CZ282401B6 - Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií - Google Patents
Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií Download PDFInfo
- Publication number
- CZ282401B6 CZ282401B6 CZ942192A CZ219294A CZ282401B6 CZ 282401 B6 CZ282401 B6 CZ 282401B6 CZ 942192 A CZ942192 A CZ 942192A CZ 219294 A CZ219294 A CZ 219294A CZ 282401 B6 CZ282401 B6 CZ 282401B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fluorochrome
- making
- indicators
- pathogenic bacteria
- colonies
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/20—Coumarin derivatives
- C12Q2334/22—4-Methylumbelliferyl, i.e. beta-methylumbelliferone, 4MU
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká způsobu provedení konfirmačních testů pomocí fluorochromních substrátů u indikátorů fekál-ního znečištění či potenciálně patogenních bakterií spočívající v tom, že se na navhčenou absorpční podložku nasycenou fluorochromním substrátem přiloží ze sektivního media vykultivovaný membránový filtr s kolo-niemi mikroorganismů, který se po kultivaci 1 až 4 h při optimální teplotě ozáří ÚV paprsky o vlnové délce 350 až 370 nm.ŕ
Description
Způsob provedení konfirmačních testů pomocí fluorochromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu provedení konfirmačních testů pomocí fluorochromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií, jehož účelem je potvrzení taxonomické kategorie mikroorganismů, a tak přesnější specifikace hygienicky významného bakteriálního znečištění.
Dosavadní stav techniky
Dosud běžný způsob identifikace mikroorganismů je založen na sledování jejich morfologických, kultivačních, fyziologických, biochemických, ekologických, popřípadě dalších významných vlastností.
V případě bakterií, které jsou morfologicky obtížně rozeznatelné nebo zcela nerozeznatelné, je při jejich identifikaci kladen důraz pouze na specifikaci jejich fyziologických a biochemických vlastností, přitom je třeba pracovat s čistými kulturami mikroorganismů, jejichž příprava bývá obtížná.
Tento způsob identifikace má řadu nevýhod. Je značně zdlouhavý, neboť trvá déle než týden, takže hrozí nebezpečí z prodlení při eventuálních hygienických závadách. Navíc je pracovně velmi náročný, neboť k přesnému provedení identifikace jednoho bakteriálního kmene podle současných vědeckých poznatků je třeba provést až 70 i více testů na různých kultivačních médiích. Mimo to vyžaduje i vysoce kvalifikovaný a dobře zapracovaný personál.
Pro běžnou praxi není třeba ke klasifikaci hygienických či jiných závad provádět přesnou identifikaci jednotlivých kultur mikroorganismů, neboť plně postačí provést konfirmační testy s kulturami, izolovanými ze selektivních médii. Na základě jejich výsledků lze zařadit mikroorganismy s vysokou spolehlivostí do příslušné taxonomické kategorie (druh, rod), nebo pouze do určité skupiny mikroorganismů (např. „koliformní bakterie“). Jako konfirmační testy se běžně používají biochemické reakce. Při identifikaci mikroorganismů k dosažení vyššího stupně spolehlivosti je nutno provádět současně několik testů vedle sebe.
Podstata vynálezu
Tyto nedostatky řeší způsob dle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se předem připraví průmyslově vhodná absorpční podložka a nasytí se pro příslušný mikroorganismus specifickým fluorochromním substrátem. Takto připravená podložka se uchovává v suchém stavu, zatavená do nepropustné fólie, při teplotě do (menší než) 4 °C, za nepřístupu světla.
Těsně před použitím se podložka vloží do Petriho misky, navlhčí se, potom se na ni těsně přiloží membránový filtr s koloniemi, vykultivovanými na selektivním médiu, a kultivuje se 1 až 4 hodiny při teplotě, která je optimální pro příslušný mikroorganismus. Výsledek testu se odečítá po skončení kultivace pod zdrojem UV záření o vlnové délce 366 nm.
Presumptivní kolonie sledovaného mikroorganismu vykazují modrou fluorescenci.
Způsob podle vynálezu je univerzální, neboť umožňuje stanovení presumptivních kolonií určitého mikroorganismu, předtím vykultivovaného na libovolném selektivním médiu, a
-1 :í nevyžaduje bezprostřední přípravu ekonomicky nákladného a pracného média s fluorochromním substrátem.
Navrhované podložky mohou být kdykoliv k dispozici do uplynutí jejich expirační doby.
Kromě UV lampy způsob podle vynálezu nevyžaduje žádné mimořádné laboratorní vybavení.
Hlavní předností způsobu podle vynálezu je možnost přímého kvantitativního stanovení sledovaného mikroorganismu a určení poměru počtu jeho kolonií k počtu kolonií jiných taxonomických kategorií.
Příklady provedení
Příklad 1
Stanovení počtu kolonií presumptivní Escherichia coli v pitné vodě.
Ve vzorku pitné vody se stanoví počet kolonií termotolerantních koloformních bakterií na „mFC“ médiu metodou membránových filtrů. Po kultivaci se určí počet laktózo-pozitivních kolonií. Potom se membránový filtr přenese na destilovanou vodou navlhčenou absorpční podložku, obsahující fluorochromní substrát, t.j. 4-methylumbelliferyl-B-D-glukuronid, (MUG), která je umístěna ve sterilní Petriho misce o průměru 6 cm. Po uzavření víčkem se Petriho miska vloží na 4 hodiny do termostatu, vytemperovaného na inkubační teplotu 37 ±1 °C. Po kultivaci se odklopí víčko Petriho misky a v zatemněné místnosti se při osvětlení zdrojem UV o vlnové délce 366 nm stanoví celkový počet světle modře fluoreskujících kolonií, t.j. presumptivní Escherichia coli.
Příklad 2
Stanovení poměru mezi počtem kolonií koliformních bakterií a počtem presumptivní Escherichia coli.
Ve vzorku pitné vody je stanovován počet kolonií koliformních bakterií na Endo agaru metodou membránových filtrů. Po kultivaci a provedení cytochromoxidázového testu se určí počet laktózopozitivních kolonií, t.j. koliformních bakterií.
Potom se membránový filtr přenese na absorpční podložku a postupuje se dále, jak je uvedeno v příkladu 1.
Modře fluoreskující kolonie indikují počet presumptivní Escherichia coli.
Z poměru počtu koliformních bakterií a počtu presumptivní Escherichia coli lze usuzovat na původ bakteriálního znečištění.
Příklad 3
Provedení konfirmačního testu a stanovení enterokoků.
Enterokoky se stanoví metodou membránových filtrů, které jsou kultivovány na absorpčních podložkách, nasycených tekutým médiem (FS médiem). Po kultivaci se membránový filtr
-2CZ 282401 B6 přenese na novou absorpční podložku, nasycenou kultivačním médiem, obsahujícím fluorochromní substrát, t.j. 4-methyl-umballiferyl-D-glukosid. Dále se postupuje, jak je uvedeno v příkladu 1.
Po dodatečné kultivaci se určí celkový počet kolonií světle modře fluoreskujících.
Průmyslová využitelnost
Způsob provedení konfirmačních testů podle vynálezu lze využít při posuzování hygienické závadnosti pitné nebo povrchové vody.
Claims (1)
- Způsob provedení konfirmačních testů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií pomocí fluorochromních substrátů společně s použitím UV paprsků přímo na koloniích, vykultivovaných na membránových filtrech, vyznačující se tím, že se ze selektivního kultivačního média přeloží vykultivovaný membránový filtr s koloniemi na navlhčenou speciální podložku, nasycenou fluorochromním substrátem, a po dodatečné kultivaci 1 až 4 hodiny při teplotě, optimální pro sledovanou skupinu mikroorganismů, se ozáří UV paprsky o vlnové délce 350 až 370 nm.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ942192A CZ282401B6 (cs) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií |
| PCT/CZ1995/000020 WO1996007755A2 (en) | 1994-09-09 | 1995-09-11 | Method of performing confirmatory tests by fluorochrome substrates in indicators of fecal contamination or potentially pathogenic bacteria |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ942192A CZ282401B6 (cs) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ219294A3 CZ219294A3 (en) | 1996-03-13 |
| CZ282401B6 true CZ282401B6 (cs) | 1997-07-16 |
Family
ID=5464527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ942192A CZ282401B6 (cs) | 1994-09-09 | 1994-09-09 | Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ282401B6 (cs) |
| WO (1) | WO1996007755A2 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112019001357A2 (pt) | 2016-08-12 | 2019-04-30 | Coloplast As | aparelho de ostomia |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5817598B2 (ja) * | 1979-10-31 | 1983-04-08 | 味の素株式会社 | 微生物の迅速検出方法 |
| NO165730C (no) * | 1982-11-01 | 1991-04-03 | Miles Inc | Fremgangsmaate for paavisning og isolering av en mikroorganisme. |
| US4617265A (en) * | 1984-09-19 | 1986-10-14 | Board Of Regents, University Of Texas System | Colony blot assay for enterotoxigenic bacteria |
| GB2178847A (en) * | 1985-08-07 | 1987-02-18 | Philips Electronic Associated | Testing for the presence of living organisms at the surface of an object |
| EP0470172B1 (en) * | 1989-04-27 | 1995-06-28 | BioControl Systems, Incorporated | Precipitate test for microorganisms |
-
1994
- 1994-09-09 CZ CZ942192A patent/CZ282401B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-09-11 WO PCT/CZ1995/000020 patent/WO1996007755A2/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1996007755A3 (en) | 1996-07-25 |
| WO1996007755A2 (en) | 1996-03-14 |
| CZ219294A3 (en) | 1996-03-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3043063B2 (ja) | 微生物のための沈澱テスト | |
| Chang et al. | Proportion of beta-D-glucuronidase-negative Escherichia coli in human fecal samples | |
| EP0386051B1 (en) | Rapid process for detecting coliform microorganisms | |
| CA1125152A (en) | Selective determination of viable somatic and microbial cells | |
| CN1908186B (zh) | 一种测定细菌总数的方法及其专用试剂与装置 | |
| US6165742A (en) | Rapid coliform detection system | |
| JP2008530993A (ja) | 液体試料中の微生物株の検出 | |
| CN101319248A (zh) | 利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法 | |
| US5550032A (en) | Biological assay for microbial contamination | |
| FI57128B (fi) | Saett att identifiera mikroorganismer | |
| CZ282401B6 (cs) | Způsob provedení konformačných testů pomocí fluorchromních substrátů u indikátorů fekálního znečištění či potenciálně patogenních bakterií | |
| JP2004501654A (ja) | グラム陰性菌の同定および初期菌数計算に用いる栄養混合物と手順 | |
| Flournoy | Facilitating identification of lactose-fermenting enterobacteriaceae on macconkey agar | |
| RU2381278C1 (ru) | Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах | |
| Berry et al. | A Slide Culture Method for the Early Detection and Observation of Growth of the Tubercle Bacillus, A Preliminary Report | |
| WO1994021816A1 (en) | Test kits and methods for rapidly testing for contamination by microorganisms | |
| Young et al. | Differentiation of gonococcal and non-gonococcal neisseriae by the superoxol test. | |
| WO2008156462A1 (en) | Device and method for the detection and enumeration of multiple groups of microorganisms | |
| Arshad et al. | Manipulation of different media and methods for cost-effective characterization of Escherichia coli strains collected from different habitats | |
| CN112011590A (zh) | 一种用于饮用水的细菌检测的方法 | |
| JP4740486B2 (ja) | 新規の細菌分析方法 | |
| JP4414515B2 (ja) | 微生物の鑑別方法 | |
| JP2002010799A (ja) | 細菌検査培地 | |
| RU2180690C2 (ru) | Способ выявления микобактерий с поверхностей | |
| JPH06245795A (ja) | 生物固定化担体中の微生物量測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20030909 |