CZ297533B6 - Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence - Google Patents

Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence Download PDF

Info

Publication number
CZ297533B6
CZ297533B6 CZ0081699A CZ81699A CZ297533B6 CZ 297533 B6 CZ297533 B6 CZ 297533B6 CZ 0081699 A CZ0081699 A CZ 0081699A CZ 81699 A CZ81699 A CZ 81699A CZ 297533 B6 CZ297533 B6 CZ 297533B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
compound
pharmaceutically acceptable
acceptable salts
butyrylcholinesterase
bche
Prior art date
Application number
CZ0081699A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ81699A3 (cs
Inventor
H. Greig@Nigel
Yu@Qian-Sheng
Brossi@Arnold
T. Soncrant@Timothy
Hausman@Marvin
Original Assignee
Axonyx
National Institute Of Health
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Axonyx, National Institute Of Health filed Critical Axonyx
Publication of CZ81699A3 publication Critical patent/CZ81699A3/cs
Publication of CZ297533B6 publication Critical patent/CZ297533B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/048—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being five-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D495/14—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Řešení se týká použití inhibitorů butyrylcholinesterázy k přípravě léčiva pro prevenci a léčbu zhoršování poznávací funkce spojené se stárnutím nebo Alzheimerovou chorobou účinným množstvím inhibitoru butyrylcholinesterázy, který je vybrán ze skupiny sestávající zN.sup.8.n.-benzylnorcymserinu, N.sup.8.n.-norcymserinu, N.sup.1.n.,N.sup.8.n.-bisnorcymserinu, N.sup.1.n.,N.sup.8.n.-bisbenzylnorcymserinu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí.

Description

Ing. Jana Vandělíková, Petrská 12, Praha 1, 11000 (54) Název vynálezu:
Použití inhibitorů butyryichoiinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence (57) Anotace:
Řešení se týká použití inhibitorů butyryichoiinesterázy k přípravě léčiva pro prevenci a léčbu zhoršování poznávací funkce spojené se stárnutím nebo Alzheimerovou chorobou účinným množstvím inhibitoru butyryichoiinesterázy, který je vybrán ze skupiny sestávající z N8-benzylnorcymserinu, N8norcymserinu, N ,N8-bisnorcymserinu, N*,N8bisbenzylnorcymserinu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí.
Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence
Oblast techniky
Vynález se týká inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence.
Dosavadní stav techniky
Předpokládá se, že defekty cholinergního systému jsou podnětem pro zhoršení poznávací funkce spojené s normálním stárnutím a Alzheimerovou chorobou (Bartus, et al., Science, 217, 408-417, (1982); Fisher, et al., Neurobiol. Aging, 13, 9/23, (1992)). Mnoho výzkumného úsilí se zaměřilo na vývoj cholinomemetické náhradí terapie jako na potenciální způsob léčby těchto poškození. Mezi nimi byl zkoumán i vliv cholinesterázových inhibitorů jako je fysostigmin (Phy) a tetrahydroaminoakridin (ThA) na paměťový efekt jak u zvířat (Rupniak, et al., Neurobiol. Anging, 11,09-613, (1990); Murray, et al., Psychopharmacology, 105, 134-136, (1991)), tak u lidí (Mohs, et al., J. Am. Geriatr. Soc., 3, 749-757, (1985); Summers, et al., N. Engl. J. Med., 315, 1241-1245,(1986)).
Jako selektivní inhibitory acetylcholinesterázy (AChE) byly navrženy i další látky. Je známo, že heptylfysostigmin (Heptyl-Phy) má větší lipofilicitu, delší inhibiční účinek na cholinesterázu a déle trvající zvýšení koncentrace acetylcholinu v mozku s menší toxicitou než výchozí látka (Brufanin, et al., Pharmacol. Biochem. Behav., 26, 625-629, (1987). Jde o to, zda bude terapeutické okno pro klinické využití heptyl-Phy dostatečně široké.
Zjistilo se, že fenserin((-)-N-fenylkarbamoyleserolin) je vynikajícím selektivním inhibitorem AChE a tedy, že se hodí jako látka pro terapii zhoršování poznávací funkce spojené se stárnutím a Alzheimerovou chorobou. (US patent č. 5 409 948, publikovaný 25. dubna 1995).
V US patentu č. 5 171 750 publikovaném 15. prosince 1992 je uvedena řada substituovaných fenserinů, které se ukazují jako selektivní inhibitory AchE i butyrylcholinesterázy (BChE). O kumylkarbamátu (4'-izopropylfenylkarbamátovém) derivátu (-)-fysovenolu bylo zjištěno, že má reverzní enzymovou specificitu, tj. selektivně inhibuje přednostně BChE vedle AChE. Patent ukazuje, že sloučeniny vynálezu jsou vhodné „pro léčbu cholinergních onemocnění jako je glaukom, Myasthenia Gravis, Alzheimerova choroba a jako antidot při otravě organofosfáty“. Není uvedeno, který typ inhibitoru by se měl pro léčbu specifikovaných onemocnění použít, přesto jde o další význak takového vlivu, kde AChE, který se nachází v buňkách červených krvinek, v mozku a nervových tkáních se zdá specifičtějším enzymem hydro lyžujícím acetylcholin (ACh) in vivo než BChE nacházející se v séru, pankreatu a játrech. Výrazná cholinergická ztráta AD je provázena dramatickým snížením obsahu enzymů cholinacetyltransferázy působící při syntéze cholinergického neurotransmiteru acetylcholinu, Ach a AChE, které ukončují působení Ach (Perry, et al., Brit Med. J., 2,6150, 1457-1459, (1978); Whitehouse, et al., Science, 215, 1237-1239,(1982).
US patent 5 378 723 publikovaný 3. ledna 1995 popisuje řadu derivátů kyseliny thiafýsovenolkarbamové o kterých se uvádí, že vykazují vysokou potenci při inhibici AChE nebo BChE. Sloučeniny tohoto vynálezu podobně jako v případě výše uvedeného US patentu 5 171 750, jsou vhodné pro léčbu onemocnění jako je glaukom, Myasteria Gravis, Alzheimerovy choroby a při otravě organofosfáty. Tak, jako u výše uvedeného, není nic uvedeno o tom, pro které typy inhibitorů mají být použity při kterém onemocnění.
-1 CZ 297533 B6
Geula a Mesulam v článku nazvaném „Cholinesterázy a patologie Alzheimerovy choroby“, Alzheimer's Disease and Associated Disorders, Vol. 9, Suppl. 2, str. 23-28, (1995) uvedli svá pozorování ve shrnutí takto: „Alzheimerova choroba (AD) je provázena významnou ztrátou aktivity acetylcholinesterázy (AChE) ve spojení s kortikálními cholinergickými axony a cholinoceptivními neurony. Souběžně s touto ztrátou se cholinesterázová (ChE) aktivita objevuje v mozkové kůře postižených AD ve formě aktivity AChE a BChE spojené s plaky, komplikacemi a amyloidní angiopatií. Naše pozorování ukázala, že ChE spojené s patologickými lézemi AD (ADChEs) mají různé enzymatické vlastnosti a je zcela možné, že jsou odlišného původu v porovnání s ChE spojeným s normálními neurony a axony. ADChE mají co se týká patogeneze AD nej pravděpodobněji necholinergickou funkci“. V dalším odstavci uvádějí autoři na straně 26: „Tato pozorování ukazují, že gliomy jsou patrně zdrojem ChE a podobně i BChE ve spojení s patologickými lézemi AD. Uvádějí také, že vysoký poměr BChE kAChE pozitivní gliomy mohou hrát souhlasnou nebo kauzativní roli v neuropatologii tohoto onemocnění. Je možné, že existují další ložiska ChE s enzymatickými vlastnostmi podobnými nebo identickými s AD ChE. Tato možnost zůstává neobjasněna“.
Odborníci uvádějí, že BChE se nachází ve značně vyšších množstvích v AD plakách než v plakách nedementních mozků srovnatelného stáří. Navíc bylo zjištěno, že BChE mění agregaci beta amyloidpeptidů (Αβ). Byla uvedena hypotéza, že pokud je AChE inhibován vysokou koncentrací acetylcholinu (Ach), zatímco BChE zůstává neovlivněn, může BChE hrát významnou úlohu při regulaci synaptických koncentrací ACh v mozku pacientů AD in vivo. Inhibitor BChE vniklý do mozku způsobuje značné zvýšení hladiny mimobuněčné ACh (Giacobinim, et al., Proč. Soc. Neurosci., 22, 203, (1996).
Bylo také zjištěno, že vzorky plaků AD, které byly kompaktního nebo neuritického typu, byly téměř vždy spojeny s intenzivní aktivitou BChE. Byl učiněn závěr, že aktivita BChE se objevuje v mezistupni tvorby plaků, a že tedy může vytvářet jeden z faktorů týkajících se transformace původně benigního Αβ depozitu na kompaktní neuritickou formu spojenou s neurální degenerací a demencí.
Podstata vynálezu
Neočekávaně bylo zjištěno, a to tvoří základ tohoto vynálezu, že inhibitory BChE mohou být využívány pro systematické podávání jako prevence nebo léčba při zhoršování poznávací funkce spojené se stárnutím nebo Alzheimerovou chorobou.
I když bylo již dříve zjištěno, že aktivita BChE tkví primárně v periferních orgánech jako je pankreas, játra a séru nebo oběhu a jeho inhibice byla spojována s vedlejšími účinky pozorovanými u první generace terapie Alzheimerovy choroby (Liston, et al., Proč. Soc. Neurosci., 20, 608, (1994); Soreq a Zachnt, Human Cholinesterase and ?, Academie Press, New York, str. 2129, (1993), ref.), nebylo dosud v oboru navrženo použití selektivních inhibitorů BChE pro léčbu nebo prevenci zhoršování poznávací funkce spojené se stárnutím nebo Alzheimerovou chorobou.
Dalším faktorem, na který je nutno upozornit při možném použití selektivních inhibitorů BChE pro léčbu chorob zhoršování poznávací funkce mozku a CNS, byl očekávaný profil rozložení těchto látek. Údaje v oboru dostupné uvádějí, že takové sloučeniny by měly být přednostně vázány na periferní orgány, kde tkví hlavní podíl jejich účinku. Neočekávalo se tudíž, že by klinicky vhodné koncentrace selektivních inhibitorů BChE systematicky pacientům podávaných prošly krví mozkovou bariérou a byly tak mozku k dispozici, protože (i) od takových sloučenin by se očekávalo, že se budou vázat na systémový enzym před dosažením mozku, který omezuje jejich vstup, a (ii) většina inhibitorů BChE známých v oboru nemůže do mozku přímo vstoupit. Až dosud byly inhibitory BChE skutečně využívány většinou jako pesticidy v zemědělství (Soreq a Zachut, Human Cholinesterase and Anticholinesterases, Academie Press, New York, str. 21-29, (1993)).
-2CZ 297533 B6
Termín „selektivní“ tak, jak je zde používán, zahrnuje ty inhibitory BChE, jejichž poměr hodnot IC (50) BChE lidské plazmy ve srovnání s jejich IC (50) AChE lidských erythrocytů je větší než přibližně 15:1.
Hodnotu IC (50) lze u takových inhibitorů stanovit metodami v oboru známými. Při takové zkoušce se farmakologická aktivita každé látky IC (50), definovaná jako taková koncentrace v nanomolech, která z 50 % inhibuje aktivitu enzymu AChE a BChE, stanovuje zvlášť. Pro stanovení hodnot IC (50) se aktivita enzymu každé koncentrace vyjádří jako její procento stanovené v nepřítomnosti druhé látky. To se pak převede do logaritmického měřítka (logit formát), kde logit = In (% aktivity/[l 00 - % aktivity]) a vynese jako funkce logaritmické koncentrace sloučeniny. Hodnoty IC (50) (tj. logit = In (5 0/[ 100-50] = 0) byly stanoveny pouze z korelačních koeficientů (r2) při méně než -0,985 a pokud bylo z duplikátních vzorků dosaženo inhibice větší než 50 %. Poměr selektivity se potom stanovil porovnáním hodnot IC (50) získaných pro každou sloučeninu s AChE ku hodnotě pro BChE.
Stručný popis obrázků
Obrázky ΙΑ, 1B a IC představují tabulku chemických struktur sloučenin zkoušených na aktivitu a zahrnuje sloučeniny s vhodnou selektivitou na BChE podle tohoto vynálezu.
Obrázek 2 je imunozkouška ke stanovení účinku uvedených sloučenin na vylučování βΑΡΡ in vitro.
Obrázek 3 je diagram uvádějící, že cymserin snižuje hladinu CSF βΑΡΡγ u krys.
Obrázek 4 je diagram znázorňující časový průběh distribuce v bariéře krev/mozek u krys po intravenózním podání 1 mg.kg1 cymserinu.
Obrázek 5 je diagram znázorňující, že cymserin zlepšuje paměťový výkon krys.
Příklady provedení
Podrobný popis vynálezu
Vhodnými selektivními inhibitory BChE podle způsobu tohoto vynálezu jsou sloučeniny uvedené v tabulce 1, které mají hodnotu selektivity na BChE 15 nebo vyšší, a jejich struktury jsou uvedeny na obrázcích ΙΑ, 1B a IC (společně s jejich poměrem selektivity), což pro sloučeniny podle tohoto vynálezu představuje opět hodnotu selektivity na BChE 15 nebo vyšší. Pro účely porovnání struktury jsou v tabulce 1 a obrázcích ΙΑ, 1B a IC uvedeny také další příbuzné sloučeniny nevykazující požadovanou selektivitu na BChE.
Mezi sloučeninami uvedenými v tabulce 1 a obrázku 1 jsou jisté nové sloučeniny, které inhibují butyrylcholinesterázu. Novými sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou (čísla v závorkách odpovídají číslu sloučeniny v tabulce 1): N8-benzylnorcymserin(33), N8-norcymserin(37), N1, N8-bisnorcymserin (41), N1, N8-bisbenzylnorfysostigmin (42), N1, N8-bisbenzylnorfenserin (43), aN1, N8-bisbenzylnorcymserin (45).
-3CZ 297533 B6
Tyto nové sloučeniny byly syntetizovány takto:
(-)-(3aS)-8-benzyl-l,3a-dimethyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-yl-N-4'-izopropylfenylkarbamát: (N8-benzylnorcymserin - sloučenina 33).
(-j-QaSj-S-benzyl-lJa-dimethyl-l^úúa^Sa-hexahydropynOiPjS-bJmdol-S-ol1 (33 mg, 0,112 mmol) byl rozpuštěn v etheru (2 ml) a přidán Na (1 mg). Směs byla za laboratorní teploty míchána po dobu 1 minuty a potom přidán 4-izopropylfenylizokyanát (18,1 mg, 0,112 mmol). Směs byla za laboratorní teploty míchána 5 minut. Po odstranění rozpouštědla byl zbytek chromatografován (CH2Cl2/MeOH = 20/1) a získána látka 33 (40 mg, 80 %) jako pěna: [a]D-60',0° (c = 0,2, CHC13); ’H NMR (CDC13) δ 7,40 - 7,08 (m, 9H, Ar-H), 6,80 (d, J = 2,2 Hz, 1H, C4-H), 6,70 (dd, = 2,2; 8,5 Hz, 1H, C6-H), 6,15 (d, J = 8,5 Hz, 1H, C7-H), 4,45 a 4,35 (AB, J = 16,6 Hz, 2H, Ph-CH2), 4,25 (s, 1H, C8a-H), 2,80 (m, 1H, Ph-CH<), 2,68 (m, 2H, Cl-H2), 2,32 (s, 3H, N1-CH3), 1,90 (m, 2H, C2-H2), 1,35 (s, 3H, C3a-CH3), 1,15 (d, J = 7,0 Hz, 6H, >CMe2); EI/MS m/z: (relativní intenzita): 294 (MH+-ArNHCO, 65), 280 (2,2), 265 (3,6), 237 (75), 207 (58), 160 (34), 91 (100). HR-MS m/z vypočteno pro C29H33N3O2: 455,2573; nalezeno: 455,2569.
(-)-(3aS)-l,3a-dimethyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-yl-N^l'-izopropylfenylkarbamát: (N8-norcymerserin - sloučenina 37).
Sloučenina 33 (22 mg, 0,048 mmol) byla rozpuštěna ve směsi MeOH (1 ml), H2O (1 ml) a TFA (0,5 ml). Byl přidán palladiumhydroxid na uhlíku (5 mg). Reakční směs byla za laboratorní teploty míchána v atmosféře vodíku za barometrického tlaku po dobu 1 hodiny, a potom byl katalyzátor odfiltrován.
Filtrát byl odpařen ve vakuu a obdržený zbytek, který byl rozpuštěn v H2O zalkalizován Na2CO3, extrahován etherem a potom vysušen nad Na2SC>4. Po odstranění rozpouštědla byl zbytek chromatografován na preparativní TLC vrstvě (silikagel) (CH2C12 = 10/1) a získán produkt 37 (12 mg, 65,7 %) jako hmota charakteru gumy: [oc]20D -73,8° (c = 0,2, CHC13); !HNMR (CDC13) δ 67,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H, C2'-H a C6'-H), 7,10 (d, J = 8,5 Hz, 2H, C3'-H a C5'-H), 6,80-6,70 (m, 2H, C4-H a C6-H), 6,50 (d, J = 8,5 Hz, C7-H). 4,65 (s, 1H, C8a-H), 2,85 (m, 2H, C2-H2), 2,64 (m, 1H, -HC<), 2,48 (S, 3H, N1-CH3), 2,00 - 1,90 (m, 2H, C3-H2), 1,42 (s, 3H, C3a-CH3), 1,20 (d, J = 7,0 Hz, 6H, >CMe2); EI-MS m/z (relativní intenzita): 204 (MH+ - ArNHCO, 99), 189 (25), 174 (8,3), 117(10). HR-MZ m/z vypočteno pro C22H27N3O2: 365,2105; nalezeno 365,2100.
(—)—(3 aS)—1,8-dibenzyl-3a-methyl-l ,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-yl N-4'-izopropylfenylkarbamát (sloučenina 45).
(—)—(3aS)— 1,8-dibenzyl-3a-methyl-l ,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-ol2 (68 mg, 0,18 mmol) byl rozpuštěn vbezvodém etheru (2 ml) a přidán kousek kovového Na (přibližně 1 mg).
Směs byla za laboratorní teploty míchána po dobu 1 minuty, potom přidán 4-izopropylfenylizokyanát (30 mg, 0,18 mmol) a mícháno dále 5 minut. Odpařením rozpouštědla se získal surový produkt, který byl přímo chromatografován a získána tak látka 45 (89 mg, 991,3 %) jako hmota charakteru gumy:
[a]20 D -44,7° (C = 0,5, CHC13); *H NMR (CDC13) δ 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2h, C2'-H a C6'-H), 7,14 (d, J = 8,5 Hz, 2H, C3'-H a C5'-H), 6,78 (d, J= 2,2 Hz, 1H, C4-H), 6,70 (dd, J= 2,5; 8,5 Hz, 1H, C6-H), 6,15 (d, J= 8,5 Hz, 1H, C7-H), 4,48 (s, 1H, C8a-H), 4,30 - 4,15 (AB, J = 16,6 Hz, 2H, Ph-CH2-N8), 3,73 (s, 2H, Ph-CH2-Nl), 2,80 (m, 1H, -HC<), 2,70 (m, 2H,
-4CZ 297533 B6
C2-H2, 1,90 (m, 2H, C3-H2), 1,40 (s, 3H, C3a-CH3), 1,15 (d, J= 7,0 Hz, 6H); EI-MS m/z (relativní intenzita): 370 (MEf-ArNHCO, 1,0), 294 (90), 279 (10), 237 (8,0), 174 (95), 160 (92), 132 (60), 104 (55), 91 (100). HR-MZ m/z vypočteno pro C35H37N3O2: 531,2888; nalezeno 531,2907.
(-)-(3aS)-3a-methyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-yl N-4'-izopropylfenylkarbamát (sloučenina 41).
Sloučenina 45 (42 mg, 0,078 mmol) byla rozpuštěna v izopropanolu (1 ml) a přidán Pd(OH)2/C (5 mg). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty v atmosféře vodíku za barometrického tlaku po dobu 60 hodin, potom byl katalyzátor odfiltrován. Odpařením rozpouštědla byl získán zbytek, který byl chromatografován (CH2Cl2/MeOH = 10/1) k získání nejpolámější sloučeniny, sloučeniny 41 (14 mg, 51 %) jako hmoty charakteru gumy:
[a]20D -71,1° (C = 0,3, CHC13); 'Η NMR (CDC13) δ 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 2H, C2'-H a C6'-H), 7,10 (d, J= 8,5 Hz, 2H, C3'-H a C5'-H), 6,80 (m, 2H, C4-H a C6-H), 6,55 (d, J = 8,5 Hz, C7-H), 5,20 (s, 1H, C8a-H), 2,90 (m, 1H, Ph-CH<), 2,80 (m, 2H, C2-H2), 2,13 (m, 2H, C3-H2), 1,45 (s, 3H, C3a-CH3), 1,18 (d, J= 7,0 Hz, >CMe2J); EI-MS m/z (relativní intenzita): 190 (MH+-ArNHCO, 98), 174 (10), 160 (70), 146 (100), 133 (11), 117 (15), 103 (5,0), 91 (14). HR-MS (NH3) m/z vypočteno pro C2]H25N3O2: 351,1948; nalezeno 351,1941.
(—)—(3aS)— 1,8-dibenzyl-3a-methyl-l ,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-yl N-methylkarbamát (sloučenina 42).
(-)-(3aS)-l,8-dibenzyl-3a-methyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydro-5-methoxypyrrol[2,3-b] indol (47,5 mg, 0,13 mol) byl rozpuštěn vbezvodém etheru (2 ml) a přidán kousek kovového Na (přibližně 1 mg). Směs byla za laboratorní teploty míchána po dobu 1 minuty, potom byl přidán methylizokyanát (14,6 mg, 0,26 mmol) a směs míchána dále 10 minut. Po odpaření rozpouštědla byl získán surový produkt, který byl přímo chromatografován k získání látky 42 (50,0 mg, 90,0 %) jako hmota charakteru gumy:
[oc]2°d -58,2° (C = 0,7, CHC13); *H NMR (CDCI3) δ 7,40 - 7,20 (m, 10H, Ar-H), 6,75 (d, J = 2,2 Hz, 1H, C4-H), 6,64 (d, J = 8,5 Hz, 1H, C6-H), 6,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H, C7-H, 4,65 (s, 1H, N-H), 4,40 (s, 1H, C8a-H), 4,35 - 4,20 (AB, J = 16,6 Hz, 2H, Ph-CH2-N8), 3,70 (s, 2H, Ph-CH2N1), 2,80 (d, J = 3,9 Hz, 3H, NH-CH3), 2,70 (2H, C2-H2), 1,90 (m, 2H, C3-H2), 1,35 (s, 3H, C3a-CH3); EI-MS m/z (relativní intenzita): 370 (MH~-CH3 NHCO-, 33), 354 (1,5), 279 (8,5), 264 (3,0), 91 (100). Analýza (C27H29N3O3) C, Η, N.
(—)—(3 aS)—1,8-dibenzyl-3a-methyl-l ,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,2-b]indol-5-yl N-fenylkarbamát (sloučenina 43).
(—)—(3aS)—1,8-dibenzyl-3a-methyl-l,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrol[2,3-b]indol-5-ol (40,7 mg, 0,11 mmol) byl rozpuštěn vbezvodém etheru (2 ml) a přidán kousek kovového Na (přibližně 1 mg). Směs byla za laboratorní teploty míchána po dobu 1 minuty, potom byl přidán fenylizokyanát (13,1 mg, 0,11 mol) a směs míchána dále 5 minut. Po odpaření rozpouštědla byl získán surový produkt, který byl přímo chromatografován k získání látky 43 (48 mg, 89,1 %) jako hmota charakteru gumy:
[a]2°D -59,1° (C = 0,7, CHC13); ’H NMR (CDC13) δ 7,40 - 6,90 (m, 15H, Ar-H), 6,75 (d, J = 2,5 Hz, 1H, C4-H), 6,73 (d, J = 8,5 Hz, 1H, C6-H), 6,17 (d, J = 8,5 Hz, 1H, C7-H), 4,45 (s, 1H, C8a-H), 4,30 - 4,20 (AB, J = 16,6 Hz, 2H, Ph-CH2-N8), 3,72 (s, 2H, Ph-CH2-Nl), 2,70 (m, 2H, C2-H2), 1,90 (m, 2H, C3-H2), 1,38 (s, 3H, C3a-CH3); EI-MS m/z (relativní intenzita): 370 (MH+-PhNHCO-, 31), 354 (1,0), 279 (8,0), 264 (2,0), 91 (100). Analýza (C27H29N3O3) C, Η, N.
-5CZ 297533 B6
Syntéza zbývajících sloučenin uvedených v tabulce 1 je známa a lze ji nalézt v odkazech citovaných pro každou sloučeninu uvedenou na obrázku 1.
Všechny publikace zde uvedené jsou v odstavci Literatura v tomto vynálezu.
V souhrnu tabulky 1 rozsáhlé studie ukazují, že zatímco klasická anticholinesteráza fysostigminu (1) nevykazuje žádnou selektivitu inhibičního účinku mezi dvěma enzymovému podtypy - acetyl- (AChE) a butyrylcholinesterázou (BChE), specifické substituce v poloze 4' (para), (4,5) u (-)-fenylkarbamátu fysostigminu (2) vybavují sloučeniny selektivitu k inhibici BChE. To je neočekávané, protože ostatní substituce 4', (6), nebo podobné substituce v jiných polohách jako na poloze 2' (ortho), (3,7), nevykazují žádnou selektivitu pro BChE. Poslední studie ukázaly, že substituce 3' podobně nevykazuje žádnou selektivitu BChE, tak jako například 3'-methyl-karbamoyleserolin má IC50 AChE 27 nM a BChE 165 nM. Substituce v polohách 2'-; 2',4'-; 3'-; 2',3'-; 3',5'-; nebo 2',4',6'- skutečně nevykazují selektivitu na BChE. Doplňující studie ukazují, že nezávislé substituce v poloze N1- u fysostigminu (1) jako je Ý-norfýsostigmin (8), N-benzylnorfysostigmin (12), bť-fenetylnorfýsostigmin (16) a Ý-allylnorfysostigmin (20) vykazují v porovnání s fysostigminem (1) selektivitu kBChE. Je to neočekávané, protože další substituce jako substituce aminů (21) nikoliv. Náhrada N1 skupiny fysostigminu (1) k získání thiafysoveninu (22) a fysoveninu (26) také neočekávaně vykazuje selektivitu inhibičního účinku BChE. Ještě další studie ukázaly, že nezávislé substituce v poloze N8 u fysostigminu (1) při přípravě N8-benzylnorfysostigminu (30) a N8-norfysostigminu (34) produkují potentní a selektivní inhibitory BChE. Kombinace popisovaných modifikací vede ke sloučeninám (11, 15, 16, 19, 25, 29, 33, 37), které vykazují nebo se u nich očekává dramatická selektivita pro inhibiční účinek BChE proti AChE.
Mezi další vhodné sloučeniny pro účely tohoto vynálezu náleží sloučeniny (12, 20, a 22).
Sloučenině, které se v tomto vynálezu dává zvláštní přednost je cymserin (sloučenina 4, tabulka 1, obrázek 1 A). Důvodem pro to je její snadný způsob syntézy, dostupnost stabilních solí a její schopnost prostupovat krevní bariérou do mozku.
Složení léčiva použitého metodami tohoto vynálezu se týká takového složení léčiva, kde je aktivní složka obsažena v účinném množství pro dosažení zamýšleného účelu. Sloučeniny mohou být podávány v jakémkoliv farmaceuticky přijatelném množství, například v rozsahu od 0,001 g do asi 1 g na kg tělesné hmotnosti. Na základě zde uvedené informace může specialista stanovit účinné množství. Sloučeniny se obvykle užívají v léčivech o takovém složení (hmotn. %), aby obsahovaly účinnou složku s nosičem nebo vehikulem v léčivu obsaženou v množství od asi 0,1 do 99 hmotn. %, přednostně okolo 25 - 85 hmotn. %.
Pro orální podávání lze snadno připravit jak tekuté, tak tuhé dávkové formy. Selektivní inhibitory BChE mohou být například smíseny s konvenčními složkami jako je střední fosforečnan vápenatý, křemičitan hořečnatohlinitý, stearát hořečnatý, síran vápenatý, škrob, talek, laktóza, akácie, methylcelulóza a funkčně podobné látky použité jako farmaceutické excipienty nebo nosiče. Volitelně lze připravovat složení s látkami podporujícími uvolňování. U starších nebo nesoběstačných pacientů se dává přednost lékové formě s podporou uvolňování. Tobolky lze připravovat míšením sloučeniny s farmaceutickou ředicí látkou, která je inertní a vkládat tuto směs do tvrdých želatinových tobolek vhodného rozměru. Pokud se vyžadují měkké tobolky, vytvoří se ze sloučeniny s přijatelným rostlinným, lehkým minerálním nebo jiným inertním olejem těsto, které se plní do želatinových tobolek.
Pro orální nebo tekuté dávkové formy pro orální podávání lze používat suspenze, sirupy a elixíry. Pro rozpustné olejové lékové formy lze použít tekuté přípravy včetně olejů. Rostlinný olej jako je například obilní olej, olej z burských oříšků nebo bylinný olej ve směsi s chuťovými přísadami, sladidly a dalšími ochrannými látkami vytvoří přijatelný tekutý přípravek. Při přípravě sirupo
-6CZ 297533 B6 vých forem pro tekuté dávkové formy se mohou k vodě přidat povrchově aktivní látky. Pro vodné alkoholické farmaceutické přípravky lze použít látky s přijatelným sladidlem jako je cukr, sacharin nebo biologické sladidlo a chuťovou přísadu ve formě elixíru.
Lékové formy pro parenterální podávání a ve formě čípků mohou být také získány standardními technikami tohoto oboru.
Podle tohoto vynálezu se dává přednost sloučeninám v takových lékových formách, které jsou vhodné pro orální podávání. Dalšímu způsobu, kterému se dává přednost při používání těchto sloučenin jsou transdermální parenterální lékové formy, které jsou zvláště vhodné při prevenci nebo léčbě cholinergických onemocnění jako je Alzheimerova choroba. Z tohoto důvodu jsou vhodná složení léčiv zvláště k podávání v těchto případech zahrnuta v tomto vynálezu. Výše uvedené parenterální roztoky nebo suspenze mohou být podávány transdermálně a látka tak je do těla dodávána přes pokožku náplastí. Pokud se to vyžaduje, mohou být podávány injekčně s vehikulem jako například se sezamovým olejem.
Využití účinných sloučenin spolu s pomalým uvolňováním matrice, lze využít pro transdermální podávání. Sloučeniny mohou být podávány transdermálně v koncentraci účinné složky ve vehikulu nebo nosiči od asi 0,01 do 99 %, přednostně od 25 do 85 %.
Transdermální terapeutické systémy jsou lékové formy obsahující dávku, která při použití přiložením na pokožku dodá léčivo nebo léčiva regulovanou rychlostí do systémového oběhu. Mezi výhody používání transdermální cesty patří: zesílená terapeutická účinnost, omezení četnosti dávkování, omezení vedlejších účinků pro časově závislý optimalizovaný profil koncentrace v krvi, zlepšená snášenlivost pacienta vlivem eliminace mnohonásobných dávek, vyhnutí se prvotnímu průchodu („first pass“) jatemím metabolizmem, předcházení gastrointestinálním potížím a zajištění předpověditelného a prodlouženého účinku. Hlavní funkcí pokožky je však její působení jako bariéra při pronikání těchto sloučenin. V této souvislosti se dává přednost transdermální terapii pro omezený počet látek majících požadované fyziologickochemické vlastnosti pro difúzi bariérou pokožky. Jedním z účinných způsobů zdolání bariérové funkce pokožky je použití takového složení transdermálního terapeutického systému, který zesiluje pronikání léčiva do pokožky.
Látkou zvyšující pronikání je chemická sloučenina, která pokud se do složení lékové formy použije, přechodně zvýší propustnost pokožky pro cestu léčiva a umožní, aby se absorbovalo její větší množství v kratším čase. Bylo uveřejněno několik různých typů takových látek zvyšujících pronikání, jako například dimethylsulfoxid, n-decylmethylsulfoxid, N,N-dimethylacetamid, N,N-dimethylformamid, l-dodecylazacykloheptan-2-on (Azon), propylenglykol, ethanol, pyrrolidony jako je N-methyl-2-pyrrolidon (NMP) a povrchově aktivní látky.
Výše uvedené látky mohou být v zásobníku samotné nebo v kombinaci s farmaceutickými nosiči.
Farmaceutické nosiče přijatelné pro účely tohoto vynálezu jsou v oboru známé nosiče, neovlivňující působení účinné látky, dalších látek nebo látek z kterých sestává transportní systém léčiva. Mezi vhodné farmaceutické nosiče patří sterilní voda, fyziologický roztok, dextróza, dextróza ve vodě nebo fyziologickém roztoku, kondenzační produkty ricinového oleje a ethylenoxid obsahující přibližně 30 až 35 mol ethylenoxidu na mol ricinového oleje, kapalné kyseliny, nižší alkanoly, oleje jako je obilní olej, olej z burských oříšků, sezamový olej a podobně, s emulgátory jako je mono- nebo diglycerid mastné kyseliny; nebo fosfatid, například lecitin a podobně; glykoly, polyalkylenglykoly, vodná média v přítomnosti suspenzního činidla, například sodná sůl karboxymethylcelulózy, alginát sodný, polyvinylpyrrolidon a podobné a to samotné nebo s vhodnými dispergačními činidly jako je lecitin, polyoxyethylenstearát a podobně. Nosič může také obsahovat pomocné látky jako jsou ochranné látky, stabilizátory, smáčedla, emulgátory a podobně spolu s látkami zesilujícími pronikání a sloučeninu podle tohoto vynálezu.
-7CZ 297533 B6
Účinná dávka pro savce se může měnit podle takových faktorů jako je stáří, hmotnost, úroveň aktivity a stavu léčeného subjektu. Účinná dávka sloučeniny podle tohoto vynálezu je typicky od okolo 1 až do 800 mg při orálním nebo rektálním podávání jednou až třikrát denně. To je asi 0,002 až 50 mg na kilogram hmotnosti subjektu podávané jako denní dávka. Přednost se dává přibližně 10 až 300 mg při podávání orálně nebo rektálně jednou až třikrát denně pro dospělého člověka. Požadovaná dávka je značně nižší, pokud se podává parenterálně. Je to přibližně od 0,01 do 150 mg podávaných intramuskulámě nebo transdermálně dospělému člověku jednou nebo dvakrát denně.
Sloučeniny pro využití podle tohoto vynálezu mohou být podávány většinou v množství od asi 0,01 do asi 99 hmotn. % jejich obsahu ve směsi; přednost se dává asi 25 až 85 % hmotn. Způsob podle tohoto vynálezu sestává z podávání účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu nebo účinné množství v lékové formě podle tohoto vynálezu savcům, kteří tuto léčbu potřebují.
V uváděné studii jsme zjistili vlivy chronického působení cymserinem (5 dnů) na výkon krys (21-22 měsíců starých) chovaných způsobem Fischer-344 (F344) ve 14jednotkovém T-labyrintu na který se odvoláváme jako na Stoneův labyrint. Význam typového Stoneova labyrintu pro tuto studii mohou podpořit dvě předchozí pozorování: (1) známá zodpovědnost cholinergického systému za chování, jak to bylo demonstrováno na farmakologické studii a studii lézí a (2) značná odchylka v chování způsobená stářím, jak to je demonstrováno u různých chovů hlodavců včetně chovu Fischer 344 (F344). Využití krys F344 pro tuto studii je také opodstatněno, pro dokumentované odchylky cholinergických markérů (buněčný znak) způsobené stářím ve specifických oblastech mozku a demonstrovaným zlepšením výkonu paměti takto chovaných krys z tohoto chovu po následujících rozličných cholinergických léčebných postupech.
Samci krys F344 21-22 měsíců starých byli získány od Harlan-Sprague-Dawley kontraktem National Institute on Aging. Byli chováni po dvou v klecích ve vivariu v Gerontology Research Center za specifických podmínek bez patogenů, jak bylo již dříve uvedeno.
Jak již bylo popsáno, Stoneův labyrint je konstruován z průhledného plastu se dnem z rozprostřeného drátěného pletiva s možností elektrických šoků do nohou a je obklopen šedými stěnami pro snížení možnosti vnikání podnětů z okolí labyrintu. Jediným dalším zařízením byla přímá dráha (2 m) použitá k předběžnému procvičování.
Podobně jako labyrint, také dráha byla konstruována z průhledného plastu a měla stejné dno z rozprostřeného drátěného pletiva s možností elektrických šoků do nohou a byla obklopena šedými stěnami.
Počínaje prvním dnem obdržely krysy jednu denní injekční dávku i.p. 0,9% NaCl jako kontrolní skupina nebo cymserin tartarát rozpuštěný ve fyziologickém roztoku a podávaný v dávkách 0,5 a 1 mg.kg ’, což pokračovalo i ve dnech 2-5. Ve dnech 3-5 byly injekce podávány 30 minut před zkouškou na jejich chování.
Počínaje dnem 2 byly krysy cvičeny v jednosměrném pohybu na přímé dráze. Při každém pokusu se musela krysa přemístit ze startovního boxu do cílového během 10 sekund, aby nedostala proudový náraz do nohou (0,8 mA). Krysy měly ve 2. dni 10 pokusů a ve 3. dni také 10 pokusů, cvičení bylo ukončeno, když krysy splnily výkonnostní kritéria v osmi případech z deseti po sobě následujících celkem ze 30 možností. V dalším dni byly testovány ve Stoneově labyrintu pouze ty krysy, které splnily toto kritérium.
Krysy cvičily ve Stoneově labyrintu podle plánu a ve 4. a 5. dni měly 4 pokusy během dopoledne a odpoledne. Během každého pokusu se musela krysa dostat ze startovního boxu do cílového skrze pět labyrintových segmentů, z nichž každý byl oddělen padacími dvířky. Požadavek na krysy byl, aby splnily průchod každým segmentem během 10 sekund, aniž by dostaly slabý proudový náraz do nohou (0,8 mA), a který skončil pokud se dostaly za dvířka do dalšího
-8CZ 297533 B6 segmentu. Po vstupu do dalšího segmentu se dvířka předchozího segmentu uzavřela, aby se jí zabránilo návratu. Odchylky od správné cesty byly zaznamenávané, závislost chyb byla nejprve náhodná a byly počítány automaticky řadou infračervených čidel zapojených na mikroprocesor. Čas ze startovního boxu do cílového byl také zaznamenáván automaticky. Frekvence a trvání proudového nárazu bylo zaznamenáváno na mechanických hodinách.
Během předběžného cvičení nebyl sledován žádný vliv léčiva. Střední hodnoty chyb (s.e.m.) pro všechny krysy byly 67 % (1,7), 65 % (2,8), 63 % (3,8) a 61 % (3,9) pro kontrolní skupinu a skupinu s 1, 2 a 3 mg.kg1 cymserinu. Jednosměrná analýza variací [one-way analysis variance] (ANOVA) neukázala v tomto parametru žádný signifikantní rozdíl mezi skupinami, F(3,4O)<1,0.
Působení cymserinu značně zredukovalo počet chyb v Stoneově labyrintu v porovnání s kontrolními podmínkami (Obr. 5). Tento vliv byl velmi nápadný během posledních bloků cvičení a nejméně se projevil při dávce 3 mg.kg“1. Statistické ověření bylo provedeno z výsledků čtyř (skupina s přípravkem) ku čtyřem (pokusný blok) ANOVA s opakovaným měřením posledního faktoru. Výsledky ukázaly značný vliv skupiny F(3,42) = 3,41, p = 0,03, značný hlavní účinek na pokusný blok F(3,126) = 151,6 p < 0,0001, ale skupina jako bloková interakce nedosáhla statistické významnosti F (9,126) = 1,55, p = 0,13. Bylo tedy provedeno individuální porovnání chyb ve všech pokusech. V porovnání s kontrolní skupinou vykázaly značně zlepšený výkon pouze skupiny s 1 a 2 mg.kg1.
Ostatní proměnné veličiny hodnotící chování (čas, četnost proudových nárazů a jejich trvání) byly u krys, kterým byl podán cymserin také sníženy na méně významný stupeň než bylo pozorováno při hodnocení chyb. Hodnoty každé veličiny byly nejprve analyzovány jako čtyři (přípravek) ku čtyřem (bloky) ANOVA s opakovaným měřením na posledním bloku. Z této analýzy nevyplynul žádný významný hlavní účinek přípravku; interakce přípravek x blok byla však přesto u obou významná (p < 0,005). Hodnoty byly analyzovány dále porovnáváním t-testu ke kontrolním skupinám pro každý blok. Krysy na které se působilo 1,0 mg.kg“1 cymserinu vykazovaly značně snížený čas pro průchod, četnost elektrických rázů a jejich trvání u bloků 3 a 4 v porovnání s kontrolní skupinou. U skupiny 2,0 mg.kg“1 tyto parametry výkonu byly u bloku 4 značně sníženy. Skupina 3,0 mg.kg 1 byla značně odlišná od kontrolní skupiny pouze v době trvání proudového rázu u bloku 4. Trvání proudového rázu bylo také významně sníženo v bloku 2 a skupiny 1,0 mg.kg“1. Závěrem lze říci, že veličiny výkonu byly významně ovlivněny pouze během posledních pokusů a nejvíce u skupiny 1,0 mg.kg“1. Některé vedlejší motorické účinky jako je jemné chvění bylo zjištěno u několika krys, na které se působilo dávkou 3,0 mg.kg”1; jinak nebyly u krys na které se působilo cymserinem pozorovány žádné vedlejší účinky.
Chronické působení cymserinem význačně zlepšilo poznávací schopnosti chovaných krys ve Stoneově labyrintu. Krysy, které obdržely dávky 1—2 mg.kg”1 cymserinu vykazovaly značně zmenšené chybování a rovněž tak v posledních několika pokusech zlepšení v dalších výkonových charakteristikách. Tato odezva byla pravděpodobně způsobena cholinergickou neurotransmisí působením této síly dlouhopůsobícím inhibitorem cholinesterázy.
Další aspekt tohoto vynálezu se týká objevu, že selektivní inhibitory BChE lze použít pro omezování syntézy a vylučování prekurzorového proteinu beta-amyloidu. Alzheimerova choroba je charakterizována ukládáním amyloid beta-peptidu (Αβ) ve formě cerebrovaskulámího amyloidu a extracelulámích senilních plaků. Primární součástí jádra senilních plaků Αβ peptid, samoagregující protein se 39 až 43 zbytky odvozený ze skupiny větších glykosylovaných transmembránových proteinů, β-ΑΡΡ o 695 až 770 aminokyselinách, β-ΑΡΡ je zdrojem toxických Αβ peptidů, o nichž se ví, že se ukládají v mozku pacientů s AD. Mutace APP genu se kosegreguje s AD v jistých kmenech postihujících β-ΑΡΡ695 až β-ΑΡΡ770, z nichž některé obsahují aktivní Kunitzův kmen domény inhibitoru serinproteázy (KPI) rovněž tak jako Αβ a další amyloidogenní fragmenty β-ΑΡΡ v procesu onemocnění jako centrální. (Selkoe J.,
-9CZ 297533 B6
Neuropathol., Exp. Neurol., 53, 438-447, (1994)). β-ΑΡΡ je zpracováván či metabolizován alternativní proteolytickou cestou za vzniku různých rozkladných produktů. Mezi ně patří sekreční a lysosomální/endosomální cesta. Sekreční cesty se účastní tři odlišné sekretázy. U člověka, ale ne u krysy je podstatná část β-ΑΡΡ rozštěpena v oblasti Αβ α-sekretázou za vzniku neamyloidogenní rozpustné β-ΑΡΡ, sAPP, o které je známo, že hraje mnoho významných fyziologických rolí. Postulovaná alternativa štěpení sekretázy, γ-sekretáza, generuje omezenou sAPPy, která obsahuje potenciálně amyloidogenní sekvenci.
Toto je preferenční forma vznikající u krys a dále štěpená u člověka postulovanou β-sekretázou za vzniku neurotoxinu ΑβίΟΙιεοΙβΓ J, Neurochem., 65, 1431-1444, (1995)).
Syntéza, zpracování a sekrece β-ΑΡΡ a jejich derivátů nastává in vivo v mozku a její produkty jsou detekovatelné v mozku a CSF jak u člověka tak u zvířecích modelů, a navíc nastává in vitro na tkáňových kulturách s produkty detekovatelnými v kultivačním médiu buněčných kultur a buněčných lyzátech. Faktory, které regulují ukládání Αβ jsou centrálními pro porozumění cerebrovaskulámích změn u AD. (Robertson a Harrell, Brain Res Rev., 25, 50-69, (1997)). Toto onemocnění se také vyznačuje dramatickou ztrátou cholinergických neuronů, které působí na kůru mozkovou a neurochemicky redukcí v presynaptických (cholinacetylesteráza, ChAT) markérech cholinergického systému, zvláště v těch oblastech mozku, které se týkají paměti a učení (Perry, et al., ibid, (1978)). Toto je jasná příbuznost mezi ztrátou cholinergického působení na kůru mozkovou a hipokampus a syntézu a zpracování β-ΑΡΡ (Wallace, et al., PNAS, 98, 8712-8716- (1993)). Cholinergický deficit AD byl modelován u krys neurotoxickými lézemi v bazální části předního mozku, většinou v Meynertově nukleus basalis (nbM) (Olton a Wenk, In Psychopharmacology: The Third generation of Progess (ed. Meltzer), Raven Press, NY, str. 941— 954, (1987)). Takové léze u krys podobně jako u člověka sAD vedou k vyčerpání cholinergického systému v kůře mozkové zvířat a ke zhoršování poznávací funkce z příčin obvyklých u AD (Kesner, et al., Behav. Neurosci., 101, 451 -456, (1987)).
Cholinergické léze předního mozku dále značně zvyšují hladinu β-ΑΡΡ m-RNA v kůře mozkové a vylučovaly β-ΑΡΡ obsahující celou délku Αβ v CSF u krys (Wallace, et al., Mol. Brain Res., 10, 173-178,(1991)).
Ve zprávě Lahiri, et al., (ANN.NY, Acad Science, 828, 416^421, (1997) byla zkoumána možnost, zda je možná regulace zpracování β-ΑΡΡ různými inhibitory cholinesterázy. Léčiva, která byla při stanovení účinků inhibitorů cholinesterázy na sekreci vylučovaných forem β-ΑΡΡ z mnoha buněčných linií studována, tj. glioblastů, HeLa, neuroblastů a PC12, zahrnovala 3,4-diaminopyridin, metrifonát, fýsostigmin (sloučenina 1, tabulka 1) a tacrin. Pozorované výsledky vedly k závěru, že působení na neuronální buňky tacrinem regulovalo sekreci β-ΑΡΡ, tedy ji snižovalo, zatímco žádné z dalších léčiv, všech klasických anticholinesteráz na změnu takové sekrece nepůsobilo. Bylo navrženo, že jakákoliv aktivita vykázaná těmito dalšími látkami může být nezávislá na jejich anticholinesterázové aktivitě. Žádná ze sloučenin použitých v těchto studiích nebyla nijak selektivním inhibitorem BChE.
V dalších studiích byla hodnocena aktivita selektivních inhibitorů AChE (sloučenina 2,3-fenserin a tolserin - tabulka 1) a BChE (sloučenina 4 - cymserin - tabulka 1) na lidské neuroblastomické buněčné linie. Byla hodnocena měření úrovně sekrece v kultivačním médiu, tak i úrovně β-ΑΡΡ měřená v buněčných lyzátech a porovnáváno s úrovněmi dosaženými u buněk bez zásahu. Cymserin dramaticky snižoval hladiny buněčné β-ΑΡΡ indikující tak zpomalení syntézy a podobně snižování úrovně vylučování β-ΑΡΡ (Obrázek 2).
-10CZ 297533 B6
Metodologie, kterou je možno pro stanovení schopnosti vybraných sloučenin regulovat úroveň buněčné a vylučované β-ΑΡΡ je tato:
až 1,5.10“7 každého typu buněk (neuronální a neneuronální) se kultivuje ve vhodném médiu. Před přidáním zkoušené látky se buňky zavedou do média obsahujícího pouze 0,5 % FBS (malá koncentrace séra). Potom se buňky v přítomnosti či v nepřítomnosti zkoušené látky.
Po inkubační době od 12 do 48 hodin se kultivační médium z každé plotny odebere a i s buňkami se centrifuguje při 800 g po dobu 10 minut. Kultivační médium se odebere a buňky se lyžují v ústojném roztoku obsahujícím 50 mM Tris.Cl (pH 8,0), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 2 mM PMSF, 0,5% deoxycholát sodný, 1 pg.mE1 aprotinu, leupeptinu a TLCK a lpg.mE1 pepstatinu A. Buňky se centrifugují po dobu 10 minut při 11 000 g při 4 °C. Proteiny supematantového roztoku (buněčný lyzát) se měří Bradfordovým postupem s použitím barviva (Bradford, Anal. Biochem., 72, 248-154,(1976)).
Při elektroforéze s polyakrylamidovým gelem a imunozkoušce: v kontrolních zkouškách se použije ekvivalentní koncentrace ethanolu jako vehikulum, což je méně než 1 % média. Mohou se použít dávky sloučeniny od 0,15 mM do 0,5 mM. Na 12% polyakrylamidový gel obsahující SDS (SDS-PAGE) se z celého buněčného lyzátu oddělí 100 μΐ kultivačního média nebo 30 μg proteinu. Imunozkouška byla provedena s použitím detekční soupravy avidin-biotynylovaného komplexu od Vector Laboratories, jak to popisuje Lahiri, et al., J., Neurosci. Res., 12, 777-787, (1994)). Použité antisérum je z klonu mAb22Cl 1 (Boehringer Mannheim), které zjišťuje všechny dospělé formy β-ΑΡΡ zjištěné v buněčných membránách, rovněž tak jako odštěpené karboxylové rozpustné formy vylučované do kultivačního média a proteiny příbuzné s APP. Dále je použit mAbóElO, který rozlišuje zbytky Αβ 1 až 28. K zajištění toho, že je zkoušená látka selektivní na β-ΑΡΡ a nemá neselektivní vliv na všechny proteiny, může se použít protilátka vystupující proti lidské nexin II proteáze (PN-II) a anti-HSP-70 (protilátka vystupující proti tepelnému šoku proteinu-70, HSP-70). Také se používají biotinylované sekundární protilátky, koňské protimyší protilátky a kozí protikráličí protilátky (Boehringer Mannheim a Vector Labs).
Výše uvedený způsob zkoušky se používá k identifikaci toho, který ze selektivních inhibitorů BChE podle tohoto vynálezu má schopnost regulovat syntézu a sekreci vylučovaných a buněčných forem β-ΑΡΡ. Jak je na obrázku 2 ukázáno, může cymserin dramaticky snížit úroveň βΑΡΡ a to provádí, jak bylo stanoveno jak mAb22Cl 1, tak 6E10 na β-ΑΡΡ bez ovlivnění dalších sekundárních proteinů jako je HSP-70.
Cymserin jako představitel selektivních inhibitorů BChE navíc mění syntézu a zpracování β-ΑΡΡ in vivo. U krys s lézemi cholinergického předního mozku (nukleus basalis Meynerta), se úroveň β-ΑΡΡ v CSF bezprostředně a dramaticky zvýší (obrázek 3, kontrolní skupina s lézemi proti slepé kontrolní skupině), jako důsledek ochuzeného presynaptického cholinergického systému, modelujícího AD a snižujícího cholinergické dopady na vyšší mozková centra v kůře mozkové a hippokampu, jak to bylo již dříve uvedeno (Wallace, et al., ibid., 1993 až 1995). Studie ukázaly, že oproti člověku obsahuje vylučovaný β-ΑΡΡ celou délku Αβ, avšak u zvířat není štěpen účinkem sekretázy na toxický Αβ peptid (Wallace, et al., J. Neurosci., 15, 4896-4905, (1995)), a tudíž je AD specifická na člověka. Zatímco u krysy dochází ke zvyšování β-ΑΡΡ obsahující celou délku Αβ peptidu, při modelování u člověka se zvyšuje produkce Αβ.
Podávání cymserinu krysám s cholinergickými lézemi předního mozku blokuje zvyšování vylučování β-ΑΡΡ (obrázek 3). To je ve shodě s průběhem působení cymserinu na β-ΑΡΡ in vitro a navíc představuje, že systematicky podávaný cymserin podávaný interperitoneální cestou dvakrát denně po dobu 7 dní může okamžitě překlenout bariéru krev-mozek a vstoupit do mozku.
- 11 CZ 297533 B6
Skutečně, jak ukazuje obrázek 4, cymserin ihned po jeho systematickém podávání (1 mg.kg1 intravenózní cestou) vstupuje do mozku a v něm zůstává v úrovni asi 40 krát vyšší než v plazmě. Navíc, jak ukazuje obrázek 3, snižuje u zvířat cymserin úroveň β-ΑΡΡ bez cholinergických lézí, tj. v cymserinu samotném proti čistým kontrolním krysám.
Metodologie, kterou je možno použít ke stanovení schopnosti vybraných sloučenin regulovat úroveň vylučování β-ΑΡΡ in vivo je tato:
Pro léze cholinergického systému předního mozku obdrží krysy unilaterální subkortikální lézi nukleus basalis Maynerta (nbM) za použití N-methyl-D-aspartátu (NMDA) jeko excitotoxin. Po tomto krysy dostanou anestezi a umístí se do stereotaxického přístroje s nastavením horní měrky na intraurální linii. Infuzní kanyla č. 33 se ponořuje do dvou stran v prostoru nbM na jedné straně mozku (AP bregma, ML-2,8 mm, DV -8,0 mm re:lebka a AP bregma -0,8 mm, ML -3,0 mm, DV -7,8 mm). Na každou stranu se pomalu vstřikuje jeden mikrolitr roztoku 50 mM NMDA v ústojném roztoku PBS (fyziologické pH). Kontrolní zkouška na lézi se provádí pouze se samotným vehikulem na kontralaterální straně pokusných zvířat.
Odběr CSF pro analýzu úrovně β-ΑΡΡ se provádí odebráním alikvotu z čistem magma krys bezprostředně po jejich uhynutí. Kvantitativní vyhodnocení β-ΑΡΡ se provádí imunozkouškou s použitím mAb22C 11.
Stanovení časově závislé kinetiky cymserinu v mozku a plazmě krys se provede podáváním sloučeniny do safénové žíly zvířat pod anestezi. Zvířata se usmrcují přebytkem anestetika v určených časech a ihned se odebírají vzorky krve a mozku.
Krev se centrifuguje (10 000 g, 2 minuty), plazma se odebere a společně se vzorkem mozku se uloží při -80 °C. Kvantitativní vyhodnocení koncentrace cymserinu se provede vysokotlakou kapalinovou chromatografií.
Dalším přínosem tohoto vynálezu je možnost modifikace selektivních inhibitorů BChE zavedením fluorescenční látky k označení a vzniklé označené fluorescenční činidlo lze použít k histochemické detekci lézí nebo patogenních stavů spojených s Alzheimerovou chorobou a dalšími demencemi na řezech mozkové tkáně. Lze použít kteroukoliv v oboru známou fluorescenční látku, jako například fluorescein. Označené deriváty selektivního inhibitoru BChE mohou být preparovány známými způsoby, jako například reakcí inhibitoru s 5-[4,6-dichlortriazen-2-yl-amino]-fluoresceinem a reakční produkt lze čistit metodami v oboru známými, jako například tenkovrstvou chromatografií.
Deriváty selektivních inhibitorů BChE, které lze použít pro mozkové skeny, zvláště pozitronovou emisní tomografii a fotonovou emisí tomografii jsou tyto:
sloučeniny v tabulce 1 a jejich analogy s příslušnými skupinami, které z nich vytvoří buď fluorescenční nebo detekční zobrazovací nebo kvantitativně vyhodnocovací objekty in vitro nebo in vivo.
Následující radiofarmaceutická činidla s patřičnými úpravami, pokud jsou nutné, mohou být navázána způsoby v oboru dobře známými, na kterýkoliv selektivní inhibitor BChE: thalium, technecium, jod131 nebo jod123, xenon133, krypton381, gallium67, Indium111, uhlík11, dusík13 a fluor18.
Tyto izotopy je možno zavést například jako cold kits a rekonstituují se příslušnými chemikáliemi. Rekonstituované sloučeniny po podání pacientovi se pohybují v těle podle fyzikálních a chemických vlastností specifických činidel rovněž tak jak podle skupiny, na kterou byla označená radioaktivní látka navázána.
- 12CZ 297533 B6
Tato činidla mohou být využita pro diagnostiku mozku, zrovna tak jako systémových periferních míst těla; příkladem je ukládání periferního amyloidu, ve slezině, rovněž tak jako v mozku při Alzheimerově chorobě. Navázání radioaktivních činidel způsoby v oboru dobře známými, na nosné molekuly, které proniknou bariérou mezi krví a mozkem, například na cymserin, mohou vytvářet specifická neuropatogenní diagnostika.
Příkladem je využití technecia jako pertechnát při zobrazování mozku. Toto činidlo kombinované se selektivními inhibitory butyrylcholinesterázy podle tohoto vynálezu lokalizují určité oblasti mozku jako je chloroid plexus.
Optimální typ radiofarmaceutika vydává většinu energie ve formě gama záření. Diagnostické zařízení používané v medicíně má jisté optimální hladiny detekce energie. Většina radioaktivních látek používaných v nukleární medicíně je vyrobena konverzí stabilních prvků na radioaktivní formu. Konverze se provádí v jaderných reaktorech nebo cyklotronech, kde se stabilní prvky bombardují protony nebo neutrony.
Pokroky v bezfilmových detektorech zajišťují informace o počtu fotonů dopadajících na citlivý detektor. Tyto hodnoty zkombinované za použití zpracovaných dat procesních algoritmů zvyšují účinnost zobrazování v medicíně. Mezi diagnostická zobrazovací zařízení patří počítačová tomografie (CT), pozitronová emisí tomografie (PET), fotonová emisní počítačová tomografie (SPC), digitální subtraktivní angiografie (DSA), angiografické zobrazování se synchrotronovým zářením a zobrazování magnetickou rezonancí (MRI).
Základními používanými izotopy jsou uhlík11, kyslík15 a dusík13. Tato činidla jsou izotopy s malým počtem neutronů emitující pozitrony. Jsou vyráběny v cyklotronu a rychle zabudovány do sloučenin tohoto vynálezu.
Přínosným aspektem tohoto vynálezu jsou sloučeniny vykazující selektivní inhibiční aktivitu butyrylcholinesterázy, připravované zabudováním radiofarmaceutického činidla a tak vytvořením činidla vhodného pro zobrazování pacienta při detekci na přítomnost lézí nebo patologických stavů spojených s Alzheimerovou chorobou. Taková činidla mohou být zaváděna sympatetickými cestami v oboru známými. Tak například karbonylová skupina selektivních inhibitorů butyrylcholinesterázy může být vložena jako skupina s a uhlíkem C11 obecnými postupy použitými ve sdělení Bonnot J., Label Comp. Radiopharm., 33, (4), 277-284, (1993). Výsledná sloučenina může být pacientovi podávána parenterálně a projde do mozku, kde se selektivně naváže na každou lézi nebo patologický stav a může být detekována vhodným zobrazovacím zařízením jako je skenovací PET.
Literatura
1. Pei, X. F., Greig, N. H., Bi, S., Brossi, A.: Preparation and Selective Inhibition of Human Butyrylcholinesterase by N-Phenylnorphysostigmine Analogues, Med., Chem., Res., 5, 455^161, 1995.
2. Brzostowska, M., He, X. S., Greig, N. H., Rapoport, S. I., Brossi, A., Phenylcarbamates of (-)-Eseroline, (-)—N'Noreseroline and (-)-Physovenol: Selective Inhibitors of Acetyl and, or Butylcholinesterase, Med. Chem. Res., 2, 238-246, 1992
3. Yu, Q. S., Atack, J. R., Rapoport, S. I., Brossi, A.: Synthesis and Anticholinesterase Activity of (-)-Physostigmine, (-)-Eseramine, and Other N(-)-Substituted Analogues of (-)-Physostigmine, J. Med. Chem., 31, 2297-2300, 1997
4. He, X. S., Greig, N. H., Rapoport, S. I., Brossi, A., Li, Y. Q., Yu, Q. S., Thiaphysovenine and Carbamate Analogues: A New Class of Potent Inhibitors of Cholinesterases Med. Chem. Res., 2, 229-237, 1992
5. Yu, S. Q., Liu, C., Brzostowska, M., Chrisey, L., Brossi, A., Greig, N. H., Atack, J. R., Soncrant, T. T., Rapoport, S. I., Radunz, Η. E., Physovenines: Effícient Synthesis of
- 13 CZ 297533 B6 (-) and (+)-Physovenine and Synthesis of Carbamate Analogues of (-)-Physovevine. Anticholinesterase Activity and Analgetic Properties of Optically Active Physovenines, Hel. Chim. Acta, 74, 761-766, 1991
6. Yu, Q. S., Pei, X. F., Holloway, H. W., Greig, N. H., Brossi, A., Total Synhtesis and Anticholinesterase Activities of (3aS)-N-Norphysostigmine, (3aS)-N-(8)-Norphenserine, Their Antipodal Isomers, and Other N(8)-Substituted Analogues, J. Med. Chem., 40, 2895-2901, 1997
7. Yu, Q. S., Holloway, H. W., Greig, N. H., Brossi, A., Synthesis and Anticholinesterase Activities of (3aS)-N(l),N(8)-Norphysostigmine, (3aS)-N(l),N(8)-Norphenserine, Their Antipodal Isomers, and Other Potential Metabolites of Phenserine, J. Med. Chem., 40, 2895-2901, 1997
8. Atack, J. R., Yu, Q. S., Soncrant, T. T., Brossi, A., Rapoport, S. I., Comparative Inhibitory Effects of Various Physostigmine Analogs Against Acetyl- and Butylcholinesterases, J. Pharmacology and Experimental Therapeutics, 249, 194-202, 1989
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (16)

1. Použití inhibitoru butyrylcholinesterázy k výrobě léčiva pro prevenci nebo léčbu zhoršování rozpoznávacích schopností spojených se stárnutím nebo Alzheimerovou chorobou pacienta, která zahrnuje léčbu pacienta při riziku nebo zhoršování rozpoznávacích funkcí účinným množstvím inhibitoru butyrylcholinesterázy, který je vybrán ze skupiny sestávající z N8-benzylnorcymšermu, N -norcymserinu, N ,N -bisnorcymserinu, N ,N -bisbenzylnorcymserinu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí.
2. Použití podle nároku 1, kde jmenovaný inhibitor butyrylcholinesterázy je vybrán ze skupiny sestávající zN',N8-bisbenzylnorcymserinu, a jeho farmaceuticky přijatelných solí.
3. Použití podle nároku 1, kde jmenovaný inhibitor butyrylcholinesterázy je vybrán ze skupiny sestávající zN',N8-bisnorcymserinu, a jeho farmaceuticky přijatelných solí.
4. Sloučenina mající vzorec N8-benzylnorcymserinu nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí.
5. Sloučenina mající vzorec N8-norcymserinu nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí.
6. Sloučenina mající vzorec N’,N8-bisnorcymserinu nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí.
7. Sloučenina mající vzorec N’,N8-bisbenzylnorcymserinu nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí.
8. Farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu podle kteréhokoliv nároku 4 až 7.
9. Použití inhibitoru butyrylcholinesterázy k výrobě léčiva k léčbě snížení sekrece a syntézy proteinového prekurzoru beta amyloidu buněčných linií nebo tkání neuronálního původu, spočívající v podávání účinného inhibitoru butyrylcholinesterázy k buněčným liniím nebo tkáním neuronálního původu, přičemž inhibitor butyrylcholinesterázy je vybrán ze skupiny sestávající z N8-benzylnorcymserinu, N8-norcymserinu, N',N8-bisnorcymserinu, N',N8-bisbenzylnorcymserinu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí.
10. Použití podle nároku 9, kde inhibitor butyrylcholinesterázy je vybrán ze skupiny sestávající z N’,N8-bisnorcymserinu, a jeho farmaceuticky přijatelných solí.
7 výkresů
-14CZ 297533 B6
RHNC
Obrázek 1A
Struktura Č.
Sloučenina
Číslo sloučeniny v odkazech
RHNC
RHNC
1. R = CH3 fysostigmin 2. R = fenserin 3. R = tolserin 4. r = cymserin 5. R ^jQ^-methoxyfenserin8 1^ 21 31 41 13z 182 ČC 7. R = 4’-methylfenserin8 2'-isopropylfenserin 8. R = CH3 bT-norfysostigmin 51 9.R= Q N1-norfenserin 61 10. R =©C N^nortolserin 71 11. R N1-norcymserin 81 12. R = CH3 N1 -benzylnorfysostigm in 91 13. R--©^ hT-benzylnorfen šeřin 101 14.R = ©C NI1 -benzylnortolserin 111
192
12z
82
121
15. R bf-benzylnorčymserin
N’-fenety!norfysostigmin
16. R = CH3
17. R=Cr N1-fenetylnorfenserin
18. R = (X
19. R φΟΓ N1 -fenetylnorcymserin
N1-fenetylnortolserin
CZ0081699A 1997-07-09 1998-07-09 Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence CZ297533B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US5208797P 1997-07-09 1997-07-09

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ81699A3 CZ81699A3 (cs) 2000-01-12
CZ297533B6 true CZ297533B6 (cs) 2007-01-03

Family

ID=21975382

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0081699A CZ297533B6 (cs) 1997-07-09 1998-07-09 Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence

Country Status (17)

Country Link
US (2) US6410747B1 (cs)
EP (1) EP0949920B1 (cs)
JP (1) JP4522499B2 (cs)
AT (1) ATE311876T1 (cs)
AU (1) AU749088C (cs)
BR (1) BR9806184A (cs)
CA (1) CA2264750C (cs)
CZ (1) CZ297533B6 (cs)
DE (1) DE69832688T2 (cs)
DK (1) DK0949920T3 (cs)
ES (1) ES2255170T3 (cs)
HU (1) HUP0003852A3 (cs)
IL (2) IL128877A0 (cs)
MX (1) MXPA04001462A (cs)
PL (1) PL191402B1 (cs)
SI (1) SI0949920T1 (cs)
WO (1) WO1999002154A1 (cs)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6488280B1 (en) * 2000-09-27 2002-12-03 Milestone Entertainment Games, and methods and apparatus for game play in games of chance
ATE406371T1 (de) * 2000-11-02 2008-09-15 Us Gov Health & Human Serv Wirkstoffe für die verminderung von amyloid precursor protein und die behandlung von schwachsinn, und deren verfahren der verwendung
WO2005042475A2 (en) * 2003-10-21 2005-05-12 Sention, Inc. Carbamoyl esters that inhibit cholinesterase and release pharmacologically active agents
US20070129350A1 (en) * 2004-01-30 2007-06-07 Axonyx, Inc. Methods for treatment of diabetes
US20050182044A1 (en) * 2004-02-17 2005-08-18 Bruinsma Gosse B. Combinatorial therapy with an acetylcholinesterase inhibitor and (3aR)-1,3a,8-trimethyl-1,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrolo[2,3,-b]indol-5-yl phenylcarbamate
EP1604686A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-14 Axonyx, Inc. Use of phenserine and a HMG CoA reductase inhibitor for delaying Alzheimer's disease progression
US20080045500A1 (en) * 2004-07-01 2008-02-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Nerve Regeneration Stimulator
WO2006052496A2 (en) * 2004-11-03 2006-05-18 Axonyx, Inc. Compound useful for the treatment or prevention of cognitive disorders associated with diabetes and the use thereof
US20060194723A1 (en) * 2005-02-28 2006-08-31 Rabinoff Michael D Novel medication treatment and delivery strategies for Alzheimer's Disease, other disorders with memory impairment, and possible treatment strategies for memory improvement
KR100701798B1 (ko) 2005-05-04 2007-03-30 라이브켐 주식회사 해조식물로부터 추출한 콜린에스터라제 활성 억제제를함유하는 알츠하이머성 치매 개선제 및 인지능력 개선제
US20080188510A1 (en) * 2005-05-23 2008-08-07 Eisai R & D Management Co., Ltd. Novel methods using zonisamide
WO2006138385A2 (en) * 2005-06-14 2006-12-28 Cancog Technologies Inc.24 Use of phenserine and analogs to treat behavioral problems and improve trainability
US9757399B2 (en) 2006-10-31 2017-09-12 Jal Therapeutics, Inc. Butyrylcholinesterase inhibitors
US20100069337A1 (en) * 2006-10-31 2010-03-18 Acey Roger A Butyrylcholinesterase inhibitors
US20090048229A1 (en) * 2007-07-18 2009-02-19 Rupniak Nadia M J Methods for promoting wakefulness
PL2271218T3 (pl) 2008-03-27 2017-10-31 Chase Pharmaceuticals Corp Zastosowanie i kompozycja do leczenie otępienia
WO2010025368A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Treventis Corporation Butyrylcholinesterase ligands as diagnostic tools and treatment for deseases of the nervous system
WO2010067594A1 (ja) * 2008-12-11 2010-06-17 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ヘキサヒドロピロロインドール誘導体
US8892184B2 (en) 2010-10-18 2014-11-18 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Systems and methods for reducing interference in a dual modality imaging system
US20120225922A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-06 Qr Pharma Effective Amounts of (3aR)-1,3a,8-Trimethyl-1,2,3,3a,8,8a-hexahydropyrrolo [2,3-b]indol-5-yl Phenylcarbamate and Methods of Treating or Preventing Neurodegeneration
EP2892514A4 (en) 2012-09-05 2016-04-13 Chase Pharmaceuticals Corp Neurotropic Anticholinergic Composition and Method
KR101667215B1 (ko) 2014-10-21 2016-10-18 한밭대학교 산학협력단 신규한 트립타민 컨쥬게이트 화합물 및 그의 용도
US10149828B2 (en) 2015-01-09 2018-12-11 Chase Pharmaceuticals Corporation Oxybutynin transdermal therapeutic system combination
EP3654957A4 (en) 2017-05-24 2021-06-23 Annovis Bio, Inc. PREVENTION OR TREATMENT OF DISEASE CONDITIONS DUE TO METAL DIS-HOMEOSTASIS BY ADMINISTERING POSIPHES TO HEALTHY OR SICK PEOPLE
CN109535157B (zh) * 2018-12-03 2021-10-15 江苏科技大学 一种半蜡梅碱类似物、其合成方法及其用途
KR102233120B1 (ko) 2018-12-18 2021-03-29 한밭대학교 산학협력단 신규한 파에오놀-트립타민 화합물 및 그의 용도
US20230113944A1 (en) * 2020-01-10 2023-04-13 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for the treatment of neurodegenerative diseases

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0253372A2 (en) * 1986-07-16 1988-01-20 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated 1,2,3,3a,8,8a-Hexahydro-1,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indoles, a process for their preparation and their use as medicaments
US4900748A (en) * 1988-03-04 1990-02-13 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Carbamates related to (-)-physostigmine as cholinergic agents
US5171750A (en) * 1991-09-26 1992-12-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Substituted phenserines as specific inhibitors of acetylcholinesterase
WO1993006105A1 (en) * 1991-09-26 1993-04-01 United States Government, As Represented By Secret Substituted phenserines and phenylcarbamates of (-)-eseroline, (-)-n1-noreseroline, and (-)-n1-benzylnoreseroline; as specific inhibitors of acetylcholinesterase
US5378723A (en) * 1991-09-26 1995-01-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health And Human Services Carbamate analogs of thiaphysovenine and method for inhibiting cholinesterases
US5409948A (en) * 1992-11-23 1995-04-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method for treating cognitive disorders with phenserine

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5783584A (en) * 1995-12-11 1998-07-21 Mayo Foundation For Medical Education And Research THA analogs useful as cholinesterase inhibitors
AU2003201758A1 (en) * 2002-03-12 2003-09-22 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. High-frequency heating apparatus and control method thereof

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0253372A2 (en) * 1986-07-16 1988-01-20 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals Incorporated 1,2,3,3a,8,8a-Hexahydro-1,3a,8-trimethylpyrrolo[2,3-b]indoles, a process for their preparation and their use as medicaments
US5541216A (en) * 1986-07-16 1996-07-30 Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Inc. Memory enhancing and analgsic 1,2,3,3A,8,8A-Hexahydro--3A, 8(And1,3A,8)-Di (and Tri) Methylpyrrolo(2,3-B Indoles
US4900748A (en) * 1988-03-04 1990-02-13 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Carbamates related to (-)-physostigmine as cholinergic agents
US5171750A (en) * 1991-09-26 1992-12-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Substituted phenserines as specific inhibitors of acetylcholinesterase
WO1993006105A1 (en) * 1991-09-26 1993-04-01 United States Government, As Represented By Secret Substituted phenserines and phenylcarbamates of (-)-eseroline, (-)-n1-noreseroline, and (-)-n1-benzylnoreseroline; as specific inhibitors of acetylcholinesterase
US5378723A (en) * 1991-09-26 1995-01-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health And Human Services Carbamate analogs of thiaphysovenine and method for inhibiting cholinesterases
US5409948A (en) * 1992-11-23 1995-04-25 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method for treating cognitive disorders with phenserine

Also Published As

Publication number Publication date
AU749088B2 (en) 2002-06-20
AU749088C (en) 2005-11-03
DE69832688T2 (de) 2006-09-07
EP0949920A1 (en) 1999-10-20
HUP0003852A3 (en) 2003-04-28
DE69832688D1 (de) 2006-01-12
CA2264750A1 (en) 1999-01-21
US6410747B1 (en) 2002-06-25
MXPA04001462A (es) 2005-04-29
CZ81699A3 (cs) 2000-01-12
SI0949920T1 (sl) 2006-10-31
ES2255170T3 (es) 2006-06-16
WO1999002154A1 (en) 1999-01-21
IL128877A (en) 2007-10-31
BR9806184A (pt) 2001-06-19
JP4522499B2 (ja) 2010-08-11
EP0949920A4 (en) 2003-04-23
CA2264750C (en) 2009-06-16
IL128877A0 (en) 2000-01-31
PL332078A1 (en) 1999-08-30
HUP0003852A2 (hu) 2001-04-28
JP2001500165A (ja) 2001-01-09
DK0949920T3 (da) 2006-04-18
US6683105B2 (en) 2004-01-27
EP0949920B1 (en) 2005-12-07
AU8293198A (en) 1999-02-08
US20020094999A1 (en) 2002-07-18
ATE311876T1 (de) 2005-12-15
PL191402B1 (pl) 2006-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ297533B6 (cs) Použití inhibitorů butyrylcholinesterázy pro léčbu a diagnostiku Alzheimerovy choroby a demence
US6569848B1 (en) Compounds for the treatment of alzheimer&#39;s disease
JP4095676B2 (ja) 注意障害を治療するためのコリンエステラーゼ阻害剤の使用
JP3708957B2 (ja) （−）−エゼロリン、（−）−ｎ１−ノルエゼロリンおよび（−）−ｎ１−ベンジルノルエゼロリンの置換フェンゼリンおよびフェニルカルバミン酸塩：特異的アセチルコリンエステラーゼ阻害薬としての使用
JPH0621065B2 (ja) シクロセリン含有医薬組成物
EP3521284B1 (en) Pyrazine compounds as map kinase modulators and uses thereof
JP2005232171A (ja) アセチルコリンエステラーゼ阻害剤および（３ａＲ）−１，３ａ，８−トリメチル−１，２，３，３ａ，８，８ａ−ヘキサヒドロピロロ［２，３−ｂ］インドール−５−イルフェニルカーバメートによる組み合わせ療法
TW200909431A (en) Spirocycles as inhibitors of 11-beta hydroxyl steroid dehydrogenase type 1
EP2558467B1 (en) Aryl-/heteroaryl-cyclohexenyl-tetraazabenzo[e]azulenes as vasopressin antagonists
AU5729094A (en) Use of phenserine to treat cognitive disorders
JP2022510691A (ja) 線維症及び炎症の処置のための組成物
US5171750A (en) Substituted phenserines as specific inhibitors of acetylcholinesterase
US5227385A (en) Method for treatment of neurodegenerative diseases
CZ288583B6 (cs) 1,3-Dioxo-6-(3-methylaminopropyl)-1,2,3,6-tetrahydro-4-(thiofen-3-yl)pyrrolo[3,4-c]karbazol, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
JP2961013B2 (ja) 〔（アリールアルキルピペリジン−４−イル）メチル〕−２ａ，３，４，５−テトラヒドロ−１（２Ｈ）−アセナフチレン−１−オン類および関連化合物
RU2280449C2 (ru) Способы лечения когнитивных расстройств
EP0605474B1 (en) Carbamate analogs of thiaphysovenine, pharmaceutical compositions, and method for inhibiting cholinesterases
JP7164537B2 (ja) 運動ニューロン疾患の治療のためのガングリオシド代謝阻害剤
EP0538248B1 (en) Tetrahydroisoquinolinylcarbamates of 1,2,3,3a,8,8a-hexahydro-1,3a,8-trimethylpyrrolo [2,3-b]indole
JPH0352857A (ja) １―置換―２―（３―アミノ―１―プロピニル）ピロリジン誘導体
US20220257570A1 (en) Calpain inhibitors and uses thereof for treating neurological disorders
RU2799454C2 (ru) Терапевтический препарат для лечения нейродегенеративных заболеваний и его применение
EP4043442A1 (en) 6-methyluracil derivatives with anticholinesterase activity and their use
TWI404531B (zh) 石杉鹼甲化合物及包含此化合物之醫藥組合物
Enz Accumulation and turn-over of acetylcholine after administration of acetylcholinesterase inhibitors in rat brain

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20080709