CZ291768B6 - Deriváty 10,13,15-trioxatricyklo [9.2.1.1.9.6] pentadekanonu, způsob jejich přípravy a léčiva, obsahující tyto sloučeniny - Google Patents

Abstract

Deriv ty N-desmetyl-N-izopropyl-erytromycinu A obecn ho vzorce I vhodn k l en poruch motility v gastrointestin ln m traktu. Produkty se z skaj kysele katalyzovanou intramolekul rn spirocyklizac v²choz l tky p°i teplot m stnosti.\

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nových sloučenin [(1'R),2R,3S,4S,5R,6R,9R,11R,12R,14]-11-(1'hydroxypropyl)-3-[(2,6-dideoxy-3-C-metyl-3-0-metyl-a-L-ribo-hexopyranosyl)-oxy]-5[(3,4,6-trideoxy-3-amino-{3-D-xylohexopyranosyl)-2,4,6,8,11,14-hexametyl-l 0,13,15-trioxatricyklo[9.2.1.1.⁹⁶]-pentadekan-l-onu, substituovaných na atomu dusíku, s agonistickými vlastnostmi motilinu a jejich adičních solí kyselin, jakož i farmaceutických přípravků, obsahujících tyto sloučeniny a způsobu přípravy těchto sloučenin. Sloučeniny podle vynálezu jsou N-desmetyl-N-izopropyl-spiroacetalové deriváty erytromycinu A se zmenšenými kruhy.

Dosavadní stav techniky

Antibiotikum erytromycin A má také, jak známo, vedle svých antibiotických účinků, pro antibiotika nežádoucí gastrointestinální vedlejší účinky, mimo jiné silný vzrůst kontrakční aktivity v oblasti trávicího ústrojí se žaludečními a střevními křečemi, nevolností, zvracením a průjmem.

Existovalo vícero pokusů modifikovat erytromycin A tak, aby se získaly deriváty, u nichž se prakticky nevyskytuje žádný antibiotický účinek, avšak je zachován účinek, ovlivňující motilitu gastrointestinálního traktu. Z patentové přihlášky EP 0 550 895 jsou známy deriváty N-desmetyl-N-izopropyl-erytromycinu A se zmenšenými kruhy, s gastrointestinálně účinnými agonistickými vlastnostmi motilinu.

Podstata vynálezu

Předložený vynález si klade za úlohu vyvinout nové orálně účinné deriváty erytromycinu A se zmenšenými kruhy bez antibiotického účinku a vlastnostmi se zlepšeným účinným profilem, příznivě ovlivňujícími motilitu gastrointestinálního traktu.

Bylo vynalezeno, že nové N-desmetyl-N-izopropyl-spiroacetalové deriváty eiytromycinu A se zmenšenými kruhy, mají selektivní agonistické vlastnosti motilinu a příznivým způsobem stimulují motilitu gastrointestinálního traktu a projevují zesilující účinky na tonus spodního jícnového svěrače a na tonus žaludu. Na základě svého účinného profilu se hodí látky podle vynálezu k léčení poruch motility v gastrointestinálním traktu a vyznačují se přitom dobrou snášenlivostí, dobrou orální účinností a dobrou stabilitou.

Předložený vynález se proto týká nových derivátů [(l'R),2R,3S,4S,5R,6R,9R,l 1R,12R,14R]-11(1 '-hydroxypropyl)-2,4,6,8,11,14-hexametyl-l 0,13,15-trioxatricyklo-[9.2.1.1,^{9 6}]-pentadekan1-onu obecného vzorce I

-1 CZ 291768 B6 (I),

kde R¹ znamená metyl nebo vodík a jejich stabilních a fyziologicky přijatelných adičních solí s kyselinami.

Příznivou se ukazuje zejména sloučenina vzorce I, kde R¹ znamená metyl.

Sloučeniny vzorce I lze získat tím, že se známým způsobem sloučeniny vzorce I, kde R¹ má shora uvedený význam, působením kyseliny převedou na deriváty [2R (2'R,3'R),3S,4S,5R,6R,10R,l 1RJ-1 l-(2',3'-dihydroxypent-2'-yl)-2,4,6,8,10-pentametyl-12,13-dioxobicyklo [8.2.1]tridec-8-en-l-onu obecného vzorce Π

a v žádoucím případě se zavede do získané sloučeniny vzorce I, kde R¹ znamená vodík, metylový zbytek nebo se ze získané sloučeniny, kde R¹ znamená metyl, metylový zbytek odštěpí se a v žádoucím případě se převedou volné sloučeniny vzorce I na své stabilní adiční soli s kyselinami nebo se adiční soli s kyselinami převedou na volné sloučeniny vzorce I.

Sloučeniny vzorce I se získají protony katalyzovanou intramolekulámí spirocyklizací sloučenin vzorce Π. Spirocyklizace probíhá známým způsobem působením kyselin, výhodně ve vodném médiu, při nízkých hodnotách pH, například hodnotách pH nanejvýš 3, účelně při pH 1,5 až 3. Jako kyseliny mohou být vůči ostatních funkčním skupinám sloučenin vzorců I a Π použity inertní, ve vodě rozpustné anorganické nebo organické kyseliny. Je účelné zabránit snížení hodnoty pH pod 1, čímž nedochází k žádným vedlejším hydrolyzačním reakcím. Vhodnými reakčními médii jsou např. vodné roztoky solí kyselin nebo vodný roztok kyseliny octové. Výhodně probíhá cyklizační reakce ve vodném roztoku kyseliny solné při pokojové teplotě.

Získaná sloučenina vzorce I, kde R¹ znamená vodík, může být alkylována známým způsobem na odpovídající sloučeninu sN-metylem. Alkylace může probíhat známým způsobem reakcí s metylhalogenidem nebo jako reduktivní alkylace reakcí s formaldehydem za redukčních

-2CZ 291768 B6 podmínek a může být provedená, například při níže uvedených podmínkách, k alkylaci sloučenin vzorce ΙΠ.

Ze sloučenin vzorce I, kde R¹ znamená metyl, může být v žádoucím případě dodatečně odštěpen metylový zbytek. Demetylace může probíhat známým způsobem působením halogenu, zejména jodu, anebo bromu, na sloučeninu v inertním rozpouštědle za přítomnosti vhodné zásady. Jako zásady se hodí například alkoholáty alkalických kovů, hydroxidy alkalických kovů a soli alkalických kovů slabých organických kyselin.

Sloučeniny vzorce I mohou být známým způsobem z reakční směsi izolovány a čištěny. Adiční soli kyselin mohou být převedeny známým způsobem na volné zásady a tyto se mohou v žádoucím případě převést známým způsobem na farmakologicky únosné adiční soli kyselin. K zabránění hydrolyzačních reakcí je účelné použít k tvorbě soli pouze ekvivalentní množství kyselin.

Jako farmakologicky přijatelné adiční soli kyselin sloučenin vzorce I se hodí například jejich soli anorganických kyselin, např. kyseliny uhličité, halogenvodíkových kyselin, zejména kyseliny chlorovodíkové nebo organických kyselin, například nižších alifatických mono- nebo dikarbonových kyselin, jako kyselina maleinová, fumarová, mléčná, vinná nebo octová.

Na chirálním centrum, vzniklém spirocyklizační reakcí na uhlíkovém atomu v pozici 8, se mohou vyskytovat 2 epimemí formy, takže jsou možné dva izomery sloučeniny vzorce I. Předložený vynález obsahuje nejen směs izomerů, ale i čisté izomemí sloučeniny vzorce I. Při cyklizační reakci vzniká směs izomerů. Čisté izomery mohou být získány ze směsi známým způsobem obvyklými dělicími postupy, například chromatografickým dělením.

Výchozí sloučeniny vzorce Π jsou známy z patentové přihlášky EP 0 550 895 a mohou být připraveny způsobem v ní popsaným. Tak mohou být sloučeniny vzorce Π získány tím, že se do sloučenin obecného vzorce ΙΠ

H-.C

R

I

N-H

CH, kde R¹ má shora uvedená význam, zavede známým způsobem izopropylový zbytek.

K zavedení izopropylového zbytku mohou být sloučeniny vzorce ΙΠ alkylovány známým způsobem. Alkylace se výhodně provádí známým způsobem jako reduktivní, chemickou reakcí sloučeniny vzorce ΙΠ s acetonem za redukčních podmínek. Sloučeniny vzorce HI mohou reagovat například s acetonem za přítomnosti komplexních redukčních činidel, například borhydridových sloučenin, jako kyanoborhydrid sodný, acetoxyborhydrid sodný nebo borhydrid sodný. V žádoucím případě může probíhat alkylace, zejména té sloučeniny vzorce ΙΠ, kde R¹ znamená metyl, také reakcí s izopropylhalogenidem, zejména izopropyljodidem nebo izopropylsulfátem nebo s esterem kyseliny izopropylsulfonové. Alkylace se účelně provádí v organickém rozpouštědle za inertních reakčním podmínek. K reduktivním alkylaci může sloužit jako rozpouštěd

-3CZ 291768 B6 lo například přebytek acetóňú. Ďálě je vhodným rozpouštědlem cyklický éter, jako tetrahydrofuran nebo dioxan, aromatické uhlovodíky, jako toluen nebo nižší alkoholy. Alkylace může probíhat při teplotách v rozmezí mezi pokojovou teplotou a teplotou bodu varu rozpouštědla.

Při alkylaci s izopropylderivátem, například izopropylhalogenidem, jako izopropyljodid, se pracuje účelně za přítomnosti zásady, jako například s uhličitanem sodným nebo terciárním organickým aminem.

V žádoucím případě se může do získané sloučeniny vzorce R¹ znamená vodík, zavést metylový zbytek R¹ nebo se ze získané sloučeniny, kde R¹ znamená metyl, metylový zbytek R¹ odštěpí. Takovéto metylace nebo demetylace mohou probíhat známým způsobem, například za podmínek, popsaných při zavádění nebo odštěpení metylové skupiny do nebo ze sloučeniny vzorce I.

Sloučeniny vzorce ΙΠ mohou být získány známými metodami, zacházeje z erytromycinu A vzorce IV

(IV).

Erytromycin A tak může být nejdříve známým způsobem, například podle postupu, známého z patentu DE-OS 21 54 032, mono- a didemetylován, reakcí s halogenem, výhodně jodem, v inertním rozpouštědle za přítomnosti vhodné zásady. Jako zásady se hodí například alkoholáty alkalických kovů, hydroxidy alkalických kovů, uhličitany alkalických kovů a soli alkalických kovů slabých karbonových kyselin, jako například acetáty nebo propionáty alkalických kovů. Může být použito 1 až lOnásobku ekvivalentního množství halogenu, vztaženo na množství sloučeniny erytromycinu, kterou je zapotřebí demetylovat. Pro demetylaci se používá výhodně hydroxidů alkalických kovů anebo jejich solí. Množství zásady se zvolí výhodně tak, aby byla zajištěna hodnota pH v rozmezí 5 až 9. Vhodným rozpouštědlem je metanol, cyklický éter, jako dioxan nebo tetrahydrofuran, dimetylformamid nebo směsi známých rozpouštědel s vodou. Monodimetylace se provádí účelně při teplotách mezi pokojovou teplotou až 50 °C.

Reakce může být uskutečněna ozářením světlem, např. světlem o vlnové délce vyšší než 290 nm ze rtuťové nízkotlakové lampy s křemenným filtrem nebo žáruvzdorným sklem, (např. Prex^R). Demetylace se výhodně provádí v suchém nízkém alkoholu, např. metanolu, za přítomnosti příslušných alkoholátů alkalických kovů při teplotách mezi 0 až 10 °C. V žádoucím případě lze při přípravě didemetylovaného produktu vycházet rovněž z monodimetylovaného produktu.

Mono- nebo didemetylovaný erytromycin A může být známým způsobem převeden působením mírné kyseliny na příslušný mono- nebo dimetylovaný 8,9-anhydroerytromycin-A-6,9-hemiketal obecného vzorce V

-4CZ 291768 B6 (V),

kde R¹ znamená vodík nebo metyl. Tvorba hemiketalu může probíhat například působením organické kyseliny, jako kyselina citrónová, mravenčí nebo octová nebo zředěné minerální kyseliny při teplotách mezi pokojovou teplotou a cca 50 °C.

Ve sloučeninách vzorce V může být provedeno známým způsobem, intramolekulámí translaktonizací, zmenšení kruhu ze 14členného laktonového kruhu skeletu erytromycinu na 12členný laktonový kruh, za tvorby příslušných sloučenin vzorce ΙΠ. Ktomu se sloučeniny vzorce V zahřívají známým způsobem v nižším alkoholu, za přítomnosti zásady, například na teplotu mezi 40 °C až 70 °C, výhodně na bod varu reakční směsi. Jako zásady jsou vhodné zejména uhličitany alkalických kovů nebo také organické zásady, jako terciární aminy, zejména terciární nízkoalkylované aminy. Při tomto zmenšení kruhu se nemění konfigurace chirálních center.

Nové sloučeniny vzorce I a jejich fyziologicky únosné adiční soli kyselin mají zajímavé farmakologické vlastnosti, zejména agonistické vlastnosti motilinu, stimulující motilitu gastrointestinálního traktu. Přitom se vyznačují příznivým účinným profilem s dobrou orální účinností. Jsou zbaveny antibiotických účinků a mají vysokou selektivní afinitu kreceptorům motilinu, zatímco vagonisticky účinném dávkovém pásmu motilinu neprojevují prakticky žádnou relevantní afinitu k ostatním receptorům v gastrointestinálním traktu, jako receptory adrenalin, acetylcholin, histamin, dopamin nebo serotonin. Tyto sloučeniny vykazují překvapivě dobrou jatemí snášenlivost, která je činí vhodnými pro jejich užívání na delší dobu.

Aby se zabezpečilo regulované trávení přijaté potravy, působí ve zdravém stavu autonomní nervový systém a hormony gastrointestinálního traktu společně, aby se vytvořila kontrakční činnost gastrointestinálního traktu, nejen přímo po požití potravy, nýbrž také při prázdném gastrointestinálním traktu. Motilin je známý gastrointestinální peptidový hormon, který stimuluje motilitu gastrointestinálního traktu a indukuje koordinovanou motilitu v celém gastrointestinálním traktu v lačném stavu, jakož i po požití potravy.

Sloučeniny vzorce I projevují fyziologické účinky motilinu tím, že se stávají účinným jako agonisté pro receptory motilinu. Sloučeniny vzorce I tak projevují vynikající stimulující účinky v trávicím ústrojí a na spodním jícnovém svěrači. Způsobují především urychlení vyprázdnění žaludku, zvýšení žaludečního tonusu a dlouhotrvající zvýšení klidu tonusu jícnového svěrače. Na základě svého účinného profilu motilinu se hodí látky k léčení nemocných stavů, které jsou spojeny s poruchami motility v gastrointestinálním traktu anebo vracení kaše potravy ze žaludku do jícnu. Sloučeniny vzorce I se doporučují například při gastroparitidě různého původu, poruchách tonusu žaludku, poruchách vyprazdňování žaludku a gastroezofagálního refluxu, dyspepsii a postoperačních poruchách motility.

-5CZ 291768 B6

Příklady provedení vynálezu

Gastrointestinálně účinné vlastnosti sloučenin vzorce I se dají prokázat farmakologickými zkušebními metodami ve zkumavce i živém těle:

Popis testovacích metod.

1. Stanovení schopnosti zkušebních látek vázat receptory motilinu.

Afinita sloučenin vzorce I k receptorům motilinu se zkouší ve zkumavce na frakci tkáňového homogenizátu z prepyrolitické části králičího žaludku. Stanovuje se vytlačení radioaktivně jodem označeného motilinu z vazby motilin-receptor zkušebními látkami.

Studie vazby receptorů se provádějí podle modifikace metody Bormana a kol. (Regulátory peptidu 15 (1986), 143-153). K přípravě motilinu označeného jodem¹²⁵ se motilin známým způsobem enzymaticky joduje, např. analogicky metodě, popsané Bloomem a kol. (Scand. J. Gastroenterol. 11, (1976) 47-52), za použití laktoperoxidázy.

K získání frakce tkáňového homogenizátu z prepyrolytické části králičího žaludku, použitého v testu, se prepyrolytická část žaludku, zbavená sliznice, rozdrtí a homogenizuje v 10ti násobném objemu chladného homogenizačního ústrojí roztoku (50 mM pufru tris-HCl, 250 mM sacharózy, 25 mM KC1, 10 mM MgCl₂, pH 7,4) s přídavkem inhibitorů (1 mM jodacetamidu, 1 μΜ pepstatinu, 0,1 mM metylsulfonylfluoridu, 0,1 g/l inhibitoru trypsinu, 0,25 g/l bacitracinu), homogenizátorem, 15 s, při 1500 otáčkách za minutu. Homogenizát se odstřeďuje po dobu 15 minut po 1000 g, získaný zbytek se čtyřikrát promývá homogenizačním ůstrojným roztokem a nakonec se resuspenduje v 0,9% roztoku chloridu sodného (v objemu, odpovídajícím pětinásobném váhovém množství prepyrolytické části žaludku). Takto získaná tkáňová frakce, která se označuje jako „surový membránový přípravek“ se použije ke zkoušce.

K pokusu vazby se inkubuje 200 μΐ surové membránové frakce (0,5 - 1 mg proteinu) ve 400 μΐ ústrojného roztoku A (50 mM pufru tris-HCl, 1,5 % BSA, 10 mM MgCl₂, pH 8,0) se 100 μΐ jodového motilinu v ůstrojném roztoku B (10 mM pufru tris-HCl, 1% BSA, pH 8), zředěno na konečnou koncentraci 50 pM, 60 min. při 30 °C. Reakce se zastaví přídavkem 3,2 ml chladného ústrojného roztoku B a vázaný i nevázaný motilin se od sebe oddělí odstředěním (1000 g, 15 minut) a změří ve sčítači impulzů gama. Studie sliznice jsou prováděny přídavkem zvyšujícího se množství látky, kterou je třeba změřit, do inkubačního média. Jako zkušební roztok látek se použijí vodné roztoky, které se připraví vhodným zředěním 60x10⁴ molámích vodných kmenových roztoků. Zkušební látky, které jsou ve vodě těžko rozpustné, se rozpustí nejdříve v 60% etanolu a tento roztok se zředí takovým množstvím vody, aby koncentrace etanolu v roztoku, který je zapotřebí zkoušet, nepřesáhla 1,6 % obj. Ze získaných naměřených dat se určí jako IC₅o, koncentrace každé z měřených látek, která způsobí 50% inhibice specifické vazby jodového molitanu na receptoiy motilinu. Z této se pak vypočte příslušná hodnota pIC₅₀. Podle předcházející metody byla stanovena pro látku z příkladu 1 hodnota pIC₅o 7,85.

2. Stanovení vlivu látek na tonus žaludku v živém těle.

Tonus žaludku hraje důležitou roli při vyprazdňování žaludku. Zvýšený tonus žaludku přispívá kjeho vyprazdňování.

Vliv látek na tonus žaludku se stanovuje na tonusu žaludku psí rasy Beagle pomocí barostatu, který je spojen s umělohmotným sáčkem v žaludku psa, a umožňuje měření objemu a tlaku žaludku psa. Barostatem se stanoví objem žaludku při konstantním tlaku v žaludku nebo tlak žaludku se stanoví za určitého tlaku snížený objem žaludku a zvýšený tlak při určitém objemu. V modelu, použitém ke zkoušení látek, způsobujících zvýšení tonusu žaludku, se změří při

-6CZ 291768 B6 konstantním tlaku změna žaludku, Způsobená látkami. Žaludek pokusného zvířete se relaxuje přijetím lipidů, tj.tonus žaludku klesne, čímž se příslušně zvětší objem žaludku. Jako míra pro zvyšující se působení látek na tonus žaludku se v % měří vznikající redukce objemu žaludku, zvětšeného přídavkem lipidu po přijetí látky, opětným nárůstem žaludečního tonusu. Látka z příkladu 1, v maximálně tolerované dávce, ukázala na tomto zkušebním modelu redukci zvětšeného objemu žaludku po přídavku lipidu o 69 %.

Na základě svých účinků v gastrointestinálním traktu jsou sloučeniny vzorce I vhodné v gastroenterologii jako léčiva pro větší savce, zejména člověka, k profylaxi a léčení poruch motility gastrointestinálního traktu.

Dávky, které je zapotřebí použít, mohou být individuálně různé a mohou se přirozeně měnit podle druhu stavu, který je zapotřebí léčit, a formy aplikace. Například parenterální formulace budou obsahovat všeobecně nižší množství účinné látky než orální preparáty. Všeobecně jsou však pro aplikace u větších savců, zejména člověka, vhodné lékové formy, s obsahem účinné látky od 1 do 100 mg v jednotlivé dávce.

Jako léčivé látky mohou být sloučeniny vzorce I obsaženy s obvyklými farmaceutickými pomocnými látkami vgalenických přípravcích, jako např. tabletách, kapslích, čípcích nebo roztocích. Tyto galenické přípravky mohou být vyrobeny podle známých metod, za použití obvyklých pevných nosičů, jako např. mléčného cukru, škrobu a talku nebo kapalných ředidel, jako např. vody, kapalných tuků nebo kapalných parafínů a s použitím farmaceuticky známých pomocných látek, například rozvolňovačů tablet, látek, zprostředkujících rozpouštění, nebo konzervačních prostředků.

Následující příklady mají vynález blíže objasnit, avšak jeho rozsah není žádným způsobem omezen.

Příklad 1 [(l'R),2R,3S,4S,5R,6R,9R,llR,12R,14R]-ll-(l'-hydroxypropyl)-3-[(2,6-dideoxy-3-Cmetyl-3-0-metyl-a-L-ribo-hexopyranosyl)-oxy]-5-[(3,4,6-trideoxy-3-(N-metyl-N-izopropylamino)-P-D-xylohexopyranosyl)-oxy]-2,4,6,8,11,14-hexatyl-l 0,13,15-trioxatricyklo [9.2.1.1.⁹⁶]-pentadekan-l-onu (= směs izomerů sloučeniny vzorce I, R¹ = metyl)

A) Výroba N-desmetylerytromycinu A g erytromycinu A (= 27,2 mmol) a 11,2 g (= 136,2 mmol) acetátu sodného bylo rozpuštěno ve 200 ml roztoku metanol/voda 8:2. Roztok byl zahřát na teplotu 47 °C. Poté bylo přidáno 6,9 g (= 136,2 mmol) jodu. Hodnota pH byla udržována přídavkem zředěného vodného roztoku hydroxidu sodného na 8 až 9. Po 3 hodinách byla reakční směs ke zpracování vlita do směsi z 1 1 vody a 20 ml roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs byla extrahována etylesterem kyseliny octové a organický extrakt byl promyt hydroxidem amonným s obsahem vody a zahuštěn. Po odstranění rozpouštědla byl zbývající surový produkt překrystalován z roztoku aceton/hydroxid amonný 50:3. Bod tání od 143 do 148 °C.

B) Výroba N-desmetyl-8,9-anhydroeiytromycin-A-6,9-hemiketalu (sloučenina vzorce V, R¹ = metyl) g produktu získaného způsobem A) bylo rozpuštěno ve 110 ml ledové kyseliny octové a roztok byl míchán po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Poté byla reakční směs ke zpracování odkapána za chlazení ledem do 400 ml koncetrovaného roztoku hydroxidu amonného. Reakční směs byla extrahována etylester kyseliny octové, organický extrakt byl promyt vodou a bylo

-7CZ 291768 B6 odtaženo rozpouštědlo. Suťový produkt, zbývající jako zbytek, byl nejprve překrystalován z éteru a poté z metanolu. Bylo získáno 14 g čistého produktu s bodem tání 145 °C.

C) Výroba [2R(2'R,3'R),3S,4S,5R,6R,10R,l 1R]-1 H2',3'-dihydroxypent-2^ř-yl)-3-[(2,6-dideoxy-3C-metyl-3-0-metyI-a-L-ribo-hexopyranosyl)oxy]-5-[(3,4,6-trideoxy-3-metylamino-p-D-xylo-hexypyranosyl)-oxy]-2,4,6,8,10-pentametyl-12,13-dioxabicyklo[8.2.1 ]tridec-8-en-l-onu (^sloučenina vzorce ΙΠ, R¹⁼ metyl)

9,4 g (= 13,4 mmol) produktu získaného způsobem B) bylo vařeno po dobu 2,5 hodin s 1,9 g (=13,4 mmol) uhličitanu draselného v metanolu pod refluxem. Ke zpracování byla reakční směs zahuštěna odpařením, zředěna vodou a extrahována etylesterem kyseliny octové. Surový produkt, zbývající po odstranění rozpouštědla, byl překrystalován z izopropanolu. Bylo získáno 7,1 g čistého produktu s bodem tání od 199 °C do 200 °C, hodnota optické otáčivosti [a]²⁰ _D: -31,6° (c = 1, metanol).

D) Příprava [2R(2'R,3'R),3S,4S,5R,6R,10R,l 1RJ-1 H2',3'-dihydroxypent-2'-yl)-3-[(2,6-dideoxy-3-C-metyl-3-O-metyl-a-L-ribohexopyranosyl)-oxy]-5-[(3,4,6-trideoxy-3-(Nmetyl-N-izopropylamino)-p-D-xylohexopyranosyl)-oxy]-2,4,6,8,10-pentametyl-12,13dioxybicyklo[8.2.1]tridec-8-en-l-onu (= sloučenina vzorce Π, R¹ = metyl) g (= 2,8 mmol) produktu, získaného způsobem C), bylo rozpuštěno v metanolu a hodnota pH byla přídavkem zředěného roztoku kyseliny solné nastavena na 4. K roztoku bylo přidáno 2 g molekulového síta (křemičitan hlinitovápenatý, s průměrem pórů 0,4 nm), přebytek acetonu a 0,4 g (= 6,4 mmol) kyanoborhydridu sodného. Reakční směs byla míchána po dobu 12 hodin. Ke zpracování bylo odfiltrováno molekulové síto, filtrát zahuštěn odpařením, rozředěn vodou a extrahován etylesterem kyseliny octové. Surový produkt, zbývající po zahuštění extraktu etylesteru kyseliny octové jako zbytek, byl čištěn sloupcovou chromatografií přes silikagel (eluční roztok etylester kyseliny octové/metanol 95 : 5). Bylo získáno 1,4 g vyčištěného produktu s bodem tání 130 do 134 °C, hodnota optické otáčivosti [a]²⁰ _D: -32,8°.

E) Příprava titulní sloučeniny g produktu, získaného způsobem D), bylo vloženo do 2250 ml vody. Za míchání byla ke směsi přikapána koncentrovaná kyselina solná až bylo dosaženo hodnoty pH 2-3. Nakonec byla reakční směs míchána při pokojové teplotě pod dobu 7 hodin. Ke zpracování byl přidáván k reakční směsi koncentrovaný roztok amoniaku až bylo dosaženo hodnoty pH 11. Nakonec byla reakční směs extrahována dichlormethan. Organický extrakt byl zahuštěn. Surový produkt, zbývající po zahuštění, byl čištěn překrystalováním z acetonitrilu. Bylo získáno 19,6 g titulní sloučeniny s bodem tání od 181 °C do 183 °C, hodnota optické otáčivosti [a]²°o: -52,2°.

Oddělení izomerů:

Oddělení izomerů probíhalo semipreparativně vysokovýkonnou kapalnou chromatografií (= Hing Performace Liquid Chromatography, zkráceno jako HPCL) na zhotoveném sloupci s rozměry 300 mm (L) x (ID) firmy Waters. Byl použit sloupcový materiál Reversed-Phase “SymeryPrep“ C18 (7pm). Jako eluent sloužila směs ze 600 ml vodného roztoku 0,05 M KH₂PO₄ s hodnotou pH 6,0 (nastaveno 1M roztokem hydroxidu sodného) a 400 ml acetonitrilu.

S retenčním časem 5,2 minut byl získán 8R-izomer.

S retenčním časem 6,8 minut byl získán 8S-izomer.

-8CZ 291768 B6

Příklad 2 [(l'R),2R,3S,4S,5R,6R,9R,llR,12R,14R]-ll-(l'-hydroxypropyl>-3-[(2,6-dideoxy-3-Cmetyl-3-0-metyl-a-L-ribohexopyranosyl)-oxy]-6-[(3,4,6-trideoxy-3-(N-izopropylamino)p-D-xylohexopyranosyl)-oxy]-2,4,6,8,l 1,14-hexametyl-lO, 13,15-trioxatricyklo[9.2.1.1,^{9 6}]pentadekan-l-onu (izomemí směs sloučeniny vzorce I, R¹⁼ vodík)

A) Příprava [2R(2'R,3'R),3S,4S,5R,6R,10R,l 1RJ-1 l-(2',3'-dihydroxypent-2'-yl)-3-[(2,6-dideoxy-3-C-metyl-3-O-metyl-a-L-ribohexopyranosyl)-oxy]-5-[(3,4,6-trideoxy-3-(Nizopropylamino)-p-D-xylohexopyranosyl)-oxy]-2,4,6,8,10-pentametyl-12,13-dioxybicyklo[8.2.1 .]tridec-8-en-l-onu

Směs 7,3 g etylátu sodného a 500 ml metanolu byla ochlazena pod dusíkovou atmosférou na teplotu 0 °C. Poté byl přikapáván roztok 20 g sloučeniny vzorce Π (R¹⁼metyl), získané způsobem podle ID), do 100 ml metanolu. Nakonec bylo přidáno po částech 34,1 g jodu a reakční směs byla udržována na teplotě od 0 °C do 5 °C. Ke zpracování byla vložena reakční směs do roztoku 58 g thiosíranu sodného a 48 ml koncentrovaného roztoku amoniaku v 1,5 1 vody. Vodná fáze byla čtyřikrát extrahována chloroformem vždy po 100 ml. Sloučené organické fáze byly jednou promyty směsí z 5 ml koncentrovaného roztoku amoniaku a 100 ml vody, sušeny síranem sodným a zahuštěny. Zbývající zbytek byl čištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu. Bylo získáno 0,5 g vyčištěného produktu z bodem tání od 147 °C do 155 °C, hodnota optické otáčivosti [a]²⁰ _d: -26,2°.

B) Příprava titulní sloučeniny g předešle získaného produktu byl zreagován metodou podle příkladu 1E). Bylo získáno 0,47 g titulní sloučeniny s bodem tání od 201 °C do 209 °C, hodnota optické otáčivosti [a]²⁰ _D: -45,8°.

Příklad I [(l'R,2R,3S,4S,5R,6R,9R, 11R,12R, 14RJ-11-( 1 '-hydroxypropyl)-3-[(2,6-dideoxy-3-C-metyl3-0-metyl-a-L-ribohexopyranosyl)-oxy]-5-[3,4,6-trideoxy-3-(N-metyl-N-izopropylamino)-p-D-xylohexapyranosyl)-oxy]2,4,6,8,11,14-hexametyl-l 0,13,15-trioxatricyklo[9.2.1.1.⁹⁶]-pentadekan-l-onu (izomemí směs sloučeniny vzorce I, R¹ = metyl)20 mg kukuřičný škrob 60mg mléčný cukr 135mg želatina (jako 10% roztok) 6mg

Účinná látka, kukuřičný škrob a mléčný cukr byly zahuštěny 10% roztokem želatiny. Pasta byla rozmělněna a vzniklý granulát byl umístěn na vhodný plech a sušen při 45 °C. Usušený granulát byl veden do drtiče a v mixéru smíchán s pomocnými látkami:

talek 5mg stearan hořečnatý 5mg kukuřičný škrob 9mg a poté slisován na tablety o hmotnosti 240 mg.

Claims (3)

1. Deriváty [(l'R),

2R,3S,4S,5R,6R,9R,l 1R,12R,14R]-1 l-(l'-hydroxypropyl>-2,4,6,8,11,145 hexametyl-10,13,15-trioxatricyklo [9.2.1.1.⁹⁶]-pentadekan-l-onu obecného vzorce I (D, kde R¹ znamená metyl nebo vodík, a jejich stabilní a fyziologicky přijatelné adiční soli s kyselinami.

10 2. Deriváty podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R¹ znamená metyl.

3. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje farmakologicky účinné množství deriváty podle nároku 1 a obvyklé farmaceutické pomocné a nosné látky.

15 4. Způsob přípravy derivátů [(rR),2R,3S,4S,5R,6R,9R,llR,12R,14R]-ll-(r-hydroxypropyl)-2,4,6,8,11,14-hexametyl-l 0,13,15-trioxatricyklo[9.2.1.1^{9 6}]-pentadekan-l-onu podle nároku 1 obecného vzorce I, (I), kde R¹ znamená metyl nebo vodík, a jejich stabilních a fyziologicky přijatelných adičních solí 20 s kyselinami, vy z n a č uj í c í se tím, že deriváty [2R(2'R,3'R),3S,4S,5R,6R,10R,l 1R]1 l-(2',3'-dihydroxypent-2'-yl)-2,4,6,8,10-pentametyl-l2,13-dioxabicyklo [8.2. l]tridec-8-en1-onu obecného vzorce Π

-10CZ 291768 B6 (ID, kde R¹ má shora uvedený význam, se převedou působením kyseliny na sloučeninu vzorce I a v žádoucím případě se zavede do získané sloučeniny vzorce I, kde R¹ znamená vodík, metylový zbytek, nebo se ze získané sloučeniny vzorce I, kde R¹ znamená metyl, metylový zbytek odštěpí 5 a v žádoucím případě se převedou volné sloučeniny vzorce I na své stabilní adiční soli s kyselinami nebo se převedou adiční soli na volné sloučeniny vzorce I.