CZ296246B6

CZ296246B6 - 17-Halogenované 19-nor steroidy, zpusob a meziprodukty pro jejich prípravu, jejich pouzití jako léciva a farmaceutické prostredky, které je obsahují

Info

Publication number: CZ296246B6
Application number: CZ20004834A
Authority: CZ
Inventors: Bouali@Yasmina; Mauger@Jacques; Nique@François; de Velde@Patrick Van
Original assignee: Aventis Pharma S.A.
Priority date: 1998-06-23
Filing date: 1999-06-22
Publication date: 2006-02-15
Also published as: IL140416A; AU771369B2; DE69906972T2; TW550077B; US6566542B2; AP1579A; TR200003857T2; CZ20004834A3; NO20006573D0; PT1090027E; AU4270599A; YU80700A; MY118101A; DZ2827A1; NZ508535A; FR2780060A1; ID27410A; KR20010034919A; JP4509380B2; SK19492000A3

Abstract

17-Halogenované 19-nor-steroidy obecného vzorce I, kde R.sub.1.n. je H, (CH.sub.2.n.).sub.m.n.-Ar, (CO)-Ar, (CH.sub.2.n.).sub.m.n.-Alk nebo (CO)-Alk,R.sub.2.n. je uhlovodíkový zbytek s 1 az 6 C atomy, X je halogen, Y je jednoduchá vazba, O, NH, S, SO nebo SO.sub.2.n., Z je H nebo halogen, n je 2, 3, 4 nebo 5, R.sub.3.n. a R.sub.4.n. je H, (CH.sub.2.n.).sub.m.n.-Ar, (CH.sub.2.n.).sub.m.n.-Het, (CH.sub.2.n.).sub.m.n.-Alk, nebo R.sub.3.n. a R.sub.4 .n. spolecne s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvorí poprípade substituovaný heterocyklus se 3 az 15 cleny, prípadne obsahující 1 az 3 dalsí heteroatomy vybrané z O, S a N, Ar je aryl se 6 az18 C atomy, Het je heterocyklyl s 1 az 9 C atomy uhlíku a 1 az 5 heteroatomy vybranými z O, N a S, Alk je uhlovodíkový zbytek s 1 az 12 C atomy, pricemz Ar, Het nebo Alk jsou poprípade substituované,m a m' je 0, 1, 2 nebo 3 a prerusovaná cára je prípadná druhá vazba, a jejich adicní soli s bázemi nebo kyselinami. Zpusoby a meziprodukty pro jejichprípravu, jejich pouzití pro výrobu léciv zejménapro substitucní hormonální lécbu v menopauze neboperimenopauze, pri níz má estrogen malý nebo nemázádný vliv na úroven umístení delohy a se soucasným zajistením prevence nebo lécby osteoporózy. Farmaceutické prostredky, které je obsahují.

Description

17-Halogenované 19-nor steroidy, způsob a meziprodukty pro jejich přípravu, jejich použití jako léčiva a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká 17-halogenovaných 19-nor steroidních sloučenin, způsobu jejich přípravy a meziproduktů, jejich použití jako léčiva a farmaceutických prostředků, které je obsahují.

Dosavadní stav techniky

Osteoporóza je patologický jev, který je charakterizován kvantitativní a kvalitativní redukcí kostní hmoty, což vede k vertebrálním nebo periferním zlomeninám spontánně nebo příležitostně vlivem minimálních traumat. Ačkoliv má tato nemoc mnoho faktorů ve svém původu, menopauza u žen tvoří dominující faktor při úbytku kosti nebo osteopenii.

Tato osteopenie se manifestuje řídnutím a přeměnou architektury pórovité kosti, následkem čehož vzrůstá lámavost skeletu a riziko zlomenin. Kostní úbytky vzrůstají značně po menopauze vlivem potlačení funkce vaječníků a dosahují 3 až 5 % za rok před zpomalením po stáří 65 let.

Pro terapeutické účinky může být postmenopauzní hormonální defícience kompenzována nahrazovací hormonální terapií, kde hraje hlavní roli při zachování kostní hmoty estrogen. Ale dlouhodobá estrogenoterapie je někdy doprovázena nežádoucími účinky na genitální ústrojí (endometriální hyperplasie, prsní tumory ...), které tvoří hlavní nevýhodu a omezují její použití.

Je proto vhodné nalézt sloučeniny, jiné než estradiol, které mají disociovanou estrogenní aktivitu, konkrétně estrogenní aktivitu na kostní úrovni, přičemž nemají žádnou nebo pouze malou endometriální hyperplasní aktivitu, ani prsní tumorovou proliferační aktivitu.

Určité 19-nor-steroidové deriváty vykazující hormonální nebo antihormonální aktivitu jsou popsány v patentových spisech FR 2 528 434, WO-A-99/25725, WO-A-98/45316 a EP 0 110 434. Tyto sloučeniny se liší od sloučenin podle vynálezu druhem substituce v poloze 17.

-1 CZ 296246 B6

Podstata vynálezu

Předmětem předkládaného vynálezu jsou 17-halogenované 19-nor-steroidy obecného vzorce I

X

kde

Ri znamená atom vodíku, skupinu (CH₂)_m-Ar, (CO)-Ar, (CH₂)_m-Alk nebo (CO)-Alk,

R₂ znamená skupinu odvozenou od lineárního nebo rozvětveného, nasyceného nebo nenasyceného uhlovodíku obsahujícího 1 až 6 atomů uhlíku,

X znamená atom halogenu,

Y znamená jednoduchou vazbu, O, NH, S, SO nebo SO₂,

Z znamená atom vodíku nebo atom halogenu, n je 2, 3, 4 nebo 5,

R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají atom vodíku, skupinu (CH₂)_m-Ar, (CH₂)_nť-Het, (CH₂)_m'-Alk, nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvoří popřípadě substituovaný monocyklický nebo polycyklický, nasycený nebo nenasycený, aromatický nebo nearomatický heterocyklus se 3 až 15 členy, případně obsahující 1 až 3 další heteroatomy vybrané z kyslíku, síry a dusíku,

Ar znamená karbocyklickou arylovou skupinu obsahující 6 až 18 atomů uhlíku, Het znamená nasycenou nebo nenasycenou aromatickou nebo nearomatickou heterocyklickou skupinu obsahující 1 až 9 atomů uhlíku a 1 až 5 heteroatomů vybraných z kyslíku, dusíku a síry,

Alk znamená zbytek odvozený od nasyceného nebo nenasyceného, lineárního, rozvětveného nebo cyklického nearomatického uhlovodíku obsahujícího 1 až 12 atomů uhlíku, kde Ar, Het nebo Alk jsou substituované nebo nesubstituované, mam' znamená0, 1, 2nebo 3,

-2CZ 296246 B6 přerušovaná čára představuje případnou druhou vazbu a jejich adiční soli s bázemi nebo kyselinami.

Z výhodných provedení těchto steroidů je možno uvést steroidy obecného vzorce I a jejich adiční soli, kde

- X je atom fluoru v alfa poloze a přerušovaná vazba nepředstavuje další vazbu;

a/nebo

- Rj je atom vodíku, R₂ je methylová skupina a Zje buď atom vodíku nebo atom chloru, Y znamená atom kyslíku a přerušovaná čára neznamená druhou vazbu;

a/nebo buď R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány tvoří jeden z následujících nasycených heterocyklů; a/nebo

- X je atom fluoru v alfa poloze, Rj je atom vodíku, R₂ je methylová skupina, Y je atom kyslíku, Z je atom vodíku nebo atom chloru, n je rovno 2 nebo 3, buď R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány tvoří jeden z následujících nasycených heterocyklů:

a přerušovaná čára neznamená druhou vazbu.

Jako přednostní konkrétní steroidy podle vynálezu je možno uvést

17-alfa-fluor-l l-beta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17-alfa-fluor-l l-beta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid,

17-alfa-fluor-l l-beta-[4—[2-(l-diethylamino)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17-alfa-fluor-l l-beta-[4-[2-(l-pyrrolidinyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

4-chlor-17-alfa-fluor-ll-beta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17-j od-11 -beta-[4-[2-( 1 -piperidyl)ethoxy] fenyl]-estra-l ,3,5( 10), 16-tetraen-3-ol,

17-alfa-fluor-11 -beta-[4-[2-(4-methyl-1 -piperidyl)ethoxy] fenylj-estra-1,3,5(10)-trien-3-ol,

17-alfa-fluor-11 -beta-[4-[2-(4-methyl-1 -piperidyl)ethoxy] fenylj-estra-1,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid,

17-alfa-fluor-3-methoxy-l 1 -beta-[4-[2-( l-piperidyl)ethoxy] fenyl]-estra-l ,3,5(10)-trien,

17-alfa-fluor-3-methoxy-ll-beta-[4-[2-(l-pyrrolidinyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien,

17-alfa-fluor-3-methoxy-l l-beta-[4-[2-(diethylamino)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien, (ll-beta)-17-chlor-ll-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10),16-tetraen-3-ol,

17-alfa-chlor-ll-beta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17-jod-l 1 —beta—[4—[2—(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]-estra-l ,3,5( 10), 16-tetraen-3-ol hydrochlorid a

17-alfa-fluor-11 -beta-[4-[2-( 1 -piperidyl)ethoxy] fenylj-estra-1,3,5(10)-trien-3-ol.

Předmětem vynálezu je také způsob přípravy steroidů obecného vzorce I definovaných výše, jakož i jejich adičních solí s kyselinami nebo bázemi, jehož podstata spočívá vtom, že

i) sloučenina obecného vzorce II

kde

R₂ a Z mají význam uvedený v nároku 1 a RA znamená jednu z následujících skupin

kde Y, n, R₃ a R₄ mají význam uvedený v nároku 1 a Hal znamená atom halogenu, se podrobí

-4CZ 296246 B6

a) působení redukčního činidla ketoskupiny v poloze 17 za vzniku sloučeniny obecného vzorce III_a

kde R₂ a Z mají význam uvedený u obecného vzorce I a skupina RA je definována v odstavci i) a potom se

b) na získanou sloučeninu obecného vzorce III_a působí halogenačním činidlem za vzniku slou-

kde R₂ a Z mají význam uvedený u obecného vzorce I a skupina RA je definována v odstavci i), přičemž před provedením stupně a), po provedení stupně a) nebo po provedení stupně b) se kterákoliv ze sloučenin vzorce II, III_a nebo I'_a podrobí, je-li to žádoucí nebo nutné, jedné nebo více z následujících reakcí

- protekci nebo deprotekci nebo aktivaci kterékoliv z hydroxyskupin,

- acylaci nebo alkylací hydroxyskupiny připojené k aromatickému kruhu pro převedení této hydroxyskupiny na skupinu ORi, kde Ri má význam uvedený v nároku 1, působení činidla vzorce HNR₃R4, případně ve formě soli, když RA představuje -Ph-Y(CH₂)_n-Hal nebo aktivovanou skupinu-Ph-Y-(CH₂)_n-OH,

- převedení v sůl;

nebo ii) sloučenina obecného vzorce II definovaná v odstavci i) nároku 7 se a) nechá reagovat s hydrazinem za vzniku sloučeniny obecného vzorce IIJ,

b) na získanou sloučeninu obecného vzorce III_b působí halogenačním činidlem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I'_b

kde R₂, X a Z mají význam uvedený u obecného vzorce I a skupina RA je definována v odstavci i), přičemž před provedením stupně a), po provedení stupně a) nebo po provedení stupně b) se kterákoliv ze sloučenin vzorce II, III_b nebo I'_b podrobí, je-li to žádoucí nebo nutné, jedné nebo více z následujících reakcí

- protekci nebo deprotekci nebo aktivaci kterékoliv z hydroxyskupin,

- acylaci nebo alkylaci hydroxyskupiny připojené k aromatickému kruhu pro převedení této hydroxyskupiny na skupinu ORi, kde R| má význam uvedený v nároku 1,

- působení činidla vzorce HNR₃R4, případně ve formě soli, když RA představuje -Ph-Y(CH₂)_n-Hal nebo aktivovanou skupmu-Ph-Y-(CH₂)_n-OH,

- převedení v sůl.

-6CZ 296246 B6

Ve výhodném provedení tohoto způsobu se připravuje steroid obecného vzorce I, kde X je atom fluoru v alfa poloze a přerušovaná vazba nepředstavuje další vazbu; přičemž se jako halogenačního činidla používá perfluor-l-butansulfonylfluoridu vzorce FSO2C4F9.

Předmětem vynálezu jsou dále také steroidy obecného vzorce I definované výše a jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami nebo bázemi pro použití jako léčiva a dále také farmaceutický prostředek, který obsahuje alespoň jeden z těchto steroidů.

Dále jsou předmětem také sloučeniny obecného vzorce 1¾ definované výše, jako meziprodukty.

Předmětem vynálezu je také použití steroidů obecného vzorce I, definovaných výše, pro přípravu léčiva pro substituční hormonální léčbu v menopauze nebo perimenopauze, při níž má estrogen malý nebo nemá žádný vliv na úroveň umístění dělohy a s výhodou též se zajištěním prevence nebo léčby osteoporózy.

Léčivo podle vynálezu lze také použít cíleně pro prevenci nebo léčbu osteoporózy nebo pro kardiovaskulární ochranu. Taková aplikace rovněž spadá do rozsahu vynálezu.

Následuje bližší objasnění termínů použitých v definici obecného vzorce I.

Halogen znamená jod, brom, chlor nebo fluor. Ve 4 poloze je výhodně chlor nebo brom. V 17 poloze je výhodně fluor.

(CH₂)_m nebo (CH₂)_m' znamená následující hodnoty: jednoduchou vazbu v případě, že m je rovno 0, CH₂, (CH₂)₂ a (CH₂)₃.

Výraz (Ar) představující karbocyklickou arylovou skupinu obsahující 6 až 18 atomů uhlíku znamená derivát aromatického cyklického uhlovodíku, jako je fenyl, naftyl, fenantryl nebo derivát kondenzovaného bicyklického nebo tricyklického uhlovodíku obsahující benzenový kruh, jako je indanyl, indenyl, dihydronaftyl, tetrahydronaftyl nebo fluorfenyl. Spojení je provedeno na úrovni benzenového kruhu. Výhodně je fenyl.

Výraz (Het) znamená nasycený nebo nenasycený, aromatický nebo nearomatický heterocykl obsahující 1 až 9 atomů uhlíku a 1 až 5 heteroatomů vybraných ze souboru, který zahrnuje atomy kyslíku, dusíku a síry, přičemž zejména zahrnuje následující:

heterocyklické monocyklické radikály, například thienyl, furyl, pyranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, thiazolyl, oxazolyl, furazanyl, pyrrolinyl, imidazolinyl, pyrazolinyl, thiazolinyl, triazolyl, tetrazolyl, kondenzované heterocyklické kruhy, například benzofuranyl, benzothienyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, nafto[2,3-b]thienyl, thianthrenyl, izobenzofuranyl, chromenyl, xanthenyl, fenoxathinyl, indolizinyl, izoindolyl, 3H-indolyl, indolyl, indazolyl, purinyl, chinolizinyl, izochinolyl, chinolyl, ftalazinyl, naftyridyl, chinoxalinyl, chinazolinyl, cinnolinyl, pteridinyl, karbazolyl, beta-karbolinyl, akridinyl, fenazinyl, fenothiazinyl, fenoxazinyl, indolinyl, izoindolinyl, imidazopyridyl, imidazopyrimidinyl nebo také kondenzované polycyklické systémy tvořené monocyklickými heterocykly, jak jsou definovány shora, například furo[2,3-b]pyrrol nebo thieno[2,3-b]furan, nebo nasycené heterocykly, jako pyrrolidin, piperidin nebo morfolin.

Výraz (Alk) znamená zbytek odvozený od nasyceného nebo nenasyceného, lineárního, rozvětveného nebo cyklického nearomatického uhlovodíku a zahrnuje například alkylové radikály, jako je methyl, ethyl, propyl, izopropyl, butyl, izobutyl, terc.butyl, n-pentyl, n-hexyl, 2-methylpentyl,

2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 2,2-dimethylpentyl, 3,3-dimethylpentyl, 3-ethylpentyl, n-oktyl, 2,2-dimethylhexyl, 3,3-dimethylhexyl, 3-methyl-3-ethylpentyl, nonyl, 2,4-dimethylpentyl nebo n-decyl, alkenylové radikály, jako vinyl, propenyl, izopropenyl, allyl, 2methylallyl, butenyl nebo izobutenyl, nebo alkinylové radikály, jako je ethinyl, propinyl, propar-7CZ 296246 B6 gyl, butinyl nebo izobutinyl a, v případě cyklických zbytků, cykloalkylové zbytky, jako cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl nebo adamantyl.

Výhodně je methyl nebo ethyl.

CO-Alk výhodně znamená COCH₃ a COEt; CO-Ar výhodně znamená benzoylovou skupinu, (CH₂)_m-Ar výhodně znamená benzylovou skupinu, kde mje jiné než 0.

Jestliže R₃ a R4 společně atomem dusíku ke kterému jsou vázány tvoří heterocykl, pak je zejména mono- nebo bicyklický heterocykl, případně obsahující další heteroatomy vybrané ze souboru, který zahrnuje kyslík a dusík, jako následující nenasycené heterocykly: pyrrolyl, imidazolyl, indolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, thiazolyl, oxazolyl, furazolinyl, pyrazolinyl, thiazolinyl nebo výhodněji, následující nasycené heterocykly:

Když jsou různé skupiny Alk, Ar, Het a rovněž heterocykly tvořené R₃ a R4 s dusíkem, který je nese substituovány, mohou být substituovány zejména skupinami vybranými ze souboru, který zahrnuje:

halogen, konkrétně fluor, chlor, brom nebo jod, alkoxy, jako methoxy, ethyloxy, propyloxy, izopropyloxy, butyloxy, alkylthio, jako methylthio, ethylthio, propylthio, izopropylthio, butylthio, amino, alkylamino, jako methylamino nebo ethylamino, dialkylamino, jako dimethylamino, diethylamino, methylethylamino, přičemž tyto dialkylaminové skupiny jsou případně v oxidované formě, aminoalkyl, jako je aminomethyl, aminoethyl, dialkylaminoalkyl, jako je dimethylaminomethyl nebo dimethylaminoethyl, dialkylaminoalkoxy, jako dimethylaminoethyloxy, hydroxyl, případně acylovaný, acyl, jako je acetyl, propionyl, butyryl, benzoyl, volná nebo esterifíkovaná karboxy, jako je alkoxykarbonyl, například methoxykarbonyl nebo ethoxykarbonyl, kyano, trifluormethyl, aryl, jako je fenyl, aralkyl, jako je benzyl, alkyl, alkenyl nebo alkinyl, přičemž tyto skupiny jsou případně substituované atomem halogenu, alkylem, alkoxy, alkylthio, amino, alkylamino nebo dialkylaminovými skupinami indikovanými shora.

Výraz „substituovaný“ indikuje, že může být přítomno jeden nebo více shodných nebo různých substituentů. Například, když je alkylová skupina methyl substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, může být zejména CH₂C1, CH₂F, CHF₂ a CF₃. V případě (Flet), substituenty mohou být na NH nebo atomu uhlíku.

Hodnoty R_b R₂, R₃ a R4 a rovněž n, m a m' jsou navzájem nezávislé.

Vynález rovněž zahrnuje soli sloučenin obecného vzorce I, jako jsou například soli tvořené s minerálními nebo organickými kyselinami na aminu. Potom se může použít jedna z následujících kyselin: chlorovodíková, bromovodíková, dusičná, sírová, fosforečná, octová, mravenčí, propionová, benzoová, maleinová, fumarová, jantarová, tartarová, citrónová, šťavelová, glyoxylová, aspartová, alkansulfonové kyseliny, jako je methan nebo ethansulfonová, arylsulfonové kyseliny, jako je benzen nebo p-toluensulfonová a arylkarboxylové kyseliny. Jestliže sloučeniny obecného vzorce I obsahují kyselou funkci, vynález je dále rozšířen na soli alkalických kovů, soli kovů alkalických zemin nebo amonia, případně substituované.

Následuje podrobnější vysvětlení způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu.

-8CZ 296246 B6

Redukce 17-ketoskupiny na alkohol se provede standardními metodami, zejména působením borohydridu alkalického kovu, jako je borohydrid sodný v methanolu nebo ethanolu nebo působením aluminium nebo lithium tetrahydridu. Touto reakcí se získá alkohol v poloze 17-beta.

Halogenační reakce, která následuje, se výhodně provede reakčními činidly, jako je XSO₂C₄F₉v přítomnosti bráněné báze, jako je DBU (diazabicykloundecen), X je výhodně fluor. Mohou se také použít další halogenační metody známé odborníkům.

Jestliže je hydroxyskupina výchozího produktu v poloze beta, během nukleofílní substituce dochází k inverzi konfigurace a tímto postupem (halogenační činidlo: perfluor-12-butansulfonylfluorid (FSO₂C₄F₉)) se získají zcela zvláštní sloučeniny obecného vzorce I nebo I'_a s atomem fluoru v poloze 17-alfa.

Působení hydrazinu se výhodně provede v přítomnosti báze, jako je triethylamin a halogenace, která následuje se provede zejména s X₂ v bazickém prostředí a zejména s I₂.

Aktivací alkoholu se míní zavedení zejména mesylátu, tosylátu nebo triflátu, které podporují nukleofílní substitucí aminu HNR₃R₄ na sloučeninách vzorce II, III_a, III_b, I'_a nebo I'_b, kde R₃ znamená skupinu -Ph-Y-(CH₂)_n-OH.

Tvorba mesylátu, tosylátu nebo triflátu z odpovídajícího alkoholu se provede v přítomnosti báze, jako je triethylamin. Může se také provést substituce alkoholu atomem halogenu podle obvyklých metod.

Protekční a deprotekční reakce jsou standardní reakce, které jsou odborníkům známé. Docela kompletní přehled je obsažen v následující publikaci: Protective groups in organic synthesis, T. W. Greene, John Wiley & sons (1981).

Ochranná skupina P (OH -> OP) může představovat alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, benzylovou skupinu, tetrahydropyranylovou skupinu, skupinu RcR_DR_ESi, kde Rc, R_D a R_Ejsou stejné nebo různé, navzájem nezávislé a každá představuje alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu. Zcela zvláštní skupiny jsou Si(Me)₂CMe₃ nebo -Si(Ph)₂CMe₃ nebo -SiMe₃.

Jako příklad se uvádí deprotekční reakce (OP -a OH v poloze 3), kde P je tetrabutyldifenylsilylová skupina, která se může provést působením tetrabutylamoniumfluoridu v roztoku v tetrahydrofuranu. Je to stejné jako když P představuje SO₂C₄F₉ po fluorační reakci.

Jestliže P je tetrahydropyranylová skupina, deprotekce se provede v přítomnosti vodné kyseliny v alkoholovém rozpouštědle a výhodně působením kyseliny chlorovodíkové vmethanolu.

Působení sloučeniny obecného vzorce R₃R₄NH na sloučeniny vzorců II, III_a, III_b, I'_a nebo I'_b, kde R₂ znamená skupiny -Ph-Y-(CH₂)_n-OH nebo -Ph-Y-(CH₂)_n-Hal se provede za standardních podmínek pro nukleofílní substituci, zejména v přítomnosti aprotického rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran. Jestliže je OH skupina aktivována, pak je zejména OSO₂CH₃, OSO₂-Ph~pMe, OSO₂CPh₃.

Alkylační nebo acylační reakce OH skupiny v poloze 3 a stejně tak reakce při kterých vzniká sůl se provedou standardními způsoby, které jsou odborníkům známé.

Sloučeniny obecného vzorce I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami mají zejména estrogenní aktivitu, antiestrogenní aktivitu a antiproliferační aktivitu.

-9CZ 296246 B6

Na tomto základě mohou být sloučeniny obecného vzorce I použity při léčení poruch spojených s hypofolikulinismem, například amenorhey, dismenorhey, opakované potraty, premenstruační poruchy, při léčení určitých, na estrogenu závislých stavů jako jsou adenomy nebo karcinomy prostaty, karcinomy prsu a jejich metastázy nebo při léčení benigních tumorů prsu, jako antiuterotrofíkum, stejně jako při nahrazovací terapii v menopauze nebo perimenopauze.

Symptomy a důsledky spojené s menopauzou jsou přesněji: návaly horka, pocení, atrofíe a suchost vagíny, urinámí symptomy a dlouhodobý pokles kostní hmoty a zvýšené riziko zlomenin, stejně jako ztráta kardiovaskulární ochrany poskytované estrogeny.

Zejména sloučeniny vzorce I, stejně tak jejich farmaceuticky přijatelné soli s kyselinami mohou být takto použity při prevenci nebo léčení osteoporózy.

Sloučeniny vzorce I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami mohou být také použity při léčení osteoporózy u lidí.

Mohou být také použity při prevenci nebo léčení sekundární osteoporózy (například s kortizony spojené osteoporózy nebo spojené s imobilizací).

Sloučeniny vzorec I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami mají zejména disociovanou estrogenní aktivitu.

Disociovaná estrogenní aktivita znamená estrogenní aktivitu v kosti, která vykazuje jen minimální aktivitu v uteru a tak nevede k endometriální proliferaci (aktivitu dostatečně nízkou oproti aktivitě estradiolu).

Dále sloučeniny podle vynálezu poskytují následující výhody:

- vykazují antiestrogenní a/nebo antiproliferační aktivitu v prsu. Na rozdíl od estradiolu, nestimulují růst lidských prsních nádorových buněk a mohou dokonce inhibovat jejich růst. Sloučeniny podle vynálezu jsou tudíž zvlášť výhodné pro léčení menopauzy u žen při riziku rakoviny prsu (rodinná dispozice), které jsou tudíž vyloučeny z náhradní terapie estradiolem. Mohou být také použity při léčení rakoviny prsu.

- vedou ke snížení hladiny sérového cholesterolu na hladinu ekvivalentní hladině vyvolané estradiolem. Také poskytují kardiovaskulární ochranu.

- konečně sloučeniny podle vynálezu nevykazují estrogenní aktivitu v uteru a tak se nevyžaduje, aby byly podávány ve spojení s progestomimetickou sloučeninou.

Vynález se tak týká sloučenin obecného vzorce I, stejně tak jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami, jako léčiv.

Vynález se zejména týká sloučenin obecného vzorce I stejně tak jejich farmaceuticky přijatelných solí s kyselinami nebo bázemi, jako léčiv pro prevenci nebo léčení osteoporózy.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků, obsahujících alespoň jedno léčivo uvedené shora jako aktivní složku.

Sloučeniny obecného vzorce I se používají digestivní, parenterální nebo lokální cestou, například perkutánní cestou. Mohou být předepisovány ve formě prostých nebo povlečených tablet, želatinových kapslí, granulí, čípků, pesarů, injektovatelných přípravků, mastí, krémů, gelů, mikrokuliček, implantátů, intravaginálních kroužků, náplastí, které se připravují obvyklými způsoby.

-10CZ 296246 B6

Ve farmaceutických prostředcích mohou být aktivní složka nebo aktivní složky použity s obvyklými pomocnými látkami, jako je talek, arabská guma, laktóza, škrob, stearát hořečnatý, kakaové máslo, vodná nebo nevodná vehikula, mastné látky živočišného nebo rostlinného původu, parafinické deriváty, glykoly, různé smáčecí, dispergační nebo emulgační prostředky a konzervační látky.

Požadovaná dávka se mění v závislosti na chorobě, která se má léčit a na cestě podání; u dospělých pacientů může činit denní dávka při orálním podání 1 až 1000 mg denně.

Předmětem vynálezu je také použití sloučenin obecného vzorce I, jak jsou definovány shora, pro přípravu léčiva určeného pro hormonální náhradní léčbu v menopauze nebo perimenopauze, mající malý nebo žádný účinek na dělohu, zejména když se léčivo má použít k prevenci nebo léčbě osteoporózy.

Sloučeniny obecného vzorce II a IIIa jsou sloučeniny, které jsou známé nebo snadno dostupné odborníkovi. Konkrétně, sloučeniny obecného vzorce II, kde Z = H, R₂ = Me a RA = -Ph-Y(CH₂)_n-Hal jsou popsány v mezinárodní patentové přihlášce WO 93/13123 (sloučeniny obecného vzorce II); sloučeniny obecného vzorce II, kde Z = H, R₂ = Me a RA = -Ph-Y-(CH₂)_n-OH jsou popsány v evropském patentu 0305242 B1 (sloučenina obecného vzorce III)), sloučeniny obecného vzorce II, kde Z = H, R₂ = Me a RA = -Ph-Y-(CH₂)_n-NR₃R4 jsou popsány v evropském patentu 0097572, francouzském dodatečném osvědčení 2640977 nebo evropském patentu 0305242.

Sloučeniny obecného vzorce II, kde Z znamená atom halogenu, jsou popsány v mezinárodní patentové přihlášce WO 9845316 a připraví se ze sloučeniny obecného vzorce IV

působením halogenačního činidla s cílem získat sloučeninu obecného vzorce V

(V), kde sloučenina obecného vzorce V se podrobí působení aromatizačního činidla kruhu A a poté působení báze s cílem získat sloučeninu obecného vzorce II, kde Z znamená atom halogenu.

-11 CZ 296246 B6

Působení halogenačního činidla, jako je N-bromsukcinimid nebo N-chlorsukcinimid na sloučeniny obecného vzorce IV se provádí zejména v přítomnosti dipolámího aprotického rozpouštědla, jako je dimethylformamid.

Aromatizační reakce následovaná zmýdelněním (působení báze) se provede standardními způsoby, jak je popsáno v evropském patentu 0097572. Výhodně se použije jako aromatizační činidlo směs acetanhydridu a acetylbromidu a jako činidlo pro zmýdelnění se použije báze, jako je soda v methanolu.

Předmětem předkládaného vynálezu jsou také meziprodukty, sloučeniny obecného vzorce I'_a, III_bal'_b.

Dále uvedené příklady ilustrují předkládaný vynález. Tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu.

Rozpouštědla použitá v příkladech: AcOEt (ethylacetát), TEA (triethylamin), CH₂C1₂ (dichlormethan), CHC1₃ (chloroform), MeOH (methanol), NH₄0H (hydroxid amonný), iPrOH (izopropylalkohol).

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

17alfa-fluor-11 beta-[4- [2-( 1 -piperidinyl)ethoxy] fenyljestra-1,3,5(10)-trien-3-ol

Stupeň A: Redukce lbeta-[4-(2-jodethoxy)fenyl]estra-l ,3,5(10)trien-3,7beta-diol mg borohydridu sodného se přidá při teplotě 0 °C k roztoku 516 mg 3-hydroxy-l-beta-[4(2-jodethoxy)fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-17-onu připraveném podle způsobu popsaném ve WO 93/13123 v 5 ml MeOH a 5 ml THF a směs se míchá při této teplotě po dobu 5 minut a poté 1 hodinu a 30 minut při teplotě místnosti. Po přidání 20 ml 0,lN HC1 dojde ke krystalizaci. Získá se 460 mg žádaného produktu.

Rf AcOEt/TEA 95/5 = 0,67

NMR (CDCb, 300 MHz)

7,01 a 6,61 (4H, 2d, aromatický H v poloze 11); 6,79 (1H, d, Hl); 6,68 (1H, d, H4); 6,51 (1H, dd, H2); 4,11 (2H, t, CH₂O); 3,94 (1H, bt, Hll); 3,72 (1H, bt, H17); 3,33 (2H, t, CH₂1); 0,37 (3H, s, 18-Me).

Stupeň B: Fluorace

Nonafluorbutansulfonát 17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-jodethoxy)fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-olu

0,45 ml DBU a poté 0,20 ml perfluor-l-butansulfonylfluoridu (FSO₂C₄F₉) se přidá při teplotě °C a pod atmosférou dusíku k suspenzi 518 mg steroidu připraveném ve stupni A v 5 ml toluenu a 1 ml dichlormethanu a získaný roztok se udržuje při teplotě okolí 30 minut. Reakční směs se potom vlije do 20 ml vody, extrahuje se ethylacetátem, promyje se, suší se a odpaří za sníženého tlaku a získá se 565 mg surového produktu, který se čistí chromatografíí na Lichrosorbu RP18, eluováním směsí acetonitrilu a vody 85/15. Získá se 350 mg očekávaného produktu.

-12CZ 296246 B6

Rf CH₃CN/H₂O 85/15 = 0,47 na LKC18F (Whatman)

t.t. = 110 °C

NMR (CDC1₃, 250 MHz)

7,00 (2H, m, H1 a H4); 6,93 a 6,63 (4H, 2d, ΑΑ'ΒΒ', aromatické H' v poloze 11); 6,82 (1H, dd, H2); 4,44 (1H, dd, Ji = 55,5 Hz J₂ = 5 Hz, H17); 4,14 (2H, t, CH₂O); 4,03 (1H, m, Hl 1); 3,35 (2H, t, CH₂1); 0,23 (3H, d, J = 2 Hz, CH₃).

Stupeň C: Zavedení aminu následované deprotekcí

0,4 ml piperidinu se přidá k roztoku steroidu připraveném v předchozím stupni ve 3 ml THF, reakční směs se zahřívá při zpětném toku 2 hodiny, ochladí se, vlije se do 10 ml vody, extrahuje se ethylacetátem, promyje se, suší a odpaří za sníženého tlaku a získá se 320 mg žádaného surového produktu. Po rozpuštění ve 30 ml THF se přidají 2 ml tetrabutylamoniumfluoridu a směs se zahřívá při zpětném toku 7 hodin. Po ochlazení se reakční směs vlije do 20 ml vody nasycené hydrogenuhličitanem sodným, extrahuje se ethylacetátem, promyje, suší a odpaří se za sníženého tlaku. Získá se 405 mg surového produktu, který se čistí chromatografií na silikagelu, eluováním směsí AcOEt/TEA 95/5. Získá se 160 mg žádaného čistého produktu.

Rf AcOEt/TEA 95/5 0,31 na SiO₂F₂₅₄ Měrek.

NMR (CDC1₃ 300 MHz)

6,95 a 6,48 (4H, 2d, ΑΑ'ΒΒ', aromatické H v poloze 11); 6,79 (1H, d, Hl); 6,48 (1H, d, H4); 6,39 (1H, dd, H2); 4,44 (1H, dd, J=56 Hz a 5 Hz, H17); 3,99 (1H, bt, Hl 1); 4,26 a 3,99 (2H, 2m, CH₂O), 1,65 a 1,46 (6H, m, CH₂ v γ a β poloze piperidinu); 1,20 až 3,20 (20H, m, skelet H + CH₂N a CH₂ v a poloze piperidinu); 0,22 (3H, d, J = 2 Hz, CH₃).

IR (CHCI3)

- OH 3597 cm^-1 + připojené

- aromatické 1608, 1582, 1512, 1503 cm¹

Příklad 2 alfa-fluor-11 beta-[4-[2-( 1 -piperidinyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid ml 4N roztoku HC1 v ethylacetátu se přidá k roztoku fluorované sloučeniny příkladu 1 v 10 ml ethylacetátu při 0 až 5 °C, kdy dojde ke krystalizací. Získá se 1,6 g bílých krystalů.

Rf AcOEt/TEA 95/5 = 0,21 na SiO₂F₂₅₄ Měrek.

t.t. = 216 °C

NMR (CDCh 300 MHz)

6,95 a 6,43 (4H, 2d, ΑΑ'ΒΒ', aromatické H v poloze 11); 6,79 (1H, d, Hl); 6,66 (1H, d, H4);

6,59 (1H, dd, H2), 4,43 (1H, dd, J = 56 Hz a 5 Hz, H17); 3,99 (1H, bt, Hl 1); 4,26 a 3,87 (2H, 2m,

CH₂O); 3,48 (pohyblivý 1H, NH⁺); 2,8 a 3,25 (2H, m, CH2N⁺); 0,22 (3H, d, J = 2 Hz, CH3).

-13CZ 296246 B6

IR (CHC1₃)

- OH 3598 cm^-1 + připojené

- NH⁺ absorpce

- aromatické 1610, 1582, 1512 cm”¹

Příklad 3

17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-(l-diethylamino)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol

Postupuje se způsobem popsaným v příkladu 1, ale ve stupni C se použije diethylamin místo piperidinu, získá se 0,141 g žádaného produktu.

Rf AcOEt/ET₃N 99/1 = 0,15 na SiO₂F₂₅₄ Měrek

NMR (CDC1₃ 300 MHz)

0,24 (d, CH₃ v poloze 18); 1,05 (t, CH₃CH₂N); 2,64 (q, CH₃CH₂N); 2,83 (t, O-CH₂CH₂N); 3,95 (t, CH₂O); 4,00 (bt, Hll); 4,44 (dd, J = 56 Hz a 5 Hz, H17); 6,32 (d, H0, 6,38 (dd, H2); 6,53 (d, H4); 6,57 a 6,96 (ΑΑ'ΒΒ, aromatický H v poloze 11).

Příklad 4

17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-(l-pyrrolidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol

Postupuje se způsobem popsaným v příkladu 1, ale ve stupni C se použije pyrrolidin místo piperidinu, získá se 0,049 g žádaného produktu.

Rf AcOEt/ET₃N 95/5 = 0,18 na SiO₂F₂₅₄ Měrek

NMR (CDC1₃ 300 MHz)

0,28 (d, CH₃ v poloze 18); 2,70 (m, pyrrolidin); 3,03 (t, CH₂N); 3,98 (t, CH₂O); 4,45 (dd, H17); 6,37 (dd, H2); 6,41 (d, H4); 6,50 a 6,96 (ΑΑ'ΒΒ', aromatický H v poloze 11); 6,78 (d, Hl).

Příklad 5

4-chlor-17 alfa-fluor-11 beta-[4-[2-( 1 -piperidinyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol

Stupeň A: Ochrana 3-hydroxy 4-chlor-3-[[dimethyl(2,2-dimethyl)ethyl)silyl]oxy]-l l-beta-[4[2-( 1 -piperidinyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-onu

1,3 g terc-butyldimethylsilylchloridu se přidá k roztoku 4-chlor-3-hydroxy-llbeta-[4-[2-(lpiperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-onu připraveného působením NCS na odpovídající Δ 4-5 9-10, 3-on derivát. Poté se provede aromatizační reakce kruhu A v 30 ml CH₂C1₂, reakční směs se ochladí na 0 °C a po kapkách se přidá 1,13 ml TEA. Po 5 minutách při 0 °C se teplota reakční směsi upraví na teplotu místnosti, při které se udržuje 3 hodiny a potom se vlije do 100 ml vody. Po vysušení se organická fáze odpaří za sníženého tlaku a získá se 4,55 g surového produktu, který se čistí chromatografii na silikagelu eluováním směsí AcOEt/TEA 98/2. Získá se 2,68 g očekávané sloučeniny.

-14CZ 296246 B6

Rf AcOEt/TEA 90/10 = 0,58 na SÍO₂F₂₅₄ Měrek.

IR (CHC1₃)

C=O 1733 cm'¹ aromatická C-H 2936 - 2859 cm^-1

Stupeň B: Redukce

4-chlor-3-[[dimethyl-(2,2-dimethylethyl)silyl)oxy-llbeta-4-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5(10)-trien-l 7beta-ol

189 mg NaBH₄ se přidá k roztoku steroidu získaném v předchozím stupni v 15 ml methanolu ochlazeném v ledové lázni a směs se míchá při 0+5 °C a poté 30 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se vlije do 100 ml vody a následuje extrakce s ethylacetátem, promyje se, suší a odpaří se za sníženého tlaku. Získá se 1,5 g žádaného produktu.

Rf AcOEt/TEA 90/10 = 0,40 na SiO₂F₂₅₄ Měrek.

Stupeň C: Fluorace a poté odstranění chránící skupiny

- Fluorace

0,90 ml DBU, 0,04 ml perfluorbutansulfonylfluoridu se přidá pod dusíkem při teplotě okolí k roztoku 596 mg steroidu získanému v předchozím stupni v 5 ml toluenu a 1 ml CH₂C1₂ a reakční směs se míchá 2 hodiny. Potom se směs vlije do vody, extrahuje se dichlormethanem a poté se promyje, suší a odpaří za sníženého tlaku. Získá se 1,23 g surového produktu, který se čistí chromatografií na silikagelu eluováním směsí AcOEt/TEA 98/2. Získá se 0,6 g fluorovaného produktu chráněného v poloze 3.

- Odstranění chránící skupiny ml Bu₄NF se přidá k roztoku fluorovaného produktu ve 3 ml THF, směs se zahřívá při zpětném toku 4 hodiny, potom se ochladí a vlije se do 20 ml vody. Po extrakci s dichlormethanem, promytí a sušení se provede odpaření za sníženého tlaku, dokud se nezíská suchý extrakt, který se chromatografuje na Lichrosorb RP18, eluováním směsí MeOH/H₂O/TEA 90/9/1. Získá se 65 mg chráněného produktu.

Rf MeOH H₂O/TEA 90/9/1 = 0,23 na LKC 18F (Whatman)

NMR (CDClj 300 MHz)

6,91 a 6,61 (4H, 2d, aromatický H v poloze 11); 6,80 (1H, d, Hl); 6,61 (1H, d, H2); 4,34 (1H, dd, J = 5 Hz a 55,5 Hz, H17); 3,98 (1H, maskováno, Hll); 3,98 (2H, t, CH₂O); 2,70 (2H, t, CH₂N); 2,47 (4H, m, 2CH₂ v a poloze dusíku piperidinu); 1,58 (4H, m, 2CH₂ v β poloze dusíku piperidinu); 1,44 (2H, m, 1CH₂ v γ poloze dusíku piperidinu); 0,22 (3H, d, J = 2,5 Hz, 18-Me).

IR (CHC1₃)

OH 3537 cm¹ aromatické: 1608, 1581, 1512 cm“¹

Postupem podle předchozích příkladů se získají následující produkty:

-15 CZ 296246 B6

Příklad 6

17-jod-l lbeta-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5(10), 16-tetraen-3-ol

Rf: 0,33 (AcOEt-TEA 90-10).

IR (CHC1₃)

OH: 3600 cm⁴; aromatické: 1609, 1580, 1512 cm^-1.

NMR (CDCh, 300 MHz)

0,46 (s, CH₃ v poloze 18); 3,95 (m, CH₂O a H„); 6,11 (H₁₆); 6,36 (dd, H₂); 6,44 (d, H₄); cca 6,50 až cca 6,94 (aromatické v poloze 11).

Příklad 7 alfa-íluor-11 beta-[4-[2-(4-methyl-1 -piperidinyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol

Rf 0,22 (AcOEt-TEA 99-1).

IR (CHCb)

OH: 3599 cm^-1; aromatické: 1610, 1581, 1512 (F) cm^-1.

NMR (CDC1₃, 300 MHz)

0,26: (s, CH₃ v poloze 18); 0,90 (d, CH₃ v poloze 4 piperidinylu); cca 3,97 (m, CH₂O a Hn); 4,43 (dd, Hp); 6,38 (dd, H₂); 6,46 (d, H₄); 6,80 (d, Hi); cca 6,50 - cca 6,95 (aromatické v poloze 11).

Příklad 8

17alfa-íluor-l l-beta-[4-[2-(4-methyl-l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid teplota tání = 200 °C

Rf: 0,15 (AcOEt-TEA 99-1).

NMR (DMSO, 300 MHz)

0,16 (s, CH₃ v poloze 18); 0,90 (d, CH₃ v poloze 4 piperidinylu); 3,98 (bs, H_n); 4,25 (bs, CH₂O);

4,45 (dd, H₁₇); 6,31 (dd, H₂); 6,48 (d, J = 2 H₄); 6,71 (d, H^; 6,71 - 7,02 (aromatické v poloze 11); 8,97 (s, OH v poloze 3).

Příklad 9

17alfa-fluor-3-methoxy-l lbeta-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxyfenyl]estra-l,3,5(10)-trien

Rf: 0,23 (MeOH-H₂O-TEA 94-5-1).

-16CZ 296246 B6

IR (CHC1₃) absence H: aromatické: 1610, 1578, 1512, 1501 v cm“¹.

NMR (CDC1₃, 300 MHz)

0,22 (s, CH₃ v poloze 18); 1,58 (m) a 2,47 (m) piperidin; 2,70 (t, CH₂-N); 3,73 (s, CH₃O); 3,98 (t, CH₂O); 4,43 (dd, Hi_?); 6,50 (dd, H₂); 6,64 (bs, H₄); 6,88 (d, Hi); cca 6,62 až cca 6,97 (aromatické v poloze 11).

Příklad 10

17alfa-fluor-3-methoxy-l lbeta-[4-[2-(l-pyrrolidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien.

teplota tání = 132 °C.

Rf: 0,21 (MeOH-H₂O-TEA 94-5-1).

IR CHC1₃ aromatické: 1610, 1578, 1512, 1501 v cm“¹.

NMR (CDClj, 300 MHz)

0,22 (s, CH₃ v poloze 18); 1,78 (m) a 2,58 (m), pyrrolidin; 2,83 (t, CH₂-N), 3,73 (s, CH₃-O); 3,99 (t, CH₂O); 4,43 (dd, H₁₇); 6,50 (dd, H₂); cca 6,65 (H₄); 6,89 (d, H0; cca 6,64 - cca 6,97 (aromatické v poloze 11).

Příklad 11

17alfa-fluor-3-methoxy-l lbeta-[4-[2-(diethylamino)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5( 10)-trien

Rf: 0,20 (MeOH-H₂O-TEA 94-5-1).

IR (CHC1₃) aromatické: 1610, 1578, 1512, 1501 v cm”¹.

NMR (CDCI3, 300 MHz)

0,22 (s, CH₃ v poloze 18); 1,04 (t) a 2,61 (q), N-Et₂; 2,82 (t, CH₂-N), 3,73 (s, CH₃-O; 3,94 (t, CH₂O); 4,43 (dd, H_]7); 6,49 (dd, H₂); 6,64 (d, H₄); 6,88 (d, HJ; cca 6,62 - cca 6,96; (aromatické v poloze 11).

Příklad 12 (1 lbeta)-l 7-chlor-l l-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5( 10), 16-tetraen-3-ol

Rf: 0,25 (CH₂Cl₂-MeOH-NH₄OH 95-5-0,5).

- 17CZ 296246 B6

NMR (CDC1₃, 300 MHz)

0,60 (s, CH₃ v poloze 18); cca 4,01 (m, CH₂O a H_n); 5,60 (bd, H₁₆); 6,38 (dd, H₂); 6,45 (d, H₄); 6,70 (d, Hi); cca 6,50 - cca 6,93 (aromatické v poloze 11).

Příklad 13

17alfa-chlor-l lbeta-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol

Rf: 0,10 (CH₂Cl₂-MeOH-NH₄OH 94-5-0,1).

NMR (CDC1₃, 300 MHz)

0,41 (s, CH₃ v poloze 18); cca 3,98 (m, CH₂O a H_n a H₁₇); 6,39 (dd, H₂); 6,48 (H₄); 6,79 (d, H_t); cca 6,48 - cca 6,94 (aromatické v poloze 11).

Příklad 14

17-j od-11 beta-[4-[2-( 1 -piperidinyl)ethoxyfenyl] estra-1,3,5 (10), 16-tetraen-3-ol hydrochlorid teplota tání 260 °C

Rf: 0,33 (AcOEt-TEA 90-10).

NMR (DMSO, 300 MHz)

0,29 (s, CH₃ v poloze 18); 4,02 (bt, H_n); 4,25 (bs, CH₂O); 6,15 (bs, H₁₆); 6,29 (dd, H₂); 6,48 (d, H₄); 6,64 (d, Hi); cca 6,73 - cca 7,01 (aromatické v poloze 11); 8,94 cca 9,78: mobilní H.

Příklad 15

17alfa-fluor-l lbeta-[4-[2-(l-piperidinyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5(10)-trien-3-ol laktát teplota tání = 138 °C

NMR (CDC1₃, 300 MHz)

0,22 (d, CH₃ v poloze 18); cca 3,15 (CH₂N); cca 3,94 (m, CH₂O); cca 3,98 (m, H_n); 4,43 (dd, H₁₇); 6,42 (dd, H₂); 6,78 (d, Hn); cca 6,48 - cca 6,97 (aromatické v poloze 11); 1,36 (d) a 4,09 (m), laktát.

Farmakologické testy

Účinek na proliferaci prsních buněk

Proliferační aktivita molekul se zkoumá ve srovnání s proliferační aktivitou estradiolu na lidské prsní buňky v MCF-7.

K demonstraci agonistického účinku estradiolu a/nebo testovaných molekul se kultivační médium pro udržování buněk (bohatých na růstové faktory a na steroidy) nahradí ochuzeným médiem, postrádajícím mezi jiným steroidy (DMEM doplněné 5% steroidů prostého séra bez fenolové červeně). Buňky podstupují tomuto ochuzení 2 dny před zahájením testu.

-18CZ 296246 B6

Po 7 dnech kultivace v přítomnosti produktů, které se zkoumají, se proliferace buněk vyhodnotí zkouškou DNA. V každém testu účinek estradiolu při ΙΟ¹⁰ M (buněčný růst v přítomnosti estradiolu minus buněčný růst v přítomnosti rozpouštědla) určí 100% agonistická aktivita. Aktivita molekul se vyhodnotí ve srovnání s tímto vnitřním standardem. Molekuly zajišťující buněčný růst identický buněčnému růstu zjištěnému se samotným rozpouštědlem jsou vyhodnoceny jako „inaktivní“, ty, které poskytují růst menší než buněčný získaný z rozpouštědel jsou vyhodnoceny jako „inhibiční“.

	AKTIVITA
Estradiol	agonist
Příklad 1	inaktivní
Příklad 2	inaktivní

Studie produktu na kostní náraz u ovariektomizovaných krysích samic stáří 2 měsíců

Sloučeniny podle vynálezu jsou testovány k určení jejich účinku na kostní hmotu a na aktivitu tvorby a resorpce u modelu ovariektomizovaných krysích samic ve věku 3 měsíců. Zvířata dostávají preventivní ošetření.

Zvířata:

Druh

Kmen

Pohlaví

Hmotnost

Počet zvířat na skupinu krysa Sprague-Dawley samice

250 g až 280 g

Produkty

- Testovaný produkt: Produkt z příkladu 1 • vehikula: kukuřičný olej, 0,5% methylcelulóza • počet podání: jednou/den, 5 dní/týden po dobu 4 týdnů • způsob podání: orálně pro produkt • objemy: 5 ml/kg (p.o.) • doba mezi posledním podáním a usmrcením: 24 hodin • počet podání: 20

- Referenční produkt:

17p~estradiol se podává subkutánně v dávce 0,1 nebo 0,01 mg/kg/den ve směsi oleje z kukuřičných klíčků - benzylalkoholu (99:1, objem/objem) v objemu 0,2 ml/kg.

-19CZ 296246 B6

Experimentální postup

Zvířata

Studie se provádí na krysích samicích, které jsou ovariektomizovány ve věku 3 měsíců. Zvířata jsou udržována v klimatizované místnosti (teplota 20 ± 2 °C) ve skupinách po 4 v boxech. Zvířata dostávají ad libitum, demineralizovanou vodou a lisovanou potravu (pelety AO4CR-10 UAR)

Chirurgie

Krysí samice ve věku 3 měsíců, vážící 250 g se ovariektomizují za anestézie pomocí Imalgenu 1000, v dávce 100 mg/kg intraperitoneálně (i.p.) a v objemu 1 ml/kg. Dostávají také Nebutal (3 mg/kg i.p. v objemu 0,3 ml/kg).

Po laterální incisi se rozříznou vrstvy kůže a svalu. Excise každého vaječníku se provede po podvázání vejcovodu.

„SHAM“ kontrolní krysy se anestetizují za stejných podmínek. Po incisi vrstev kůže a svalu se každý vaječník obnaží a pak se nahradí in šitu.

Ošetření

Účinky produktů se určují při preventivním ošetření. Podávají se ihned po ovariektomii. Zvířata se rozdělí do skupin po 8.

Skupina 1: „SHAM“ kontrolní krysy dostávající vehikulum nebo vehikula.

Skupina 2: „OVX“ kontrolní krysy dostávající vehikulum nebo vehikula.

Skupiny X: „OVX“ krysy dostávající příslušně stanovené dávky produktu nebo produktů, které mají být testovány.

Vzorky krve

Ke konci 4 týdne (trvání studie) se zvířata usmrtí gilotinou. Séra sdružená po odstředění se uskladní při teplotě -20 °C.

Tukové bilance se vyhotoví ze sérových zkoušek celkového cholesterolu, triglyceridů a fosfolipidů v 500 μΐ alikvotu séra. Pokles úrovně sérového cholesterolu se vyjádří procenticky ve vztahu k úrovni zjištěné pro ovariektomizovaná zvířata dostávající pouze rozpouštědlo.

Vzorky orgánů

Po usmrcení zvířat se odstraní následující orgány:

- genitální trakt

Odstraní se dělohy. Ty se zváží. Vzrůst hmotnosti se vyjádří procenticky k hmotnosti dělohy ovariektomizovaných zvířat, která dostávala pouze rozpouštědlo.

- kost

Kostní hmota (BMD neboli bone minerál density) se měří dvojnásobně energetickou X paprskovou dvoufotonovou absorpciometrií (DEXA). Měření se provádí na kostech po excisi a odstranění všech měkkých tkání. BMD se měří na celé kosti a na metafýzní oblasti proximálního konce

-20CZ 296246 B6 pro levé tibio. Tato zóna se definuje jako oblast, která je nejbohatší, pokud jde o trámčitou kost a tudíž je nejcitlivější vůči změnám v objemu kosti a kostní minerální hustoty.

Výsledky se vyjádří procenticky při použití vzorce:

BMD testovaného produktu - BMD OVX _____________________________________________ . 100

SHAM BMD - BMD OVX

	Dávka Cesta mg/kg	Kost tibia BMD %	Děloha Hmotnost %	Cholesterol %
OVX		0
SHAM		100
Estradiol	0,1 s.c.	139	220	-3
Příklad 1	0,3 p.o.	73	41	-51
Estradiol	0,01 s.c.	95	317	-16
Příklad 1	o,1 p.o	57	67	-49
	0,3 p.o.	71	70	-59
	1,0 p.o.	72	93	-61

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 17-Halogenované 19-nor-steroidy obecného vzorce I

I ⁴ (CH₂)_n kde

Ri znamená atom vodíku, skupinu (CH₂)_m-Ar, (CO)-Ar, (CH₂)_m-Alk nebo (CO)-Alk,

R₂ znamená skupinu odvozenou od lineárního nebo rozvětveného, nasyceného nebo nenasyceného uhlovodíku obsahujícího 1 až 6 atomů uhlíku,

X znamená atom halogenu,

Y znamená jednoduchou vazbu, O, NH, S, SO nebo SO₂,

Z znamená atom vodíku nebo atom halogenu, n je 2, 3, 4 nebo 5,

R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají atom vodíku, skupinu (CH₂)_m-Ar, (CH₂)_m'-Het, (CH₂)_m--Alk, nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvoří popřípadě substituovaný monocyklický nebo polycyklický, nasycený nebo nenasycený, aromatický nebo nearomatický heterocyklus se 3 až 15 členy, případně obsahující 1 až 3 další heteroatomy vybrané z kyslíku, síry a dusíku,

Ar znamená karbocyklickou arylovou skupinu obsahující 6 až 18 atomů uhlíku, Het znamená nasycenou nebo nenasycenou aromatickou nebo nearomatickou heterocyklickou skupinu obsahující 1 až 9 atomů uhlíku a 1 až 5 heteroatomů vybraných z kyslíku, dusíku a síry,

Alk znamená zbytek odvozený od nasyceného nebo nenasyceného, lineárního, rozvětveného nebo cyklického nearomatického uhlovodíku obsahujícího 1 až 12 atomů uhlíku, kde Ar, Het nebo Alk jsou substituované nebo nesubstituované,

-22CZ 296246 B6 mam' znamená0, 1, 2nebo 3, přerušovaná čára představuje případnou druhou vazbu a jejich adiční soli s bázemi nebo kyselinami.
2. Steroidy obecného vzorce I, podle nároku 1 a jejich adiční soli, kde X je atom fluoru v alfa poloze a přerušovaná vazba nepředstavuje další vazbu.
3. Steroidy obecného vzorce I, podle nároku 1 nebo 2 a jejich adiční soli, kde Ri je atom vodíku, R₂ je methylová skupina a Z je buď atom vodíku nebo atom chloru, Y znamená atom kyslíku a přerušovaná čára neznamená druhou vazbu.
4. Steroidy obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 a jejich adiční soli, kde buď R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, tvoří jeden z následujících nasycených heterocyklů
5. Steroidy obecného vzorce I, podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 a jejich adiční soli, kde

X je atom fluoru v alfa poloze, Rf je atom vodíku, R₂ je methylová skupina, Y je atom kyslíku, Z je atom vodíku nebo atom chloru, n je rovno 2 nebo 3, buď R₃ a R4 jsou stejné nebo různé a znamenají alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo R₃ a R4 společně s atomem dusíku ke kterému jsou vázány tvoří jeden z následujících nasycených heterocyklů a přerušovaná čára neznamená druhou vazbu.
6. Steroidy podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kterými jsou:

17alfa-fluor-l lbeta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17alfa-fluor-l lbeta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-1,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid, 17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-(l-diethylamino)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17 al fa-fluor-11 beta-[4-[2-( 1 -pyrrolidmyljethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol,

4-chlor-17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17-j od-1 lbeta-[4-[2-( l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5(10), 16-tetraen-3-ol,

-23CZ 296246 B6

17alfa-fluor-llbeta-[4-[2-(4-methyl-l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-l,3,5(10)-trien-3-ol,

17alfa-fluor-l 1 beta-[4-[2-(4-methyl-l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estra-l ,3,5(10)-trien-3-ol hydrochlorid

17alfa-fluor-3-methoxy-11 beta-[4-[2-( l-piperidyl)ethoxy] fenyl]estra-1 ,3,5(10)-trien,

17 alfa-fluor-3-methoxy-11 beta-[4-[2-( 1 -pyrrolidinyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien,

17 alfa-fluor-3-methoxy-l 1 beta-[4-[2-(diethylamino)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien, (1 lbeta)-l 7-chlor-l 1—[4—[2—(l-piperidyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10), 16-tetraen-3-ol,

17 alfa-chlor-11 beta-[4-[2-( 1 -piperidyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol,

17—jod—1 lbeta-[4-[2-(l-piperidyl)ethoxy]fenyl]estral,3,5(10),16-tetraen-3-ol hydrochlorid a

17 alfa-fluor-11 beta-[4-[2-( l-piperidyl)ethoxy] fenyl] estra-1,3,5(10)-trien-3-ol.
7. Způsob přípravy steroidů obecného vzorce I definovaných v nároku 1, jakož i jejich adičních solí s kyselinami nebo bázemi, vyznačující se tím, že

i) sloučenina obecného vzorce II

HO kde

R₂ a Z mají význam uvedený v nároku 1 a RA znamená jednu z následujících skupin

-24CZ 296246 B6 kde Y, n, R₃ a R4 mají význam uvedený v nároku 1 a Hal znamená atom halogenu, se podrobí

a) působení redukčního činidla ketoskupiny v poloze 17 za vzniku sloučeniny obecného vzor5 ce III_a kde R₂ a Z mají význam uvedený v nároku 1 a skupina RA je definována v odstavci i) nároku 7 a potom se

10 b) na získanou sloučeninu obecného vzorce III_a působí halogenačním činidlem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I'_a

-25 CZ 296246 B6 kde R₂ a Z mají význam uvedený v nároku 1 a skupina RA je definována v odstavci i) nároku 7, přičemž před provedením stupně a), po provedení stupně a) nebo po provedení stupně b) se kterákoliv ze sloučenin vzorce II, III_a nebo I'_a podrobí, je-li to žádoucí nebo nutné, jedné nebo více z následujících reakcí

- protekci nebo deprotekci nebo aktivaci kterékoliv z hydroxyskupin,

- acylací nebo alkylaci hydroxyskupiny připojené k aromatickému kruhu pro převedení této hydroxyskupiny na skupinu OR_b kde Rj má význam uvedený v nároku 1,

- působení činidla vzorce HNR3R4, případně ve formě soli, když RA představuje -Ph-Y(CH₂)_n-Hal nebo aktivovanou skupinu -Ph-Y-(CH₂)_n-OH,

- převedení v sůl;

nebo ii) sloučenina obecného vzorce II definovaná v odstavci i) nároku 7 se a) nechá reagovat s hydrazinem za vzniku sloučeniny obecného vzorce IIJ, kde R₂ a Z mají význam uvedený v nároku 1 a skupina RA je definována v odstavci i) nároku 7, a potom se

b) na získanou sloučeninu obecného vzorce III_b působí halogenačním činidlem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I'_b

-26CZ 296246 B6 kde R₂, X a Z mají význam uvedený v nároku 1 a skupina RA je definována v odstavci i) nároku 7, přičemž před provedením stupně a), po provedení stupně a) nebo po provedení stupně b) se kterákoliv ze sloučenin vzorce II, 1¾ nebo I'_b podrobí, je-li to žádoucí nebo nutné, jedné nebo více z následujících reakcí

- protekci nebo deprotekci nebo aktivaci kterékoliv z hydroxyskupin,

- acylaci nebo alkylaci hydroxyskupiny připojené k aromatickému kruhu pro převedení této hydroxyskupiny na skupinu OR_b kde Ri má význam uvedený v nároku 1, působení činidla vzorce HNR3R4, případně ve formě soli, když RA představuje -Ph-Y(CH₂)_n-Hal nebo aktivovanou skupinu-Ph-Y-(CH₂)_n-OH, převedení v sůl.
8. Způsob podle nároku 7 pro přípravu steroidů obecného vzorce I definovaných v nároku 2, kde X znamená atom fluoru v poloze 17 alfa a přerušovaná čára neznamená druhou vazbu, vyznačující se tím, že halogenační činidlo je perfluor-l-butansulfonylfluorid vzorce FSO₂C₄F₉.
9. Steroidy obecného vzorce I, podle nároku 1 a jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami nebo bázemi pro použití jako léčiva.
10. Steroidy obecného vzorce I, podle nároků 2 až 5 a jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami pro použití jako léčiva.
11. Steroidy podle nároku 6 a jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami pro použití jako léčiva.
12. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í se t í m , že obsahuje jedno nebo více léčiv podle nároků 9, 10 nebo 11.
13. Sloučeniny obecného vzorce III_b definované v nároku 7, jako meziprodukty.
14. Použití steroidů obecného vzorce I, podle nároků 1 až 6 pro přípravu léčiva pro substituční hormonální léčbu v menopauze nebo perimenopauze, při níž má estrogen malý nebo nemá žádný vliv na úroveň umístění dělohy.
15. Použití steroidů obecného vzorce I, podle nároků 1 až 6 pro přípravu léčiva pro substituční hormonální léčbu v menopauze nebo perimenopauze se zajištěním prevence nebo léčby osteoporózy.
16. Léčivo definované v nároku 11 pro použití pro prevenci nebo léčbu osteoporózy.
17. Léčivo definované v nároku 11 pro použití pro kardiovaskulární ochranu.