2 (de) | Verfahren zur aufreinigung des faktors viii | |
Jochum et al. | Clotting and other plasma factors in experimental endotoxemia: Inhibition of degradation by exogenous proteinase inhibitors | |
JPH08509735A (ja) | トロンビン阻害剤 | |
EA200001024A1 (ru) | Производные аминогуанидина и алкоксигуанидина и способ их получения (варианты), фармацевтическая композиция и способ ингибирования протеолиза у млекопитающего, способ лечения различных заболеваний млекопитающего, способы ингибирования индуцированной тромбином агрегации тромбоцитов и свертывания фибриногена в плазме, тромбина, агрегации тромбоцитов и образования тромбов в крови, устройство для сбора крови, искусственного кровообращения и хранения крови | |
Shandall et al. | Colonic healing: a role for polymorphonuclear leucocytes and oxygen radical production | |
Seegers | Multiple protein interactions as exhibited by the blood-clotting mechanism. | |
DE69635977T2 (de) | Verfahren zur Bestimmung der therapeutischen Wirkung von Metalloproteinase-Verbindungen, neue Inhibitor-Verbindungen und deren therapeutische Verwendung | |
US4390630A (en) | Hementin--a fibrinolytic agent | |
RU2097033C1 (ru) | Имидазолсодержащие ингибиторы катепсин g-индуцированной агрегации тромбоцитов | |
Andrassy et al. | Bleeding in uremic patients after carbenicillin | |
JP2758162B2 (ja) | 出血疾患の治療方法および治療用組成物 | |
RU2097039C1 (ru) | Средство для замедления агрегации тромбоцитов | |
WANGENSTEEN et al. | Plasma myocardial depressant activity (shock factor) identified as salt in the cat papillary muscle bioassay system | |
Lefer et al. | Protective effects of a novel thromboxane analog in lethal traumatic shock | |
Eckle et al. | Protein S degradation in vitro by neutrophil elastase | |
Winn et al. | Argatroban and inhibition of the vasomotor actions of thrombin | |
Stokke et al. | Continuous intravenous infusion of elastase in normal and agranulocytic minipigs—effects on the lungs and the blood coagulation system | |
US5897860A (en) | Method for controlling bleeding and microbial infections by administering thrombin, casein kinase II, and sphingosine | |
Turino et al. | In Vivo Effects of Pancreatic Elastase I—Studies on the Serum Inhibitors | |
Kraut et al. | The Na+/Ca2+ exchanger regulates cytolysin/perforin-induced increases in intracellular Ca2+ and susceptibility to cytolysis. | |
Fujii | Inhibitors of kinin-forming enzymes |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20051001 |