CZ282057B6

CZ282057B6 - Nové steroid-estery

Info

Publication number: CZ282057B6
Application number: CS931495A
Authority: CZ
Inventors: Bengt Axelsson; Ralph Brattsand; Leif Kallstrom; Arne Thalén
Original assignee: Astra Aktiebolag
Priority date: 1991-02-04
Filing date: 1992-01-29
Publication date: 1997-05-14
Also published as: HU221168B1; DE69224982D1; YU6492A; CZ149593A3; US5614514A; KR100205835B1; SK79793A3; JPH06505233A; ATE164589T1; IS3809A; NZ241211A; JP2947933B2; DE69224982T2; IE920167A1; NO932762L; PT100087A; CN1076606C; HK1004335A1; SK281802B6; DK0572451T3

Abstract

Jsou popsány sloučeniny obecného vzorce I, jejíž vzorec v poloze 1,2 je nasycen nebo obsahuje dvojnou vazbu, kde R.sub.1 .n.znamená atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec, R.sub.2 .sub..n.znamená atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec, R.sub.3 .n.znamená acylovou skupinu, X.sub.1 .n.znamená atom vodíku nebo atom halogenu, X.sub.2 .n.znamená atom vodíku nebo atom halogenu, s podmínkou, že 1) R.sub.1 .n.a R.sub.2 .n.neznamenají současně atomy vodíku, 2) X.sub.1 .n.a X.sub.2 .n.neznamenají současně atomy vodíku, 3) pokud poloha 1,2 představuje dvojnou vazbu R.sub.1 .n.a R.sub.2 .n.neznamenají současně methylové skupiny, 4) pokud poloha 1,2 představuje dvojnou vazbu, R.sub.1 .n.znamená atom vodíku a R.sub.2 .n.znamená přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, R.sub.3 .n.znamená acylovou skupinu s 11 až 20 atomy uhlíku, způsoby jejich výroby a farmaceutické prostředky, které je obsahují. Tyto sloŕ

Description

Steroid-ester, způsob jeho přípravy, farmaceutický prostředek tento steroid-ester obsahující, tento steroid-ester pro použití jako terapeuticky účinná látka a použití tohoto steroid-esteru pro výrobu léčiv

Oblast techniky

Vynález se týká nového steroid-esteru, způsobu jeho přípravy, farmaceutického prostředku obsahujícího tento steroid-ester jako účinnou látku, tohoto steroid-esteru pro použití jako terapeuticky účinná látka a použití tohoto steroid-esteru pro výrobu léčiv.

Dosavadní stav techniky

Glukokortikosteroidy jsou hodnotnými léčivými látkami, které přinášejí úlevu při astmatu a zánětu nosní sliznice. Všeobecně je známo, že glukokortikosteroidy uplatňují v rámci svých terapeutických vlastností protizánětový a antianafylaktický účinek v dýchacích cestách a v plicní tkáni. Proti jejich dlouhodobému perorálnímu podávání však svědčí jejich závažné vedlejší účinky, ke kterým v organismu dochází mimo plíce. Proto se v současné době podrobuje perorální terapii zahrnující podávání glukokortikosteroidů pouze malé množství pacientů trpících astmatem nebo zánětem nosní sliznice. Bezpečnější terapii v tomto ohledu představuje podávání glukokortikosteroidů inhalací. Nicméně i nejčastěji klinicky používané potentní inhalační glukokortikosteroidy, kterými jsou beclomethason-17alfa, 21-dipropionát a budenosid mají poněkud zúžené aplikační možnosti vzhledem k tomu, že byly u obou uvedených účinných látek popsány nežádoucí vedlejší účinky a doporučeny určité maximální dávky aplikovatelné při inhalační podání.

Liposomy jsou membránovité měchýřky tvořené řadou koncentrických lipidových dvojvrstev střídajících se s hydrofilními oblastmi. Liposomy se používají jako nosiče pro různé druhy farmaceuticky účinných sloučenin za účelem zlepšení dodávky léčivé látky a snížení vedlejších účinků při terapii. Do takových liposomů je možné zabudovat glukokortikosteroidy pouze v nízké koncentraci a tylo glykokortikosteroidy jsou fixovány v liposomových měchýřcích pouze malou měrou. Míra zabudování a uchycení glukokortikosteroidů může být zvýšena esterifikací glukokortikosteroidů v poloze 21 mastnými kyselinami. Bylo totiž zjištěno, že relativně dlouhý řetězec mastné kyseliny působí jako kotva, která udržuje jádro steroidu v hlavních hydratovaných polárních skupinách fosfolipidu a tím zvyšuje vzájemné působení mezi glukokortikosteroidem a liposomem.

Glukokortikosteroidy zapouzdřené v liposomech za účelem jejich terapeutického použití jsou popsány autorem M. De. Silva v Lancet 8130, 1320 (1979). V Patentu US 4 693 999 jsou popsány liposomové přípravky obsahující glukokortikosteroidy a použitelné pro inhalaci. Patent US 4 695 625 (který je ekvivalentní s patentem EP 164 636) popisuje některé 16alfa, 17alfabutylidendioxypregnanové deriváty mající chlor nebo/a fluor v poloze 6 nebo/a 9. Patent EP 262 108 popisuje odlišnou, i když blízkou skupinu sloučenin, ve kterých skupinou 21 může být volná nebo esterifikovaná hydroxylová skupina a ve kterých substituenty v poloze 6 a 9 mohou být zvoleny z množiny zahrnující vodík, fluor, chlor a methylovou skupinu. Patent EP 54 010 popisuje ještě další skupinu příbuzných sloučenin, ve kterých jsou však polohy 6 a 9 nesubstituované. Patent EP 170 462 popisuje další skupinu velmi specificky definovaných sloučenin, z nichž všechny mají dvojnou vazbu v poloze 1,2 a mohou mít, ale nemusí, nakondenzovaný kruh v polohách 16, 17.

Vzhledem k výše uvedenému trvá neustále snaha získat nové protizánětové a antialergicky působící glukokortikosteroidy s vysokým účinkem v cílovém místě, například v dýchacím traktu, na pokožce, v intestinálním traktu, v kloubech nebo v oku, čímž se dosáhne zvýšeného terapeutického účinku i při nízkých dávkách terapeuticky účinných glukokortikosteroidů.

- 1 CZ 282057 B6

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je nový steroid-ester obecného vzorce I ch,or₃

X, nebo jeho stereoisomemí komponenta, kde vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 je jednoduchou nebo dvojnou vazbou, přičemž v obecném vzorci I

Ri znamená atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R₂ vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 10 uhlíkových atomů,

R₃ znamená acylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným, nasyceným nebo nenasyceným uhlovodíkovým řetězcem obsahujícím 11 až 20 uhlíkových atomů a alespoň jeden ze substituentu

X] nebo X₂ znamená atom fluoru a druhý z těchto substituentů znamená atom vodíku nebo atom halogenu, s výhradou spočívající v tom, že R_t a R₂ neznamenají současně atomy vodíku a že pokud vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 je dvojnou vazbou, potom R] a R₂ neznamenají současně methylové skupiny.

Výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atom uhlíku v poloze 1,2 jednoduchou vazbou.

Dalšími výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₃ znamená palmitoylovou skupinu.

Dalšími výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Xi znamená atom vodíku nebo atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.

Dalšími výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Xi a X₂ znamenají atomy fluoru.

Dalšími výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R_t znamená atom vodíku.

Dalšími vý hodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 jednoduchou vazbou, Ri znamená atom vodíku, R₂znamená propylovou skupinu, X_t znamená atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.

Dalšími výhodnými steroid-estery podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 dvojnou vazbou, Ri znamená atom vodíku, R₂ znamená

-2CZ 282057 B6 propylovou skupinu, R₃ znamená palmitoylovou skupinu, X₍ znamená atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.

Obzvláště výhodným steroid-esterem podle vynálezu obecného vzorce Ije 16a, 17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-11 p-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion.

Výhodnými steroid-estery podle vynálezu obecného vzorce Ijsou také sloučeniny zvolené z množiny zahrnující (22S)-16a,17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l[3-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion, (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -myristoyloxypregn-4-en-3,20dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 (3-hydroxy-21 -lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-

3,20-dion, (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l(3-hydroxy-21-palmitoyloxypregna-l,4-dien-

3,20-dion,

6a,9a-difluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methy lethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoy loxypregn-4-en-

3,20-dion, (22RS)-16α, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 |3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22 S)-16a, 17a-buty lidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22RS)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 P-hydroxy-21 -lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-buty lidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-3,20dion, (22 S)-16α, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-3,20dion,

6a-fluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methy lethyl iden)bis(oxy)/-21 -palm itoy loxypregn-4-en-3,20dion,

9a-fluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methylethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoy loxypregn-4-en-3,20dion, (22RS)-16α, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-11 β-Ι^Γθχγ-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-11 β-ί^Γθχγ-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22S)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-1 ^hydroxy-21-palmitoy loxypregn-4-en-3,20-dion a

-3 CZ 282057 B6 (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-1,4-dien-3,20-dion.

Obzvláště výhodným steroid-esterem podle vynálezu je také sloučenina vzorce Ia

(Ia),

Předmětem vynálezu je také způsob přípravy výše uvedeného steroid-esteru obecného vzorce I, jehož podstata spočívá v tom, že se

a)uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II

CH,OH

^X2 (II), ve kterém R_b R₂, Xi a X₂ mají výše uvedené významy, se sloučeninou obecného vzorce III

R4COOH

ve kterém R, znamená přímou nebo rozvětvenou, nasycenou nebo nenasycenou alkylovou skupinu s 10 až 19 atomy uhlíku, nebo se

b) uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II

-4CZ 282057 B6 (II),

CH,OH l ²

ve kterém R_1; R₂, Xi a X₂ mají výše uvedené významy, se sloučeninou obecného vzorce IV

R4COX (IV), ve kterém R4 má výše uvedený význam a X znamená atom halogenu nebo skupinu vzorce OOCR4, nebo se

c)uvede v reakci sloučenina obecného vzorce V

CH,-Y l ²

(V), ve kterém R_h R₂, X] aX₂ mají výše uvedené významy aY znamená atom halogenu nebo mesylátový nebo p-toluensulfonátový zbytek, se sloučeninou obecného vzorce VI

R4COO· A (VI), ve kterém R4 má výše uvedený význam a A⁺ znamená kation, načež se, pokud je takto získaný steroid-ester tvořen směsí epimerů a má-li být získán čistý epimer, epimemí směs štěpí na stereoisomemí složky.

Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že jako účinnou látku obsahuje výše uvedený steroid-ester obecného vzorce I. Výhodně farmaceutický prostředek zahrnuje liposomy obsahující farmakologicky účinný steroid obecného vzorce I. Výhodně tento farmaceutický prostředek obsahuje účinnou látku společně s farmaceuticky přijatelným nosičem. Farmaceutický prostředek podle vynálezu výhodně obsahuje 10 až 1000 mikrogramů účinné látky, výhodněji 20 až 250 mikrogramů účinné látky.

Předmětem vynálezu je dále steroid-ester obecného vzorce I pro použití jako terapeuticky účinná látka.

-5CZ 282057 B6

Předmětem vynálezu je konečně použití steroid-esteru obecného vzorce I pro výrobu léčiv s protizánětovým a antialergickým účinkem.

Jednotlivé stereoisomemí složky přítomné ve směsi výše uvedeného obecného vzorce I s ohledem na existující chiralitu atomu uhlíku v poloze 22 lze definovat následujícími vzorci:

X2 eoimer

22S_;

CH₂ORj I

epimer 22R .

Výhodnou stereoisomemí složkou je epimer s konfigurací 22R.

Esterifikace 21-hydroxy-sloučeniny v rámci výše uvedeného způsobu a) může být provedena známým způsobem, například reakcí základního 21-hydroxy-steroidu s příslušnou karboxylovou kyselinou, vhodně v přítomnosti anhydridu kyseliny trifluoroctové a výhodně za přítomnosti kyselého katalyzátoru, například kyseliny p-toluensulfonové. Tato reakce se s výhodou provádí v organickém rozpouštědle, jakým je benzen nebo methylenchlorid, přičemž se reakce obvykle provádí za teploty 20 až 100 °C. Základní 21-hydroxysloučenina se může v rámci způsobu b) podle vynálezu uvést v reakci s příslušným halogenidem nebo anhydridem kyseliny, výhodně

-6CZ 282057 B6 v rozpouštědle, jakým je halogenovaný uhlovodík, například methylenchlorid, nebo ether, například dioxan, v přítomnosti báze, jakou je triethylamin nebo pyridin, výhodně za nízké teploty, například za teploty od -5 do 30 °C. V rámci způsobu c) podle vynálezu může být uvedena sůl příslušné karboxylové kyseliny s alkalickým kovem, například lithná sůl, sodná sůl nebo draselná sůl anebo triethylaminová nebo tributylaminová sůl, v reakci s příslušným alkylačním činidlem. Tato reakce se výhodně provádí v polárním rozpouštědle, jakým je aceton, methylethylketon, dimethylformamid nebo dimethylsulfoxid, obvykle za teploty v rozmezí od 25 do 100 °C.

V rámci každého ze způsobů a) až c) lze zařadit závěrečný reakční stupen vedoucí k rozštěpení epimemí směsi na své složky a izolaci případně požadovaného čistého epimeru.

Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu mohou být použity pro různé formy podání, a to podle místa, ve kterém probíhá zánět. Tyto látky mohou být takto například podány perkutánně, parenterálné nebo pro topické podání do dýchacího traktu inhalačně. Důležitým cílem u prostředku navrženého k tomuto použití je dosažení optimální biologické dostupnosti steroidu ve funkci účinné složky. U perkutánních prostředků se toho výhodně dosáhne v případě, že se steroid rozpustí v pomocné látce sloužící ke zředění, snadnější přípravě lékové formy a ke snadnějšímu podání účinné látky. Toho může být dosaženo použitím vhodného systému rozpouštědel, zahrnujících vhodné glykoly, jako je propylenglykol nebo 1,3-butandiol, buď jako takové, nebo v kombinaci s vodou.

Je také možné rozpustit steroid buď úplně, nebo částečně v lipofilní fázi za pomoci povrchově aktivní látky jako solubizéru. Perkutánní prostředky mohou být ve formě masti, krému tvořeného olejem ve vodě, krému tvořeného vodou voleji nebo lotionu. V emulzních systémech na bázi pomocné látky, obsahujících rozpuštěnou účinnou složku, se může vytvořit disperzní fáze nebo fáze kontinuální.

Steroid může také se vyskytovat ve vý še uvedených prostředcích jako mikronizovaná, tuhá látka. Přetlakové aerosoly, které obsahují steroid, jsou určeny pro orální nebo nasální inhalaci. Aerosolový systém je navrhován takovým způsobem, že každá uvolňovaná dávka obsahuje od 1 do 1000 pg, výhodně od 20 do 250 pg aktivního steroidu. Zvláště účinné steroidy se podávají v nižší části dávkového rozmezí. Mikronizovaný steroid sestává z částic, které jsou v podstatě menší než 5 pm, a které jsou suspendovány ve směsi vynášecích plynů pomocí dispergačního činidla, jako trioleátu sorbitanu, kyseliny olejové, lecitinu nebo sodné soli kyseliny dioktylsulfojantarové.

Steroid se může také podávat pomocí inhalátoru suchého prášku.

Jednou z možností je smísit mikronizovaný steroid s nosnou látkou, jako je laktóza nebo glukóza. Prášková směs se uloží v tvrdých želatinových kapslích, z nichž každá obsahuje požadovanou dávku steroidu. Kapsle se potom umístí do inhalátoru prášku a dávka se inhaluje do dýchacích cest pacienta.

Jiná možnost spočívá ve způsobu mikronizace prášku na kuličky, které se rozptylují během způsobu dávkování. Tento sferonizovaný prášek se potom plní do zásobníku léčivé látky v inhalátoru pro větší počet dávek, jako je například Turbuhaler. Dávkovači jednotka odměřuje požadovanou dávku, kterou potom inhaluje pacient. S tímto systémem se steroid dostává k pacientovi s nosnou látkou nebo bez ní.

Steroid může být také obsažen v prostředcích určených k ošetřování zánětlivých chorob střev, které se podávají buď orální cestou, nebo rektálně. Prostředky pro podání orální cestou by měly být upraveny tak, aby se steroid dostával do zanícených částí střeva. Toho se může dosáhnout

-7CZ 282057 B6 rozdílnými kombinacemi pro enterální a/nebo pomalé nebo řízené uvolňování účinné látky. Pro rektální cestu jsou vhodné prostředky typu klyzmy.

Příprava liposomových prostředků

Lecitiny používané při tomto vynálezu mají řetězce mastných kyselin o různých délkách, a proto mají rozdílné teploty fázového přechodu. Příklady používaných lecitinů jsou lecitiny získávané z vajec a sojového bobu a dále syntetické lecitiny, jako dimyristoylfosfatidylcholin (DMPC), dipalmitoylfofatidylcholin (DPPC) a distearoylfosfatidylcholin DSPC). Úpravou struktury se mohou formulovat stabilní nosné látky pro lecitiny, s proměnnými biologicky degradovatelnými vlastnostmi. To by umožnilo prodloužit uvolňování zachyceného steroid-esteru.

Rozsah vzájemného působení steroid-esteru například s dipalmitoylfosfatidylcholinovými měchýřky je závislý na délce esterového řetězce, a zvyšující se vzájemné působení se pozoruje jak řetězec roste.

Zahrnutí cholesterolu nebo cholesterolových derivátů do liposomových prostředků je zcela běžné v důsledku jejich vlastností, které zvyšují stabilitu liposomu.

Po počátečních stupních výroby liposomů podle tohoto vynálezu mohou obvykle následovat způsoby popsané v literatuře, to znamená, že se provede rozpuštění složek v rozpouštědle, například ethanolu nebo chloroformu, které se potom odpaří. Výsledná lipidová vrstva se poté disperguje ve zvoleném vodném prostředí a nato se roztok buď třepe, nebo vystaví působení ultrazvuku. Liposomy podle tohoto vynálezu mají s výhodou průměru od 0,1 do 10 μιτι.

Kromě hlavního lipidu nebo hlavních lipidů tvořících liposom, kterým je obvykle fosfolipid. mohou byt také zahrnuty jiné lipidy (například cholesterol nebo stearát cholesterolu) v množství od 0 do 40 % hmotnostních, vztaženo na veškeré lipidy, k úpravě struktury liposomové membrány. Pro optimalizaci absorpce liposomu se může vpravit třetí složka, která poskytuje negativní náboj (například dipalmitoylfosfatidylglycerol) nebo kladný náboj (například stearylaminacetát nebo čety Ipyridiniumchlorid).

Může se používat širokého rozmezí poměrů steroid-esteru k lipidu, v závislosti na použitém lipidu a použitých podmínkách. Sušené (lyofilizované nebo rozstřikováním sušené) liposomy se mohou používat v přítomnosti laktózy, přičemž obsah laktózy je v rozmezí od 0 do 95 %, vztaženo na konečný prostředek.

Prostředek podle tohoto vynálezu, který je zvláště výhodný, obsahuje (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion. Cesty k podávání využívají aplikaci práškových aerosolů, kapek, mlhového rozprašování a přetlakových aerosolů.

Příklady provedení vynálezu

Tento vynález bude dále ilustrován příklady, které však vynález žádným způsobem neomezují. V příkladech se v průběhu preparativních chromatografických měření používá rychlosti průtoku 2,5 ml/crrr.h'¹. Molekulové hmotnosti jsou ve všech případech stanoveny chemickou ionizační hmotnostní spektroskopií (methan slouží jako reagenční plyn) a teploty tání na mikroskopu s topným blokem Leitz Wetzlar. Vysoko účinné kapalinové analýzy (HPLC) se provádějí na sloupci naplněném pBondapak C_I8 (o délce 300 mm a vnitřním průměru 3,9 mm) s rychlostí průtoku 1,0 ml/min a se směsí ethanolu a vody v poměrech od 40 : 60 do 60 : 40 jako mobilní fází, pokud není uvedeno jinak.

-8CZ 282057 B6

Příklad 1 (22R)-I6a, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l(3-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion

Roztok 1,2 g palmitoylchloridu v 10 ml dioxanu se přikape k roztoku 200 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 25 ml pyridinu. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin za teploty místnosti. K reakční směsi se přidá 150 ml methylenchloridu, roztok se promyje 1-molámí kyselinou chlorovodíkovou, 5% vodným roztokem uhličitanu draselného a vodou a poté vysuší. Surová látka se po odpaření čistí chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 210 až 255 ml se zachytí a odpařením poskytnou 203 mg (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dionu. Teplota tání činí 87 až 90 °C, molekulová hmotnost odpovídá 706 (vypočteno 707,0). Čistota: 96 % (HPLC analýza).

Příklad 2 (22R)-16α, 17a-Buty 1 idendioxy-6a,9a-difluor-11 p-hydroxy-21 -palmitoy loxypregn-4-en-3,20dion

K roztoku 50 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-

3,20-dionu a 35 mg palmitoylchloridu v 10 ml methylenchloridu se přikape roztok 13 mg triethylaminu ve 2 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá za teploty místností po dobu 2 hodin. Poté se přidá 50 ml methylenchloridu a reakční směs se zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 85 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 210 až 250 ml se zachytí a odpaří, čímž se dostane 34 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l[3-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20dionu. Molekulová hmotnost činí 706 (vypočteno 707,0). Čistota: 95 % (HPLC analýza).

Příklad 3 (22 S)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion

Roztok 0,4 ml palmitoylchloridu v 10 ml dioxanu se přikape k roztoku 70 mg (22S)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu ve 25 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 16 hodin a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 225 až 265 ml se zachytí a odpaří. Tak se dostane 92 mg (22 S)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dionu, který je tvořen olejem. Molekulová hmotnost činí 706 (vypočteno 707,0). Čistota: 97 % (HPLC analýza).

Příklad 4 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 1 P-hydroxy-21 -myristoyloxypregn-4-en-3,20dion

Myristoylchlorid se syntetizuje tím způsobem, že se vaří pod zpětným chladičem směs 7,0 g

-9CZ 282057 B6 kyseliny myristové a 9 ml thionylchloridu ve 100 ml trichlorethylenu po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se poté odpaří.

K roztoku 51 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 13,21-dihydroxypregn-4-en-

3,20-dionu v 10 ml methylenchloridu se přidá 32 mg myristoylchloridu a poté 13 mg triethylaminu rozpuštěného v 5 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 4 hodin. Poté se přidá methylenchlorid a směs se postupně promyje 0,1-molámí kyselinou chlorovodíkovou a třikrát vždy 50 ml vody. Po vysušení a odpaření se odparek čistí chromatograficky na oxidu křemičitém (Měrek Kieselgel 60) za použití směsi heptanu a acetonu v poměru 6 : 4 jako mobilní fáze. Získá se 27 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor1 l[3-hydroxy-21-myristoyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost činí 678 (vypočteno 678,9). Čistota: 96,8 % (HPLC analýza).

Příklad 5 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion K roztoku 51 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-

3,20-dionu v 5 ml methylenchloridu se přidá 28 mg lauroylchloridu a poté 13 mg triethylaminu, který je rozpuštěn ve 2 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 3 hodin, poté se přidá další methylenchlorid a organická fáze se postupně promyje 0,1molámí kyselinou chlorovodíkovou a třikrát vždy 30 ml vody. Po vysušení a odpaření se odparek čistí chromatograficky na oxidu křemičitém (Měrek Kieselgel 60) za použití směsi hexanu a acetonu v poměru 6 : 4 jako mobilní fáze. Získaná látka se dále čistí v druhém chromatografickém stupni při použití směsi petroletheru a ethylacetátu v poměru 3 : 2 jako mobilní fáze. Získá se 33 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l|3-hydroxy-21-lauroyloxypregn4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost činí 650 (vypočteno 650,8). Čistota: 96,9 % (HPLC analýza).

Příklad 6 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-

3,20-dion

Roztok 2,3 ml palmitoylchloridu v 15 ml dioxanu se přikape k roztoku 700 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l lp,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu ve 30 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 76 cm a průměru 6,3 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu aethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 1020 až 1350 ml se zachytí a odpaří, čímž se získá 752 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 1βhydroxy-21-palmitoyloxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 141 až 146 °C, [a]_D ²⁵ = +71,6° (c = 0,204, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 704 (vypočteno 704,9). Čistota: 97,7 % (HPLC analýza).

Příklad 7 (22 S)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-

3,20-dion

Roztok 0,5 ml palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 150 mg (22S)-16a,17a

- 10CZ 282057 B6 butylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 215 až 315 ml se zachytí a odpaří. Získá se 132 mg (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 1 [3-hydroxy-21palmitoyloxypregna-1.4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 176 až 180 °C, [α]ο^2:ι = +47,5° (c = 0,198, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 704 (vypočteno 704,9). Čistota: 99 % (HPLC analýza).

Příklad 8 (22R)-21 -Acetoxy-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 |3-hydroxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 38 mg acetylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 75 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 5 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 16 hodin. Po odpaření se přidá 75 ml methylenchloridu a roztok se promyje studeným 5% vodným roztokem uhličitanu draselného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po odpaření se surová látka čistí chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 85 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 365 až 420 ml se zachytí a odpaří, čímž poskytnou 57 mg (22R)-21acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l lp-hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 182 až 189 °C, [a]_D ^2:5 = +112,0° (c = 0,225, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 510 (vypočteno 510,6). Čistota: 99,0 % (HPLC analýza).

Příklad 9 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 |3-hydroxy-21 -valeroyloxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 60 mg valeroylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 75 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 5 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 16 hodin a poté odpaří. K odparku se přidá 75 ml methylenchloridu a vzniklý roztok se promyje studeným 5% vodným roztokem uhličitanu draselného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po odpaření se surová látka čistí chromatografií na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 85 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 265 až 325 ml se zachytí a odpařením poskytnou 50 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l[3-hydroxy-21-valeroyloxypregn-4-en-3,20dionu. Teplota tání činí 181 až 185 °C, [a]o²⁵ = +109,4° (c = 0,212, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 552 (vypočteno 552,7). Čistota: 99,8 % (HPLC analýza).

Příklad 10 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 |3-hydroxy-21 -kapry loxypregna-1,4-dien-3,20dion

Roztok 0,2 ml dekanoylchloridu ve 3 ml dioxanu se přikape k roztoku 100 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu v 6 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 71 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 1470 až 1725 se zachytí a odpaří, čímž se dostane 113 mg (22R)-16a,17a

- 11 CZ 282057 B6 butylidendioxy-6a,9a-difluor-l l(3-hydroxy-21-kapryloxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 182 až 184 °C, [a]_D ²⁵ = 71,5° (c = 0,186, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 620 (vypočteno 620,9). Čistota: 97,7 % (HPLC analýza).

Příklad 11

6a,9a-Difluor-11 β,21 -dihydroxy-16α, 17a-/( 1 -methy lethy liden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dion

Suspenze 0,9 g tris(trifenylfosfin)rhodiumchloridu ve 250 ml toluenu zbaveného plynu se hydrogenuje za teploty místnosti a atmosférického tlaku po dobu 45 minut. K reakční směsi se přidá roztok 1,0 g 16a,17a-acetonidu fluocinolonu ve 100 ml absolutního ethanolu a v hydrogenaci se pokračuje během dalších 40 hodin. Reakční směs se odpaří a odparek čistí velmi rychlou chromatografií na oxidu křemičitém (silice) za použití směsi acetonu a petroletheru jako mobilní fáze, k odstranění hlavní části katalyzátoru. Eluát se odpaří a odparek se dále čistí chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 72,5 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 3555 až 4125 ml se zachytí a odpaří. Tak se získá 0,61 g 6a,9a-difluor-11β,21 -dihydroxy- 16a, 17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-

3.20- dionu. Teplota tání činí 146 až 151 °C, [a]_D ^2:> = +124,5° (c = 0,220, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 454 (vypočteno 454,6). Čistota: 98,5 % (HPLC analýza).

Příklad 12

6a,9a-Difluor-l Ιβ-hydroxy- 16a, 17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoyloxypregn-4-en-

3.20- dion

Roztok 2,1 ml palmitoylchloridu v 15 ml dioxanu se přikape k roztoku 310 mg 6a,9a-difluor11β,21-dihydroxy-16a, 17a-/(l-methy!ethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dionu ve 30 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 76 cm a průměru 6,3 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 1.035 až 1.260 ml se zachytí a odpaří, čímž se dostane 158 mg 6a,9a-difluor-l ^hydroxy-16a,17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 82 až 86 °C, [a]_D ²' = +85,3° (c = 0,232, methylenchlorid). Molekulová hmotnost obnáší 692 (vypočteno 692,9). Čistota: 98,6 % (HPLC analýza).

Příklad 13 (22R)- a (22S)-21-Acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l ^hydroxypregn-4-en-3,20-dion mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l ^,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu se rozpustí v 1 ml pyridinu. K. roztoku se přidá 1 ml anhydridu kyseliny octové a reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 1 hodiny, poté se vylije na ledovou vodu a třikrát extrahuje vždy 25 ml methylenchloridu. Extrakty se vysuší a odpaří. Výsledná 22RS-směs se štěpí chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 380 až 400 ml (A) a 420 až 440 ml (B) se zachytí a odpaří.

Po vysrážení ze směsi methylenchloridu a petroletheru frakce A poskytne 14 mg (22S)-21acetoxy-l6a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l ^hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí

- 12CZ 282057 B6

179 až 186 °C, [a]_D ²³ = +86,2° (c = 0,188, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 492 (vypočteno 492.6). Čistota: 97,5 % (HPLC analýza).

Frakce B skýtá po vysrážení 20 mg (22R)-21-acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-113hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 169 až 172 °C, [ajo²'³ = +139,0° (c = 0,200, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 492 (vypočteno 492,6). Čistota: 97,9 % (HPLC analýza).

Příklad 14 (22RS)-16α, 17a-Buty lidendioxy-6a-fluor-11 P-hydroxy-21 -palmitoy loxy-pregn-4-en-3,20-dion

K suspenzi 1,4 g tris(trifenylfosfin)rhodiumchloridu ve 300 ml toluenu se přidá roztok 1170 mg 6a-fluor-l ip,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu ve 250 ml absolutního ethanolu. Směs se hydrogenuje za teploty místnosti a atmosférického tlaku po dobu 22 hodin a poté se odpaří. Odparek se vysráží ze směsi acetonu a chloroformu a poskytne 661 mg 6afluor-1 ip,16a,17a,21-tetrahydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost činí 396 (vypočteno 396,5). Čistota: 96,6 % (HPLC analýza).

308 mg 6a-fluor-l lp,16a,17a,21-tetrahydroxypregn-4-en-3,20-dionu se přidává po částech k roztoku 115 mg butanalu a 0,2 ml 70% kyseliny chloristé v 50 ml dioxanu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 6 hodin. Potom se přidá 200 ml methylenchloridu a roztok se promyje 10% vodným roztokem uhličitanu draselného a vodou a poté vysuší. Odparek získaný po odpaření se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 420 až 500 ml se zachytí a odpaří, čímž poskytnou 248 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l lp,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 85 až 96 °C, [a]_D ²³ = +119,8° (c = 0,192, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6). Čistota: 96,1 % (HPLC analýza). Rozložení mezi 22R- a22Sepimery odpovídá 59 : 41 (HPLC analýza).

Roztok 0,21 ml palmitoylchloridu ve 3 ml dioxanu se přikape k roztoku 50 mg (22RS)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l lp,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 6 ml pyridinu. Reakční směs se míchá ze teploty místnosti přes noc a zpracuje se jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu. chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 185 až 230 ml se zachytí a odpaří, aby se dostalo 42 mg (22RS)-16α, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 P-hydroxy-21palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu ve formě oleje. Molekulová hmotnost činí 688 (vypočteno 688,97). Čistota: 99,0 % (HPLC analýza). Rozložení mezi 22R- a 22S-epimery odpovídá 15 : 85 (HPLC analýza).

Příklad 15 (22R)-16a, 17a-Butylidendioxy-6a-fluor-l 1 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion

225 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l lp,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu se rozštěpí preparativní vysoko účinnou kapalinovou chromatografii po částech na sloupci pBondapak C₎₈ (o délce 150 mm a průměru 19 mm) za použití směsi ethanolu a vody v poměru 40 : 60 jako mobilní fáze. Frakce soustředěné při 265 ml (A) a 310 ml (B) se jímají a odpaří. Po vysrážení ze směsi methylenchloridu a petroletheru frakce A poskytne 68 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 180 až 192

- 13 CZ 282057 B6 °C [α]ο²’ = +138.9° (c = 0,144, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6). Čistota: 99,4 % (HPLC analýza).

Frakce B poskytne po vysrážení 62 mg (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1β,21dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 168 až 175 °C, [cc]_D ^{25 =} +103,7° (c = 0,216, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6). Čistota: 99,5 % (HPLC analýza).

Roztok 0,22 ml palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 32 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a poté zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 215 až 250 ml se zachytí a odpaří. Tak se ve formě oleje získá 38 mg (22R)16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1 [3-hydroxy-2 l-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Moleku lová hmotnost odpovídá 688 (vypočteno 688,97). Čistota: 96,0 % (HPLC analýza).

Příklad 16 (22 S)-16α, 17 a-Buty 1 idendioxy-6a-fluor-11 a-hydroxy-21 -palmitoy loxypregn-4-en-3,20-dion mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu se rozpustí v 1 ml pyridinu. K. roztoku se přidá 1 ml anhydridu kyseliny octové a reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 1 hodiny, poté vylije na ledovou vodu a třikrát extrahuje vždy 25 ml methylenchloridu. Extrakt se vysuší a odpaří. Výsledná 22RS-epimemí směs se štěpí chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 380 až 400 ml (A) a 420 až 440 ml (B) se zachytí a odpaří.

Po vysrážení ze směsi methylenchloridu a petroletheru frakce A poskytne 14 mg (22S)-21acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l l[3-hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání je 179 až 186 °C, [a]_D ²⁰ = +86,2° (c = 0,188, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 492 (vypočteno 492,6). Čistota: 97,5 % (HPLC analýza).

Frakce B poskytne po vysrážení 20 mg (22R)-21-acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1βhydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání je 169 až 172 °C, [a]_D ²³ = +139,0° (c = 0,200, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 492 (vypočteno 492,6). Čistota: 97,9 % (HPLC analýza).

K. roztoku 14 mg (22S)-21-acetoxy-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1 [3-hydroxypregn-4-en-

3,20-dionu ve 2 ml ethanolu se přidají 2 ml 2-molámí kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs se míchá za teploty 60 °C po dobu 5 hodin, poté neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a třikrát extrahuje vždy 25 ml methylenchloridu. Spojené extrakty se promyjí vodou, vysuší a odpaří. Odparek se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 455 až 510 ml se zachytí a odpaří, čímž se dostane 7 mg (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l lp,21-dihydroxypregn4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6). Čistota: 96,6 %.

Roztok 195 mg palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 32 mg (22S)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu,

- 14CZ 282057 B6 chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 205 až 245 ml se jímají a odpaří, čímž poskytnou 37 mg (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l l|3-hydroxy-21palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu, který je tvořen olejem. Molekulová hmotnost odpovídá 688 (vypočteno 688,97). Čistota: 96,4 % (HPLC analýza).

Příklad 17 (22RS)-16α, 17a-Butylidendioxy-6a-fluor-11 (3-hydroxy-21 -lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 0,4 ml lauroylchloridu ve 3 ml dioxanu se přikape k roztoku 50 mg (22RS)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 6 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 215 až 250 ml se zachytí a odpařením poskytnou 15 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l ip-hydroxy-21lauroyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 125 až 143 °C, [a]o²⁵ - +92,8° (c = 0,208, methylenchlorid). Molekulová hmotnosti odpovídá 632 (vypočteno 632,9). Čistota: 96,2 % (HPLC analýza). Rozložení mezi 22R- a 22S-epimery odpovídá 58 : 42 (HPLC analýza).

Příklad 18 (22R)-16α, 17a-Buty lidendioxy-6a-fluor-11 (3-hydroxy-21 -palmitoy loxypregna-1,4-dien-3,20dion

400 mg 6a-fluor-lip,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu se přidá po částech k roztoku 0,18 ml butanalu a 0,2 ml 70% kyseliny chloristé v 50 ml dioxanu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 16 hodin. K reakční směsi se poté přidá 200 ml methylenchloridu a roztok se promyje 10% vodným roztokem uhličitanu draselného a vodou a nato vysuší. Po odpaření se odparek čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 75 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 2880 až 3300 ml se zachytí a odpaří. Tak se dostane 1209 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l lp,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Molekulová hmotnost odpovídá 448 (vypočteno 448,5). Čistota:

95,7 % (HPLC analýza). Rozložení mezi 22R a 22S-epimery činí 55 : 45 (HPLC analýza).

mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-lip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu se chromatografuje na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 1720 až 1800 ml (A) a 1960 až 2025 ml (B) se jímají a odpaří. Obě dvě látky se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. 'H-MNR spektrální analýzou a hmotnostním spektrem se určí, že v případě látky z frakce A, o hmotnosti 12 mg, jde o (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor1 ip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion a u látky z frakce B, o hmotnosti 10 mg, jde o 22 Repimer.

Epimery mají tyto vlastnosti:

Epimer 22S: teplota tání činí 172 až 180 °C, [a]_D ²⁵ = +62,3° (c = 0,132, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 448 (vypočteno 448,5).

Epimer 22R: teplota tání činí 95 až 106 °C, [a]_D ²⁵ = +105,9° (c = 0,152, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 448 (vypočteno 448,5).

- 15 CZ 282057 B6

Čistota epimerů stanovena vysoko účinnou kapalinovou chromatografickou analýzou odpovídá

98,9 % pro 22S-epimer a 97,7 % pro 22R-epimer.

Roztok 172 mg palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 56 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l lfi,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 225 až 285 ml se zachytí a odpaří, čímž se dostane 31 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l lfi-hydroxy-21palmitoyloxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 95 až 100 °C, [α]₀ ²³ = +68,0° (c = 0,200, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 686 (vypočteno 686,95). Čistota: 97,7 % (HPLC analýza).

Příklad 19 (22S)-16a,17oc-Butylidendioxy-6a-fluor-l l[3-hydroxy-21-palmitoyloxypregna-l,4-dien-3,20dion

Roztok 110 mg palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 46 mg (22S)-16a,17abutylidendioxy-6a-fluor-l ip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 185 až 225 ml se zachytí a odpaří. Tak se dostane 37 mg (22S)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-1 lfi-hydroxy-21palmitoyloxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 65 až 68 °C, [a]_D ²⁵ = +53,0° (c = 0,200, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 686 (vypočteno 686,95). Čistota: 95,9 % (HPLC analýza).

Příklad 20

6a-Fluor-l 1 β,2 l-dihydroxy-16a,17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dion

Suspenze 2,1 g tris(trifenylfosfin)rhodiumchloridu v 500 ml toluenu se hydrogenuje za teploty místnosti a atmosférického tlaku po dobu 45 minut, když je katalyzátor v roztoku. Poté se přidá roztok 2,0 g 6a-fluor-lip,21-dihydroxy-16a,17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregna-l,4-dien-

3,20-dionu v 1000 ml absolutního ethanolu a v hydrogenaci se pokračuje po dobu dalších 65 hodin. Reakční směs se odpaří a odparek čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 71 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 2010 a 2445 ml se zachytí a odpaří, aby se dostalo 1,51 g 6a-fluor-l ip,21-dihydroxy-16a,17a-/(lmethylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dion. Teplota tání činí 209 až 219 °C, [a]o^{25 =} +133,5° (c = 0,230, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 436 (vypočteno 436,5). Čistota: 99,6 % (HPLC analýza).

Příklad 21

6a-Fluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methylethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion

Roztok 0,21 ml palmitoylchloridu ve 3 ml dioxanu se přikape k roztoku 6a-fluor-11 β,21

- 16CZ 282057 B6 dihydroxy-16α, 17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dionu v 6 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 76 cm a průměru 6,3 cm), za použití heptanu, chloroformu a ethanolu ve poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 1035 až 1230 ml se zachytí a odpaří, čímž poskytnou 63 mg 6a-fluor-l Ιβ-hydroxy-16α, 17a-/(l-methy lethyliden)bis(oxy)/-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 99 až 101 °C, [a]_D ²⁵ = +89,8° (c = 0,206, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 674 (vypočteno 674,94). Čistota:

97,9 % (HPLC analýza).

Příklad 22

9a-Fluor-11 β,21 -dihydroxy-16α, 17a-/( 1 -methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dion

Roztok 675 mg tris(trifenylfosfm)rhodiumchloridu v 250 ml toluenu se hydrogenuje za teploty místnosti a atmosférického tlaku po dobu 45 minut. Poté se přidá roztok 1 g 16a,17a-acetonidu triamcinolonu ve 100 ml absolutního ethanolu a v hydrogenaci se pokračuje dalších 40 hodin. Reakční směs se odpaří a hlavní část katalyzátoru se odstraní velmi rychlou chromatografií, za použití směsi acetonu a petroletheru o teplotě varu 40 až 60 °C v poměru 40 : 60 jako mobilní fáze. Surová látka se dále čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 72,5 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 2746 až 3195 ml se zachytí a odpaří. Tak se dostane 404 mg 9a-fluor-l 1β,21 -dihydroxy- 16a, 17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-

3,20-dionu. Teplota tání činí 238 až 241 °C, [a)o²⁵ = +145,2° (c = 0,288, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 436 (vypočteno 436,5). Čistota: 99 % (HPLC analýza).

Příklad 23

9a-Fluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methy lethy liden)bis(oxy)/-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion

Roztok 0,69 ml palmitoylchloridu v 10 ml dioxanu se přikape k roztoku 9a-fluor-11 β,21 dihydroxy-16a,17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/pregn-4-en-3,20-dionu ve 20 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 240 až 305 ml se jímají a odpaří, čímž se dostane 102 mg 6a-fluor-l Ιβ-hydroxy-16a, 17a-/(l-methylethyliden)bis(oxy)/-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu, který je ve formě oleje. Molekulová hmotnost činí 674 (vypočteno 674,94). Čistota: 98 % (HPLC analýza).

Příklad 24 (22RS)-16,a,17a-Butylidendioxy-9a-fluor-l ^hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion

K. roztoku 100 mg čerstvě destilovaného butanalu a 0,2 ml 75% kyseliny chloristé v 50 ml přečištěného a vysušeného dioxanu se po malých dávkách za míchání během 20 minut přidá 340 mg 9a-fluor-l ^,16a,17a,21-tetrahydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu dalších 5 hodin. Poté se přidá 200 ml methylenchloridu, roztok se promyje vodným roztokem uhličitanu draselného a vodou a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Surová látka, získaná po odpaření, se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce

72,5 cm a průměru 6,3 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 2760 až 3195 ml se

- 17CZ 282057 B6 zachytí a odpaří, aby se získalo 215 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-9a-fluor-l 1β,21dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6). Čistota: 97,4 % (HPLC analýza).

Roztok 0,13 ml palmitoylchloridu ve 2,5 ml dioxanu se přikape k roztoku 40 mg (22RS)16a,17cc-butylidendioxy-9ct-fluor-l 13,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 5 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 87 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 220 až 300 ml se zachytí a odpaří, čímž se dostane 42 mg (22RS)-16a,17abutylidendioxy-9a-fluor-l ip-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu, který je tvořen olejem. Molekulová hmotnost odpovídá 688 (vypočteno 688,97). Rozložení mezi 22R- a 22Sepimery odpovídá 61 : 39 (HPLC analýza).

Příklad 25 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-9a-fluor-11 P-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion

200 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-9a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu se štěpí chromatograficky na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 76 cm a průměru 6,3 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 7560 až 8835 ml (A) a 8836 až 9360 ml (B) se zachytí a odpaří. ‘H-MNR spektrální analýzou a hmotnostní spektroskopií se prokáže, že látka z frakce A, o hmotnosti 128 mg, je (22S)16a,17a-butylidendioxy-9a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dion a látka z frakce B, o hmotnosti 50 mg, je 22R-epimer.

Epimery mají tyto vlastnosti:

Epimer 22S: teplota tání činí 180 až 190 °C, [a]_D ²⁵ = +105,6° (c = 0,214, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6).

Epimer 22R: teplota tání činí 147 až 151 °C, [a]_D ²⁵ = +133,7° (c = 0,196, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 450 (vypočteno 450,6).

Čistota epimerů, stanovená vysoko účinnou kapalinovou chromatografickou analýzou, je 95,6 % pro 22S-epimer a 98,2 % pro 22R-epimer.

Roztok 0,34 ml palmitoylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 50 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-9a-fluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 180 až 205 ml se jímají a odpaří, čímž poskytnou 36 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-9a-fluor-l lfkhydroxy-21palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu, který je tvořen olejem. Molekulová hmotnost odpovídá 688 (vypočteno 688,97). Čistota: 96,3 % (HPLC analýza).

Příklad 26 (22 S)-16α, 17a-Butylidendioxy-9a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 0,14 ml palmitoylchloridu v 15 ml dioxanu se přikape k roztoku 41 mg (22S)-I6a,17a

- 18CZ 282057 B6 butylidendioxy-9a-fluor-l lp,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu ve 3 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 89 cm a průměru 2,5 cm), za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 215 až 260 ml se zachytí a odpaří, čímž se jako olej dostane 26 mg (22S)-16a,17a-butylidendioxy-9a-fluor-l Ιβ-hydroxy21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu. Molekulová hmotnost odpovídá 688 (vypočteno 688,97). Čistota: 91,4 % (HPLC analýza).

Příklad 27 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-9a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-3,20dion

Roztok 75 mg palmitoylchloridu v 2,5 ml dioxanu se přikape k roztoku 25 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-9a-fluor-l ip,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dionu v 5 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a poté zpracuje jako v příkladě 1. Surová látka se čistí na sloupci Sephadexu LH-20 (o délce 85 cm a průměru 2,5 cm), za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 235 až 285 ml se jímají a odpaří, čímž se dostane 27 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-9a-fluor-11[3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-l,4-dien-3,20-dionu. Teplota tání činí 116 až 121 °C, [α]ο²’ = +67,4° (c = 0,172, methylenchlorid). Molekulová hmotnost odpovídá 686 (vypočteno 687,0). Čistota: 96,5 % (HPLC analýza).

Příklad 28 (22R)-16α, 17a-Buty íidendioxy-21 -kapryly loxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxypregn-4-en-3,20-dion

K roztoku 60 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 1 β,21-dihydroxypregn-4-en3,20-dionu ve 4 ml methylenchloridu se přidá 35 mg kaprylylchloridu a 30 mg 4-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 45 minut. Reakční směs se potom odpaří a odparek se čistí chromatograficky na sloupci naplněném oxidem křemičitým (Měrek Kieselgel 60) za použití směsi heptanu a ethylacetátu v poměru 1 : 1 jako mobilní fáze. Získaná sloučenina se dále čistí chromatograficky na koloně naplněné Sephadex LH-20 (vnitřní průměr 85 x 2,5 cm) za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 280 až 315 ml se spojí a odpaří. Odparek se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Tak se dostane 28 mg (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-21 -kaprylyloxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxypregn-4-en-3,20dionu. Teplota tání činí 158 až 165 °C, [a]_D ²⁵ = +103,7° (c = 0,216, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 594 (vypočteno 594,7). Čistota: 98,7 % (HPLC analýza).

Příklad 29 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-21 -kapryloxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 75 mg kapryIchloridu ve 2 ml dioxanu se přidá po kapkách k roztoku 60 mg (22R)16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-lip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionuve 4 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladu 1. Surová látka se čistí chromatograficky na koloně naplněné Sephadex LH-20 (vnitřní průměr 89 x 2,5 cm) za použití směsi heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 245 až 315 ml se spojí a odpaří. Odparek se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Tak se dostane 58 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-21-kapryloxy-6a,9a

- 19CZ 282057 B6 difluor-1 lp-hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 168 až 171 °C, [cc]_D ²⁵ = +93,7° (c = 0,302, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 622 (vypočteno 622,8). Čistota: 94,1 % (HPLC analýza).

Příklad 30 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-21 -kaproyloxy-6a,9a-difluor-11 (3-hydroxypregn-4-en-3,20-dion

K roztoku 60 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-

3,20-dionu ve 4 ml ethylenchloridu se přidá 25 mg kaproylchloridu a 30 mg 4-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 30 minut a zpracuje jako v příkladu 28. Získaná látka se potom chromatografuje na oxidu křemičitém (Měrek Kieselgel 60) a dále čistí chromatograficky na koloně naplněné Sephadex LH-20 (vnitřní průměr 85 x 2,5 cm) za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 300 až 345 ml se spojí a odpaří. Odparek se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Tak se dostane 20 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-21-kaproyloxy-6a,9a-difluor-l ip-hydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 148 až 160 °C, [a]_D ²³ - +107,3° (c = 0,232, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 566 (vypočteno 566,7). Čistota: 99,3 % (HPLC analýza).

Příklad 31 (22R)-16α, 17a-Butylidendioxy-21 -butyryloxy-6a,9a-difluor-11 fl-hydroxypregn-4-en-3,20-dion

Roztok 170 mg butyrylchloridu v 5 ml dioxanu se přikape k roztoku 150 mg (22R)-16a,17abutylidendioxy-6a,9a-difluor-l ip,21-dihydroxypregn-4-en-3,20-dionu v 10 ml pyridinu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc a zpracuje jako v příkladu 1. Surová látka se čistí chromatograficky na koloně naplněné Sephadex LH-20 (vnitřní průměr 70 x 6,3 cm) za použití chloroformu jako mobilní fáze. Frakce 1440 až 1740 ml se spojí a odpaří. Odparek se dále čistí chromatograficky na koloně naplněné Sephadex LH-20 (vnitřní průměr 75 x 6,3 cm) za použití směsi heptanu, chloroformu aethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako mobilní fáze. Frakce 2010 až 2230 ml se spojí a odpaří. Odparek se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Tak se dostane 118 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-21-butyryloxy-6a,9a-difluor-l 1βhydroxypregn-4-en-3,20-dionu. Teplota tání činí 208 až 216 °C, [a]_D ²⁵ = +114,4° (c = 0,216, methylenchlorid), molekulová hmotnost odpovídá 538 (vypočteno 538,6). Čistota: 99,4 % (HPLC analýza).

Příklad 32

Farmaceutické prostředky

Dále uvedené příklady, které neomezují žádným způsobem vynález, ilustrují prostředky určené pro různé lokální formy podávání. Množství účinného steroidu v perkutánních prostředcích je obvykle od 0,001 do 0,2 % hmotnostního, výhodně od 0,01 do 0,1 % hmotnostního.

Prostředek 1, mast

Steroid, mikronizovaný

Kapalný parafin

Bílý, tuhý parafin

0,025 g

10,0 g do 100,0 g

CZ 282057 B6

Prostředek 2, mast

Steroid Propylenglykol Seskvioleát sorbitanu Kapalný parafin

0,025 g 5,0 g 5,0 g 10,0 g

Bílý, tuhý parafin do 100,0 g

Prostředek 3, krém tvořený olejem ve vodě

Steroid Cetanol G lycery lmonostearát Kapalný parafin Cetomacrogol 1000 Kyselina citrónová Citrát sodný Propylenglykol

0,025 g 5,0 g 5,0 g 10,0 g 2,0 g 0,1 g 0,2 g 35,0 g

Voda do 100,0 g

Prostředek 4, krém tvořený olejem ve vodě

Steroid, mikronizovaný Bílý, tuhý parafin Kapalný parafin Cetanol Sorbimakrogolstearát Monostearát sorbitanu Kyselina sorbová Kyselina citrónová Citrát sodný Voda

0,025 g 15,0 g 5,0 g 5,0 g 2,0 g 0,5 g 0,2 g 0,1 g 0,2 g do 100 g

Prostředek 5, krém tvořený vodou v oleji

Steroid Bílý, tuhý parafin Kapalný parafin Seskvioleát sorbitanu Kyselina sorbová Kyselina citrónová Citrát sodný Voda

0,025 g 35,0 g 5,0 g 5,0 g 0,2 g 0,1 g 0,2 g do 100,0 g

Prostředek 6, lotion

Steroid Isopropanol Karboxyvinylový polymer Hydroxid sodný Voda

0,25 mg 0,5 ml 3 mg podle potřeby do 1,0 g

Prostředek 7, suspenze pro injekce

Steroid, mikronizovaný Natriumkarboxymethylcelulóza Chlorid sodný Monooleát polyoxyethylen (20) sorbitanu Fenylkarbinol Voda, sterilní

0,05 až 10 mg 7 mg 7 mg 0,5 g 8 mg do 1,0 ml

Prostředek 8, aerosol pro orální nebo nasální inhalaci

Steroid, mikronizovaný Trioleát sorbitanu Trichlorfluormethan D ich lortetrafl uorethan Dichlordifluormethan

0,1 % hmotnostního 0,7 % hmotnostního 24,8 % hmotnostních 24,8 % hmotnostních 49,6 % hmotnostních

Prostředek 9, roztok pro atomizaci

Steroid Propylenglykol

7,0 mg 5,0 g

Voda do 10,0 g

Prostředek 10, prášek pro inhalaci

Želatinové kapsle se plní směsí, která sestává ze složek uvedených dále.

Steroid, mikronizovaný Laktóza

0,1 mg 20 mg

Prášek se inhaluje pomocí inhalačního zařízení.

Prostředek 11, prášek pro inhalaci

Sferonizovaný prášek se plní do inhalátoru uzpůsobeného pro větší počet dávek prášku. Každá dávka obsahuje:

Steroid, mikronizovaný

0,1 mg

Prostředek 12, prášek pro inhalaci

Steroid, mikronizovaný Laktóza, mikronizovaná

0,1 mg 1 mg

Prostředek 13, kapsle pro ošetřování tenkého střeva

Steroid Cukr, kuličkovité částice Aquacoat ECD 30 Acety ltributylc itrát Polysorbat 80

1,0 mg 321 mg 6,6 mg 0,5 mg 0,1 mg -22-

Eudragit LI00-55 Triethylcitrát Mastek Protipěnící prostředek MMS

17,5 mg 1.8 mg 8.8 mg 0,01 mg

Prostředek 14, kapsle pro ošetřování tlustého střeva

Steroid 2,0 mg

Cukr, kuličkovité částice 305 mg

Aquacoat ECD 30 5,0mg

Acetyltributylcitrát 0,4mg

Polysorbat 80 0,14 mg

Eudragit NE30 D 12,6mg

EudragitSIOO 12,6mg

Mastek 12,6mg

Prostředek 15, rektální klyzma

Steroid 0,02 mg

Natriumkarboxymethylcelulóza25 mg

Dvojsodná sůl kyseliny edetové 0,5mg

Methyl-p-hydroxybenzoát 0,8mg

Propyl-p-hydroxybenzoát 0,2mg

Chlorid sodný 7,0mg

Kyselina citrónová, bezvodá 1,8 mg

Polysorbat 80 0,01 mg

Voda, čištěná do 1,0 ml

Prostředek 16, prostředek obsahující steroid vázaný na liposom

A. Příprava prostředku ve formě kapek mg syntetického dipalmitoylfosfatidylcholinu, 7 mg dimyristoylfosfatidylcholinu, 1 mg dipalmitoylfosfatidylglycerolu a 5 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 1 β-hydro35 xy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionu se smíchá ve skleněné zkumavce. Všechny složky jsou rozpuštěny v chloroformu. Většina rozpouštědla se odpaří za použití molekulárního dusíku a poté za sníženého tlaku, čímž se vytvoří tenký film lipidových složek na povrchu zkumavky. K lipidům se přidá vodný fyziologický roztok (s obsahem 0,9 % chloridu sodného). Přípravek z liposomů účinkuje za teploty nad teplotou fázového přechodu lipidů. Liposomy se tvoří 40 třepáním nebo působením ultrazvuku za použití čidla sonikátoru. Výsledná suspenze obsahuje liposomy v rozmezí od velmi malých měchýřků do velikosti 2 pm.

B. Příprava prostředku pro inhalaci

Příprava liposomů se provádí podle příkladu A, za použití vodného roztoku obsahujícího 10 % laktózy. Poměr mezi laktózou a lipidem odpovídá 7 : 3. Suspenze liposomů se vymrazí působením suchého ledu (oxidu uhličitého v pevné formě) a lyofilizuje. Suchý produkt se mikronizuje za vzniku částic s hmotnostním středním aerodynamickým průměrem okolo 2 pm.

Farmakologické zkoušky

Selektivita pro lokální protizánětlivý účinek se může zkoušek podle dále uvedeného modelu dýchacích cest.

-23 CZ 282057 B6

Značná část inhalovaného glukokortikosteroidu se ukládá v hltanu a je následovně polykána, až skončí ve střevě. Tato část přispívá k nežádoucím vedlejším účinkům steroidu, protože působí mimo oblast zamýšleného ošetření (plíce). Proto je výhodné používat glukokortikosteroid s vysoce lokálně protizánětlivým účinkem v plíci, ale nízkými účinky vyvolanými glukokortikosteroidem po orální podání. Proto se provádějí studie ke stanovení účinků vyvolaných glukokortikosteroidem po lokální aplikaci do plíce, stejně jako po perorálním podání a podobným způsobem se testují rozdíly mezi glukokortikostereoidovými účinky v ošetřené oblasti plíce a mimo tuto oblast.

Testovací modely

A. Testovací model pro stanovení žádoucího lokálního protizánětlivého účinku na sliznici dýchacích cest (v levém plicním laloku)

Krysy kmene Sprague Dawley o hmotnosti 250 g se slabě anestetizují ephranem a nato se testovaný přípravek na bázi glukokortikosteroidu (v liposomech, suspendovaný ve fyziologickém roztoku) o objemu 0,5 ml/kg nakape jen do levého plicního laloku. O dvě hodiny později se nakape suspenze Sephadexu (5 mg/kg, v objemu 1 mg/kg) do průdušnicových jamek nad rozdvojením tak, že suspenze zasáhne jak levý, tak pravý plicní lalok. Za 24 hodin se krysy usmrtí, levý plicní lalok se vyjme a stanoví se jeho hmotnost. Kontrolní skupiny dostávají nosnou látku místo glukokortikosteroidového přípravku a fyziologický roztok namísto suspenze Sephadexu, ke stanovení hmotnosti edemu vyvolaného Sephadexem, který nebyl ošetřen léčivou látkou, a hmotnosti normální plíce.

B. Testovací model pro stanovení nežádoucího systémového účinku orálně absorbovaného glukokortikosteroidu

Krysy kmene Sprague Dawley o hmotnosti 250 g se slabě anestetizují ephranem a nato se jim perorálně podá přípravek na bázi testovaného glukokortikosteroidu v objemu 0,5 ml/kg. Po dvou hodinách se nakape suspenze Sephadexu (5 mg/kg, v objemu 1 mg/kg) do průdušnicových jamek nad rozdvojením tak, že suspenze zasáhne jak levý, tak pravý plicní lalok. O 24 hodiny později se krysy usmrtí, levý plicní lalok se vyjme a stanoví se jeho hmotnost. Kontrolní skupiny dostávají nosnou látku místo glukokortikosteroidového přípravku a fyziologický roztok namísto suspenze Sephadexu, ke stanovení hmotnosti edemu vyvolaného Sephadexem, který nebyl ošetřen léčivou látkou, a normální hmotnosti.

Výsledky srovnávací studie jsou uvedeny v tabulce 1. Farmakologický profil sloučenin podle tohoto vynálezu se porovnává s farmakologickým profilem budesonid-21-palmitátu a flumethason-21-palmitátu v liposomech. Všechny steroidy podle tohoto vynálezu projevují vyšší lokální protizánětlivý účinek v plíci po lokálním podání než budesonid-21-palmitát v liposomech. Kromě toho výsledky také dokládají vyšší selektivitu testovaných sloučenin podle tohoto vynálezu v plíci při srovnání s vybranými sloučeninami podle dosavadního stavu techniky, protože dávka vyžadovaná k potlačení plicního edemu (ED₅₀) při orálním podání výše uvedených sloučenin je 158-krát (příklad 3), 247-krát (příklad 7) a 559-krát (příklad 1) vyšší a u budesonid21-palmitátu 66-krát vyšší a u flumethason-21-palmitátu 8-krát vyšší než dávka potřebná k inhibici plicního edemu při lokálním podání účinných látek do plíce.

Z toho se mohou vyvodit závěry, že sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou velmi dobré pro lokální ošetřování zánětlivých chorob na kůži a v různých tělesných dutinách (například v plicích, nose, střevech a kloubech).

-24CZ 282057 Β6

Tabulka 1

Účinky testovaných glukokortikosteroidů zapouzdřených v liposomech při modelu plicního edemu u krys vyvolaného Sephadexem. Výsledky jsou uvedeny ve vztahu k příslušné kontrolní skupině, které byl podán Sephadex

Sloučenina podle příkladu č.	ED₅₀ (podávání do levé plíce, nmol/kg) Hmotnost levé plíce*¹	ED₅o (perorální podávání, nmol/kg) plíce*¹	Poměr při orálním a lokálním podání
Budesonid-21palmitát (RS)	23	1520	66
Flumethason-21palmitát	2,2	18	8
7	2,3	568	247
6	1,8	-
3	3,5	554	158
1	1,5	839	559
2e⁺⁾	9	145	1297
2g^	5	58	293

*’ ED₅o = vyžadovaná dávka glukokortikosteroidů ke snížení edemu na 50 % sloučenina z příkladu 2e nebo 2g z US patentu č. 4 695 625 (v obou případech jde o R isomer)

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Steroid-ester obecného vzorce I (I), nebo jeho stereoisomemí komponenta, kde vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 je jednoduchou nebo dvojnou vazbou, přičemž v obecném vzorci I

Ri znamená atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R₂ znamená atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 10 uhlíkových atomů,

-25 CZ 282057 B6

R.3 znamená acylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným, nasyceným nebo nenasyceným uhlovodíkovým řetězcem obsahujícím 11 až 20 uhlíkových atomů a alespoň jeden ze substituentu

Xi nebo X₂ znamená atom fluoru a druhý z těchto substituentů znamená atom vodíku nebo atom halogenu, s výhradou spočívající v tom, že R[ a R₂ neznamenají současně atomy vodíku a že pokud vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 je dvojnou vazbou, potom R! aR₂ neznamenají současně methylové skupiny.
2. Steroid-ester podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 jednoduchou vazbou.
3. Steroid-ester podle nároků 1 nebo 2 obecného vzorce I, ve kterém R3 znamená palmitoylovou skupinu.
4. Steroid-ester podle některého z nároků 1 až 3 obecného vzorce I, ve kterém X] znamená atom vodíku nebo atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.
5. Steroid-ester podle některého z nároků 1 až 4 obecného vzorce I, ve kterém X[ a X₂znamenají atomy fluoru.
6. Steroid-ester podle některého z nároků 1 až 5 obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená atom vodíku.
7. Steroid-ester podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 jednoduchou vazbou, Rj znamená atom vodíku, R₂ znamená propylovou skupinu, X_tznamená atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.
8. Steroid-ester podle nároku 1 obecného vzorce I, ve kterém je vazba mezi atomy uhlíku v poloze 1,2 dvojnou vazbou, Rj znamená atom vodíku, R₂ znamená propylovou skupinu, R₃znamená palmitoylovou skupinu, X_t znamená atom fluoru a X₂ znamená atom fluoru.
9. Steroid-ester podle nároku 1 obecného vzorce I, který je tvořen 16a,17a-butylidendioxy6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dionem.
10. Steroid-ester podle nároku 1 obecného vzorce I z množiny zahrnující (22S)-16a,17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-l 13-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion, (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -myristoyloxypregn-4-en-3,20dion,

-26CZ 282057 B6 (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6cc,9a-difluor-l l[3-hydroxy-21-lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 fJ-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-

3,20-dion, (22S)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-

3,20-dion,

6a,9a-difluor-11 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methylethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoyloxypregn-4-en-

3,20-dion, (22RS)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a-fluor-l l[3-hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22S)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-l 1 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22RS)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 β-hydroxy-21 -lauroyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-3,20dion, (22S)-16α, 17a-butylidendioxy-6a-fluor-11 [3-hydroxy-21 -palmitoyloxypregna-1,4-dien-3,20dion,

6a-fluor-l 1 β-hydroxy-16α, 17a-/( 1 -methylethyliden)bis(oxy)/-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20dion,

9a-fl uor-11 β-hydroxy-16a, 17 a-/( 1 -methy lethy 1 iden)b i s(oxy)/ -21 -palm itoy loxypregn-4-en-3,20dion, (22RS)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-1 ^hydroxy-21-palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-11 β-1^Γθχγ-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion, (22S)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-11 β-1ΐ}τ1Γθχν-21 -palmitoyloxypregn-4-en-3,20-dion a (22R)-16a, 17a-butylidendioxy-9a-fluor-l ^hydroxy-21-palmitoyloxypregn-l,4-dien-3,20-dion.
11. Steroid-ester podle nároku 1 vzorce Ia (Ia),

-27CZ 282057 B6
12. Způsob přípravy' steroid-esteru obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačený tím, že se

a) uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II

CH,0H

I ² (Π), ve kterém R_h R₂, Xi a X₂ mají významy uvedené v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce III

R4COOH (ΙΠ), ve kterém R znamená přímou nebo rozvětvenou, nasycenou nebo nenasycenou alkylovou skupinu s 10 až 19 atomy uhlíku, nebo se

b) uvede v reakci sloučenina obecného vzorce II

CH,OH

I ² ^X2 (II), ve kterém R_b R₂, Xj a X₂ mají významy uvedené v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce IV

R4COX (IV), ve kterém R4 má výše uvedený význam aX znamená atom halogenu nebo skupinu vzorce OOCR4, nebo se

c) uvede v reakci sloučenina obecného vzorce V

-28CZ 282057 B6 c=o

HO ch₃ (V), ve kterém R_b R₂, X] a X₂ mají významy uvedené v nároku 1 a Y znamená atom halogenu nebo mesylátový nebo p-toluensulfonátový zbytek, se sloučeninou obecného vzorce VI

R4COO· A (VI), ve kterém R4 má výše uvedený význam a A⁺ znamená kation, načež se, pokud je takto získaný steroid-ester tvořen směsí epimerů a má-li být získán čistý epimer, epimemí směs štěpí na stereoisomemí složky.
13. Farmaceutický prostředek, vyznačený tím, že jako účinnou látku obsahuje steroid-ester podle některého z nároků 1 až 11.
14. Farmaceutický prostředek podle nároku 13, vyznačený tím, že zahrnuje liposomy obsahující farmakologicky účinný steroid podle nároku 1.
15. Farmaceutický prostředek podle nároků 15 a 16, vyznačený tím, že obsahuje účinnou látku společně s farmaceuticky přijatelným nosičem.
16. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků 13 až 15, vyznačený tím, že obsahuje 10 až 1000 mikrogramů účinné látky.
17. Farmaceutický prostředek podle nároku 16, vyznačený tím, že obsahuje 20 až 250 mikrogramů účinné látky.
18. Steroid-ester podle některého z nároků 1 až 11 pro použití jako terapeuticky účinná látka.
19. Použití steroid-esteru podle některého z nároků 1 až 11 pro výrobu léčiv s protizánětovým a antialergickým účinkem.