CZ24699A3 - Fúzní polypeptidy obsahující IgE a HSA, způsob jejich přípravy, farmaceutický přípravek, který je obsahuje, a jejich použití - Google Patents
Fúzní polypeptidy obsahující IgE a HSA, způsob jejich přípravy, farmaceutický přípravek, který je obsahuje, a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ24699A3 CZ24699A3 CZ99246A CZ24699A CZ24699A3 CZ 24699 A3 CZ24699 A3 CZ 24699A3 CZ 99246 A CZ99246 A CZ 99246A CZ 24699 A CZ24699 A CZ 24699A CZ 24699 A3 CZ24699 A3 CZ 24699A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- ige
- hsa
- polypeptide
- leu
- glu
- Prior art date
Links
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 204
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 174
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 170
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 150
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 150
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 90
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 50
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 36
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 75
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 51
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 abstract description 45
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 abstract description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 23
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 abstract description 22
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 15
- 206010052568 Urticaria chronic Diseases 0.000 abstract description 14
- 208000024376 chronic urticaria Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 14
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 abstract description 10
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 abstract description 9
- 101710128966 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit alpha Proteins 0.000 abstract description 9
- 102100038006 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit alpha Human genes 0.000 abstract description 9
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000024711 extrinsic asthma Diseases 0.000 abstract description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 42
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 39
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 37
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 36
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 36
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 36
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 36
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 34
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 33
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 23
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 23
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 21
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 20
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 20
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000002585 base Substances 0.000 description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 11
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 10
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 8
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 8
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 8
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 6
- -1 1 to 10 Chemical class 0.000 description 5
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 5
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 5
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 5
- KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KCNSGAMPBPYUAI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 206010027654 Allergic conditions Diseases 0.000 description 4
- 101100064556 Caenorhabditis elegans pek-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100408682 Caenorhabditis elegans pmt-2 gene Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 3
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- UBKOVSLDWIHYSY-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UBKOVSLDWIHYSY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- LWTTURISBKEVAC-CIUDSAMLSA-N Cys-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)N LWTTURISBKEVAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 101710171756 Cytochrome subunit of sulfide dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 101150039033 Eci2 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100021823 Enoyl-CoA delta isomerase 2 Human genes 0.000 description 3
- MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N Glu-Cys-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 3
- 101710187239 Sulfide dehydrogenase [flavocytochrome c] flavoprotein chain Proteins 0.000 description 3
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 3
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 3
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 108010047926 leucyl-lysyl-tyrosine Proteins 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 108010074082 phenylalanyl-alanyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N Ala-Asp-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N Ala-His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N Ala-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OINVDEKBKBCPLX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DCVYRWFAMZFSDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 101100519158 Arabidopsis thaliana PCR2 gene Proteins 0.000 description 2
- JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- UZGFHWIJWPUPOH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UZGFHWIJWPUPOH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)CN=C(N)N GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NVGWESORMHFISY-SRVKXCTJSA-N Asn-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O NVGWESORMHFISY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VFUXXFVCYZPOQG-WDSKDSINSA-N Asp-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VFUXXFVCYZPOQG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- XDGBFDYXZCMYEX-NUMRIWBASA-N Asp-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O XDGBFDYXZCMYEX-NUMRIWBASA-N 0.000 description 2
- GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GKWFMNNNYZHJHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWAHPBGBDIFUFD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N Cys-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N GRNOCLDFUNCIDW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- OIMUAKUQOUEPCZ-WHFBIAKZSA-N Cys-Asn-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIMUAKUQOUEPCZ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- HYKFOHGZGLOCAY-ZLUOBGJFSA-N Cys-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HYKFOHGZGLOCAY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- WVLZTXGTNGHPBO-SRVKXCTJSA-N Cys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WVLZTXGTNGHPBO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- CVPXINNKRTZBMO-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)CN=C(N)N CVPXINNKRTZBMO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SVZIKUHLRKVZIF-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N SVZIKUHLRKVZIF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- RTOOAKXIJADOLL-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RTOOAKXIJADOLL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- JRCUFCXYZLPSDZ-ACZMJKKPSA-N Glu-Asp-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JRCUFCXYZLPSDZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- GMVCSRBOSIUTFC-FXQIFTODSA-N Glu-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMVCSRBOSIUTFC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N Glu-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 2
- VHPVBPCCWVDGJL-IRIUXVKKSA-N Glu-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VHPVBPCCWVDGJL-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 2
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FOKISINOENBSDM-WLTAIBSBSA-N Gly-Thr-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O FOKISINOENBSDM-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- DQZCEKQPSOBNMJ-NKIYYHGXSA-N His-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DQZCEKQPSOBNMJ-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KWTVLKBOQATPHJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asn-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O OXKYZSRZKBTVEY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N Leu-His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N Leu-Lys-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ONPJGOIVICHWBW-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N Lys-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N Lys-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N 0.000 description 2
- DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O DUTMKEAPLLUGNO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CN=CN1 FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- TUSOIZOVPJCMFC-FXQIFTODSA-N Met-Asp-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O TUSOIZOVPJCMFC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N Phe-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CYZBFPYMSJGBRL-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- DDYIRGBOZVKRFR-AVGNSLFASA-N Phe-Asp-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N DDYIRGBOZVKRFR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- MPFGIYLYWUCSJG-AVGNSLFASA-N Phe-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MPFGIYLYWUCSJG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- FXYXBEZMRACDDR-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FXYXBEZMRACDDR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- OQTDZEJJWWAGJT-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OQTDZEJJWWAGJT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- XDMMOISUAHXXFD-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XDMMOISUAHXXFD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100203319 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) skh1 gene Proteins 0.000 description 2
- FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N Ser-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 2
- OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N Thr-Glu-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 2
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 2
- HPQHHRLWSAMMKG-KATARQTJSA-N Thr-Lys-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O HPQHHRLWSAMMKG-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- QFCQNHITJPRQTB-IEGACIPQSA-N Thr-Lys-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O QFCQNHITJPRQTB-IEGACIPQSA-N 0.000 description 2
- WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IBBBOLAPFHRDHW-BPUTZDHNSA-N Trp-Asn-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N IBBBOLAPFHRDHW-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N Trp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- HSBZWINKRYZCSQ-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HSBZWINKRYZCSQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GZUIDWDVMWZSMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- PHKQVWWHRYUCJL-HJOGWXRNSA-N Tyr-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PHKQVWWHRYUCJL-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 2
- BXJQKVDPRMLGKN-PMVMPFDFSA-N Tyr-Trp-Leu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 BXJQKVDPRMLGKN-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010078114 alanyl-tryptophyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010033706 glycylserine Proteins 0.000 description 2
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 2
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940100656 nasal solution Drugs 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 229940054534 ophthalmic solution Drugs 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- YAPQBXQYLJRXSA-UHFFFAOYSA-N theobromine Chemical compound CN1C(=O)NC(=O)C2=C1N=CN2C YAPQBXQYLJRXSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- QBBKKFZGCDJDQK-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-ethylpiperidine Chemical compound CC[C@@H]1CCCCN1 QBBKKFZGCDJDQK-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXQAPNSHUJORMC-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-4-propylbenzene Chemical compound CCCC1=CC=C(Cl)C=C1 QXQAPNSHUJORMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- PIPTUBPKYFRLCP-NHCYSSNCSA-N Ala-Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PIPTUBPKYFRLCP-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- IMMKUCQIKKXKNP-DCAQKATOSA-N Ala-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CCCN=C(N)N IMMKUCQIKKXKNP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WDIYWDJLXOCGRW-ACZMJKKPSA-N Ala-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WDIYWDJLXOCGRW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ZIWWTZWAKYBUOB-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZIWWTZWAKYBUOB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N Ala-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- SHKGHIFSEAGTNL-DLOVCJGASA-N Ala-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 SHKGHIFSEAGTNL-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N Ala-Leu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AWZKCUCQJNTBAD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N Ala-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SDZRIBWEVVRDQI-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SDZRIBWEVVRDQI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N Ala-Met-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N Ala-Met-Phe Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 108010011667 Ala-Phe-Ala Proteins 0.000 description 1
- CYBJZLQSUJEMAS-LFSVMHDDSA-N Ala-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C)N)O CYBJZLQSUJEMAS-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 description 1
- 208000005034 Angiolymphoid Hyperplasia with Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- MCYJBCKCAPERSE-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N MCYJBCKCAPERSE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OCOZPTHLDVSFCZ-BPUTZDHNSA-N Arg-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N OCOZPTHLDVSFCZ-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- OANWAFQRNQEDSY-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N OANWAFQRNQEDSY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N Arg-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LEFKSBYHUGUWLP-ACZMJKKPSA-N Asn-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LEFKSBYHUGUWLP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MEFGKQUUYZOLHM-GMOBBJLQSA-N Asn-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MEFGKQUUYZOLHM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- IYVSIZAXNLOKFQ-BYULHYEWSA-N Asn-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IYVSIZAXNLOKFQ-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- LUVODTFFSXVOAG-ACZMJKKPSA-N Asn-Cys-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LUVODTFFSXVOAG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FTCGGKNCJZOPNB-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FTCGGKNCJZOPNB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BZWRLDPIWKOVKB-ZPFDUUQYSA-N Asn-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BZWRLDPIWKOVKB-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N Asn-Trp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BIGRHVNFFJTHEB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N Asn-Tyr-Ala Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JPPLRQVZMZFOSX-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- QOVWVLLHMMCFFY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QOVWVLLHMMCFFY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ORRJQLIATJDMQM-HJGDQZAQSA-N Asp-Leu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O ORRJQLIATJDMQM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LIVXPXUVXFRWNY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N Asp-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O KGHLGJAXYSVNJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NBKLEMWHDLAUEM-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N NBKLEMWHDLAUEM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JJQGZGOEDSSHTE-FOHZUACHSA-N Asp-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O JJQGZGOEDSSHTE-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100455752 Caenorhabditis elegans lys-3 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- DCJNIJAWIRPPBB-CIUDSAMLSA-N Cys-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N DCJNIJAWIRPPBB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N Cys-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N YMBAVNPKBWHDAW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ISWAQPWFWKGCAL-ACZMJKKPSA-N Cys-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISWAQPWFWKGCAL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GHUVBPIYQYXXEF-SRVKXCTJSA-N Cys-Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 GHUVBPIYQYXXEF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N Cys-Glu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N Cys-Phe Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JLZCAZJGWNRXCI-XKBZYTNZSA-N Cys-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JLZCAZJGWNRXCI-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N Cys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N Glu-Asn Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Asp Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YKLNMGJYMNPBCP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PCBBLFVHTYNQGG-LAEOZQHASA-N Glu-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PCBBLFVHTYNQGG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SAEBUDRWKUXLOM-ACZMJKKPSA-N Glu-Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SAEBUDRWKUXLOM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ZXQPJYWZSFGWJB-AVGNSLFASA-N Glu-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZXQPJYWZSFGWJB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N Glu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WNRZUESNGGDCJX-JYJNAYRXSA-N Glu-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O WNRZUESNGGDCJX-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OHWJUIXZHVIXJJ-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N OHWJUIXZHVIXJJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PMSMKNYRZCKVMC-DRZSPHRISA-N Glu-Phe-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PMSMKNYRZCKVMC-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N QOXDAWODGSIDDI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JVYNYWXHZWVJEF-NUMRIWBASA-N Glu-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O JVYNYWXHZWVJEF-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- CAQXJMUDOLSBPF-SUSMZKCASA-N Glu-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAQXJMUDOLSBPF-SUSMZKCASA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HDNXXTBKOJKWNN-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDNXXTBKOJKWNN-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- FXTUGWXZTFMTIV-GJZGRUSLSA-N Gly-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)CN FXTUGWXZTFMTIV-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N His-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NOQPTNXSGNPJNS-YUMQZZPRSA-N His-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O NOQPTNXSGNPJNS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YTKOTXRIWQHSAZ-GUBZILKMSA-N His-Glu-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N YTKOTXRIWQHSAZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WEIYKCOEVBUJQC-JYJNAYRXSA-N His-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WEIYKCOEVBUJQC-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- PYNUBZSXKQKAHL-UWVGGRQHSA-N His-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PYNUBZSXKQKAHL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OEROYDLRVAYIMQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QEYUCKCWTMIERU-SRVKXCTJSA-N His-Lys-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N QEYUCKCWTMIERU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N His-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 101000878611 Homo sapiens High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000598906 Homo sapiens Olfactory receptor 6C2 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRHFQUPIZOYKQP-KBIXCLLPSA-N Ile-Ala-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JRHFQUPIZOYKQP-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N Ile-Cys-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GVNNAHIRSDRIII-AJNGGQMLSA-N Ile-Lys-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N GVNNAHIRSDRIII-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N Ile-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- DRCKHKZYDLJYFQ-YWIQKCBGSA-N Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 1
- NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N Ile-Tyr-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 1
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 1
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009388 Job Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000014966 Kimura Disease Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N Leu-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ILJREDZFPHTUIE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BABSVXFGKFLIGW-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N Leu-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OHZIZVWQXJPBJS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UBZGNBKMIJHOHL-BZSNNMDCSA-N Leu-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 UBZGNBKMIJHOHL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N Leu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N Leu-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- SYRTUBLKWNDSDK-DKIMLUQUSA-N Leu-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SYRTUBLKWNDSDK-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- PJWOOBTYQNNRBF-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PJWOOBTYQNNRBF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N Leu-Phe-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N Leu-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N Leu-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XZNJZXJZBMBGGS-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N Lys-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SWWCDAGDQHTKIE-RHYQMDGZSA-N Lys-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWWCDAGDQHTKIE-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- GGAPIOORBXHMNY-ULQDDVLXSA-N Lys-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O GGAPIOORBXHMNY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N Lys-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PXHCFKXNSBJSTQ-KKUMJFAQSA-N Lys-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PXHCFKXNSBJSTQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AAORVPFVUIHEAB-YUMQZZPRSA-N Lys-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AAORVPFVUIHEAB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DRCILAJNUJKAHC-SRVKXCTJSA-N Lys-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O DRCILAJNUJKAHC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Glu Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC([O-])=O LCMWVZLBCUVDAZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N Lys-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PBLLTSKBTAHDNA-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N Lys-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N Lys-Ser-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZFNYWKHYUMEZDZ-WDSOQIARSA-N Lys-Trp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZFNYWKHYUMEZDZ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- RPWQJSBMXJSCPD-XUXIUFHCSA-N Lys-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(O)=O RPWQJSBMXJSCPD-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRAWWKUTNBILNT-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YRAWWKUTNBILNT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NDYNTQWSJLPEMK-WDSKDSINSA-N Met-Cys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NDYNTQWSJLPEMK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- CEGVMWAVGBRVFS-XGEHTFHBSA-N Met-Cys-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CEGVMWAVGBRVFS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OIFHHODAXVWKJN-ULQDDVLXSA-N Met-Phe-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OIFHHODAXVWKJN-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N N-dimethylaminoethanol Chemical compound CN(C)CCO UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101100386053 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-3 gene Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical class O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KUGRPPRAQNPSQD-UHFFFAOYSA-N OOOOO Chemical compound OOOOO KUGRPPRAQNPSQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 102100037748 Olfactory receptor 6C2 Human genes 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- LZDIENNKWVXJMX-JYJNAYRXSA-N Phe-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LZDIENNKWVXJMX-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ZLGQEBCCANLYRA-RYUDHWBXSA-N Phe-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZLGQEBCCANLYRA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N Phe-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CWFGECHCRMGPPT-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N Phe-Phe-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 1
- RYQWALWYQWBUKN-FHWLQOOXSA-N Phe-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RYQWALWYQWBUKN-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- FENSZYFJQOFSQR-FIRPJDEBSA-N Phe-Phe-Ile Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FENSZYFJQOFSQR-FIRPJDEBSA-N 0.000 description 1
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- RTQKBZIRDWZLDF-BZSNNMDCSA-N Pro-Pro-Trp Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)O)CCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1 RTQKBZIRDWZLDF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- SRTCFKGBYBZRHA-ACZMJKKPSA-N Ser-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SRTCFKGBYBZRHA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- HMRAQFJFTOLDKW-GUBZILKMSA-N Ser-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMRAQFJFTOLDKW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N Ser-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ZOPISOXXPQNOCO-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N Ser-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical compound [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N Thr-Asn-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- ONNSECRQFSTMCC-XKBZYTNZSA-N Thr-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ONNSECRQFSTMCC-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- GYUUYCIXELGTJS-MEYUZBJRSA-N Thr-Phe-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O GYUUYCIXELGTJS-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- CRCHQCUINSOGFD-JBACZVJFSA-N Trp-Tyr-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N CRCHQCUINSOGFD-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZOCUWOXSDYFZ-CQDKDKBSSA-N Tyr-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZWZOCUWOXSDYFZ-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N Tyr-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- NJLQMKZSXYQRTO-FHWLQOOXSA-N Tyr-Glu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NJLQMKZSXYQRTO-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N Tyr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N Tyr-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- CWVHKVVKAQIJKY-ACRUOGEOSA-N Tyr-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N CWVHKVVKAQIJKY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- RZAGEHHVNYESNR-RNXOBYDBSA-N Tyr-Trp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RZAGEHHVNYESNR-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N Val-Met-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KISFXYYRKKNLOP-IHRRRGAJSA-N Val-Phe-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N KISFXYYRKKNLOP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000016127 added sugars Nutrition 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004855 amber Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010018691 arginyl-threonyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 108010036999 aspartyl-alanyl-histidyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010027234 aspartyl-glycyl-glutamyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001734 carboxylic acid salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 229910052570 clay Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical group BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 210000004395 cytoplasmic granule Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940012017 ethylenediamine Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040856 glutamyl-cysteinyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- XGIHQYAWBCFNPY-AZOCGYLKSA-N hydrabamine Chemical compound C([C@@H]12)CC3=CC(C(C)C)=CC=C3[C@@]2(C)CCC[C@@]1(C)CNCCNC[C@@]1(C)[C@@H]2CCC3=CC(C(C)C)=CC=C3[C@@]2(C)CCC1 XGIHQYAWBCFNPY-AZOCGYLKSA-N 0.000 description 1
- 206010051040 hyper-IgE syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002664 inhalation therapy Methods 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010073093 leucyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910000000 metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004692 metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 229940100657 nasal ointment Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010082795 phenylalanyl-arginyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000004885 piperazines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229960004559 theobromine Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- YFTHZRPMJXBUME-UHFFFAOYSA-N tripropylamine Chemical compound CCCN(CCC)CCC YFTHZRPMJXBUME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Fúzní polypeptidy obsahující IgE a HSA, způsob jejich přípravy, farmaceutický přípravek, který je obsahuje, a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká fúzních polypeptidů. Týká se fúzních polypeptidů obsahujících IgE-vazebnou doménu a lidský sérový albumin („human sérum albumin - HSA) nebo jejich solí. Týká se také polynukleotidů a fyziologicky funkčně rovnocenných polypeptidů, které jsou meziprodukty v přípravě takových fúzních polypeptidů, jejich příslušných rekombinantních expresních vektorů, odpovídajících prokaryotických a eukaryotických expresních systémů a způsobů syntézy fúzních polypeptidů.
Dosavadní stav techniky
Interakce mezi imunoglobulinem E (IgE) a jeho receptory hraje roli v obraně proti parazitárním infekcím u člověka (M. Capron a A. Capron, Science, 264, 1876- 1877, 1994). Ale v průmyslových zemích, se zlepšenými hygienickými podmínkami, je setkání s parazity méně časté než porucha systému IgE nadměrnou tvorbou IgE jako odpověď na alergeny životního prostředí, což má za následek alergie a jiné chorobné stavy zprostředkované IgE nebo IgE-receptorem.
IgE je primární protilátka zapojená do spuštění okamžité alergické odpovědi a je hlavní účastník udržování odpovědi pozdní fáze. IgE se syntetizuje v lymfocytech B a projevuje svůj účinek po vazbě na vysoce afinitní receptor pro IgE, např. FceRI, který se nalézá na povrchu alergických efektorových buněk, jako jsou žírné buňky (mastocyty),
·· ·· basofily a eosínofily. IgE také uplatňuje induktorovou funkci vazbou ke svému receptoru nebo buňkám prezentujícím antigen, jako jsou Langerhansovy buňky, lymfocyty B a monocyty (G.C. Mudde et al., Allergy, 50, 193-199, 1995).
Alergická odpověď nebo stav se manifestuje, když se molekuly IgE vážou na povrch alergických efektorových buněk prostřednictvím receptoru IgE, FceRI, zesíťuj! se alergenem, a tím dávají signál ke spuštění degranulace cytoplazmatických granulí v buňkách, s doprovodným uvolněním mediátorů alergie, jako je histamin, serotonin, prostaglandiny a cytokiny, a následný místní edém tkáně a vcestování zánětlivých buněk. Jako alternativní prostředek stimulace alergie a přidružených stavů je interakce receptoru IgE, FceRI, s cirkulujícími protilátkami proti FceRI.
FceRI typicky existuje jako tetramer obsahující řetězce α, β a dva řetězce γ (tj. podjednotky), ačkoliv na monocytech a Langerhansových buňkách je podjednotka β nepřítomná.
Ukázalo se, že IgE-vazebné místo FceRI je celé obsaženo v podjednotce α (nazýváno FceRIcc) (J. Hakimi et al., J. Biol. Chem., 265, 22079-22081, 1990, U. Blank et al. , J. Biol. Chem., 266, 2639-3646, 1991). Bylo zjištěno, že rekombinantní „knockout myši, u kterých byla geneticky odstraněna celá podjednotka a, jsou neschopné vytvořit alergickou odpověď na alergenový podnět (D. Dombrowicz et al., Cell, 75, 969-976,
1993).
FceRI je značně glykosylovaný polypeptid o molekulové hmotnosti asi 60 kD, obsahující hydrofobní transmembránovou doménu, a také hydrofilní extracelulární (,,ekto-„) a cytoplazmatické domény, které jsou exponovány na vnějším povrchu buňky. Vazebná schopnost IgE pro FceRIcc byla dále lokalizována do jeho extracelulární části, (J. Hakimi et al., 1990, supra, Leder et al., USP 4 962 035) . Je možné tvořit rozpustnou, secernovatelnou molekulu excizí transmembránové části a sekvencí od ní po směru transkripce (C. Ra et al., Int. Immunol., 5, 47-54, 1993), a výsledný zkrácený fragment skládající se v podstatě z extracelulární domény lidského FceRIa, má IgE-vazebnou aktivitu in vitro a in vivo (M. HaakFrendscho et al., Immunol., 151, 351-358, 1993, aminokyselinové zbytky 1 až 204 z FceRIa fúzovaného se zkrácenou C oblastí řetězce H IgGl, (C. Ra et al., 1993, supra: zbytky 1 až 172 z FceRIa v tomto textu odpovídají zbytkům 26 až 197 ze sekvence s identifikačním číslem 1 zde). Strukturální rysy tohoto fragmentu zahrnují dva potenciální disulfidové můstky a sedm potenciálních glykosylačních míst (M. Haak-Frendscho et al., 1993, supra).
Proto fragmenty FcsRIcc skládající se v podstatě z extracelulární domény mohou být teoreticky léčebně podávány savci, aby vázaly sérový IgE a aby zabránily vazbě na jeho vysoce afinitní receptor na alergických efektorových buňkách, a také pro supresi biosyntézy IgE de novo v lidských lymfocytech (Y. Yanagihara et al., J. Clin. Invest., 94, 2162-2165, 1994) .
Avšak účinnému použití polypeptidů vázajícího IgE, jako je extracelulární doména FcsRIa, pro systematickou léčbu IgE nebo IgE-receptorem zprostředkovaných alergických poruch u savců, brání jeho mimořádná nestálost in vivo způsobená rychlou clearencí z cirkulující plazmy. Vezme-li se do úvahy, že nemoci zprostředkované IgE nebo IgE-receptorem zodpovídají za 10-20 % kontaktu lékaře s pacientem, účinné léčení by tvořilo významný prospěch pro pacienty, kteří takovými stavy trpí, a důležitý pokrok v klinické léčbě poruch zprostředkovaných IgE nebo IgE-receptorem, jako je alergie a stavy spojené s alergií.
Bylo by proto prospěšné získat polypeptid vázající IgE, který má prodloužený účinný sérový poločas, a tedy vylepšený klinický užitek v léčbě alergie, a zejména v systémovém léčení atopické dermatitidy, atopického astmatu a chronické kopřivky, a také účinně a bez velkých nákladů vylepšenou aktivitu.
Podstata vynálezu
Doposud bylo objeveno, že fúzí IgE-vazebné domény s lidským sérovým albuminem (HSA) se mohou získat fúzní polypeptidy, které mají prodloužený sérový poločas ve vztahu k samotné IgE-vazebné doméně, beze ztráty IgE-vazebné aktivity, což vede k vytvoření IgE-vazebných polypeptidů indikovaných pro použití při systémové léčbě alergie a dalších poruch zprostředkovaných IgE. Systémově podávaný polypeptid vázající IgE se váže na sérové IgE, a také na cirkulující autoprotilátky proti receptorů IgE, FceRIa, a zabraňuje jejich vazbě na buněčně navázaný FcsRIa, a také zabraňuje a/nebo inhibuje alergickou reakci a s ní spojené proj evy.
Dále bylo zjištěno, že významná zlepšení v IgE-vazebné aktivitě mohou být dosažena použitím fúzních polypeptidů podle vynálezu obsahujících více než jednu IgE-vazebnou doménu na molekulu. Například se zjistilo, že dimer molekuly podle vynálezu má významně zvýšenou IgE-vazebnou aktivitu ve srovnání s monomerem vynálezu.
Termín „dimer se zde týká fůzního polypeptidu podle vynálezu, který má dvě IgE-vazebné domény. Termín „monomer se týká fůzního polypeptidu vynálezu, který má jednu IgEvazebnou doménu. Monomer nebo dimer může být vytvořen z jedné nebo několika složek HSA. Například· monomem! fúzní • · · ·
I · ♦ · » · · · • · · · » · polypeptid podle vynálezu může obsahovat IgE-vazebnou doménu fúzovanou na jeho buď aminovém nebo karboxylovém konci se složkou HSA. Alternativně může monomer obsahovat IgE-vazebnou doménu fúzovanou na jeho obou koncích se složkami HSA. Dimerní fúzní polypeptid podle vynálezu může obsahovat například dvě IgE-vazebné domény fúzované prostřednictvím karboxylového konce jedné a aminového konce druhé se složkou HSA nacházející se uprostřed. Jako alternativa může dimer obsahovat, kromě svých dvou IgE-vazebných domén, několikanásobné složky HSA.
Dále bylo objeveno, že molekula dimeru podle vynálezu má nečekaně uspokojivou aktivitu.
Vynález se proto týká fúzních polypeptidů a jejich solí, které obsahují alespoň jednu IgE-vazebnou doménu fúzovanou s alespoň jednou složkou HSA, výhodně s monomerními fúzními polypeptidy, kde jedna IgE-vazebná doména je fúzována s jednou nebo více složkami HSA, nebo s multimerními fúzními polypeptidy, kde jsou dvě nebo více IgE-vazebných domén fúzovány s alespoň jednou složkou HSA, výhodněji, s dimery, které mají dvě IgE-vazebné domény a alespoň jednu složku HSA.
Vynález se dále týká jejich polynukleotidových meziproduktů.
Termíny „fúzní ve kterých
i) daná funkční doména nebo „fúze se zde týkají polypeptidů, tj . IgE-vazebná doména) je vázána na svém karboxylovém konci kovalentní (výhodně peptidovou, tj . amidovou) vazbou buď k aminovému konci jiné funkční domény (tj. složky HSA) nebo ke spojovacímu peptidu, který sám je vázán kovalentní (výhodně peptidovou) vazbou k aminovému konci další funkční domény, a/nebo
* · · · · · · ii) daná funkční doména (tj. IgE-vazebná doména) je vázána na svém aminovém konci kovalentní (výhodně peptidovou, tj . amidovou) vazbou buď ke karboxylovému konci jiné funkční domény (tj. složky HSA) nebo ke spojovacímu peptidu, který sám je vázán kovalentní (výhodně peptidovou) vazbou ke karboxylovému konci další funkční domény.
Podobně také termín „fúzovaný znamená, je-li ho použito ve spojení s polynukleotidovými meziprodukty, že 3'-konec (nebo 5'-konec) nukleotidové sekvence kódující první funkční doménu je navázán k odpovídajícímu 5'-konci (nebo 3'-konci) nukleotidové sekvence kódující druhou funkční doménu, buď kovalentní vazbou nebo nepřímo prostřednictvím nukleotidové spojky, která je sama kovalentně vázána nejlépe na svých koncích k polynukleotidu kódujícímu první funkční doménu a k polynukleotidu kódujícímu druhou funkční doménu.
Výhodně je fúzní polypeptid nebo jeho sůl monomer nebo dimer, když je to dimer, obsahuje dvě IgE-vazebné domény fúzované ke složce HSA, jako je první IgE-vazebná doména fúzovaná na svém karboxylovém konci k aminovému konci složky HSA, a druhá IgE-vazebná doména fúzovaná na svém aminovém konci ke karboxylovému konci složky HSA.
Fúzní polypeptidy vynálezu mohou také zahrnovat další funkční domény kromě IgE-vazebných domén a složek HSA, např. nezkrácenou nebo zkrácenou formu (např. rozpustné, extracelulární fragmenty) lidských proteinů, jako jsou cytokiny nebo amino-koncové fragmenty urokinázy. Tyto přídatné funkční domény mohou samy sloužit jako spojovací peptidy například pro připojení IgE-vazebné domény k jiné IgE-vazebné doméně nebo ke složce HSA, alternativně mohou být lokalizovány někde jinde ve fúzní molekule, např. na jejím aminovém nebo karboxylovém konci.
Příklady fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu mohou být reprezentovány následujícími obecnými vzorci:
I. R,-L-R2
II. R2-L-Ri
III. R,-L-R2-L-Ri
IV. R1-L-Ri~L-R2
V. R2-L-RÍ-L-R!
kde
Rx je aminokyselinová sekvence IgE-vazebné domény,
R2 je aminokyselinová sekvence složky HSA, každé L je nezávisle kovalentní (výhodně peptidová) vazba, nebo je peptidový linker (spojka), který je vázán kovalentní (výhodně peptidovou) vazbou ke konci Rl a/nebo R2, přičemž výše uvedené molekulové fragmenty je třeba číst směrově, tj . s levou stranou odpovídající aminovému konci a pravou stranou karboxylovému konci molekuly.
Bylo zjištěno, že vazba IgE je silná, když je fúzní polypeptid veden IgE-vazebnou doménou, což je, když IgE-vazebná doména tvoří N-koncovou část zralého fúzního proteinu (jako ve sloučeninách vzorců I, III a IV, viz výše). Obzvláště výhodně provedení vynálezu zahrnuje dimer vzorce III uvedeného výše, tj . kde proteinová oblast, která vede expresi je IgE-vazebná doména, fúzovaná na svém karboxylovém konci k aminovému konci složky HSA, která zase sama je fúzovaná na svém karboxylovém konci k aminovému konci druhé IgE-vazebné domény. Když je více než jedna skupina Rx, nebo více než jedna skupina R2, nebo více než jedna skupina L, mohou tyto skupiny být, ale ne nezbytně, totožné.
Výhodně fúzní polypeptidy vynálezu obsahují alespoň jedno rozpustnou secernovatelnou savčí IgE-vazebnou doménu fúzovanou k alespoň jedné složce HSA, a její farmaceuticky přijatelné soli.
0 · · » 0 0 0
I 0 0 0
000 000
0 • 0 00
Vynález se dále týká způsobu prevence a/nebo léčby IgE nebo receptorem IgE zprostředkovaných poruch, a obzvláště alergických reakcí, jako je atopická dermatitida, atopické astma a chronická kopřivka, kterýžto způsob zahrnuje podávání fúzních polypeptidů podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí pacientovi, který takovou léčbu potřebuje. Dále se vynález týká farmaceutických přípravků obsahujících fúzní polypeptidy podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, spolu s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
Vynález se dále týká fyziologicky funkčních ekvivalentů fúzních polypeptidů podle vynálezu, které jsou meziprodukty syntézy polypeptidů, a také polynukleotidů, které jsou meziprodukty v přípravě fúzních polypeptidů nebo jejich fyziologicky funkčních ekvivalentů, jak je definováno výše, a také oligonukleotidových meziproduktů, které jsou použity pro jejich tvorbu, peptidů kódovaných takovými oligonukleotidy, rekombinantních vektorů pro expresi fúzních molekul, prokaryotických nebo eukaryotických (zejména savčích) expresních systémů, a dále způsobů přípravy fúzních polypeptidů nebo jejich fyziologicky funkčních ekvivalentů použitím takových expresních systémů.
Popis sekvencí s identifikačními čísly a příbuzné definice
Sekvence identifikačního čísla 1: Aminokyselinová sekvence dominantní formy nezkráceného nativního lidského FcsRIa, včetně signální sekvence.
Termín „pre-IgER se vztahuje k aminokyselinovým zbytkům Meti až Leu204 ze sekvence identifikačního čísla 1. Termín „IgER se vztahuje ke zralé formě pre-IgER a tvoří zbytky Val26 až Leu204 ze sekvence identifikačního čísla 1 (tj . extracelulární doménu FcsRIa).
Sekvence identifikačního čísla 2: Aminokyselinová sekvence dominantní formy nativního prepro-HSA (nazývaná zde jako „prepro HSA I), zahrnující zbytky Met2 až LeuS09.
Dominantní forma zralého nativního proteinu (nazývaná zde jako „HSA I) je představována zbytky Asp2s až Leu6o9 ze sekvence identifikačního čísla 2.
Termín „prepro HSA II představuje fragment nativní sekvence zkrácené o jednu aminokyselinu (Leu60s) na karboxylovém konci, a proto se týká zbytků Meti až GlyS08 ze sekvence identifikačního čísla 2.
Zralá forma prepro HSA II, nazývaná zde jako „HSA II je představována zbytky Asp2s až Leu6o9 ze sekvence identifikačního čísla 2.
Sekvence identifikačního čísla 3: Aminokyselinová sekvence kódovaná fragmentem EcoRI plazmidů R-H-R/SK#50, připraveného v příkladu 5, obsahující sekvenci pre-IgER ve zbytcích 1 až 204, spojku AlaSer(Gly)4Ser (dále nazývanou „Li) ve zbytcích 205 až 211, sekvenci HSA II ve zbytcích 212 až 795, spojku (GlyUSer (dále nazývanou „L2) ve zbytcích 796 až 799, a sekvenci „IgER ve zbytcích 800 až 978.
Zralý dimerní fúzní polypeptid podle vynálezu, nazývaný zde jako „IgER - Li - HSA II - L2 - IgER nebo alternativně jako „IgER - HSA - IgER dimer, exprimovaný buňkami CHO způsobem popsaným v přikladu 7, má aminokyselinovou sekvenci Val26 až Leu9?g ze sekvence identifikačního čísla 3.
Sekvence identifikačního čísla 4: Nukleotidová sekvence fragmentu EcoRI plazmidu R-H-R/SK#50 z příkladu 5, obsahující: polynukleotidovou sekvenci kódující „pre-IgER v pozicích 10 až 621, oligonukleotid kódující Li v pozicích 622 až 642, polynukleotid kódující HSAII v pozicích 643 až 2394, oligonukleotid kódující L2 v pozicích 2395 až 2406, a polynukleotid kódující „IgER v pozicích 2407 až 2943, se 2 stopovacími kodony v pozicích 2944 až 2949.
Restrikční místa na koncích kódujících fragmentů a ve spojovací oblasti jsou v pozicích 1 až 6, 622 až 627, 637 až 642, 2387 až 2393, 2401 až 2406, a 2950 až 2955. Kozáková sekvence je v nukleotidové pozici 7 až 9.
Bodové mutace, které se liší od souhlasné nukleotidové sekvence HSA, jsou v pozicích 804, 1239, 1290, 1446, 1815, 2064 a 2079. Protože bodové mutace jsou v kolísavé pozici, neovlivňují aminokyselinovou sekvenci.
Sekvence identifikačního čísla 5: Nukleotidová sekvence dominantní formy nativního prepro-HSA odpovídající obr. 12 a aminokyselinové sekvenci identifikačního čísla 2.
Sekvence identifikačního čísla 6: Nukleotidová sekvence dominantní formy nezkráceného nativního lidského FcsRIa včetně signální sekvence, odpovídající obr. 13 a aminokyselinové sekvenci identifikačního čísla 1.
Popis obrázků
V následujících obrázcích je třeba uvedené molekuly číst směrově, tj. levá strana odpovídá aminovému (nebo 5'-) konci a pravá strana odpovídá karboxylovému (nebo 3'-) konci.
Obrázky 1A-C: Sérový poločas u myší: proteinová koncentrace in vivo (v pikomolech proteinu na ml séra) v průběhu času (10-800 minut po injekci):
A) volný protein ΗΞΑ I, a
B) protein IgER (nazývaný jako „volný řetězec alfa) a dimerní fúzní polypeptid IgER - Li - HSA II - L2 - IgER (nazývaný jako „IgER - HSA - IgER dimer) připravený z buněk CHO, jak je popsáno v příkladu 7.
C) sérový poločas volného HSA I z A) porovnaný s poločasem dimerního fúzního polypeptidu („IgER - HSA - IgER) z B) normalizací k 1 s ohledem na sérové koncentrace v 10 minutách po injekci.
Obrázek 2: Extravazát vyplývající z pasivní kožní anafylaktické reakce u myší, kterým se podávala sériová ředění (10 μρ/kg, 50 μρ/kg nebo 500 μρ/kg) polypeptidu IgER Li - HSA II - L2 - IgER („IgER - HSA - IgER dimer) připraveného jak popsáno v příkladu 7 (kontrolní skupina dostávala 0 μρ/kg) , oblast v mm2, v intervalech 5, 15 nebo 30 minut před senzibilizací (alergizací) intradermální injekcí monoklonální myší IgE anti-dinitrofenylové (DNP) protilátky a následnou provokací s roztokem DNP-bovinního sérového albuminu obsahujícího 1% Evansovu modř.
Obrázek 3: Schematické znázornění tří fúzních polypeptidů podle vynálezu (dva monomery a jeden dimer), jsou také ukázány polypeptidové spojky:
I. Monomery:
1) základní monomer HSA-vedoucí obsahující HSA II (v obrázku nazývaný „HSA) fúzovaný prostřednictvím L2 („GGGS) k IgER. Nukleotidy kódující pozice Leu6o7Gly6o8 z HSA II obsahují jediné místo Mstil, jak je vyznačeno, a nukleotidy kódující GlySer z L2 obsahují místo BamHI (kódované aminokyseliny podtrženy),
2) základní monomer IgE-vazebné domény obsahující IgER fúzovaný na svém karboxylovém konci prostřednictvím Li (tj. „ASGGGGS) k HSA II (v obrázku nazývaný „HSA). Oligonukleotid kódující Li obsahuje místo Nhel a místo BamHI (kódované aminokyseliny AlaSer a GlySer z Li jsou podtrženy).
II. Dimer:
Základní dimer IgE-vazebné domény obsahující první IgER fúzovaný na svém karboxylovém konci prostřednictvím Li k aminovému konci HSA II (v obrázku nazývaný „HSA), jehož karboxylový konec je fúzován ke druhému IgER prostřednictvím L2 s restrikčními místy v kódujícím polynukleotidů, jak je popsáno výše pro monomer.
Obrázek 4: Primery PCR pro zkrácení úplné cDNA (nazývané zde „cDNA receptoru IgE) lidského FcsRIa, aby se získala DNA kódující:
i) IgER (místo BamHI přidané na 5' konec kódujícího vlákna pro FcsRIa oligonukleotidem č. 18, a stopovací kodon a místa EcoRI a Sáli přidaná na 3' konec nekódujícího vlákna oligonukleotidem č. 19), ii) pre-IgER (oligonukleotid č. 20 přidávající místa Sstl, EcoRI a Kozákovo na 5' konec kódujícího vlákna pro FceRIa, oligonukleotid č. 31 přidávající místa Notl a Nhel (a odstraňující druhé místo Nhel) v nekódujícím vláknu pro FceRIcc) ,
iii) pre-IgER (oligonukleotid č. 20 popsáno výše) | a č | . 19 | použité, | j ak |
A) „HSA-vedoucí: subklonování i) | výše | do | vektoru | SK, |
poskytující klonovací vektor TA klonu | pEKl | použitý | pro | |
konstrukci základního monomeru HSA II, | ||||
B) „IgER-vedoucí: subklonování | ii) | do | vektoru | SK, |
poskytující konstrukt IgER/ΤΑ č. 1 | použitý | pro přípravu | ||
základního monomeru IgER, | ||||
C) „samotný IgER: subklonování | iii) | do | vektoru | SK, |
poskytující konstrukt IgER FL/TA č. 34 použitý pro expresi zralého IgER pro použití jako standard.
Dvojitá hvězdička představuje dva stopovací kodony.
Obrázek 5: Páry primerů PCR pro zkrácení úplné cDNA lidského prepro-HSA pro získání cDNA kódující:
i) prepro-HSA II fúzovaný na karboxy konci k L2 (oligonukleotid č. 24 přidávající místa Spěl, EcoRI a Kozákovu sekvenci na 5'-konec kódujícího vlákna, oligonukleotidy č. 28 a 29 přidávající spojku kódující místa Mstil a HindlII na 3'-konci HSA II) ii) L: fúzovaný k 5' konci HSA II (oligonukleotid č. 26 přidávající místa Notl, Nhel, spojku a BamHI na kódující vlákno, oligonukleotid č. 27 obsahující místo Ncol v nekódujícím vláknu), iii) prepro-HSA I (oligonukleotid č. 24 použitý jako výše, a oligonukleotid č. 25 přidávající stopovací místo
•· ···· ·* • · · · · • ··· · · • · 0 · · • · · · | • <· 00 00 0 ·· 0 0 0 0 0 0 • 9 000 000 0 0 0 | |
14 | ||
a místa EcoRI a HindlII | na 3'-konec | nekóduj ícího |
vlákna), | ||
A) „HSA-vedoucí: subklonování i) | do vektoru SK, | poskytující |
pEK7 použitý pro konstrukci základního monomeru HSA II,
B) „IgER-vedoucí: subklonování ii) do vektoru SK, poskytující HSA/SK#5 použitý pro konstrukci základního monomeru IgER,
C) „samotný HSA: subklonování iii) do vektoru SK, poskytující hSA/SK#17 kódující zralý nativní protein lidského sérového albuminu (tj. HSA I) pro použití jako standard.
Obrázek 6: Oligonukleotidy pro sekvencování lidského sérového albuminu (HSA) č. 1-10, 12, 16, 17, 22 a 30, použité pro sekvencování materiálu klonovaného do TA a po vazbě na IgE-vazebné fragmenty.
Obrázek 7: Oligonukleotidy pro sekvencování receptorů IgE č. 11, 13 a 23, použité pro sekvencování fragmentů klonovaných do TA a po vazbě na složku HSA.
Obrázek 8:
A) mutagenní oligonukleotidy č. 14 a č. 15 pro lidský sérový albumin,
B) pro PCR a linkery (spojovací oligonukleotidy) č. 18-20, 24-29 a 31 pro konstrukci fúzních polypeptidů.
Obrázek 9: Konstrukce vektoru HSA-IgER/SK#49, obsahujícího polynukleotid kódující prepro-HSA II (nazývaný na obrázku „HSA) fúzovaný na 3'-konci prostřednictvím oligonukleotidu kódujícího spojku L2 (představovanou na obr. 9 „GGG) k 5' konci polynukleotidu kódujícího IgER (nazývaný na • · obrázku „IgER), ligací fragmentu BamHl, Sall z pEKl do pEK7 naštěpeného BamHl, Sall.
Obrázek 10: Konstrukce vektoru IgER-HSA/SK#l, obsahujícího polynukleotid kódující pre-IgER (nazývaný na obrázku „IgER), fúzovaný na 3'-konci prostřednictvím oligonukleotidu pro spojku Li (představovanou na obr. 9 „GGG) k 5'-konci polynukleotidu kódujícího HSA II („HSA), ligací fragmentu Sstl, Nhel z IgER/TA#l do HSA/SK#5 naštěpeného Sstl, Nhel.
Obrázek 11: Konstrukce vektoru HSA-IgER Pst Sal/SK#37, obsahujícího polynukleotid kódující HSA II (označený „HSA3), který je fúzovaný na 3'-konci prostřednictvím oligonukleotidu pro L2 (nezobrazeno) k 5'-konci polynukleotidu kódujícího IgER (označen jako „IgER), ligací fragmentu Pstl, Sall z HSAIgER/SK#49 do vektoru SK. Je také ukázána konstrukce vektoru R-H-R/SK#50, obsahujícího polynukleotid kódující pre-IgER (nazvaný jako „IgER), fúzovaný na svém 3'-konci prostřednictvím oligonukleotidu pro Li (nezobrazeno) k 5'-konci polynukleotidu kódujícího HSA II („HSA), který je po řadě fúzován prostřednictvím oligonukleotidu pro L2 (nezobrazeno) k polynukleotidu kódujícím IgER (IgER). Vektor je připraven ligací fragmentu Pstl, KpnI z HSA-IgER Pst Sal/SK#37 do IgER-HSA/SK#l naštěpeného Pstl, KpnI.
Obrázek 12: Nukleotidová sekvence lidského sérového albuminu a aminokyselinová sekvence odpovídající sekvenci identifikačního čísla 2 a sekvenci identifikačního čísla 5.
• Λ
Obrázek 13: Nukleotidová sekvence IgER a aminokyselinová sekvence odpovídající sekvenci a sekvenci identifikačního čísla 6 identifikačního čísla
Obrázek 14: Nukleotidová a aminokyselinová sekvence fragmentu EcoRI z R-H-R/SK#50 odpovídající sekvence identifikačního čísla 3 a sekvence identifikačního čísla 4, kódující dimerní fúzní protein R1 - HSA - R1. Sekvence HSA je označena kurzívou. Sekvence spojky jsou vyznačeny malými písmeny. Bodové mutace lišící se od souhlasné sekvence nukleové kyseliny pro HSA jsou vyznačeny malými písmeny tučně. Protože bodové mutace jsou v kolísavé pozici, neovlivňují aminokyselinovou sekvenci. Restrikční místa na koncích fragmentů a v oblasti spojky jsou podtržena.
Obrázek 15: SDS-PAGE purifikovaného zralého fúzního polypeptidu z příkladu 7:
Celková množství nanesená na gel: 8 pg (dráha 1), 6 pg (dráha 2), 4 pg (dráha 3) a 2 pg (dráha 4), standard molekulové hmotnosti: 97,4, 66, 2, 45, 31, 21,5 a 14,4 kD (dráha 5).
• · <
I
Detailní popis vynálezu
Vynález se týká fúzních polypeptidu a jejich solí, obsahujících alespoň jednu vazebnou doménu fúzovanou alespoň s jednou složkou HSA.
Termín „IgE-vazebná doména se týká sekvence aminokyselin schopné se vázat nebo jiným způsobem asociovat se savčím, např. lidským IgE takovým způsobem, že brání vazbě IgE na jeho receptor FcsRI.
Sekvence cDNA a z ní odvozená sekvence aminokyselin lidského FcsRIa jsou známy (J. Kochan et al., Nucleic Acid Research 16, 1988, 3584, Leder et al., patent USA 4 962 035). Lidský FcsRIa kóduje signální peptid NH2-konce (aminokyselinové zbytky , včetně prvního Met, Meti až Ala24) , dvě extracelulární domény podobné imunoglobulinu (zbytky Val2S až Leu204 ) , hydrofobní transmembránový úsek (Gln20s až Ile224 ) a hydrofilní cytoplazmatický úsek (Ser225 až Asn257, viz sekvence id. č. 1). Signální peptid je během opracování v buňce odštěpen. Úplná aminokyselinová sekvence dominantní formy nativního lidského FcsRIa je zde uvedena jako sekvence id. č. 1.
Termín „IgER označuje sekvence aminokyselin Val25 až Leu2o4 sekvence id. č. 1 (kódující extracelulární doménu) a termín „pre-IgER označuje aminokyselinové zbytky Meti až Leu204 sekvence id. č. 1 (kódující signální sekvenci lokalizovanou proti směru transkripce od extracelulární domény).
IgE-vazebná doména je např. aminokyselinová sekvence, která má alespoň 80%, výhodněji 85% nebo ještě výhodněji 95%, případně nej výhodněji 99% homologii s IgER definovaným v předchozím textu (přičemž homologie se počítá jako % identity mezi nativní sekvencí a pozměněnou sekvencí jako funkce celkové délky sekvence nativní molekuly, po srovnání sekvencí včetně vložených mezer, pokud je to nutné pro dosažení maximální identity v %).
V podskupině fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu složka IgE-vazebné domény je (Xa) kde (Xa) je
a) IgER, nebo
b) přirozeně se vyskytující alela IgER, nebo
c) peptid uvedený v a) nebo b) zkrácený na karboxylovém konci o 1 až 12 aminokyselin (např. 1 až 10, 1 až 7 nebo 1 až 4), nebo
d) varianta peptidů uvedeného v a), b) nebo c).
Přičemž variantou se rozumí:
- sekvence uvedená v a) , b) nebo c) modifikovaná jednou nebo několika delecemi (jinými než zkrácením karboxylové konce) až do 10 delecí (např. 1 až 7 nebo 1 až 5) aminokyselin,
- inzerce (vložení) až celkem 10 aminokyselin (např. 1 až 5) dovnitř aminokyselinové sekvence nebo až 100 aminokyselin na kterýkoliv její konec, nebo konzervativní substituce celkem až 15 (např. 1 až 5) aminokyselin.
IgE-vazebná doména je výhodněji (Xb) kde (Xb) je
a) IgER, nebo
b) IgER zkrácený na karboxylovém konci o 1 až 7 aminokyselin, nebo
c) varianta peptidů uvedeného v a) nebo b).
• 9 ···· »· 9 ·· ** • 99 9 · ·· · 9 9 9 • · 99 9 · · · · · · • ··· e · 9 »»···· • · · · · · · » ···· 99· ·· 939 99 99
IgE-vazebná doména je ještě výhodněji (Xc) kde (Xc) je
a) IgER, nebo
b) IgER zkrácený na karboxylovém konci o 1 až 7 aminokyselin (tedy např. sekvence Val26 až Alai97, viz sekvence id. č. 1) .
Nejvýhodněji IgE-vazebná doména je IgER.
Výhodně, kterýkoliv homolog, zkrácený peptid nebo varianta jsou připraveny rekombinantním způsobem jako secernovatelný polypeptid, zejméma zralý peptid se sekvencí kódující IgE-vazebnou doménu, může být secernován z hostitelské buňky, ve které je tento polypeptid (nebo jeho prekurzorová forma) sybtetizován z polynukleotidu.
Další hlaví součástí rekombinantního fůzního polypeptidu podle předkládaného vynálezu je lidský sérový albumin (HSA), který tvoří nejhojnější protein v plazmě, tj. 60% hmotnostních z celkového proteinu plazmy. Molekula lidského sérového albuminu je tvořena jediným polypeptidovým řetězcem z 585 aminokyselin, který není glykosylován, jeho molekulová hmotnost je 66,5 kDa. Specifickým rysem albuminu je jeho vzorec disulfidových vazeb (F.F.Clerc et al., J. Chromatogr. 662, 1994, 245-259) . Lidský sérový albumin se vyskytuje v celém těle, zvláště v krevním a intestinálním kompartmentu, kde se podílí jako hlavní proteinová složka séra, udržování osmolarity a plazmatického objemu. Pomalu je odstraňován v játrech a u člověka je jeho in vivo poločas 14 až 20 dnů (T.A.Waldmann. „Albumin structure, Function and uses. Pergamnon Press, 1977, 255-275). Lidský sérový albumin nemá ani enzymatickou ani imunologickou funkci. Je to přirozený ···· « · · • ··· • ·
9· · • 9 99 • · · • · · · • 4 4 • 9 999 ·· 94 • · · · • · 9 4 • ··· 494
9
99 nosič, účastnící se endogenního transportu a přenosu různých přirozených molekul a také léčiva (H. Lu et al., FEBS Lett. 356, 1994, 56-59, WO 93/15199, EP 648499, P. Yeh et al., PNAS USA 89, 1992, 1904-1908, EP 413622).
Lidské buňky syntetizují sérový albumin nejdříve ve formě prepro-polypeptidu. Signální sekvence tvořená 18 aminokyselinami (včetně prvního Met) je odstraněna při průchodu proteinu lumenem endoplazmatického retikula, přičemž stále ještě zůstává 6 aminokyselin na N-konci (v převládající formě jsou to: Ar-Gly-Val-Phe-Arg-Arg) , které jsou potom proteolyticky odstraněny buď během anebo bezprostředně po transportu sekretorickým aparátem. Lidský sérový albumin je polymorfní, jak je dobře známo (D.C.Carter aj.X.Ho, Adv. Prot. Chem. 45, 1994, 153-203). Tak např. albumin Naskapi má Lvs372 místo Glu372, proalbumin Christchurch má pozměněnou prosekvenci, kde je Glu24 místo Arg24 (Latta et al. , Patent USA 5 100 784) .
Úplná aminokyselinová sekvence dominantní formy přirozeně se vyskytujícího proteinu, který je zde označován jako „prepro-HSA I je známa (A. Dugaiczyk et al. , PNAS USA, 79, 1982, 71-75) a je zde uvedena jako sekvence id. č. 2. Dominantní forma zralého proteinu („HSA I)je představována Asp25 až LeuS09 sekvence id. č. 2.
Nosičový HSA fúzního proteinu podle předkládaného vynálezu je aminokyselinová sekvence, která má alespoň 80%, výhodněji 85% nebo ještě výhodněji 95%, případně nejvýhodněji 99% homologii se sekvencí určenou zbytky 25 až 609 sekvence id. č. 2 (tj . HSA I) (přičemž homologie se počítá jako % identity mezi nativní sekvencí a pozměněnou sekvencí jako funkce celkové délky sekvence nativní molekuly, po srovnání sekvencí včetně vložených mezer, pokud je to nutné pro dosažení maximální identity v %) .
• · ··
V podskupině fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu je složka HSA (Ya) kde (Ya) je
a) HSA I, nebo
b) přirozeně se vyskytující alela peptidu uvedeného v a), nebo
c) peptid uvedený v a) nebo b) zkrácený na svém karboxylovém konci o 1 až 10 aminokyselin (tj. např. 1 až 5 nebo 1 až 2), nebo
d) peptid uvedený v a) zkrácený tak, že končí aminokyselinovým zbytkem a, kde a je 369 až 419, a zejména kde a je 373, 387, 388, 389, 390 a 407 (viz Patent USA 5 380 712), nebo
e) varianta peptidu uvedeného v a), b), c) nebo d).
Přičemž variantou se rozumí:
- sekvence uvedená v a) , b) , c) nebo d) modifikovaná jednou nebo několika delecemi (jinými než zkrácením karboxylové konce) až do 10 delecí (např. 1 až 7 nebo 1 až 5) aminokyselin,
- inzerce (vložení) až celkem 10 aminokyselin (např. 1 až 5) dovnitř aminokyselinové sekvence nebo až 100 aminokyselin na kterýkoliv její konec, nebo konzervativní substituce celkem až 15 (např. 1 až 5) aminokyselin.
Výhodněji je složka HSA (Yb) kde (Yb) je
a) HSA I, nebo
b) přirozeně se vyskytující alela peptidu uvedeného v a), nebo • · · · • ··· ···
c) peptid uvedený v a) nebo b) zkrácený na svém karboxylovém konci o 1 až 10 aminokyselin (tj . např. 1 až 5 nebo 1 až 2), nebo
d) varianta peptidu uvedeného v a) , b) nebo c).
Ještě výhodněji složka HSA je (Yc) kde (Yc) je
a) HSA I, nebo
b) peptid uvedený v a) nebo b) zkrácený na svém karboxylovém konci o 1 až 10 (tj. např. o 1) aminokyselin (příkladem takového zkrácení je „HSAII , představovaný zbytky Asp2s až GlyS08 sekvence id. č. 2) .
Nejvýhodnější subskupinou HSA složky je složka HSAI nebo HSAII, zvláště pak HSAII.
Zvláště výhodný je fúzní polypeptid podle příkladu 7, zvláště bez vedoucí sekvence, tj . polypeptid Val26“Leu978 sekvence id. č. 3.
Výhodně kterýkoliv homolog, zkrácený peptid nebo varianta nativního HSA, které se použijí pro přípravu fúzního peptidu podle předkládaného vynálezu budou bez enzymatické funkce a nebudou bránit vazbě IgE-vazebné domény na sérový IgE nebo takovou vazbu inhibovat. Výhodně jakýkoliv takový homolog nebo varianta mají sérový poločas alespoň 14 dní.
Termín „konzervativní substituce se ve vztahu k IgE-vazebné doméně nebo složce HSA týká substituce jedné nebo několika aminokyselin jinými aminokyselinami, u kterých lze čekat, že mají podobné vlastnosti, a že alespoň sekundární struktura, a výhodně i terciární struktura ·· ·· • · · · polypeptidu zůstanou v podstatě nezměněny. Tak např. takovou substitucí je náhrada glycinu alaninem nebo valinem, glutaminu asparaginem, threoninu serinem a lysinu argininem. Všechny tyto amino-kyseliny (kromě glycinu) jsou výhodně přirozeně se vyskytující L-aminokyseliny.
Výhodně je každá IgE-vazebná doména alespoň z 95 % homologická s IgER a každá složka HSA je alespoň z 95 % homologická s HSA I.
V ostatních výhodných podskupinách:
- každá IgE-vazebná doména je výhodně (Xa) a každá složka HSA je (Ya) , nebo výhodněji (Yb) nebo ještě výhodněji (Yc) podle definic uvedených výše,
- každá IgE-vazebná doména je výhodněji (Xb) a každá složka HSA je (Ya) , nebo výhodněji (Yb) nebo ještě výhodněji (Yc) podle definic uvedených výše,
- každá IgE-vazebná doména je ještě výhodněji (Xc) a každá složka HSA je (Ya), nebo výhodněji (Yb) nebo ještě výhodněji (Yc) podle definic uvedených výše.
V dalším výhodném provedení IgE-vazebná doména je IgER a složka HSA je (Ya), nebo výhodněji (Yb) nebo ještě výhodněji (Yc) podle definic uvedených výše, nebo nejvýhodněji je HSA I nebo HSA II, zvláště pak HSA II.
Výhodnost zde popsaná se vztahuje také zvláště na polypeptidy podle každého ze vzorců I, II, III, IV a V zde uvedených.
Výhodné polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou takové, které obsahují jako první molekulu IgER fúzovanou prostřednictvím svého karboxylového konce k aminovému konci molekuly HSA II, a tato molekula HSA II je fúzována svým karboxylovým koncem k aminovému konci druhé molekuly IgER (přičemž IgER obsahuje zbytky VaÍ26 až Leu204 sekvence id. č. 1 a HSA obsahuje žbytky Asp25 až Glysos sekvence id. č. 2) .
k · · • · • · · ’
Zejména výhodné polypeptidy podle předkládaného vynálezu obsahují dimery podle vzorce III, kde každá skupina Ri je IgE* a R2 je HSA II. Zvláště výhodné polypeptidy jsou dimery podle vzorce III, kde každá skupina L je 1 až 25 aminokyselin.
Jakýkoliv peptidový linker (spojovací článek), ve vzorcích I až V označený skupina L, výhodně umožňuje nezávislé uspořádání a aktivitu IgE-vazebné domény, a nemá sklon vytvářet sekundární strukturu, která by mohla nepříznivě reagovat s IgE-vazebnou doménou nebo způsobovat imunitní reakci u pacienta, a má minimální hydrofobní a nábojové charakteristiky, které by mohly nějak reagovat s IgE-vazebnou doménou.
Peptidový linker je výhodně 1 až 500 aminokyselin, výhodněji 1 až 250 a ještě výhodněji 1 až 100 aminokyselin (tj. např. 1 až 25, 1 až 10, 1 až 7 nebo 1 až 4). Linker je výhodně lineární, tj . nerozvětvený. Obecně peptidové linkery obsahují Gly, Ala a Ser, u kterých lze čekat, že splní požadavky na linker. Tak např. k linkerům podle předkládaného vynálezu patří GlyGlyGlySer (zde označ. Li.) a AlaSerGlyGLyGlyGlySer (zde označ. L2) . Lze také užít linkery jiného složení a různých jiných délek.
Předkládaný vynález se také týká oligonukleotidů kódujících peptidové linkery podle vynálezu. Takové oligonukleotidy musí být fúzovány v souladu se čtecím rámcem (fúzovány v rámci) s polynukleotidy kódujícícmi IgE-vazebnou doménu a složku HSA, a výhodně osahují restrikční místa, která jsou jedinečná pro danou molekulu. Termínem „fúzovaný v rámci se tedy rozumí, že nedochází k posunu čtecího rámce IgE-vazebné domény ani složky HSA, který by způsobil oligonukleotid použitý jako linker, a že nedojde k terminaci * ·
translace mezi čtecími rámci pro IgE-vazebnou doménu a složku HSA.
Vynález se dále týká fyziologicky funkčních ekvivalentů nového fúzního polypeptidu podle předkládaného vynálezu, které jsou normálně meziprodukty při syntéze nového polypeptidu. Termín „fyziologicky funkční ekvivalent se výhodně týká větších molekul obsahujících fúzní polypeptid podle vynálezu, ke kterému byla přidána aminokyselinová sekvence, která je nutná nebo žádoucí pro dosažení účinné exprese a sekrece zralého rekombinantního fúzního polypeptidu podle vynálezu z určité hostitelské buňky. Taková dodatečná aminokyselinová sekvence je typicky na aminovém konci zralého polypeptidu a obvykle vytváří vedoucí (tj . signální) sekvenci, která slouží k tomu, aby polypeptid navedla do sekreční metabolické dráhy, a normálně je odštěpena buď během nebo po sekreci polypeptidu z buňky. Signální sekvence může být odvozena z přirozeného úseku aminového konce příslušného polypeptidu nebo ji lze získat z genu hostitele, který kóduje nějaký secernovaný protein, nebo ji lze odvodit z jakékoliv jiné sekvence, o které je známo, že zvyšuje sekreci požadovaného polypeptidu, včetně syntetických sekvencí a všech kombinací „pre a „pro úseků. Místo spojení mezi signální sekvencí a sekvencí kódující zralý polypeptid by mělo odpovídat místu štěpení v hostitelském organismu.
Ve fúzních polypeptidech, kde IgE-vazebná doména je vedoucí, „vede expresi, tj . je umístěna proti směru transkripce od další kódující sekvence ve fúzní molekule, je výhodné využít vedoucí sekvenci nativního lidského FcsRIa (tj . Meti + Ala2-Ala25 sekvence id. č. 1), což bylo účinně aplikováno pro získání zralého polypeptidu v savčím expresním systému (např. CHO, COS) a také ve kvasinkách (Pichia pastoris) .
• · · • · ·· · · ··*
Příkladem fyziologicky funkčních ekvivalentů zralého dimerního fúzního polypeptidu IgER-Li~HSAI I-L2-IgER je: preIgER-Li-HSAII-L2-IgER. Avšak dodatečná vedoucí sekvence nemusí být nutně lidská FceRIa a lze ji získat z jakéhokoliv vhodného zdroje, jestliže je vhodná k tomu, aby ovlivnila expresi a/nebo sekreci zralého polypeptidu z určitých hostitelských buněk. Tak např. lze užít prepro-sekvence HSA pro přípravu dimerního fúzního polypeptid zmíněného výše, zvláště pro expresi v kvasinkách.
Ve fúzním polypeptidu podle předkládaného vynálezu, kde složka HSA „vede expresi, vhodná vedoucí sekvence může obsahovat nativní vedoucí sekvenci. Např. nativní preproúsek z HSA lze užít pro dosažení sekerece zralého heterologního polypeptidu v savčích buňkách (např. CHO, COS) nebo kvasinkách (Pichia pastoris) .
Příkladem fyziologicky funkčního ekvivalentu zralého dimerního fúzního polypeptidu HSAII-L2-IgER je: prepro-HSAIIL2-IgER. Avšak i jiná vedoucí sekvence, nejen nativní sekvence z HSA nebo hostitelských buněk, může poskytnout účinnou expresi zralého fúzního proteinu v určitých hostitelích (patenty USA 5 100 784 a 5 330 901).
Vynález se dále týká polynukleotidů, které jsou meziprodukty při přípravě rekombinantních fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu, včetně polynukleotidů kódujících fúzní polypeptidy nebo jejich fyziologicky funkční ekvivalenty a také oligonukleotidů kódujících linkerové peptidy, které jsou uvedeny např. na obr. 8.
Dalším aspektem předkládaného vynálezu je způsob přípravy rekombinantního fúzního polypeptidu definovaného v předchozím textu nebo jeho soli, kterýžto způsob spočívá v tom, že se:
• 4 · transformuje hostitelská buňka vektorem, který obsahuje DNA kódující fúzní polypeptid definovaný v předchozím textu nebo jeho fyziologicky funkční ekvivalent, fúzní polypeptid nebo jeho fyziologicky funkční ekvivalent se exprimuje v těchto buňkách, přičemž fyziologicky funkčně ekvivalentní polypeptid je modifikován (např. odštěpením signální sekvence) tak, aby vytvořil fúzní polypeptid definovaný v předchozím textu, výsledný polypeptid se získá z hostitelských buněk, výhodně jako secernovaný produkt, případně ve formě jeho soli.
Ještě dalším aspektem předkládaného vynálezu jsou vektory, výhodně plazmidy, pro použití při expresi fúzních polypeptidů. Tyto vektory obsahují DNA, která kóduje polynukleotidy definované v předchozím textu nebo jejich fyziologicky funkční ekvivalenty. Obecně k vhodným vektorům pro transformaci mikroorganismů schopných exprimovat fúzní polypeptidy patří expresní vektory obsahující nukleotidové sekvence kódující fúzní polypeptidy spojené s regulačními sekvencemi transkripce a translace, jako jsou promotory, které dohromady vytvářejí expresní kazetu. Promotory mohou pocházet z genů užitého hostitele, nebo lze takové kontrolní sekvence modifikovat, např. in vitro místně cílenou mutagenezí tak, že se vloží dodatečné kontrolní prvky nebo syntetické sekvence. Expresní kazeta použitá v předkládaném vynálezu obsahuje terminační úsek transkripce a translace, který je funkční v zamýšleném hostiteli a který leží na 3'konci sekvence kódující hybridní makromolekulu. Kromě expresní kazety ještě vektor obsahuje jeden nebo několik markérů umožňujících selekci K takovým markérů patří např.
hostitele po transformaci, geny poskytující rezistenci • · · «·· · ··· k antibiotikům jako je např. G418. Geny rezistence se umístí pod kontrolu vhodných transkripčních a translačních signálů dovolujících expresi v daném hostiteli.
Příprava rekombinantních fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu může být provedena např. podle následujícího popisu.
A. Konstrukce expresního vektoru pro fúzní protein
Prvním krokem při konstrukci rekombinantních fúzních polypeptidů je subklonování částí fúzních polypeptidů do klonovacího vektoru. V této souvislosti termín „klonovací vektor znamená molekulu DNA, jako je plazmid, kosmid nebo bakeriofág, která se může autonomně replikovat v hostitelské prokaryotické buňce. Klonovací vektory typicky obsahují jedno nebo malý počet rozpoznávacích míst pro restrikční endonukleázy, do kterých lze vložit cizorodou DNA definovaným způsobem aniž by se ztratila podstatná biologická funkce vektoru, a také markerový gen, který je užitečný pro identifikaci a selekci buněk transformovaných klonovacím vektorem. Markerové geny jsou typicky geny poskytující rezistenci k tetracyklinu nebo ampicilinu. Vhodné klonovací vektory jsou popsány v publikaci J. Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, a lze je získat z různých zdrojů.
Klon pGEM-3-110B-l, obsahující cDNA FcsRIa, popsali Shimizu et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85, 1988, 19071911, a může být získán z Americké sbírky mikroorganismů ATCC pod č. ATCC 67566. Jednořetězcová cDNA lidských jater se dá získat od firmy Clontech (PCR-ready Quick Cloně cDNA, katalog, č. D 7113-1) . Sekvence HSA je dostupná v GenBank pod přístupovými čísly V00495, J00078. L00132, L00133. cDNA
HSA je možné získat PCR amplifikaci pomocí oligonukleotidů č. 24 a 25, jak se popisuje v příkladu 2.
Polynukeotid kódující vhodnou IgE-vazebnou doménu nebo složku HSA je možné připravit pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR). PCR využívá jednořetězcovou cDNA jako templát a směs oligonukleotidových primerů. Vlastní procedura PCR se provádí odborníkovi známým postupem (viz např. C.R.M. Bangham,The Polamerase Chain reaction: Getting Started, Protocols in Human Molecular genetics, Human Press, 1991, kapitola I, s. 1-8) . Soupravy pro PCR a další materiál pro použití se soupravami je komerčně dostupný z různých zdrojů. Soupravy a způsoby jejich použití jsou popsány např. v Patentu USA 5 487 993.
Sekvence DNA kódující signální peptidy mohou být přidány pomocí PCR nebo prostřednictvím syntetických oligonukleotidů, které kóduji známé sekvence signálních peptidů. Sekvence DNA kódující heterologní signální peptidy se subklonují v souladu se čtecím rámcem s DNA sekvencí kódující A-konec fúzního polypeptidu.
Fúze polypeptidu lze dosáhnout tím, že se subklonuje do přechodného vektoru. Alternativně, jeden gen se může klonovat přímo do vektoru obsahujícího druhý gen. Pro spojení sekvencí DNA lze využít linkery a adaptery.
Subklonování se provádí obvyklými technikami odborníkovi dobře známými, např. štěpením pomocí restrikčních enzymů, čímž se získají vhodné konce, použitím alkalické fosfatázy k zabránění nežádoucího spojování molekul DNA, a ligaci pomocí vhodné ligázy. Techniky pro tyto genové manipulace jsou popsány v odborné literatuře a jsou odborníkovi dobře známy.
B. Expresní klonování fúzních polypeptidů
Klonovaný fúzní protein se pak vyštěpí z klonovacího vektoru a vloží se do expresního vektoru. Vhodné expresní vektory typicky obsahují:
1) prvky prokaryotické DNA, které kódují bakteriální replikační počátek a markér rezistence k antibiotiku, aby bylo možné pěstovat a selektovat expresní vektor v bakteriálním hostiteli,
2) prvky eukaryotické DNA, které řídí zahájení transkripce, jako je např. promotor, a
3) prvky DNA, které řídí opracování transkriptu, jako jsou např. sekvence pro terminaci transkripce nebo polyadenylaci.
Další aspekt předkládaného vynálezu se proto týká vektorů, výhodně plazmidových vektorů, pro použití k expresi fúzních polypeptidů podle předkládaného vynálezu, které obsahují polynukleotidové sekvence zde popsané, které kódují polypeptidy podle vynálezu. Vhodné experesní vektory,které mohou transformovat prokaryotickou nebo eukarytickou buňku, obsahují nukleotidové sekvence kódující fúzní molekuly spojené s regulačními sekvencemi transkripce a translace, které jsou vybrány podle použitých hostitelských buněk. Pro expresi v E. coli se mohou užít vektory, které popsali
M.W.Robertson et al., J. Biol. Chem. 268, 1993, 12736-12743.
Očekává se, že takový produkt má pak navázané disulfidové vazby, ale není glykosylován. Pro expresi v kvasinkách je možné použít expresní vektor pHIL-D2 dodávaný firmou Invitrogen (San Diego, CA, USA) jako součást expresní soupravy pro Pichia pastoris (katalog. č. K1710-01). Proteinový expresní produkt je v tomto případě s navázanými disulfidovýmř vazbami a je glykosylován. Dalšími vhodným • # • 0 0··· • · · · · · «Ζ·· .··’ *··* ··· *· ·* kvasinkovými expresními systémy jsou Saccharomyces cerevisiae a Kluveromyces lactis. Pro expresi pomocí bakulovirů jsou vhodné vektory např. pAC360, pVL1392 a pVL1393 (Invitrogen, San Diego, CA, USA) pro infekci hmyzích buněk, které secernují produkt s navázanými disulfidovými vazbami a glykosylovaný.
Fúzní polypeptid podle předkládaného vynálezu je normálně glykoprotein, zejména je-li exprimován v savčích buňkách, a vynález se týká polypeptidů v jakémkoliv stavu co se týče glykosylace nebo disulfidových můstků. Zvláště mutační analýzy ukázaly, že A-glykosylace v první, druhé nebo sedmé pozici A-glykosylačních míst α-řetězce IgE receptoru (A. Shimizu et al., PNAS USA 85, 1988, 1907-1911, viz obr. 2, odpovídají aminokyselinovým zbytkům 46, 67 a 191 v sekvenci id. č. 1) zvyšují biologickou aktivitu molekuly IgER i jejích monomerů či dimerů. Nej výhodnější expresní systém je takový, kde jakékoliv přidané cukry budou co nejpodobnější cukrům v nativní molekule, ze které je polypeptid odvozen. Kvasinky a hmyzí buňky jsou známy tím, že modifikují glykoproteiny odlišně ve srovnání se savčími buňkami, zatímco E. coli nepřidává při sekreci cukry vůbec. Takže zatímco exprese z jakéhokoliv expresního systému poskytne proteinový produkt vhodný pro diagnostické účely (např. pro detekci alergických podmínek), nejvýhodnější forma exprese produktu pro použití jako terapeutická molekula je exprese v savčích buňkách, případně exprese v mléce transgenních savců.
Pro expresi v savčím hostiteli se mohou transkripční a translační regulační signály použité v expresní kazetě odvodit z virových zdrojů, jako je např. adenovirus, hovězí papillomavirus nebo opičí viry, jejichž regulační signály jsou spojeny s určitými geny, které mají vysokou úroveň exprese. Vhodné transkripční a translační regulační sekvence • · · · • ·
•·44444 je možné také získat ze savčích genů, jako je např. gen pro aktin, kolagen, myosin a metalothionin. Transkripční regulační sekvence obsahují promotorový úsek dostatečný k tomu, aby řídil zahájení syntézy RNA v savčí buňce.
Příkladem typických savčích buněk jsou buňky ovarií čínského křečka (CHO), opičí ledvinné buňky transformované SV40 (COS), a dále buňky HeLa, BHK, embryonální buňky švýcarské myši NIH, krysí, opičí nebo lidské fibroblasty nebo krysí hepatomové buňky.
Pro expresi v savčích buňkách je nej výhodnějším způsobem sekrece z buněk CHO. Ani buňky CHO ani lidské buňky nepřidávají al,3-vázané galaktózové zbytky, což je typické pro expresi v myších buňkách jako jsou buňky C127 nebo SP2/0. V lidském séru jsou přítomny protilátky proti těmto cukerným vazbám (C.F. Goochee et al., BioTechnol. 9, 1991, 1347-1355) a mohou tudíž ovlivnit poločas, dostupnost a ciearance rekombinantních produktů získaných z myších buněk. Buňky CHO dhfr- jsou buňky mutantní v genu pro dihydrofolátreduktázu (DHFR) a proto nejsou schopny de novo syntetizovat puriny, thymidin a glycin. Počet kopií plazmidu integrovaného v chromosomu nesoucího kopie divokého typu genu DHFRse může zvýšit tak, že se buňky transformované takovým plazmidem vystaví zvýšené koncentraci metotrexátu, analogu folátu, který kompetuje o folátovou vazbu v aktivním místě enzymu. Vhodný vektor pro expresi v CHO dhfr- buňkách je pMT2 (R.J.Kaufman et al. , EMBO J. 6, 1987, 187-193). Vektor pMT2 obsahuje kopii genu dhfr divokého typu, která je v rámci cizího genu transkribována do jednořetězcové mRNA. Po oštření transformovaných buněk CHO dhfr- rostoucí koncetrací metotrexátu jak cizí gen tak i dhfr jsou společně amplifikovány. Produkt secernovaný z těchto buněk má navázané
disulfidové můstky a je glykosylovaný způsobem odpovídajícím savčím buňkám.
Expresní vektor může být zaveden do hostitelských buněk různými způsoby, např. kalciumfosfátovou transfekcí, transfekcí zprostředkovanou liposomy, elektroporací apod. Výhodně se transfekované buňky selektují a množí, když je expresní vektor stabilně integrován v genomu hostitelské buňky a vytváří stabilní transformanty. Buňky se pak mohou pěstovat např. v médiu DMEM. Polypeptid secernovaný do média lze pak získat standardním biochemickým způsobem po přechodné expresi probíhající 24 až 72 hodin po transfekcí buněk nebo vytvoření stálých buněčných linií selekcí např. na rezistenci k antibiotiku.
Obvyklým způsobem, jak získat exprimovaný polypeptid z kultury, je frakcionace části kultury obsahující polypeptid pomocí biochemických metod. Např. pro izolaci exprimovaného proteinu z kultury je možné použít gelovou filtraci, gelovou chromatografií, ultrafiltraci, elektroforézu, iontoměničovou nebo afinitní chromatografií, kteréžto metody jsou známy pro proteinovou frakcionaci. Také lze užít obvyklé imunochemické metody jako je imunoafinitní chromatografie nebo imunoabsorpce. Metody vhodné pro transformaci, kultivaci, amplifikaci, screening a přípravu a purifikaci produktu jsou v oboru známy (viz. Např. J. Sambrook et al, 1989, supra, R.J.Kaufman, Genetic Engineering: Priciples and Methods, Pienum Press, Vol. 9, 1987, 156-198) .
Fúzní polypeptidy podle předkládaného vynálezu jsou určeny pro léčebné použití pro léčení savců, a zvláště člověka, trpících alergiemi. IgE-vazebná doména fúzních polypeptidů kompetuje o IgE s receptory pro IgE přirozeně se vyskytujícími na mastocytech, basofilech a Langerhansových • · · · • · napr bronchiální astma, alergie, alergická senná rýma, dermatitida, pylová ekzém, buňkách, takže IgE se váže na podávaný protein a není schopen vázat se na tyto efektorové buňky, které zprostředkovávají alergickou odpověď. IgE-vazebná doména také kompetuje s IgE receptory, FcsRIa, tím, že se váže na protilátky k FcsRIa.
Proto předkládaný vynález poskytuje farmaceutický přípravek pro kompetitivní vazbu IgE (a/nebo protilátek k FcsRIct) , a/nebo inhibici produkce IgE, a tedy pro supresivní a/nebo preventivní léčení poruch zprostředkovaných IgE nebo receptorem IgE, a přesněji alergie a stavů spojených s alergií, jako je atopická dermatitida, atopické astma a chronická kopřivka.
Termínem „poruchy zprostředkované IgE nebo receptorem IgE jsou míněny poruchy spojené s vazbou buněčně navázaného receptorů IgE, FceRI, na IgE nebo na auto-protilátky k FceRI, typ alergické reakce („syndrom hyper-IgE), jako je atopické astma, rýma, atopická anafylaxe, a také chronická kopřivka, a také nealergická Kimurova nemoc, a další plicní, dermatologické nebo autoimunitní nemoci. Zejména atopická dermatitida, jeden z nejdramatičtějších projevů atopie, je chronická zánětlivá kožní nemoc spojená s vysokými sérovými hladinami IgE a alergizací na různé alergeny životního prostředí (M. A. Morren et al., J. Am. Acad. Dermatol., 31, 467-473, 1994).
Současná léčba atopické dermatitidy se koncentruje na použití krémů obsahujících steroidy, a vážné případy atopické dermatitidy byly úspěšně léčeny cyklosporinem A (H. Granlund et al., Br. J. dermatol., 132, 106-112, 1995), ale vedlejší účinky omezují tuto léčbu pro menšinu pacientů. Přípravek, který inhibuje funkce IgE, jako je degranulace žírných buněk a prezentace antigenu B lymfocyty a jinými buňkami prezentujícími antigen zprostředkovaná IgE, by byl lepší než jakékoliv současně známé léčení atopické dermatitidy a kromě toho by byl také použitelný pro další mírné formy alergie.
Kromě atopické dermatitidy a atopického astmatu mohou být polypeptidy vynálezu použity k léčbě nebo prevenci chronické kopřivky (chronic urticaria - CU) , ve které hraje roli degranulace žírných buněk prostřednictvím aktivace FceRIoí. . Fúzní polypeptidy vynálezu mohou odstranit cirkulující auto-protilátky proti FcsRIct, na rozdíl od anti-IgE monoklonálních protilátek, které jsou navrhovány jako alternativa pro léčení této nemoci.
Polypeptidy mohou být podávány ve formě farmaceutického přípravku, který obsahuje polypeptid podle předkládaného vynálezu, výhodně nemodifikovaný polypeptid, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, ve farmaceuticky přijatelném nosiči nebo rozpouštědle.
Termín „sůl se týká konkrétně farmaceuticky přijatelných solí připravených z farmaceuticky přijatelných netoxických kyselin tak, že setvoří kyselé adiční soli např. aminoskupiny polypeptidového řetězce, nebo z farmaceuticky přijatelných netoxických baží tak, že se tvoří bazické soli, např. karboxylové skupiny polypeptidového řetězce. Takové soli se mohou vytvořit jako vnitřní soli a/nebo soli aminového nebo karboxylového konce polypeptidů podle předkládaného vynálezu.
Vhodné farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli jsou soli farmaceuticky přijatelných netoxických organických kyselin, polymerních kyselin nebo anorganických kyselin. K vhodným organickým kyselinám patří např. kyselina octová, askorbová, benzoová, benzensulfonová, citrónová, etansulfonová, fumarová, glukonová, glutamová, bromovodíková, chlorovodíková, isothionová, mléčná, maleinová, jablečná, ·· ·· > · · 4 » · · « • · a · · · ’ • · · <
······· * * mandlová, metansulfonová, slizová, dusičná, oxalová, pamoová (4, 4'-metylenbis(3-hydroxy-2-naftoová), pantotenová, fosforečná, salicylová, jantarová, sírová, vinná a p-toluensulfonová, a také polymerní kyseliny jako např. kyselina tříšlová nebo karboxymetylcelulóza. K vhodným anorganickým kyselinám patří minerální kyseliny jako chlorovodíková, bromovodíková, sírová, fosforečná a dusičná.
K příkladům vhodných anorganických baží pro vytváření solí karboxylové skupiny patří soli alkalických kovů jako jsou soli sodné, draselné a lithné, soli alkalických zemin jako jsou soli vápenaté, barnaté a horečnaté, a také soli amonné, měďnaté, železnaté a železité, zinečnaté, manganaté, hlinité a manganisté. Výhodně jsou soli amonné, vápenaté, horečnaté, draselné a sodné. K příkladům farmaceuticky přijatelných organických baží vhodných pro vytváření solí karboxylové skupiny patří organické aminy jako je např. trimetylamin, trietylamin, tri-n-propylamin, dicyklohexylamin, β-dimetylaminoetanol, tris-hydroxymetylaminometan, trietanolamin, β-dietylaminoetanol, arginin, lysin, histidin, A-etylpiperidin, hydrabamin, cholin, betain, etylendiamin, glukosamin, metylglukamin, theobromin, puriny, piperaziny, piperidiny, kofein a prokain.
Kyselé adiční soli polypeptidů je možné připravit konvenčním způsobem tak, že se polypeptid přivede do kontaktu s jedním nebo několika ekvivalenty požadované anorganické nebo organické kyseliny jako např. kyseliny chlorovodíkové. Soli karboxylových skupin peptidu mohou být připraveny obvykle tak, že se peptid přivede do kontaktu s jedním nebo několika ekvivalenty požadované baze, jako je např. hydroxid kovu, např. hydroxid sodný, nebo uhličitan či hydrogenuhličitan kovu, jako je např. uhličitan sodný nebo ·· ···· • » · • 0 ·· • · • · ··»»·9·
hydrogenuhličitan sodný, nebo aminová baze, jako je např. trietylamin nebo trietanolamin.
Vynález se dále týká farmaceutických přípravků obsahujících nový fúzní polypeptid podle předkládaného vynálezu nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem. Nosičem je výhodně sterilní, apyrogenní parenterálně přijatelná kapalina. Voda, fyziologický roztok, vodný roztok dextrózy a glykoly jsou výhodné kapalné nosiče nebo rozpouštědla, zvláště (pokud jsou isotonické) pro injikovatelné roztoky. Přípravky mohou být také v lyofilizované formě.
Přípravky lze podávat systémově, tj. parenterálně (např. intramuskulárně, intravenózně, subkutánně nebo intradermálně) nebo je lze podávat intraperitoneálně. Pro parenterální podávání je výhodné, když jsou fúzní polypeptidy nezbytně rozpustné v séru nebo plazmě, např. alespoň 1 mg polypeptidů je rozpustný v 1 ml séra nebo plazmy.
Přípravky mohou být podávány také známými způsoby pro topické podávání. Příkladem vhodné lékové formy je sprej, oftalmický roztok, nazální roztok a mast. Tak např. sprej se může připravit tak, že se peptid rozpustí ve vhodném rozpouštědle a umístí se do tlakové nádobky, kde slouží jako aerosol pro obecně užívanou inhalační terapii. Oftalmický nebo nazální roztok se připraví tak, že se rozpustí aktivní složka v destilované vodě, přidají se požadované pomocné látky, jako je pufr, izotonické činidlo, zahušťovadlo, prezervativ, stabilizátor, surfaktant a antiseptikum, a pH se nastaví na hodnotu 4 až 9. Masti se mohou získat tak, že se připraví sloučenina z polymerního roztoku, jako např. 2% vodného karboxyvinylového polymeru, a baze, jako např. 2% hydroxidu sodného, přičemž smícháním se získá gel, který se ·
> · · • · ·
I »<·· • · ··«···· smíchá s určitým množstvím purifikovaného fúzního polypeptidů.
Přípravek se výhodně podává subkutánně nebo intravenozně, ale nejčastěji subkutánně.
zmírnění symptomů) ošetření (tj.
Předkládaný vynález se dále týká způsobu léčení alergických stavů, který spočívá v tom, že se podává terapeuticky účinné množství fúzního polypeptidů podle vynálezu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, pacientovi, který takové ošetření potřebuje. Tento způsob léčení se provádí v průběhu alergického stavu (pokud je požadováno nebo jako souvislé nebo profylaktické před spuštěním očekávané poruchy zprostředkované IgE nebo receptorem IgE jako je např. alergická reakce).
Účinná dávka výše zmíněná je závislá na řadě faktorů, které je nutno brát v úvahu, jako je např. závažnost léčeného stavu, věk, pohlaví a stav subjektu, délka léčení a účinnost konkrétního fúzního polypeptidů, tedy faktorech, které lze stanovit obvyklými způsoby.
Vzhledem k tomu, že jednotlivé subjekty se velmi liší co se týče množství jejich IgE (a také protilátek k FceRI), terapeuticky účinná dávka se dá nejlépe vyjádřit jako dávka ležící v rozmezí 5xl02 až lxlO4 násobku celkového obsahu sérového IgE a protilátek k FceRI, v molárním měřítku. Pacient může být léčen pomocí jedné dávky denně nebo několika dávkami denně. Přípravek může být také podáván měsíčně (nebo v týdenních intervalech, pokud je to vhodnější), a to také v jedné dávce nebo několika dávkách.
Pro průměrný subjekt (70 kg) vhodná měsíční dávka může ležet v rozmezí 0,5 mg za měsíc až 500 mg za měsíc, výhodně v rozmezí 1 mg' až 300 mg za měsíc, nej výhodněji přibližně • 4 ♦ · · · · • · · ·
444 4·4 • 4 »4 *·
4« 4*44 ·· • · · · * • 444 · ·
4 4·· • · · · • ••4 ··· ·· mg až 250 mg za měsíc fúzního polypeptidu podle vynálezu, jako je např. dimer uvedený v příkladu 7, vhodně podávaný v dělených dávkách jednou nebo dvakrát za měsíc. Vyšší dávky v rozmezí přibližně 500 mg za měsíc až 2 g za měsíc mohou být indikovány v případě pacientů s vysokou sérovou koncentrací IgE v časných fázích léčení.
Dávkování a čas podávání mohou být různé. Na počátku lze podávat přípravek ve vyšších dávkách v rozmezí uvedeném výše a také častěji, než v pozdější fázi léčení nemoci. Vhodné dávkování lze stanovit na základě měření obsahu IgE a protilátek k FceRI v séru pacienta, jak bylo zmíněno výše. Tak např. v časné fázi nemoci, fúzní polypeptid podle vynálezu, jako je např. dimer uvedený v příkladu 7, se může průměrnému pacientovi (70 kg) podávat v týdenních dávkách 200 až 500 mg. Po clearance sérového IgE a protilátek k FcsRI se může léčebný režim změnit na ošetření jednou za týden nebo jednou za dva týdny s dávkami v rozmezí 50 μ až 100 mg polypeptidu při jednom ošetření.
Přípravky podle vynálezu mohou být podávány samotné nebi v kombinaci s jinými sloučeninami podle předkládaného vynálezu nebo s dalšími farmaceutickými agens jako jsou antihistaminika nebo kortikosteroidy.
Vynález se dále týká použití fúzních polypeptidů podle vynálezu v diagnostických testech in vitro v libovolném provedení, např. jako ELISA test, pro stanovení hladiny IgE nebo autoprotilátek proti FcsRI (např. u pacientů s chronickou kopřivkou) v biologických vzorcích získaných z lidských pacientů, jako jsou např. vzorky krve nebo tkání. Složka HSA výhodně umožňuje vazbu a detekci IgE nebo autoprotilátek proti FceRI v testu ELISA. Množství IgE a autoprotilátek přítomných' ve vzorku může sloužit jako míra » · • · · · · · • · alergické odpovědi pacienta na látku, které byl pacient vystaven. Hladina IgE nebo autoprotilátek se také mohou měřit pro stanovení účinnosti antialergické terapie a také pro monitorování alergologického stavu pacienta v průběhu času.
Vynález se dále týká způsobu provádění genové terapie lidí pomocí polynukleotidu kódujícího fúzní polypeptid podle vynálezu pro léčení poruch zprostředkovaných IgE nebo receptory IgE. Způsoby genové terapie spočívají v tom, že se modifikuje buňka pacienta tím, že se do ní zavede polynukleotid kódující fúzní polypeptid podle vynálezu a pak se v takové buňce exprimuje tento polypeptid. Tak např. somatické buňky se nejdříve vyjmou z pacienta, pak se geneticky modifikují v kultuře tím, že se do nich vloží polynukleotid, a výsledné modifikované buňky se znovu vloží do pacienta, což vede k tomu, že polypeptid podle vynálezu je exprimován v buňkách pacienta. Alternativně buňky mohou být modifikovány in vivo přímým vložením vektoru DNA, který kóduje polypeptid.
Vhodnými buňkami pro modifikaci jsou endotelové buňky nebo leukocyty. Pro potřeby genové terapie je výhodně polynukleotid podle vynálezu řízen regulovatelným (např. indukovatelným) promotorem. Jestliže se použije známý regulovatelný promotorový systém, exprese polypeptidu je pak závislá na expozici pacienta exogennímu faktoru.
Vynález se také týká využití způsobů genové terapie pro přípravu somatických rekombinant (jiných než lidských) nebo transgenních zvířat, které exprimují fúzní polypeptid podle vynálezu, např. do mléka. Taková modifikovaná zvířata (kromě člověka) jsou také předmětem vynálezu. Příkladem vhodného zvířete je myš, krysa, králík, prase, ovce, koza a kráva, • · • · • · · ·
jejichž transgenní formy připravené standardním způsobe jsou známy (D.R.Hurwitz et al., Transgenic Research 3, 1994, 365375) . Zvířata lze využívat jako modely nebo pro skutečnou produkci proteinu. Vynález se zvláště týká transgenní myši, kozy, krávy nebo prasete, exprimujících fúzní polypeptid podle vynálezu. Způsoby, jak připravit taková transgenní zvířata, jsou známy. Polynukleotid kódující fúzní protein podle vynálezu může být vložen do somatických buněk zvířete, buďto in vitro nebo in vivo, čímž se vytvoří somatické rekombinanty, které jsou geneticky modifikované, ale nemohou genetickou modifikaci předat na potomstvo. Alternativně se může polynukleotid vložit do buněk embrya a připravit tak transgenní zvířata, která předají schopnost exprimovat proteiny podle vynálezu na potomstvo.
Transfekce buněk pro genovou terapii se může provést obvyklým způsobem, např. eletroporací, kalciumfosfátovou precipitací, metodou s pomocí Lipofectinu, intramuskulární injekcí, mikroinjekcí nebo bombardováním mikočásticemi pomocí tzv. gene gun. Vektory založené na plazmidech výhodně obsahují markér, jako je např. neomycinový gen pro selekci stabilních tranfektant pomocí cytotoxického aminoglykosidu G418 v eukaryotických buňkách.
Infekci lze provést vložením genové sekvence pro fúzní polypeptid do retrovirového vektoru. V oboru jsou pro takové vnesení genu známy různé způsoby. Velmi užívaným postupem je např. použití defektního myšího retroviru jako balicího (pakážovacího) retroviru a amfotropní pakážovací buněčnou linii pro přípravu infekčního amfotropního viru pro použití k infekci cílových donorových buněk.
• »
Další charakterizaci lze provést následujícím způsobem.
Stanovení sérového poločasu in vivo
Obecný postup
Samice myší SKHl/hr/hr Charles River o hmotnosti přibližně 25 g byly injikovány intravenózně testovaným proteinem naředěným ve sterilním PBS bez Ca2+ a Mg2+. Myši pak byly rozděleny do následujících skupin:
-skupina (I) dostala 130 μg (1 nmol) fúzního polypeptidu, např. dimeru IgER-Li-HSAII-L2-IgER připraveného podle příkladu 7, nebo
-skupina (II) dostala 60 μg IgER (2 nmol), nebo
-skupina (III) dostala 65 μg HSA I (1 nmol).
Z každé myši se odebralo 100 μΐ séra 10 a 30 minut, 3, 6 a 12 hodin po injekci. Sérum bylo připraveno centrifugací. Koncentrace různých proteinů v séru byla stanovena a) ELISA testem s receptory IgE, b) inhibičním ELISA testem anebo
c) sendvičovým ELISA testem.
a) ELISA test s IgER
Sérová koncentrace IgE byla stanovena detekcí vazby IgE následujícím sendvičovým ELISA testem: 200 ng lidského IgE byla imobilizováno na 8 jamkových destičkách COSTAR Strip Plate (Cambridge, MA, USA) ve 100 μΐ pokrývacího pufru ve zvlhčované komůrce při 4°C přes noc. Každá jamka pak byla vypláchnuta 300 μΐ PBS bez Ca2+ a Mg2+ o pH 7,2. Pak byly destičky blokovány jednu hodinu při teplotě místnosti 200 μΐ PBS bez Ca2+ a Mg2+ obsahujícího 0,05% Tween 20 (PBST). Vzorky, naředěné ve 100 μΐ myšího séra naředěného 1:10 PBS bez Ca2+ a Mg2+, byly přidány a inkubovány po jednu hodinu při teplotě místnosti.
• · » · · · · • · • · · ·
Pak byly jamky propláchnuty 300 μΐ PBS a inkubovány se 100 μΐ (1 ng) monoklonální protilátky proti lidskému IgE receptoru 5H5/F8 po 1 hodinu při teplotě místnosti. A opět byly jamky propláchnuty dvakrát 300 μΐ PBST a inkubovány se 100 μΐ kozí anti-myší IgG-HRP (Biorad, ředění 1:2000 v PBS bez Caz+ a Mg2+) po 1 hodinu při teplotě místnosti. Destičky pak byly opláchnuty třikrát 300 μΐ PBST a konjugát křenové peroxidázy (HRP)byl detekován pomocí 100 μΐ ABTS (Biorad) substrátu. Reakce byla zastavena po 5 minutách 100 μΐ 3% kyseliny šťavelové. Intenzita zabarvení byla měřena fotometrem EASY READER při 405 nm.
b)Inhibiční ELISA test
100 ng FcsRIa bylo imobilizováno na imunodestičku Nunc s 96 jamkami (F96 Maxisorb) ve 100 μΐ pokrývacího pufru (0,lM NaHCCL, 0,01% NaN3, pH 9,6) ve zvlhčované komůrce při 4°C přes noc. Každá jamka pak byla propláchnuta 4 x 300 μΐ PBS s 0,05% Tween 20 (promývací pufr). Dvě různé sady jamek, negativní kontrola (50 μΐ myšího séra naředěného 1:25 v PBS, 0,05 Tween 20, 2% FCS) a ředicí řada standardu fúzního polypeptidu IgER-Li-HSAII-L2-IgER (ředění od 400 ng/ml do 1,6 ng/ml) nebo ředicí řada testovaného vzorku byly přidány. Standardy a testovaný vzorek byly naředěny myším sérem naředěným 1:25 PBS, 0,05% Tween 20, 2% FCS. Bezprostředně poté bylo přidáno 50 μΐ konjugátu lidský IgE/biotin v koncetraci 400 ng/μΐ v ředicím pufru. Výsledné ředění myšího séra v inkubačním pufru bylo 1:50.
Po inkubaci 2 hodiny při 37 °C byly destičky propláchnuty 4x 300 μΐ proplachovacího pufru, bylo přidáno 50 μΐ konjugátu streptavidin-alkalická fosfatáza (Gibco) naředěného 1:1000 v ředicím pufreu a pak se inkubovaly 1 hodinu při 37°C. Pak byly destičky opět propláchnuty
• · · · • · • · · ·
4x 300 μΐ proplachovacího pufru a po přidání 100 μΐ substrátu (lmg/ml p-nitrofenylfosfát v dietanolaminovém pufru pH 9,8 (Biorad)) byla reakce po inkubaci 30 minut ve 37 °C zastavena 50 μΐ 2M NaOH. Optická denzita (OD) byla měřena fotometrickým zařízením BIOMEK-1000 při 405 nm. Kvantitativní vyhodnocení ze standardní křivky (proložení 4 parametrové logistické funkce) bylo provedeno pomocí programu firmy Beckman pro vyhodnocováni IMMUNOFIT ELISA. Výpočet byl proveden tak, že:
% vazby= (OD vzorku nebo standardu/OD pufru) x 100.
c)Sendvičový ELISA test
500 ng monoklonální anti-myší HSA (HSA-9) bylo imobilizováno na imunodestičku Nunc s 96 jamkami (F96 Maxisorb) ve 100 μΐ pokrývacího pufru (0,lM NaHCOs, 0,01% NaN3, pH 9,6) ve zvlhčované komůrce při 4°C přes noc. Každá jamka pak byla propláchnuta 4 x 300 μΐ promývacího pufru (PBS s 0,05% Tween 20). Bylo přidáno 100 ml myšího séra naředěného 1:100 (PBS, 0,05% Tween 20, 2% FCS = ředicí pufr) jako negativní kontrola, nebo 100 μΐ standardu (1 μρ/ml až 2 ng/ml lidského sérového albuminu, KABI) nebo 100 μΐ testovaného vzorku naředěného myším sérem naředěným 1:100. Po inkubaci 2 hodiny při 37 °C byly destičky propláchnuty 4x 300 μΐ proplachovacího pufru, bylo přidáno 100 μΐ konjugátu králičí anti-HSA-Biotin naředěného ředicím pufrem na koncentraci 1 ng/μΙ. Konjugát anti-HSA-Biotin byl purifikován imunoafinitní chromatografii s CH-Seph4B-HSA a křížová reaktivita s myším sérem byla odstraněna imunosorpcí na agaróze s myším sérem. Po inkubaci 2 hodiny při 37°C byly destičky opět propláchnuty 4x 300 μΐ proplachovacího pufru a bylo přidáno 50 μΐ konjugátu streptavidin-alkalická fosfatáza (Gibco) naředěného 1:1000 v ředicím pufru a pak se inkubovaly 1 hodinu při 37°C. Pak byly destičky opět • · • a · · · · · propláchnuty 4x 300 μΐ proplachovacího pufru a po přidání 100 μΐ substrátu (lmg/ml p-nitrofenylfosfát v dietanolaminovém pufru pH 9,8 (Biorad) ) byla reakce po inkubaci 15 minut ve 37 °C zastavena 50 μΐ 2M NaOH. Optická denzita (OD) byla měřena fotometrickým zařízením BIOMEK-1000 při 405 nm. Kvantitativní vyhodnocení ze standardní křivky (proložení 4parametrové logistické funkce) bylo provedeno pomocí programu firmy Beckman pro vyhodnocováni IMMUNOFIT ELISA.
Výsledky:
Koncentrace dimerního fúzního polypeptidu IgER-Li~HSAIIL2-IgER, volného IgER (označovaného zde jako volný alfařetězec) nebo HSAI (zde označovaného HSA) v závislosti na uplynulém čase po injekci jsou uvedeny v jednotkách pmol/ml séra na obr. IA a IB.
Obr. IB ukazuje, že volný receptor v myším séru je detekovatelný jen po 10 minut, zatímco dimerní fúzní polypeptid je stále ještě detekovatelný asi 12 hodin po podání.
Obr. 1C ukazuje kinetiku relativní clearance HSA a dimerního fúzního polypeptidu. Po ustálení distribuce v krvi a tkáních po prvních 10 minut projevují dimer a HSA téměř shodné křivky clearance. To potvrzuje, že sérový poločas IgE-vazebné domény může být podstatně prodloužen fúzí s HSA.
·· ·· • · · · • · · · • · • · · ·
Inhibice pasivní kožní anafylaxe (PCA) u myši
Obecný postup
Podání polypeptidu
Fúzní polypeptid IgER-Li~HSAI I-L2-IgER ředěný na 10, 50 nebo 500 pg/kg, získaný z buněk COS v příkladu 7, byl intravenózně injikován do samic myší SKHl/hr/hr Charles River o hmotnosti přibližně 25 g v různých intervalech před alergizací.
Byly tak vytvořeny 3 skupiny myší v závislosti na tom, kolik bylo injikováno polypeptidu před alergizací (tj. 10, 50 nebo 500 pg/kg). Čtvrtou skupinu tvořily kontrolní myši, kterým bylo intravenózně injikováno 200 pg/kg PBS místo polypeptidu. Každá z těchto čtyřech skupin byla rozdělena na 3 podskupiny, které se lišily intervaly mezi intravenózní injekcí sloučeniny a intrakutánní alergizací pomocí IgE (tj. krok b) v následujícím popisu). Testované intervaly byly 5, 15 a 30 minut.
Intrakutánní alergizace
Anestezované myši byly alergizovány do kůže na zádech 4 intradermálními injekcemi po 5 ng monoklonální protilátky anti-dinitrofenyl (DNP) IgE v 10 ml PBS (BioMakor, Rehovot, Israel). V kontrolní skupině byl injikován fyziologický roztok intradermálně do jednoho místa.
Alergenní provokace minut po alergizací byly myši opět podrobeny anestezi a pak jim byl injikován intravenózně roztok obsahující 50 pg dinitrtofenyl-hovězí sérový albumin (DNP-BSA)(CalbiochemBehring, San Diego, USDA) obsahující 1% Evansovu modř.
Odpověď PCA byla kvantifikována měřením průměru zabarvení testovacího místa díky extravasaci.
Výsledky:
Výsledky pro zralý fúzní polypeptid podle příkladu 7 jsou znázorněny sloupcovým, grafem na obr. 2 (aminokyseliny Val26 až Leug78 sekvence id. č. 3) . Při koncentraci 500 μρ/kg dimerní fúzní polypeptid úplně blokuje PCA ve všech časech aplikace. Při 50 pg/kg aplikace 30 minut před výzvou vede ke statisticky významnému snížení o 36%. Při 15 minutách před výzvou je vidět trend při podání jak 10 tak 50 μς/kg dimeru. Tudíž dimerní fúzní polypeptid je účinný v prevenci PCA.
Postupy a techniky k provedení předkládaného vynálezu jsou v oboru známé. Proto zde nejsou samostatně popsány, neboť sloučeniny, reagencie, vektory, buněčné linie atd., které je třeba použít, jsou snadno dostupné nebo je lze získat obvyklým způsobme z dostupného materiálu nebo lze připravit obdobný materiál obvyklým způsobme ze známého a dostupného materiálu.
Následující neomezující příklady ilustrují vynález. Všechny teploty jsou uvedeny ve stupních Celsia.
• ·
Příklady provedení vynálezu
Materiál a metody
Amplifikace PCR:
Chemická syntéza de novo primerů vynálezu může být provedena za použití jakékoliv vhodné metody, například fosfotriesterové nebo fosfodiesterové metody.
Metody a systémy pro amplifikaci specifické sekvence nukleové kyseliny jsou popsány v USP 4 683 195 a 4 683 202 a v Polymerase Chain Reaction, H.A. Erlich et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) .
Po PCR jsou fragmenty DNA vyříznuty a purifikovány za použití laboratorního protokolu QiaEx (Qiagen, lne. Chatsworth, CA, USA), poté jsou subklonovány do vektoru TA (TA Cloning® Kit (Invitrogen) (návod k použití produktu, verze 2.2). Primery použité pro tvorbu nukleových kyselin amplif ikovaných metodou PCR jsou uveden v obr. 8. DNA je sekvencována za použití metody se Sequenase (USB, Cleveland, OH, USA).
Plazmidy a reagencie:
cDNA klon FcsRIa, pGEM-3-110B-l (A. Shimizu et al.,
Proč. Nat. Acad. Sci. USA, 85, 1907-1911, 1988) byl získán z American Type Tissue Collection (ATCC šarže č. 67566). Jednovláknová cDNA z lidských jater je získána od Clontech (PCR-ready Quick Cloně cDNA, č. kat. D 7113-1). Sekvence HSA je dostupná pod přístupovými čísly v GEnBAnk V00495, J00078, L00132 a L00133. Restrikční enzymy byly získány od Boehringer-Mannheim nebo GIbco/BRL. Taq DNA polymeráza je získána Perkin-Elmer Cetus (PECI) nebo od BoehringerMannheim. Vektor SK byl získán od Stratagene.
• · · · • · 99
9 9 9
9 9 9 « · · · · · · • · • · · ·
Plazmid pHIL-D2 je dostupný od Invitrogenu (San Diego, CA, USA, č. kat. K1710-01, 1994) (viz „Pichia Expression Kit
- Protein Expression - A Manual of Methods for Expression of Recombinant Proteins in Pichia pastoris - Version 3.0 (prosinec 1994) (dále zmiňován jako „Invitrogen Manual).
Vektor pXMT3 pochází z pMT2 (Sambrook et al., eds., 1989, výše) klonováním Pstl do klonovacího místa EcoRI z pUC8 (Pharmacia) do míst Pstl a EcoRI z pMT2 (R.J. Kaufman et al., 1987, výše).
A: Klonovací vektor TA
Plazmid pCR2 je odděleně ligován s každým z amplifikačních produktů PCR získaných v příkladech 1 a 2. Ligační reakce jsou provedeny za použití DNA ligázy T4 v následující reakčni směsi:
mM Tris-HCl (pH 7,8) mM MgCl2 mM DTT mM ATP ng vektorová DNA
100-200 ng PCR reakčních produktů (nepurifikovaných) jednotky DNA ligázy T4 (New England Biolabs)
Každá reakčni směs se udržuje v 15 °C 18 hodin před transformací do kompetentních buněk.
Příklad 1
Amplifikace PCR a klonování cDNA FcsRIa cDNA FcsRIa je purifikována z pGEM-3-110B-l za použití metody Qiagen.
A) pro přípravu základního konstruktu HSA se provedla amplifikace PCR cDNA FcsRIa s oligonukleotidy č. 19 a č. 19 (obr. 4,8) za použití následující reakční směsi:
μΐ (50 ng) cDNA FcsRIct pmol každého z oligonukleotidů č. 18 a 19 μΐ lOx pufru PCR (PECI)
0,5 μΐ 20 mM zásobního roztoku = 200 μΜ konečná koncentrace dNTP
0,5 μΐ (2,5 U) Taq polymerázy (PECI) voda do 50μ1
Reakční směs byla převrstvena minerálním olejem pro zabránění odpaření a podrobena teplotním cyklům v termocykleru Perkin Elmer Cetus DNA model 480. Podmínky cyklování pro tuto reakci jsou: zahřát na 95° 5 minut, pak 30 cyklů 94° po 1,5 minutu, 53° p 2 minuty, 72 0 po 3 minuty, následováno tříminutovou extenzí v 72° a ve 4° přes noc.
Po elektroforéze byl amplifikovaný produkt o velikosti 500 potvrzen barvením ethidiumbromidem. Fragment byl subklonován do vektoru PCR2, čímž vznikl plazmid pEKl kódující IgER (obr. 4, 8B).
B) Pro přípravu konstruktu s vedoucím IgE se provedla amplifikace FcsRIa cDNA stejně jako v A) kromě toho, že se užily oligonukleotidy č. 20 a č. 31 (obr. 8B) . Po elektroforéze v 0,7% agarózovém gelu byl amplifikovaný produkt velikosti asi 600 bp potvrzen obarvením • · ethidiumbromidem. Fragment pak byl subklonován do vektoru PCR2, čímž vznikl IgER/TA#l kódující pre-IgER.
C) Pro přípravu konstruktu kódujícího pre-IgER, který by exprimoval zralý, zkrácený protein pro použití v kontrolních testech, byla opět provedena amplifikace PCR jako v A) s oligonukleotidy č. 20 a č. 19. (obr. 8B) . Po elektroforéze v 0,7% agarózovém gelu byl amplifikovaný produkt velikosti asi 620 bp potvrzen obarvením ethidiumbromidem. Fragment byl pak vyříznut a subklonován do vektoru PCR II, čímž vznikl IgERFL/TA#34 kódující pre-IgER následovaný stop-kodonem (obr. 4).
Příklad 2
Amplifikace PCR a klonování cDNA lidského sérového albuminu
Pro získání sekvence kódující prepro-HSA II byla provedena PCR s úplnou cDNA lidského sérového albuminu s oligonukleotidy č. 24 a 25 (obr. 8B) podle obecného postupi popsaného v příkladu 1 (A) . Výsledný klon HSA/TA#1 měl sekvenci velmi blízkou sekvenci v GenBank. V tomto klonu bylo zjištěno 7 mutací v kolísavé poloze a jedna mutace, která vedla k záměně lysinu na kyselinu glutamovou v aminokyselinové poloze 1333. Mutace v kolísavých pozicích byly: base 309 -změna A na T, base 744 - změna A na G, base 795 - změna G na A, base 951 - změna G na A, base 1320 změna C na T, base 1569 . změna A na C, base 1584 změna G na A (podle HSA/TA#1). Mutace lysinu na kyselinu glutamovou byla uvdena do souladu se sekvencí GenBank tím, že byla opravena místně cílenou mutagenezí pomocí oligonukleotidu uvedených na obr. 8A a soupravy pro mutagenezí in vitro Mutagene Phagemid kit (Βίο-Rad, katalog, č. 170-3581) . Tato metoda spočívá • · · · · ·
• · «··· ♦·· v inkorporaci uracilového zbytku do parentálního řetězce a v jeho následném odstranění v mutovaném řetězci (T.A.Kunkel, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82, 1985, 488-492).
Vzhledem k tomu, že bodové mutace v kolísavé poloze nemění nativní aminokyselinovou sekvenci kódovaného proteinu, výše zmíněných sedm mutací nebylo opravováno. Po elektroforéze v 0,7% agarózovém gelu byl amplifikovaný produkt velikosti asi
1,8 kb potvrzen obarvením ethidiumbromidem.
Tento produkt velikosti 1,8 kb byl subklonován do vektoru pCR2, čímž vznikl HSA/TAmut#l6, u něhož bylo ověřeno sekvencováním DNA, že obsahuje úplnou sekvenci prepro-HSA II. HSA/TAmut#16 byl subklonován do plazmidu Bluescript SK jako SpeI,HindII fragment, čímž byl vytvořen HSA/SK#17.
A) Pro přípravu konstruktu s vedoucím HSA byl HSA/SK#17 naštěpen Msti a HindlII, aby se odstranily sekvence kódující 3'-koncovou aminokyselinu (Leugog) , pak byl na 3'-konec linearizovaného HSA/SK#17 vložen oligonukleotidový linker L2 popsaný výše, tak, že se oligonukleotidy č. 28 a 29 (obr. 8B) ošetřily kinázou, přichytily a pak se tyto fragmenty ligovaly do míst Mstl/HindlII linearizovaného HSA/SK#17, čímž vznikl pEK7 kódující prepro-HSA II fúzovaný s L2 (obr. 8B) . DNA získaná minipreparací byla kontrolována štěpením BamHIa sekvencováním.
B) Pro přípravu konstruktu s vedoucím IgE byl HSA/SK#17 kódující prepro-HSA II amplifikován PCR s oligonukleotidy č. 26 a 27 (obr. 5, 8). Oligonukleotid č. 26 odstraňuje preprosekvenci z HSA a přidává sekvenci linkeru LI na 5'-konec HSA. Oligonukleotid č. 27 končí přirozeně se vyskytujícím místem Ncol v nukleotidové pozici 800 kódující sekvence HSA. Amplifíkace PCR byla provedena postupem popsaným v přikladu • · (A) . Fragment, který byl· izolován eiektroforézouu a soupravou Qia, byl subklonován do vektoru pCR2, čímž vznikl klon HSA Nco/TA#13, jehož sekvence byla ověřena sekvencováním DNA. Ncol-Notl fragment z tohoto klonu byl subklonován do HSA/SK#17 naštěpeného Ncol a Notl, čímž byl vytvořen plazmid HSA/SK#5 (obr. 5), který kóduje Li napojený na 5'-konec cDNA kódující HSA II.
C) Pro expresi samotného HSA byl použit konstrukt HSA/SK#17 popsaný v předchozím textu.
Příklad 3
Fúzní konstrukt HSA-IgER/SK#22 kódující prepro-HSA + linker + IgER
Plazmidy pEK7 (obsahující prepro-HSA II cDNA + oligonukleotid pro L2) a pEKl (obsahující IgER) byly naštěpeny BamHl a Sall. Fragment velikosti 1,8 kb získaný z pEK7 byl ošetřen fosfatázou, a pak spojen s fragmentem velikosti 550 bp získaným z pEKl. DNA z jediné pozitivní minipreparace č. 23 byla kontaminována neznámým plazmidem, což zabránilo izolaci pásu HSA-IgER. Byl proto z minipreparace č. 23 izolován Spel-Sall fragment velikosti 2,4 kb obsahující spojené HSA-IgEF fragment velikosti 2,9 kb obsahující zbytek vektorové DNA, které byly opět spojeny dohromady, a tak vznikl klon HSA-IgE/SK#49 (obr. 9)(Vektorová místa chyběla na obou koncích subklonovaného úseku, tudíž Spel-Sall fragment z HSA-IgE/SK#49 velikosti 2,4 kb byl subklonován do plazmidu Bluescript SK naštěpeného Spěl a Sall, čímž vznikl HSA-IgE/SK#22 (není ukázán na obr.).
·· ···· · · • · · · ·
000 0 * • 0 0 0 0 • · · · • ••Φ 0·· ··
Sekvence spojení HSA a linkeru s DNA IgE receptoru a sekvence konců celého fúzovaného genu ve vektorové DNA byly v plazmidu HSA-IgE/SK#22 podle očekávání, jak bylo ověřeno sekvencováním DNA.
Příklad 4
Fúzní konstrukt IgE-HSA/SK#l kódující IgER + prepro-HSA II
Plazmidy HSA/SK#5 a IgER/TA byly naštěpeny Sstl a Nhel. Fragment z IgE/TA#l velikosti 600 bp byl purifikován gelovou elektroforézou a ligován do naštěpeného a fosfatázou ošetřeného plazmidu HSA/SK#5, čímž vznikl klon IgE-HSA/SK#l (obr. 10) .
Příklad 5
Fúzní konstrukt R-H-R/SK#50 kódující pre-IgER-Li-HSAII-L2-IgER
Místo Pstl jedinečné pro úsek HSA v IgE-HSA/SK#l a HSAIgE/SK#49 bylo využito ke spojení IgER a prepro-HSAII prostřednictvím oligonukleotidu pro L2. Plazmidy HSAIgER/SK#49 a Bluescript byly štěpeny Pstl a Sáli. Fragment veliosti 1,2 kb obsahující 3'-úsek HSAII, linker a sekvenci IgER byl ligován do plazmidu Bluescript naštěpeného Pstl a Sáli, což vedlo ke vzniku plazmidu HSA-IgER Pst Sal/SK#37 (obr. 11), který byl naštěpen Pstl a KpnI a byl izolován fragment velikosti 1,2 kb.
DNA IgER-HSA/SK#l byla naštěpena Pstl a KpnI a fragment velikosti 4,8 kb obsahující vektor, IgER, linker a 5'-část HSA byl izolován, ošetřen fosfatázou a ligován s fragmentem velikosti 1,2 kb z plazmidu HSA-IgER Pst Sal/SK#37. Tak byl získán výsledný dimerní konstrukt R-H-R/SK#50 (obr. 11).
·· ···· • ·
··· · ··>
Příklad 6
Monomerní fúzní polypeptidy HSAII-L2-IgER připravené transfekcí a kultivací Pichia pastoris
Plazmid MB#2 kódující HSAII-L2-IgER byl připraven naštěpením plazmidu HSA/SK#49 EcoRI a izolací fragmentu velikosti 2,4 kb, který kóduje fúzní protein. Tento fragment byl ligován do jedinečného místa EcoRI expresního vektoru pHIL-D2 (Invitrogen) Pichia pastoris, poté co byl plazmid pHIL-D2 naštěpen EcoRI a ošetřen alkalickou fosfatázou. Výsledný plazmid MB#2 byl linearizován štěpením Notl a byl transformován do buněk his4GS115 podle návodu v již zmíněné příručce firmy Invitrogen. Transformanty His+ byly vybírány podle růstu na metanolu. Kmeny vykazující pomalý růst na metanolu byly pěstovány dále na minimálním glycerolovém médiu podle návodu v příručce Invitrogen až do stacionární fáze, pak byly centrifugovány a přemístěny do úplného méida s metanolem a ponechány růst po 4 dny. Supernatant z kultury pak byl testován pomocí ELISA na přítomnost HSA nebo na schopnost vázat IgE. IgE-vazebná schopnost produktu získaného sekrecí z P. pastoris byla shodná s koncentrací HSA (vyjádřeno na molární bázi) a produkt byl biologicky plně aktivní.
Příklad 7
Dimerní fúzní polypeptidy IgER-Li-HSAII-L2-IgER připravené transfekcí a kultivací Pichia pastoris
Plazmid pXMT3-RIct-HSA-RIcc (obsahující polynukleotid sekvence id. č. 4 kódující IgER-Li-HSAII-L2-IgER) byl připraven naštěpením plazmidu R-H-R/SK#50 (viz příklad 5)
EcoRI a izolací fragmentu velikosti 3 kb, který kóduje
•· AAAA
A A · dimerní fúzní protein. Tento fragment byl ligován do jedinečného místa EcoRI plazmidu pXMT3, poté co byl plazmid pXMT3 naštěpen EcoRI a ošetřen alkalickou fosfatázou.
Výsledný plazmid byl transfekován do buněk CHO DUKX Bil. Tyto buňky postrádají funkční gen dhfr (dihydrofolátreduktázu) , nezbytný pro syntézu nukleosidů. Proto se buňky udržovaly na médiu Alfa+ (MEM Alfa+ médium s ribonukleosidy a deoxyribonukleosidy, Gibco) obsahujícím 10% fetální telecí sérum (FCS). Pro transfekci byly buňky dvakrát opláchnuty v PBS bez Ca++ a Mg++ (CMF-PBS) a koncentrace buněk byla nastavena na 2xlOs buněk/ml v CMF-PBS. 0,8 ml buněčné suspenze se přidalo k 15 μg plazmidové DNA. Transfekce byla provedena elektroporací pomocí zařízení BioRad Gene Pulser (napětí 1000V, kapacita 25 gF) . Po transfekci byly buňky pěstovány po 3 dny v 15 ml média Alfa+ s 10% FCS.
Gen dhfr lokalizovaný na plazmidu pXMT3 dovoluje selekci rekombinantních buněk v médiu chudém na nukleosidy. 3 dni po transfekci byly buňky přemístěny do média Alfa'- (MEM Alfa médium bez ribonukleosidů a deoxyribonukleosidů, Gibco) obsahujícího 10% dialyzovaného fetálního telecího séra (FCSD). Po dvou týdnech kultivace byly viditelné rekombinantní buněčné kolonie. Buňky byly po další 4 pasáže udržovány v Alfa médiu obsahujícím 10% FCSD, než byla zahájena amplifikace genu.
V přítomnosti metotraxátu (MTX) se gen dhfr a geny s ním spojené amplifikují, což vede ke zvýšené expresi transgenu. Proto selekce rekombiantních buněk v médiu chudém na nukleosidy je následována kultivací v přítomnosti 20nM MTX v Alfa médiu obsahujícím 10% FCSD. Další amplifikace se dosáhne postupným zvyšováním metotrexátu na 100 a 500 nM MTX.
Protein se připravuje tak, že se vysejí buňky Tl/3-500nM do rolerových lahví s Alfa médiem obsahujícím 10% FCS (Gibco) • · v hustotě 9xl03/cm3. První supernatant se sebere 5 dní po zaočkování a pak se médium změní na Alfa-. Podruhé se sebere supernatant o 3 dny později, což celkem představuje 1 1 supernatantu pro purifikaci.
Druhá dávka je purifikována ze 21 supernatantu sebraného z kultury Tl/3-500nM adaptované na růst bez přítomnosti séra. Buňky se vysejí v hustotě 5xl04 buněk/ml a supernatant se sebere 6 dní po zaočkování.
Příklad 8
Purifikace fúzního proteinu
Supernatant z kultury v příkladu 7 byl purifikován imunoafinitní chromatografií na imobilizované monoklonální protilátce anti-FcsRIa (např. 5H5-F8, myší IgGl), připravené a purifikované standardním způsobem.
a) Příprava chromatografického nosiče
Monoklonální protilátka je navázána na sefarózu 4B aktivovanou CNBr (Pharmacia, Uppsala, Švédsko) v hustotě 10 mg protilátky/1 ml gelu podle pokynů výrobce. Přebytečné reakční skupiny jsou poté blokovány atanolaminem a pryskyřice je před použitím uchovávána v PBS s 0,02% NaN3.
b) Afinitní chromatografie
Čirý supernatant z kultury se nanesl na 5ml sloupec s protilátkou ekvilibrovaný s PBS průtokem 0,5 ml/min. Absorbovaný materiál se eluoval roztokem: 50mM kyselina citrónová, 140 mM NaCl, pH 2,70. Frakce obsahující protein byla okamžitě upravena na pH 7,0 (pomocí NaOH) a pak sterilně filtrována.
• · ·· ···· ·· * • · · · · * · • · · · · · * • · · · · · • · · · · ···«··· ·· ···
c)Kvantifikace/charakterizace
Koncentrace dimerního fúzního polypeptidu byla určena absorpcí při 280 nm pro nativní konformaci v 30mM 3-Nmorfolinopropansulfonové kyselině (MOPS) o pH 7,0 a pro denaturovanou formu v 6M guanidin-HCl. Odpovídající molární absorpční koeficienty byly vypočteny na základě počtu tryptofanových, tyrosinových a cysteinových zbytků pomocí tabulkových hodnot absorpčních koeficientů těchto aminokyselin v modelových sloučeninách a pak byly korigovány rozdíly v optické hustotě uspořádaného (složeného) a neuspořádaného proteinu. Fúzní protein obsahoval 17 zbytků tryptofanu, 40 tyrosinu a 21 cystinu, což vedlo k hodnotě teoretického extinkčního koeficientu 150840 M1cm'1. Kvalita purifikovaného materiálu byla hodnocena standardní elektroforézou na SDS-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE), automatickým sekvencováním N-konce Edmanovou degradací v plynné fázi a hmotovou spektroskopií. Výsledky SDS-PAGE (obr. 15) ukazují podle migrace zjevnou molekulovou hmotnost polypeptidu 140 kDa, což přestavuje asi 28% glykosylaci (teoretická molekulová hmotnost bez glykosylace je 108 863,
Da).
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) (B) (C) (D) | DÉLKA: 257 aminokyselin TYP: aminokyselina TYP VLÁKNA: jednoduché | ||
TOPOLOGIE: | lineární | ||
(ii) | TYP | MOLEKULY: | protein |
(iii) | i HYPOTETICKÁ: | ne |
(iv) OPAČNÁ ORIENTACE: ne (v) TYP FRAGMENTU: vnitřní (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
44 • 9 9 4
4 4 4 • ·4 4 «99
4 • 9 49 ·· ··*· ·
• 9 44
4 4
4 ·
4 9 • 4 444
Met 1 | Ala | Pro | Ala | Met 5 | Glu | Ser | Pro | Thr | Leu 10 | Leu | cys | Val | Ala | Leu 15 | Leu |
Phe | Phe | Ala | Pro | Asp | Gly | Val | Leu | Ala | Val | Pro | Gin | Lys | Pro | Lys | Val |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Leu | Asn | Pro | Pro | Trp | Asn | Arg | Ile | Phe | Lys | Gly | Glu | Asn | Val | Thr |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Thr | Cys | Asn | Gly | Asn | Asn | Phe | Phe | Glu | Val | Ser | Ser | Thr | Lys | Trp |
c r\ -a | 5 5 | 60 | |||||||||||||
Phe | His | Asn | Gly | Ser | Leu | Ser | Glu | Glu | Thr | Asn | Ser | Ser | Leu | Asn | Ile |
6 5 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Val | Asn | Ala | Lys | Phe | Glu | Asp | Ser | Gly | Glu | Tyr | Lys | Cys | Gin | His | Gin |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gin | Val | Asn | Glu | Ser | Glu | Pro | Val | Tyr | Leu | Glu | Val | Phe | Ser | Asp | Trp |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Leu | Leu | Leu | Gin | Ala | Ser | Ala | Glu | Val | Val | Met | Glu | Gly | Gin | Pro | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Phe | Leu | Arg | Cys | His | Gly | Tro | Arg | Asn | Trp | Asp | Val | Tyr | Lys | Val | Ile |
130 | 13 5 | 140 | |||||||||||||
Τ'/r | Tyr | Lys | Asp | Gly | Glu | Ala | Leu | Lys | Tyr | Trp | Tyr | Glu | Asn | His | Asn |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Σ1 β | S s r | T 1 o | Thr | 2. pt | Ala | Thr | Val | Glu | Asd | Ser | Gly | Thr | Tyr | Tvr | Cys |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
'Τ' ·-. V- | Gly | Lys | Val | Trp | Gin | Leu | Asp | Tyr | Glu | Ser | Glu | Pro | Leu | Asn | Ile |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Thr | Val | Ile | Lys | Ala | Pro | Arg | Glu | Lys | Tyr | Trp | Leu | Gin | Phe | Phe | Ile |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Pro | Leu | Leu | Val | Val | Ile | Leu | Phe | Ala | Val | Asp | Thr | Gly | Leu | Phe | Ile |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ser | Thr | Gin | Gin | Gin | Val | Thr | Phe | Leu | Leu | Lys | Ile | Lys | Arg | Thr | Arg |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Lys | Gly | Phe | Arg | Leu | Leu | Asn | Pro | His | Pro | Lys | Pro | Asn | Pro | Lys | Asn |
245 250 255
tv • · · * • · · ·
444 ··· • 4 ·· ·· ·· • · »444 ···· ·· • · · ··· · · • · 4 · ··· (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 609 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) OPAČNÁ ORIENTACE: ne (v) TYP FRAGMENTU: vnitřní (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
Met 1 | Lys | Trp Val | Thr 5 | Phe | Ile | Ser | Leu | Leu 10 | Phe | Leu | Phe | Ser | Ser 15 | Ala |
Tyr | Ser | Arg Gly 20 | Val | Phe | Arg | Arg | Asp 25 | Ala | His | Lys | Ser | Glu 30 | Val | Ala |
His | Arg | Phe Lys 35 | Asp | Leu | Gly | Glu 40 | Glu | Asn | Phe | Lys | Ala 45 | Leu | Val | Leu |
Ile | Ala 50 | Phe Ala | Gin | Tyr | Leu 55 | Gin | Gin | Cys | Pro | Phe 60 | Glu | Asp | His | Val |
Lys 65 | Leu | Val Asn | Glu | Val 70 | Thr | Glu | Phe | Ala | Lys 75 | Thr | Cys | Val | Al a | Asp 80 |
Glu | Ser | η1a Glu | Asn 85 | Cys | Asp | Lys | Ser | Leu 90 | His | Thr | Leu | Phe | Gly 95* | Asp |
Lys | Leu | Cys Thr 100 | Val | Ala | Thr | Leu | Arg 105 | Glu | Thr | Tyr | Gly | Glu 110 | Met | Ala |
Asp | Cys | Cys Ala 115 | Lys | Gin | Glu | Pro 120 | Glu | Arg | Asn | Glu | Cys 125 | Phe | Leu | Gin |
His | Lys 130 | Asp Asp | Asn | Pro | Asn 135 | Leu | Pro | Arg | Leu | Val 140 | Arg | Pro | Glu | Val |
Asp 145 | Val | Met Cys | Thx* | Ala 150 | Phe | His | Asp | Asn | Glu 155 | Glu | Thr | Phe | Leu | Lys 160 |
Lys | Tyr | Leu Tyr | Glu 165 | Ile | Ala | Arg | Arg | His 170 | Pro | Tyr | Phe | Tyr | Ala 175 | Pro |
Glu | Leu | Leu Phe 180 | Phe | Ala | Lys | Arg | Tyr 185 | Lys | Ala | Ala | Phe | Thr 190 | Glu | Cys |
cys | Gin | Ala Ala 195 | Asp | Lys | Ala | Ala 200 | Cys | Leu | Leu | Pro | Lys 205 | Leu | Asp | Glu |
Leu | Arg 210 | Asp Glu | Gly | Lys | Ala 215 | Ser | Ser | Ala | Lys | Gin 220 | Arg | Leu | Lys | Cys |
β ·
Ala 225 | Ser | Leu | Gin | Lys | Phe 230 | Gly | Glu |
Ala | Arg | Leu | Ser | Gin 245 | Arg | Phe | Pro |
Lys | Leu | Val | Thr 260 | Asp | Leu | Thr | Lys |
Asp | Leu | Leu 275 | Glu | Cys | Ala | Asp | Asp 280 |
Cys | Glu 290 | Asn | Gin | Asp | Ser | lle 295 | Ser |
Lys 305 | Pro | Leu | Leu | Glu | Lys 310 | Ser | His |
Glu | Met | Pro | Ala | Aso 325 | Leu | Pro | Ser |
Lys | Asp | Val | Cys 340 | Lys | Asn | Tyr | Ala |
Met | Phe | Leu 355 | Tyr | Glu | Tyr | Ala | Arg 360 |
Leu | Leu 370 | Leu | Arg | Leu | Ala | Lys 375 | Thr |
Cys 3 85 | Ala | Ala | Ala | Asp | Pro 390 | His | Glu |
Phe | Lys | Pro | Leu | Val 405 | Glu | Glu | Pro |
Glu | Leu | Phe | Lys | Gin | Leu | Gly | Glu |
420
• « • | • · • · · · | • • • · · • · • | • · • • • • · | • • • • | • · • · • · · · • • · · | ||
Arg | Ala | Phe 235 | Lys | Ala | Trp | Ala | Val 240 |
Lys | Ala 250 | Glu | Phe | Ala | Glu | Val 255 | Ser |
Val 265 | His | Thr | Glu | Cys | Cys 270 | His | Gly |
Arg | Ala | Asp | Leu | Ala 285 | Lys | Tyr | lle |
Ser | Lys | Leu | Lys 3 00 | Glu | Cys | Cys | Glu |
Cys | lle | Ala 315 | Glu | Val | Glu | Asn | Asp 320 |
Leu | Ala 330 | Ala | Asp | Phe | Val | Glu 335 | Ser |
Glu 345 | Ala | Lys | Asp | Val | Phe 350 | Leu | Gly |
Arg | His | Pro | Asp | Tyr 365 | Ser | Val | Val |
Tyr | Glu | Thr | Thr 380 | Leu | Glu | Lys | Cys |
Cys | Tyr | Ala 395 | Lys | Val | Phe | Asp | Glu 400 |
Gin | Asn 410 | Leu | lle | Lys | Gin | Asn 415 | Cys |
Tyr 42 5 | Lys | Phe | Gin | Asn | Ala 430 | Leu | Leu |
Val | Arg | Tyr 435 | Thr | Lys | Lys | Val | Pro 440 | Gin | Val | Ser | Thr | Pro 445 | Thr | Leu | Val | |
Glu | Val | Ser | Arg | Asn | Leu | Gly | Lys | Val | Gly | Ser | Lys | Cys | cys | Lys | His | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
Pro | Glu | Ala | Lys | Arg | Met | Pro | Cys | Ala | Glu | Asp | Tyr | Leu | Ser | Val | Val | |
♦ | 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Leu | Asn | Gin | Leu | Cys | Val | Leu | His | Glu | Lys | Thr | Pro | Val | Ser | Asp | Arg | |
- | 485 | 4 90 | 495 | |||||||||||||
Val | Thr | Lys | Cys | Cys | Thr | Glu | Ser | Leu | Val | Asn | Arg | Arg | Pro | Cys | Phe | |
500 | 505 | 510 | ||||||||||||||
Ser | Ala | Leu | Glu | Val | Asp | Glu | Thr | Tyr | Val | Pro | Lys | Glu | Phe | Asn | Ala | |
515 | 520 | 525 | ||||||||||||||
Glu | Thr | Phe | Thr | Phe | His | Ala | Asp | lle | Cys | Thr | Leu | Ser | Glu | Lys | Glu | |
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
Arg | Gin | lle | Lys | Lys | Gin | Thr | Ala | Leu | Val | Glu | Leu | Val | Lys | His | Lys | |
545 | 550 | 555 | 560 |
• ·
Pro | Lys | Ala | Thr | Lys | Glu | Gin | Leu | Lys | Ala | Val | Met | Asp | Asp | Phe | Ala |
565 | 570 | 575 | |||||||||||||
Ala | Phe | Val | Glu | Lys | Cys | Cys | Lys | Ala | Asp | Asp | Lys | Glu | Thr | Cys | Phe |
580 | 585 | 590 | |||||||||||||
Ala | Glu | Glu | Gly | Lys | Lys | Leu | Val | Ala | Ala | Ser | Gin | Ala | Ala | Leu | Gly |
595 | 600 | 605 |
Leu
609 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERIŠTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 978 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (iii) HYPOTETICKÁ: ne (iv) OPAČNÁ ORIENTACE: ne (v) TYP FRAGMENTU: vnitřní
( | xi) | POPIS SEKVENCE: | SEKVENCE S | IDENTIFIKAČNÍ! | 1 ČÍSLEM | 3 : |
Met t_ | Ala | Pro Ala Met Glu 5 | Ser Pro Thr | Leu Leu Cys Val 10 | Ala Leu 15 | Leu |
Phe | Phe | Ala Pro Asp Gly 20 | Val Leu Ala 25 | Val Pro Gin Lys | Pro Lys 30 | Val |
Ser | Leu | Asn Pro Pro Trp 35 | Asn Arg Ile 40 | Phe Lys Gly Glu 45 | Asn Val | Thr |
Leu | Thr 50 | Cys Asn Gly Asn | Asn Phe Phe 55 | Glu Val Ser Ser 60 | Thr Lys | Trp |
Phe 65 | His | Asn Gly Ser Leu 70 | Ser Glu Glu | Thr Asn Ser Ser 75 | Leu Asn | Ile 80 |
Val | Asn | Ala Lys Phe Glu 85 | Asp Ser Gly | Glu Tyr Lys Cys 90 | Gin His 95 | Gin |
Gin | Val | Asn Glu Ser Glu 100 | Pro Val Tyr 105 | Leu Glu Val Phe | Ser Aso 110 | Trp |
Leu | Leu | Leu Gin Ala Ser 115 | Ala Glu Val 120 | Val Met Glu Gly 125 | Gin Pro | Leu |
Phe | Leu 130 | Arg Cys His Gly | Trp Arg Asn 135 | Trp Asp Val Tyr 140 | Lys Val | Ile |
Tyr 145 | Tyr | Lys Asp Gly Glu 150 | Ala Leu Lys | Tyr Trp Tyr Glu 155 | Asn His | Asn 160 |
• · • | • · · · • · | • 4 • | • • · · | • • | • · • · | ||||||||||
• · · · | • | • · | • | • · | |||||||||||
• | • | • · | • · | • · | • · · | ||||||||||
64 | • | • | • • « | • · • · | • • · · · | ||||||||||
Ile | Ser | Ile | Thr | Asn | Ala | Thr | Val | Glu | Asp | Ser | Gly | Thr | Tyr | Tyr | Cys |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Thr | Gly | Lys | Val | Trp | Gin | Leu | Asp | Tyr | Glu | Ser | Glu | Pro | Leu | Asn | Ile |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Thr | Val | Ile | Lys | Ala | Pro | Arg | Glu | Lys | Tyr | Trp | Leu | Ala | Ser | Gly | Gly |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Gly | Gly | Ser | Asp | Ala | His | Lys | Ser | Glu | Val | Ala | His | Arg | Phe | Lys | Asp |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Lsu | Gly | Glu | m n | Zícri | PH*? | Lys | Ala | Leu | Val | Leu | Ile | Ala | Phe | Ala | Gin |
225 | 230 | 235 | 24 0 | ||||||||||||
Tyr | Leu | Gin | Gin | Cys | Pro | Phe | Glu | Asp | His | Val | Lys | Leu | Val | Asn | Glu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | Thr | Glu | Phe | Ala | Lys | Thr | Cys | Val | Ala | Asp | Glu | Ser | Ala | Glu | Asn |
260 | 2 65 | 270 | |||||||||||||
Cys | Asp | Lys | Ser | Leu | His | Thr | Leu | Phe | Gly | Asp | Lys | Leu | Cys | Thr | Val |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
A13 | Thr | Leu | Arg | Glu | Thr | Tyr | Gly | Glu | Met | Ala | Asp | Cys | Cys | Ala | Lys |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Gin | Glu | Pro | Glu | Arg | Asn | Glu | cys | Phe | Leu | Gin | His | Lys | Asp | Asp | Asn |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Pro | Asn | Leu | Pro | Arg | Leu | Val | Arg | Pro | Glu | Val | Asp | Val | Met | Cys | Thr |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
A i 3 | Phe | His | Asp | Asn | Glu | Giu | Thr | Phe | Leu | Lys | Lys | Tyr | Leu | Tyr | Glu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Ile | A1 čí | Arg | Arg | Hi s | Pro | Tyr | Phe | Tyr | Ala | Pro | Glu | Leu | Leu | Phe | Phe |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Ala | Lys | Arg | Tyr | Lys | Ala | Ala | Phe | Thr | Glu | cys | cys | Gin | Ala | Ala | Asp |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Lys | Ala | Ala | Cys | Leu | Leu | Pro | Lys | Leu | Asp | Glu | Leu | Arg | Asp | Glu | Gly |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Lys | Ais | Ser | Ser | Ala | Lys | Gin | Arg | Leu | Lys | Cys | Ala | Ser | Leu | Gin | Lys |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Phe | Gly | Glu | Arg | Ala | PllC | Lys | Ala | Trp | Ala | Val | Ala | Arg | Leu | Ser | Gin |
420 | 42 5 | 430 | |||||||||||||
Arg | Phe | Pro | Lys | Ala | Glu | Phe | Ala | Glu | Val | Ser | Lys | Leu | Val | Thr | Asp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Leu | Thr | Lys | Val | His | Thr | Glu | Cys | Cys | His | Gly | Asp | Leu | Leu | Glu | Cys |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Ala | Asp | Asp | Arg | Ala | Asp | Leu | Ala | Lys | Tyr | Ile | Cys | Glu | Asn | Gin | Asp |
465 | 470 | 475 | 480 |
Ser Ile 'Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu 485 490 495 • · ··· ···· · · · ···· · · · · · ·
Lys | ř; ς | Glu 505 | • • Asn Asp | • · · · « c | • • · • • Met | • · • · • · • · · Pro 510 | • • • Ala | • · » · · · • 1 · · Asp | |||||||
Ser | His | Cys 500 | Ile | Ala | Glu | Val | Glu | ||||||||
Leu | Pro | Ser | Leu | Ala | Ala | Asp | Phe | Val | Glu | Ser | Lys | Asp | Val | Cys | Lys |
515 | 520 | 525 | |||||||||||||
Asn | Tyr | Ala | Glu | Ala | Lys | Asp | Val | Phe | Leu | Gly | Met | Phe | Leu | Tyr | Glu |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
Tyr | Ala | Arg | Arg | His | Pro | Asp | Tyr | Ser | Val | Val | Leu | Leu | Leu | Arg | Leu |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Ala | Lys | Thr | Glu | Thr | Thr | Leu | GJ υ | T.vs | Cys | Cys | Ala | Ala | Ala | Asp | |
565 | 57 0 | 57 5 | |||||||||||||
Pro | His | Glu | Cys | Tyr | Ala | Lys | Val | Phe | Asp | Glu | Phe | Lys | Pro | Leu | Val |
580 | 585 | 590 | |||||||||||||
Glu | Glu | Pro | Gin | Asn | Leu | Ile | Lys | Gin | Asn | Cys | Glu | Leu | Phe | Lys | Gin |
595 | 600 | 605 | |||||||||||||
Leu | Gly | Glu | Tyr | Lys | Phe | Gin | Asn | Ala | Leu | Leu | Val | Arg | Tyr | Thr | Lys |
610 | 615 | 620 | |||||||||||||
Lys | Val | Pro | Gin | Val | Ser | Thr | Pro | Thr | Leu | Val | Glu | Val | Ser | Arg | Asn |
625 | 630 | 635 | 640 | ||||||||||||
Leu | Gly | Lys | Val | Gly | Ser | Lys | Cys | Cys | Lys | His | Pro | Glu | Al 3. | Lys | Arg |
645 | 650 | 655 | |||||||||||||
Met | Pro | Cys | Ala | Glu | Asp | Tyr | Leu | Ser | Val | Vaí | Leu | Asn | Gin | Leu | Cys |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Val | Leu | His | Glu | Lys | Thr | Pro | Val | Ser | Asp | Arg | Val | Thr | Lys | Cys | Cys |
67 5 | 680 | 685 | |||||||||||||
Thr | Glu | Ser | Leu | Val | Asn | Arg | Arg | Pro | Cys | Phe | Ser | Ala | Leu | Glu | Val |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Asp | Glu | Thr | Tyr | Val | Pro | Lys | Glu | Phe | Asn | Ala | Glu | Thr | Phs | Thr | Phe |
705 | 710 | 715 | 720 | ||||||||||||
His | Ala | Asp | Ile | Cys | Thr | Leu | Ser | Glu | Lys | Glu | Arg | Gin | Ile | Lys | Lys |
725 | 730 | 735 | |||||||||||||
Gin | Thr | Ala | Leu | Val | Glu | Leu | Val | Lys | His | Lys | Pro | Lys | Ala | Thr | Lys |
740 | 745 | 750 | |||||||||||||
Glu | Gin | Leu | Lys | Ala | Val | Met | Asp | Asp | Phe | Ala | Ala | Phe | Val | Glu | Lys |
755 | 760 | 765 | |||||||||||||
Cys | cys | Lys | Aid | Asp | Asp | Lys | Glu | Thr | Cys | Phe | Ala | Glu | Glu | Gly | Lys |
770 | 775 | 780 | |||||||||||||
Lys | Leu | Val | Ale | Ale | Ser | Gin | Ala | Ala | Leu | Gly | Gly | Gly | Gly | Ser | Val |
785 | 790 | 795 | 800 | ||||||||||||
Pro | Gin | Lys | Pro | Lys | Val | Ser | Leu | Asn | Pro | Pro | Trp | Asn | Arg | Ile | Phe |
805 | 810 | 815 | |||||||||||||
Lys | Gly | Glu | Asn | Val | Thr | Leu | Thr | Cys | Asn | Gly | Asn | Asn | Phe | Phe | Glu |
820 | 825 | 830 |
66 | • « | • · | • · · 9 1 | ||||||||||||
Val | Ser | Ser 835 | Thr | Lys | Trp | Phe | His 840 | Asn | Gly | Ser | Leu | Ser 845 | Glu | Glu | Thr |
Asn | Ser 850 | Ser | Leu | Asn | Ile | Val 855 | Asn | Ala | Lys | Phe | Glu 860 | Asp | Ser | Gly | Glu |
Tvr 8 65 | Lys | Cys | Gin | His | Gin 870 | Gin | Val | Asn | Glu | Ser 875 | Glu | Pro | Val | Tyr | Leu 880 |
Glu | Val | Phe | Ser | Asp 885 | Trp | Leu | Leu | Leu | Gin 890 | Ala | Ser | Ala | Glu | Val 895 | Val |
Μθ w | Glu | Gly | Gin 900 | Pro | Leu | Phe | Leu | Arg 9U5 | Cys | H i s | Gl y | Trp | Aro 910 | Asn | Trp |
Asp | Val | Tyr 915 | Lys | Val | Ile | Tyr | Tyr 920 | Lys | Asp | Gly | Glu | Ala 925 | Leu | Lys | Tyr |
Trp | Tyr 930 | Glu | Asn | His | Asn | Ile 935 | Ser | Ile | Thr | Asn | Ala 940 | Thr | Val | Glu | Asp |
Ser 945 | Gly | Thr | Tyr | Tyr | cys 950 | Thr | Gly | Lys | Val | Trp 955 | Gin | Leu | Asp | Tyr | Glu 960 |
Ser | Glu | Pro | Leu | Asn 965 | Ile | Thr | Val | Ile | Lys 970 | Ala | Pro | Arg | Glu | Lys 975 | Tyr |
Trp Leu 978 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 2955 párů baží £
ω u
ω '1—1 >u '1—1
Z >o
Ul i—i E-i
S ω
Q ω
(0 p
-H
1-1 | Ό | μ-4 | υ | |||
ω | -Ρ | Ρ | £ | |||
ω | •Η | ρ | Ή | ω | ||
>1 | •ΓΊ | 'Π3 | Φ | Ρ | ρ> | |
λ: | ο | Φ | Ρ | >Ρ | £ | |
> | Ρ | -Ρ | ω | |||
'(ϋ | Ό | -Η | ·· | •Η | ω | |
> | ι—1 | £ Φ | ω | Ρ | ||
ο | Ο Ρ | U | > | • - | ||
φ | ω | |||||
1-1 | £ | ω | .. .. | Η | - | υ |
λ: | 1—I | U 'PÍ | £ | Ρ) | £ | |
3 | Ο | U £ | Η | Η | W | |
Ρ | Ο | £> Ο | ι—ι | £ | *> | |
> | U | £ Μ | £ | ω | £ | |
· | Ο | Ν Η | Ο | £ | ω | |
Οι | Οι | CU | £ Η | ο | ω | |
ο | Ο Ε-ι | |||||
Η | Ε-ι | Η | S ο | rY t-Μ | ω | |
Cu | >υ | Μ | ||||
.___ | ,_, | ,— | CU U | < | CU | |
ω | U | Q | £ | CU | CU | ο |
ο | Cu | |||||
Ε-ι | ||||||
.—' Ή | ,—- | „—, | ||||
-Η -Η | > | •Η | ||||
-Η -Η | •Η | > | X |
ο | ο | ο | ο | Ο | ο |
C0 | Ο | <Ό | |||
Τ—1 | τ—I | (Μ | ΓΩ | ΓΩ | |
0 | < | Ε-ι | Ε-ι | 0 | |
Η | 0 | Ε-ι | 0 | < | 0 |
(£ | 0 | Ρ-ι | 0 | η | |
0 | Ε-· | 0 | <3 | 0 | |
Η | 0 | Ε-· | υ | < | < |
0 | 0 | Η | 0 | 0 | |
< | 0 | Ε-| | Ε | 0 | Ε-ι |
Ε-* | <* | <C | < | Ε-ι | |
Ρ^ | ρΙ | 0 | U | ||
0 | 0 | 0 | < | 0 | 0 |
υ | Ε-ι | < | 0 | < | Ε-ι |
0 | Ε-ι | <3 | 0 | 0 | |
< | 0 | 0 | 0 | Ε-· | 0 |
Ρ-ι | 0 | 0 | < | 0 | Ε-ι |
0 | Η | 0 | 0 | Ε-ι | 0 |
Η | 0 | Ρ-ι | ρ£ | 0 | |
0 | Ε-ι | <c | < | ρ£ | 0 |
Ε-ι | 0 | <ζ | 0 | <3 | Ε-ι |
0 | 0 | Ε-ι | < | 0 | 0 |
Η | < | 0 | υ | < | < |
0 | < | Ρ-ι | Ε-ι | Ε-ι | 0 |
< | Εη | < | Ε-ι | ρ£ | Ε-ι |
Η | 0 | 0 | Η | ρ5. | 0 |
0 | 0 | < | 0 | 0 | < |
Ε-ι | ρΡ | Ε-ι | 0 | < | 0 |
0 | ΡΓ | Ε-ι | 0 | 0 | Ρ-ι |
< | <u | 0 | < | 0 | Ε-ι |
Ε-ι | 0 | Ε-ι | 0 | Ε-ι | 0 |
0 | < | 0 | 0 | 0 | Ε-ι |
0 | 0 | 0 | < | 0 | |
0 | Ε-ι | 0 | Η | 0 | |
0 | 0 | Ε-ι | <” | <3 | |
Ε-ι | 0 | 0 | ρΡ | 0 | 0 |
< | 0 | Ε-ι | 0 | ρΡ | 0 |
|£p | Ε-ι | < | < | <3 | Ε-ι |
0 | 0 | < | 0 | 0 | 0 |
0 | < | 0 | 0 | Ε-ι | 0 |
Ρ-ι | 0 | < | Ε-ι | Ε-ι | < |
< | 0 | 0 | Ε-ι | Ε-ι | Η |
0 | < | < | 0 | < | 0 |
0 | Ρ- | 0 | 0 | Ε-ι | |
0 | Ε-ι | 0 | Ε-ι | ρ5 | 0 |
Ε-ι | 0 | < | < | 0 | Ε-ι |
0 | Ε-ι | < | < | 0 | 0 |
0 | 0 | < | 0 | 0 | |
Ρ< | 0 | Ρ-ι | 0 | Ε-ι | |
0 | 0 | Ε-ι | 0 | < | |
0 | 0 | Ε-ι | < | < | 0 |
0 | Ε-· | < | 0 | 0 | Ε-· |
Ε-1 | < | Ρ-ι | 0 | Ε-ι | 0 |
< o υ < υ ο < ο
Η
Η ο < Η Ο
3
Ο Ε-<
Ε-* Η
Η 0 <
Εο ο CM C0
U 0 Ε-|
Ο 0 Η Η < 0 0 0 Ε-1 <s 0 < 0 0 Η <
Η 0 0 < Η 0 0 Η Η 0 < 0 0 Ρ 0 0 0 Η Η
AACCACAACA TCTCCATTAC AAATGCCACA GTTGAAGACA GTGGAACCTA CTACTGTACG 540 GGCAAAGTGT GGCAGCTGGA CTATGAGTCT GAGCCCCTCA ACATTACTGT AATAAAAGCT 600 CCGCGTGAGA AGTACTGGCT TGCTAGCGGT GGAGGTGGAT CCGATGCACA CAAGAGTGAG 660
·· ·· • · · • · · • · · · · · • · ·· ··
TCAAGAAACC TAGGAAAAGT GGGCAGCAAA TGTTGTAAAC ATCCTGAAGC AAAAAGAATG 1980 o o sf O O t—I CN CM
O O LO CM r-l CM CM CM
O O 00 ΜΓ CM ΓΟ CM CM
O O O LO sj* sf CM CM
O O CM CO LT) LT) CM CM
O O O
LD t— CM CM
O O LO CM Γ- CO CM CM
O O CO
CO ΟΊ CM CM
O O H O <
H H 5
O O H < O
Η Η H < <
O O H O O
H O O < <
O H < O <
Η H O < <
< O < O <
H U < < O
H | H | < | O < | |
O | < | o | O | |
< | < | o | < | O |
O | O | o | < | O |
o | < | H | O | O |
<* | o | H | < | |
< | < | O | o | < |
o | o | o | H | O |
H | o | < | O | o |
O | H | H | H | u |
o | O | < | Pm | o |
H | o | O | Ε- | < |
O | H | Ο | << | |
o | < | u | ||
H | O | < | ||
O | o | < | o | |
O | O | H | o | < |
o | o | < | o | < |
H | < | O | H | <L |
< | o | O | < | o |
H | H | H | H | H |
O | O | O | < | O |
H | < | < | H | H |
< | O | < | < | H |
H | < | O | O | O |
u | o | o | < | O |
< | < | H | O | < |
o | o | O | O | O |
< | H | H | H | H |
< | O | O | < | H |
o | < | O | O | O |
*£ | < | < | O | H |
u | H | u | H | H |
o | O | H | H | O |
H | < | H | O | < |
O | O | H | O | O |
H | o | H | < | o |
O | o | O | o | H |
O | o | O | H | O |
o | < | H | H | < |
OH<<OHOOHOO
UO<<UUHHHHU
O<<OO<O<OH
O<HOH<OOOOO <OHO<<H<U<<
OOH<<OU<HUH
OH<OUHOOOUO <OHOHOH<HO<
<O<HO<OH<H<
H<<HH000000 <HOOH<<H<H<
UH<<<OOO<OO
00H0HHHH0<H <U<H<<O<<<O
UU<0<<UU0<Č0
HH0<0HH0000
000<HH00<00
00H0H0HH<00
0<<HH<0000H <<OHO<O<<OO <OUH<OO<O<O
OHHO<<OOHH<
OOOHO<<O<O<
H<UHHUU<HH<
0<UHH0H000<
00<<<<H00<H
HO<<C<OOHHH<
0H00<0UH00<
i | O O | H < H < | o | < O | H O | O O | < H | < H | H O | ||
o | Pm | O | o | o | H | O | H | O | O | H | |
< | Ε- | O | o | < | O | H | < | <* | O | O | |
o | Ο | H | o | o | H | O | O | < | < | < | |
< | H | O | H | < | fť | O | O | O | < | H | |
H | H | H | < | < | O | O | H | O | H | ||
O | O | O | < | O | < | H | H | O | o | < | |
Pm | <* | O | H | < | O | U | O | H | H | O | |
H | tí | < | O | O | < | < | O | O | O | < | |
H | < | < | H | H | H | O | < | O | < | < | |
H | < | H | < | H | < | H | o | < | o | O | LC) |
O | < | O | O | H | < | O | H | < | < | H | Lf) |
O | < | O | < | O | O | < | O | o | o | O | σ> |
< | H | H | O | < | O | o | H | < | O | CM | |
O | O | < | H | O | O | H | H | O | < | u | |
O | O | O | < | o | H | H | O | o | o | ||
o | O | o | H | o | H | O | O | H | H | o | O |
H | < | U | o | O | H | H | < | H | < | H | |
H | o | o | < | o | < | O | O | O | O | o | H |
H | o | H | O | H | O | O | O | < | H | < | |
*£ | < | U | H | < | < | < | O | < | o | O | < |
p | o | O | O | < | o | O | O | < | < | H | O |
ř—1 | o | O | H | O | <* | O | O | H | o | O | |
< | o | H | < | < | H | < | < | o | < | < | |
o | o | O | < | O | o | U | O | H | o | O | H |
o | H | O | O | o | H | O | o | H | H | H | O |
H | H | u | < | H | H | < | o | < | <* | < | < |
< | H | H | O | H | H | H | o | H | < | H | H |
H | O | < | < | O | < | O | o | O | < | O | < |
H | O | O | o | O | < | H | < | H | O | < | H |
O | H | o | o | H | < | O | o | < | < | O | - O |
Lf) iT) (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM (i) CHARAKTERIŠTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1827 párů baží fl ω
'1—1 >U £
'1—1 fl >O i—i [fl fl fl fl fl Q fl
ro | ω | |||||
2 | ||||||
-2 | w | |||||
i—i | '01 | Ή | o | |||
ω | 4-) | 2 | fl | |||
•H | 2 | \|-j | w | |||
Rl | •ΓΊ | '2 | 0) | 2 | *> | |
λ: | 0 | Φ | 2 | >2 | fl | |
> | 2 | < | 4-) | w | ||
'«3 | Ό | -«—i | - | Ή | cn | |
> | i—I | fl ω | ω | 2 | ||
O | . | O 2 | ο | > | · | |
D | < | < | H | |||
r—| | [fl | • · · · | a | • - | O | |
fl | fl | 1—1 | fl '< | fl | fl | fl |
2 | O | fl fl | w | fl | W | |
2 | fl | O | fl o | fl | fl | í> |
> | fl | fl fl | fl | ω | fl | |
* · | O | [fl fl | Ο | 2 | fl | |
(fl | fl | fl | fl ω | O | ω | |
fl | fl | O | O fl | '< | < | |
fl | fl | fl | £ o | fl | fl | ω |
a | >υ | fl | h | |||
a a | < | fl | ||||
CQ | U | Q | fl fl | fl | fl | O |
— | —- | — | fl | ο | fl | fl |
ίΓ—1 | fl | |||||
-—· ·ι~1 Ή Ή | > | .___ | -rH | |||
-Η Ή | •Η | > | X |
• · • ·»·
o | O | O | o | o | o | o | O | o | o | o | o |
CO | CO | 00 | sj* | o | KO | co | co | o | cx> | co | |
t—i | «—1 | co | cp | rp | LP | 00 | o |
H | < | H | H | < | H | u | <ť | u | u | u | U |
u | H | < | U | U | H | |CT | H | u | < | H | |
o | U | f | U | < | u | u | < | H | u | u | U |
u | < | < | H | u | u | u | H | H | < | < | |
u | u | U | U | u | < | H | H | H | u | < | u |
< | u | U | U | H | u | H | H | U | u | < | u |
u | u | H | < | < | < | < | H | U | < | u | u |
U | H | U | H | H | < | U | H | H | < | u | u |
H | H | H | U | H | u | U | H | U | < | u | H |
H | H | U | H | < | < | U | < | < | H | H | < |
< | < | < | U | < | U | U | < | < | U | U | |
H | U | u | H | < | U | < | u | u | H | u |
H<U<U^UUUHU<
u < | < | u | < | u | H | < | U | u | u < | ||
u | u | U | u | U | u | U | u | H | |||
u | H | H | < | < | H | U | U | H | H | u | |
u | H | H | < | u | U | < | U | u | U | H | |
H | H | U | < | u | H | < | u | U | u | U | H |
u | U | H | <ζ | H | U | < | H | H | < | U | H |
u | U | < | u | H | U | u | < | < | < | < | U |
< | u | H | u | H | H | u | < | H | u | < | U |
►2 | H | U | H | H | U | u | U | H | u | u | < |
fl | < | < | H | H | < | < | < | H | u | u | u |
H | U | U | H | U | u | < | u | H | H | u | |
u | H | H | U | H | u | H | U | H | < | < | |
H | U | U | < | u | U | < | < | < | U | < | < |
U | u | U | U | < | U | u | U | H | H | u | u |
H | H | H | H | H | U | H | H | H | < | H | < |
fl | H | H | U | < | H | < | H | U | < | < | u |
H | U | H | < | u | < | u | H | U | U | u | u |
H | u | U | < | H | < | H | H | < | u | H | |
H | < | U | H | H | < | <r | U | < | u | u | H |
U | u | u | U | U | U | < | U | U | < | u | H |
HHH<<HUH<HH<
HUH<OU<UUHH<
U<<UHUU<<HU<
UUUH<H<U<H<<
U<H<<<<UUU<<
H<H<<HUH<UUU
HUUUUUUUUHHU
H<HH<UHHUU<H <UUUU<H<UUUU
H<U<H<UUH<UH
HUHHU<HHH<HU
HUHHHUHU<<U<
UHU<HHUH<HUU
U<U<<UU<<<<U <UU<<UHUUH<U <<<<<H<HHO<H
HU<H<H<H<UUU
UU<UUUUUH<UH OHUHHHHU<<U< UUH<UU<<H<H< HUHUU<<UH<H< UHHH<<<<UHUU <H<<UUUU<UHH <H<UHU<UHUUU UU<<UHU<<HU< HH<<<H<U<HUU < U U U U U U < < Η H '<
• · · · · « • «
9 9 9
Ο ο co sr ιχ> Γο ο
C0 ·· ·<··
ο C0 ť- | ο sr 00 | ο ο σ> | ο ΜΟ σ | ο CM Ο τ-Η | ο CO ο ϊ—1 | ο sr τ—( •-Η | |
< | Ο | Ο | Ε- | υ | < | Ε- | |
ο | < | <c | < | υ | υ | 0 | |
< | Ο | U | c_, | <£ | |||
ϋ | Ε- | ο | Ε- | Ě- | 0 | ||
Η | < | Ε- | Ρ- | υ | 0 | ||
* | Ο | U | U | U | 0 |
ο ο Ο U0 CN ΓΊ
Ε<
Ε<
Ο Ο ΓΊ C0 ΓΩ ΓΩ •—1 t—I ο ο sr ο sr ld τ—I ι—I
Ο ο <Ο CU ΙΓ) γ—I γ—I <
Η
Η υ
Ε- | 0 | 0 | 0 | Ε- | 0 | Ε- | |
0 | Ε- | ε- | 0 | 0 | < | Ρ- | 0 |
<γ | 0 | 0 | Ρ< | < | < | Ε- | |
<3 | Ρ- | < | 0 | 0 | Ρ- | 0 | |
0 | 0 | <* | Ε- | Η | < | <ζ | |
0 | <3 | 0 | 0 | < | U | <3 | |
Ρ- | 0 | Ε-1 | 0 | <£ | Ρ- | < | <ζ |
Η | Ε- | 0 | 0 | <Γ | 0 | 0 | 0 |
Ε- | Η | Ε- | 0 | <ζ | Ρ- | 0 | |
0 | 0 | < | 0 | 0 | Η | < | 0 |
0 | 0 | Η | Ε- | Η | 0 | Ε- | |
< | Ε- | 0 | Ε- | Ε- | Η | 0 | < |
0 | 0 | Ε- | < | 0 | Ε- | 0 | Ε- |
< | Ε- | Ε- | 0 | Ε-1 | 0 | Ρ- | 0 |
0 | < | < | 0 | Ε- | Ε- | Ε- | 0 |
0 | 0 | 0 | Ε- | Η | < | 0 | Ρ- |
Η | < | 0 | U | Η | 0 | < | řť |
Η | 0 | < | < | < | 0 | 0 | <3 |
Ε- | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | < | 0 |
0 | Ε- | Ε-1 | 0 | Ρ- | 0 | 0 | Ε- |
< | < | < | 0 | 0 | Ε- | Ε- | < |
0 | 0 | < | Ε- | 0 | υ | 0 | 0 |
0 | < | 0 | 0 | 0 | Ε- | ||
Ε- | Ε- | Ε- | Ρ- | Ρ- | Ε- | 0 | <Γ |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||
Ε- | < | < | Ε- | Ε- | < | Ρ- | |
<Γ | < | 0 | < | Ε- | 0 | 0 | |
<Γ | Ε- | < | 0 | 0 | U | 0 | 0 |
<3 | 0 | 0 | 0 | < | 0 | 0 | 0 |
0 | < | Ε- | 0 | < | Ρ- | < | |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | Ρ- | 0 |
< | < | Ρ- | Ε- | Ρ- | Ε- | Ρ- | 0 |
Ε- | < | 0 | 0 | Ε- | < | < | |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
0 | < | <3 | < | 0 | Ε- | Ε- | 0 |
0 | Η | 0 | Ε- | Ρ- | < | 0 | |
<Γ | 0 | 0 | Ρ- | Ρ- | 0 | 0 | 0 |
<3 | Ε- | < | Ε- | 0 | < | 0 | Ε- |
0 | 0 | 0 | Ε- | 0 | 0 | Ε- | Ε- |
< | Ε- | 0 | Ε- | < | 0 | < | Ε- |
0 | 0 | 0 | 0 | Ε- | Ρ- | 0 | |
0 | 0 | 0 | 0 | Ε- | 0 | Ρ- | 0 |
Ε- | 0 | < | Ε- | Ε- | < | 0 | Ε- |
Η U U ϋ
AAGCTGCCTT AGGCTTA 1827
< | < | U | 0 | υ | 0 | 0 | Ε- | U | 0 | 0 | Ρ- | Ε- | 0 | 0 | ||||
0 | U | 0 | Ε- | Ε- | Ε- | Ε- | 0 | Ε- | < | <3 | 0 | 0 | 0 | 0 | <3 | 0 | Ε- | |
Ε- | 0 | < | 0 | 0 | < | 0 | 0 | 0 | 0 | < | < | 0 | < | 0 | 0 | 0 | ||
0 | < | 0 | Ε- | 0 | Ε- | 0 | < | 0 | ο | Ρ- | <3 | 0 | 0 | 0 | < | 0 | Ρ^ | |
0 | Ε- | 0 | 0 | 0 | 0 | Ε- | 0 | Ε- | 0 | Ε- | 0 | < | Ε- | 0 | 0 | υ | < | |
0 | Ε- | 0 | 0 | Ε- | < | Ε- | Ε- | 0 | υ | Ε- | < | 0 | 0 | |||||
0 | 0 | 0 | Ε- | < | <r | 0 | 0 | <3 | 0 | 0 | Ε- | < | < | 0 | 0 | <3 | Ε- | 0 |
Ε- | Ε- | 0 | «£ | 0 | <Γ | 0 | < | Ρ- | 0 | < | Ε- | 0 | 0 | 0 | Ρ^ | 0 | 0 | Ε- |
0 | < | 0 | <3 | < | 0 | Ρ- | Ε- | < | < | 0 | Ε- | 0 | < | 0 | 0 | 0 | ||
0 | 0 | υ | 0 | <3 | < | 0 | Ρ- | 0 | 0 | Ρ- | 0 | Ε- | Ρ- | Ρ- | 0 | < | 0 |
ID (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 773 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojité ω
'RH >O £ 'b—! £ >O š
I—I P i—i P £ ω Q P
V) w
Ή | o | ||||
o | s | ||||
Ll | Ή | w | |||
><Ú | Φ | P | !> | ||
Φ | P | >P | P | ||
P | -P | ω | |||
•H | • · | -H | w | ||
1—I | £ | Φ | ω | P | |
Q | P | o | > | • . | |
*· | ω | ||||
ω | • · | - | P | • | u |
H | P | 'pť | p | P> | S |
O | P | P | w | P | ω |
O | P | o | P | ||
Pl | l-l | P | ω | P | |
o | w | P | o | s | ω |
cu | P | ω | o | cn | |
o | o | P | C | pť | |
P | s | o | P | ω | |
P >u | P | 1—1 | |||
P | >1 | < | P | ||
Q | P | P | O | ||
P | o | P | |||
— | P | ||||
•H | >—- | —-v. | |||
•H | •i—{ | > | .—, | -H | |
•H | •H | •H | > | X |
·· ··*· ·· · ··I • « • · ··
o | o | o | o | o | o | o | o | o | o | o | o | |
co | CN | CD | sr | o | co | CN | co | sr | o | co | CN | |
i—1 | i—1 | CN | CO | co | sr | sr | LD | co | co | Γ | ||
< | < | R | R | O | O | 0 | 0 | 0 | 0 | < | 0 | |
0 | 0 | O | R | < | < | R | R | < | 0 | 0 | ||
0 | < | < | < | n | 0 | m | <ť | 0 | 0 | < | CO | |
R | 0 | R | R | R | Ř | 0 | <C | R | 0 | 0 | r- | |
0 | R | < | < | 0 | < | < | ier | 0 | < | 0 | Γ | |
O | O | < | O | 0 | 0 | 0 | 0 | |||||
u | O | < | 0 | R | R | 0 | U | 0 | 0 | 0 | <ς | |
R | O | R | R | O | 0 | <c | 0 | 0 | R | 0 | 0 | |
R | R | O | R | O | R | <ζ | 0 | 0 | 0 | < | R | |
0 | < | R | R | < | u | 0 | 0 | 0 | R | R | 0 | 0 |
R | 0 | R | O | < | 0 | < | < | 0 | 0 | 0 | <c | < |
R | 0 | R | <C | 0 | o | < | 0 | < | 0 | 0 | ||
0 | R | 0 | < | o | 0 | R | R | <ť | R | R | 0 | |
R | O | R | O | < | 0 | < | 0 | <c | R | R | ||
O | 0 | R | R | u | 0 | < | R | R | R | < | ||
< | u | R | R | 0 | R | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
0 | 0 | R | < | 0 | 0 | 0 | R | R |
R | < | 0 | 0 | < | < | 0 | U | 0 |
0 | < | R | R | R | 0 | < | 0 | < |
< | R | < | R | < | R | 0 | U | |
R | 0 | 0 | R | < | 0 | R | < | < |
0 | 0 | 0 | 0 | < | 0 | 0 | 0 | |
R | <c | R | 0 | < | 0 | 0 | R | |
0 | R | 0 | 0 | R | R | 0 | < | |
< | <; | 0 | < | 0 | R | R | 0 | 0 |
R | 0 | R | 0 | R | 0 | 0 | R | R |
0 | < | 0 | 0 | 0 | R | R | < | R |
0 | 0 | < | 0 | < | 0 | 0 | 0 | 0 |
0 | R | 0 | R | 0 | < | 0 | 0 | < |
0 | 0 | R | <c | < | < | 0 | <c | 0 |
R | 0 | 0 | <C | 0 | 0 | 0 | <c | < |
< | 0 | R | 0 | <C | 0 | 0 | R | 0 |
< | R | < | < | <c | R | < | < | 0 |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | R | 0 | |
0 | < | 0 | 0 | R | 0 | U | R | R |
R | 0 | < | R | R | < | 0 | < | |
< | 0 | 0 | R | R | R | 0 | R | |
0 | < | < | 0 | 0 | 0 | 0 | ||
0 | R | 0 | 0 | R | < | R | 0 | |
0 | R | 0 | R | < | 0 | 0 | < | < |
R | 0 | < | < | 0 | R | 0 | 0 | R |
0 | R | < | < | 0 | 0 | R | R | R |
U | 0 | < | 0 | 0 | < | 0 | < | |
R | 0 | R | 0 | R | <C | 0 | 0 | 0 |
U | 0 | R | 0 | R | 0 | |||
0 | 0 | R | < | <c | 0 | 0 | R | |
0 | R | < | 0 | 0 | R | 0 | 0 | 0 |
R | < | R | 0 | R | 0 | R | < | R |
0 | < | R | 0 | < | 0 | R | < |
R | R | ||
0 | tí; | ||
tíí | R | 0 | 0 |
R | R | R | 0 |
0 | < | R | 0 |
R | 0 | 0 | U |
0 | R | R | <c |
< | 0 | 0 | <C |
R | 0 | R | |
R | R | R | 0 |
< | 0 | R | 0 |
0 | 0 | < | 0 |
<C | R | 0 | <C |
< | R | < | < |
0 | 0 | 0 | R |
R | R | R | 0 |
0 | R | 0 | 0 |
0 | < | 0 | R |
0 | U | < | < |
0 | 0 | 0 | 0 |
0 | 0 | 0 | < |
< | R | < | 0 |
0 | < | 0 | 0 |
R | R | 0 | 0 |
0 | R | < | |
R | R | 0 | řp |
0 | R | R | 0 |
< | R | 0 | R |
0 | R | 0 | |
R | <! | R | |
< | 0 | R | |
R | 0 | R | 0 |
0 | < | 0 | < |
< | R | E-. | 0 |
0 | U | < | < |
0 | 0 | R | U |
R | 0 | R | R |
0 | R | R | R |
0 | 0 | < | 0 |
< | < | R | 0 |
0 | R | R | 0 |
0 | 0 | < | |
0 | 0 | ||
R | << | 0 |
•4 ·99·
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Fůzní polypeptid, který obsahuje alespoň jednu vazebnou doménu pro imunoglobulin E (IgE) spojenou s alespoň jednou složkou lidského sérového albuminu (HSA), nebo sůl takového polypeptidu nebo jeho fyziologicky funkční ekvivalent.
- 2. Polypeptid podle nároku 1 nebo jeho sůl, kdeIgE-vazebná doména je IgER nebo pre-IgER (sekvence id. č. 1), nebo- složka HSA je HSA-I, prepro-HSA-I nebo HSA-ΙΙ (sekvence id. č. 2).
- 3. Polypeptid podle nároku 1 nebo jeho sůl, kterýžto polypeptid je polypeptid podle příkladu 7 včetně vedoucí sekvence (sekvence id. č. 3), nebo polypeptid podle příkladu 7 ve zralé formě (aminokyselinové zbytky Val2s až Leu978 sekvence id. č. 3) .
- 4. Izolovaný polynukleotid, který je meziproduktem při přípravě polypeptidu podle nároku 1 nebo jeho soli, a který zahrnuje aminokyselinové zbytky Val26 až Leu978 sekvence id. č. 3.
- 5. Způsob přípravy polypeptidu podle nároku 1 nebo jeho soli, vyznačující se tím, že obsahuje kroky, kdya) hostitelská buňka se transformuje vektorem, který obsahuje DNA kódující polypeptid podle nároku 1 nebo jeho fyziologicky funkční ekvivalent,b) polypeptid nebo jeho fyziologicky funkční ekvivalent se exprimuje v buňce, přičemž fyziologicky funkční ···· • 99 ekvivalent polypeptidů se modifikuje tak, že vytvoří fúzní polypeptid definovaný v nároku 1, ac) výsledný polypeptid se získá z hostitelské buňky, volitelně ve formě jeho soli.
- 6. Vektor, který obsahuje DNA kódující polypeptid nebo jeho sůl podle nároku 1, nebo somatický rekombinant kromě člověka nebo transgenní zvíře, které exprimují polypeptid nebo jeho sůl podle nároku 1 nebo fyziologicky funkční ekvivalent takového polypeptidů.
- 7. Polypeptid podle nároku 1 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl pro použití jako léčivo.
- 8. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid podle nároku 1 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo rozpouštědlem.
- 9. Použití polypeptidů podle nároku 1 nebo jeho soli pro diagnostický test in vitro ke stanovení hladiny IgE nebo autoprotilátek k FcsRIcc v biologickém vzorku získaném z lidského pacienta.
- 10. Způsob genové terapie u lidí, vyznačující se tím, že obsahuje kroky, kdy se odeberou somatické buňky pacienta, tyto buňky se v kultuře geneticky modifikují tím, že se do nich vloží polynukleotid podle nároku 4, a výsledné modifikované buňky se zavedou zpět do pacienta, přičemž tyto buňky pacienta exprimují polypeptid podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US69021696A | 1996-07-26 | 1996-07-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ24699A3 true CZ24699A3 (cs) | 1999-04-14 |
CZ297634B6 CZ297634B6 (cs) | 2007-02-21 |
Family
ID=24771594
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ0024699A CZ297634B6 (cs) | 1996-07-26 | 1997-07-25 | Fúzní polypeptidy obsahující IgE a HSA, zpusob jejich prípravy, farmaceutický prípravek, který je obsahuje, a jejich použití |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0917581B1 (cs) |
JP (1) | JP3681402B2 (cs) |
KR (1) | KR100502879B1 (cs) |
CN (1) | CN1146664C (cs) |
AR (1) | AR008077A1 (cs) |
AT (1) | ATE383429T1 (cs) |
AU (1) | AU722069B2 (cs) |
BR (1) | BR9710605A (cs) |
CA (1) | CA2261562C (cs) |
CO (1) | CO4650184A1 (cs) |
CZ (1) | CZ297634B6 (cs) |
DE (1) | DE69738452T2 (cs) |
ES (1) | ES2300114T3 (cs) |
HK (1) | HK1020352A1 (cs) |
ID (1) | ID19420A (cs) |
IL (2) | IL128094A0 (cs) |
MY (1) | MY120425A (cs) |
NO (1) | NO323611B1 (cs) |
NZ (1) | NZ333908A (cs) |
PE (1) | PE99498A1 (cs) |
PL (1) | PL189415B1 (cs) |
PT (1) | PT917581E (cs) |
RU (1) | RU2209211C2 (cs) |
SK (1) | SK7799A3 (cs) |
TR (1) | TR199900155T2 (cs) |
TW (1) | TW565571B (cs) |
WO (1) | WO1998004718A1 (cs) |
ZA (1) | ZA976666B (cs) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1289253A (zh) * | 1998-01-29 | 2001-03-28 | 泰诺士公司 | 以lgE拮抗剂治疗特应性皮炎 |
EP1088084B1 (en) | 1998-06-15 | 2006-09-13 | GTC Biotherapeutics, Inc. | Erythropoietin analog-human serum albumin fusion protein |
EP1208194A2 (en) * | 1999-08-09 | 2002-05-29 | Genaissance Pharmaceuticals, Inc. | Drug target isogenes: polymorphisms in the immunoglobulin e receptor i alpha subunit gene |
DE10026998A1 (de) * | 2000-05-31 | 2001-12-13 | Fresenius Kabi De Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen Zusammensetzung, die humanes Serum Albumin umfasst, welches aus transgenen nicht-menschlichen Säugern erhalten wurde |
JP2004528014A (ja) * | 2000-12-07 | 2004-09-16 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | Glp−1融合タンパク質 |
TW200526779A (en) * | 2001-02-08 | 2005-08-16 | Wyeth Corp | Modified and stabilized GDF propeptides and uses thereof |
CA2471363C (en) | 2001-12-21 | 2014-02-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
BRPI0921586A2 (pt) | 2008-11-18 | 2019-09-24 | Merrimack Pharmaceuticals Inc | articuladores de albumina de soro humana e conjugados destes |
DK2401383T3 (da) * | 2009-02-27 | 2013-12-16 | Novartis Ag | Fremgangsmåder til udvælgelse af eukaryote celler, som udtrykker et heterologt protein |
WO2012169735A2 (ko) * | 2011-06-07 | 2012-12-13 | (주)네오팜 | FCεRI의 수용성 단편을 포함하는 복합체 및 이를 포함하는 IGE 매개 알레르기성 질환 치료용 조성물 |
RU2506271C2 (ru) * | 2011-06-22 | 2014-02-10 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-западного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН) | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПОЛИПЕПТИД А2, СЕЛЕКТИВНО СВЯЗЫВАЮЩИЙ HSA, РЕКОМБИНАНТНАЯ ДНК pa2, КОДИРУЮЩАЯ HSA-СВЯЗЫВАЮЩУЮ ЧАСТЬ ПОЛИПЕПТИДА A2, ЕГО ПРОДУЦЕНТ - РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli M15-A2, СОДЕРЖАЩИЙ РЕКОМБИНАНТНУЮ ПЛАЗМИДНУЮ ДНК pQE 32-pa2, ОБЕСПЕЧИВАЮЩУЮ ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИПЕПТИДА A2 И ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИПЕПТИДА А2 ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ МИКРОАЛЬБУМИНУРИИ И ВЫДЕЛЕНИЯ HSA ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ |
US9345766B2 (en) | 2012-08-30 | 2016-05-24 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapies comprising anti-ERBB3 agents |
EP3291670A1 (en) * | 2015-05-04 | 2018-03-14 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | Transgenic production of fc fusion proteins |
EP3192806A1 (en) | 2016-01-13 | 2017-07-19 | Affiris AG | Alpha chain of the high-affinity ige receptor (fceria) |
WO2018089335A1 (en) * | 2016-11-09 | 2018-05-17 | North Carolina State University | Treatment of allergic diseases with chimeric protein |
CN111773392B (zh) * | 2020-05-25 | 2023-04-07 | 河南省生物工程技术研究中心 | 一种人血白蛋白/寡核苷酸纳米颗粒及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4962035A (en) * | 1987-12-01 | 1990-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | DNA encoding IgE receptor alpha-subunit or fragment thereof |
GB8909916D0 (en) * | 1989-04-29 | 1989-06-14 | Delta Biotechnology Ltd | Polypeptides |
CA2059842A1 (en) * | 1991-02-11 | 1992-08-12 | Richard A. Chizzonite | Ige-receptor-antibodies |
-
1997
- 1997-07-24 PE PE1997000662A patent/PE99498A1/es not_active Application Discontinuation
- 1997-07-24 AR ARP970103340A patent/AR008077A1/es active IP Right Grant
- 1997-07-24 MY MYPI97003371A patent/MY120425A/en unknown
- 1997-07-25 AU AU42025/97A patent/AU722069B2/en not_active Ceased
- 1997-07-25 IL IL12809497A patent/IL128094A0/xx active IP Right Grant
- 1997-07-25 ES ES97940030T patent/ES2300114T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 KR KR10-1999-7000621A patent/KR100502879B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 SK SK77-99A patent/SK7799A3/sk unknown
- 1997-07-25 CZ CZ0024699A patent/CZ297634B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 DE DE69738452T patent/DE69738452T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 NZ NZ333908A patent/NZ333908A/en unknown
- 1997-07-25 PT PT97940030T patent/PT917581E/pt unknown
- 1997-07-25 CA CA2261562A patent/CA2261562C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 ZA ZA976666A patent/ZA976666B/xx unknown
- 1997-07-25 RU RU99103326/13A patent/RU2209211C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 EP EP97940030A patent/EP0917581B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-25 BR BR9710605A patent/BR9710605A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-07-25 TR TR1999/00155T patent/TR199900155T2/xx unknown
- 1997-07-25 WO PCT/EP1997/004066 patent/WO1998004718A1/en active IP Right Grant
- 1997-07-25 JP JP50850498A patent/JP3681402B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 ID IDP972592A patent/ID19420A/id unknown
- 1997-07-25 CO CO97042651A patent/CO4650184A1/es unknown
- 1997-07-25 AT AT97940030T patent/ATE383429T1/de active
- 1997-07-25 CN CNB971976597A patent/CN1146664C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-08 TW TW086111356A patent/TW565571B/zh not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-01-18 IL IL128094A patent/IL128094A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-01-25 NO NO19990328A patent/NO323611B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-01-25 PL PL97331356A patent/PL189415B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-11-24 HK HK99105437A patent/HK1020352A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2010246108B2 (en) | FGF21 mutants and uses thereof | |
CN103328502B (zh) | 治疗fgf21相关的病症的方法 | |
US7576190B2 (en) | FGF-21 fusion proteins | |
CZ24699A3 (cs) | Fúzní polypeptidy obsahující IgE a HSA, způsob jejich přípravy, farmaceutický přípravek, který je obsahuje, a jejich použití | |
KR20170065026A (ko) | 대사 장애 치료용으로 이용되는 조성물 및 방법 | |
CZ20012406A3 (cs) | Exprese a export proteinů působících proti obezitě jako Fc fúzních proteinů | |
JP7488303B2 (ja) | IgE Fc受容体のアルファサブユニットの細胞外ドメイン、その物を含む医薬組成物、およびその物を製造する方法 | |
WO2005116078A1 (en) | Glycosylated immunoglobulin and immunoadhesin comprising the same | |
KR20240035643A (ko) | C1 에스테라제 억제제 융합 단백질 및 이의 용도 | |
JP2022520862A (ja) | 新規組換えジアミンオキシダーゼおよび過剰ヒスタミンによって特徴づけられる疾患の治療のためのその使用 | |
HU227311B1 (en) | Single-chain forms of the glycoprotein hormone quartet | |
US6423512B1 (en) | Fusion polypeptides | |
US20050069540A1 (en) | Treating b-cell mediated diseases by modulating dr6 activity | |
MXPA99000970A (en) | Fusion polypeptides com0prising an ige-binding domain and a hsa component, and their diagnostic and therapeutic uses | |
KR20230110297A (ko) | 소 항체 변이체 | |
AU2003287431A1 (en) | Treatment of immunological renal disorders by lymphotoxin pathway inhibitors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20090725 |