CZ287780B6

CZ287780B6 - Peptide derivatives, their use and pharmaceutical preparation in which they are comprised

Info

Publication number: CZ287780B6
Application number: CZ19961349A
Authority: CZ
Inventors: John Montana; Jonathon Dickens; David Alan Owen; Andrew Douglas Baxter
Original assignee: Darwin Discovery Ltd
Priority date: 1993-11-10
Filing date: 1994-11-10
Publication date: 2001-02-14
Also published as: CA2173470A1; KR960705843A; EP0728144B1; HK1015139A1; US5853623A; HU217344B1; CN1134705A; NO961888L; GR3033103T3; FI961976A; CZ134996A3; GB9323165D0; HU9601244D0; ATE188969T1; PL314300A1; HUT73799A; DE69422726D1; WO1995013289A1; DE69422726T2; PT728144E

Description

Peptidové deriváty, jejich použití a farmaceutický prostředek je obsahující

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nové skupiny peptidových derivátů, způsobu jejich přípravy a jejich využití v medicíně.

Dosavadní stav techniky

V normální tkáni je syntéza spojovací buněčné tkáně vyvážena degradací extracelulámího matrixu, přičemž tyto dva děje existují v dynamické rovnováze. Degradace matrixu je prováděna působením proteináz uvolněných z rezidentních buněk spojovací tkáně a pronikajících zánětlivých buněk a je způsobena působením přinejmenším tří skupin metaloproteináz. Jsou to kolagenázy (intersticiální kolagenázy, MMP-1; PMN kolagenáza, MMP-8), gelatinázy (gelatináza A, MMP-2, 72 kDa-gelatináza, kolagenáza typ IV; gelatináza B, MMP-9, 92 kDa-gelatináza, kolagenáza typ IV) a stromelysiny (proteoglykanáza, MMP-3, stromelysin-1, transin; stromelysin-2, MMP-10; stromelysin-3, MMP-11). Normálně jsou tyto katabolické enzymy pevně regulovány na úrovni jejich syntézy a vylučování a také na úrovni jejich extracelulámí aktivity, která je kontrolována působením specifických inhibitorů, jako je TIMP (tkáňové inhibitory metaloproteináz, které tvoří s metaloproteinázami inaktivní komplexy a obecněji inhibitory proteináz, jako je a2-makroglobulin.

Zrychlený, nekontrolovaný rozpad spojovacích tkání resorpcí extracelulámího matrixu, katalyzovaného metaloproteinázou, se objevuje při mnoha patologických stavech, jako je revmatická artritida, osteoartritida, septická artritida, vředy rohovky, kůže nebo žaludku, nádorové metastázy nebo invazní nádor, periodontální nemoci, proteinurie, koronární trombóza, spojená s porušením aterosklerotického plaku, a nemoci kostí. Inhibitory jsou také použitelné při prevenci potíží, které mohou následovat po traumatickém poranění, které může vést k invaliditě. Tyto sloučeniny mají také využití jako prostředek pro kontrolu porodnosti, prevenci ovulace nebo implantace. Lze očekávat, že patogenezi uvedených nemocí lze kladně ovlivnit podáváním inhibitorů metaloproteináz a za tímto účelem bylo navrženo mnoho sloučenin [pro obecný přehled viz Wahl a kol., Ann. Rep. Med. Chem. 25: 175-184, Academie Press lne., San Diego (1990)].

Bylo popsáno mnoho malých sloučenin peptidového typu, které inhibují metaloproteinázy. Pravděpodobně nejvýznamnější z nich jsou ty, které se týkají angiotensin-konvertujících enzymů (ACE), kde taková činidla působí tak, že blokují přeměnu dekapeptidu angiotensinu I na angiotensin II účinnou presorovou látkou. Sloučeniny tohoto typu jsou popsány v EP-A-0012401. Také příbuzné merkaptoamid peptidové deriváty vykazují ACE inhibiční aktivitu in vitro a in vivo (Weller a kol. (1984) Biochem. Biophys. Res. Comm. 125 (1):82-89).

TNF je cytokin, který je produkován jako 28 kDa prekurzor, spojený s buňkou. Je uvolňován ve své aktivní 17 kDa formě (Jue a kol. (1990) Biochemistry 29: 8371-8377), která zprostředkovává in vivo mnoho odbourávacích dějů. Po podání zvířatům nebo lidem způsobuje záněty, horečku, kardiovaskulární poškození, průjem, prudké koagulační odpovědi, podobné těm, které vznikají během akutních infekčních a šokových stavů. Trvalé podávání také způsobuje kachexii a anorexii. Akumulace přebytku TNF je smrtelná.

Ze studií na zvířecích modelech je jasné, že blokování účinků TNF specifickými protilátkami je prospěšné při akutních infekcích, šokových stavech, reakcích příjemce na transplantát a autoimunitních nemocí. TNF je také autokrinní růstový faktor pro některé myelomy a lymfomy a může vést k inhibici normální hematopoezie u pacientů s těmito nádory.

-1CZ 287780 B6

Prevence produkce nebo působení TNF je proto důležitá pro účinnou terapeutickou strategii u mnoha zánětlivých, infekčních, imunologických nebo maligních onemocnění. Ty zahrnují, ale nejsou tímto výčtem nijak omezeny, septický šok, hemodynamický šok a septický syndrom (Mathison a kol. (1988) J. Clin. Invest. 81: 1925-1937; Miethke a kol. (1992) J. Exp. Med. 175: 5 91-98), onemocnění po postischemické reperfuzi, malárii (Grau a kol. (1989) Immunol. Rev.

112: 49-70), mykobakteriální infekce (Bames a kol. (1992) Infect. Imm. 60: 1441-9), meningitidu, lupénku, selhání srdce, fíbrotické onemocnění, kachexii, odhojování transplantátu, rakovinu, autoimunitní onemocnění, revmatickou artritidu, roztroušenou sklerózu, nemoc z ozáření, otravu, která následuje po podávání imunosupresivních monoklonálních protilátek, jako ío je OKT3 nebo CAMPATH-1.

Současné klinické přístupy proti TNF zahrnují použití kortikosteroidů, jako je dexamethason, a použití cyklosporinu-A nebo FK506, což jsou nespecifické inhibitory transkripce cytokinového genu. O fosfodiesterázových inhibitorech, jako je pentoxyfilin, bylo prokázáno, že jsou 15 specifičtější inhibitory genové transkripce TNF (Endres S (1991) Immunol. 72: 56-60, Schandene a kol. (1992) Immunol. 76: 30-34, Alegre a kol. (1991) Transplantation 52: 674-679, Bianco a kol. (1991) Blood 78: 1205-1221). O thaloimidu bylo také prokázáno, že inhibuje produkci TNF leukocyty (Sampajo a kol. (1991) J. Exp. Med. 173: 699-703). Experimentálně bylo prokázáno, že anti-TNF monoklonální protilátky, rozpustné TNF receptory a rozpustné TNF 20 receptory/imunoadhesiny specificky inhibují působení TNF (Bagby a kol. (1991) J. Efect. Dis.

163: 83-88, Charpentier a kol. (1991) Presse-med. 20: 2009-2011, Silva a kol. (1990) J. Infect.

Dis. 162: 421-427, Franks a kol. (1991) Infect. Immun. 59: 2609-2614, Tracey a kol. (1987) Nátuře 330: 662-664, Fischer a kol. (1992) PNAS USA v tisku, Lesslauter a kol. (1991) Eur. J. Immunol. 21: 2883-2886, Ashkenazi a kol. (1991) PNAS USA 88: 10535-10539).

Nedávno bylo prokázáno, že účinky TNF jsou zprostředkovány dvěma peptidy TNF-a a TNF-b. Ačkoliv tyto peptidy mají mezi sebou pouze 30% homologii, aktivují tytéž receptory a jsou kódovány těsně následujícími geny. Tak, jak se používá v předkládaném vynálezu, pojem faktor nekrózy tumoru nebo TNF znamená faktor nekrózy tumoru - a peptidy, které s ním mají vysoký 30 stupeň homologie řetězce, nebo peptidy, které mají v zásadě podobné fyziologické účinky jako

TNF-a, například TNF-b.

Sloučeniny, které dokáží inhibovat působení metaloproteináz, které působí v rozkladu spojovacích tkání, jako je kolagenáza, stromelysin a gelatináza vykazují inhibici uvolňování TNF 35 jak in vitro, tak in vivo (Gearing a kol. (1994) Nátuře 370: 555-557, McGeehan a kol. (1994)

Nátuře 370: 558-561, WO 93/20047). Všechny uvedené inhibitory obsahují vaznou skupinu zinečnatou sůl hydroxamové kyseliny.

Sloučeniny, které inhibují kolagenázy, jsou popsány v US patentu č. 4,511,504, vydaném 16. 4. 40 1985, US Patentu, č. 4,568,666, vydaném 4. 2. 1986. Sloučeniny podobné struktury, které jsou patentově nárokovány jako látky, inhibující stromelysin (proteoglykanáza), jsou popsány v US patentu č. 4,771,037, vydaném 13. 9. 1988.

Inhibitory stromelysinu a kolagenázy mají využití v prevenci artritického poškození chrupavek, 45 spojeném se septickou artritidou. Bakteriální infekce kloubů může vést k zánětlivé odpovědi, která může vést k trvalému poškození strukturních složek. Na zvířecích modelech byly použity k vyvolání artritické odpovědi s proteolytickými aktivitami bakteriální agens. Viz Čase a kol. (1989) J. Clin. Invest. 84: 1731-40 a Williams a kol. (1990) Arth. Rheum. 33: 533-41.

Inhibitory stromelysinu, kolagenázy a gelatinázy lze použít ke kontrole nádorových metastáz, nepovinně současně v kombinaci s chemoterapií a/nebo radioterapií. Viz Matrisian a kol. (1986) PNAS USA 83: 9413-7, Wilhelm a kol. (1987) ibid. 84: 6725-29, Werb a kol. (1989) J. Cell. Biol. 109: 872-889, Liotta a kol. (1983) Lab. Invest. 49: 636-649 a Reich a kol. Metastasis, Ciba Foundation Symposium, Wiley Chicester, 1988, str. 193-210.

-2CZ 287780 B6

Vylučované proteinázy, jako je stromelysin, kolagenáza a gelatináza hrají důležitou roli v procesech pohybu buněk během metastatické nádorové invaze. Také existují důkazy, že matrixové metaloproteinázy jsou v určitých metastatických nádorových buněčných liniích přepisovány. V této souvislosti enzym prochází membránami a umožňuje nádorovým buňkám uniknout z místa původního vzniku nádoru a vstoupit do oběhu. Po zachycení na stěny cév použijí nádorové buňky tytéž metaloproteinázy k narušení membrán a proniknutí do dalších tkání, což vede k nádorovým metastázím. Inhibice tohoto procesu působí preventivně proti metastázím a zlepšuje účinnost současné chemoterapie a/nebo radioterapie.

Tyto inhibitory jsou také použitelné pro kontrolu periodontálních onemocnění, jako je gingivitida. Jak kolagenázové, tak stromelysinové aktivity byly zjištěny ve fibroblastech, odvozených ze zanícené sliznice dásní (Uitto a kol. (1981) J. Periodontal Res. 16: 417-424). Množství enzymu souviselo s prudkostí onemocnění dásní, Overall a kol. (1987) J. Periodontal Res. 22: 81-88.

Proteolytické procesy byly také pozorovány u vředů rohovky po popálení alkáliemi (Brown a kol. (1969) Arch. Ophtalmol. 81: 370-373). Peptidy, které obsahují merkapto skupinu, inhibují kolagenázu, izolovanou z králičí rohovky, popálené alkáliemi (Bums (1989) Invest. Ophtalmol. 30: 1569-1575). Léčení očí, popálených alkáliemi, nebo očí, které trpí vředovitostí rohovky v důsledku infekce, pomocí inhibitorů těchto metaloproteináz v kombinaci s citrátem sodným nebo askorbátem sodným a/nebo protimikrobiálními látkami může být účinné v prevenci úplného rozvinutí degradace rohovky.

O stromelysinu bylo zjištěno, že odbourává strukturní složky glomerulámí základní membrány (GBM) ledvin, jejíž hlavní funkcí je bránit průchodu plazmových proteinů do moči (Baricos a kol. (1989) Biochem. J. 254: 609-612). Proteinurie, následek glomerulámího onemocnění, je nadbytek proteinů v moči, způsobený zvýšenou průchodností plazmových proteinů skrz GBM. Důvody, které způsobují zvýšenou prostupnost GBM, nejsou známé, ale proteinázy včetně stromelysinu mohou hrát důležitou úlohu v glomerulámích nemocích. Inhibice tohoto enzymu může zmírnit proteinurii, spojenou se selháním ledvin.

Inhibice stromelysinu působí preventivně proti porušení aterosklerotického plaku, které vede ke koronární trombóze. Porušení aterosklerotického plaku je nejběžnější příčina, která vyvolává koronární trombózu. Jako příčina porušení plaku byla označena destabilizace a degradace tkáně spojovacího matrixu, která obklopuje tento plak, proteolytickými enzymy nebo cytokiny, uvolněnými zánětlivými buňkami. Toto porušení plaku může vést k akutní trombolytické příhodě z důvodu rychlého toku krve z cévy. Velké množství stromelysinové m-RNA bylo lokalizováno v jednotlivých buňkách aterosklerotického plaku, vyjmutých ze srdce, transplantovaného pacientovi během operace (Henney a kol. (1991) PNAS USA 88: 8154-8158). Inhibice stromelysinu těmito sloučeninami může pomoci v prevenci nebo zpoždění odbourávání matrixu spojovací tkáně, která stabilizuje aterosklerotický plak a tím i prevenci události, která vede k akutní koronární trombóze.

Specifické inhibitory stromelysinu a kolagenázy mohou být použitelné pro kontrolu porodnosti. Existují pozorování, že exprese metaloproteináz, včetně stromelysinu a kolagenáz, probíhá u neoplodněných vajíček a zygot a v dalších stadiích odbourávání a zvyšuje se v blastocystovém stadiu rozvoje plodu a s endodermní diferenciací (Brenner a kol. (1989) Genes & Develop. 3: 848-59). Analogicky k invazi nádoru, blastocyty mohou exprimovat metaloproteinázy, aby pronikly extracelulámím matrixem děložní stěny během implantace. Inhibice stromelysinu a kolagenázy během těchto prvotních rozvojových procesů by měla zabránit normálnímu rozvoji embrya a/nebo implantaci v děloze. Tato intervence tak představuje způsob kontroly porodnosti. Navíc bylo pozorováno, že kolagenáza je důležitá v procesu ovulace. V tomto případě je potřeba překonat krycí vrstvu kolagenu, aby se vajíčko mohlo uvolnit. Při tomto procesu byla prokázána kolagenáza a její inhibice vede k prevenci ovulace (Woessner a kol. (1989) Steroids 54:

-3CZ 287780 B6

491-499). Určitou roli při ovulaci hraje také stromelysin (Too a kol. (1984) Endocrin. 115: 1043-1050).

Kolagenolytické a stromelytické aktivity byly také pozorovány u dystrofilní epidermolytické bullózy (Kronberger a kol. (1982) J. Invest. Dermatol. 79: 208-211, Sawamura a kol. (1991) Biochem. Biophys. Res. Commun. 184: 1003-8). Inhibice metaloendoproteináz by měla omezit rychlou destrukci spojovací tkáně kůže.

Kromě extracelulámího matrixu, který obsahuje strukturální složky, může stromelysin degradovat in vivo i jiné substráty, včetně ai-proteinázového inhibitoru, a proto může ovlivnit aktivitu jiných proteináz jako je elastáza (Winyard a kol. (1991) FEBS Letts. 279(1): 91-94). Inhibice matrixových metaloendoproteináz může vyvolat antiproteinázovou aktivitu těchto endogenních inhibitorů.

V současné době byly zjištěny některé nové enzymy ze skupiny MMP, z nichž některé jsou podstatné při některých onemocněních. Kolagenáza 3 je enzym, který se vyskytuje pouze v buňkách karcinomu prsu, a je těmito buňkami využíván (Freije a kol. (1994) J. Biol. Chem. 269(24): 16766-16773), MT-MMP, další člen skupiny MMP, je klíčový enzym při aktivaci gelatinázy A (Sáto a kol. (1994) Nátuře 370: 61-65). Gelatináza A je enzym, důležitý pro růst a metastázování nádorů.

Odbourávání b-amyloid prekurzorových proteinů (APP) vede k tvorbě amyloidového plaku, hlavní složky senilního plaku, nalezeného u pacientů s Alzheimerovou nemocí (AD). Dvě nové publikace popisují metaloproteinázové enzymy, které štěpí APP na amyloidový plak (Abraham a kol. (1944) Biochemistry 33: 192-199), Huber a kol. (1994) Biochem Biophys. Res. Comm. 201 (1): 45-53).

Jak je osobě, vzdělané v dané problematice, jasné, značná homologická podobnost mezi těmjto novými enzymy a ostatními MMP vede ke značné možnosti toho, že sloučenina, která inhiquje jeden enzym, může do určitého stupně inhibovat i tyto nové enzymy. Proto mohou být inhibitory podle předkládaného vynálezu použitelné pro nemoci, způsobované těmito novými enzymy.

Předmětem předkládaného vynálezu bylo poskytnout sloučeniny, které inhibují uvolňování TNF z buněk, a které lze proto použít pro léčení nemocí, vyvolaných TNF. Toto použití zahrnuje, ale tímto výčtem není nijak omezeno, léčení zánětů, horečky, kardiovaskulárních onemocnění, průjmu, prudké koagulační odpovědi, kachexie a anorexie, akutních infekcí, šokových stavů, reakcí příjemce na transplantát a autoimunních nemocí.

Dalším předmětem předkládaného vynálezu bylo poskytnout sloučeniny, které kromě inhibice TNF také inhibují působení MMP a proto je lze použít k léčení pacientů, kteří trpí nemocemi, způsobenými TNF a/nebo MMP.

Podstata vynálezu

Stručný popis vynálezu

Vynález zahrnuje nové merkaptoalkylpeptidové sloučeniny obecného vzorce I:

které jsou použitelné jako inhibitory matrixových metaloproteináz a/nebo nemocí, způsobených TNF včetně degenerativních nemocí (které byly uvedeny výše) a určitých rakovin.

Jedním aspektem předkládaného vynálezu jsou nové sloučeniny obecného vzorce I, kde

R¹ je C2_6 alkyl, C2_6 alkenyl, aryl, (Ci_6alkyl)aryl nebo C^alkyl-AR⁹, kde A je O, NR⁹nebo S(O)m, kde m = 0-2, a nebo každé R⁹ je H, Ci^ alkyl, aryl nebo C^alkyljaryl, přičemž aryl je případně substituovaný fenyl nebo naftyl se substituenty, vybranými ze skupiny, obsahující halogen, trifluormethyl, alkyl, alkoxyl a fenyl,

R² je H nebo Ci_6 alkyl;

R⁴ je H nebo Ci_6alkyl, případně substituovaný aminem (NH₂), arylaminem, chráněným aminem, arylem, di(Ci_6alkyl)aminem, mono(Ci_6alkyl)aminem, COOH, chráněným karboxylem, karbamoylem, mono(Ci_6alkyl)karbamoylem nebo di(C].₆alkyl)karbamoylem, přičemž aryl znamená jak uvedeno výše, chráněná aminoskupina je aminoskupina chráněná skupinami, vybranými ze skupiny, obsahující benzyloxykarbonyl, terc.-butoxykarbonyl, acetyl, nebo je ve formě fitalimidu, chráněný karboxyl je karboxyl, chráněný ve formě snadno štěpitelného esteru, vybraného ze skupiny, obsahující methylester, ethylester, benzylester nebo terc.butylester,

R⁵ je H nebo Ci_6alkyl, neboje NR⁴R⁵ pyrrolidin, piperidin nebo morfolin;

R⁶ je případně substituovaný C₃_₆ cykloalkyl, C₃..₆ cykloalkenyl, Ci_6 alkyl, benzyl, (Ci_6alkoxy)benzyl, benzyloxybenzyl nebo 3-indolylmethyl,

Alk je C]^ alkyl nebo C₂-6 alkenyl a n = 0 nebo 1;

R⁷ je H nebo R¹⁰CO, kde R¹⁰ je C]_4 alkyl, (C^alkyljaryl, C₃_6 cykloalkyl, (C₃.₆cykloalkyl)CM alkyl, C₂_« alkenyl nebo (C₂_6 alkenyl)aryl, přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše, a

R⁸ je H, C|alkyl, (Cj_4 alkyl)aryl nebo aryl;

přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty nebo hydráty.

Podrobný popis vynálezu

Je cenné, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat jeden nebo více asymetricky substituovaných atomů uhlíku, například ty, které jsou označeny v obecném vzorci I hvězdičkou. Přítomnost jednoho nebo více těchto asymetrických center ve sloučenině obecného vzorce I zvyšuje množství stereoizomerů a v každém případě je vynález chápán tak, že zahrnuje všechny stereoizomery, včetně enantiomerů a diastereomerů a. směsí, včetně jejich racemických směsí.

V obecných vzorcích v předkládaném vynálezu je čára ~ používána na případném asymetrickém centru, kde reprezentuje možnost R- a S-konfígurace, čáry < a ..... představují konkrétní konfiguraci na asymetrickém centru.

-5CZ 287780 B6

Jak se používá v předkládaném vynálezu buď samostatné nebo v kombinaci, pojem „C]_6 alkyl“ označuje případně rozvětvenou alkylovou skupinu, která sestává z jednoho až šesti uhlíkových atomů, včetně, například, methylu, ethylu, propylu, izopropylu, butylu, t-butylu, pentylu, hexylu. Takto například [Alk]_nR⁶ může být t-butyl.

Pojem „Ci_4 alkyl“ označuje případně rozvětvenou alkylovou skupinu, která sestává z jednoho až čtyř uhlíkových atomů, včetně, například, methylu, ethylu, propylu, izopropylu, butylu a t-butylu.

Pojem „C₂-6 alkenyl“ označuje případně rozvětvenou alkylovou skupinu, která sestává ze dvou až šesti uhlíkových atomů a obsahuje navíc jednu dvojnou vazbu s konfigurací E nebo Z. Tento pojem zahrnuje, například, vinyl, 1-propenyl, 1-a 2- butenyl a 2-methyl-2-propenyl.

Pojem „cyklo(C3_6)alkyl“ označuje nasycenou alicyklickou skupinu, která sestává ze tří až šesti uhlíkových atomů a zahrnuje, například, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Pojem „cyklo(C3_6)alkenyl“ označuje alicyklickou skupinu, která sestává ze tří až šesti uhlíkových atomů a obsahuje navíc jednu dvojnou vazbu. Tento pojem zahrnuje, například, cyklopentenyl a cyklohexenyl.

Pojem „aryl“ označuje nepovinně substituovaný fenyl nebo naftyl, přičemž substituent(y) jsou vybrány z, například, halogenu, trifluormethylu, Ci_6 alkylu, alkoxylu, fenylu a podobně. Pojem „halogen“ označuje fluor, chlór, bróm nebo jód.

Pojem „chráněný amin“ nebo „chráněný karboxyl“ označuje amino nebo karboxy skupinu, která je chráněna způsobem, který je známý osobám, vzdělaným v dané problematice. Například aminoskupina může být chráněna benzyloxykarbonylem, terc.-butoxykarbonylem, acetylem nebo podobnou skupinou, nebo ve formě ftalimidu nebo podobné skupiny. Karboxylová skupina může být chráněna ve formě snadno odstranitelného esteru, jako je methyl, ethyl, benzyl nebo terc.-butylester.

Pojem „alkoxyl“ označuje případně rozvětvený alkoxyl, který sestává maximálně ze šesti uhlíkových atomů, jako je methoxyl, ethoxyl, propoxyl, izopropoxyl, butoxyl nebo terc.-butoxyl.

Soli sloučeniny obecného vzorce I zahrnují farmaceuticky přijatelné soli, například soli, které vzniknou přidáním kyseliny, odvozené od anorganických nebo organických kyselin, jako jsou hydrochloridy, hydrobromidy, p-toluensulfonáty, fosfáty, sulfáty, chloristany, octany, trifluoroctany, propionáty, citráty, malonáty, sukcináty, laktáty, oxaláty, vinany a benzoáty.

Soli mohou být také tvořeny bázemi. Takové soli zahrnují soli, odvozené od anorganických nebo organických bázi, například solí alkalických kovů, jako jsou hořečnaté nebo vápenaté soli, a soli s organickými aminy, jako jsou morfolinové, piperidinové, dimethylaminové nebo diethylaminové soli.

Pokud je „chráněná karboxylová“ skupina ve sloučenině podle předkládaného vynálezu esterifikovaná karboxylová skupina, může to být metabolicky labilní ester COOR¹¹, kde R¹¹je ethyl, benzyl, fenethyl, fenylpropyl nebo a nebo β-nafiyl, 2,4-dimethylfenyl, 4-terc.-butylfenyl, 2,2,2-trifluorethyl, l-(benzyloxy)benzyl, l-(benzyloxy)ethyl, 2-methyl-l-propionyloxypropyl, 2,4,6-trimethylbenzyloxymethyl nebo pivaloyloxymethyl.

Preferované sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou ty, ve kterých nezávisle nebo v jakékoliv kombinaci:

R¹ je Cm alkyl nebo Cj_₃ alkyl-OH, například 2-methylpropyl(izobutyl) nebo 2-hydroxyethyl;

R² je vodík;

n je nula;

R⁴ je vodík nebo Ci_₃ alkyl, například methyl;

R⁵ je vodík nebo Ci_₃ alkyl, například methyl;

R⁶ je benzyl nebo 3-indolylmethyl;

R⁷ je vodík nebo R¹⁰CO, kde R¹⁰ je Ci^ alkyl, například methyl;

R⁸ je C|_4 alkyl, aryl nebo (Ci_₃ alkyl)aryl, například fenyl nebo benzyl.

Zejména preferované sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou:

N-[N-(nierkaptoacetyl)-L-leucyl]-L-fenylaIaninmethylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-leucyl-L-fenylalaninmethylamid, (RS)-2-(acetylthio)pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-(acety lth iojpropanoy 1-L-leucy 1-L-fenylalan in-N-methylam id, (RS)-2-(acetylthio)-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-(acetylthio)-2-fenylacetyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-(acetylthio)-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-(acetylthio)-4-fenylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-threonyl-L-fenylalaninmethylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-leucyl-L-tryptofanmethylamid, (RS)-2-merkaptopentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-merkaptopropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-merkapto-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-merkapto-2-fenylacetyl-L-Ieucyl-L-fenylalanin-N- methylamid, (RS)-2-merkapto-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, (RS)-2-merkapto-4-fenylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, N-[N-(merkaptoacetyl)-L-threonyl]-L-fenylalaninmethylamid, N-[N-(merkaptoacetyl)-L-Ieucyl]-L-tryptofanmethylamid.

Sloučeniny obecného vzorce I lze připravit jakoukoliv vhodnou metodou, známou v dané problematice, a/nebo následujícími.postupy, které jsou součástí vynálezu. Je cenné, že pokud je potřeba jednotlivý stereoizomer obecného vzorce I, popsaný syntetický postup lze použít na homochirální výchozí látky a/nebo mohou být izomery odděleny ze směsí pomocí běžných separačních technik (např. HPLC).

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu lze připravit následujícím postupem. Ve vzorcích uvedených dále odpovídají skupiny R¹, R², R³, R⁶, R⁷, R⁸ a X definicím uvedeným výše, pokud není uvedeno jinak. Je cenné, že funkční skupiny, jako je amino, hydroxyl nebo karboxyl, přítomné v různých sloučeninách popsaných dále, které je potřeba zachovat, mohou být před provedením reakce v chráněné formě. V takových případech může být odstranění chránící skupiny posledním krokem konkrétní reakce. Vhodné chránící skupiny pro takové funkční skupiny jsou osobám, vzdělaným v dané problematice, známy. Pro konkrétní detaily viz „Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley Interscience, TW Greene, PGM Wuts.

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I zahrnuje ochránění (například hydrolýzou) sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁷ představuje vhodnou chránící skupinu (např. terc.-butyl nebo acetát).

-7CZ 287780 B6

Je cenné, že pokud je žádán konkrétní stereoizomer obecného vzorce I, může být získán běžnými rezolučními technikami, jako je HPLC. Pokud je to žádoucí, lze nicméně užít pro reakci vhodné homochirální výchozí látky, ze kterých se získá konkrétní stereoizomer obecného vzorce I. To je popsáno v příkladech provedení vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁷ představuje vhodnou chránící skupinu, lze připravit reakcí kyseliny obecného vzorce II:

kde R⁷ a R⁸ odpovídají definicím uvedeným výše, nebo jejího aktivního derivátu, s aminem obecného vzorce III:

Aktivní deriváty kyseliny obecného vzorce II jsou například anhydridy nebo halogenidy, jaká jsou chloridy kyselin.

Reakci lze provést za standardních podmínek pro aminační reakce tohoto typu. Reakci lze provést v rozpouštědle, například inertním organickém rozpouštědle, jako je ether, např. cyklický ether, jako je tetrahydrofuran, amid, např. substituovaný amid, jako je dimethylformamid, nebo halogenovaný uhlovodík, jako je dichlormethan, za nízké teploty, např. -30 °C až laboratorní teplota, jako je -20 °C až 0 °C, nepovinně v přítomnosti báze, např. organické báze, jako je amin, např. triethylamin, nebo cyklický amin, jako je N-methylmorfolin. Pokud je použita kyselina obecného vzorce II, reakce se dále provádí v přítomnosti kondenzačního činidla, například diimidu, jako je N,N‘-dicyklohexylkarbodiimid, s výhodou v přítomnosti triazolu, jako je 1-hydroxybenzotriazol. Alternativně se může kyselina nechat před reakcí s aminem obecného vzorce III reagovat s chloroformátem, například s ethylchloroformátem.

Amin obecného vzorce III lze připravit z kyseliny obecného vzorce IV:

nebo jejího aktivního derivátu reakcí s aminem obecného vzorce V:

-8CZ 287780 B6

a následným odstraněním chránících skupin.

Aktivní deriváty kyseliny obecného vzorce IV jsou například anhydridy nebo halogenidy, jako jsou chloridy kyselin, jak je uvedeno výše.

Aminokyseliny a jejich deriváty, vyobrazené na obecných vzorcích IV a V, lze získat v chirální nebo racemické formě. V chirální formě tvoří asymetrické stavební bloky pro chirální syntézy sloučenin obecného vzorce I. Mnoho z těchto derivátů lze snadno získat z komerčně dostupných výchozích látek pomocí metod, známých osobám, vzdělaným v dané problematice. (Viz „The Practice of Peptide Synthesis“ M. Bodanszk a kol., Springer Verlag, New York, 1984; WO 92/21360).

Sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁷ představuje vhodnou chránící skupinu, lze připravit nukleofilní substitucí sloučenin obecného vzorce VI;

kde R¹⁴ je vhodná odstupující skupina (např. halogen, jako je bromid, nebo alkyl sulfonátové estery, jako je methansulfonát), thiolem obecného vzorce VII:

R⁷SH kde R⁷ je vhodná chránící skupina (např. terc.-butyl nebo acetát), za standardních podmínek, které jsou osobám, vzdělaným v uvedené problematice, známy, jak je uvedeno v příkladech provedení vynálezu ve WO 90/05719.

Thioly obecného vzorce VII lze získat z komerčně dostupných výchozích látek pomocí metod, které jsou osobám, vzdělaným v uvedené problematice, známy. Mnoho thiolů obecného vzorce VII je také komerčně dostupných.

Sloučeniny obecného vzorce VI lze připravit reakcí kyseliny obecného vzorce Vlil:

VIII, kde R¹⁴ a R⁸ odpovídají definicím uvedeným výše (nebo se jedná o jejich vhodně chráněné deriváty), nebo jejího aktivního derivátu s aminem obecného vzorce III za podobných podmínek,

-9CZ 287780 Β6 jako je popsáno u přípravy sloučeniny obecného vzorce I, ve které R⁷ představuje vhodnou chránící skupinu.

Karboxylové kyseliny struktur, vyobrazených na obecných vzorcích II a VIII, lze získat v chirální nebo racemické formě. Mnoho těchto derivátů lze snadno získat z komerčně dostupných výchozích materiálů pomocí metod, které jsou osobám, vzdělaným v uvedené problematice, známy (viz WO 90/05719).

Sloučeniny obecného vzorce I lze také připravit přeměnou jiné sloučeniny obecného vzorce I. Takto například lze připravit sloučeninu obecného vzorce I, kde R¹ je Ct_6 alkyl, hydrogenací (pomocí palladia na uhlí ve vhodném rozpouštědle, jako je alkohol, např. ethanol) sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ je C2_6 alkenyl. Sloučeninu obecného vzorce I, kde R¹ je R¹⁸CO, lze připravit acylací (pomocí vhodného chloridu kyseliny R¹⁰COC1 v přítomnosti báze, jako je triethylamin ve vhodném rozpouštědle, jako je chlorované rozpouštědlo, např. dichlormethan) sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ je H.

Jakákoliv směs konečných produktů nebo meziproduktů se může dělit na základě fyzikálně chemických rozdílů složek známými způsoby na čisté konečné produkty nebo meziprodukty, například chromatografií, destilací, frakční krystalizací nebo tvorbou soli, pokud je to za určitých podmínek vhodné nebo možné.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu vykazují in vitro inhibiční aktivity ve vztahu ke stromelysinu, kolagenáze a gelatináze. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu také vykazují in vitro inhibici uvolňování TNF. Aktivita a selektivita sloučenin může být stanovena pomocí vhodného testu inhibice enzymů, například jak je popsáno v příkladu A, uvedeném dále.

Vynález se také týká způsobu léčení pacientů (včetně člověka a/nebo savců, pěstovaných v mlékárenství, masném nebo kožešnickém průmyslu, nebo jako domácí zvíře), kteří trpí poruchami nebo nemocemi, které souvisí se stromelysinem, jak je popsáno výše, a konkrétněji způsobu léčení, který zahrnuje podávání inhibitorů matrixových metaloproteináz obecného vzorce I jako aktivní složky.

Sloučeninu obecného vzorce I lze použít spolu s dalšími složkami v léčení osteoartritidy a revmatické artritidy a nemoci, které vznikají nadměrnou expresí těchto matrixových metaloproteináz, jako jsou ty, které se nacházejí v určitých nádorových, metastatických buněčných liniích.

Jak je uvedeno výše, sloučeniny obecného vzorce I jsou použitelné v lidské nebo veterinární medicíně, protože jsou aktivní jako inhibitory TNF a MMP. V dalším aspektu se předkládaný vynález týká způsobu managementu (čímž je míněna léčba nebo profylaxe) nemoci nebo stavu, který souvisí s TNF a/nebo MMP u savců, zejména u lidí, přičemž tato metoda zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli. Za tímto účelem může být sloučenina obecného vzorce I použita pro přípravu činidla pro management (čímž je míněna léčba nebo profylaxe) nemoci nebo stavu, který souvisí s TNF a/nebo MMP.

Nemoci nebo stavy, které patří mezi výše uvedené, zahrnují zánět, horečku, kardiovaskulární onemocnění, průjem, prudké koagulační odpovědi, kachexii a anorexii, akutní infekce, šokové stavy, reakce příjemce na transplantát a autoimunní nemoci, a ty, které zahrnují rozpad tkáně, jako je resorpce kostí, zánětlivá onemocnění, dermatologické stavy, růst nádoru, angiogeneze a invaze sekundárních metastáz, zejména revmatická artritida, osteoartritida, periodontóza, gingivitida, vředovitost rohovky, růst nádoru, angiogeneze a invaze sekundárních metastáz.

Pro léčení revmatické artritidy, osteoartritidy a nemocí, které vznikají nadměrnou expresí matrixových metaloproteináz, jako jsou ty, které se nacházejí v určitých metastatických buněčných liniích, nebo jiných nemocí, které jsou způsobeny matrixovýnii metalo

-10CZ 287780 B6 endoproteinázami nebo zvýšenou produkcí TNF, mohou být sloučeniny obecného vzorce I podávány orálně, povrchově, parenterálně, inhalací sprejem nebo rektálně v jednotkových dávkových prostředcích, které obsahují nejedovaté farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvans a vehikula. Pojem parenterální tak, jak se používá v předkládaném vynálezu, zahrnuje subkutánní injekce, intravenózní, intramuskulámí, intrastemální injekce nebo infúzní techniky. Navíc k léčení teplokrevných živočichů, jako jsou myši, krysy, koně, hovězí dobytek, ovce, psi a kočky, jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu účinné při léčení lidí.

Farmaceutický prostředek, který obsahuje aktivní složku podle předkládaného vynálezu, může být ve formě vhodné pro orální použití, například jako tablety, vodné nebo olejovité suspenze, dispergovatelné prášky nebo granule, emulze, tvrdé nebo měkké kapsule nebo sirupy. Prostředky, určené pro orální podávání, mohou být připraveny podle jakékoliv metody, známé v dané problematice pro výrobu farmaceutických prostředků, a takové prostředky mohou obsahovat jedno nebo více agens, vybraných ze sladidel, příchutí, barviv a stabilizačních prostředků, aby se připravily farmaceuticky elegantní a chutné prostředky. Tablety obsahují aktivní složky ve směsi s nejedovatými farmaceuticky přijatelnými excipienty, které jsou vhodné pro výrobu tablet. Tyto excipienty mohou být, například, inertní zřeďovadla, jako je uhličitan vápenatý, uhličitan sodný, laktóza, fosforečnan vápenatý nebo fosforečnan sodný; granulační nebo dezintegrační činidla, například kukuřičný škrob nebo kyselina alginová; pojivá, například škrob, želatina nebo akacia, a maziva, například stearát hořečnatý, kyselina stearová nebo talek. Tablety mohou být nepotažené nebo mohou být potažené známými technikami, které prodlouží dobu rozpadu a absorpce v gastrointestinálním traktu, a tak poskytují prodloužené působení po delší dobu. Například lze použít zpožďující materiál, jako je glyceryl monostearát nebo glyceryl distearát. Tablety lze také potáhnout technikami, popsanými v US patentech č. 4,256,108; 4,166,452 a 4,256,874, aby vznikly osmotické terapeutické tablety s kontrolovaným uvolňováním.

Prostředky pro orální podávání mohou také být ve formě tvrdých želatinových kapslí, ve kterých je aktivní složka smíchána s inertním pevným zřeďovadlem, například uhličitanem vápenatým, fosforečnanem vápenatým nebo kaolinem, nebo jako měkké želatinové kapsle, ve kterých je aktivní složka smíchána s vodným nebo olejovým médiem, například arašídovým olejem, kapalným parafinem nebo olivovým olejem.

Vodné suspenze obsahují aktivní složky ve směsi s excipienty, které jsou vhodné pro výrobu vodných suspenzí. Takové excipienty jsou suspendační činidla, například sodná sůl karboxymethylcelulózy, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, alginát sodný, polyvinylpyrrolidon, tragakantová pryskyřice a akaciová pryskyřice, dispergační nebo zvlhčující činidla mohou být přirozeně se vyskytující fosfatidy, například lecithin, nebo kondenzační produkty alkylenoxidu s mastnými kyselinami, například polyoxyethylenstearát, nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s alifatickými alkoholy s dlouhým řetězcem, například heptadekaethylenoxycetanol, nebo kondenzační produkty ethylenoxidu s částečnými estery, odvozenými od mastných kyselin a hexitolu, jako je polyoxyethylen, s částečnými estery, odvozenými od mastných kyselin a hexitolanhydridů, například polyoxyethylensorbitanmonooleát. Vodné suspenze mohou také obsahovat jeden nebo více stabilizačních prostředků, například ethyl- nebo n-propyl-p-hydroxybenzoát, jedno nebo více barviv, jednu nebo více příchutí a jedno nebo více sladidel, jako je sacharóza nebo sacharin.

Olejové suspenze mohou být vytvořeny suspendováním aktivní složky v rostlinném oleji, například arašídovém oleji, olivovém oleji, sezamovém oleji nebo kokosovém oleji, nebo v minerálním oleji, jako je tekutý parafín. Olejové suspenze mohou obsahovat zahušťovadlo, například včelí vosk, tuhý parafín nebo cetylalkohol. Aby vznikl chutný prostředek pro orální podávání, lze přidat sladidla a příchutě. Tyto prostředky se stabilizují předáním antioxidantů, jako je kyselina askorbová.

Dispergovatelné prášky a granule, vhodné pro přípravu vodné suspenze přidáním vody, obsahují aktivní složku ve směsi s disperzním nebo zvlhčujícím činidlem, suspendaČním činidlem a

-11CZ 287780 B6 jedním nebo více stabilizačními prostředky. Vhodná disperzní nebo zvlhčující činidla a suspendační činidla jsou uvedena výše. Lze také použít sladidla, příchutě a barviva.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu mohou také být ve formě emulzí olej ve vodě. Olejová fáze může být rostlinný olej, například olivový olej nebo arašídový olej nebo minerální olej, například tekutý parafín, nebo jejich směsi. Vhodná emulgační činidla jsou přirozeně se vyskytující pryskyřice, například akaciová pryskyřice nebo tragakantová pryskyřice, přirozeně se vyskytující fosfatidy, například ze sojových bobů, lecithin a estery a částečné estery, odvozené od mastných kyselin a hexitol anhydridů, například sorbitanmonooleát a kondenzační produkty uvedených částečných esterů s ethylenoxidem, například polyoxyethylensorbitanmonooleát. Emulze mohou také obsahovat sladidla a příchutě.

Sirupy lze připravit smícháním se sladidly, například glycerolem, propylenglykolem, sorbitolem nebo sacharózou. Takové prostředky také mohou obsahovat deemulgátor, stabilizační prostředky, příchutě a barviva.

Farmaceutické prostředky mohou být ve formě sterilní injikovatelné vodné nebo oleagenní suspenze. Tato suspenze může být připravena za použití vhodných disperzních nebo zvlhčujících činidel a suspendačních činidel, která byla uvedena výše, způsoby známými v dané problematice. Sterilní injikovatelné prostředky mohou být také sterilní injikovatelné roztoky nebo suspenze v nejedovatém, parenterálně přijatelném ředidle nebo roztoku, například jako roztok 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula patří voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Navíc se jako rozpouštědlo nebo suspendační médium běžně používají sterilní, stálé oleje. Za tímto účelem lze použít jakoukoliv směs stálých olejů, včetně syntetických mono- nebo diglyceridů. Navíc lze pro přípravu těchto injekcí použít mastné kyseliny, jako je kyselina olejová.

Sloučeniny obecného vzorce I lze také podávat ve formě doplňků při rektálním podávání léků. Tyto prostředky lze připravit smícháním léku s vhodným nedráždícím excipientem, který je za laboratorní teploty pevný, ale kapalný při rektální teplotě, a proto v rektu roztaje a uvolní lék. Takový materiál je kakaové máslo a polyethylenglykoly.

Pro povrchové použití se využívají krémy, gely, roztoky nebo suspenze, které obsahují sloučeninu obecného vzorce I. V předkládaném vynálezu zahrnuje pojem povrchové aplikace také použití ústních vod a kloktadel.

Dávkování od 0,05 mg do 140 mg na kilogram tělesné hmotnosti denně je vhodné pro léčení uvedených stavů (2,5 mg až 7 g pacientovi denně). Například zánět lze účinně léčit podáváním 0,01 až 50 mg sloučeniny na kilogram tělesné hmotnosti denně (0,5 mg až 3,5 g pacientovi denně).

Množství aktivní složky, které po smíchání s nosičem vytvoří jednotkovou dávku, bude záviset na léčeném příjemci a konkrétním způsobu podávání. Například prostředek, určený pro orální podávání pro lidi, může tvořit 5 až 95 procent celkového prostředku. Jednotková dávka bude obecně obsahovat 1 mg až 500 mg aktivní složky.

Nicméně je jasné, že konkrétní dávka pro jednotlivého pacienta bude záviset na mnoha faktorech, včetně aktivity konkrétní použité sloučeniny, věku, tělesné hmotnosti, celkovém zdravotním stavu, pohlaví, čase podávání, způsobu podávání, rychlosti vylučování, kombinace léků a prudkosti konkrétní léčené nemoci.

-12CZ 287780 B6

Příklady provedení vynálezu

Následující, nikterak neomezující příklady 1 až 23 ilustrují přípravu sloučenin obecného vzorce I pomocí materiálů včetně následujících meziproduktů. Příklady A až D ilustrují testovací postupy.

V příkladech jsou použity následující zkratky:

DCC dicyklohexylkarbodiimid,

RT laboratorní teplota,

EDC hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu,

THF tetrahydrofuran,

TNFa faktor nekrózy tumoru, a

PMA forbol-13-myristát-12-acetát,

ELISA enzymem spojený imunosorbentní test.

Meziprodukt 1 L-fenylalanin-N-methylamid

DCC (3,02 g) byl přidán do roztoku L-fenylalanin-N-benzylkarbamátu (4,00 g) a N-hydroxysukcinimidu (1,60 g) v suchém THF (35 ml) při 0 °C. Směs byla míchána při této teplotě po dobu 16 h a přefiltrována přes křemelinu. K filtrátu byl přidán methylamin (40% vodný roztok, 5 ml) a směs byla míchána za RT po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zahuštěna za sníženého tlaku a surový produkt (6,01 g) byl rozpuštěn v ethanolu (250 ml). K ethanolovému roztoku byla přidána suspenze 10% palladia na uhlí v H₂O (2 ml). Směs byla míchána v přítomnosti vodíku při 734 kPa po dobu 18 h. Roztok byl přefiltrován přes křemelinu a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku. Odparek byl rozdělen mezi IN kyselinu chlorovodíkovou (110 ml) a dichlormethan (50 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována dichlormethanem (50 ml). Vodná vrstva byla neutralizována 3 N hydroxidem sodným na pH 14 a extrahována dichlormethanem (3 x 50 ml). Organické extrakty byly spojeny, vysušeny (Na₂SO₄), filtrovány a odpařeny na sloučeninu, uvedenou v titulu, ve formě bezbarvého, viskózního oleje, který byl za velmi nízkého tlaku ztužen (2,24 g).

TLC R_f 0,15 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Podobným postupem byl připraven:

Meziprodukt 2 L-tryptofan-N-methylamid

Z L-tryptofan-N-benzylkarbamátu (50 g) ve formě bezbarvého oleje (14,3 g).

TLC R_f 0,30 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Meziprodukt 3

N-[N-(karbobenzyloxy)-L-leucyl]-L-fenylalaninmethylamid

Meziprodukt 1 (1,33 g), L-leucin-N-benzylkarbamát (1,98 g), N-hydroxybenzotriazol (1,21 g) a EDC (1,57 g) byly míchány v suchém THF (30 ml) při 0 °C po dobu 24 h. Byla přidána voda (10 ml) a dichlormethan (10 ml) a organické rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, vodná fáze byla rozdělena mezi zředěnou kyselinu chlorovodíkovou (1 N, 10 ml) a ethylacetát (20 ml). Organická vrstva byla oddělena, promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu (8%, 20 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (20 ml), vysušena (Na₂SO₄), filtrována a odpařena na neprůsvitný gel. Ten byl rozpuštěn v dichlormethanu a odpařen za sníženého tlaku na produkt ve formě bezbarvého oleje (2,78 g).

TLCRfO, 60 (EtOAc).

-13CZ 287780 B6

Podobným postupem byl připraven:

Meziprodukt 4

N-[N-(karbobenzyloxy)-L-leucyl]-L-tryptofanmethylamid Z meziproduktu 2 (11,4 g) ve formě bílé pevné látky (20 g).

TLC R_f 0,46 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Meziprodukt 5

N-[N-(karbobenzyloxy)-L-threonyl]-L-fenylalaninmethylamid

Z L-threonin-N-benzylkarbamátu (4,3 g) ve formě bezbarvého oleje (7,7 g).

TLC R_f 0,31 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Meziprodukt 6 N-(L-leucyl)-L-fenylalaninmethylamid

Meziprodukt 3 (2,78 g) byl rozpuštěn v ethanolu (140 ml) a pak bylo přidáno palladium na uhlí (0,5 g) (jako suspenze ve 3 ml H₂O). Suspenze byla míchána po dobu 16 h pod vodíkovou atmosférou. Směs byla filtrována přes křemelinu, promyta dichlormethanem (20 ml). Odpařením filtrátu byla získána bezbarvá polotuhá látka, která byla rozpuštěna v 1 N kyselině chlorovodíkové (100 ml) a extrahována dichlormethanem (3x50 ml), pak byla neutralizována hydroxidem sodným (3 N, 50 ml) a extrahována dichlormethanem (3 x 50 ml). Organické extrakty byly spojeny, vysušeny (Na₂SO₄), filtrovány a odpařeny na sloučeninu, uvedenou v titulu, ve formě bezbarvé pevné látky (1,66 g).

TLC Rf 0,13 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Meziprodukt 7 N-(L-leucyl)-L-tryptofanmethylamid

Na roztok meziproduktu 4 (2 g) v cyklohexenu (50 ml) a ethanolu (50 ml) se působilo 10% palladiem na uhlí (0,2 g). Směs byla míchána po dobu 2 h za varu pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo bylo po filtraci přes křemelinu odpařeno za sníženého tlaku a odparek byl čištěn flash kolonovou chromatografíí (SiO₂, 10% MeOH, CH₂C1₂) na hygroskopickou bezbarvou pevnou látku (1,05 g).

TLC Rf 0,38 (5% MeOH-CH₂CI₂).

Podobným postupem byl připraven:

Meziprodukt 8 N-(L-threonyl)-L-fenylalaninmethylamid

Z meziproduktu 5 (6,6 g) ve formě bílé pevné látky (3,31 g).

TLC Rf 0,05 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Meziprodukt 9 Acetylmerkaptooctová kyselina

Do ethanolu (20 ml) byl přidán sodík (460 mg) a k roztoku byla přidána kyselina thioloctová (1,50 g). Po 5 min byla přidána kyselina bromoctová (2,78 g) a reakční směs byla míchána po dobu 18 h. Reakční směs byla naředěna dichlormethanem (60 ml) a filtrována přes křemelinu. Filtrát byl odpařen na světle žlutý olej. Surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu (10 ml), filtrován a odpařen na sloučeninu, uvedenou v titulu, ve formě žlutého oleje (2,84 g).

’H NMR (200 MHz; CDC1₃; Ref TMS) 2,41 (s, 3H) a 3,75 (s, 2H).

-14CZ 287780 B6

Meziprodukt 10 Kyselina (RS)-2-brompentanová

K roztoku D,L-nor-valinu (10 g) a bromidu draselného (35,5 g) ve vodné kyselině sírové (1,25 M, 130 ml) byl po částech přidán během 1 h, při 0 °C pevný dusitan sodný (8,8 g). Roztok byl pak ponechán ohřát na RT a míchán po dobu 2 h. Směs byla extrahována dichlormethanem (2x100 ml), spojené extrakty byly vysušeny (MgSO₄) a za sníženého tlaku odpařeny na sloučeninu, uvedenou v titulu (11,53 g), ve formě bezbarvého oleje.

TLC R_f 0,60 (EtOAc).

Podobným způsobem byly připraveny:

Meziprodukt 11 Kyselina (RS)-2-brom-3-methylbutanová

Z D,L-valinu (10 g) ve formě bezbarvého oleje (11,48 g).

TLC R_f 0,54 (EtOAc).

Meziprodukt 12 Kyselina (RS)-2-brom-2-fenyloctová

Z D,L-fenylglycinu (10 g) ve formě světle žlutého oleje (7 24 g).

TLC R_f 0,58 (EtOAc).

Meziprodukt 13 Kyselina (RS)-2-brom-3-fenylpropanová

Z D,L-fenylalaninu (5 g) ve formě světle žlutého oleje (6, 72 g).

TLC R_f 0,58 (EtOAc).

Meziprodukt 14 Kyselina (RS)-2-brom-A-fenylbutanová

Z D,L-homo-fenylalaninu (970 mg) ve formě bílé pevné látky (1,0 g).

TLC R_f 0,13 (EtOAc).

Meziprodukt 15 Kyselina (RS)-2-acetylthio-pentanová

K roztoku meziproduktu 10 (3,0 g) v ethanolu (50 ml) se přidal thiolacetát draselný (2,1 g) a směs se nechala míchat přes noc za RT. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a odparek byl rozdělen mezi vodu (30 ml) a dichlormethan (30 ml). Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem chloridu sodného (30 ml), vysušena (MgSO₄) a odpařena za sníženého tlaku na sloučeninu, uvedenou v titulu (2,23 g), ve formě žlutého oleje.

TLC R_f 0,55 (EtOAc).

Podobným způsobem byly připraveny:

Meziprodukt 16 Kyselina (RS)-2-acetylthio-propanová

Z kyseliny (RS)-2-brompropanové (1,63 g) ve formě žlutého oleje (1,38 g).

TLC R_f 0,4 (5% EtOH-CHCl₃).

Meziprodukt 17 Kyselina (RS)-2-acetylthio-3-methylbutanová

Z meziproduktu 11 (5 g) ve formě světle žlutého oleje (4 g).

TLC Rf 0,5 (EtOAc).

Meziprodukt 18 Kyselina (RS)-2-acetylthio-2-fenyloctová

-15CZ 287780 B6

Z meziproduktu 12 (3,0 g) ve formě žlutého oleje (1,64 g).

TLC Rf0,5 (EtOAc).

Meziprodukt 19 Kyselina (RS)-2-acetylthio-3-fenylpropanová Z meziproduktu 13 (2,0 g) ve formě žlutého oleje (1,41 g).

TLC R_f 0,80 (EtOAc).

ío Meziprodukt 20 Kyselina (RS)-2-acetylthio-4-fenylbutanová Z meziproduktu 14 (860 mg) ve formě oleje (340 mg).

TLC R_fO,35 (EtOAc).

Příklad 1 N-[N-acetylmerkaptoacetyl-L-leucyl]-L-fenylalanin-N-methylamid

Meziprodukt 6(113 mg) a meziprodukt 9 (52 mg) byly rozpuštěny v suchém THF (10 ml), byl přidán N-hydroxybenzotriazol (63 mg), EDC (82 mg) a vzniklý roztok byl míchán po dobu 16 h 20 při 0 °C. Reakční směs byla odpařena za sníženého tlaku a odparek byl rozdělen mezi 1 N kyselinu chlorovodíkovou (20 ml) a ethylacetát (20 ml). Vrstvy byly odděleny a organická fáze byla promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 20 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (20 ml), vysušena (MgSO₄) a odpařena na surový produkt ve formě bezbarvé pevné látky (146 mg). Čištěním flash kolonovou chromatografií (8 x 1,5 cm, EtOAc 25 jako mobilní fáze, nanesení vzorku v CH₂C1₂) se získala sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvé pevné látky (110 mg).

TLC R_f 0,35 (EtOAc).

’HNMR (200 MHz; CDC1₃; Ref TMS): 0,90 (m, 6H), 1,3-1,8 (m, 3H), 2,4 (s, 3H), 2,7 (d, 3H), 30 2,9-3,3 (m, 2H), 3,5 (s, 2H), 4,2 (m, 1H), 4,6 (m, 1H), 6,1 (m, 1H), 6,45 (br.d, 1H), 6,6 (br.d,

1H), 7,1-7,4 (m, 5H).

Podobným způsobem byly připraveny:

Příklad 2 (RS)-2-acetylthio-pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z meziproduktu 15 (300 mg) a meziproduktu 6 (500 mg) ve formě bílé pevné látky (540 mg).

TLC R_f 0,63 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₃H₃₅N₃O₄S [449,6); [ΜΗ⁴] = 450; [MNa⁺] = 472.

Příklad 3 (RS)-2-acetylthio-propanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z meziproduktu 16 (180 mg) a meziproduktu 6 (355 mg) ve formě bílé pevné látky (314 mg).

TLC Rf 0,33 (EtOAc).

C₂₁H_3]N₃O₄S [421,6]; [MH⁺] = 422.

-16CZ 287780 B6

Příklad 4 (RS)-2-acetylthio-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N- methylamid

Z meziproduktu 17 (330 mg) a meziproduktu 6 (553 mg) ve formě bílé pevné látky (570 mg) po rekrystalizaci z diethyletheru.

TLC R_f 0,36, 0,40 (diastereomery) (EtOAc).

C₂₃H₃₅N₃O₄S [449,6]; [MJT] = 450; [MNa⁺] = 472.

Příklad 5 (RS)-2-acetylthio-2-fenylacetyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z meziproduktu 18 (360 mg) a meziproduktu 6 (500 mg) ve formě bílé pevné látky (660 mg).

TLC R_f 0,37 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₆H₃₃N₃O₄S [483,6]; [MH⁺] = 484; [MNa⁺] = 496.

Příklad 6 (RS)-2-acetylthio-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L—fenylalanin-N-methylamid

Z meziproduktu 19 (420 mg) a meziproduktu 6 (553 mg) ve formě bílé pevné látky (410 mg) po rekrystalizaci z diethyletheru.

TLC R_f 0,36, 0,43 (diastereomery) (EtOAc).

C₂₇H₃₅N₃O₄S [497,7]; [ΜΗΊ = 498; [MNa⁺] = 520.

Příklad 7 (RS)-2-acetylthio-4-fenylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z meziproduktu 20 (350 mg) a meziproduktu 6 (500 mg) ve formě bílé pevně látky (640 mg).

TLC R_f 0,39 (5% MeOH-CH₂Cl₂)

C₂₈H₃₇N₃O₄S [511,7]; [MH⁺] = 512; [MNa⁺] = 534

Příklad 8 N-[N-acetylmerkaptoacetyl-L-threonyl)-L-fenylalaninmethylamid

Z meziproduktu 9 (0,48 g) a meziproduktu 8 (1,0 g) ve formě bílé pevné látky (0,83 g)

TLC R_f 0,35 (7 % MeOH-CH₂Cl₂).

*H NMR (200 MHz; CDC1₃ + CD₃OD; Ref TMS): 1,1 (d, 3H), 2,4 (s, 3H), 2,7 (d, 3H), 3,1 (m, 2H), 3,6 (d, 2H), 4,2 (m, 2H), 4,6 (m, 1H), 7,2 (m, 5H).

Příklad 9 N-[N-acetylmerkaptoacetyl-L-leucyl]-L-tryptofanmethylamid

Z meziproduktu 9 (220 mg) a meziproduktu 7 (500 mg) ve formě bílé pevné látky (590 mg).

TLC R_f 0,22 (EtOAc).

C₂₂H₃₀N₄O₄S [446,6]; [MH⁺] = 447.

Příklad 10 N-[N-merkaptoacetyl-L-leucyl)-L-tryptofanmethylamid

Produkt příkladu 1 (16 mg) byl míchán po dobu 2 h za laboratorní teploty pod dusíkovou atmosférou s nasyceným roztokem hydroxidu amonného (200 ml) a methanolem (400 ml).

-17CZ 287780 B6

Roztok byl okyselen zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (2 N) a vzniklá směs byla extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické frakce byly vysušeny (Na₂SO₄), filtrovány a odpařeny na surový produkt ve formě bezbarvé pevné látky (14,2 mg). Čištěním flash kolonovou chromatografíí (1,5 x 10 cm, EtOAc jako mobilní fáze, nanesení vzorku v CH₂C1₂) se získala sloučenina, uvedená v titulu, ve formě bezbarvé pevné látky (6,0 mg).

TLC R_f 0,23 (EtOAc).

‘H NMR (200 MHz; CDC1₃; Ref TMS): 0,90 (d, 3H), 0,93 (d, 3H), 1, 48-1,71 (m, 3H), 1., 86 (t, 1H), 2,74 (d, 3H), 3,02-5,17 (m, 4H), 4,40 (m, 1H), 4,62 (q, 1H), 6,03 (brm, 1H), 6,82 (brd, 1H), 6,99 (br d, 1H) a 7,12-7,37 (m, 5H).

Podobným způsobem byly připraveny:

Příklad 11 (RS)-3-merkaptopentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid Z produktu příkladu 2 (200 mg) ve formě bílé pevné látky (180 mg).

TLC R_f 0,37 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂,H₃₃N₃O₄S [407, 6]; [MH⁺] = 408; [MNa ] = 430.

Příklad 12 (RS)-2-merkapto-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z produktu příkladu 4 (200 mg) ve formě bílé pevné látky (190 mg).

TLC R_f 0,41 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C_2IH₃₃N₃O₃S [407,6]; [MH⁺1 = 408; [MNa⁺] = 430.

Příklad 13 (RS)-2-merkapto-2-fenylacetyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid

Z produktu příkladu 5 (200 mg) ve formě bílé pevné látky (173 mg).

TLC R_f 0,28 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₉H₃₁N₃O₃S [441,6]; [ΜΗΊ = 442; [MNa⁺] = 464.

Příklad 14 (RS)-2-merkapto-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid Z produktu příkladu 6 (202 mg) ve formě bílé pevné látky (185 mg).

TLC R_f 0,28 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₅H₃₃N₃O₃S [455,6]; [MH*J = 456.

Příklad 15 (RS)-2-merkapto-4-fenylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid Z produktu příkladu 7 (150 mg) ve formě bílé pevné látky (138 mg).

TLC R_f 0,20 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₆H₃₅N₃O₃S [469,6]; [ΜΗ*] = 470; [MNa⁺] = 492.

-18CZ 287780 B6

Příklad 16 N-[N-merkaptoacetyl-L-leucyl]-L-tryptofanmethylamid Z produktu příkladu 9 (120 mg) ve formě bílé pevné látky (100 mg). TLC R_f 0,12 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

C₂₀H₂₈N₃O₃S [390,5]; [MH⁺] = 391.

Příklad 17 N-[N-merkaptoacetyl-L-threonyl]-L-fenylalaninmethylamid

Z produktu příkladu 8 (0,3 g) ve formě bílé pevné látky (0,09 g).

TLC R_f 0,09 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

'H NMR (200 MHz; DMSO): 1,0 (d, 3H), 2,5 (d, 3H), 2,8 (m, 3H), 3,0 (dd, IH), 3,2 (m, 2H), 3,9 (m, 1H), 4,2 (dd, 1H), 4,4 (m, 1H), 5,0 (d, 1H), 7,2 (m, 5H), 7,8 (m, 1H), 8,0 (m, 2h).

Příklad 18 (RS)-2-merkaptopropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin- N-methylamid

K roztoku methoxidu sodného (10 mg) v methanolu (1,5 ml) byl přidán produkt příkladu 3 (56 mg, 0,133 mmol) a směs byla míchána za laboratorní teploty po dobu 1 h. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a odparek byl rozdělen mezi dichlormethan (15 ml) a 2 M kyselinu chlorovodíkovou (10 ml). Vodná vrstva byla reextrahována dichlormethanem (10 ml) a spojené extrakty byly vysušeny (Na₂SC>4) a odpařeny za sníženého tlaku na bílou pevnou látku. Čištěním kolonovou chromatografií (SiO₂, 3% methanol v dichlormethanu) byla získána sloučenina, uvedená v titulu (13 mg), jako bílá pevná látka.

C₁₉H₂₉N₃O₃S [379,5]; MS [MLČ] = 380.

TLC R_f 0,32 (5% MeOH-CH₂Cl₂).

Příklady 19-23

Pět následujících sloučenin, které lze vyrobit postupy, analogickými k výše popsaným, jsou látky obecného vzorce I, ve kterých R² = R⁴ = R⁸ = H, R⁵ = CH3, R⁶ = —benzyl, R⁷ = CH3CO, n = 0 a:

R1 = < CH₂SCH₃ (příklad 19).

R1 = < CH₂SOCH₃ (příklad 20).

R1 = < CH₂SO₂CH₃ (příklad 21).

R1 = < CH₂OH (příklad 22).

R1 = < CH₂CH₂OH (příklad 23).

Příklad A Kolagenázová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I působit jako inhibitory kolagenáz byla stanovena postupem podle Cawstona a Barretta, (Anal. Biochem., 99: 340-345, 1979), kdy testovaný 1 mM roztok inhibitoru nebo zředěnější roztok byl inkubován při 37 °C po dobu 16 hodin s kolagenem a kolagenázou (pufrováno 50 mM Tris, pH 7,6, obsahující 5 mM CaCl₂, 0,05% Brij 35, 60 mM NaCl a 0,02 %NaN₃). Kolagen byl acetylovaný ³H nebo ^l4C-kolagen, připravený způsobem podle Cawstona a Murphyho (Methods in Enzymology 80: 711, 1981). Volba radioaktivního značení neovlivňuje schopnost kolagenázy degradovat kolagenový substrát. Vzorky byly centrifugovány, aby se usadil neodbouraný kolagen, a alikvotní podíl radioaktivního roztoku nad pevnou látkou byl odebrán pro test ve scintilačním čítači, aby se stanovilo množství, hydrolýzy. Kolagenázová aktivita v přítomnosti 1 mM roztoku inhibitoru nebo zředěnějšího roztoku byla

-19CZ 287780 B6 porovnána s aktivitou v kontrolním pokusu bez inhibitoru a výsledky jsou uváděny jako koncentrace inhibitoru, která z 50% inhibuje kolagenázu (IC₅o).

Příklad B Strom ely sinová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I působit jako inhibitory stromelysinu byla stanovena postupem podle Cawstona a kol., (Biochem. J. 195: 159-165, 1981), kdy testovaný 1 mM roztok inhibitoru nebo zředěnější roztok byl inkubován při 37 °C po dobu 16 hodin se stromelysinem a ^I4C-acetylovaným kaseinem (pufrováno 50 mM Tris, pH 7,6, obsahující 5 mM CaCl₂, 0,05% Brij 35 a 0,02% NaN₃). Kasein byl ¹⁴C-acetylovaný způsobem podle Cawstona a kol., uvedeným výše. Stromelysinová aktivita v přítomnosti 1 mM roztoku inhibitoru nebo zředěnějšího roztoku byla porovnána s aktivitou v kontrolním pokusu bez inhibitoru a výsledky jsou uváděny jako koncentrace inhibitoru, která z 50 % inhibuje stromelysin (IC50).

Příklad C Gelatinázová inhibiční aktivita

Účinnost sloučenin obecného vzorce I působit jako inhibitory gelatinázy byla stanovena postupem podle Harris & Krane (Biochem. Biophys. Acta 258: 566-576, 1972), kdy testovaný 1 mM roztok inhibitoru nebo zředěnější roztok byl inkubován při 37 °C po dobu 16 hodin s gelatinázou a tepelně denaturovaným ³H nebo ^l4C-acetylovaným kolagenem (pufrováno 50 mM Tris, pH 7,6, obsahující 5 mM CaCl₂, 0,05% Brij 35 a 0,02% NaN₃). ³H nebo ¹⁴C gelatin byl připraven denaturací ³H nebo ^l4C-kolagenu, připraveným způsobem podle Cawstona a Murphyho, uvedeného výše, inkubací po dobu 30 minut při 60 °C. Neodbouraný gelatin byl vysrážen přídavkem kyseliny trichloroctové a centrifugách Gelatinázová aktivita v přítomnosti 1 mM roztoku inhibitoru nebo zředěnějšího roztoku byla porovnána s aktivitou v kontrolním pokusu bez inhibitoru a výsledky jsou uváděny jako koncentrace inhibitoru, která z 50 % inhibuje gelatinázu (IC50).

Příklad D Inhibice produkce TNFa

Účinnost sloučenin obecného vzorce I působit jako inhibitory produkce TNFa byla stanovena následujícím postupem. Testovaný 1 mM roztok inhibitoru nebo zředěnější roztok byl inkubován při 37 °C v atmosféře 5% CO₂ s buňkami U937 (lidský histiosytický lymfom), suspendovanými v médiu RPM1 1640 při hustotě buněk 2 x 10⁶/ml a stimulovanými 50 nM celkovou koncentrací PMA. Po 10 hodinách byl roztok nad sraženinou testován na množství TNFa pomocí komerčně dostupného ELISA testu (R & D Systems). Aktivita v přítomnosti 1 mM roztoku inhibitoru nebo zředěnějšího roztoku byla porovnána s aktivitou v kontrolním pokusu bez inhibitoru a výsledky jsou uváděny jako koncentrace inhibitoru, která z 50 % inhibuje tvorbu TNFa.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou aktivní v jakémkoliv z popsaných testů A až D.

Průmyslová využitelnost

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou průmyslově využitelné pro výrobu prostředků; které se používají pro léčení nemocí, které lze léčit inhibicí metaloproteináz.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Peptidové deriváty obecného vzorce I, kde

R je C₂-6 alkyl, C₂_^ alkenyl, aryl, (Cj-^alkyl)aryl nebo C]_g alkyl-AR⁹, kde A je O, NR⁹nebo S(O)m, kde m = 0 až 2 a každé R⁹ je H, Ci_4 alkyl, aryl nebo (Ci_4alkyl)aryl, přičemž aryl je případně substituovaný fenyl nebo naftyl se substituenty, vybranými ze skupiny, obsahující halogen, trifluormethyl, Ci_ů alkyl, C^alkoxyl a fenyl,

R² je H nebo C i_6 alkyl;

R⁴ je H nebo C[_6 alkyl, případně substituovaný aminoskupinou, arylaminoskupinou, chráněnou aminoskupinou, arylem, di(C|_6alkyl)aminoskupinou, mono(Ci_6alkyl)aminoskupinou, COOH, chráněným karboxylem, karbamoylem, mono(Ci_₆alkyl)karbamoylem nebo di(Ci_6alkyl)karbamoylem, přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše, chráněná aminoskupina je aminoskupina chráněná skupinami,vybranými ze skupiny, obsahující benzyloxykarbonyl, terc.-butoxykarbonyl, acetyl, nebo je ve formě ftalimidu, chráněný karboxyl je karboxyl, chráněný ve formě snadno štěpitelného esteru, vybraného ze skupiny, obsahující methylester, ethylester, benzylester nebo terc.butylester, a R⁵ je H nebo C₁_₆alkyl, nebo je NR⁴R⁵ pyrrolidinyl, piperidinyl nebo morfolinoskupina;

R⁶ je případně substituovaný C₃_6 cykloalkyl, C₃^ cykloalkeny 1, C^ alkyl, benzyl, (Ci_6 alkoxy)benzyl, benzyloxybenzyl nebo 3-indolylmethyl,

Alk je Cj_6 alkyl nebo C₂_6 alkenyl a n = 0 nebo 1;

R⁷ je H nebo R¹⁰CO, kde R¹⁰ je C^ alkyl, (Ci_4alkyl)aryl, C₃_6 cykloalkyl, (C₃.₆cykloalkylJC^ alkyl, C₂_6 alkenyl nebo (C₂_6 alkenyl)aryl, přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše, a

R⁸ je H, C_w alkyl, (C|₄ alkyl)aryl nebo aryl;

přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty nebo hydráty.

-21CZ 287780 B6
2. Peptidové deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, ve které R¹ je alkyl, alkenyl, aryl nebo alkylaryl a R⁷ a R⁸ je každé H, přičemž aryl znamená, jak uvedeno výše.
3. Peptidové deriváty podle nároku 1, kterými jsou

N-[N-(merkaptoacetyl)-L-leucyl]-L-fenyialaninmethylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-leucyl-L-fenylalaninmethylamid, 2-(acetylthio)pentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-(acetylthio)propanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-(acetylthio)-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-(acetylthio)-2-fenylacetyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-(acetylthio)-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-(acetylthio)-4-fenyIbutanoyI-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-threonyl-L-fenylalaninmethylamid, N-(acetylmerkaptoacyl)-L-leucyl-L-tryptofanmethylamid, 2-merkaptopentanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-merkaptopropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-merkapto-3-methylbutanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-merkapto-2-fenylacetyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-merkapto-3-fenylpropanoyl-L-leucyl-L-fenylalanin-N-methylamid, 2-merkapto-4-fenylbutanoyl-L-leucyí-L-fenylalanin-N-methylamid, N-[N-(merkaptoacetyl)-L-threonyl]-L-fenylalaninmethylamid a N-[N-(merkaptoacetyl)-L-leucyl]-L-tryptofanmethylamid.
4. Peptidové deriváty podle kteréhokoliv z předcházejících nároků 1 až 3, ve formě jednotlivého enantiomeru nebo diastereomeru nebo směsi takových izomerů.
5. Farmaceutický prostředek pro použití při léčení, vyznačující se tím, že obsahuje ' peptidové deriváty podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 a fyziologicky přijatelné ředidlo nebo nosič.
6. Použití peptidových derivátů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro výrobu léku pro prevenci nebo léčení stavů, které souvisí s matrixovými metaloproteinázami nebo aktivitou TNF.
7. Použití podle nároku 6, ve kterém stav je vybraný ze zánětu, horečky, kardiovaskulárních onemocnění, průjmu, prudké koagulační odpovědi, kachexie a anorexie, akutních infekcí, šokových stavů, reakcí příjemce na transplantát, autoimunních nemocí, malárie, reperfuzního poškození, meningitidy, lupénky, odbourávání tkání, periodontózy a gingivitidy.
8. Použití podle nároku 6, ve kterém stav je vybraný z nádorů, růstu nádorů, angiogeneze a invaze sekundárních metastáz.
9. Použití podle nároku 6, ve kterém stav je vybraný z revmatické artritidy, osteoartritidy, resorpce kostí nebo roztroušené sklerózy.