CZ293031B6

CZ293031B6 - N alfa-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylové aminokyseliny

Info

Publication number: CZ293031B6
Application number: CZ19991350A
Authority: CZ
Inventors: Vladimir V. Samukov; Aydar N. Sabirov; Pavel I. Pozdnyakov; Hack-Joo Kim; Young-Deug Kim
Original assignee: Hyundai Pharm. Ind. Co., Ltd.
Priority date: 1996-10-19
Filing date: 1996-10-19
Publication date: 2004-01-14
Also published as: CA2268544A1; US6265590B1; HU222843B1; AU7341196A; WO1998017638A1; HUP9903525A2; RU2157365C2; AU729889B2; JP2001502686A; HUP9903525A3; CZ135099A3; EP0934260A1

Abstract

N.sub..alfa..n.-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylové aminokyseliny označované jako Nsc aminokyseliny obecného vzorce I, kde R.sup.1.n. zastupuje vodíkový atom a R.sup.2.n. zastupuje hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, (4-hydroxy-fenyl)methyl, (4-imidazolil)methyl, (benzyloxy)methyl, 1- (benzyloxy)ethyl, (4- (benzyloxy)fenyl)methyl, (benzyloxykarbonyl)methyl, 2-(benzyloxykarbonyl)ethyl, (benzylthio)methyl, (difenylmethyl)thiomethyl, 4-(benzyloxykarbamido)butyl, 3-guanidinopropyl, 3-(3-(4-methylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, 3-(3-nitroguanidino)propyl, 3-(3-(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, N-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoylmethyl, 2-(N-(bis(4-methoxyfenyl)-methyl)karbamoyl)ethyl, (terc-butyldithio)methyl, 4-(2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbamido)butyl, propyl, butyl, ethyl, 3-(benzyloxykarbamido)propyl nebo 3-(terc-butoxykarbamido)propyl a metody jejich přípravy reakcí výchozí látky s chlormravenčanem. Sloučeniny jsou použitelné pro syntézy peptidů.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových derivátů chráněných aminokyselin použitelných pro syntézy peptidů, jmenovitě, 2V_a-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylové aminokyseliny obecného vzorce I:

o₂n

s—CH.CHt-O—

II ^{2 2}o

NR-CHR—COOH

kde R¹ zastupuje vodíkový atom a R² zastupuje hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, (4-hydroxyfenyl)methyl, (4-imidazolyl)methyl, (benzyloxy)methyl, l-(benzyloxy)ethyl, (4-(benzyloxy)fenyl)methyl, (benzyloxykarbonyl)methyl, 2-<benzyloxykarbonyl)ethyl, (benzylthio)methyl, (difenylmethyl)thiomethyl, 4-(benzyloxykarbamido)butyl, 3-guanidino-propyl, 3-(3-(4-methylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, 3-(3-nitroguanidino)propyl, 3-(3-(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, 7V-(bis-(4-methoxyfenyl)-methyl)karbamoylmethyl, 2-(N-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)-karbamoyl)ethyl, (terc-butyl-dithio)methyl, 4-(2-(4-nitrofenylsulfonyl)-ethoxy-karbamido)butyl, propyl, butyl, ethyl, 3-(benzyloxykarbamido)propyl nebo 3-(terc-butoxykarbamido)propyl. Dále se vynález týká metod jejich přípravy.

Dosavadní stav techniky

7V_a-2-(4-Nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylové aminokyseliny (I) označované jako Nsc-aminokyseliny představují třídu chráněných derivátů slouží JV_a-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylová (Nsc) skupina jako dočasné A^-chránění, které může být selektivně odstraněno po každém kroku prodloužení peptidového řetězce. Nsc-skupina je značně odolná vůči kyseliným činidlům. Odstraňována je podle β-eliminačního mechanismu organickou bází v aprotickém rozpouštědle. Mírné podmínky při odchránění dovolují použít dočasné V_a-Nsc-chránění vpeptidové syntéze spolu s chránícími skupinami, které jsou citlivé na kyselé prostředí. Takovýmito skupinami jsou především široce používané skupiny íerc-butylového nebo benzylového typu. Použití Λ^-Nsc-chránění spolu s jinými skupinami tedy umožňuje tak zvanou „ortogonalitu“ syntetické strategie.

Nedávno byly V_a-Nsc-aminokyseliny, metody pro jejich přípravu a jejich využití při syntéze peptidů v pevné fázi zveřejněny v mezinárodní publikaci číslo WO96/ 25 394. Byla však popsána pouze minimální sada A_a-Nsc-derivátů kódovaných aminokyselin, která je určena pro syntézu peptidů v pevné fázi, s úplným postranním chráněním peptidového řetězce Zerc-butylem nebo slučitelným, na kyselé prostředí citlivým typem.

Proto je žádoucí vyvinout nové A_a-Nsc-aminokyseliny a rozšířit počet jejich derivátů dostupných pro syntézu v pevné fázi. Na druhou stranu použití derivátů jV_a-Nsc-aminokyselin, spolu s dalšími typy postranního chránění (např. benzyl a podobné) nebo bez postranního chránění, může dát novou příležitost pro syntézy peptidů v kapalné fázi.

-1 CZ 293031 B6

Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout nové deriváty N_a-Nsc-aminokyselin, zejména 7V_a-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylové aminokyseliny obecného vzorce I:

O *1 1

CHjCH—O—O—NR—CHR—COOH (I) kde R¹ zastupuje vodíkový atom a R² zastupuje hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, (4-hydroxy5 fenyl)methyl, (4—imidazolyl)methyl, (benzyloxy)methyl, l-(benzyloxy)ethyl, (4-(benzyloxy)fenyl)methyl, (benzyloxykarbonyl)methyl, 2-(benzyloxykarbonyl)ethyl, (benzylthio)methyl, (difenylmethyl)thiomethyl, 4-(benzyloxykarbamido)butyl, 3-guanidino-propyl, 3-(3-(4-methylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, 3-(3-nitroguanidino)propyl, 3-(3-(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl)guanidino)propyl, A^r-(bis(4—methoxyfenyl)-methyl)karbamoylmethyl, 2-(7V-(bisio (4-methoxyfenyl)methyl)-karbamoyl)ethyl, (terc-butyl-dithio)methyl, 4-(2-(4-nitrofenylsulfonyl)-ethoxy-karbamido)butyl, propyl, butyl, ethyl, 3-(benzyloxykarbamido)propyl nebo 3(terc-butoxykarbamido)propyl, které mohou být použity jako deriváty 7V_a-chráněných aminokyselin v syntéze peptidů. Dalším předmětem předkládaného vynálezu jsou metody pro přípravu těchto Y₀-Nsc-aminokyselin (I). Tyto a další předměty vynálezu budou zřejmé z následujícího 15 popisu.

Podstata vynálezu

JVa-Nsc-aminokyseliny (I) předkládaného vynálezu mohou být připraveny z aminokyselin obecného vzorce Π, kde substituenty R¹ a R² jsou stejné jako u vzorce I, reakcí s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethyl-chlormravenčanem (ΠΙ) ve směsném rozpouštědle voda - organické rozpouštědlo v přítomnosti báze a při teplotě od 0 do 40 °C, s výhodou od 0 do 20 °C (Schéma 1).

r’hn—chr^—cooh + (II)

I ( Schéma I)

Chlormravenčan ΠΙ je do reakce použit v množství od 0,5 do 1,5 molámích ekvivalentů, s výhodou od 0,7 do 0,9, vzhledem k aminokyselině. Jako organická složka rozpouštědla může být použito jakékoli aprotické organické rozpouštědlo, které je schopno rozpustit acylační činidlo ΙΠ a je mísitelné s vodou, například acetonitril, DMF, tetrahydrofuran nebo dioxan. Báze může být organická nebo anorganická, například uhličitan sodný nebo draselný, oxid hořečnatý nebo 30 vápenatý, triethylamin nebo N-methylmorfolin.

Podle další metody předkládaného vynálezu jsou aminokyseliny obecného vzorce Π nejprve převedeny na jV,(7-bis(trimethylsilyl)deriváty použitím metod známých v tomto oboru a následně reagovány s ekvivalentním množstvím chlormravenčanu ΙΠ v bezvodém organickém rozpouš35 tědle, například v dichlormethanu, v přítomnosti báze, například terciárního aminu. Po vodné hydrolýze takto získaných trimethylsilylderivátů jsou potřebné aminokyseliny I získány ve volné formě.

Deriváty vzorce I, kde R¹ je vodíkový atom a R² je 2V-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoyl40 ethyl nebo 2-(7V-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoyl)ethyl, mohou být připraveny reakcí známých derivátů I, kde R¹ je vodíkový atom a R² je karbamoylmethyl nebo 2-karbamoylethyl, s bis(4-methoxyfenyl)methanolem v organickém rozpouštědle v přítomnosti silné kyseliny. Jako rozpouštědlo může být použita kyselina octová a jako silná kyselina může být použita kyselina sírová nebo methansulfonová.

-2CZ 293031 B6

Derivát vzorce I, kde R¹ je vodíkový atom a R² je 3-guanidinopropyl (AJ-Nsc-Arg-OH), může být připraven reakcí argininu s 2-(4-nitrofenylthio)ethylchlormravenčanem ve vodě v přítomnosti hydrogenuhličitanu sodného. Výsledný A₀-(2-(4-nitrofenylthio)ethoxykarbonyl)arginin je následně oxidován na požadovaný A_a-Nsc-arginin peroxidem vodíku v organickém rozpouštědle, například v ethanolu nebo kyselině octové.

Derivát vzorce I, kde R¹ je vodíkový atom a R² je (2-imidazolyl)methyl (V_a-Nsc-His-OH) může být připraven z jV_a-Nsc-7V_(m-chráněného histidinového derivátu selektivním odchráněním imidazolového kruhu, například selektivní detritylací známého V_a-Nsc-V_im-(trifenylmethyl)histidinu.

Z molekulového vzorce I je zřejmé, že sloučeniny I mají centrum chirality na a-uhlíkovém atomu. Protože α-uhlíkový atom nepodléhá při přípravě těchto sloučenin (I) žádným reakcím, je konfigurace tohoto chirálního centra ve výchozí aminokyselině II zachována i ve výsledném Nsc-derivátu I. Je tedy zřejmé, že metody předkládaného vynálezu mohou být použity pro přípravu AJ-Nsc-aminokyselin I z aminokyselin Π v jakékoli opticky čisté formě (L nebo D) stejně dobře jako pro racemické.

Substituenty R¹ a R² v derivátem obecného vzorce I odpovídají v předkládaném vynálezu strukturám postranních řetězců známých α-aminokyselin obsahujících nebo neobsahujících chránící skupiny známé v této oblasti (Tabulka 1).

Tabulka 1 - Substituenty R¹ a R² pro sloučeniny I

v c.	R¹	R²	Aminokyselina	Zkratka
1-1	H	Hydroxymethyl	Scrin	Nsc-Ser-OH
1-2	H	1 -Hydroxyethyi	Threonin	Nsc-Thr-OH
1-3	11	(4-Hydroxyfenyl)methyl	Tyrosin	Nsc-Tyr-OH
1-4	H	(4-1 m idazo I y l)meth y 1	Histidin	Nsc-I lis-OH
1-5	H	(tícnzyloxy)methyl	O-Bcnzylserin	Nsc-Ser(Bzl)-OH
1-6	H	1 -(Benzyloxy)ethy 1	(7-Benzyllhreonin	Nsc-Thr(Bzl)-QH
1-7	H	4-(Bcnzyloxy)fenylmethyl	<J-Benzyltyrpsin	Nsc-Tyr(Bzl)-OH
1-8	H	(BcnzYloxykarbonyi)methyl	β-Benzylestcr kyseliny asparagové	Nšc-Asp(OBzl)-OH
1-9	H	2-(Benzyloxykarboný))- cthyl	y-Bcnzylester kyseliny glutamové	Ňsc-Glu(OBzl)-OH
1-10	11	(Bcnzylthio)methyl	S-Benzylcystcin	Nsc-Cys(Bzl)-OH
1-11	H	(Difenylmcthyl)ihiomethyl	^-(DifenylmethyJjcystein	Nsc-Cys(Dpm)-OH

-3CZ 293031 B6

Tabulka I - pokračování

č. Ř'	R²	Aminokyselina	Zkratka
1-12	H	4-(Benzyloxykarbamido)butyl	V_c-(Benzyloxykárbonyl)lysin	Nsc-Lys(Z)-OH
1-13	H	3-Guanidinopropyl	Arginin	Nsc-Arg-OH
1-14	H	3-(3-(4-methylfenyl)sulfonyl)guanidinopropyl	//'-Toluensulfonylargiuin	Nsc-Arg(Tos)-OH
1-15	H	3 -(3-Nitroguanid ino)propyl	A^-Nitroarginin	Nsc-Arg(NO₂)-0II
1-16	II	3-(3-(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl)guanidino)propyl	A^/G-(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl)arginin	Nsc-Arg(Mtr)-OH
1-17	H	A^ř-(Bis(4-methoxyfcnyl)methyl)karbamoyhnethyl	A/(i-(Bis(4-methoxyrenyl)methyl)asparagin	Nsc-Asn(Mbh)-OH
1-18	H	2-(JV-(Bis( 4-methoxyfenyl)methyl)karbamoyl)ethyl	N_r-( Bis(4-methoxyfenyl)methyl)glutamin	Nsc-Gln(Mbh)-OH
1-19	II	(řerc-hutyldithio)methyl	S-(terc- Butylthio)cystein	Nsc-Cys(StBu)-OH
1-20	II	4-(2-(4-Nitrofenylsulfonyl)cthoxykarbamido)butyl	M-(2-(4-Nitrofenylsulfonyljethoxyfcarbony 1) ly sin	Nsc-Lys(Nsc)-OIl
1-21	11	Propyl	Norvalin	Nsc-Nva-OH
1-22	II	Butyl	Norleucin	Nsc-Nle-OH
1-23	II	Ethyl	tx-Aminobutanová kyselina	Nsc-Abu-OH
1-24	II	3-(bcnzyloxykarbamido)propyl	Afo-(Benzyloxykarbonyl)omitin	Nsc-Om(Z)-OH
1-25	H	3-(terc-Butoxykarbamidojpropyl	N_t-řerc-Butoxykarbonyb Omitin	Nsc-Om(Boc)-OH

Společně s A^-Nsc-aminokyseliny zveřejněnými v mezinárodní publikaci číslo WO96/ 25 394 mohou být sloučeniny vzorce I uvedené v Tabulce 1 použity pro širokou škálu taktických přístu5 pů syntézy peptidů nejen v pevné fázi, ale také v roztoku. Použitím A_a-Nsc-chránění je nyní možno na bázi terc-butylového, benzylového nebo směsného typu postranního chránění řetězců, vyvinout syntetická schémata přípravy peptidů v roztoku, a také použít taktik minimálního postranního chránění řetězce.

ío Předkládaný vynález je tedy přídavkem a pokračováním výše zmíněné mezinárodní publikace } číslo WO96/25 394.

I Vynález bude nyní popsán pomocí příklad, které jsou uvedeny jako ukázka a nejsou myšleny jako limitující. Pokud není uvedeno jinak, mají všechny aminokyseliny v následujícím popisu 15 L-konfiguraci.

-4CZ 293031 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

V_a-Nsc-O-Benzyltyrosin (1-7)

8,15 g O-benzyltyrosinu a 7,7 g uhličitanu draselného bylo rozpuštěno ve 150 ml směsi voda - dioxan (3:1, v/v) a ochlazeno v ledové lázni. Poté byl za míchání během 15 min po kapkách přidán roztok 7,5 g 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethyl-chlormravenčanu (ΙΠ) v 70 ml dioxanu. Chladicí lázeň byla odstraněna a směs byla míchána dalších 20 min. Pak byla za sníženého tlaku odpařena na ca. 100 ml a převedena do dělicí nálevky. Ke směsi bylo přidáno 100 ml vody a výsledný roztok byl extrahován 2krát 50 ml ethylacetátu. Vodná vrstva byla odstraněna a za chlazení ledovou lázní okyselena na pH 2 kyselinou sírovou (40%). Pak byla extrahována 3krát 80 ml ethylacetátu. Spojené extrakty byly sušeny nad bezvodým síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Rekrystalizací odparku ze směsi ethylacetát - hexan byl získán požadovaný produkt 1-7 ve formě bílého krystalického prášku (70 %). Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

Příklad 2

AJ-Nsc-Threonin (1-2)

3,58 g threoninu a 100 ml bezvodého dichlormethanu byly vneseny do 250ml baňky s kulatým dnem, opatřené zpětným chladičem a přikapávací nálevkou. K této suspenzi bylo za intenzivního míchání přidáno 9,7 ml chlortrimethylsilanu a směs byla zahřívána k varu 1 h. Výsledný roztok byl ochlazen v ledové lázni a za míchání bylo přidáno 9,0 ml triethylaminu a 9,0 g chlormravenčanu ΙΠ. Směs byla míchána 20 min v ledové lázni a následně 1,5 h při teplotě místnosti. Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odpařeno a odparek byl rozdělen mezi 200 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva byla oddělena, promyta 50 ml etheru a okyselena na pH 2 kyselinou chlorovodíkovou (IN) a extrahována 3krát 70 ml ethylacetátu. Spojené extrakty byly sušeny bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku odpařeny. Triturace zbytku petroletherem poskytla požadovaný produkt 1-2 ve formě bílého prášku (75 %). Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

Příklad 3 jVa-N sc-VXBenzyloxykarbonyljomitin (1-24)

8,0 g AX-ýbenzyloxykarbonyOomitinu a 120 ml bezvodého dichlormethanu bylo vloženo do 250ml baňky s kulatým dnem opatřené zpětným chladičem a přikapávací nálevkou. K této směsi bylo za intenzivního míchání přidáno 12,7 ml triethylaminu a následně 7 ml chlortrimethylsilanu, ' a směs byla zahřívána k varu 1,5 h. Reakční směs pak byla ochlazena ledovou lázní a přidáno do ní jednorázově 9,0 g chlormravenčanu ΙΠ. Následně byla směs míchána při teplotě místnosti 1,5 h. Poté bylo rozpouštědlo za sníženého tlaku odpařeno a odparek byl rozdělen mezi 250 ml ethylacetátu a 250 ml 2,5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva byla oddělena, promyta 50 ml etheru a okyselena na pH 2 kyselinou chlorovodíkovou (IN) a extrahována 2krát 100 ml ethylacetátu. Spojené extrakty byly sušeny bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku odpařeny. Rekrystalizací odparku ze směsi ethylacetát - hexan byl získán požadovaný produkt 1-24 ve formě bílého prášku (84 %). Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

-5CZ 293031 B6

Příklad 4

N_a-Nsc-jV-(Bis(4-methoxyfenyl)methyl)asparagin (1-17)

3,89 g #_o-Nsc-asparaginu a 2,6 g bis(4-dimethoxyfenyl)methanolu bylo rozpuštěno v 25 ml ledové kyseliny octové. K tomuto roztoku bylo přidáno 0,4 ml kyseliny methansulfonové a směs byla ponechána při teplotě místnosti přes noc. Výsledný roztok byl poté za míchání vlit do 100 ml ledově studené vody a vzniklá sraženina byla odfiltrována, promyta vodou a následně etherem. Surový produkt byl rozpuštěn v 10 ml horkého DMF, přefiltrován a vysrážen etherem, ío Sraženina byla odfiltrována, promyta etherem a vysušena ve vakuu. Takto byla získána požadovaná látka 1-17 jako krystalický prášek (80 %). Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

Příklad 5

TVa-Nsc-arginin (1-13)

K roztoku 1,7 g hydrogenuhličitanu sodného a 4,22 g hydrochloridu argininu v 25 ml vody, míchaného při teplotě místnosti bylo během 30 min přidáno v pěti stejně velkých množstvích 20 5,74 g 2-(4-nitrofenylthio)ethyl-chlormravenčanu. Poté bylo v míchání pokračováno další 2 h.

Hodnota pH směsi byla upravena na pH 8,5 koncentrovaným roztokem amoniaku a udržována při 4 °C po dobu 3 h. Vyloučená sraženina byla odstraněna, promyta ledově studenou vodou, vysušena na filtru sáním a rozpuštěna v 30 ml kyseliny octové. K tomuto roztoku byly přidány 4 ml peroxidu vodíku (34%) a směs ponechána na 30 h při teplotě místnosti. Poté byla směs 25 odpařena do sucha. Odparek byl triturován ethylacetátem, zfiltrován a vysušen na vzduchu. Takto byla získána požadovaná látka 1-13 (88 %). Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

Příklad 6

7V„-Nsc-Histidin (1-4)

6,6 g V_a-Nsc-V_im-(trifenylmethyl)histidinu bylo rozpuštěno v 30 ml 90% vodné kyseliny octové a udržováno ve varu 30 min. Po ochlazení byla sraženina odfiltrována a filtrát odpařen. Odparek 35 byl triturován etherem a odfiltrován. Takto byla získána látka 1—4 ve výtěžku 95 %. Charakterizace viz tabulka 2 (příklad 7).

Příklad 7

Vlastnosti V_a-Nsc-aminokyselin I

V Tabulce 2 jsou sloučeniny vzorce I, které byly připraveny použitím uvedených metod, které jsou detailně popsány v Příkladech 1 až 6. Čísla ve sloupci „Metoda“ odpovídají číslům příkladů, f 45 kde byly metody přípravy detailně popsány. Hodnoty retenčního faktoru R_f jsou uvedeny po tenkovrstvé chromatografické desky Alufolien Keselgel 60 F254 (Měrek, Darmstadt, Německo); • byla použita eluční soustava A, tj. chloroform - methanol - kyselina octová v poměru 95:5:3 a eluční soustava B, tj. benzen - aceton - kyselina octová v poměru 100:50:3; skvrny byly detekovány UV-absorbancí a/nebo reakcí s ninhydrinem. Hmotnost molekulových iontů (M+H)⁺50 byly změřeny použitím hmotnostního spektrometru MS-BC-1 TOF (time-of-light) s Cf²⁵² radiací vyvolanou desorpcí (Electrom SPA, Sumy, Ukrajina).

-6CZ 293031 B6

Tabulka 2 - Vlastnosti A^-Nsc-aminokyselin I

č.	Látka	Metoda	RKA)	R.(B)	Sumární Molekulový ion (M+H)⁺vzorec Vypočteno Nalezeno
1-1	Nsc-Ser-OH	2	0,40	0,30	C12H14Ň2O9S	363,32	363,6
1-2	Nsc-Thr-OII	2	0,42	0,35	CisHieNjOaS	377,35	377,6
1-3	Nsc-Tyr-OH	2	0,40	0,37	C18H18N2O9S	439,44	439,9
1-4	Nsc-His-OH	6	0,15	0,10	C,₅H₁₆N<O₈S	413,40	413,1
1-5	Nsc-Ser(Bzl)-OH	1,3	0,70	0,55	C19H20N2O9Š	453,46	453,8
1-6	Nsc-Thr(I3zl)-OH	3	0,70	0,55	C20H22N2O9S	467,49	467,9
1-7	Nsc-Tyr(Bzl)-OH	1,3	0,75	0,55	C25H24N2O9S	529,57	530,1
1-8	Nsc-Asp(OBzl)-OH	3	0,60	0,45	C20H20N2O10S	481,47	480,9
1-9	Nsc-Glu(OBzl)-OH	3	0,62	0,43	C21H22N2O10S	459,50	495,1
1-1-0	Nsc-Cys(Bzl)-OH	3	0,75	0,60	C19H20N2O8S2	469,53	469,3
1-11	Nsc-Cys(Dpm)-OH	1,3	0,75	0,70	C25H24N2OaS2	545,63	545,2
1-12	Nsc-Lys(Z)-OH	3	0,65	0,50	C23H27N3O10S	538,58	538,3
1-13	Nsc-Arg-OH	5	0,10	0,05	CisHíiNsObS	432,45	432,8
1-14	Nsc-Arg(T os)-Ol J	1,2	0,35	0,30	C22H27N5O10S2	586,64	586,9
1-15	Nsc-Arg(NO₂)-OH	2	0,25	0,15	C15H20N6O10S	477,45	477,1
1-16	Nsc-Arg(Mtr)-OH	3	0,43	0,35	C25H33N5O10S2	628,73	629,4
1-17	Nsc-Asn(Mbh)-OH	4	0,55	0,38	C28H29ŇI3OH S	616,65	616,1
1-18	Nsc-Gln(Mbh)-OH	4	0,58	0,33	C29H31N3O11S	630,68	630,2
1-19	Nsc-Cys(StBu)-OII	3	0,60	0,45	CieH22N?OaS3	467,57	567,2
1-20	N sc-Lys(Nsc)-OH	3	0,55	0.40	C24H28N4O14S2	661,66	662,1
1-21	Nsc-Nva-OII	2	0,65	0,50	C14H18N2O8S	375,39	375,6
1-22	Nsc-NIe-OH	2	0,65	0,50	C15H20N2QBS	389,42	389,6
1-23	Nsc-Abu-OH	2	0,60	0,47	C13H16N2OBS	375,40	375,8
1-24	Nsc-Om(Z)-OH	3	0,62	0,47	C22H25N3O10S	533,55	534,0
1-25	Nsc-Om(Boc)-OIl	3	0,65	0,43	C19H27N3O10S	490,53	491,0

Průmyslová využitelnost

Použití jVa-Nsc-derivátů aminokyselin rozšiřuje možnosti syntézy peptidů, zejména v kombinaci s využitím dalšího postranního chránění řetězce chránícími skupinami běžně používaných v tomto oboru. TVa-Nsc-deriváty aminokyselin jsou použitelné jak pro syntézu peptidů v pevné fázi, tak ve fázi kapalné.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. N_a-2-{4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylová aminokyselina obecného vzorce I ch₂ch-o

NR—CHR—COOH (υ, kde R] je atom vodíku a R₂ znamená hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, 4-hydroxybenzyl, (4imidazolyl)methyl, benzyloxymethyl, 1-benzyloxyethyl, 4-(benzyloxy)benzyl, (benzyloxykarbonyl)methyl, 2-(benzyloxykarbonyl)ethyl, (S)-benzylthiomethyl, (S)-(difenylmethyl)thiomethyl, 4-(benzyloxykarbamido)butyl, 3-guanidinopropyl, 3-(3-toluensulfonyl)guanidinoío propyl, 3-(3-nitro)guanidinopropyl, 3-(3-(4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzensulfonyl)]guanidino)propyl, 7V-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoylmethyl, 2-(V-(bis(4—methoxyfenyl)methyl)karbamoyl)ethyl), (5)-(/erc-butyldithio)methyl, 4-(2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbamido)butyl, propyl, butyl, ethyl, 3-(benzyloxykarbamido)propyl nebo 3-(/erc-butoxykarbamido)propyl.
2. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m , že aminokyselina obecného vzorce Π

HNRj-CHRj-COOH(Π), kde R] a R₂ jsou definovány v nároku 1, reaguje s 0,5 až 1,5 molámími ekvivalenty 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethyl-chlormravenčanu vzorce ΙΠ

NO₂ ,---- Oo ¹¹II

Λ Λ—S—CH₂CH₂-O—C—Cl v y ii \/ ₀ (lil), ve směsném vodno-organickém rozpouštědle v přítomnosti báze při teplotě 0 až 40 °C.
3. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m , že

a) aminokyselina obecného vzorce Π,

HNR₁-CHR₂-COOH(II), kde R) a R₂ jsou definovány v nároku 1, se převede na svůj N, O-(trimethylsilyl)derivát a

I 35 b) tento N, O-(trimethylsilyl)derivát reaguje s 2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethyl-chlormravenčanem vzorce ΙΠ _/=r\ OO

NO₂—Z \-S-CH₂CH₂-O-C-CI (III), \/ v bezvodém organickém rozpouštědle v přítomnosti báze s následnou hydrolýzou.

-8CZ 293031 B6
4. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ri je atom vodíku a R₂je <V-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoylmethyl nebo 2-(jV-(bis(4-methoxyfenyl)methyl)karbamoyl)ethyl, vyznačující se t í m , že 7V„-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonylasparagin nebo JV_a-2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl-glutamin reaguje s bis(4-methoxyfenyl)methanolem v organickém rozpouštědle v přítomnosti kyseliny.
5. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ri je atom vodíku a R₂ je 3-guanidinopropyl, vyznačující se tím, že arginin reaguje s 2-(4-nitrofenylthio)ethyl-chlormravenčanem ve vodě v přítomnosti hydrogenuhličitanu sodného, a takto vzniklý N_a(2-(4-nitrofenylthio)ethoxykarbonyl)arginin se následně oxiduje peroxidem vodíku v organic- I kém rozpouštědle.
6. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R] je atom vodíku a R₂je (4-imidazolyl)methyl, vyznačující se tím, že W_a-(2-(4-nitrofenylsulfonyl)ethoxykarbonyl)-M_m-(trifenylmethyl)histidin reaguje s kyselinou.