RU2381278C1 - Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах - Google Patents
Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2381278C1 RU2381278C1 RU2008125457/13A RU2008125457A RU2381278C1 RU 2381278 C1 RU2381278 C1 RU 2381278C1 RU 2008125457/13 A RU2008125457/13 A RU 2008125457/13A RU 2008125457 A RU2008125457 A RU 2008125457A RU 2381278 C1 RU2381278 C1 RU 2381278C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- coli
- coliform bacteria
- culture medium
- tryptophan
- methylumbelliferyl
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Питательная среда содержит в г/л дистиллированной воды: панкреатический гидролизат желатина 10,0±4,0, лактозу 10,0±3,0, желчь очищенную 20,0±4,0, бриллиантовый зеленый 0,0133±0,0033, L-триптофан 1,0±0,3, 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) 0,1±0,02. Это исключает ложную интерпретацию результатов при визуальном наблюдении, позволяет одновременно определять колиформные бактерии и E.coli и сокращает время исследования до 18 ч. 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и микробиологической промышленности и может быть использовано для селективного обогащения Escherichia coli и других колиформных микроорганизмов, а также для ускоренного одновременного определения общих колиформных бактерий и Е. coli в исследуемой пробе воды, в образцах пищевых продуктов продовольственного сырья, смывов с объектов внешней среды.
Ведущими зарубежными фирмами ООО «ГЕМ», MERCK выпускаются сухие флюорогенные питательные бульоны для колиформных бактерий и Е. coli на основе казеинового пептона с использованием бычьей желчи.
Наиболее близкой по назначению к предлагаемой среде является Fluorocult Brilliant Green 2% Bile (BRILA) Broth, выпускаемый фирмой MERCK (каталог Микробиология 2004/05, стр.401), состоящий из следующих компонентов, г/л:
Pepton | 10.0 |
Lactose | 10.0 |
Ox bile, dried | 20.0 |
Brillant green | 0.0133 |
L-tryptophan | 1.0 |
4-Methylumbelliferyl β-D-glucuronide | 0.1 |
Недостатком этой среды является слабо выраженное свечение (в основном на поверхности среды) в УФ-свете (366 нм).
Задачей изобретения является создание питательной среды, позволяющей исключить вариабельность интерпретации результатов при визуальном наблюдении.
Поставленная задача решается сбалансированностью компонентного состава среды, содержащей источник азота - панкреатический гидролизат желатина (ПГЖ) производства ФГУН ГНЦ ПМБ; в качестве ингибиторов роста грам+ микрофлоры - желчь крупного рогатого скота (с содержанием желчных кислот не менее 40%) и бриллиантовый зеленый; в качестве углеводного компонента - лактозу, а также 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) и триптофан при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Панкреатический гидролизат желатина | 10.0±4.0 |
Лактоза | 10.0±3.0 |
Желчь очищенная | 20.0±4.0 |
Бриллиантовый зеленый | 0.0133±0.0033 |
L-триптофан | 1.0±0.3 |
4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) | 0.1±0.02 |
Отличие предлагаемой питательной среды от среды Fluorocul BRILA Broth фирмы MERCK заключается в том, что впервые используют панкреатический гидролизат желатина в качестве белковой основы во флюорогенной среде для быстрого и достоверного обнаружения общих колиформных бактерий и Е. coli в исследуемых образцах.
Фермент β-глюкуронидаза Е. coli расщепляет флюорогенный субстрат (MUG) с образованием флюоресцирующего (при воздействии УФ-света) продукта. Триптофан дает возможность проведения индольного теста для окончательного подтверждения и Е. coli.
Панкреатический гидролизат желатина производства ГНЦ ПМБ имеет следующие физико-химические показатели: общий азот 13,5-15,5%; аминный азот 2,5-3,7%; потери при высушивании (105°С, 4 ч) менее 6%; рН (5%-ный раствор) 6,5-7,5; степень расщепления белка 20-30%.
Получение гидролизата желатина включает в себя несколько основных стадий:
- настаивание желатина в холодной воде для набухания в течение 1 ч (гидромодуль 1:10), кипячение и охлаждение до 50°С;
- внесение панкреатина или поджелудочной железы (5% или 40% соответственно от веса желатина);
- подщелачивание раствором едкого натра до рН 8,0-8,2 (в течение всего процесса гидролиза);
- гидролиз при температуре 48-50°С в течение 6 ч;
- осветление гидролизата в кислой зоне (кипячение в течение 10 мин при рН 4,5);
- фильтрация;
- осветление гидролизата в щелочной зоне (кипячение в течение 10 мин при рН 8,0);
- фильтрация;
- высушивание.
Предлагаемый состав питательной среды обеспечивает повышенный уровень интенсивности роста колиформных бактерий и Е. coli, обладает, как видно на чертеже, более выраженной голубой флюоресценцией при ультрафиолетовом облучении микробного роста во всем исследуемом объеме, чем среда - прототип, а также позволяет получить сухую, стандартную среду для ускоренного их определения, сводящую до минимума перестройку производственного процесса.
Питательную среду готовят следующим образом.
Пример 1. Для приготовления питательной среды берут следующие навески компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат желатина | 6.0 |
Лактоза | 7.0 |
Желчь очищенная | 16.0 |
Бриллиантовый зеленый | 0.01 |
L-Триптофан | 0.7 |
4-Метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) | 0.08 |
Навески тщательно суспендируют в 1 л дистиллированной воды, хорошо перемешивают и разливают в пробирки. Стерилизуют автоклавированием при температуре 115°С в течение 15 мин.
Для биологического контроля предлагаемой питательной среды используют культуры Е. coli АТСС 25922, Е. coli 675, Е. coli Ewing (O124K72) 227, С. freundii 101/57, Е. aerogenes 10006 из разведения 10-8, S. aureus Wood-46 и Е. faecalis 775 - из разведения 10-5 музейных штаммов. Все посевы инкубируют аэробно при температуре 37±1°С в течение 18 ч. Учет результатов проводят визуально по помутнению, образованию газа, голубой флюоресценции среды в УФ-свете (366 нм) и индолообразованию.
Через 18 ч культивирования в результате роста тест-штаммов Е. coli АТСС 25922, Е. coli 675, Е. coli Ewing (O124K72) 227, C. freundii 101/57, Е. aerogenes 10006 было отмечено помутнение среды и газообразование. Степень интенсивности голубой флюоресценции, характерной для Е. coli, при ультрафиолетовом облучении микробного роста ярче выражена на предлагаемой питательной среде, чем на среде Fluorocult BRILA Broth. После внесения во флюоресцирующую среду реактива Ковача (индольный тест) наблюдается образование красного слоя на поверхности культуральной жидкости, что указывает на индолообразование и подтверждает наличие E.coli.
Полученные результаты представлены в таблице.
Пример 2. Для приготовления питательной среды компоненты берут в следующем количественном соотношении, г/л:
Панкреатический гидролизат желатина | 10.0 |
Лактоза | 10.0 |
Желчь очищенная | 20.0 |
Бриллиантовый зеленый | 0.0133 |
L-Триптофан | 1.0 |
4-Метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) | 0.1 |
Готовят среду в соответствии с примером 1. На предлагаемой среде проверяют ростовые свойства тест-культур, как в примере 1. Результаты проверки аналогичны примеру 1.
Пример 3. Питательную среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем количественном соотношении, г/л:
Панкреатический гидролизат желатина | 14.0 |
Лактоза | 13.0 |
Желчь очищенная | 24.0 |
Бриллиантовый зеленый | 0.0166 |
L-Триптофан | 1.3 |
4-Метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) | 0.12 |
Ростовые свойства тест-штаммов на предлагаемой среде идентичны результатам проверки по примеру 1.
Из таблицы видно, что предлагаемая питательная среда чувствительна, обладает хорошими ростовыми свойствами, подавляет рост стафилококка и энтерококка. Кроме того, среда обладает более выраженной голубой флюоресценцией при ультрафиолетовом облучении микробного роста во всем исследуемом объеме, чем среда-прототип.
Таким образом, по сравнению со средой-прототипом предлагаемая среда имеет ряд преимуществ:
- при визуальном наблюдении исключается ложная интерпретация результатов; ярко выраженная голубая флюоресценция при ультрафиолетовом облучении микробного роста во всем исследуемом объеме;
- использование высокочувствительной и специфичной среды позволяет одновременно определять колиформные бактерии и Е. coli и сокращает время исследования до 18 ч;
- не меняются стереотипы работы диагностических лабораторий практического здравоохранения;
Claims (1)
- Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и E.coli в исследуемых образцах, содержащая источник азота, лактозу, желчь очищенную, бриллиантовый зеленый, L-триптофан, 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве источника азота она содержит панкреатический гидролизат желатина при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
панкреатический гидролизат желатина 10,0±4,0 лактоза 10,0±3,0 желчь очищенная 20,0±4,0 бриллиантовый зеленый 0,0133±0,0033 L-триптофан 1,0±0,3 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) 0,1±0,02
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008125457/13A RU2381278C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008125457/13A RU2381278C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008125457A RU2008125457A (ru) | 2009-12-27 |
RU2381278C1 true RU2381278C1 (ru) | 2010-02-10 |
Family
ID=41642558
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008125457/13A RU2381278C1 (ru) | 2008-06-25 | 2008-06-25 | Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2381278C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2508400C1 (ru) * | 2012-07-17 | 2014-02-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | СУХАЯ ХРОМОГЕННАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ И E.coli (ВАРИАНТЫ) |
RU2508399C1 (ru) * | 2012-07-17 | 2014-02-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | СУХАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ И УЧЕТА E.coli И КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ |
RU2534342C2 (ru) * | 2013-03-12 | 2014-11-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дагестанская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Хромогенная питательная среда для одноэтапного выделения и идентификации возбудителей уроинфекций |
-
2008
- 2008-06-25 RU RU2008125457/13A patent/RU2381278C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Каталог Микробиология 2004/05, с.401. * |
Справочник по микробиологическим питательным средам. /Под ред. М.М.МЕДЖИДОВА. - Махачкала: Дагкнигоиздат, 1989, с.41-45. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2508400C1 (ru) * | 2012-07-17 | 2014-02-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | СУХАЯ ХРОМОГЕННАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ И E.coli (ВАРИАНТЫ) |
RU2508399C1 (ru) * | 2012-07-17 | 2014-02-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | СУХАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ И УЧЕТА E.coli И КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ |
RU2534342C2 (ru) * | 2013-03-12 | 2014-11-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дагестанская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Хромогенная питательная среда для одноэтапного выделения и идентификации возбудителей уроинфекций |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2008125457A (ru) | 2009-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5911511B2 (ja) | 標的微生物を検出するための物品及び方法 | |
JP5802148B2 (ja) | 耐性微生物の特異的検出用の培地 | |
JP3034036B2 (ja) | 水中のe.coliを同定するための新規および改良された方法 | |
US6165742A (en) | Rapid coliform detection system | |
KR20110106373A (ko) | 고체 또는 반고체 배지 상의 미생물의 특성화 방법 | |
AU2012236786B2 (en) | Detection of bacteria having a resistance to carbapenems | |
JP2005160491A (ja) | 各種カンジダ種の培養と特異的同定用培地、及び分析方法 | |
JP5737947B2 (ja) | クロストリジウム・ディフィシルを検出及び/又は同定する方法 | |
RU2381278C1 (ru) | Питательная среда для определения общих колиформных бактерий и e.coli в исследуемых образцах | |
AU2012236787B2 (en) | Detection of bacteria having an enzymatic resistance to carbapenems | |
US20160017402A1 (en) | Method and apparatus utilizing enzyme substrates producing slow diffusing fluorescent product appearances and chromogens, and use in combination with fast diffusing product appearances | |
JP2010517551A (ja) | 細菌を検出および/または同定するための培地 | |
BRPI0920391B1 (pt) | Meio reacional para as bactérias staphylococcus aureus resistentes à meticilina (mrsa), seu uso e processo de detecção e/ou de identificação | |
JPS6156098A (ja) | 抗微生物活性物質の検出用試薬および検出方法 | |
US20100297692A1 (en) | Reaction medium for detecting and/or identtifying staphyloccous aureus | |
US10351896B2 (en) | Use of at least one substrate of carboxylesterase and/or triacylglycerol lipase for detecting bacteria of the group Bacillus cereus | |
US9404141B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of a target microbe in a test sample | |
US20090197298A1 (en) | Method for detecting microorganisms in a biological sample | |
US20120225449A1 (en) | Method and appraratus utilizing enzyme substrates producing slow diffusing fluorescent product appearances and chromogens, and use in combination with fast diffusing product appearances | |
CN1756848B (zh) | 通过测量乙酸激酶和氨基甲酸激酶的活性检测的测支原体测定法 | |
EP2981619B1 (fr) | Utilisation d'au moins un substrat de phosphatase chromogène et/ou fluorogène pour la détection et/ou le dénombrement d'entérobactéries dans un échantillon | |
RU2264466C2 (ru) | Композиция и способ обнаружения и раннего и дифференцированного подсчета грамотрицательных микроорганизмов | |
AU2011298206B2 (en) | Use of a beta-glucosidase activator for detecting and/or identifying C. difficile | |
RU2508400C1 (ru) | СУХАЯ ХРОМОГЕННАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ И E.coli (ВАРИАНТЫ) | |
RU2704854C1 (ru) | Дифференциально-элективная питательная среда для выделения клебсиелл |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150626 |