CZ284739B6

CZ284739B6 - Diagnostický prostředek pro vyšetření ledvin

Info

Publication number: CZ284739B6
Application number: CZ931472A
Authority: CZ
Inventors: Ernst Nitsch
Original assignee: Laevosan Gesellschaft Mbh
Priority date: 1991-01-23
Filing date: 1992-01-21
Publication date: 1999-02-17
Also published as: US5561226A; HRP940725A2; DE59208333D1; EP0568574A1; AU1170392A; RU2095076C1; CZ147293A3; ATE151437T1; NO932652L; FI933301A0; DE4101910A1; HU9302128D0; SI9210024B; NO932652D0; EP0568574B1; HUT64778A; CA2101267A1; WO1992013005A1; CA2101267C; ES2102491T3

Abstract

Řešení spočívá v diagnostickém prostředku pro vyšetření ledvin, určeném pro parenterální podání, který obsahuje fruktan, získaný extrakcí částí rostlin s obsahem fruktanu vodou s následnou ultrafiltrací vodného roztoku nejprve přes první membránu, zadržující vysokomolekulární uhlohydráty a bílkoviny, avšak propouštějící fruktan, pak se ultrafiltrát podrobí druhé ultrafiltraci na druhé membráně, zadržující fruktan, avšak propouštějící soli, monosacharidy a nižší oligosacharid', a z fysiologického hlediska přijatelný pufr o pH 5,0 až 7,0 v množství, zajišťujících isotonicitu výsledného prostředku.ŕ

Description

Vynález se týká způsobu výroby ve vodě rozpustného fruktanu, vhodného pro vyšetření ledvin. Získaný fruktan je určen pro parenterální podání.

Dosavadní stav techniky

Fruktany, označované také jako polyfruktosany, jsou oligo- a polysacharidy, které jsou tvořeny přímými nebo rozvětvenými řetězci fruktózy, naroubovanými na základní molekulu sacharózy. Podle stupně rozvětvení nebo polymerace se mohou mezi těmito látkami vyskytovat podstatné rozdíly ve fyzikálních vlastnostech, například v rozpustnosti ve vodě. Rada fruktanů se vyskytuje v rostlinách jako zásobní uhlohydráty, především v podzemních částech rostlin, zejména z čeledí složnokvětých, zvonkovitých, liliovitých a travin.

Zvláštní použití mají fruktany v diagnostice při vyšetření ledvin, zejména při stanovení glomerulámí filtrace. Obvykle se k tomuto účelu užívá inulin, fruktan z kořenů různých druhů složnokvětých, jako jsou čekanka, jiřina a topinambur (A.N. Richard, B.B. Westfall, P.A. Bott: Proč. Soc. exp. Biol., N. Y. 32, 1934, 73 a O. Schiick: Examination of Kidney Function, Martinus Nijnhoff Publishers, Boston 1984, str. 9ff). Inulin má tu výhodu, že se po parenterálním podání v organismu ani nemetabolizuje, ani neukládá, nýbrž je vylučován glomeruly ledvin a v ledvinných tubulech již není znovu resobrobán (J. A. Shannon, H.W. Smith: J. clin. Inv. 14 1935, 393). Inulin však má pro každodenní rutinní vyšetřování tu nevýhodu, že je ve vodě jen velmi málo rozpustný a že tedy dochází při delším skladování vodných prostředků sjeho obsahem kjeho vykrystalizování, takže je nutno před podáním delším zahříváním tuto látku znovu převést do roztoku. Při provádění tohoto opatření však je podle doby zahřívání inulin hydrolyzován a popřípadě odbouráván až na fruktózu. Další nevýhoda spočívá v tom, že při úplném rozpuštění zůstávají v prostředcích zbytky nerozpuštěného inulinu, které nejsou snadno zjistitelné a které mohou o injekčním podání způsobit těžké oběhové komplikace. V rakouském patentovém spisu č. 304 769 se proto navrhuje nahradit inulin jinými ve vodě rozpustnými fruktany, například ze zásobních orgánů rostlin z čeledi liliovitých, trav a z čeledi Amaryllidaceae, jde například o sinistrin a phlein. Tyto látky jsou podobně jako inulit tvořeny 10 až 40 fruktózovými jednotkami, což odpovídá celkové molekulové hmotnosti v rozmezí 1600 až 6500.

Podle starší literatury, například O. Schmiedeberg: Hoppe Seyler’s Z. physiol. Chem. 3, 1979, 112 a G. Klein: Handbuch der Pflanzenanalyse, Springer 1932, 1. díl. str. 866-873, je možno tyto fruktany získat z vodných extraktů příslušných orgánů rostlin po čištění srážecími činidly, například solemi, olova, opakovaným srážením při použití organických rozpouštědel, jako jsou methanol, ethanol nebo aceton. Podle svrchu uvedeného rakouského patentového spisu se navrhuje nahradit jedovaté soli těžkých kovů srážením uvedenými rozpouštědly v kyselém prostředí při pH 1,0 až 3,0. Při tomto postupu je však nutno počítat s částečným odbouráním snadno hydrolyzovatelných řetězců fruktanu a tím se snížením molekulové hmotnosti a se snížením celkového výtěžku. Mimoto je při provádění všech dosud známých postupů nutno zachovávat nákladná opatření oproti vznícení a explozi a je nutno počítat také s nežádoucími zbytky rozpouštědel ve výsledném produktu.

Vynález si klade za cíl navrhnout způsob výroby fruktanů, při němž by se nepoužívalo žádné organické rozpouštědlo ani jedovaté soli těžkých kovů, současně by mělo být možné dosáhnout lepších výtěžků. Mimoto by mělo být možné tímto způsobem také zajistit odstranění pyrogenních látek tak, aby bylo možno použít také kontaminovaný a infikovaný surový výchozí materiál.

- 1 CZ 284739 B6

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří způsob výroby ve vodě rozpustného fruktanu, obsahujícího 10 až 40 fruktózových jednotek a určeného jako složka diagnostického prostředku pro vyšetření ledvin, při němž se části rostlin s obsahem fruktanu extrahují vodou. Postup spočívá v tom, že se vodný extrakt, obsahující fruktan, podrobí ultrafiltraci nejprve přes první membránu, zadržující látky od molekulové hmotnosti 30 000 až 100 000, například vysokomolekulámí uhlohydráty a bílkoviny, avšak propouštějící fruktan, a pak se filtrát podrobí ultrafiltraci na druhé membráně, zadržující látky od molekulové hmotnosti 800 až 2000, která propouští soli, monosacharidy a nižší oligosacharidy, avšak zadrží fruktan.

Takto získaný fruktan je prostý pyrogenních látek i organických rozpouštědel. Materiál, v němž se nachází fruktan a který byl zadržen druhou membránou, je možno přímo použít jako složku diagnostického prostředku, nebo také dále čistit obvyklým způsobem a fruktan izolovat. To je možno s výhodou uskutečnit odpařením roztoku, popřípadě po předběžném čištění na iontoměničích.

Pro první ultrafiltraci se při čištění vodného extraktu s obsahem fruktanu s výhodou užije taková membrána, která zadrží látky s molekulovou hmotností 30 000 až 100 000, zejména 30 000 až 50 000. Na takové membráně dojde k účinnému zdržení bílkovin, polygenních látek a vysokomolekulámích polysacharidů. Filtrát pak obsahuje extrahovaný fruktan spolu s nízkomolekulárními balastními látkami. Při druhé ultrafiltraci se s výhodou užijí takové membrány, které zadrží látky s molekulovou hmotností v rozmezí 800 až 2 000, zejména 1000 až 1500. Na takových membránách dojde k zadržení fruktanu, který má být oddělen, avšak nežádoucí nízkomolekulámí látky, jako soli, mono- a oligomery uhlohydrátů apod. jsou odstraněny ve filtrátu. Tímto způsobem je možno získat fruktan s vysokou čistotou a v dobrém výtěžku například po diafiltraci a odpaření. Získaný produkt je možno popřípadě ještě dále čistit činidly pro odbarvení a/nebo odstraněním zbytků solí známým způsobem.

Vhodnými ultrafiltračními membránami jsou například v případě první membrány membrána Rohrmembran FP 100 (Paterson, Candy, Velká Británie) a v případě druhé membrány membrána Spiralmembrane Desal GE 4026 (Desalination Systems, Ca., USA).

Takto získaný čistý roztok fruktanu je možno přímo upravit na požadovanou koncentraci a plnit do sterilizovatelných obalů, jako jsou ampule nebo infuzní láhve, neboje možno roztok šetrným způsobem odpařit a uchovat materiál pro pozdější použití. Ze šetrných způsobů odpaření je možno uvést například lyofilizaci, odpařování ve vakuu nebo také sušení rozprašováním.

Diagnostický prostředek podle vynálezu obsahuje kromě fruktanu, získaného svrchu uvedeným způsobem, ještě z fyziologického hlediska přijatelný pufr s osmotickým účinkem. Hodnota pH tohoto pufru se má pohybovat v rozmezí 5,0 až 7,0 a s výhodou v rozmezí 6,0 až 6,5. Pufr má být v diagnostickém prostředku obsažen v takovém množství, které je nutné k získání roztoku, izotonického s krví, tj. s hodnotou 250 až 350, zejména 280 až 320 mOsmol/kg H₂O.

Z pufrů, přijatelných z fyziologického hlediska, je podle vynálezu možno použít směsi slabých kyselin, zejména slabých organických kyselin a jejich solí s alkalickými kovy nebo kovy alkalických zemin. Výhodnými kyselinami jsou kyselina octová a mléčná a sodné soli těchto kyselin. Podle vynálezu je také možné užít jako pudry, přijatelné z fyziologického hlediska, směsi slabých bází, zejména organických bází a jejich solí, s výhodou jejich hydrochloridů. Vhodnou bází je triethanolamin a bazické aminokyseliny.

Diagnostický prostředek podle vynálezu pro vyšetření funkce ledvin je na rozdíl od známých prostředků, které jsou tvořeny sterilizovanými vodnými roztoky Inulinu nebo jiných ve vodě

-2CZ 284739 B6 rozpustných fruktanů, bez dalších přísad (např. obsahují 10 g inulinu/100 ml nebo 25 g sinistrinu/100 ml) výjimečně dobře snášen a je také dlouhodobě stálý.

V případě známých diagnostických prostředků může při rychlém podání dojít ke vzniku bolestí nebo k hemolýze. Mimoto se ukázalo, že v těchto systémech dochází v průběhu sterilizace teplem a při delším skladování v teplém prostředí k poklesu hodnoty pH, což vede k silnému odbourávání fruktanu.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 příprava fruktanu z česneku (sinistrin) kg běžně dodávaného suchého česnekového granulátu se rovnoměrně promíchá s roztokem 10 g siřičitanu sodného ve 30 1 vody, zbavené solí, a materiál se nechá bobtnat 24 hodin v uzavřené nádobě. Pak se materiál extrahuje v perkolátoru vody, zbavenou solí, při průtoku 4 litry/h tak dlouho, až se získá 1001 filtrátu. Tento filtrát se pak podrobí ultrafiltraci přes membránu, zadržující látky s molekulovou hmotností nad 50 000 (Wickelmodul 1) a filtrát se z nádoby, v níž byl zachycen, vede na další ultrafiltrační membránu (Wickelmodul 2), zachycující látky s molekulovou hmotností vyšší než 1 000. Po průchodu veškerého množství materiálu modulem 1 se tento modul promyje 5 litry vody a materiál, zadržený na této membráně se odloží. Materiál, zadržený na membráně modulu 2 se podrobí diafiltraci za současné náhrady odfiltrovaného objemu vodou, zbavenou solí, tak dlouho, až je vodivost filtrátu nižší než 200 pS/cm. Všechny filtráty, které prošly membránou modulu 2 a obsahují soli, mono- a oligomerní uhlohydráty a další nízkomolekulámí látky, se odloží. Podíl, zadržený na této membráně, byl tvořen 55 kg již velmi čistého roztoku s obsahem 7,4 % fruktanu, což odpovídá 4,07 kg suché hmoty. K dalšímu čištění pro odstranění stop pachů a barviv se k materiálu přimísí 50 g aktivního uhlí a po době působení 1 hodina se aktivní uhlí odfiltruje a filtr se promyje. Filtrát, prostý pachů a barviv, se odpaří ve vakuu až na sirupovitou konzistenci a pak se suší v nádobách v sušicí peci ve vakuu při teplotě 80 °C za vzniku bílé pěnovité hmoty.

Výtěžek po mletí je 3,95 kg

Specifická otáčivost /alfa/²⁰ _D= 39,0 ° (c = 10, voda).

Molekulová hmotnost Mw (podle chromatografíe na gelu) = 3650. Při zkouškách na králících podle doporučení evropského lékopisu bylo prokázáno, že materiál neobsahuje pyrogenní látky.

Příklad 2

Příprava fruktanu z červené mořské cibule (sinistrin) kg běžně dodávané mořské cibule v sušené formě bylo nahrubo umleto a extrakt a dvojí ultrafiltrace byla prováděna stejným způsobem jako v příkladu 1. Na druhé membráně bylo zadrženo 49 kg slabě červeně zbarveného roztoku s obsahem 9,0 % fruktanu, což odpovídá

4,41 kg suché hmoty.

-3 CZ 284739 B6

K dalšímu čištění se nechá roztok projít vrstvou směsi iontoměničů, tvořenou 200 ml silně kyselého kationtoměniče v řT-formě a 200 ml středně bazického aniontoměniče v OH-formě. Roztok, který je po průchodu touto vrstvou bezbarvý, se odpařuje ve vakuu stejným způsobem jako v příkladu 1.

Výtěžek po umletí je 4,2 kg.

Specifická otáčivost /alfa/²°o = -39,5 ° (c = 10, voda).

Molekulová hmotnost Mw (stanovená chromatografií na gelu) je 3 820.

Při zkouškách na králících podle doporučení evropského lékopisu je možno prokázat, že materiál neobsahuje pyrogenní látky.

Příklad 3

Výroba izotonického diagnostického prostředku pro vyšetření ledvin pro parenterální podání s obsahem laktátového pufru

13,4 g roztoku laktátu sodného (50 % DAB 9) se smísí se 700 ml vody pro injekční podání, za míchání se přidá 250 g fruktanu z česneku, připraveného podle příkladu 1, až do úplného rozpuštění a přidáním 6,8 ml 0,1 N roztoku hydroxidu sodného se pH upraví na 6,30.

Nakonec se objem roztoku doplní destilovanou vodou na 1 litr.

Roztok se sterilizuje přes membránový filtr s průměrem pórů 0,2 μτη a pak se plní po 20 ml do ampulí, které se uzavřou a pak 8 minut sterilizují při teplotě 121 °C. Tyto ampule obsahují bezbarvý, sterilní, pyrogenních látek prostý roztok, který po nitrožilním podání u člověka ani jiných živočichů nevyvolává bolest ani jiné reakce a odpovídá všem požadavkům na kvalitu obdobných roztoků.

Osmolarita (stanovená podle teploty mrznutí): 311 mOsmol/kg H₂O

Příklad 4

Příprava izotonického diagnostického prostředku pro vyšetření ledvin pro parenterální podání s obsahem acetátového pufru

8,0 g trihydrátu octanu sodného se smísí se 700 ml destilované vody pro injekční podání, za míchání se přidá 250 g fruktanu z mořské cibule, získaného způsobem podle příkladu 2, až do úplného rozpuštění a přidání 2,0 ml 1 M hydroxidu sodného se pH upraví na 6,30.

Nakonec se objem vzniklého roztoku doplní destilovanou vodou na 1 litr.

Pak se roztok sterilizuje průchodem přes membránový filtr s průměrem póru 0,2 pm a plní po 20 ml do ampulí, které se uzavřou a pak sterilizují 8 minut při teplotě 121 °C. Ampule obsahují bezbarvý sterilní roztok bez obsahu pyrogenních látek, který při nitrožilním podání člověku nebo jiným živočichům nevyvolá bolest ani jinou reakci a který splňuje všechny požadavky na kvalitu obdobných roztoků.

Osmolalita (stanovením teploty mrznutí): 303 mOsmol/kg H₂O

-4CZ 284739 B6

Určení trvanlivosti roztoku

Aby bylo možno prokázat podstatně zlepšenou stálost a skladovatelnost roztoku, získaného ve svrchu uvedených příkladech, byly roztoky z příkladů 3 a 4 a také srovnávací roztok s obsahem 250 mg fruktanu z mořské cibule/litr bez přidání soli a pufru naplněny po 20 ml do ampulí, které byly uzavřeny a sterilizovány 8 minut při 121 °C a pak uloženy při teplotě 50 °C, aby bylo možno prokázat chování roztoků při delší době skladování.

Ihned po sterilizaci a pak po 5, 15, 30 a 45 dnech byla v každé skupině ampulí stanovena hodnota pH, množství volné fruktózy (hlavního produktu hydrolýzy fruktanu) a střední molekulová hmotnost Mw pomocí chromatografie, zadržující látky s určitou hodnotou molekulové hmotnosti (SEC). Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce, z níž je zřejmé, že se kontrolní roztoky podstatně změnily, kdežto u roztoků, získaných způsobem podle vynálezu, nedošlo k téměř žádným změnám.

Tabulka

údaj	dny 50 °C	srovnávací roztok	roztok příkl. 3	roztok příkl. 4
PH	0	6,8	7,0	6,9
	5	5,6	7,0	7,0
	15	4,9	7,0	6,9
	30	4,4	6,9	6,8
	45	4,1	6,8	6,8
volná fruktóza	0	0,43	0,24	0,25
mg/ml	5	1,42	0,24	0,25
	15	7,36	0,40	0,41
	30	18,7	0,70	0,83
	45	30,4	1,0	1,05
střední molekulová	0	4400	4450	4420
hmotnost Mw	5	4290	4450	4430
	15	3870	4340	4380
	30	2740	4320	4340
	45	1520	4280	4260

Příklad 5

Způsob výroby fruktanu z Cordyline australis kg sušených dřevěných stonků Cordyline australis, čeleď Asteliaceae, Asparagales, se hrubě umele a extrakce a ultrafiltrace se pak provádí způsobem, uvedeným v příkladu 1. Zadržený podíl je tvořen 45,0 kg žlutavého roztoku, obsahujícího 8,1 % hmotnostních fruktanu, což odpovídá 3,65 kg sušiny.

K dalšímu čištění se roztok nechá projít systémem, tvořeným 200 ml silně kyselého kationtoměniče v H⁺-formě a středně silným bazickým aniontoměničem v OH-formě. Tímto způsobem se získá bezbarvý roztok, který se odpaří ve vakuu stejným způsobem jako v příkladu 1.

Po mletí je celkový výtěžek takto připraveného fruktanu 3,10 kg.

Specifická otáčivost /alfa/²°D = -39,2° (c = 10, voda).

Molekulová hmotnost (stanovená chromatografií na gelu) = 3690.

-5CZ 284739 B6

Při testech na králících podle evropského lékopisu je možno prokázat, že sloučenina nemá pyrogenní účinky.

Příklad 6

Způsob výroby fruktanu z Agáve potatorum

V orgánech různých druhů Agáve je možno nalézt vysoké koncentrace fruktanu s vysokou rozpustností ve vodě, odpovídající požadavkům vynálezu. Jako příklad bude uvedeno zpracování šťávy, vylisované z Agáve potatorum, čeleď Agavaceae, Asparagales.

Čerstvě vylisovaná šťáva z rozdrcených stonů Agáve potatorum původem z Mexika se za účelem koncentrace smísí s 25 % hmotnostními ethanolu. 45,5 kg zfiltrovaného čirého slabě zbarveného roztoku, odpovídajícího 10 kg materiálu, se pak přímo podrobí dvojí ultrafiltraci stejně jako v příkladu 1. Zadržený podíl je tvořen 6,45 kg téměř bezbarvého roztoku s obsahem 12,4% fruktanu, což odpovídá 8,0 kg sušiny.

Výtěžek po mletí je 7,55 kg.

Specifická otáčivost /alfa/²² _D = - 38,9° (c = 10, voda).

Molekulová hmotnost (chromatografie na gelu) = 3720.

Při zkouškách na králících podle evropského lékopisu je možno prokázat, že materiál je prostý pyrogenních látek.

Příklad 7

Způsob výroby izotonického diagnostického prostředku pro vyšetření ledvin s obsahem triethanolaminu jako pufru

9,7 g triethanolaminu se smísí se 700 ml destilované vody pro injekční podání, 250 g fruktanu z Cordyline australis z příkladu 5, směs se míchá až do úplného rozpuštění a pak se pH upraví na 7,0 přidání, 58,5 ml 1M kyseliny chlorovodíkové.

Nakonec se roztok doplní destilovanou vodou na objem 1 litr.

Roztok se ke sterilizaci zfiltruje přes membránový filtr s průměrem otvorů 0,2 mikrometrů a po 20 ml se plní do ampulí, které se po uzavření sterilizují 8 minut při teplotě 121 °C. Získá se bezbarvý, pyrogenů prostý sterilní roztok, kteiý je po nitrožilním podání u lidí i jiných živočichů snášen bez bolesti a bez reakce a splňuje všechny požadavky na kvalitu.

Osmolarita roztoku, stanovená na základě teploty tuhnutí, je 305 mOsmol/kg vody.

Příklad 8

Způsob výroby izotonického prostředku pro vyšetření ledvin s obsahem lysinu jako pufru

9,50 g lysinu se smísí se 700 ml destilované vody pro injekční podání, 250 g fruktanu z Agáve potatorum z příkladu 6 a směs se míchá až do úplného rozpuštění a upraví na pH 7,0 přidáním

60, 5 ml 1M kyseliny chlorovodíkové. Pak byl roztok doplněn destilovanou vodou na objem litr.

-6CZ 284739 B6

Roztok byl ke sterilizaci zfíltrován membránovým filtrem s průměrem otvorů 0,2 mikrometrů a plněn po 20 ml do ampulí, které byly po uzavření sterilizovány 8 minut při teplotě 121 °C. Byl získán bezbarvý, pyrogenů prostý, sterilní roztok, který byl po nitrožilním podání lidem a jiným živočichům bez reakce a bez bolesti snášen a odpovídal všem požadavkům na kvalitu.

Osmolarita roztoku, stanovená na základě teploty tuhnutí, je 312 mOsmo/kg vody.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby ve vodě rozpustného fruktanu, obsahujícího 10 až 40 fruktózových jednotek a určeného jako složka diagnostického prostředku pro vyšetření ledvin, při němž se části rostlin s obsahem fruktanu extrahují vodou, vyznačující se tím, že se vodný extrakt, obsahující fruktan, podrobí ultrafiltraci nejprve přes první membránu, zadržující látky od molekulové hmotnosti 30 000 až 100 000, například vysokomolekulámí uhlohydráty a bílkoviny, avšak propouštějící fruktan, a pak se filtrát podrobí ultrafiltraci na druhé membráně, zadržující látky od molekulové hmotnosti 800 až 2000, která propouští soli, monosacharidy a nižší oligosacharidy, avšak zadrží fruktan.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se jako první membrána pro ultrafiltraci užije membrána, zadržující látky od molekulové hmotnosti 30 000 až 50 000.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se jako druhá membrána pro ultrafiltraci užije membrána, zadržující látky od molekulové hmotnosti 1000 až 1500.
4. Způsob podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se materiál, zadržený na druhé ultrafiltrační membráně, dále čistí při použití aktivního uhlí a/nebo iontoměniče.
5. Způsob podle některého z nároků laž4, vyznačující se tím, že se získaný roztok s obsahem fruktanu odpaří a odparek se vysuší.
6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, žesepH produktu upraví na hodnotu 6,0 až 6,5.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, žesekproduktu přidává pufr, tvořený fyziologicky přijatelnou organickou kyselinou a její solí s alkalickým kovem nebo kovem alkalických zemin.
8. Způsob podle nároků 6a 7, vyznačující se tím, žesek produktu přidá pufr, obsahující kyselinu mléčnou a mléčnan sodný.
9. Způsob podle nároků 6a 7, vyznačující se tím, žesek produktu přidá pufr, obsahující kyselinu octovou a octan sodný.
10. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, žesek produktu jako pufr přidá směs organické báze, přijatelné z fyziologického hlediska, a její soli nebo jejich solí.
11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že se kproduktu přidá pufr, obsahující triethanolamin a jeho hydrochlorid.

-7CZ 284739 B6
12. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že se kproduktu přidá pufr, obsahující bazickou aminokyselinu a její hydrochlorid.
13. Způsob podle nároku 10 nebo 12, vyznačující se tím, že se k produktu jako 5 bazická aminokyselina přidá lysin a/nebo omithin.
14. Způsob podle nároků 6 až 13, vyznačující se tím, že se pufr k produktu přidává v koncentraci, která zajistí výslednému roztoku fruktanu osmotický tlak v rozmezí 250 až 350 mOsmol/kg H₂O.
15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že se osmotický tlak vodného roztoku fruktanu přidáním pufru upraví na hodnotu v rozmezí 280 až 320 mOsmol/kg H₂O.