CZ243197A3

CZ243197A3 - Přemostěné indoly jako inhibitory matricové metaloproteázy

Info

Publication number: CZ243197A3
Application number: CZ972431A
Authority: CZ
Inventors: Teng J. Liak; Zhengyo Yuan; Alexander Krantz; Jian Jeffrey Chen; Wart Harold Van; Paul D. Cannon; Arlindo L. Castelhano; Stephen Horne
Original assignee: Syntex (U.S.A.) Inc.
Priority date: 1995-02-03
Filing date: 1996-02-02
Publication date: 1998-01-14
Also published as: CN1066150C; AR002958A1; NO973551L; EP0807114A1; CN1180358A; US6013792A; FI113965B; ZA96850B; CA2212236A1; CZ293868B6; NO973551D0; UA67716C2; RU2191779C2; FI973198A0; FI973198L; AU4863696A; NO311257B1; JPH11500109A; AU705763B2; PL321659A1

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká sloučenin a jejich farmaceuticky vhodných solí, které inhibují matricové metaloproteázy, s výhodou intersticiální kolagenázy a jsou proto vhodné pro léčení a zmírnění projevů nemocí savců.

Dosavadní stav techniky

Matricové metaloproteázy jsou skupinou proteáz (enzymů), které působí při odbourání a přeměně pojivových tkání. Tyto enzymy mají mnoho vlastností, které zahrnují závislost na zinku a vápníku, vylučování jako zymogeny a 40-50 % homologie sekvence aminokyselin.

Skupina matricových metaloproteáz obsahuje intersticiální kolagenázy odvozené od fibrioblast/makrofágů a neurofilů, které katalyzují počáteční rozštěpení přírodního kolagenu typu I, Π, ΠΙ a X.

Kolagen, hlavní stavební protein savců, je základní složkou matrice mnoha tkání, např. chrupavky, kosti, šlachy a kůže. Intersticiální kolagenázy jsou specifickými matricovými metaloproteázami, které štěpí kolagen za vzniku dvou fragmentů, které samovolně denaturují za fyziologické teploty a proto se stávají přístupnými pro štěpení méně specifickými enzymy. Stepení pomocí kolagenázy způsobuje ztráty ve strukturní celistvosti cílových tkání a je to v podstatě nevratný proces, který je proto vhodný pro terapeutické použití.

Dále intersticiální kolagenázy, enzymy matricových metaloproteáz obsahují dva různé, ale příbuzné, typy želatinázy: 72 kD enzym vylučovaný fibrioblasty a dalšími typy buněk a 92 kD enzym, vylučovaný monomolekulárními fagocyty. Bylo prokázáno, že tyto želatinázy odbourávají želatinu (denaturovanou kolageny), kolagen typu IV (základ membrán a V, fibronektin a nerozpustný elastin.

Matricové metaloproteázy také obsahují stromelisiny (1 a 2), které štěpí široký rozsah matricových substrátů, jako laminin, fibronektin, proteoglykany a kolageny typu IV a IX v jejich nehelikálních oblastech.

• ·· ·

Matrilysin (domnělá metaloproteáza nebo PUMP) je nedávno popsaný člen skupiny matricových metaloproteáz. Bylo prokázáno, že matrilysin odbourává velké množství matricových substrátů jako proteoglykany, želatiny, fibronektin, elasti a laminin. Jeho exprese byla dokumentována na molekulárních fagocytech, na explantovaných dělohách krys a řídce na nádorech.

Inhibitory matricových metaloproteáz umožňují léčení např. artritidních onemocnění, onemocnění, při kterých řídně kostní tkáň (jako osteoporoza), zvýšené odbourávání kolagenu spojené s diabetem, periodontální onemocnění, zvředovatění rohovky, zvředovatění pokožky, nádorová onemocnění a metastázy. Např. vzhled a potencionální použití inhibitorů kolagenáz je popsáno v J. Enzyme Inhibition (1987), Vol. 2, pp 1-22; Drug News & Prospectives (1990), Vol. 3, No. 8, pp 453-458. Inhibitory matricových metaloproteáz jsou také předmětem mnoha patentů a patentových aplikací, např. U.S. Patent Nos. 5,189,178 (Galardy) a 5,183,900 (Galardy), Europian Published Patent Application 0 438 223 (Beecham) a 0 276 436 (F. Hoffmann- La Roche), a Patent Cooperation Treaty International Application 92/21360 (Merck), 92/06966 (Beecham) a 92/09563 (Glycomed).

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje nové sloučeniny, které jsou výhodné jako inhibitory matricových metaloproteáz, s výhodou intersticiálních kolagenáz, a které jsou účinné při léčení onemocnění charakterizovaných zvýšenou aktivitou matricových metaloproteáz.

Jeden aspekt předkládaného vynálezu vede k sloučeninám obecného vzorce I ve formě jednoho stereoizomeru nebo jako směsi stereoizomerů:

(I) • · kde:

m je 2, 3, 4, 5 nebo 6; a nje 0,1, 2, 3 nebo 4; takže:

když mje 2, 3 nebo 4; nje 1,2, 3, nebo 4; a

A je -CH2-, -0-, nebo -N(Rⁿ)-, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl;

R¹ je a) -(CHhj-R⁴ kde R⁴ je merkapto, acetylthio, karboxy, aminokarbonyl, Nhydroxyformylamino, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, aralkoxykarbonyl, benzyloxyaminokarbonyl, nebo

O

II

OH z

kde R je případně substituovaný aryl, kde aryl skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2yl, pyridyl nebo fenyl;

b) -CH(R )-R kde R je alkyl, hydroxy, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonylamino, aralkylaulfonylamino, alkoxykarbonyl, aminokarbonyl, aralkyl nebo karboxy; nebo R⁷ je -CH2NHR, kde Rje vodíh, alkyl, aryl, 2-benzoxazol, -SO2R^a, SO2NHR^a, -SO2OR^a -C(O)R^a -C(O)NHR^a, -C(O)OR^a, kde R^a je alkyl, trifluormethyl, ft aryl, aralkyl, aralkenyl nebo arylkarbonylaminoalkylaryl; a R je karboxy, hydroxyaminokarbonyl, alkoxykarbonyl nebo aralkoxykarbonyl; nebo

c) -NH-CH(R⁹)-R¹⁰ kde R⁹ je vodík, alkyl nebo aralkyl, a R¹⁰ je karboxy, alkoxykarbonyl nebo aralkoxykarbanyl, fosfonyl, dialkylfosfonyl, nebo methoxyfosfonyl;

R² je alkyl, alkenyl, trifluormethylalkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aralkoxyalkyl, aryl, aryloxyalkyl nebo aralkyl; a o

Rje vodík, hydroxy, halo, alkyl, alkoxy nebo aralkoxy;

když nje 0; mje 4, 5 nebo 6; a

A je -CH(R )- kde R je karboxy, alkoxykarbonyl nebo případně substituovaný karbamoyl; a R¹, R² a R³ jsou definovány výše; nebo a farmaceuticky vhodné soli.

• ···· · ·· ······ ·· · ······ · • · ······ • · · ·· · · ···· • · · · · · · ··· · ··· ·· ·· ·

Další aspekt předkládaného vynálezu vede k postupu inhibice matricové metaloproteázy u savců, který obsahuje podávání sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli savcům v terapeuticky účinném množství.

Další aspekt předkládaného vynálezu vede k farmaceutickým prostředkům vhodným pro inhibici aktivity matricové metaloproteázy u savců, přičemž tyto prostředky obsahují terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli; a farmaceuticky vhodného excipientu.

Další aspekt předkládaného vynálezu odpovídá postupu přípravy sloučeniny vzorce I.

Podrobný popis vynálezu

Definice

Jestliže není uvedeno jinak, v popisu a připojených nárocích se používají následující zkratky:

„BOC“ znamená t-butoxykarbonyl.

„CBZ“ znamená benzyloxykarbonyl (karbobenzyloxy).

„DMF“ znamená N,N-dimethylformamid.

„EDO“ znamená N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid.

„HOBT“ znamená 1-hydroxybenzotriazol.

„EtOAc“ znamená ethyl acetat.

„THF“ znamená tetrahydrofuran.

„DCC“ znamená 1,3-dicyklohexyl karbodiimid.

„DMAP“ znamená 4-dimethylaminopyridin.

„Pht“ znamená ftalimid.

Acetylthio znamená zbytek -SC(O)CH₃.

• Φ··· · ·· ······ • · · φφφφ · · · • φ φ φ φ φ φ φ φ · φ φφ ······ • φ φφφ · · · · · · φ φ φ · φ ·Φ ·

Halo znamená brom, chlor nebo fluor.

Alkyl znamená přímý nebo rozvětvený jedno vazný řetězec skládající se pouze z uhlíku a vodíku o jednom až šesti atomech uhlíku neobsuhující nenasycení např. methyl, ethyl, n-propyl, 2-methylpropyl (iso-butyl), 1-methylethyl (iso-propyl), 1,1dimethylethyl (t-butyl), a pod.

„Alkenyl“ znamená přímý nebo rozvětvený řetězec obsahující nejméně jednu nenasycenou vazbu, např. ethenyl, pent-4-enyl a pod..

„Nižší alkyl“ znamená přímý nebo rozvětvený řetězec obsahující jeden až čtyři atomy uhlíku.

„Alkylamino“ znamená zbytek vzorce -NHR_a, kde Ráje alkyl jak je definováno výše, např. methylamino, ethylamino, n-propylamino, a pod.

„Alkylen“ jak je použito zde znamená přímý nebo rozvětvený dvouvazný nasycený uhlovodíkový řetězec obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jako methylen, ethylen, propylen, 2-methylpropylen, 1,2-dimethylpropylen, hexylen, a pod.

„Alkoxy“ znamená zbytek vzorce -OR_a, kde Ráje alkyl jak je definováno výše, např. methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, 1-methylethoxy, n-butoxy, t-butoxy, a pod, který je případně substituován hydroxy, alkoxy, aryl, amino, alkylamino, dialkylamino, dialkylaminokarbanyl nebo N-methylpiperidin-3-yl skupinami.

„Aminokarbonyl“ znamená zbytek vzorce -C(0)-NH2, kde amino může být případně substituována jednou nebo více hydroxy, aralkyl, aralkoxy, alkylaminoalkyl a dialkylaminoalkyl, jako hydroxyaminokarbonyl skupinami.

„Aryl“ znamená jedno vazný nenasycený aromatický karbocyklický zbytek obsahující jeden nebo dva kruhy jako fenyl, naftyl, indanyl nebo bifenyl, nebo znamená jedno vazný nenasycený aromatický heterocyklický zbytek jako chinolyl, dihydroisoxazolyl, furanyl, imidazolyl, pyridyl, fthalimido, nebo thianyl případně substituovaný aryl skupinou, jak je definováno zde. Aryl může být případně mono-, di- nebo tri-substituovaný nezávisle halo, hydroxy, nižší alkyl, alkoxy, trifluormethyl, aryloxy, amino, aryl, acetamido, a/nebo kyano skupinami např. 6-nitrochinol-2-yl, 6-fluorchinol-2-yl, 6-hydroxychinol-2• · · · • · · · · · • · · · ··· · • · · · · •·· 9 9 9· · yl, 6-methoxychinol-2-yl, 6-nitronaft-l-yl, 6-chlomaft-l-yl, 6-hydroxynaft-l-yl, 6mothoxynaft-l-yl, 6-nitronaft-2-yl, 6-chloranaft-2-yl, 6-hydroxynaft-2-yl, 6methoxynaft-2-yl, 6-nitrofenyl, 6-chlorfenyl, 6-hydroxyfenyl, 6-methoxyfenyl, bifenyl, 3-methylpyridyl, 4-ethylpyridyl, 4-chlorfenyl, 4-fenoxyfenyl, 2-pyrrolidin-l-yl-ethoxyfenyl, 4-kyanofenyl, naftalen-2-yl, 4-hydroxy-3-methyl-fenyl a pod.

„Aryloxy“ znamená zbytek vzorce -ORb kde Rb je aryl jak je definováno výše, např. fenoxy, chinol-2-yloxy, naft-l-yloxy, nebo naft-2-yloxy, a pod.

„Aralkyl“ znamená zbytek vzorce -RcRb, kde Reje alkylen jak je definováno výše a Rb je aryl jak je definováno výše, např. benzyl, fenylethylen, 3-fenylpropyl, a pod.

Aralkoxy znamená zbytek vzorce -OR_cR_b kde Reje alkylen jak je definováno výše a Rb je aryl jak je definováno výše, např. benzyloxy, 3-naft-2-ylpropoxy, a pod.

„Alkoxykarbonyl“ znamená zbytek vzorce -C(O)ORb, kde Rb je alkyl jak je definováno výše, nebo Rb je nenasycený karbocyklický kruh obsahující jeden nebo více heteroatomů, např. methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, t-butoxykarbonyl, Nmethylpiperid-4-yl-oxykarbonyl, a pod.

„Aralkoxykarbonyl“ znamená zbytek vzorce -C(O)Rd, kde Ráje aralkoxy jak je definováno výše, např. benzyloxykarbonyl, naftyl-2-ylethoxykarbonyl, a pod.

„Benzyloxyaminokarbonyl“ znamená zbytek vzorce -C(O)NHOCH2Ph, kde Ph je fenyl.

„Karbamoyl“ znamená zbytek vzorce -C(0)NH2.

„Karboxy“ znamená zbytek vzorce -C(O)OH.

„Cykloalkyl“ znamená jedno vazný nasycený karbocyklický zbytek neobsahující žádné nenasycení a obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, jako např. cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl.

„Cykloalkylalkyl“ znamená zbytek vzorce -(CHhjpRc, kde Reje cykloalkyl jak je definováno výše a p je celé číslo 1 až 6, např. cyklopentylpropyl, cyklopropylmethyl, cyklobutylmethyl, cyklohexylbutyl.

φφφφ

φφφφ φ φ φ • φ φ φ φ φ • · · φ ··· φ • φ φ φ φ φφφ ΦΦ ·· φ „Dialkylamino“ znamená zbytek vzorce -NR_fR_g, kde R_f a R_g jsou nezávisle alkyl jak je definováno výše nebo Rf a R_g společně tvoří kruh, např. morfolinyl, piperidinyl nebo pyrrolindinyl, a pod.

„Hydroxyamino“ znamená zbytek vzorce -NHOH.

„Hydroxyaminokarbonyl“ znamená zbytek vzorce -C(O)NHOH.

„N-hydroxyformylamino“ znamená zbytek vzorce -N(OH)C(O)H.

„Merkapto“ znamená zbytek vzorce -SH.

„Sulfonyl“ znamená zbytek vzorce =S(O)2.

„Fosfonyl“ znamená zbytek vzorce -PO(OH)2.

„Případný“ nebo „případně“ znamená, že postupně popsané události se mohou nebo nemusí vyskytnout a že popis zahrnuje příklady nebo události, které se vyskytují a příklady, které se navyskytují. Např. „případně substituovaný chinol-2-yl“ znamená, že chinol-2-ylový zbytek může, ale nemusí být substituovaný a že popis obsahuje jak substituovaný chinol-2-ylový zbytek, tak nesubstituovaný chinol-2-ylový zbytek.

„Případně substituovaný karbamoyl znamená karbamoylový zbytek případně substituovaný na atomu dusíku jedním nebo více substituenty ze skupiny obsahující alkyl, mono- a di-alkylaminoalkyl a aralkyl.

„Amino-chránící skupina“ jak je zde uvedeno znamená organickou skupinu použitou k chránění atomu dusíku proti nežádoucím reakcím v průběhu syntézy a zahrnuje např. benzyl, acyl, acetyl, benzyloxykarbonyl (karbobenzyloxy), p-methoxybenzyloxykarbonyl, p-nitrobenzyloxykarbonyl, t-butoxykarbonyl, trifluoracetyl, a pod., ale není omezena pouze na tato příklady.

„Farmaceuticky vhodná sůl“ zahrnuje jak farmaceuticky vhodné soli kyselin, tak farmaceuticky vhodné soli bází.

„Farmaceuticky vhodná sůl kyseliny“ znamená takovou sůl, která má biologickou účinnost a vlastnosti volné báze a která není biologicky nebo jinak nežádoucí a tvoří se reakcí sloučeniny s anorganickou kyselinou jako je kyselina chlorovodíková, kyselina

9999

9

9999

9 9 9 9 9

9 9« 999 9

9 9 9 9

999 99 9· 9 bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a pod; nebo s organickou kyselinou jako je kyselina octová, kyselina propionová, kyselina glykolová, kyselina pyrohroznová, kyselina šťavelová, kyselina maleinová, kyselina malonová, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina tartarová, kyselina citrónová, kyselina bezoová, kyselinaskořicová, kyselina mandlová, kyselina methansulfonová, kyselina ethansulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina salicylová a pod.

„Farmaceuticky vhodná sůl báze“ znamená takovou sůl, která má biologickou účinnost a vlastnosti volné kyseliny a která není biologicky nebo jinak nežádoucí. Tyto soli se připravují přidáním anorganické báze nebo organické báze k volné kyselině. Soli odvozené od anorganických bází jsou sodné, draselné, lithné, amonné, vápenaté, hořečnáté, železnaté, zinečnaté, měďnaté, soli manganu, hlinité soli a pod., ale použití anorganických solí není omezeno pouze na tyto příklady. Soli ovozené od organických bází jsou soli primárních, sekundárních a terciárních aminů, substituované aminy zahrnující přírodně se vyskytující aminy, cyklické aminy a bazické iontově výměnné resiny, jako je isopropylamin, trimethylamin, diethylamin, triethylamin, tripropylamin, ethanolamin, 2-dimethylamino ethanol, 2-diethylaminoethanol, trimethamin, dicyklohexylamin, lysin, arginin, histidin, kaffein, prokain, hydrabamin, cholin, betain, ethylendiamin, glukosamine, methylglukamine, theobromin, puriny, piperazin, piperidin, N-ethylpiperidin, polyamin resiny apod., použité báze však nejsou omezeny pouze na tyto příklady. Výhodnými organickými bázemi jsou isopropylamin, diethylamin, ethanolamin, trimethamin, dicyklohexylamin, cholin a kafein.

„Savci“ zahrnují člověka a všechna domestikovaná a divoká zvířata jako např. hovězí dobytek, koně, vepře, ovce, kozy, psy, kočky a pod., bez omezení.

„Terapeuticky účinné množství“ znamená takové množství sloučeniny vzorce I, které když je podáváno savcům, je dostatečné pro účinnou léčbu, jak je definováno níže, pro onemocnění při kterých je nutné inhibovat aktivitu matricové metaloproteázy, jako je aktivita stromelysinu, želatináz, matrilysinu a/nebo kolagenáz. Množství sloučeniny vzorce I, která tvoří „terapeuticky účinné množství“ se mění v závislosti na sloučenině, onemocnění a jeho závažnosti a na léčeném zvířeti, ale může být rutinně určeno pomocí běžně používaného postupu s ohledem na znalosti terapeuta.

4444

«4··

4 4 4 4 « *4 4 φ 4444

4 4 4 4

44« 44 44 4 „Léčení nebo léčba“ jak je zde uvedeno znamená léčbu onemocnění savců, s výhodou člověka, pro onemocnění při kterých je nutné inhibovat aktivitu matricové metaloproteázy, s výhodou aktivitu intersticiální kolagenázy a pod. a zahrnuje:

(i) prevenci onemocnění vyskytujících se u savců, s výhodou jeli savec náchylný k těmto onemocněním, ale jeho onemocnění nebylo ještě přesně určeno;

(ii) inhibici onemocnění např. zastavení jeho vývoje; nebo (iii) zmírnění onemocnění např. způsobení obratu v onemocnění.

„Izomery“ jsou různé sloučeniny, které mají stejný molekulární vzorec.

„Stereoizomery“ jsou izomery, které se liší pouze v uspořádání atomů v prostoru.

„Enantiomery“ jsou párem stereoizomerů, které jsou zrcadlovými obrazy. Směs páru enantiomerů 1:1 se nazývá „racemická“ směs.

„Diastereoizomery“ jsou stereoizomery, které nejsou zrcadlovými obrazy.

Názvosloví použité zde je založeno na upravené formě názvosloví I. U. P. A. C. kde se sloučeniny předkládaného vynálezu nazývají jako deriváty fosfmové nebo alkanové kyseliny s tricyklo substituentem. Sloučeniny vzorce I mají ve své struktuře nejméně dva asymetrické uhlíkové atomy, např. v místě připojení substituentu R² a v indolylmethylové skupině. Sloučeniny vzorce I nebo jejich farmaceuticky mohou proto existovat jako jednotlivé stereoizomery, racemát a směs enantiomerů a diastereomerů. Všechny takové jednotlivé stereoizomery, racemáty a jejich směsi jsou předmětem předkládaného vynálezu.

Jestliže je v názvu jednotlivých stereoizomerů sloučenin vzorce I uveden znak absolutní konfigurace R nebo S, chirální uhlíkový atom je zde označen v souladu se „Sekvenčními pravidly“ popsanými Cahnem, Ingoldem a Prelogem.

Např. následující sloučenina vzorce I, kde n je 2; m je 3; A je -CH2-; R¹ je -CH2-R⁴ kde R⁴ je - -C(O)NHOH; R² je 2-methylpropyl a R³ je vodík, má následující vzorec:

9999

99 9 ••99 I • 9 9 9 9 «9 · « 9 9 9

9

a zde se nazývá (3R,10S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo[10,6,l,0¹³’¹⁸] nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid.

Dalším příkladem je následující sloučenina vzorce I, kde m je 2; n je 2; A je kyslík; R¹je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy; R² je 3-(4-pyridinyl)propyl; a R³ je vodík, např. následující sloučenina vzorce:

která má název kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo[9,6,l,0¹²’¹⁷]oktadeka11 (18), 12,14, 16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová.

····

99 9

9

Průmyslová využitelnost

A. Použitelnost

Sloučeniny vzorce I inhibují matricové metaloproteázy savců, s výhodou intersticiální kolagenázy savců, čímž působí jako prevence rozkládání kolagenu u savců. Sloučeniny jsou proto vhodné pro léčbu onemocnění spojených se zvýšenou aktivitou matricových metaloproteáz, s výhodou zvýšenou aktivitou intersticiálních kolagenáz, jako např. artritická onemocnění (revmatoidní artritida a osteoartritida), periodontální onemocnění, vředovatění rohovky, vředovatění pokožky, nádorová onemocnění a metastázy. Viz např. Arthritis and Rheumatism (1993), Vol. 34, No. 2, pp. 181-189; Arthritis and Rheumatism(l99l), Vol. 34, No. 9, pp. 1073-1075; Seminars in Arthritis and Rheumatism(Í990), Vol. 19, No. 4, Supplement 1 (February), pp. 16-20; Drugs of the Future (1990), Vol. 15, No. 5, pp. 495-508; a J. Enzyme Inhibition (1987), Vol. 2, pp. 122.

Testování

Schopnost sloučenin vzorce I inhibovat aktivitu matricové metaloproteázy, s výhodou aktivitu intersticiální kolagenázy může být demonstrována pomocí různých in vitro a in vivo zkouškách obecně známých a používaných v této oblasti. Např. aktivita jednotlivé metaloproteázy může být demonstrována při in vitro pokusu popsaném v Anal.

Biochem. (1985), Vol. 147, p. 437, nebo jeho modifikaci. Fyziologický účinek inhibice matricových metaloproteáz může být demonstrován pomocí ex vivo zkoušky explantátu hovězí chrupavky popsané v Methods of Enzymology (1987), Vol. 144, pp. 412-419, nebo její modifikace; nebo pomocí ex vivo zkoušky dlouhých kostí plodu krys popsané v Proč. Nati. Acad. Sci. USA (1988), Vol. 85, pp. 8761-8765, nebo její modifikace nebo v J. Clin. Invest. (1965), Vol. 44, pp. 103-116, nebo její modifikace.

Schopnost inhibovat aktivitu kolagenázy 1-, 2-, a 3-, stromelysinu-1, želatinázy A a B a matrilysinu může být demonstrována pomocí zkoušky popsané v MMP Enzymatic Assay in FEBST, 296, 263 (1992) nebo její modifikace. Schopnost sloučeniny vzorce I inhibovat procesy zprostředkované MMP in vivo může být testována za použití zkoušky explantátu chrupavky stimulované interleukinem-1 a zkouškou inplantace čepu chrupavky.

···· ·· ···· • · ·♦·♦·· • · · · · · * ··· 9 • · · 9 9 9 9 ··· · ··· ·· ♦· ·

Podávání

Podávání sloučenin vzorce I nebo jejich farmaceuticky vhodných solí v čistém stavu nebo ve farmaceuticky vhodné formě může být prováděno prostřednictvím jakéhokoli přijatelného postupu podávání pro podávání podobných prostředků. Látky mohou být například podávány orálně, nasálně, nitrožilně, místně, přes pokožku nebo rektálně ve formě pevné látky, polotuhé látky, lyofilizovaného prášku nebo v kapalné dávkovači formě, jako jsou např. tablety, čípky, pilulky, měkké elastické a tvrdé želatinové kapsle, prášek, roztok, suspenze nebo aerosol a pod., s výhodou v jednotkové dávkové formě vhodné pro jednoduché podávání přesných dávek. Směs bude zahrnovat obvyklé farmaceutické nosiče nebo excipienty a sloučeninu vzorce I jako aktivní složku a dále může zahrnovat další medicionální činidla, farmaceutická činidla, nosiče, adjuvanty atd.

Obecně, v závislosti na místě určení při podávání, bude farmaceuticky vhodné složení obsahovat asi 1 % až 99 % (hmotnostních) sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli a 99 % až 1 % (hmotnostní) vhodného farmaceutického expicientu.

S výhodou bude směs obsahovat 5 % až 75 % (hmotnostních) sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli a zbytek vhodného farmaceutického expicientu.

Výhodný způsob podávání je orální, za použití vhodné denní dávky, která může být přizpůsobena stupni a závažnosti onemocnění. Pro orální podávání je farmaceuticky vhodná směs tvořena sloučeninou vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou solí, která je smí sena s běžně používaným excipientem, jako je např. farmaceuticky čistý mannitol, laktosa, škrob, želatinovaný škrob, stearát hořečnatý, sacharin sodný, pudr, deriváty etheru celulosy, glukosa, želatina, sacharosa, citrát, propyl galát, apod. Toto složení tvoří roztok, suspenzi, tablety, pilulky, kapsle, prášek, a podobně.

S výhodou je toto složení podáváno ve formě kapslí, kablet nebo tablet a proto obsahuje také „ředidlo“ jako je laktosa, sacharosa, fosforečnan vápenatý a pod.; disintegrant jako je krokarmelosat sodný nebo jejich deriváty; lubrikant jako je stearát hořečnatý apod; a pojivo jako je škrob, akáciová klovatina, polyvinylpyrrolidon, želatina, deriváty etheru celulosy, apod.

Sloučenina vzorce I nebo její farmaceuticky vhodná sůl může být také upravena pro použití jako čípek např. asi 0,5 % až 50 % aktivní složky umístěné na vhodném nosiči ♦ ···· ·· · • · • · ··· · • ·· ·· ···· ••••·· · • · · · · · • * · » ··· · * · · · · ··· ·· · tak, že se v těle pomalu rozpouští, např. polyoxyethylenglykoly a polyethylenglykoly (PEG) např. PEG 1000 (96 %) a PEG 4000 (4 %).

Kapalné farmaceuticky vhodné složení může být např. připraveno rozpuštěním, dispergováním atd., sloučeniny vzorce I (asi 0,5 % až 20 %) nebo její farmaceuticky vhodné soli a výhodného farmaceutického adjuvantu jako nosič, jako je např. voda, solný roztok, vodná dextrosa, glycerol, ethanol a pod., čímž vznikne roztok nebo suspenze.

Je-li to nutné, farmaceutická směs předkládaného vynálezu může také obsahovat malé množství přídavných sloučenin jako jsou zvlhčovadla nebo emulgátory, pH pufrovací činidla, antioxidanty a pod., jako jsou např. kyselina citrónová, sorbitan monolaurát, triethanolamin oleát, butylovaný hydroxytoluen, atd.

Účinné metody pro přípravu takových dávkovačích forem jsou známé nebo budou podobné těm, které se běžně používají; např. Remingtons Pharmaceutical Sciences, 18^thEd., (Mack Publishing Company, Easton, Pensylvania, 1990). Směs, která se podává vždy obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli, k léčení onemocnění, kdy je nutné inhibovat aktivitu matricové metaloproteázy v souladu se závěry předkládaného vynálezu.

Sloučenina vzorce I nebo její farmaceuticky vhodná sůl jsou podávány v terapeuticky účinném množství, které se mění v závislosti na různých faktorech včetně aktivity použitých sloučenin, metabolické stability a délky působení sloučeniny, věku, tělesné hmotnosti, zdravotního stavu, pohlaví, dietě, způsobu a době podávání, rychlosti vyměšování, kombinaci s léky, závažnosti onemocnění a podstupované terapii. Obecně je terapeuticky účinná denní dávka sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli od 0,14 mg do 14,3 mg/kg tělesné hmotnosti za den; s výhodou asi 0,7 mg až 10 mg/kg tělesné hmotnosti za den; a nej výhodněji od 1,4 mg až 7,2 mg tělesné hmotnosti za den. Např. při podávání 70 kg osobě se denní dávka může pohybovat mezi 10 mg až 1 g za den sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky vhodné soli, s výhodou mezi 50 mg až 700 mg za den a nejvýhodněji mezi 100 mg až 500 mg za den.

···· • ···· • · ··· ·· • · · • · · ··· · • · ·· ·

Výhodná složení

Výhodnou třídou sloučenin vzorce I jsou ty, kde n je 1, 2 nebo 3, m je 3, a A je -CH2-.

Výhodnou podtřídou této třídy sloučenin jsou sloučeniny, kde n je 1 nebo 2, kde R¹ je CH2-R⁴ a R³ je vodík, s výhodou kde R² je 2-methylpropyl, bifenylpropyl, thien-2-ylethyl, cyklopentyl, cyklopropylmethyl, nebo cyklopentylmethyl; a R⁴ je acetylthio, merkapto, karboxy, alkoxykarbonyl, N-hydroxyaminokarbonyl nebo Nhydroxyformylamino.

Výhodnou podskupinou této třídy sloučenin jsou sloučeniny, kde R² je 2-methylpropyl nebo cyklopentylmethyl a R⁴ je acetylthio, merkapto, karboxy, Nhydroxyaminokarbonyl nebo N-hydroxyformylamino.

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde R¹ je

O

II

OH kde R⁶je případně substituovaný aryl, kde aryl skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2yl, pyridyl nebo fenyl. Výhodnou podtřídou této třídy jsou sloučeniny, kde R⁶ je chinol2-yl.

, 7 2 7

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde R je -CH(R )-R kde R je CH2NHR, s výhodou kde R je vodík, R je 2-methylpropyl nebo cyklopentylmethyl, R je vodík a R⁸ je karboxy. Výhodné jsou sloučeniny, kde Rje methoxykarbonyl, methansulfonyl, nebo ethylureido.

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde R¹ je -CH(R⁷)-R⁸ kde R⁷ je alkyl, alkoxykarbonyl nebo karboxy; a R² je 2-methylpropyl nebo cyklopentylmethyl; R³ je vodík; a R je karboxy nebo hydroxyaminokarbonyl. Výhodné jsou sloučeniny kde R je methoxykarbonyl.

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰ kde R⁹ je vodík, alkyl nebo aralkyl; a R¹⁰ je karboxy, alkoxykarbonyl nebo aralkoxykarbonyl.

444 • · 4 4 4 4 4

............

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -N (R¹¹) kde R je vodík nebo alkyl; R je alkyl; a R je vodík. Výhodnou podtřídou této třídy jsou sloučeniny, kde n je 2, R² je 2-methylpropyl, a R¹¹ je methyl.

Další výhodnou podskupinou jsou sloučeniny, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R⁴ je karboxy nebo hydroxyaminokarbonyl; a R² je aryl, aralkyl nebo aralkoxyalkyl. Nejvýhodnějšími sloučeninami vzorce I jsou následujíccí sloučeniny:

(3R,10S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadea12(19),13(18),14,16-tetraon-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 11 S)-N-hydroxy-5-methyl-3-( 10-oxo-1,9-diazatricyklo(11,6,1,0^14,19)eicosa-13 (20), 14(19), 15,17-tetraen-11 -ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R,9S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo-(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11 (18), 12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid;

kyselina (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina(3R,9 S)-4-cyklopentyl-3-(8-oxo-1,7-diamatricyklo(9,6,1,0^12,17) oktadeka11(18),12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-cyklobutyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18), 12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)butanová a její methyl nebo ethyl ester;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka-ll(18),12(17),13,15 tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová;

kyselina (3R,9S)-4-(3-methoxy-4,5(R,S)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo1,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12(17), 13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-(3-hydroxy-4,5(R,S)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo-1,7diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷) oktadeka-11 (18), 12(17), 13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

·· 4 44 4 4 · · · • 4 4 · · · 4 4 • · * 4 · 4 · 444 4 <4 4 · · · φ ··· · ........

kyselina (3R,9S)-4-(3-brom-4,5(R,S)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo-l,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11(18), 12(17), 13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (2S,3R,9S)-2-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-l,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (2R,3R,9S)-2-(ethoxykarbonylamino-methyl-5-methyl-3-(8-oxo1.7- diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (2R,3R,9S)-2-(methansulfonamidomethyl)-4-cyklopentyl-3-(8-oxo1.7- diazatricyklo (9,6,l,0^12,17)oktadeka-1 l(18),12(17),13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

(10S)-2-merkaptomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10. 6. 1. 0^13,18)nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)pentanamid;

kyselina (10S)-4-methyl-2-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)pentyl(chinolin-2-ylthiomethyl)fosfinová;

(10S)-2-acetylthiomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)pentanamid;

(3R, 10S)-N-hydroxy-5-methyl-2-methoxykarbonyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tatraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

kyselina (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadekal2( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová;

ethyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanové;

·· · ·» ·

-(2-dimethylaminoethyl)amid kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové;

l-methylpiperidin-4-yl ester kyseliny (3R,10S)-S-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)-nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové;

kyselina (3R, 10S)-3-cyklopentyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)propionová;

kyselina (3R, 10S)-4-cyklopropyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová;

(3R, 10S)-6-(bifenyl-4-yl)-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo-(10,6,1,0^13,18)-nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)-nonadeka12(19), 13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-(thiofen-2yl)pentanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(amínomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo[ 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-N-hydroxy-N-formylamino-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0¹³¹⁸)-nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(methoxykarbonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)-nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-6-pyridin-4-yl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo[ 10,6,1,0^13,18]nonadeka12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(methansulfbnamidcmethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0¹³’¹⁸)-nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

• · · · · · · · • · · · · ··· ·· ·* · kyselina (3R, 10S)-2-(3-ethylureidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)- nonadeca-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová;

(3RS, 10S)-N-hydroxy-N-formyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo[ 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16 tetraen-10-ylkarbamoyl)hexylamin;

(2S, 3R, 9S)-N-hydroxy-2-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid;

kyselina (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)-oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R, 9S)-3-cyklobutylmethyl-N- (8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-yl)j antarová;

kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-axa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenoxy-pentanové acid;

kyselina (3R, 9S)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo-(9,6. l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18)12,14,16-tatraen-9-ylkarbamoyl)pentanová;

ethyl ester kyseliny (3R,9S)-5-(4-chlor-fenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1. O^12,17) oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) pentanové;

ethyl ester kyseliny (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenoxy-pentanové;

kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo[9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17) oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

• ••4 ♦ 4 44·· ••••44 · • · · 4 4 4 • 4 44 44· 4 • · · 4 4 »· · 44 44 4 kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-(4-fenoxy-fenyl)-pentanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-hydroxy-ethoxy)-fenyl-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo[9,6,1,0^12,17) oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza- tricyklo (9,6.1. O^12,17) oktadeka11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-[4-(2-pyrrolidin-l-yl-ethoxy)-fenyl] hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo[9,6. 1,1^12,17] oktadeka-11 (16), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-[4-(2-methoxy-ethoxy)-fenyl]-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo [ 9,6,1. O^12,17) oktadeka-11(18) 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo[9,6,1,0^12,17] oktadeka11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenyl-pentanová; , kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-fenyl-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(3-hydroxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6-l,0^12,17) oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-(3-piperidin-1 -yl-propoxy)-fenyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(3-dimethylamino-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-axa-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17) oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-[4-(2-dimethylamino-ethoxy)-fenyl]-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0 ¹²’¹⁷) oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-kyano-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová;

···· ·· ··· • · kyselina (3R,9S)-6-naftalen-2-yl-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0¹²¹⁷) oktadeka-11 (18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-pyrrol-1 -yl-fenyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-3-methyl-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo (19,6,1,0^12,17) oktadeka-1 l(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-benzyloxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(4-aminobutoxy-fanyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18)12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexalnová;

kyselina (3R,9S)-5-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18) 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)pentanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-amino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18)12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11 (18), 12,14,16-tatraen-9-ylkarbamoyl)-6-[4-(pyridin-4-ylmethoxy)fenyl]-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-acetylamino-fanyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo[9,6,l,0 ^12,17] oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová; a ethyl ester kyseliny (3R,9S)-6-[4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza tricyklo[9,6,l,0¹²’¹⁷]oktadeka-ll(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanové.

Příprava sloučeniny vzorce I

Sloučeniny vzorce I jsou deriváty peptidů, které se mohou připravovat z a-amino kyselin. Standardní postupy pro tvorbu peptidových vazeb popsal M. Bodanszky a kol., The Pr adice of Peptid Synthesis (1984), Springer-Verlag; M. Bodanszky, Principles of Peptid Synthesis (1984), Springer-Verlag; J.P. Greenstein a kol., Chemistry of the ·· · ·

Amino Acids (1961), Vol. 1-3, John Wiley a Synové.; G.R. Pettit, Synthetic Peptids (1970), Vol. 1-2, Van Nostrand Reinhold Company.

Amidové kaplingy použité pro přípravu sloučenin vzorce I se obvykle provádějí pomocí karbodiimidové metody s činidly jako dicyklohexylkarbodiimid nebo N'-ethyl-N'-(3dimethylaminopropyl)karbodiimid (EDCI) v přítomnosti 1-hydroxybenzatriazolu (HOBT) v inertním rozpouštědle jako dimethylformamid (DMF). Další metody pro přípravu amidové nebo peptidové vazby jsou přes chlorid kyseliny, acyl azid, smíšený anhydrid nebo aktivovaný ester jako nitrofenyl ester. Amidové kaplingy s nebo bez peptidového fragmentu se provádějí v roztoku.

Výběr chránící skupiny pro koncovou amino nebo karboxy skupinu sloučeniny použité při přípravě sloučeniny vzorce I se řídí z části konkrétním amidem nebo podmínkami peptidového kaplingu a z části amino kyselinou a/nebo peptidovou složkou zapojenou do kaplingu. Používají se běžně známé amino chránící skupiny, např.

benzyloxykarbonyl (karbobenzyloxy), p-methoxybenzyloxykarbonyl, pnitrobenzyloxykarbonyl, t-butoxykarbonyl (BOC), a pod. Výhodnou chránící skupinou pro amino skupinu je buď BOC nebo benzyloxykarbonyl (CBZ), protože je lze snadno odstranit slabými kyselinami např. kyselinou trifluoroctovou (TFA) nebo kyselinou chlorovodíkovou v ethyl acetátu; nebo katalytickou hydrogenací.

Jednotlivé stereoizomery sloučenin vzorce I mohou být od sebe odděleny pomocí známých postupů, např. když R¹ je karboxy, oddělením (např. pomocí frakční krystalizace, chromatografíe a/nebo postupy uvedenými zde) diastereoizomemích solí vytvořených reakcí sloučeniny vzorce I s opticky aktivní bází při teplotě 0 °C až reflux rozpouštědla použitého pro krystalizaci.Příklady takových opticky aktivních bází jsou brucin, strychnin, chinin, chinidin, cinchonidin, efedrin, α-methylbenzylamin, a pod.

Kombinace substituentů a/nebo záměny ve sloučeninách vzorce I jsou přípustné pouze tehdy, když vznikají stabilní sloučeniny.

• · · · • 9 9 9 9 ·· 9

22··· ·

A. Příprava meziproduktů: Sloučeniny vzorce J

Sloučeniny vzorce J:

kde R³ je definováno v Podstatě vynálezu a p je 5, 6,7 nebo 8 jsou vhodné pro přípravu sloučenin vzorce I. Sloučeniny vzorce J se připravují podle popisu v Reakčním schématu 1 níže; R³ a p jsou definovány, BOC je t-butoxykarbonyl a R¹³ je vodík, mesyl nebo tosyl.

Reakční schéma 1

O

II

CH₃C-O-<CH₂)_p_,-csh (C) » HO-CCBjjp-NBj BCl

0

II II

2. <C> -- CH₃C-O-<CB₂>_p-NH-C-CB₃

CD)

S (E)

1S

C0>

• · · ·

Sloučeniny vzorců B a F jsou komerčně dostupné např. od Karl Idustries, lne., nebo Sigma nebo se mohou připravit pomocí známých postupů.

Obecně se sloučeniny vzorce J připravují nejprve esterifikací alkoholu vzorce B acet anhydridem v přítomnosti báze, s výhodou pyridinu, za vzniku sloučeniny vzorce C, která se poté redukuje v přítomnosti acet anhydridu za vzniku sloučeniny vzorce D. Sloučenina vzorce D se hydrolyzuje za kyselých podmínek, s výhodou kyselinou chlorovodíkovou, za vzniku sloučeniny vzorce E, která se poté kapluje se sloučenou vzorce F za standardních podmínek pro peptidový kapling, např. s EDCI za přítomnosti HOBT v DMF za vzniku sloučeniny vzorce G, kde R¹³ je hydroxy. Tato sloučenina se poté reaguje buď s tosyl chloridem nebo mesyl chloridem za vzniku sloučeniny vzorce G, kde R je mesyl nebo tosyl. Cyklizací tosylátů tak v přebytku NaH v inertním rozpouštědle, s výhodou v THF, při velkém zředění při teplotě místnosti vzniká sloučenina vzorce H. Podobně cyklizací tosylátů hydroxidem sodným v inertním rozpouštědle, s výhodou CH2CI2, v přítomnosti katalyzátoru fázového přenosu, s výhodou tetra(n-butyl)amonium hydrogensulfátu, vzniká sloučenina vzorce H. Chránící skupina sloučeniny vzorce H se odstraní za slabě kyselých podmínek, s výhodou za přítomnosti kyseliny trifluoroctové, za vzniku sloučeniny vzorce J.

B. Příprava sloučenin vzorců Ia, Ib, Ic, a Id

Sloučeniny vzorce Ia jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

···· • · · · _Λ . · · ··· · ·

24···· ····· ·· *

Sloučeniny vzorce Ib jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je

-CH2-, R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ic jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-, R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Id jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-, R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je hydroxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ia, Ib, Ic, a Id se připravují jak je uvedeno v Reakčním schématu 2 níže, kde p je 5, 6, 7 nebo 8; R¹⁴ je alkyl nebo benzyl; R^7a je je vodík nebo alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Reakční schéma 2

cí») • · · ·

Cle)

CId)

Sloučeniny vzorce K se připravují pomocí postupu popsaného zde nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů.

Obecně, sloučeniny vzorce Ia, Ib a Ic se připravují nejprve kaplingem sloučeniny vzorce J se sloučeninou vzorce K za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny vzorce Ia. Chránící skupina sloučeniny vzorce Ia se poté odstraní za slabě kyselých podmínek za vzniku sloučeniny vzorce Ib.

Sloučenina vzorce Ib se poté kapluje s O-benzylhydroxylaminem za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny Ic. Benzylová chránící skupina sloučeniny vzorce Ic se poté odstraní pomocí katalytické hydrogenace za vzniku sloučeniny vzorce Id.

C. Příprava sloučenin vzorce Ie a lf

Sloučeniny vzorce Ie jsou sloučeniny vzorce I, kde nje 1,2, nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je acetylthio; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

• · · 9

9 · 9 9 9 9 ·· 9

9 999999

9 9 99 99 9999

--• 9 9 9 9 99

26··· · ··· ·· ·· ·

Sloučeniny vzorce If jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2, nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je merkapto; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ie a If se připravují tak, jak je uvedeno na následujícím Reakčním schématu 3, kde R² a R³ jsou definovány výše a p je 5, 6, 7 nebo 8.

Reakční schéma 3

Sloučeniny vzorce M jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů.

Obecně, sloučeniny vzorce Ie a If se připravují nejprve kaplingem sloučeniny vzorce M se sloučeninou vzorce J za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny vzorce Ie. Reakcí sloučeniny vzorce Ie s koncentrovaným NH4OH v methanolu vznikne odpovídající sloučenina vzorce If.

4··· ·· ····

• 4 ·

27··· ·

D. Příprava sloučenin vzorce K a jejích jednotlivých stereoizomerů

Sloučenina vzorce K:

kde R¹⁴ je alkyl nebo benzyl a R^7a je vodík, alkoxykarbonyl, hydroxykarbamoyl, karboxy nebo případně substituovaný karbamoyl se používá pro přípravu sloučeniny vzorce I. Jednotlivé stereoizomery sloučeniny vzorce K se použijí při přípravě odpovídajících stereizomerů sloučeniny vzorce I. Zejména sloučeniny následujícího vzorce Ka:

kde R^7a je vodík, je stereoizomer sloučeniny vzorce K o konfiguraci R. Sloučeniny vzorce Ka se připravují tak, jak je uvedeno na následujícím Reakčním schématu 4, kde R² je definováno výše:

• ····

Μ * • ·

28·;· ·

Reakční schéma 4 ► ····· 4 • · · · · · • · ·· ···· • « · · · • · · Β·

C-Cl

II o

L-(+)-2,10-kafr suitám

CN) <BB)

CN) + CCS υ

₃)₃C0^^

Br

CCH₃)_sCO

O 8CCK₃)C0 JU c-oh _a

II o

L-(+)-2,10-kafr suitám

Cl*)

Podobným způsobem, ale záměnou D-(-)-2,10-kafr sultamu za L-(+)-2,10-kafr suitám, se připraví stereoizomer o konfiguraci S.

Sloučeniny vzorce HH jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů, např. postupem popsaným v Příkladu 11 níže. L-(+)-2,10-kafr suitám a D-(-)-2,10-kafr suitám jsou komerčně dostupné např. od Aldrich.

Obecně, sloučeniny vzorce Ka se připravují nejprve kondenzací sloučeniny vzorce HH s L-(+)-2,10-kafr sultamem za vzniku sloučeniny vzorce N. Použitím NaHMDS se po 1 hod generuje anion, reakce se rozloží t-butylbromacetátem za vzniku odpovídajícího esteru vzorce Q. Kafi skupina se poté odstraní za bazických podmínek za vzniku «« ···· « · ·

29’ jednoho stereoizomeru sloučeniny vzorce Ka, kde uhlík, na který je připojen substituent R² má konfiguraci R.

Podobně může být sloučenina vzorce Ka připravena podle Reakčního schématu 4A.

Reakční schéma 4A

Sloučenina vzorce HH se nejprve kondenzuje s 4S-fenylmethyloxazolidinonem za standardních podmínek za vzniku odpovídající sloučeniny vzorce aa. Ke sloučenině vzorce aa se v inertním rozpouštědle jako je THF přidá se přibližně ekvimolámí množství hexamethyldisilazidu sodného. Reakce probíhá při -70 až -95 °C asi 15 min. Ke směsi se přidá přebytek t-butylbromacetátu a roztok se 2 hod míchá při -90 až -60 °C za vzniku převážně jednoho stereoizomeru vzorce bb, který se čistí pomocí standardního postupu v organické chemii. Oxazolidinonová skupina sloučeniny vzorce bb se odstraní za bazických podmínek za vzniku jednoho stereoizomeru sloučeniny vzorce Ka.

·· ····

30· » · » · · ♦ • »

Sloučenina vzorce Kb:

kde R^7c je alkoxykarbonyl, může být připravena tak, jak je uvedeno na následujícím Reakčním schématu 5, kde R² a R^7c jsou definovány výše:

Reakční schéma 5

R²

(Kb)

Sloučeniny vzorce R a T jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů.

Obecně, sloučeniny vzorce Kb se připravují nejprve reakcí sloučeniny vzorce R s isobutenem a katalytickým množstvím koncentrované H2SO4 v dichlormethanu a následnou destilací za vzniku t-butyl esterové sloučeniny vzorce S. Sloučenina vzorce

4444

44 44 ·444

4 4 4 4 4

44 444 4

4 4 4 4

444 44 4« 4

S se poté reaguje se sloučeninou vzorce T za přítomnosti t-butoxidu draselného za vzniku sloučeniny vzorce U. Hydrolýzou sloučeniny vzorce U za kyselých podmínek, s výhodou s kyselinou trifluoroctovou při teplotě místnosti se získá sloučenina vzorce Kb, kde R^7c je alkoxykarbonyl.

Sloučeniny vzorce K, kde R^7a je karboxy se připravují ze sloučeniny vzorce Kb, kde R^7cje alkoxykarbonyl pomocí známých postupů, např. hydrolýzou.

Dále k výše popsaným postupům přípravy izomerů sloučeniny vzorce K, sloučeniny vzorce K, kde R^7a je alkyl se mohou připravit reakcí sloučeniny vzorce K, kde R^7a je vodík, v aprotickém rozpouštědle, např. v THF, za přítomnosti NaN(TMS) s haloalkanem, s výhodou methyljodidem, za vzniku sloučeniny vzorce K, kde R^7a je alkyl.

E. Příprava sloučenin vzorce Ig

Sloučeniny vzorce Ig jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -CH₂-R⁴, kde R⁴

\R⁶ kde R⁶ je případně substituovaný aryl, kde arylovou skupinou je chinol-2-yl, naftl-yl,naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl; R² je alkyl a R³ je vodík. Sloučeniny vzorce Ig se o z připravítak jak je popsáno v následujícím schématu 6, kde p je 5, 6, 7 nebo 8; R a R jsou definovány výše a R^12a je mesyl nebo tosyl:

Ef'

OEt •í / 32··· 1

Reakční schéma 6 • ·· ·# ···· ·· · t · * · • · i ♦ · 9 • « · · ··· · • · » · * ··· 99 ·· ·

OEt

kde Et znamená ethyl.

Sloučeniny vzorce W se připraví podle běžně používaných postupů nebo se mohou připravit podle postupu popsaného v Příkladu 19 níže. Sloučeniny vzorce Z jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů.

Obecně, sloučeniny vzorce Ig se připravují nejprve reakcí sloučeniny vzorce W s formamidem za vzniku sloučeniny vzorce X. Sloučenina vzorce X se poté reaguje s tosyl nebo mesyl chloridem za bazických podmínek za vzniku sloučeniny vzorce Y. Sloučenina vzorce Y se poté reaguje se solí sloučeniny vzorce Z (s výhodou sodnou solí vytvořenou reakcí sloučeniny vzorce Z s hydridem sodným) za vzniku sloučeniny vzorce AA. Sloučenina vzorce AA se hydrolyzuje za bazických podmínek za vzniku sloučeniny vzorce BB. Sloučenina vzorce BB se poté kapluje se sloučeninou vzorce J za φ ···· ·· · • · • ·· ·· ·

• · » • · · • » ··* • · ···· standardních peptidových podmínek , s výhodou s l,l'-karbonyldiimidazolem, za vzniku sloučeniny vzorce Ig.

F. Příprava sloučenin vzorce Ih, li a Ij

Sloučeniny vzorce Ih, li a Ij jsou sloučeniny vzorce Ib, Ic a Id, v tomto pořadí, jak je popsáno výše v části B, kde indolový kruh je úplně nasycený. Připravují se podle popisu

0 *í v následujícím Schématu 7, kde R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu, R je vodík a p je 5, 6, 7 nebo 8

Obecně, sloučeniny vzorce Ih, li a Ij se připravují nejprve redukcí sloučeniny vzorce Ib za podmínek katalytické hydrogenace za vzniku sloučeniny vzorce Ih. Sloučenina vzorce Ih se poté reaguje s o-benzylhydroxylaminem za standardních podmínek pro

9« «··· • ···· · ··

9· « ····*· · • · ·····* · 9 9 9 · 9 9«· « ~ · · ··· ··

35»·· * ··» »· ·· » peptidový kapling za vzniku sloučeniny vzorce li. Benzylová chránící skupina se poté odstraní ze sloučeniny vzorce li za podmínek katalytické hydrogenace za vzniku sloučeniny vzorce Ij.

G. Příprava sloučenin vzorce Ik, II, Im a In

Sloučeniny vzorce Ik jsou sloučeniny vzorce I s allylovou vazbou, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce II jsou sloučeniny vzorce I s allylovou vazbou, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Im jsou sloučeniny vzorce I s allylovou vazbou, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce In jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je hydroxyaminokarbonyl; a R² a R³jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ik, II, Im a In se připravují tak, jak je popsáno v následujícím Reakčním schématu 8, kde n je 2 nebo 3; m je 4; R², R³ a R¹¹ jsou definovány výše; R¹⁴je alkyl nebo benzyl; R^7a je vodík; a BOC je t-butoxykarbonyl.

4444

BOC

CFF)

4·

444

Reakční schéma 8

44

4 4

444 44 ····

4 4

444 4

4

CK)

CXk) ·· ···· • *

Sloučeniny vzorce F se připraví podle běžně používaných postupů nebo se mohou připravit podle postupu popsaného zde.

Obecně, sloučeniny vzorce Ik, II, Im a In se připravují nejprve reakcí sloučeniny vzorce F s diaminalkanem nebo mono-alkyl substituovaným diaminalkanem za standardních podmínek pro peptidový kapling, např. s HOBT a EDCI, v inertním rozpouštědle, např. DMF, za vzniku sloučeniny vzorce DD. Sloučenina vzorce DD se poté reaguje s trans-l,4-dichlorbut-2-enem za bazických podmínek za vzniku sloučeniny vzorce EE. Aminochránící skupina sloučeniny vzorce EE se poté odstraní za slabě kyselých podmínek, s výhodou kyselinou trifluoroctovou, za vzniku sloučeniny vzorce FF.

Sloučenina vzorce FF se poté kapluje za standardních podmínek pro peptidový kapling, např. s HOBT a EDCI, za vzniku sloučeniny vzorce Ik. Chránící skupina sloučeniny • ···· · ·· 99 9999

9 99 9 · 9 9 9

9 9 · 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 999 9 _oo · 9 999 · ·

3ó··· 9 999 99 99 9 vzorce Ik se poté odstraní za slabě kyselých podmínek, s výhodou kyselinou trifluoroctovou, za vzniku sloučeniny vzorce II. Sloučenina vzorce II se poté reaguje s o-benzylhydroxylaminem za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny vzorce Im. Chránící skupina sloučeniny vzorce Im se poté odstraní za podmínek katalytické hydrogenace za vzniku sloučeniny vzorce In.

H. Příprava sloučenin vzorce Io a Ip

Sloučeniny vzorce Io jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylkyl a R¹⁰ je aralkoxykarbonyl; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ip jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylkyl a R¹⁰ je karboxy; a R² o

a R jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Io a Ip se připravují tak, jak je popsáno v následujícím Reakčním

O O Q schématu 9, kde p je 5, 6, 7 nebo 8; R , R a R jsou definovány výše.

Reakční schéma 9

(JJ) b₂n c-o-c(cx₃)₃ (ΙΓ) *·

<

B

O

C-O-CCCH₃)j

X

CtLj (MM) • ···· * ·· ·· ····

Cíp)

Sloučeniny vzorce JJ se připraví podle běžně používaných postupů nebo se mohou připravit podle postupu popsaného v Příkladu 36 níže.

Obecně, sloučeniny vzorce Io a Ip se připraví nejprve reakcí sloučeniny vzorce JJ s triflyl anhýdridem, dále reakcí se sloučeninou vzorce KK za bazických podmínek za vzniku sloučeniny vzorce LL. Sloučenina vzorce LL se poté hydrolyzuje za slabě kyselých podmínek, s výhodou kyselinou trifluoroctovou, za vzniku sloučeniny vzorce MM. Sloučenina vzorce MM se poté kapluje se sloučeninou vzorce J za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny Io. Sloučenina vzorce Io se poté odehrání za vzniku sloučeniny vzorce Ip.

I. Příprava sloučenin vzorce Iq a Ir

Sloučeniny vzorce Iq jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH₂NHR, kde Rje vodík a R⁸ je karboxy, benzyloxykarbonyl nebo alkoxykarbonyl a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Ir jsou sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH₂NHR, R⁸ je karboxy a R, R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

40.:.

·· ·· ···· • · · · · • · · · · • · · ··· · • · · · • »· ·♦ ·

Sloučeniny vzorce Iq a Ir se připravují podle Reakčního schématu 10 níže:

Reakční schéma 10

CPP)

kde Pht je ftalimido.

Sloučeniny vzorce J se připravují pomocí postupů popsaných výše. Sloučeniny vzorce NN se připravují pomocí známých postupů popsaných např. v EP 575 844.

Obecně, sloučeniny vzorce PP a Iq se připravují nejprve kaplingem sloučeniny vzorce J se sloučeninou vzorce NN za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku

• 4

4 ·

sloučeniny PP. Ftalimido skupina sloučeniny vzorce PP se převede pomocí standardních metod na aminoskupinu, např. reakcí s hydrazinem, za vzniku sloučeniny vzorce Iq.

Sloučenina vzorce Iq se poté převede na sloučeninu vzorce Ir pomocí známých reakcí. Např. reakcí sloučeniny vzorce Iq s alkylsulfonyl halogenidem v přítomnosti báze, dále hydrolýzou produktu kyselinou trifluoroctovou, za vzniku sloučeniny vzorce Ir, kde R je alkylsulfonyl. Podobně, reakce Iq s alkyl, aryl nebo arylalkyl chloroformátem poskytne odpovídající amid, reakcí vhodně substituovaného isokyanátu vznikne odpovídající močovina, atd.

J. Příprava sloučenin vzorce I, kde R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je

N-hydroxyformylamino

Sloučeniny vzorce I, kde R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je N-hydroxyformylamino se připraví reakcí sloučeniny vzorce J za podmínek peptidového kaplingu popsaných výše se sloučeninou vzorce:

OH

O

Příprava těchto sloučenin je popsána v U. S. Patent Application Seriál No. 08/343,158, který je zde uveden jako odkaz.

Produkt tohoto kaplingu se poté debenzyluje podobně, jak je popsáno v Reakčním schématu Π výše, za vzniku sloučeniny vzorce I, kde R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je N-hydroxyformylamino.

Příprava sloučenin vzorce Is, It a Iu

Sloučeniny vzorce Is jsou sloučeniny vzorce I, kde n a m jsou 2; A je kyslík; R je -CH2-R⁴, kde R⁴je t-butoxykarbonyl; a ER² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

···· «· ·· ····

42.

··*·»· * • · · · · · • · · · ··« · • · · · · ··· ·· ·· ·

Sloučeniny vzorce It jsou sloučeniny vzorce I, kde n a m jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴ , kde R⁴ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Iu jsou sloučeniny vzorce I, kde n a m jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴ , kde R⁴ je alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Is, It nebo Iu se připravují podle popisu v Reakčním schématu 11

4444

43.

• · • · ···

4444

Reakční schéma 11 □

O R² t-8uO'^-^^sy-^OHO (Ka)

t-BuO

(IS)

k-oj

Sloučeniny vzorce Ka se připraví podle popisu uvedeného zde. Příprava sloučeniny vzorce ff je popsána níže.

•φ φφφφ

Obecně, sloučeniny vzorce Is se připravují nejprve kaplingem sloučeniny vzorce Ka se sloučeninou vzorce ff za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny Is.

Reakcí sloučeniny vzorce Is za slabě kyselých podmínek se získásloučenina vzorce It.

Sloučenina vzorce Is se také může pomocí známých postupů převést na sloučeninu vzorce Iu, kde R¹ je -CH2-R⁴ , kde R⁴je alkoxykarbonyl jiný než t-butoxykarbonyl.

Dále se sloučeniny vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴ , kde R⁴je hydroxyaminokarbonyl; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu, mohou připravit následujícím postupem, který je popsán výše u převedení sloučeniny vzorce Ic na sloučeninu vzorce Id.

L. Příprava sloučeniny vzorce ff

Příprava sloučeniny vzorce ff o

o

NR:

je popsána v následujícím Reakčním schématu 12.

·· ····

Reakční schéma 12

O

BocNH^^X

OH

(kk)

O

BocNH_X : N >

\ ^H o '—\

L/^NH OH

R

Sloučeniny vzorce kk a 11 jsou komerčně dostupné, např. Sigma nebo Aldrich nebo se mohou připravit pomocí známých postupů.

9999

Λ£ ·· 999 9*

4θ ··· · ··· 99 99 9

Sloučeniny vzorce 11 zobrazené v Reakčním schématu 12 se používají pro přípravu sloučenin vzorce I, kde m a n jsou 2. Je zřejmé, že postup použitý v Reakčním schématu se může provádět s všemi sloučeninami, které representuje vzores

H2N(CH2)_nO(CH2)_mOH, ve kterém m a n jsou definovány v Podstatě vynálezu. Tyto sloučeniny jsou buď komerčně dostupné nebo mohou být připraveny pomocí známých postupů.

Obecně, sloučeniny vzorce ff se připravují nejprve kaplingem sloučeniny vzorce kk se sloučeninou vzorce 11 za standardních podmínek pro peptidový kapling, např. s DCC za přítomnosti HOBT v DMF, za vzniku sloučeniny vzorce mm. Tato sloučenina vzorce mm se poté reaguje s tosyl chloridem za vzniku sloučeniny vzorce nn. Místo tosyl chloridu se může v této reakci také použít mesyl chlorid. Cyklizace tosylátu probíhá s přebytkem NaH v inertním rozpouštědle, s výhodou v THF, při vysokém zředění při teplotě místnosti za vzniku sloučeniny vzorce oo. Podobně, cyklizace tosylátu probíhá s koncentrovaným hydroxidem sodným v inertním rozpouštědle, s výhodou CH2CI2, v přítomnosti katalyzátoru fázového přenosu, s výhodou tetra (n-butyl)amonium hydrogensulfátu, za vzniku sloučeniny vzorce 00. Chránící skupina BOC sloučeniny vzorce 00 se odstraní za slabě kyselých podmínek, s výhodou za přítomnosti kyseliny trifluoroctové, za vzniku sloučeniny vzorce ff.

M. Příprava sloučeniny vzorce Iv

Sloučeniny vzorce Iv jsou sloučeniny vzorce I, kde n a m jsou 2; A je kyslík; R je -CH2-R⁴ , kde R⁴je karboxy neboalkoxykarbonyl; a R² je aralkyl, kde alkylenový řetězec je -(CH2)3-; a R³ je definováno v Podstatě vynálezu.

Sloučeniny vzorce Iv se připravují podle popisu Reakčního schématu 13.

····

Sloučenina vzorce ff se připraví podle popisu uvedeného zde. Sloučenina vzorce gg se připraví podle Reakčního schématu 4A záměnou sloučeniny HH za odpovídající allylovou sloučeninu, kde skupině R² ve vzorci HH je zaměněna za pro-2-enyl.

e · φφ φφφφ • · · · φ φ φ φφφ • φ φ φφφ φ φ φ φ φ • φ φ · φ φ

Obecně, sloučeniny vzorce Iv se připraví nejprve kaplingem sloučeniny vzorce ff se sloučeninou vzorce gg za standardních podmínek pro peptidový kapling za vzniku sloučeniny vzorce hh.

Přidání arylu R² skupiny k allylovému řetězci pomocí arylace sloučeniny vzorce hh se provádí za přítomnosti báze a palladiového katalyzátoru přidáním aryl halogenidu, s výhodou bromidu nebo jodidu a zahříváním reakční směsi 2 až 4 hodiny, s výhodou 4 hodiny, na 100 °C za vzniku sloučeniny vzorce ii. Katalytickou hydrogenací (Pd/C) allylové sloučeniny vzorce ii vzniká odpovídající sloučenina vzorce Iv'.

Sloučeniny vzorce Iv' se převedou na odpovídající sloučeniny, kde R¹ je -CH2-R⁴ , kde R⁴ je karboxy nebo jiná alkoxykarbonylová skupina a následuje postup popsaný pro přípravu sloučeniny It a Iu.

Podobně, arylace se může provádět nejprve na sloučeninách vzorce gg a dále postupem popsaným výše za vzniku sloučeniny Ka, která se poté kapluje se sloučeniou vzorce ff.

N. Příprava sloučenin vzorce Iw

A

Sloučeniny vzorce Iw jsou sloučeniny vzorce I, kde R je aralkyl, kde aryl je substituovaný alkoxy skupinou (aryl-O-R); a n, m, A, R¹ a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Tyto sloučeniny se připravují modifikací substituoentů na arylovém kruhu jako O-alkylací fenolové skupiny (t. j. R je vodík).

Soli sloučenin vzorce I

Všechny sloučeniny vzorce I, které existují jako volné báze se mohou převést na jejich farmaceuticky vhodné soli reakcí s vhodnou anorganickou nebo organickou kyselinou. Soli sloučenin vzorce I mohou být také převedeny na volné báze nebo na jiné soli.

V přehledu se sloučeniny vzorce I připravují:

1. reakcí sloučeniny vzorce K, kde R^7a je vodík nebo alkoxykarbonyl; R¹⁴ je alkyl nebo benzyl a R² je definováno v Podstatě vynálezu; se sloučeninou vzorce J, kde p je 5, 6, 7 nebo 8 a R³ je definováno v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n ···· ·· ·*«·

je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

2. reakcí sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je karboxy; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

3. reakcí sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R je karboxy; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; s O-chrráněným hydroxylaminem jako O-benzylhydroxylaminem za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R² a R³jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

4. reakci sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je hydroxyaminokarbonyl; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

5. reakcí sloučeniny vzorce M, kde R² je definováno v Podstatě vynálezu, se sloučeninou vzorce J, kde p je 5, 6, 7 nebo 8 a R³ je vodík, za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je acetylthio; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

6. reakcí sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je acetylthio; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je merkapto; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

7. reakcí sloučeniny vzorce BB, kde R² je definováno v Podstatě vynálezu; a R⁶ je případně substituovaný aryl, kde arylovou skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl; se sloučeninou vzorce J, kde p je 5, 6, 7 nebo 8 a R³ je definováno v Podstatě vynálezu, za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je • · · · ·· ·φφ φ

Φ Φ Φ · · · · φ · φ

Φ Φ ΦΦΦΦΦΦ

Ο

II

OH kde R⁶ je případně substituovaný aryl, kde arylovou skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

8. reakcí sloučeniny vzorce Im, kde n je 2 nebo 3;mje4;Aje -NR¹ \ kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 2 nebo 3;mje4;Aje -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je hydroxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

9. reakcí sloučeniny vzorce MM, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylkyl a R² je definováno v Podstatě vynálezu; se sloučeninou vzorce J, kde p je 5, 6, 7 nebo 8 a R³ je definováno v Podstatě vynálezu, za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-, R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo aralkyl a R¹⁰ je aralkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

10. reakcí sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo aralkyl a R¹⁰ je aralkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo aralkyl a R¹⁰ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

11. reakcí sloučeniny vzorce PP, kde p je 5, 6, 7 nebo 8; R¹⁴ je hydroxy, benzyl nebo alkyl; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde n je 1, 2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH2NHR, kde R je vodík a R⁸ je karboxy, benzyloxykarbonyl nebo alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

12. reakcí sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je

-CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH2NHR, kde Rje vodík a R⁸ je karboxy, benzyloxykarbonyl nebo alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; za vzniku • · · » • · • « · · · ·

sloučeniny vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-; R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH₂NHR, kde Rje vodík a R⁸ je karboxy; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

13. reakcí sloučeniny vzorce Ka, kde R² je definováno v Podstatě vynálezu se sloučeninou vzorce ff, R³ je definováno v Podstatě vynálezu; za vzniku sloučeniny vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH₂-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; a R² a

a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

14. hydrogenací sloučeniny vzorce ii, kde R³ je definováno v Podstatě vynálezu za vzniku sloučeniny vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; R² je arylkyl (aryl-(CH2)₃-); a R³ je definováno v Podstatě vynálezu; nebo

15. převedením sloučeniny vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; na sloučeninu vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy; a R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

16. převedením sloučeniny vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxy nebo t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; na sloučeninu vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl jiný než t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v Podstatě vynálezu; nebo

17. převedením sloučeniny vzorce I, kde R je hydroxyarylalkyl; a m, n, R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu na sloučeninu vzorce I, kde R² je hydroxyarylalkyl; a m, n, R a R jsou definovány v Podstatě vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Následující specifické příklady poskytují přehled o provedení vynálezu. Předkládaný vynález však není omezen pouze na tyto příklady.

*· ···· • · « · ·· 4 · · · 4

Příklad 1

Sloučenina vzorce E

A. 6-Kyano-l-hexanol (7,1 g, 55,8 mmol) byl rozpuštěn v 30 ml anhydridu kyseliny octové v atmosféře argonu. K této látce byl přikapán pyridin 5,3 ml (65,4 mmol) a směs byla nechána míchat 2 hodiny. Obsah baňky byl poté nali do kádinky obsahující 50 ml ledové vody a směs byla míchána 15 min. Poté byla převedena do 250 ml dělící nálevky a byl přidán ether (100 ml). Po vytřepání byla izolována etherová vrstva a vodná vrstva byla ještě 2x promyta etherem (2 x 100 ml). Spojené etherové vrstvy byly promyty solankou, sušeny MgSOj a filtrovány. Po odpaření (rotační odparka a vakuová pumpa) byl získán 6-kyano-l-acetoxyhexan (sloučenina vzorce C), který byl okamžitě použit v dalším kroku.

B. 6-Kyano-l-acetoxy-hexan (55,8 mmol) byl rozpuštěn ve 100 ml anhydridu kyseliny octové v Parrově reakční baňce (500 ml). Ke směsi byla přidána kyselina octová (0,5 ml) a oxid platičitý (100 mg). Baňka byla umístěna v Parrově hydrogenační aparatuře a naplněna vodíkem (280,32 kPa). Materiál byl míchán 12 hod, filtrován přes křemelinu (odstranění katalyzátoru), přidán čerstvý oxid platičitý ¢100 mg), napněn vodíkem (280,32 kPa) a míchán dalších 24 hod. Materiál byl filtrován přes křemelinu a všechny těkavé složky byly odstraněny za sníženého tlaku (rotační odparka). Získaný 1acetoxy-7-acetamidoheptan byl dostatečně čistý pro použití v dalším kroku (získáno 11,8 g).

C. l-Acetoxy-7-acetamidoheptan (11,8 g, 54,3 mmol) byl rozpuštěn v 20 ml methanolu v 200 ml kulaté baňce. Bylo přidáno 50 ml 40% vodné kyseliny chlorovodíkové a směs byla zahřívána k refluxu 60 hod. Těkavé složky byly odstraněny za sníženého tlaku. Požadovaný 7-amino-l-heptanol byl získán jako krystalický hydrochlorid 1.1. 74-81 °C, MS: 131 (MH⁺).

Příklad 2

Sloučenina vzorce G

A. N-Methylmorfolin (2,2 ml, 19,7 mmol) byl při teplotě místnosti přikapán k 7amino-l-heptanol hydrochloridu (3,3 g, 19,7 mmol), v 50 ml suchého DMF za míchání • 4 4

pod argonem. Po 5 min míchání bylo přidáno: N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan, (5 g, 16,45 mmol), 1-hydroxybenzotriazol, (2,52 g, 16,45 mmol) a EDCI hydrochlorid (4,73 g, 24,7 mmol). Směs byla 2 hodiny míchána a poté byl DMF odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl přidán do 2,5 % hmotn. HC1 (100 ml) a ethylacetátu (3 x 100 ml) a převeden do dělící nálevky. Organická vrstva byla izolována a promyta postupně

2,5 % hmotn. HC1 (100 ml) a solankou (100 ml). Ethylacetátová vrstva byla sušena MgSO4, filtrována a odpařena. Byl získán N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-(7hydroxyheptyl)amid;

IR (čisté): 3300, 2921, 1685, 1645, 1490, 1356, 1157 cm’¹;

^lH NMR (80 MHz, CDC1₃): δ 0,98-1,62 (m, 10H, -(CH₂)₅-), 1,45 (s, 9H, t-butyl), 2,963,32 (m, 4H,CH-CH₂, HN-CH₂), 3,68 (t, 2H, >5,6 Hz, -CH₂OH), 4,22-4,55 (m, 1H, CH), 5,12-5,32 (široký d, 1H, NH-CH), 5,65-5,9 (široký t, 1H, NH-CH₂), 6,98-7,92 (m, 5H, ArH), 8,63 (široký s, indol NH).

B. Roztok N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-(7-hydroxyheptyl)amidu (8,2 g) v 150 ml bezvodého pyridinu byl ochlazen na 0 °C (ledová lázeň). K roztoku byl přidán paratoluensulfonyl chlorid (4,7 g) a ochlazená směs byla míchána 7 hod. Směs byla rozložena přidáním 50 ml vody a včechny těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Produkt, N-t-butoxykarbonyl-Ltryptofan-(N'-(7-(4'-methylfen-1 yl)sulfonylaxy)heptyl)amid byl izolován pomocí kolonové chromatografie na silikagelu za použití směsi 10 až 40 % obj. ethylacetat/hexan jako eluentu. Produkt byl krystalizován stáním, MS: 572 (MH⁺).

C. Podobně, k roztoku N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofanu (5,0 g, 16,45 mmol), 6amino-l-hexanolu (2,31 g, 19,74 mmol) a l-hydroxybenzotriazolu.H₂O (2,52 g, 16,45 mmol) v suchém DMF (50 ml) při teplotě místnosti pod argonem byl přidán EDCI (4,73 g, 24,68 mmol). Po míchání přes noc byl DMF odstraněn za vysokého vakua. Zbytek byl rozdělen mezi ethylacetat (150 ml) a IN HC1 (75 ml). Organická vrstva byla promyta IN HC1 (75 ml), nasyceným roztokem uhličitanu sodného (2 x 75 ml), a nakonec solankou (50 ml). Organická vrstva byla sušena (MgSO^ a odpařena dosucha za získání 6,45 g (97 % hmotn.) N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-N'-(6• · ·9 9 ·

9·«9

9 * 9 9

9 9 • 99 9

9 • 9 9 hydroxyhexyl)amidu jako bílé pěny. MS: 404,3 (M+H)⁺. Čistota produktu byla ověřena analytickým HPLC.

D. Dále bylo k N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-N'-(6-hydroxyhexyl)amidu (5,5 g, 13,64 mmol) v 150 ml suchého pyridinu při 0 °C pod argonem přidáno 3,9 g (20,46 mmol) p-toluensulfonyl chloridu. Homogenní roztok byl při této teplotě míchán přes noc. Reakce byla rozložena 25 ml vody a přebytek pyridinu byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu (120 ml) a promyt IN HC1 (2 x 50 ml) , nasyceným roztoke NaHCCb (50 ml), a solankou (50 ml) .Organická vrstva byla sušena (MgSO₄) a odpařena za získání žlutého oleje, N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-(N'-(6(4'-methylfen-l-yl)sulfonyloxy)hexyl)amidu (5,77 g, 76 % hmotn.), MS: 558,3 (M+H)⁺.

E. K 5-hydroxytryptofanu (3,5 g, dostupný od Sigma) a triethylaminu (5,6 ml) ve vodě (25 ml) a tetrahydrofuranu (50 ml) byl přidán BOC-ON (2-(t-butoxykarbonyloxyimino)-2-fenylacetonitril). Po 2,5 hod míchání byl THF odstraněn, byl přidán roztok 10% NA2CO3 (20 ml) a směs byla extrahována etherem (50 ml). Vodná vrstva byla extrahována ještě 2 x etherem (20 ml) a poté okyselena za chlazení 10% HC1 v dvoufázovém systému obsahujícím ethylacetat (100 ml). Ethylacetatová fáze byla oddělena a promyta vodou (30 ml), solankou, sušena bezvodým MgSO₄ a odpařena za vzniku syrupu. Syrup byl reagován s 6-amino-l-hexanolem podobným způsobem, jak bylo popsáno v Příkladu 1C za vzniku N-t-butoxykarbonyl-L-(5-hydroxy)tryptofan-N'(6-hydroxyhexyl)amidu. Polovina tohoto produktu byla převedena do 40 ml DMF a reagována s K2CO3 (5 g) a methyljodidem (1,2 g) při teplotě místnosti přes noc. Směs byla potéextrahována mezi vodu (50 ml) a ethylacetat (80 ml), organická vrstva byla dvakrát promyta vodou (2 x 20 ml), solankou, sušena nad bezvodým MgSO₄ a odpařena za vzniku oleje. Produkt, N-t-butoxykarbonyl-L-(5-methoxy)tryptofan-N'-(6hydroxyhexyl)amid, byl čištěn chromatografií na silikagelu; ’HNMR: δ (CDCI3) 0,9-1,6 (m, CH₂, 8H); 1,45 (s, 9H); 2,7-3,3 (m, 5H); 3,6 (t, 2H); 3,85 (s, 3H); 4,35 (m, 1H); 5,3 (široký d, 1H); 5,85 (široký t, 1H); 6,75-8,3 (m, 4H); 8,73 (široký s, 1H).

F. Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

N-t-butoxykarbonyl-L-(5-ethoxy)tryptofan-N'-(6-hydroxyhexyl)amid;

N-t-butoxykarbonyl-L-(5-propoxy)tryptofan-N'-(6-hydroxyhexyl)amid;

N-t-butoxykarbonyl-L-(5-ethyl)tryptofan-N'-(6-hydroxyhexyl)amid; a ·« ·· * · ♦

N-t-butoxykarbonyl-L-(4-methyl)tryptofan-N'-(6-hydroxyhexyl)amid.

Příklad 3

Sloučeniny vzorce H

A. N-t-Butoxykarbonyl-L-tryptofan-(N'-(4'-methylfen-l-yl)sulfonyloxyheptyl)amid (6,78 g) byl po částech přidán k roztoku NaH (60% v oleji, 1,9 g) v 1,1 litru bezvodého tetrahydrofuranu a byl nechán míchat přes noc. Reakční směs byla odtařena a převedena do vody (150 ml) a CH2CI2 (150 ml). Vodná vrstva byla mírně okyselena 2,5% HCI (pH 3 až 4) a organická vrstva byla izolována (3 x 150 ml) a postupně promyta

2,5 % obj. HCI, 5 % obj. NaHCC/ (150 ml) a solankou (150 ml). Organická vrstva byla sušena MgSO4, filtrována a odpařena za vzniku žlutozelené polotuhé látky. Po čištění kolonovou chromatografií na silikagelu bylo získáno (11S)-1 l-N'-(t-butoxykarbonyl)amino-10-oxo-l,9-diaza-tricyklo(l 1,6,1,0^14,19)eikosa13(20),14(19),15,17-tetraenu; t.t. 208 až 209 °C, MS: 400 (M+H)⁺·

B. Podobně byly k N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-(N'-(6-(4'methylfonl-yl)sulfonyloxy)hexyl)amidu (5 g, 8,97 mmol) v 1 litru suchého THF při 0 °C pod argonem přidány 4 ekvivalenty 60 % hmotn. NaH (1,44 g, 36 mml) po částech v průběhu 10 min. Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Vzniklá žlutá směs byla odpařena na 200 ml a byl přidán 1 1 destilované vody. Žlutá sraženina byla odfiltrována a sušena nad P2O5 při vysokém vakuu přes noc. Suchý surový produkt (8 g) byl čištěn kolonovou chromatografií na silikagelu 60 za eluce 30 % obj. ethylacetát v CH2CI2 za vzniku 1,2 g (35 % hmotn.) (10S)-10-N'-(t-butoxykarbonyl)amino-9-oxo1,8-diaza-tricyclo (10,6. 1. 0^13,18)nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraenu jako bílého prášku, MS: 386 (M+H)⁺, t.t. 222 až 223 C.

C. Podobně bylo k roztoku N-t-butoxykarbonyl-L-tryptofan-(N'-(6-(4'-methylfenl-yl)sulfonyloxy)hexyl)amidu (1,21 g, 2,17 mmol) v 45 ml methylenchloridu přidáno 15 ml 40 % obj. vodného KOH a 0,3 ekvivalentu benzyl triethyl ammonium chloridu (0,65 ml, 148 mg). Dvoufázová směs byla míchána přes noc. Organická vrstva byla oddělena a vodná vrstva byla extrahována 25 ml dichlormethanu. Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (25 ml), sušeny MgSO4 a odpařeny dosucha. Zbytek byl míchán ve směsi 10 % obj. etheru v petroletheru při 0 °C 15 min a filtrován za vzniku • 4

4» 4444

4 ·

4 4

44* 4 • 4

4* ♦

792 mg (93 % hmoto.) (10S)-10-N'-(t-butoxykarbonyl)amino-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka 12(19),13(18),14,16-tetraenu jako bílého prášku.

Příklad 4

Sloučenina vzorce J

A. (11S)-11 -N'-(t-butoxykarbonyl)amino-( 10-oxo-1,9diazatricyklo[l 1,6,1,0^14,19)eikosa-13(20),14(19),15,17-tetraenu (850 mg) bylo rozpuštěno v 5 ml 10 % obj. kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu a mícháno 1 hod. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do dichlormethanu (40 ml) a IN NaOH (40 ml) a přenesen do dělící nálevky. Organická vrstva byla izolována a promyta solankou, sušena MgSO4, filtrována a odpařena za vzniku 654 mgof(11S)-1 l-amino-(l0-oxo-l,9-diazatricyklo[ll,6,l,0¹⁴’¹⁹)eikosa 13(20),14(19),15,17-tetraenu.

B. Podobně, (10S)-10-N'-(t-butoxykarbonyl)amino-(9-oxo1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen (0,5 mmol,

193 mg) byl míchán v 20% TFA/CH2CI2 (10 ml) při teplotě místnosti 2 hodiny. Přebytek TFA byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu (30 ml) a promyt IN HC1 (25 ml), solankou (10 ml) a sušen MgSCL. Odpařením do sucha bylo získáno 140 mg (kvant.) (10S)-10-amino-(9-oxo-l,8diazatricyklo[10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraenu jako bílé pěny, t.t. 157 až 160 °C, MS: 286,2 (M+H)⁺.

Příklad 5

Sloučenina vzorce Ia

A. K míchanému roztoku (11S)-11 -amino-( 10-oxol,9-diazatricyklo(l 1,6,1,0^14,19)eikosa-13(20), 14(19), 15,17-tetraenu (654 mg) a racemické kyselině 4-methyl-2-t-butoxykarbonylmethylpentanové (800 mg) v 30 ml bezvodého DMF pod argonem byl přidán 1-hydroxybenzotriazol (360 mg), a EDCI (940 mg). Směs byla míchána přes noc a poté byl DMF odstraněn za sníženáho tlaku. Zbytek byl převeden do směsi CH2CI2 (100 ml) a 1,5 % obj. studené HC1 (100 ml) a přenesen do dělící nálevky. Organická vrstva byla izolována a postupně promyta ♦ ·· 9

1,5 % obj. studené HC1 (100 ml), 5 % hmotn. NaHCCh a solankou (100 ml). CH₂C1₂fáze byla sušena MgSO₄, filtrována a odpařena za vzniku polokrystalického produktu, t-butyl esteru kyseliny (1 lS)-5-methyl-3-(10-oxo-í ,9-diazatricyklo[l l,6,l-0¹⁴’¹⁹)eikosa13 (20), 14( 19), 15,17-tetraen-11 -ylkarbamoyl)hexanové. Jednotlivé stereoizomery této sloučeniny byly odděleny pomocí chromatografie na silikagelu za eluce směsí ethylacetát/hexan. Méně polární stereoizomer měl t.t. 154-157 °C, [oc]²⁴d=-43,9 °, c=23,8 mg/21 CHCI3, více polární stereoizomer měl t.t. 168-171 °C, [oc]²⁴d=-19,1 °, c=ll,80 mg/21 CHC1₃

B. Podobně byl k roztoku kyseliny (2R)-4-methyl2-(t-butoxykarbonylmethyl)pentanové připravené výše (2,39 g, 10,4 mmol), HOBT.H₂O (2,5 g, 1 eq.), N-methylmorfolinu (2,3 ml, 2 eq.), a (10S)-10-amino-(9-oxol,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’’⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16tetraenu(2,96 g, 1 eq.) v suchém DMF (200 ml) pod argonem přidán EDCI (3,96 g, 2,0 eq.). Vzniklá směs byla míchána přes noc, poté byl DMF odstraněn při 35 1C za vysokého vakua. Zbytek byl rozdělen mezi dichlormethan (150 ml) / voda75 ml), poté byla organická vrstva promyta 0,5N HC1 (2 x 75 ml), nasyceným roztokem NaHCCb (2 x 75 ml), a solankou (1 x 75 ml). Po sušení dichlormethanové vrstvy nad Na₂SO₄ byla filtrována a odpařena dosucha. Čištění pomocí kolonové chromatografie (petrolether 30 % obj. ethylacetát/petrolether) poskytla t-butyl ester kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové (3,24 g, 62,7%).

C. Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny vzorce Ia:

t-butyl ester kyseliny(3R,10S)-4-fenyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanové, MS: 532 (M+H)⁺;

t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklohexyl-3-(9-axo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)butanové, MS: 538 (M+H)⁺;

999 9

999 t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-6-fenyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové

MS: 560 (M+H)⁺; a t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-3 (9-oxo-l,8-diaza-tricyklo(l0,6.1. 0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové: 484 (M+H)⁺;

benzyl ester kyseliny (3R,10S)-2-methoxykarbonyl-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³’¹⁸)nonadeka-12( 19), 13(18), 14,16 tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové, MS: 590 (M+H)⁺;

t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)butanové;

methyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6.

1,0¹³’¹⁸)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanové; MS:

496 (M+H)⁺;

t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopropyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)butano vé;

ethyl ester kyseliny (3R, 9S)-4-cyklobutyl-3-(6-oxo-l, 7-diazatricyklo(9,6,l,0^12,17)oktadeka-11(18),12(17),13,15 -tetraen-9-ylkarbamoyl)butanové;

ethyl ester kyseliny (3R, 9S)-6-pyridin-4-yl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6.1,0^12,17) oktadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanové;

ethyl ester kyseliny (3R,9S)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12(17), 13,15-tetraen-9-yl-karbamoyl)pentanové;

t-butyl ester kyseliny(3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0*^3,18)nonadeka-12( 19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl-karbamoyl)hhexanové;

ethyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6,l,0¹³’¹⁸) nonadeka-12(19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-karbamoyl)hexanové;

• •4

4

4 4

4*4 ·»« 4

4

4 4

44

44· «

4* « 4 4

4 4 • 44 44

4 isopropyl ester kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-karbamoyl)hexanové;

ethyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(15-fluor-9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanové;

ethyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(15-fluor-9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l O^13,18) nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen- 10-ylkarbamoyl)butanové;

t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6,l,0¹³’¹⁸) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-karbamoyl)hexanové; a isopropyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(15-fluor-9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19) 13 (18),14, 16-tetraen 10-ylkarbamoyl)butanové acid.

Podobně byla připravena následující sloučenina:

(3RS, 10S)-N-benzyloxy-N-formyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13 (18), 14, 16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexylamin.

D. Podobně se připraví z t-butylesterů za podmínek popsaných v Příkladu 56 následuj íxí methyl estery:

methyl ester kyseliny (3R,9S)-4-cyklobutyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷) octadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)butanové methyl ester kyseliny (3R,95)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷)oktadeka-ll(18) 12(17),13,15-tetraen-9-yl-karbamoyl)pentanové; a methyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,7-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yl-karbamoyl)hexanové.

E. Podobně, ke kyselině (2R)-4-methyl-2-(t-butoxykarbonylmethyl)pentanové (lg, 4,34 mmol) v suchém THF (100 ml) bylo pod argonem při -78 °C přikapáno NaN(TMS)2 (1,0 M v THF, 10,9 ml, 2,5 ekv.) a směs byla míchána přes noc při -78 °C ař teplotě místnosti. Další den byla reakční směs rozložena vodou (100 ml). Po extrakci etherem (3 x 100 ml) byla vodná vrstva spojena s ethylacetátem a za míchání byla

9999

9 9 9 9 9

99 999 9

9 9 9 9

999 99 99 9 přidána 4 N HC1 na pH=2. Do nasycení byl přidán chlorid sodný a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny nad Na2SC>4 , filtrovány a odpařeny za vzniku kyseliny (2R)-4-methyl-2-((l-methyl-l-tbutoxykarbonyl)methyl)pentanové jako tmavě hnědého oleje (1 g). K surovému produktu (500 mg) a (10S)-10-amino-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka12(19),13(18),14,16-tetraenu (399 mg, 0,7 ekv.) v suchém DMF pod argonem při 0 °C byl přidán HOBT-H2O (1,1 eq, 234 mg), a EDCI (663 mg, 2,5 eq). Vzniklá směs byla míchána přes noc při 0 °C. Většina DMF byla odstraněna vakuovou destilací při 65 °C. Zbytek byl extrahován dichlormethanem (150 ml). Po promytí 0,5 nHCl (2x75 ml), nasyceným roztokem NaHCCb (2x75 ml) a solankou (1x75 ml), organická vrstva byla sušena nad Na2SO4, filtrována a odpařena dosucha. Surová látka byla sušena chromatografií na silikagelu za eluce 30 % obj. ethylacetátu v petroletheru za získání směsi tří sloučenin, dvou jednotlivých stereoizomerů t-butyl esteru kyseliny (3R,10S)-2 methyl-5-methyl-3- (9-oxo-l,8-diaza-tricyklo-(10,6,l,0^l3’¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové a t-butyl esteru kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3(9-oxo-l,8-diaza-tricyklo-(10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové. Dalším čištěním byly tři sloučeniny odděleny; t-butyl ester kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19),13 (18),14, 16-tetraen-10-ylkarbamoyl)haxanové (13 mg) jako bílá pevná látka;

1:1 směs stereoizomerů (5 mg) jako bílá pevná látka; méně polární stereoizomer t-butyl esteru kyseliny (3R, 10S)-2-methyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexanové (15 mg); 300 MHz NMR v CDCI3 (méně polární diastereomer): δ (-0,2)-(-0,05) (m, 1H); 0,5-0,7 (m, 1H); 0,9 (dd, J=4 Hz, >6,7 Hz, 6H); 1,15 (d, >8,4 Hz, 3H); 1,18-1,4 (m, 3H); 1,41 (s, 9H); 1,45-1,73 (m, 4H); 1,75-1,8 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 3H); 2,89 (dd, >10,9 Hz, J-15 Hz, 1H); 3,34-3,5 (m, 2H); 3,9S-4,1 (m, 1H); 4,25-4,4 (m, 1H); 4,724,82 (m, 1H); 5,22-5,3 (m, 1H); 6,52 (d,J=7,5 Hz, 1H); 6,91 (s,lH); 7,13 (dd, >6,7 Hz, >8,4 Hz, 1H); 7,22 (dd, >5 Hz, >7,1 Hz, 1H); 7,34 (d,>8,4 Hz, 1H); 7,84 (d, >8,4 Hz, 1H).

• 9· 9

9

99 999 • 9 9 9 9 * 9

9 9 9 9 9

99 9999

9 9 9 9

999 99 *9 9

Příklad 6

Sloučenina vzorce lb

A. Méně polární diastereomer t-butyl esteru kyseliny (llS)-5-methyl-3-(10-oxo-l,9diazatricyklo[l 1,6,1,0^14,19)eikosa 13(20),14 (19),15,17-tetraen1 l-ylkarbamoyl)hexanové (300 mg) byl uzavřen s 5 ml roztoku 10 % hmotn. trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu a nechán míchat. Po 2,5 hod byla reakce dle TLC dokončena. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do dichlormethanu (40 ml) a a přenesen do dělící nálevky a byl postupně promyt 0,5 % obj. HC1 a solankou (40 ml). Organická vrstva byla sušena MgSO₄, filtrována a odpařena za získání méně polárního stereoizomeru kyseliny (1 lS)-5-methyl-3-(10-oxo1,9-diazatricyklo( 11,6,1,0¹⁴’¹⁹)eikosa 13(20), 14( 19), 15,17-tetraen-11 ylkarbamoyl)hexanové.

B. Podobným způsobem byl hydrolyzován polárnější stereoizomer t-butyl esteru kyseliny( 11 S)-5-methyl-3-(l 0-oxo-1,9-diazatricyklo(l 1,6,1,0^14,19)eikosa13(20),14(19),15,17 tetraen-1 l-ylkarbamoyl)hexanové za vzniku polárnějšího stereoizomeru kyseliny (1 lS)-5-methyl-3-(10-oxo-l,9-diazatricyklo(l l,6,l,0¹⁴’¹⁹)eikosa13(20), 14( 19), 15,17-tetraen-11 -ylkarbamoyl)hexanové.

C. Podobně byl t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové (3,24 g, 6,5 mmol) převeden do 95% TFA (vodné) (30 ml) při 0 °C a míchán 20 min. Poté byla odstraněna ledová lázeň a směs byla míchána další hodinu. Po odpaření na olej byl zbytek převeden do ethyůacetátu (250 ml) a promyt vodou (7x150 ml). Organická vrstva byla sušena Na₂SO₄, filtrována a odpařena za získání jednoho stereoizomeru kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16 tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanovč jako bílého prášku, 2,83 g (98,4 % hmotn.); MS: 442 (M+H)⁺

D. Podobným způsobem, ale záměnou t-butyl esteru kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové za vhodnou sloučeninu vzorce lb bylo připraveno:

9999

9 9 9 9

99 ··· 9

9 9 9 <9 9 9 9 kyselina (3R, 10S)-4-fenyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová, MS: 474 (M-H);

kyselina (3R, 10S)-4-cyklohexyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová,MS: 482 (M+H)⁺;

kyselina(3R, 10S)-3-cyklohexyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) propanová, MS: 468 (M+H)+;

kyselina (3R, 10S)-6-fenyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 502 (M-H)‘;

kyselina (3R, 10S)-3-(9-oxo-l,8-diaza-tricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 426 (M-H)';

kyselina (3R, 10S)-2-amino-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo[ 10,6,1,0^13,18]nonadeka 12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 457 (M+H)+;

kyselina (3R, 10S)-2-hyftoxy-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18) nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 458 (M+H)⁺;

kyselina (3R, 10S)-2-aminomethyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-5-methyl-3 -(15-methoxy-9-oxo 1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³’¹⁸) nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,10S)-2-methyl-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo[10,6,l,0^13,18]nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina(3R, 10S)-2-karboxy-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo[10,6,1,0^13,18] nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo-l ,7-diazatricyklo(9,6,l ,0^l2,17)oktadeka11(18),12(1’7),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-4-cykLopentyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19),13(18),14,16-tatraen-10-ylkarbamoyl)butanová; MS: 509;

···· • · kyselina (3R, 10S)-3-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)propionová; MS: 454;

kyselina (3 R, 10 S )-3 -cyklopropyl-3 -(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová; MS: 439;

kyselina (3R, 10S)-6-(bifenyl-4-yl)-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0^13,18)-nonadeka 12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová; MS: 579; a kyselina (3R, 10S)-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-(thiofen-2-yl)pentanová, MS: 496,3 (M+H)⁺.

Podobně se připraví:

kyselina (3R, 10S)-4-cyklopropyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraon-10-ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-cyklobutyl-3-(8-oxo-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11 (18), 12( 17), 13,15 -tetraen-9-ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-(3-methoxy-4,5(RS)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo1,7-diazatricyklo(9,6,1,0 ^12,17)oktadeka-11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-(3-hydroxy-4,5(RS)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo-l,7diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18),12(17), 13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-4-(3-brom-4,5(RS)-dihydro-isoxazol-5-yl)-3-(8-oxo-l,7diazatricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷)oktadeka-l l(18),12(17),13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R,9S)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)pentanová;

kyselina (3R,9S)-5-methoxy-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)pentanová;

···♦ ·· ···· ··· · ..... ·* · kyselina (3R,9S)-6-methoxy-3-(8-oxo-l ,7-diazatricyklo[9,6,l ,0^12,17]oktadeka11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-7-fenyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12(17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)heptanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(15-fluor-9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methylhexanová;

kyselina (3R, 10S)-5-fenyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-pentanová;

kyselina (3R, 10S)-3-cyklohexyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetrasn-10-y l)-j antarová;

kyselina (3R,10S)-3-cyklopentyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyclo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-yl)-j antarová;

kyselina (3R,10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methylhex-5-enová;

kyselina (3R, 10S)-2(R)-aminomethyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methyl-hexanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(15-benzyloxy-9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka 11 (19), 12(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methyl-hexanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(15-hydroxy-9-oxa-l,8-diazatricyklo(10. 6 ,1,0 ^13>18)nondeka 11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methyl-hexanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6.1,0¹³’¹⁸)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)oktanová;

kyselina (3R, 10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10. 6.1. 0^13,18)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-7-hydroxyheptanová;

kyselina (3 R,10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6.1. 0^13,18)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-7-benzyloxyheptanová;

ΦΦ ΦΦ φφφφ φφφφ · φ φ φφφ φ φ φ φφφ φ φ φ φ φ φ ΦΦ ΦΦ φ kyselina (3R, 10S)-4- (3-thiofenyl)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-butanová;

kyselina (3R, 10S)-6-trifluormethyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tatraen-10-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R, 10S)-5-(2-thiofenyl)-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo[ 10,6.1. 0^13,18]nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-pentanová;

kyselina (3R, 10S)-7-(4-bifenyloxy)-3-(9-oxa-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,^013,18)nonadeka11 (19), 12( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-heptanová;

kyselina (3R,10S)-7-fenoxy-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,l,0^13,18)nonadeka11(19), 12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-heptanová;

kyselina (3R, 10S)-4-(3-furanyl)-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-butanová;

kyselina (3R, 10S)-6-(3 -pyridyl)-3 -(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R, 10S)-6-(4-pyridyl)-3- (9-oxo-l,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,10S)-3-(4-fenylimidazol-l-yl)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6,l. O^13,18) nonadeka-11 (19),12(18),14,16-tetraen-10-yl)-jantarová;

kyselina (3R, 10S)-4-cyklobutyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka11(19), 12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) butanová; a kyselina (3R,10S)-4-benzyloxy-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo-(10,6. I,0^13,18)nonadeka11(19),12(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) butanová.

E. Kyselina (3R, 10S)-5-Methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19),13(16),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová (183 mg) byla převedena do 40 ml suchého dichlormethanu a při 0 °C byl přidán ethanol (0,5 ml, 5 eq), N,Ndimethylaminopyridin (0,1 eq, 5 mg) a nakonec EDCI (209 mg, 5 eq). Vzniklý roztok byl při 0 °C ař teplotě místnosti míchán přes noc. Ke směsi bylo přidáno dalších 100 ml • φφφφ • ΦΦΦ ·· φ «φφφφφ φ • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φφφ · ζζ ·· φφφ · ·

ΟΟ φφφφ φφφφφ φφ φ dichlormethanu a byla promyta 0,5 N HC1 (2x50 ml), nasyceným NaHCCh (2x50 ml) a solankou (2x50 ml). Organická vrstva byla sušena nad Na₂SO4, filtrována a odpařena do sucha. Rekrystalizací z ethylacetátu a petroletheru byl získán ethyl ester kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo[ 10,6,1,0 ¹³'¹⁸]nonadeka-12 (19), 13 (18),14, 16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové jako bílá pevná látka (Výtěžek: 108 mg, 55 % hmotn.), MS: 470 (M+H)⁺.

Podobně byl připraven ethyl ester kyseliny (3R,10S)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo1,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka-12 (19),13 (18),14, 16-tetraen-10ylkarbamoyl)butanové; MS: 496 (M+H)⁺;

diethylkarbamoylmethyl ester kyseliny (3R,9S)-5-(4-chlor-fenoxy)-3-(8-oxo-l,7diazatricyklo(9,6,l,0^12,17)oktadeka-ll(18) 12 (17),13,15-tetraen-9ylkarbamoyl)pentanové;

indan-5-yl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové;

morfolinylethyl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-12(19), 13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové;

(l-methyl-4-piperidin) ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové, MS: 539,51 (M+S⁺); a (l-methyl-3-piperidinylmethyl ester kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo (10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové.

F. Podobně byl méně polární stereoizomer t-butyl esteru kyseliny (3R, 10S)2-methyl-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,l,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanově připravený v Příkladu 5D výše (15 mg) převeden do dichlormethanu (2,4 ml) a TFA (0,6 ml) a vzniklá směs byla míchána při teplotě místnosti 4 hod. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku při 35 °C. Poté byl přidán ethylacetát a roztok byl promyt vodou (3x10 ml). Organická ···· • · • · • · · • · • ·· ·· ···· ··· vrstva byla sušena nad Na2SO₄ , filtrována a odpařena do sucha. Rekrystalizací ze směsi ethylacetát/petroether byla získána kyselina (3R,10S)-2-methyl-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová jako bílá pevná látka (7 mg), MS: 456,3 (M+H)⁺.

G. Podobným způsobem byla směs stereoizomerů 1:1 t-butyl esteru kyseliny (3R,10S)-2-methyl-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanově (připravené v Příkladu 5D výše) (5 mg) hydrolyzována za vzniku 3 mg pevné látky; 300 MHz *H NMR v CDCI3: δ (-0,5)-(-0,3) (m, 1H); 0,6-0,8 (m, 1H); 0,8-1,05 (m, 6H); 1,05-1-22 (m, 2H); 1,35 (3H,

7,25-7,32 (m, 1H); 7,35 (d, J-8,4 Hz, 1H); 7,88 (d. J-6,4 Hz)

H. Podobně, benzyl ester kyseliny (3R, 10S)-2-methoxykarbonyl-5-methyl-3-(9oxol,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové byl převeden do ethanolu (35 ml, za mírného zahřátí) a byl přidán ammonium formát (1642 mg, 3 eq) a dále 10 % hmotn. Pd na aktivním uhlí (100 mg). Po 3 hod. míchání při teplotě místnosti byla reakce dokončena. Směs byla odfiltrována přes 1 cm lůžko z křemeliny, poté odpařena, byl přidán MeOH odfiltrována přes vatu. Po odpaření byl ke zbytku přidán dichlormethan, směs byla silně míchána a poté odfiltrována. Filtrát byl odpařen a rekrystalizován z ethylacetátu/petroletheru za vzniku kyseliny (3R,10S)-2-methoxykarbonyl-5-methyl-3- (9-oxoI, 8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanové jako bílé pevné látky, (výtěžek: 140 mg), MS: 500,3 (M+H)⁺.

I. Kyselina (3R, 10S)-2-Methoxykarbonyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexalnová byla převedena do ethanol (25 ml) a poté byl přikapán IN LiOH (0,3 ml, 3 eq). Vzniklý homogenní roztok byl míchán při teplotě místnosti 3 hod. Většina ethanolu byla odstraněna za sníženého tlaku při 30 °C. Poté byla přidána voda (5 ml) a ethylacetát (30 ml), 4 N HC1 do pH=2. Ethylacetátová vrstva byla promyta solankou, ···· • · · · · · • · • · · ·· · · · · • · · · · * · • · · · · ·· ···· ro ·· ··· ·· ··· · ··· ·· ·· · sušena Na₂SO₄ , filtrována a odpařena do sucha. Čištění pomocí HPLC reversní fázi bylo získáno 47 mg kyseliny (3R,10S)-2-karboxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanově jako bílé látky, MS: 484,5 (M-H)-.

Příklad 7

A. Směs dibenzylfumaratu (5,3 g, 0,018 mol) a 4-bifenyl-4-yl-lH-imidazolu (3,94 g, 0,018 mol) byla zahřívána na 110-115 °C 4 hod. Směs byla převedena do etheru a promyta 0,05 % obj., 0,01 N NaOH a solankou a sušena. Po odstranění etheru byl surový produkt čištěn kolonovou chromatografií (60 % obj. ethylacetát/hexan) za vzniku 5,75 g dibenzyl esteru kyseliny 2-(4-bifenyl-4-yl-imidazol-l-yl) jantarové,

MS: 517,3 (M+H)⁺.

Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny: dibenzyl ester kyseliny 2-(4-fenylimidazol-l-yl)jantarové; dibenzyl ester kyseliny 2-(4-(4-methoxyfenyl)imidazol-l-yl)jantarové; a dibenzyl ester kyseliny 2-(4-(4-fenoxyfanyl)-imidazol-lyl)jantarové.

B. Suspenze dibenzyl esteru kyseliny 2-(4-bifenyl-4-yl-imidazol-1 -yl)j antarové (551 mg) v 10 ml vody byla refluxována přes noc a ochlazena na teplotu místnosti. Vodná vrstva byla odstraněna a zbylá pevná látka byla sušena v lyofilizéru za vzniku 4-benzyl esteru kyseliny 2-(4-bifenyl-4-yl)-imidazol-l-yl jantarové (437 mg),

MS: 426 (M⁺).

Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

4-benzyl ester kyseliny 2-(4-fenyl-imidazol-l-yl) jantarové;

4-benzyl ester kyseliny 2-(4-(4-methoxyfenyl)-imidazol-l-yl) jantarové; a

4-benzyl ester kyseliny 2-(4-(4-fenoxyfenyl)-imidazol-l-yl) jantarové.

C. Směs 4-benzyl esteru kyseliny 2-(4-bifenyl-4-yl-imidazol-l-yl) jantarové (450 mg,

1,05 mmol), (1 OS)-10-amino-9-oxo-1,8-diaza-tricyk( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19),13(18),14,16-tetraenu (284mg, 0,95 mmol), EDCI (302 mg, 1. 5 mmol), HOBT (142 mg, 1. 05 mmol), N-methylmorfolinu (0,14 ml) a DMAP (50 mg) v DMF (10 ml) • · · byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Roztok byl zředěn 100 ml EtOAc a promyt solankou a nasyceným roztokem NaHCCb. Surový produkt získaný po odstranění rozpouštědel byl čištěn kolonovou chromatografií za vzniku benzyl esteru kyseliny (3RS, 10S)-3-(4-bifenyl-4-yl-imidazol-i-yl)-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-succinamové.

Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

benzyl ester kyseliny (3RS,10S)-3-(4-fenyl-imidazol-l-yl) -N- (9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)onadeka-12(19) 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-succinamové benzyl ester kyseliny (3RS, 10S)-3-(4-(4-methoxyfenyl)-imidazol-l-yl)-N-(9-oxo-l,8diaza-tricyklo(10,6,l,0 ^13,18)nonadeka-12(19),13 (18) 14,16-tetraen-10-yl- succinamové; a benzyl ester kyseliny (3RS,10S)-3-(4-(4-fenoxyfenyl)-imidazol-l-yl)-N- (9-oxo-l,8diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yl- succinamové.

D. Roztok benzyl esteru kyseliny (3RS, 10S)-3-(4-bifenyl-4-yl-imidazol-i-yl) -N(9-oxo-l, 8-diaza-tricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen-10-ylsuccinamové (190 mg) v THF/EtOH (5/1, 20 ml) byl hydrogenován na 10 % hmotn. Pd/C (170mg) 8 hod dokud podle TLC nevymizela výchozí látka. Roztok byl filtrován přes lůžko z křemeliny. Filtrát byl odpařen a rekrystalizován z (THF/EtOAc) za vzniku 147 mg kyseliny (3RS,10S)-3-(4-bifenyl-4-yl-imidamol-l-yl)-N-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-succinamové, t.t.: 222-226 °C, MS: 604,2 (M+H)⁺.

Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina (3RS, 10S)-3-(4-fenyl-imidazol-1 -yl)-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³’ ¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10-yl-succinamová, t.t.: 184-187 °C, MS: 528,3 (M+H)⁺;

kyselina (3RS, 10S)-3-(4-(4-methoxyfenyl)-imidazol-1 -yl)-N-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo (10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12(19), 13(18) 14,16-tetraen-10-yl-succinamová; t.t.:

186-190 °C, MS: 558,3 (M+H)⁺;

• · · · • ·

ΠΛ · · · · · · ' /[} ··· · ··· ·· ·· kyselina (3RS,10S)-3-(4-(4-fenoxyfenyl)-imidazol-l-yl)-N-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-succinamová, MS:

620,12 (M+H)⁺; a kyselina (3RS, 10S)-3-(3-fenyl-pyrazol-1 -yl)-N-(9-axo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl-succinamová, MS: 568,4 (M+H)⁺.

Příklad 8

A. Karboxylové kyseliny připravené podle Příkladu 6 mohou být převedeny na odpovídající amidy reakcí kyselin s vhodnými aminy v přítomnosti káplovacího činidla jako EDCI a HOBT. Tyto postupy jsou odborníkům známé.

Takto byly připraveny následující sloučeniny:

(3RS, 10 S)-3 -(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12(19),13(18),14,16tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methylhexanamid; a (3RS, 10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16tetraen-10-ylkarbamoyl)-5-methyl-N-(N,N-dimethylaminoethyl)hexanamid, MS:

512,49 (M+H)+.

B. Podle postupu popsaného v U.S. Patentu č. 4 412 994 byla připravena následující sloučenina:

(3R,10S)-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16tatraen-10-ylkarbamoyl)-5-methyl-N-hydroxy-N-morfolinylmethylhexanamid.

Příklad 9

Sloučeniny vzorce lei

Roztok méně polárního stereoizomerů kyseliny (1 lS)-5-methyl-3-(10-oxo-l,9diazatricyklo( 11,6,1,0^14,19)eikosa-13(20), 14( 19), 15,17-tetraen-11 -ylkarbamoyljhexanové (210 mg) a 5-hydroxybenzotriazolu monohydratu (109 mg) v bezvodém DMF (20 ml) pod argonem byl ochlazen na 0 °C (ledová lázeň). K této směsi bylo přidáno EDCI (282 mg) a míchání pokračovalo 0,5 hod. K roztoku byl přidán O-benzylhydroxylamin • · · · · ·

(0,27 ml) a reakční směs byla nechána ohřívat na teplotu místnosti přes noc. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do dichlormethanu (100 ml) a 20 % obj. HC1 (100 ml) a převeden do dělící nálevky. Organická vrstva byla izolována a vodná vrstva byla promyta dichlormethanem (2x100 ml). Organická vrstva byla poté postupně promyta 5 % hmotn. NaHCO3, solankou, sušena MgSO₄, filtrována a odpařena za získání (1 lS)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(10-oxo-l,9-diaza-tricykIo(l 1,6,1. 0^I4’¹⁹)eikosa-13(20),14(19),15,17-tetraen-l 1-ylkarbamoyl) hexanamidu jako krystalické látky. Produkt byl dále čištěn kolonovou chromatografií na silikagelu a krystalizací z horké směsi ethylacetát/dichlormethan při získání polárnějšího stereoizomeru sloučeniny o t.t. 232-233 °C a méně polárního stereoizomeru sloučeniny o t.t.

251-253 °C.

B. Podobně k roztoku kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové (2,5 g, 5,82 mmol), HOBT.H2O (0,89 g, 1 eq.) a O-benzyl hydroxylaminu (2,2 ml, 3 eq.) v DMF (200 ml) při 0 °C byl přidán EDCI (2,77 g,

2,5 eq.). Vzniklá směs byla míchána přes noc. DMF byl odstraněn vakuovou destilací při 65 °C. Ke zbytku byl přidán methanol (14 ml) a ether (140 ml). Směs byla míchána při 0 °C 15 min., poté byla odfiltrována bílá pevná látka a postupně promyta vodou (100 ml) a směsí 1:1 ether/petrolether (100 ml). Po sušení za vakua v přítomnosti P2O5 byl získán (3R,10S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸) nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid j ako bílá pevná látka (2,7 g, 84,9 % hmotn.).

C. Podobným způsobem, ale náhradou kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo (10,6,l,0^l318)nonadeka- 12 (19), 13 (18) 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové za vhodně substituovanou sloučeninu vzorce Ib byly připraveny následující sloučeniny vzorce Ic:

(3R, 10S)-N-benzyloxy-2-methoxykarbonyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6. I,0^13,18)nonadeka- 12 (19) 13 (16) 14,16 -tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid,

MS: 605,3 (M+H)⁺;

(3R, 10S)-N-benzyloxy-6-fenyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0¹³’¹⁸) nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid, MS: 609 (M+H)⁺;

• · · ·

(3R, 10S)-N-benzyloxy-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0¹³’¹⁸)nonadeka12(19),13(18),14,16-tatraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid, MS: 533 (M+H)⁺.

D. Podobným způsobem, ale záměnou O-benzyl hydroxylaminu za 2dimethylaminoethylamin nebo l-methyl-4-hydroxypiperidin, byly připraveny následující deriváty sloučeniny vzorce I:

l-(2-dimethylaminoethyl)amid kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,°¹³ ’¹⁸)nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové, MS: 512,49 (M+H)⁺;

l-methylpiperidin-4-yl ester kyseliny (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10. 6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen- 10-ylkarbamoyl)hexanové, MS: 539,51 (M+H)^Ť;

Příklad 10

Sloučeniny vzorce Id

A. K roztoku polárnějšího stereoizomeru (1 lS)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(10-oxo1,9-diazatricyklo-( 11,6,1,0^14,19)eikosa-13(20),14(19), 15,17-tetraen-l 1ylkarbamoyl)hexanamidu (90 mg) ve směsi ethanol/tetrahydrofuran (350 ml; 2:1) bylo přidáno 10 % hmotn. Pd/C (30 mg). Směs byla míchána při konstantním proudu vodíku. Po 3 hod byla podle TLC (10 % obj. MeOH/dichlormethan) reakce dokončena. Směs byla 3x filtrována přes lůžko z křemeliny a odpařena za sníženého tlaku do sucha. Bylo přidáno 15 ml dichlormethanu a roztok byl znovu odpařen dosucha a postup byl poté opakován. Ke zbytku byly přidánny 3 až 4 kapky MeOH a 15 ml dichlormethanu. Směs byla míchána za chlazení (ledová lázeň) poté bylo přidáno 5 ml etehru a 2 ml hexanu. Pomalu se vyvíjel krystalický materiál, který byl poté odfiltrová. Bylo získáno 50 mg polárnějšího stereoizomeru (llS)-N-hydroxy-5-methyl-3-(10-oxo-l,9-diazatricyklo(11,6,1,0^14,I9)eikosa-13(20),14(19),15,17-tetraen-l l-ylkarbamoyl)hexanamidu, t.t. 197201 °C, [a]²³D=-85,10° (3,5 mg/1,0 ml DMSO).

B. Podobným způsobem, ale záměnou polárnějšího stereoizomeru (11S)-Nbenzyloxy-5-methyl-3-(l 0-oxo-1,9-diazatricyklo-[ 11,6,1,0^14,19]-eikosa13(20), 14(19), 15,17-tetraen-l l-ylkarbamoyl)hxanamidu za méně polární, byl připraven • · • · · 9 9 ·

méně polární (llS)-N-hydroxy-5-methyl-3-(10-oxo-l,9-diazatricyklo(11,6,1,0^14,l9)eikosa-13(20),14(19),15,17-tetraen-l l-ylkarbamoyl)hexanamid , t.t. 212-216 °C, [a]²³D=-38,5° (4,7 mg/1,0 ml MeOH).

C. Podobně, (3R,10S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo (10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19) 13 (18) 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid (1,0 g, 1,83 mmol) byl převeden do roztoku 20 % obj. THF v ethanolu (500 ml) a poté bylo po částech přidáno Pd/C (200 mg). Směs byla míchána za probublávání vodíkem. Po 4 hod. byla reakční směs odfiltrována přes lůžko z křemeliny (1,5 cm) a filtrát byl odpařen a převeden do methanolu (30 ml) a filtrován přes vatu. Rekrastalizací ze směsi methanol/ethylacetát/ether/petrolether byl získán (3R,10S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12(19),13(16) 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid (768 mg, 92 % hmotn.), MS: 455 (M-H)'.

D. Podobným způsobem, ale záměnou (3R, 10S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(9-oxo-l, 8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18) nonadeka-12 (19) 13 (18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanamidu za vhodnou sloučeninu vzorce Id bylo připraveno:

(3R, 10S)-N-hydroxy-2-methoxykarbonyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo (10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid,

MS: 515 (M+H)⁺;

(3R, 10S)-N-hydroxy-6-fenyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid, MS: 517 (M-H)';

(3R, 10S)-N-hydroxy-2-aminokarbonyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexanamid, MS: 483 (MH⁺)-H₂0;

(3R, 10S)-N-hydroxy-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid, MS: 443 (MH⁺);

(3R,9S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12(17),13,15-tetrasn-9-ylkarbamoyl)hexanamid; a • ···· · ·· · · · ·· · ·· · ··«· « · · • · ······ • · · · · ······ ·ϊ· ϊ .i.·..· ..· :

(2S,3R,9S)-N-hydroxy-2-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3RS, 10S)-N-hydroxy-N-formyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexylamin, MS: 455 (M-H)-;

(3R,9S)-N-hydroxy-6-pyridin-4-yl-3-(8-oxo-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R,9S)-N-hydroxy-2-hydroxy-5-methyl-(8-oxo-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 10S)-N-hydroxy-5-methyl-3-( 15-methoxy-9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraon-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 10S)-N-hydroxy-2-acetyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexannamid;

(3R,10S)-N-hydroxy-6-fenyl-3-(9-oxo-l,8-diaza-tricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka12(19), 13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamíd;

(3R, 10S)-N-hydroxy-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0 ¹³¹⁸)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16- tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 10S)-N-hydroxy-5-fenyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetracn-10-ylkarbamoyl)pentanamid;

(3 S, 10R)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0¹³’¹⁸)nonadeka12(19),13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 10RS)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid;

(3R, 10RS)-N-hydroxy-5-methyl-3-( 15-fluor-9-oxo-1,8-diaza-tricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka-12 (19) 13 (18) 14,16 -tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid; a • · · · • · ·« ···· ·· · ·· · · · · · • · ······ • · · ·· ·· · · · ·

9 9 9 9 9 9 /J 999 9 999 99 49 9 (3R, 10S)-N-hydroxy-2-aminokarbonyl-5-methyl-3-( 15-fluor-9-oxo-1,8-diaza-tricyklo (10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka- 12 (19) 13 (18) 14, 16 -tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid.

Příklad 11

Sloučeniny vzorce Ie

A. K roztoku kyseliny 4-methyl-2-acetylthiomethylpentanové (612 mg, 3 mmol), (1 OS)-10-amino-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19), 13(18), 14,16tetraenu (427 mg, 1,5 mmol), a HOBT.H2O (230 mg, 1,5 mmol) v suchém DMF (30 ml) pod argonem při teplotě místnosti byl přidán EDCI (863 mg, 4,5 mmol). Směs byla míchána přes noc a DMF byl odstraněn za vakua při 30 °C za vzniku žluté polotuhé látky. Ta byla rozpuštěna v ethylacetátu (50 ml), promyta 1 N HC1 (30 ml), 5 % hmota. NaHCO3 (30 ml) a solankou (30 ml). Organická vrstva byla sušena MgSO₄ a odpařena do sucha. Nažloutlý olej byl míchán ve směsi 50 % obj. ether/petrolether (40 ml) za vzniku 600 mg (85 % hmota.) (10S)-2-acetylthiomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-l,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl)pentanamidu jako směsi 1:1 stereoisomerů. Směs izomerů byla oddělena pomocí kolonové chromatografie (LPS-2) za eluce 20 % obj. ethylacetát v petroletheru. Byl získán méně polární stereoizomer o t.t. 226 °C a polárnější stereoizomer o t.t. 220 °C.

Příklad 12

Sloučeniny vzorce If

A. K roztoku méně polárního stereoizomeru (10S)-2-acetylthiomethyl-4-methyl-N(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10yl)pentanamidu (50 mg, 0,106 mmol) v 10 ml methanolu při 0 °C pod argonem bylo přidáno 0,5 ml konc. NH₄OH. Reakční směs byla míchána při teplotě 0 °C (ledová lázeň odejmuta po přidání NH4OH) až teplota místnosti a poté nechána stát při teplotě místnosti 1 hod. Přebytek MeOH byl odstraněn za sníženého tlaku za vzniku bílého pevného zbytku. Zbytek byl extrahován mezi ethylacetát (30 ml) a 0,1 N HC1 (15 ml). Organická vrstva byla promyta solankou (15 ml), sušena MgSO₄ a odpařena do sucha. Pevný zbytek byl míchán ve směsi 50 % obj. ether/petrolether a filtrován za získání polárněj šího stereoizomeru (10S)-2-merkaptomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-1,8···· • · ·· ···· ·· · · · » · 9 9 · • · ··«··· • · · · · · * ···· · · · · 9 9 9 /Ό 999 9 999 99 99 9 diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12(19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl)pantanamídu jako bílého prášku, 41 mg (90 % hmotn.), t.t. 224 °C.

Příklad 13

Sloučeniny vzorce HH

A. Ke kyselině 4-methylpentanové (25 g, 0,215 mmol) ve 25 °C teplé vodní lázni byl pomalu přidán thionyl chlorrid (20,4 ml, 1,3 g). Poté byla směs pod argonem zahřívána na 50 °C 3 hod. (dokud se nepřestal uvolňovat plyn). Surová reakční směs byla destilována za atmosférického tlaku za vzniku 4-methylpentanoyl chloridu (25,3 g, 87,3 % hmotn.), t.t. 143 °C.

B. Podobným způsobem, ale záměnou kyseliny 4-methylpentanové za kyselinu 5-fenylpentanovou (5 g), byl připraven 5-fenylpentanoyl chlorid (4,4 g), jako bezbarvá kapalina, t.t. 91-93 °C.

Příklad 14

Sloučeniny vzorce N

A. K suspenzi 60 % hmotn. NaH (836 mg, 1,5 eq.) v toluenu (200 ml) při teplotě místnosti pod argonem byl přidán L-(+)-2,10-kafrsultam (3,0 g, 3,9 mmol). Směs byla bouřlivě míchána při teplotě místnosti 1 hod. Poté byl opatrně při 0 °C přikapán 4-methylpentanoyl. Po 3 hod míchání při teplotě místnosti byla reakční směs rozložena 10 ml vody a bylo přidáno 70 ml etheru. Směs byla nejprve promyta 0,5 N HC1 (2x50 ml), poté 5 % hmotn. K2CO3 (3x50 ml) a nakonec solankou (1x50 ml). Organická vrstva byla sušena nad MgSO4 , filtrována a odpařena do sucha. Čištěním pomocí kolonové chromatografie (1:6 ethylacetát/petrolether) bylo získán N-4-methylpentanoylL-(+)-2,10-kafrsultam (3,39 g, 78 % hmotn.).

B. Podobně, ale záměnou 4-methylpentanoyl chloridu za vhodný chlorid byly získány následující sloučeniny vzorce N:

N-3-fenylpropanoyl-L-(+)-2,10-kafrsultam, MS: 347 (M⁺);

N-5-fenylpentanoyl-L-(+)-2,10-kafrsultam, MS: 375 M⁺;

♦ · · 9 ·· 9999

9 ♦·♦··· >

9 999999

9 9 9 9 9 9 999 9 <-7<7 9 9 9 9 9 9 9 // 9999 99999 999

N-pentanoyl-L-(+)-2,10-kafrsultam, MS: 300 (M+H)+.

Příklad 15

Sloučeniny vzorce Q

A. Kroztoku N-4-methylpentanoyl-L-(+)-2,10-kafrsultamu (3,39 g, 10,8 mmol) v 75 ml suchého THF při -78 °C pod argonem byl během 5 min přikapán NaN(TMS)2 (1,0 M v THF, 11,34 ml, 1,05 ekv.). Po 1 hod. míchání při -78 °C byl ke směsi přidán hexamethylfosforamid (5,2 ml, 3 ekv.), poté 400 mg tetra n-butyl amonium jodidu.

Vzniklý roztok byl při -78 °C míchán přes noc. Ráno byla směs rozložena vodou (100 ml) a extrahována etherem (3x100 ml). Spojené etherové vrstvy byly promyty solankou, sušeny Na2SO4, filtrovány a odpařeny. Čištěním kolonovou chromatografií (5:95 ethylacetát/petrolether až 10:90 ethylacetát/petrolether) byl získán N-(4-methyl-2t-butoxykarbonylmethyl)pentanoyl-L-(+)-2,10-kafrsultam (4 g, 86,5 % hmotn.).

B. Podobným způsobem, ale záměnou N-4-methylpentanoyl-L-(+)-2,10kafrsultamu za vhodnou sloučeninu vzorce N byly připraveny následující sloučeniny vzorce Q:

N-(3-fenyl-2-t-butoxykarbonylmethyl)propanoyl-L-(+)-2,10-kafir suitám, MS: 461 (M⁺);

N-(5-fenyl-2-t-butoxykarbonylmethyl)pentanoyl-L-(+)-2,10-kafr suitám, MS: 490 (M+H)⁺;

N-(2-t-butoxykarbonylmethyl)pentanoyl-L-(+)-2,10-kaťrsultam, MS: 414 (M+H)⁺.

Příklad 16

Sloučeniny vzorce Ka

K míchanému roztoku N-(4-methyl-2-t-butoxykarbonylmethyl)pentanoyl-L-(+)-2,10kafrsultam (5,45 g, 12,7 mmol) v 50 % obj. THF (150 ml) při 0 °C pod argonem byly přidány krystaly LÍOH.H2O (2,14 g, 4 ekv.) a 30 % obj. H2O2 (11,5 ml). Poté byla ledová lázeň odstraněna a emulze byla míchána 3 hod dokud se nevyčeřila. Většina THF byla odstraněna za sníženého tlaku při 35 °C. Poté byl přidán dichlormethan (150 ml) a za míchání byla přidávána 4N HC1 do pH=2. Po přidání NaCl byla vodná vrstva • · · · • · *·· ·

extrahována dichlormethanem (3x150 ml). Dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku při 35 °C a zbytek byl převeden do ethylacetátu (150 ml). Tento roztok byl extrahován 5 % hmotn. K2CO3 (3x50 ml) a spojené extrakty byly promyty etherem (50 ml). Dichlormethan byl přidán k vodné vrstvě a za míchání s NaCl byla vodná vrstva extrahována dichlormethanem (3x70 ml) a spojené extrakty byly sušeny nad Na2SC>4, filtrovány a odpařeny za vzniku kyseliny (2R)-4-methyl-2-tbutoxykarbonylmethyl-pentanové jako bezbarvého oleje (2,95 g, kvantitativní výtěžek).

B. Podobným způsobem, ale náhradou N-(4-methyl-2-tbutoxykarbonylmethyl)pentanoyl-L-(+)-2,10-kafr sultamu za vhodnou sloučeninu vzorce Q byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina (2R)-3-fenyl-2-t-butoxykarbonylmethyl-propanová, MS: 265 (M+H)⁺; kyselina (2R)-5-fenyl-2-t-butoxykarbonylmethyl-pentanová, MS: 293 (M+H)⁺; kyselina (2R)-2-t-butoxykarbanylmethyl-pentanová, (bezbarvý olej, 1,09 g).

C. Kyselina (2R)-3-fenyl-2-t-butoxykarbonylmethyl-propanová (55 mg) byla převedena do ledové kyseliny octové (20 ml) a byl přidán PtCh (25 mg) v kyselině octové. Kádinka byla umístěna do Parrovy nádoby, evakuována a naplněna vodíkem na tlak 0,7 Mpa. Po 3 dnech míchání byla směs odfiltrována přes 1 cm lůžko z křemeliny. Filtrát byl odpařen za vzniku žlutého oleje, kyseliny (2R)-3-cyklohexyl-2t-butoxykarbonylmethyl-propanové (56 mg), MS: 269 (M-H)-.

Příklad 17

Sloučenina vzorce R

K roztoku D-leucinu (50 g, 0,381 mol) v 570 ml 3N HBr (vodné) při 0 °C byl přidán nitrit sodný (42 g, 1,6 ekv.) po částech v průběhu 1 hod a 15 min. Reakční směs byla míchána 3 hod při 0 °C a poté byla extrahována etherem (1 000 ml). Po promytí etherové vrstvy vodou (2x500 ml) byla sušena nad MgSC>4 a odpařena. Červený syrup byl znovu odpařen s chloroformem (3x200 ml), čímž byla odstraněna barva a po vysušení na pumpě byla získána kyselina (2R)-2-brom-4-methylpentanová, jako bezbarvý olej s konstantní hmotností 71,3 g.

·· ····

* · · • · · • · · · • · · ·

Příklad 18

Sloučenina vzorce S

Do dichlormethanu (80 ml) byl kondenzován isobuten do dvojnásobného objemu (při -50 °C CHCF/suchý led). K tomuto roztoku byla přidána kyselina (2R)-2-brom-4methylpentanová (28 g, 143,6 mmol) a př teplotě mezi -40 až -50 °C byla přikapána konc. kyselina sírová (1 ml). Reakční směs byla nechána ohřát na teplotu místnosti v průběhu 20 hod. Roztok byl odpařen, byl přidán další dichlormethan (300 ml), který byl postupně promyt nasyceným roztokem NaHCCF (2x100 ml) a vodou (2x100 ml). Po sušení nad Na2SC>4 byla organická vrstva filtrována a odpařena za vzniku žlutého oleje. Látka byla předestilivána za vzniku 23 g t-butyl esteru kyseliny (2R)-2-brom-4methylpentanové jako čirého oleje.

Příklad 19

Sloučenina vzorce U

K benzyl methyl malonatu (2,13 ml, 1 ekv.) a t-butylalkoholátu draselnému (1,36 g, ekv.) v suchém DMF (100 ml) při 0 °C byl v průběhu 1 hod přikapán t-butyl ester kyseliny (2R)-2-brom-4-methylpentanové (2,89 g, 11,5 mmol) v 50 ml DMF. Roztok byl míchán při 0 °C 3 dny.Reakční směs byla extrahována mezi ether (150 ml) a nasycený roztok chloridu amonného (80 ml). Směs byla odfiltrována přes křemelinu dvě vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována etherem (3x100 ml) a spojené etherové extrakty byly promyty vodou (6x100 ml). Po sušení nad MgSC>4 byla organická vrstva odfiltrována a odpařena do sucha. Po čištění pomocí kolonové chromatografie (eluce 4:96 ethylacetát/petrolether) byl získán t-butyl ester kyseliny (2R)-2-((l-methoxykarbonyl-l-benzyloxykarbonyl)methyl)-4-methylpentanové acid (2,55 g) jako čirý bezbarvý olej, MS; 322 (M-aceton)⁺.

Příklad 20

Sloučenina vzorce Kb

T-butyl aster kyseliny (2R)-2-[(l-methoxykarbonyl-l-benzyloxykarbonyl)-methyl)-4methylpentanové byl převeden do 5 ml 80 % TFA (eq) při teplotě místnosti a směs byla φφφφ • · φ · · φ φφ · «ΦΦΦΦΦ φ φ ♦ ΦΦΦΦΦΦ • · φ φ φ φ φ ΦΦΦ φ

ΟΑ · · ΦΦΦ · · όϋ Φ·Φ φ ΦΦΦ ·< Φ· · míchána 1,5 hod. Dle TLC byla reakce hotova pouze ze 30 %, proto byla přidána TFA (10 ml). Po 0,5 hod byla reakce dokončena. TFA byla odstraněna za vysokého vakua při 45 °C a zbytek byl převeden do ethylacetátu a promyt vodou (5x30 ml). Po sušení nad Na2SO₄ byla ethylacetátová vrstva filtrována, odpařena a suřena za vakua za vzniku kyseliny (2R)-2-(( 1 -methoxykarbonyl-l-benzyloxykarbonyl)methyl)-4-methylpentanové jako pevné látky (1,68 g), MS: 322 (M⁺).

Příklad 21

Sloučenina vzorce W

Krystalická kyselina fosfinová (8,4 g, 0,13 mol) byla míchána 90 min s čistým triethylorthofomiátem (22 ml, 0,20 mol) při teplotě místnosti. Tato směs byla pomocí kanyly převedena k míchanému roztoku ethylisobutylakrylátu (8 g, 0,036 mol)) a tetramethylguanidinu (4,5 ml, 0,036 mol), který byl chlazen 10 min na 0 °C. Směs byla zředěna 200 ml etheru a roztok byl promyt 1 N HC1 (1 ml), vodou (4x100 ml), solankou (100 ml) a sušena nad síranem hořečnatým. Po odpaření za sníženého tlaku byl získán ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)-fosfinoylmethyl-4-methylpentanové jako nažloutlý olej,

MS: 349 (M-H₂0)⁺.

Příklad 22

Sloučenina vzorce X

Surový ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)fosfinoylmethyl-4-methylpentanové (26 g) byl rozpuštěn v 600 ml THF/CH2CI2 (50/50) a ochlazen na 0 °C. Poté byl kroztoku přidán diisopropyl-ethylamin (32 ml) a 90,8 ml bis-(trimethylsilil)acetamid a vzniklá směs byla míchána 20 min a poté byl přidán paraformaldehyd (5,5 g). Roztok byl temperován na teplotu místnosti a zahříván 18 hod na 37 °C. Rozpouštědlo bylo odpařeno a vzniklý olej byl rozpuštěn v 200 ml ethylacetátu. Roztok byl promyt 50 ml 1 N HC1 (2x), 50 ml solanky (2x), sušen nad MgSO₄, filtrován a odpařen za vzniku 19,3 g ethyl esteru kyseliny 2-(ethoxy)(hydiOxymethyl)fomfinoylmethyl-4-methylpentanové jako žlutého oleje, MS: 281 (MET).

4444

444 •

4 · • 44 • 4 4 · • · • 4 4

Příklad 23

Sloučeniny vzorce Y

A. Ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(hydroxymethyl)fosfinoylmethyl-4methylpentanové (5 g) byl rozpuštěn v 20 ml dichlormethanu a ochlazen na -20 °C (duplicitně). K roztoku byl přikapán methansulfonyl chlorid (1,5 ml) a triethylamin (3,0 ml). Po 15 min byla lázěň odstraněna reakční směs byla nechána při teplotě místnosti 3,5 hod. Rozpouštědla byla promyta 10 ml studené 2 % obj. HC1,10 ml NaHCCb (nas.), 10 ml solanky, sušena MgSC>4, filtrována a odpařena za vzniku 12,8 g (spojený výtěžek) ethyl esteru kyseliny 2(ethoxy)(methansulfonyloxymethyl)fosfinoylmethyl-4-methylpentanové.

B. Podobným způsobem, ale záměnou methansulfonyl chloridu za p-toluenesulfonyl chlorid, byl připraven ethyl ester kyseliny 2(ethoxy)(p-toluenesulfonyloxymethyl)fosfmoylmethyl-4-methylpentanové.

Příklad 24

Sloučeniny vzorce AA

Hydrid sodný (1,52 g, 60 % hmotn.) a 6 g 2-chinolin thiolu bylo mícháno při 0 °C v 50 ml DMF. Poté co se začal uvolňovat vodík, byla směs míchána při teplotě místnosti 2,5 hod; Směs byla ochlazena na 0 °C a pomocí kanyly byl přidán ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(methansulfonyloxy-methyl)fosfinoyl-methyl-4-methylpentanové (12,8 g) v 10 ml DMF a směs byla míchána 18 hod za pomalého ohřívání na teplotu místnosti. DMF byl odstraněn odpařením a zbytek byl rozpuštěn v 50 ml ethylacetátu a promyt 50 ml vody (2x), solankou (50 ml), sušen nad MgSCU a odpařen za vzniku žluté polotuhé látky. Ciětěním pomocí kolové chromatografie za eluce směsí 10 % obj. ethylacetát/hexan až 80 % obj. ethylacetát/hexan bylo získáno 10 g ethyl esteru kyseliny 2-(ethoxy)(chinolin-2-ylthiomethyl)-fosfinoyl-methyl-4-methylpentanové (Rf 0,35 80 % obj. ethyl acetat/hexan), MS: 424 (MH‘j.

B. Podobným způsobem, ale záměnou 2-chinolinthiolu za 1-naftalenthiol, 2naftalenethiol nebo thiofenofbyly připraveny následující sloučeniny vzorce AA:

• ♦ · · · · · • · · · · · • · ·· ··· · • · · · · ··· ·· · · · ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(nafí-l-ylthiomethyl)fosfinoyl-methyl-4methylpentano vé;

ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(naft-2-ylthiomethyl)fosfinoyl-methyl-4methylpentanové; a ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(fenylthiomethyl)fosfinoyl-methyl-4-mothylpentanové.

Příklad 25

Sloučeniny vzorce BB

A. Ethyl ester kyseliny 2-(ethoxy)(chinolin-2-ylthiomethyl)-fosfinoyl-methyl-4methylpentanové (4,5 g) byl rozpuštěn ve 100 ml THF a bylo přidáno 12,5 ml 2 N NaOH a dostatečné množství methanolu, aby vznikl homogenní roztok. Po 18 hod byl THF odpařen, zbytek byl zředěn 50 ml vody a promyt 50 ml ethylacetátu. Vodná vrstva byla okyselena na pH=4 a produkt byl extrahován 50 ml ethylacetátu (2x). Ethylacetát byl promyt 20 ml solanky, sušen MgSCU a odpařen za vzniku 3,8 g kyseliny 2-(hydroxy)(chinolin-2-ylthiomethyl)-fosfinoyl-methyl-4-methylpentanové jako žlutého oleje, MS: 368 (MFfj.

B. Podobně byly připraveny následující sloučeniny vzorce BB:

kyselina 2-(hydroxy)(naft-1 -ylthiomethyl)fosfinoyl-methyl-4-methylpentanová;

kyselina 2-(hydroxy)(naft-2-ylthiomethyl)fosfmoyl-methyl-4-methylpentanová; a kyselina 2-(hydroxy)(fenylthiomethyl)fosfmoyl-methyl-4-methylpentanové.

Příklad 26

Rodělení sloučenin vzorce BB

Kyselina 2-(hydroxy)(chinolin-2-ylthiamethyl)fosfinoyl-methyl-4-methylpentanová (5,3 g) byla rozpuštěna v 50 ml horkého ethanolu (abs.) a bylo přidáno 4,2 g (-)-cinchonidinu. Po 30 min při teplotě místnosti se začala vylučovat sůl. Baňka byla přikryta folií a nechána stát 2 dny. Sůl byla poté odfiltrována a filtrát byl odpařen za vzniku žluté pěny. Sůl a filtrát byly (zvlášť) rozpuštěny ve 100 ml ethylacetátu a promyty 1 % obj. HC1, čímž byl při pH vyšším než 4 odstraněn cinchonidin. Oba roztoky byly sušeny nad MgSO4 a odpařeny za vzniku 2,4 g jednoho stereoizomeru.

• · · · · · · • · · · · · • · · · ··· · • · · · · ·· · ·· ·· · [cc]²⁴D=+10,68 ⁰ (9,73 mg v methanolu (2 ml)) a 2,5 g druhého stereoizomeru, [oc]²⁴d=-8,70 ⁰ (9,88 mg v methanolu (2 ml)).

Příklad 27

Sloučenina vzorce Ig

Jeden stereoizomer kyseliny 2-(hydroxy)(chinolin-2-ylthiomethyl)-fosfinoylmethyl-4methylpentanové (300 mg, 0,81 mmol) a Ι,Γ-karbonyldiimidazol (174 mg, 1,0 mmol) byl 1 hod míchán při 0 °C v 6 ml THF. Poté byl k roztoku přidán (lOS)-lO-amino(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen (270 mg,

0,95 mmol) a směs byla nechána temperovat na teplotu místnosti a poté byla míchána 18 hod. THF byl odpařen a zbytek byl rozpuštěn v 60 ml ethylacetátu. Ethylacetát byl prromyt 10 ml vody, 10 ml solanky, sušen nad MgSC>4 a odpařen za vzniku kyseliny (10S)-(4-methyl-2-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16tetraen-10-ylkarbamoyl)pentyll(chinolin-2-ylthiomethyl)fosfmové jako žlutého oleje.

Čištění bylo prováděno na reverzní fázi HPLC za použití gradientu acetonotrilu a 50 mm NH4OAC pufru jako eluentu. Polárnější stereoizomer byl izolován (30 mg) při 41 % obj. acetonotrilu a méně polární stereoizomer byl izolován (10 mg) při 43 % obj. acetonotrilu. Frakce byly lyofilizovány za vzniku bílého prášku, MS: 63S (MH⁴).

Příklad 28

Sloučenina vzorce Ih

Kyselina (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka

12(19), 13(18), 14,16-tetraen- 10-ylkarbamoyl)hexanová (200 mg, 0,45 mmol) byla rozpuštěna v 10 ml ledové kyseliny octové a hydrogenována při tlaku vodíku 0,7Mpa v přítomnosti Pt₂O (60 mg) v Parrově nádoběpři teplotě místnosti 15 hodin. Do reakční směsi byl 15 min probubláván argon a katalyzátor byl odfiltrován přes křemelinu. Čirý filtrát byl odpařen do sucha a znovu dvakrát odpařen s toluenem při získání kyseliny (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,18)nonadekan-l 0ylkarbamoyl)hexanové (kvant.) jako bílé pevné látky. MS: 448 (M-H)-.

• · · · · · · • · · · · · • · · · · · · · • · · 9 9

999 99 99 ·

Příklad 29

Sloučenina vzorce li

Ke kyselině (3R,10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0^I3’¹⁸)nonadekanylkarbamoyl)hexanové a O-benzylhydroxylaminu (5 eq,

2,25 mmol, 277 mg) v 10 ml suchého DMF při teplotě místnosti byl přidán l-hydroxybenzo-triazol.H₂O (2 eq, 0,9 mmol, 122 mg) a EDCI (5 eq, 2,25 mmol,

431 mg). Vzniklá čirá reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc.

Rozpouštědlo bylo odpařeno za vysokého vakua při teplotě místnosti a zbytek byl extrahován mezi ethylacetát (15 ml) a 1 N HC1 (15 ml). Ethylacetátová vrstva byla dále extrahována 1 N HC1 (15 ml). Ke spojeným vodným extraktům byl přidán 4 N NaOH a byly nasyceny NaCl a extrahovány dichlormethanem (3x15). Spojené dichlormethanové extrakty byly sušeny MgSCL, filtrovány a odpařeny do sucha za vzniku polotuhé látky.

Polotuhá látka byla míchána v etheru (10 ml) při 0 °C 30 min a odfiltrována za vzniku 85 mg (34 % hmotn.) (3R,10S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadekanylkarbamoyl)hexanamidu, jako bílého prášku,

MS: 555 (M+H)+.

Příklad 30

Sloučenina vzorce Ij (3R, 10S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo-( 10,6,1,0^13,18)nonadekan10-ylkarbamoyl)hexanamid (75 mg, 0,135 mmol) byl hydrogenován při tlaku vodíku 100 kPa v abs. Ethanolu (5 ml) v přítomnosti 10 % hmotn. Pd/C (35 mg) 2 hod. Poté byl 10 min do reakční směsi probubláván argon a katalyzátor byl odfiltrován přes křemelinu. Ten byl promyt 5 ml ethanolu. Spojené filtráty byly odpařeny dosucha za vzniku pevného zbytku. Pevná látka byla míchána v 10 ml 5 % obj. v etheru při 0 °C 30 min a odfiltrována za vzniku 57 mg (91 % hmotn.) (3R,10S)-N-hydroxy-5-methyl-3(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0,^13,18)nonadekan-10-ylkarbanoyl) hexanamidu, jako bílého prášku, MS: 465 (M+H)⁺.

• · · ·

Příklad 31

Slouřenina vzorce DD

K N-t-butoxykarbonyltryptofanu (3 mmol, 914 mg) a N-methylethandiaminu (3,6 mmol, 0,27 g, 0,32 ml) v suchém DMF (15 ml) byl přidán 1-hydroxybenzotriazol.H2O (3 mmol, 459 mg) a EDCI (4,5 mmol, 863 mg). Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc pod argonem a poté byl odstraněn přebytek DMF za vysokého vakua při 35 °C. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu (40 ml) a adukt byl extrahován do 1 N HC1 (3x25 ml). Ke spojeným vodným extraktům byl přidán pevný K2CO3 a směs byla extrahována ethylacetátem (3x25 ml). Spojené organické extrakty byly promyty solankou (30 ml) a sušeny MgSCL. Po odpaření do sucha bylo získáno 920 mg (85 % hmotn.) HPLC čistého produktu, N-t-butoxykarbonyltrytofan-N((methyl)aminoethyl)-amidu jako bílé pěny.

Příklad 32

Sloučenina vzorce EE

K dobře míchanému roztoku N'-t-butoxykarbonyl-trytofan-N-((methyl)aminoethyl)amidu (2 g, 5,55 mmol) a trans-1,4-dichlorbut-2anu (8,32 mmol, 1,04 g, 0,88 ml) v methylene chloridu (75 ml) a 40 % hmotn. KOH (50 ml) byly přidány 0,3 ekvivalenty benzyltriethyl ammonium chloridu (1,66 mmol, 378 mg). Po míchání při teplotě místnosti přes noc byla žlutá organická vrstva oddělena a vodná vrstva byla extrahována 30 ml dichlormethanu. Spojené dichlormethanové extrakty byly promyty solankou a sušeny nad MgSCL. Zbytek byl rozpuštěn v 10 ml MeOH a při 0 °C míchán s 50 ml etheru. Vzniklá žlutá pevná látka byla odfiltrována. Filtrát byl odpařen dosucha za vzniku 1,12 g HPLC čistého produktu, 1 l-N'-(t-butoxykarbonyl)amino-l 0-oxo-1,6,9triaza-6-methyltricyklo( 11,6,1,0^14,19)eikosa-3(4), 13(20), 14(19), 15,17-pentaenu jako žlutého prášku, MS: 413 (M+H)⁺.

• · · · • · · · · ·

Příklad 33

Sloučenina vzorce FF

-N'-(t-Butoxykarbonyl)amino-10-oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo(l 1,6,1,0^14,l9)eikosa-3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen (414 mg, 1 mmol) byl míchán se 40 % obj. TFA v dichlormethanu (10 ml) při teplotě místnosti 1 hod. Přebytek TFA a rozpouštědla byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (30 ml) a ptomyt 5 % hmotn. K2CO3 (2x15 ml) a solankou (15 ml). Organická vrstva byla sušena nad MgSO4 a odpařena za vzniku 240 mg (76 % hmotn.) žluté pěny, 1 l-amino-10-oxo-l,6,9-triaza-6-methyltricyklo(l l,6,l,0¹⁴’¹⁹)eikosa3(4),13(20),14(19),15,17pentaenu, MS: 313 (M+H)⁺.

Příklad 34

Sloučeniny vzorce Ik

- Amino-10-oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo( 11,6,1,0^14,19)eikosa3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen (161 mg, 0,7 mmol) a kyselina (2R)-4-methyl2-t-butoxykarbonylmethylpentanová (220 mg, 0,7 mmol) byla míchána v suchém DMF (15 ml) za přítomnosti HOBT (0,7 mmol). Pod argonem při teplotě místnosti bylo přidáno EDCI (1,4 mmol, 266 mg), a N-methyl morfolin (1,4 mmol, 0,15 ml) a směs byla míchána přes noc. Přebytek DMF byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (30 ml) a promyt vodou (30 ml). Vodná vrstva byla extrahována dichlormethanem (30 ml). Spojené dichlormethanové vrstvy byly sušeny nad MgSCU a odpařeny do sucha za vzniku světle hnědého oleje. Tento olej byl čištěn na HPLC s reverzní fází (Cis kolona; CH3CN-5O MM, NH4OH gradient). Požadovaná frakce byla lyofilizována za vzniku 148 mg (40 % hmotn.) t-butyl esteru kyseliny (3R, 11 S)-5-methyl-3-(l 0-oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo-(l 1,6,1,0^14,19)eikosa3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen-l l-ylkarbamoyl)hexanovéjako žlutého prášku, MS: 525,2 (M+H)⁺.

• ·· · • · · · · ·

Příklad 35

Sloučenina vzorce II t-Butyl ester kyseliny (3R,1 lS)-5-methyl-3-(l 0-oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo(11,6,1,0^14,19)eikosa-3(4), 13(20), 14( 19), 15,17-pentaen-11 -ylkarbamoyl)-hexanové (0,228 mmol, 120 mg) byl míchán v 20 % TFA v CH2CI2 (5 ml) 1 hod při teplotě místnosti. Přebytečné rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku (rotační odparka při 30 °C) za vzniku surové kyseliny (3R,1 lS)-5-methyl-3-(10-oxo-l,6,9-triaza6-methyltricyklo-(l 1,6,1,0^14,19)eikosa-3(4), 13(20), 14(19), 15,17-pentaen1 l-ylkarbamoyl)hexanové jako světle hnědého oleje. Čištěním na HPLC s reverzní fází, CH3CN-NH4OAC pufr s gradientem, bylo získáno 90 mg (75 % hmotn.) kyseliny jako žlutého prášku, MS: 469,1 (M+H)⁺.

Příklad 36

Sloučenina vzorce Im

Kyselina (3R, 11 S)-5-methyl-3-(l 0-oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo(11,6,1,0^14,19)eikosa-3(4),13(20),14(19),15,17-pentaen-l l-ylkarbamoyl)hexanová a O-benzylhydroxylamin (5 eq, 2,5 mmol, 308 mg) byli míchány v suchém DMF (30 ml) v přítomnosti HOBT (2 eq, 1 mmol, 135 mg), EDCI (5 eq, 2,5 mmol, 479 mg), a N-methylmorfolinu (10 eq, 5 mmol, 0,55 ml) při teplotě místnosti pod argonem 15 hod. Rozpouštědlo bylo odstraněno za vysokého vakua při teplotě místnosti. Zbytek byl rozpuštěn v destilované vodě (35 ml) a byl extrahován 10 % obj. ethylacetátem v petroletheru za odstranění méně polárních nečistot. Očekávaný produkt byl poté extrahován z vodné vrstvy dichlormethanem (2x35 ml). Organický extrakt byl prromyt solankou (25 ml), sušen MgSO₄ a odpařen za vzniku žlutého oleje (330 mg). Surový produkt byl čiětěn na HPLC s reverzní fází, CH₃CN-NH₄OAc pufr s gradientem a lyofilizován za vzniku 175 mg (61 % hmotn.) (3R,1 lS)-N-benzyloxy-5-methyl-3(10-oxo-1,6,9-triaza-6-methyl-tricyklo(l 1,6,1,0^14,19)eikosa-3(4), 13(20), 14(19), 15,17pentaen-11-ylkarbamoyl) hexanamidu jako bílého prášku, MS: 572 (M-H)-.

·· 9··· ·· · · · · · · · « • · ······ * ··········· ·:· ϊ ..· :

, Příklad 37

Sloučenina vzorce In

Směs (3R, 11 S)-N-benzyloxy-5-methyl-3-( 1O-Oxo-1,6,9-triaza-6-methyltricyklo(11,6,1,0^14,19)eikosa-3(4), 13(20), 14( 19), 15,17-pentaen-11 ylkarbamoyl)hexanamidu (40 mg, 0,07 mmol) a 10 % hmotn. Pd-C (10 mg) byla míchána v roztoku 3 % obj.

:' HCOOH v ethanolu (5 ml) při teplotě místnosti 1 hod. Směs byla přefiltrována přes křemelinu a odpařena ve vakuu. Pevný zbytek v 1 ml 50 % obj. AcOH/MeOH byl přidán k 5 ml etheru. Bílý prášek byl odfiltrován za vzniku 26 mg (68 % hmotn.) (3R, 11 S)-N-hydroxy-5-methyl-3-( 10-oxo-1,6,9-triaza-6methyltricyklo(l 1,6,1,0^14,19)eikosa-3(4),13(20), 14(19), 15,17-pentaen-l 1ylkarbamoyl)hexanamidu, MS: 488,5 (MH⁺).

Následující sloučenina byla připravena podobně:

(2S,3R,9S)-(N,2)-dihydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-1,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanamid.

I

Příklad 38

Sloučenina vzorce JJ

A. K roztoku sodné soli kyseliny (±)-2-hydroxybutanové, (2,54 g, 20,1 mmol) v suchém DMF (30 ml) byl přidán benzyl bromid (2,9 ml, 1,2 ekv.) a bezvodý KI (330 mg, 0,1 ekv.). Suspenze byla 24 hod zahřívána na 100 °C a DMF byl oddestilován za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do etheru, promyt vodou a nasyceným roztokem Na2S2O3, sušen MgSC>4 a odpařen. Po destilaci zbylého oleje bylo získáno ' 3,7 g (95 % hmotn.) benzyl (±)-2-hydroxybutanoátu jako bezbarvého oleje, t.v.. 95 °C (0,45 Torr).

B. Podobně , k chladné suspenzi (0 °C) NaH (3,8 g, 60 % hmotn. disperze v min.

. oleji, 95 mml) v THF (50 ml) byl pomocí kanyly přidán roztok kyseliny glykolové (7,2 g, 95 mmol) v THF (50 ml). Vzniklý roztok byl zahřát na 25 °C a odpařen ve vakuu. Vzniklá sůl byla suspendována do DMF (100 ml) a reagována s KI (1,57 g,

0,1 ekv.) a benzyl bromidem (12,3 ml, 1,1 ekv.). Směs byla zahřívána 23 hod pod

44 4 ·· 4···

4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4 • 4 44 444 4

4 4 4 4

4 44 44 4 argonem na 100 °C a DMF byl odpařen. Zbytek byl rozpuštěn v etheru a promyt vodou, nasyceným roztokem Na₂S₂O₃, solankou, sušen MgSC>4 a odpařen. Po destilaci byl získán benzyl glykolát (8,5 g, 54 % hmotn.) jako bezbarvý olej, t.v. 85-87 °C (0,5 Torr).

Příklad 39

Sloučeniny vzorce LL

A. K chladnému roztoku (0 °C) benzyl (±)-2-hydroxybutanoatu (1,75 g, 9,01 mmol) v CH₂C1₂ (50 ml) byl přikapán 2,6-lutidin (1,2 ml, 1,1 eq) a triflyl anhydrid (1,7 ml,

1,1 ekv.). Po 10 min byl při 0 °C přikapán roztok t-butyl esteru L-leucinu (1,7 g, 1 eq) a diisopropylethylaminu (1,7 ml, 1,1 eq) v CH₂C1₂ (30 ml). Roztok byl zahříván 36 hod na 25 °C, zředěn CH₂C1₂ a promyt nasyceným roztokem NaHCO₃ (50 ml). Po sušení Na₂SC>4 a odpaření ve vakuu byl zbylý olej chromatografován (silikagel, 5 % obj. ethylacetát/hexan) za rozdělení diastereomerů. Méně polární diastereomer, t-butyl ester (lR)-N-(2-benzyloxykarbonyl) propyl-L-leucinu (Rf 0,22, 5 % obj. ethyl acetat/hexan), a polárnější diastereomer, t-butyl ester (lS)-N-(2-benzyloxykarbonyl)propyl-L-leucinu (Rf 0,13), byly dále čištěny pomocí HPLC (5 % obj. ethyl acetat/hexan) za vzniku 1,1 g polárnějšího diastereomerů a 0,78 g méně polárního diastereomerů, MS(FAB): 364 (MH+).

B. Podobným způsobem z benzyl glycolatu (379 mg, 2,7 mmol), t-butyl esteru Lleucinu (435 mg, 2,7 mmol), 2,6-lutidinu (0,35 ml, 2,8 mmol), diisopropylethylaminu (0,53 ml, 0,28 mmol), a triflyl anhydridu (0,51 ml, 2,8 mmol) bylo získáno 383 mg (50 % hmotn.) t-butyl esteru N-benzyloxykarbonylmethyl-L-leucinu jako bezbarvého oleje, MS (FAB): 336 (MH⁺).

Příklad 40

Sloučeniny vzorce Io

A. K roztoku t-butyl esteru (1 S)-N-(2-benzyloxykarbonyl)propyl-L-leucinu (143 mg, 0,393 mmol) v dichlormethanu (3 ml) při 0 °C byla přidána TFA (0,5 ml).

Roztok byl míchán 4 hod při 25 °C a poté odpařen ve vakuu za vzniku soli (lS)-N-(2benzyloxykarbonyl)propyl-L-leucinu (sloučenina vzorce MM), která byla poté rozpuštěna v DMF (3 ml) s (10S)-10-amino-(9-oxo-l,8·· ···· ····

• · · • · · « · · · • · ·· · diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraenem (124 mg, 1,1 eq) a HOBT (80 mg, 1,5 eq). )Po ochlazení na 0 °C byl přidán N-methylmorfolin (60 ml, 1,5 eq) a EDCI (113 mg, 1,5 eq). Po 18 hod při 25 °C byla reakční směs zředěna 10 ml ethylacetátu, promyta nasyceným NaHCO3 (3x10 ml) a vodou (2x10 ml), sušena Na₂SO4 a odpařena. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu za eluce směsí (1 % obj. MeOH/CH₂Cl₂) a byly spojeny frakce s Rf 0,5 (5 % obj. MeOH/CH₂Cl₂).

HPLC na reverzní fázi poskytla (2R,l'S,10S)-2-[N(l-benzyloxykarbonyl)propylaminal-4-methyl-N-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo( 10,6,1,0¹³’¹⁸]nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl) pentanamid (46 mg), MS(FAB): 575 (MH⁺).

B. Podobným způsobem, ale záměnou t-butyl esteru (1R)-N(2-benzyloxykarbonyl)propyl-L-leucinu (270 mg) za t-butyl ester (lS)-N-(2benzyloxykarbonyl)propyl-L-leucinu byl získán (2R,l'R,10S)-2-(N-(lbenzyloxykarbonyl)propylaminol-4-methyl-N-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraen-10yl)pentanamid, (175 mg), MS(FAB): 575 (MEČ).

Příklad 41

Sloučeniny vzorce Ip

A. K roztoku (2R, l'S, 10S)-2-(N-( 1 -benzyloxykarbanyl)propylaminol-4-methyl-N(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13,(18), 14,16-tetraen-10yl)pentanamidu (46 mg) v THF/MeOH (1:1,2 ml) pod argonem byl přidán roztok 1 M hydroxidu barnatého (0,3 ml). Po 24 hod při 25 °C byl roztokem probubláván CO_{2 a}vyloučené krystaly uhličitanu barnatého byly odfitrovány. Rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku a pH bylo upraveno na hodnotu 5,5 pomocí 1 M HC1. Po odstranění vody a chromatografií na HPLC s reverzní fází byl získán (2R,l'S,10S)-2-(N'(lkarboxy)propylamino)-4-methyl-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl)pentanamid, jako bílá pevná látka, MS(FAB):

483 (M-H)-.

• · · · ·· ·

Podobně bylo připraveno:

(2RS, 10S)-2-(Karboxymethylamino)-2-cyklohexyl-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo (10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl)acetanamide, 497 (M+H)⁺.

(2RS, 10S)-2-(Karboxymethylamino)-3-methyl-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-yl)pentamid, 471 (M+H)⁺.

(2RS, 10S)-2-(Fosfonylmethylamino)-4-methyl-N-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl)pentamid.

B. Podobně byl z (2R, 1 'R, 10S)-2-(N'-( 1 -benzyloxykarbonyl)propylamino)-4methyl-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen10-yl)pentanamidu získán (2R, 1' S, 10S)-2-(N'( 1 -karboxy)propylamino)-4-methyl-N-(9oxo-1,8-diazatricyklo-( 10,6,1,0^13,18) nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10yl)pentanamid (16 mg), MS(FAB): 483(M-H)-.

C. Postupem jako při přípravě sloučeniny Io výše byl z t-butyl esteru

N-((benzyloxykarbonyl)methyl)-L-leucinu (156 mg, 0,465 mmol), HOBT (94 mg,

1,5 eq), EDCI (134 mg, 1,5 eq), N-methylmorfolinu (77 μΐ) a (10S)-10-amino-(9-oxo1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19),13(18),14,16-tetraenu (133 mg, 1 eq)po kolonové chromatografií (3 % obj. MeOH/dichlormethan) získán surový benzyl ester. Ten byl rozpuštěn ve směsi THF/MeOH (1:1,6 ml) a hydrolyzován 1 M hydroxidem barnatým (0,9 ml) přes noc. Roztokem byl probubláván oxid uhličitý a vzniklá sraženina byla odfiltrována. Filtrát byl odpařen a vodný zbytek byl okyselen na pH 5,5 pomocí 1 M HCI. Chromatografií na reverzní fázi HPLC byl získán (2R,10S)-N'(karboxymethyl)-amino-4-methyl-N- (9-oxo-l,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yl)pentanamid (17 mg) jako bílá pevná látka,

MS(FAB): 457 (MH⁺).

Příklad 42

Sloučeniny vzorce 6

Kyselina 4-methyl-2-methylenpentanová o?

Φ Φ Φ 4 I Φ Φ Φ φ φφ φφ φφφφ φφ φ φ φ φ φ φφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφ φ φφφ φ φ φφφ φφ φφ φ

A. Κ čistému ethyl isobutylmalonatu (25 g, 0,13 mol) při 0 °C byl pomalu přidán ledem vychlazený diethylamin (15,1 ml, 0,15 mol). Po 15 min míchání byl přikapán formalin (11,1 ml, 37 % obj. vodný formaldehyd). Směs byla míchána 3 dny při teplotě místnosti. Poté byla reagována s 20 g K₂CO₃ v 40 ml vody a extrahována etherem (2x100 ml). Etherové extrakty byly spojeny, promyty solankou, sušeny MgSC>4 a odpařeny za sníženého tlaku při 20 °C. Surový produkt, ethyl 4-methyl2-methylenpentanoat obsahující trochu etheru byl rozpuštěn v absolutním ethanolu (250 ml) a reagován s acetonitrilem (250 ml), 1 M LiOH (9,7 g v 250 ml vody,

0,23 mol). Po míchání přes noc byla organická rozpouštědla odpařena za sníženého tlaku a vodný zbytek byl extrahován ethylacetátem (2x150 ml). Spojené extrakty byly promyty solankou, sušeny nad MgSC>4 a odpařeny za sníženého tlaku za vzniku 10,5 g kyseliny 4-methyl-2-methylenepentanové jako bezbarvého oleje.

B. Podobně byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina 4-fenyl-2-methylenbutanová;

kyselina 3 -cyklohexyl-2-methylenpropanová;

kyselina 5-fenyl-2-methylenpentanová;

kyselina 2-methylenpentanová; a kyselina 3,3-dimethyl-2-methylenbutanová.

Příklad 43

Sloučenina vzorce Id (Reversní hydroxamát)

A. Roztok kyseliny 4-methyl-2-methylenopentanové (3,5 g) a

O-benzylhydroxylaminu byl zahříván 8 hod na 120 °C. Reakční směs byla extrahována mezi 50 ml 1 N NaOH a 50 ml etheru. Vodná vrstva byla oddělena, okyselena 10 % obj HC1 a promyta 50 ml etheru. Iontově výměnnou chromatogryfií (Dowex-50W) za eluce 20 % obj. pyridin/voda byla získána kyselina 2-(benzyloxyaminomethyl)4-methylpentanová.

• ···· · ·· ·· ···· ·· · ····»· · • · ····♦· • · · ·· · · ·· · · no · · · · · · t yj ·♦· · ··· ·· ·· ·

300 MHz 'HNMR v CDC1₃: 8 0,9-1,0 (dd, 6H, CH₃) ; 1,25-1,35 (m, 1H, CH); 1,6-1,75 (m, 2H, CH₂); 2,8-2,9 (m, 1H, C«-H); 3,0-3,2 (AB_q, 2H, CH₂N), 4,7-4,75 (AB_q, 2H,

CH₂O); 7,3-7,4 (m, 5H, Ph).

B. Formylace kyseliny 2-(benzyloxyaminomethyl)-4-methylpentanové byla prováděna v dichlormethanu s kyselinou mravenčí/acetanhydridem za vzniku kyseliny N-formyl-2-(benzyloxyaminomethyl)-4-methylpentanové.

Kapling se sloučeninou vzorce J: Ke kyselině N-formyl-2-(benzyloxyaminomothyl)4-methylpentanové (175 mg) a J (230 mg) v 5 % obj. pyridin/dichloromethan (30 ml) byl přidán 4-dimethylaminopyridin (DMPA) (200 mg) a l-(3-dimethylaminopropyl)-3ethyl-karbodiimid hydrochlorid (EDCI) při teplotě místnosti. Reakční směs byla míchána 8 hod a opařena, extrahována mezi 30 ml ethylacetátu a 30 ml 20 % obj. HC1. Organická vrstva byla promyta vodou (20 ml), 5 % bmotn. roztokem NaHCOj (201) a solankou, sušena MgSO4 a odpařena. Čištěním na silikagelu zy eluce směsí 50 % obj. ethylacetát/hexan byl získán produkt jako směs isomerů. Hydrogenolýzou v MeOH nad 10 % hmotn. Pd/C byl získán (2RS, 10S)2-(N-formyl, N-hydroxyaminomethyl)4-methyl-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19)13(18), 14,6-tetraen10-yl)pentamid, jako směs dvou isomerů, MS 455 (M-H)', (Sloučenina vzorce 6) .

Pdobně byl připraven;

(2RS, 10 S)-2-(iso-propoxykarbonylmethyl)-4-methyl-(9-axo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19) 13(18), 14,6-tetraen-10-yl)pentamid,

MS: 455 (M+H)⁺· (2RS, 10S)-2-(morfolinokarbethoxymethyl)-4-methyl-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19) 13(18),14,6-tetraen-10-yl)pentamide,

MS: 555 (M+H)⁺.

Příklad 44

Sloučenina vzorce Iq

A. Příprava sloučeniny vzorce (PP)

Ke směsi t-butyl esteru kyseliny 2-(fthalimid-2-ylmethyl)-3(R)-isobutyljantarové (3,4 g), N-methylmorfolinu (1,92 ml), 1-hydroxybenzotriazolu (1,3 g) a (10S)-10-amino-(9-oxo»··· ·· ···· • · · «· · · · · · • · ······ • · · 9 9 9 9 99 9 9 η λ ♦ · · · · 9 · ·♦·· ····· 99 9 í,8-diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadekal2(19),13(18),14,16-tetraenu (2,49 g) v suchém DMF (200 ml) při 0 °C bylo přidáno EDCI (3,34 g). Vzniklá směs byla míchána přes noc za ohřívání na teplotu místnosti a rozpouštědlo bylo odstraněno za vysokého vakua při 45 °C. Zbytek byl míchán se směsí ethylacetát (300 ml) a 0,5 N HC1 (150 ml).

Organická vrstva byla promyta 0,5 N HC1 (2x1501), nasyceným roztokem NaHCO₃(2x150 ml) a solankou (1x150 ml). Po sušení organické vrstvy nad MgSO₄ byl roztok odfiltrován a odpařen do sucha. Čištěním zbytku pomocí kolové chromatografie byl získán t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-2-(fthalimid-2-ylmethyl)5-methyl-3- (9-oxo-l,8diaza-tricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸)nonadekal 2( 19), 13( 10), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové (4,81 g). Tato sloučenina byla získána jako 2,96 g méně polárního diasteroisomeru, 1,05 g polárnějšího diasteroisomeru a 0,8 g směsi těchto dvou izomerů.

B. Příprava sloučeniny vzorce Iq:

K roztoku méně polárního izomeru sloučeniny vzorce PP, připravené v 42A (2,96 g) v methanolu (50 ml) a dichlormetanu (50 ml) byl při teplotě místnosti přidán hydrazin (2,8 ml). Směs byla míchána přes noc, poté bylo přidáno 200 ml dichlormethanu a 300 ml methanolu a silikagel. Rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku a zbytek silikagelu, na kterém byla adsorbována látka byl převeden na silikagelovou kolonu a byl chromatografován. Po eluci směsí 4 % obj. methanol/dichlormetan bylo získáno 2,01 g t-butyl esteru kyseliny (3R,10S)-2-(aminomethyl)-5-methyl-3- (9-oxo1.8- diaza-tricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka 12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanové (4,81 g).

C. Hydrolýzou esteru kyselinou trifluoroctovou, jak je uvedeno níže, byla získána kyselina (3R, 10S)-2-(aminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(l 0,6,1,0^13,1S) nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-lOylkarbamoyl) hexanová, MS 471 (MH^4-).

Příklad 45

Sloučenina vzorce Ir

A. K roztoku t-butyl esteru kyseliny (3R, 10S)-2-(aminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diaža-tricyklo (10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19) 13 (18), 14,16-tetraen• ·»·· 4 99 44 4444 • · 4 4444 44 4 • 4 444444

4 4 44 44 4444 _nr 44 44444

444 4 444 44 44 4

10-ylkarbamoyl)hexanové (363 mg) a triethylaminu (0,54 ml) v suchém dichlormethanu (20 ml) při 0 °C byl přidán methansulfonyl chloride (77 μΐ). Vzniklá směs byla míchána 2 hod , poté byla temperována na teplotu místnosti, a za míchání byl přidán dichlormethan (100 ml) a 0,5 N HC1 (50 ml). Vodná vrstva byla extrahována dichlormethanem (2x75 ml), spojené organické vrstvy byly promyty solankou (100 ml).

Po sušení organické vrstvy nad MgSC>4 byl roztok filtrován a odpařen do sucha.

Čištěním zbytku kolonovou chromatografií (20-30 % obj. ethylacetát/dichlormethan) byl získán t-butyl ester kyseliny (3R,10S)-2-(methylsulfonamidoaminomethyl)5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diaza-tricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka 12(19),13(18),14,16tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanové jako bílá pevná látka (211 mg).

B. K roztoku sloučeniny získyné v A (180 mg) v methylen chloridu (4 ml) při 0 °C byla přidána kyselina trifluoroctová (2 ml). Směs byla míchána 5 hod za temperování na teplotu místnosti. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, ke ubytku byl přidán ethylacetát a roztok byl promyt vodou (7x30 ml). Organická vrstva byla sušena nad MgSO4, filtrována a odpařena do sucha. Krystalizací zbytku ze směsi methanol/ethylacetát/hexan byla získána kyselina (3R,10S)2-(methylsulfonamidoaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diaza-tricyklo(l 0,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12( 19), 13 (16), 14,16-tetraen 10-ylkarbamoyl)hexanová j ako bílá pevná látka (129 mg).

C. Podobně byly získány následující sloučeniny vzorce Ir:

kyselina (3R, 10S)-2-(methoxykarbonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo (10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18),14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová, MS 527,5 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(ethoxykarbonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo (10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18),14, 16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová,

MS: 541,5 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(methansulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19), 13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexalnová, MS 549,2 (M-H⁺);

···· ···

• ·· ·· · ·· « · · ♦ · • · · · · · • · · · ··· · • · · · ·

9 99 99 9 kyselina (3R, 10S)-2-(ethansulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-díazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexanová, MS: 563 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(trifluoromethansulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8diazatricyklo-( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová, MS: 603,3 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(fenylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová,

MS: 611,1 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(benzylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12 (19),13 (18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl) hexanová, MS: 625,2 (M-H⁺);

kyselina (3R,10S)-2-(5-(2-pyridyl)thiofen-2-ylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo- (10,6,l,0^13,18)nonadeka-12 (19),13 (18),14,16 tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová, MS: 692,4 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(thien-2-ylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8diazatricyklo( 10,6,1,0¹³¹⁸) nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 617,5 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(2-fenylvinylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo(10,6,l,0^I318)nonadeka-12 (19) 13 (18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 637,6 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(l-azanafthyridin-8-ylsulfonamidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo-( 10,6,1,0^13,18)nonadeka-12(19), 13(18),14,16-tetraen 10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 549,2 (M-H⁺);

kyselina (3R, 10S)-2-(3-ethylureidomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(l 0,6. l,0^13,18)nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová, MS: 542,34 (M-H⁺); a ·· · 9999 99 9 · · 999 999 • 9 9 99 9 · 9999 ·^:· ί :

kyselina (3R, 10S)-2-(acetylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6. 1. 0^13,18)nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen- 10ylkarbamoyl)hexanová, MS: 512 (M-H+);

kyselina (3R, 10S)-2-(8-chinolinsulfonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo (10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18),14, 16-tetraen1 Oylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(5-benzoylaminomethyl-thien-2-yl)sulfonylaminomethyl-5-methyl3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19), 13 (18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(N-methyl-imidazol-2-ylsulfonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18),14, 16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová, MS: 612,7 (M-H)';

kyselina (3R, 10S)-2-(5-pyridin-2-yl-thien-2-ylsulfonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo(10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19) 13 (18), 14,16-tetraen-10ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(benzylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo (10,6,1. 0^13,18)nonadeka-12 (19) 13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(fthalimid-2-ylmethyl-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka-12 (19),13 (18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(N-fthalimid-2-ylmethyl-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo (10,6,1,0^13,18) nonadeka-12 (19),13 (18) 14,16-tetraen-1 Oylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R, 10S)-2-(methansulfonylaminomethyl)-4-cyklopentyl-3-(9-oxo-1,8diazatricyklo (10,6,l,0¹³¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18),14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)butanová; a kyselina (3R,10S)-2-(fenylethylsulfonylaminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8diazatricyklo(10,6,l,0¹³’¹⁸)nonadeka-12 (19),13 (18) 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanová.

···· • · · · · ·

• · · • · · • · · · • · n ·

Podobně se připraví:

kyselina (3R,9S)-2-(methansulfonamidomethyl)-4-cyklopentyl-3-(8-oxo-1,7diazatricyklo(9,6,1,0^{12> 17})oktadeka-11(18),12(17),13,15-tetraen9-ylkarbamoyl)butanová.

Příklad 46

Sloučenina vzorce mm

K roztoku N-t-butoxykarbanyl-L-tryptofanu (128 g, 0,42 mol),

2-(2-aminoethoxy)ethanolu (46,42 g, 0,44 mol), 1-hydroxybenzotriazolu (60,0 g,

0,44 mol) v 700 ml DMF při 0 °C byl přidán DCC (100 g, 0,48 mol). Po 15 min míchání při 0 °C byla směs míchána přes noc při teplotě místnosti. Bílá pevná látka byla odfiltrována a promyta ethylacetátem. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do etheru a malého množství ethylacetátu, promyt 1 % obj. HC1 (3x500 ml), nasyceným roztokem NaHCCb (3x500 ml) a solankou (3x500 ml). Organická vrstva byla sušena nad MgSO4, odfiltrována a odpařena za vzniku

2-(S)-t-butoxykarbonylamino-N-(2-(2-hydroxy-ethoxy)ethyl)-3-(lH-indol-3yl)propionamid, 150 g (výtěžek 91 % hmotn.) MS: 392,2 (M+H)⁺.

Příklad 47

Sloučenina vzorce nn

Ke sloučenině získané v Příkladu 46 (50 g, 0,128mol) a N,N-dimethylpyridinu (200 mg,

%) v 250 ml triethylamin/dichloromethan (1/4) při 0 °C byl přidán p-toluensulfonyl chlorid (29 g, 0,15 mol). Směs byla míchána 4 hod při 0 °C. Rozpouštědlo bylo odstraněno při 0 °C za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do ethylacetátu a 1 N HC1 a přenesen do dělící nálevky. Organická vrstva byla oddělena a opakovaně promyta % obj. HC1 dokud nebylo pH vodné vrstvy 2 a nasyceným roztokem NaHCO3 a solankou, organická vrstva byla sušena a odpařena za vzniku 60 g (86 % hmotn.)

2- (S)-t-butoxykarbonylamino-2-N-(2-(2-4'-methylfenylsulfonyloxy)-ethoxy)ethyl)3- (lH-indol-3-yl)-propionamidu, MS: 545 (M⁺).

······ · • · · · · · • · · · ··· · • · · · · ·· · ·· ·· ·

Příklad 48

Sloučenina vzorce oo

Ke sloučenině získané v Příkladu 47 (30 g, 0,055 mol) v CH2CI2 (700 ml) byl přidán 50% NaOH (200 ml) a tetra-n-butylamonium hydrogen sulfát (20,54 g, 0,06 mol). Směs byla míchána při teplotě místnosti 1 hod. Organická vrstva byla izolována, promyta solankou a sušena. Po odstranění rozpouštědla byl surový produkt čištěn kolonovou chromatografií (5 % obj. aceton/EtOAc) a rekrystalizován ze směsi ether/hexan za vzniku 4,4 g (21 % hmotn.) t-butoxy-karbonylamino-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka-ll(16),12,14,16-tetraen-8-one, MS: 374 (M+H)⁺, t.t.

177,5-178 °C, [oc]d⁼-0,852 (MeOH, c=0,983 g/lOOml).

Příklad 49

Sloučenina vzorce ff

Ke sloučenině získané v Příkladu 48 (15 g, 0,04 mol) při 0 °C byla přidána směs 40% TFA/CH2CI2 (50 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti 3,5 hod. Rozpouštědla byla odstraněna za sníženého tlaku. Ke zbytku byl přidán toluen (50 ml) a rozpouštědlo bylo znovu odstraněno. Tento postup byl dvakrát opakován. Zbytek byl sušen ve vakuu přes noc a extrahován mezi EtOAc/1 N NaOH. Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována EtOAc (3x100 ml) a spojené EtOAc vrstvy byly promyty 1 N NaOH (3x100 ml) a solankou (1x100 ml). Rozpouštědlo bylo sušeno MgSO4 a odpařeno za vzniku 11 g (100 % hmotn.) 9-(S)-amino-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka1 l(18),12,14,16-tetraen-6-onu.

Příklad 50

Sloučenina vzorce gg

A. Ke kyselině 4-pentenové (28 g, 0,28 mol) v 11 suchého THF při -78 °C byl přidán ΕΐβΝ (52,6 ml, 0,38 mol). Poté byl přikapán pivaloyl chlorid (42.S mL, 0,32 mol). Po dokončení přidávání byla směs ohřátá na 0 °C a znovu ochlazena na -78 °C.

V oddělené baňce byl k S-4-benzyl-2-oxazolidinonu (43 g, 0,24 mol) v suchém THF (1 1) při -78 °C přidán trifenylmethan (20mg) jako indikátor. Dokud trvala žlutá barva, ···· • · ····

100

byl přikapáván roztok n-buli v hexanu (1,6 M). Roztok byl míchán dalších 30 min. Poté byl pomalu převeden do směsi anhydridu (viz. výše) a míchán 1 hod. Reakční směs byla rozložena 500 ml zředěného roztoku NH4CI. THF byl odpařen a zbylý roztok byl extrahován etherem (3x500 ml). Spojené etherové vrstvy byly sušeny nad MgSO₄ a odpařeny za vzniku 64,9 g (S)-4-benzyl-3-pent-4-enoyl-oxazolidin-2-onu,

MS: 259 (M⁺).

Β. K (S)-4-benzyl-3-pent-4-enol-oxazolidin-2-onu (64,9 g, 0,25 mol) v suchém THF (700 ml) při -78 °C byl přikapán bis(trimethylsilyl)amid sodný v THF (1,0 M,

275 ml, 0,28 mol). Po další hodině míchání při -78 °C byl přikapán t-butylbrom acetát (44,3 ml, 0,30 mol). Směs byla míchána 4 hod při -78 °C a poté byla rozložena 200 ml zředěného roztoku NH₄C1. THF byl odpařen a zbylý roztok byl extrahován etherem (3x300 ml). Etherové vrstvy byly promyty solankou (200 ml), sušeny a odpařeny při získání 109,7 g surového produktu. Po čištění kolonovou chromatografií (5 % obj. aceton/hexan) bylo získáno 41,3 g čistého terc-butyl esteru kyseliny (R)-3-(S-4-benzyl2-oxo-oxazolidin-3-karbonyl)hex-5-enové, MS: 373 (M⁺).

C. K terc-butyl esteru kyseliny (R)-3-(S-4-benzyl-2-oxo-oxazolidin-3-karbonyl)hex-5-anové (25 g, 0,067mol) v 300 ml THF/voda (1/1) při 0 °C byl přidán hydroxid lithný (11,25 g, 0,268 mol) a peroxid vodíku (30 % , 31,1 ml, 0,268 mol). Po 20 min míchání při 0 °C byla reakční směs míchána 2 hod při teplotě místnosti. THF byl odpařen a zbylý roztok byl okyselen na pH 2, nasycen NaCl a extrahován EtOAc (2x150 ml). Spojené EtOAc vrstvy byly extrahována 10 % hmotn. K2CO3 (4x30 ml). Spojené K2CO3 vrstvy byly promyty etherem (2x100 ml). Ke zbylému roztoku K2CO3 byl přidán EtOAc (200 ml) a roztok byl při 0 °C okyselen na pH 2. Po nasycení NaCl byly dvě vrstvy odděleny. Vodná vrstva byla extrahována EtOAc (3x100 ml). Spojené EtOAc extrakty byly odpařeny za vzniku 4-t-butyl esteru kyseliny 2-(R)-allyl-jantarové, MS: 215 (M+H⁺).

Příklad 51

Sloučenina vzorce hh

K roztoku 4-t-butyl esteru kyseliny 2-(R)-allyl-jantarové (5 g, 0,00234 mol), 9-(S)amino-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka 11(18),12,14,16-tetraen-8-onu • · · · • ·· ·

(6,38 g, 0,00234 mol) v 50 ml DMF byl přidán HOBT (3,47 g, 0,026 mol) , DMAP (80 mg), N-methylmorfolin (2,84 g, 0,028 mol), a EDCI (6,69 g, 0,035 mol) . Směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs byla zředěna EtOAc (300 ml) a promyta solankou (2x100 ml), nasyceným NaHCO, (2x100 ml) a solankou (1x100 ml) a sušena MgSO4. Po odpaření rozpouštědel bylo získáno 9 g surového produktu. Po kolonové chromatografii (50 % obj. EtOAc(dichlormethan) bylo získáno 7,5 g čistého tbutyl esteru kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18) 12, 14,16 tetraen-9-yl karbamoyl)-hex-5-enové, MS: 469(M⁺).

Příklad 52

Sloučenina vzorce ii

Sloučenina získaná v Příkladu 51 (1,5 g, 3,2 mmol), m-iodfenol (0,70g, 3,2 mmol), NaHCC>3 (0,672 g, 8 mmol), n-tetrabutylammonium chlorid (0,89 g, 3,2 mmol) a Pd(OAc)2 (72 mg) v 10 ml DMF byla 15 min zahřívána na 90 °C. Roztok byl zředěn 50 ml EtOAc a promyt solankou (4x25 ml), sušen a odpařen. Surový produkt byl čištěn kolonovou chromatografii (50 % obj. EtOAc/dichlormethan) za vzniku 1,5 g t-butyl esteru kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(3-hydroxyfenyl)-hex-5-enové,

MS: 562,4 (M+H)⁺.

Příklad 53

Sloučenina vzorce Iv'

Sloučenina získaná v Příkladu 52 (1,5 g) v 40 ml EtOH byla hydrogenována 1,4 g Pd/C (kat.) 12 hod. Roztok byl filtrován přes křemelinu, promyt EtOH (10 ml). Filtrát byl odpařen za vzniku 1,34 g (89 % hmota.) t-butyl esteru kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa1,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6(3-hydroxyfenyl)-hexanové, MS: 564,2 (M+H)⁺.

• ···· · ·· ·· ···· • · · ·«···· · • · ······ • · · * · ·· ···· 102 ··· · *·· ·· ·· *

Příklad 54

Sloučeniny vzorce Iv

Sloučenina získaná v Příkladu 53 (1,34 g, 0,0024 mol) a thioanisol (2,58 g, 0,024 mol) v 15 mm 30 % TFA/CH₂C1₂ byli míchány 1,5 hod při teplotě místnosti. Rozpouštědla byla odpařena. Ke zbytku byl přidán toluen a byl znovu odpařen za sníženého tlaku. Aby se odstranily zbytky TFA, byl tento postu opakován několikrát. Pevný zbytek byl 10 min míchán v horkém EtOAc (10 ml), ochlazen na teplotu místnosti a odfiltrován a promyt etherem za vzniku 400 mg čisté kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka 11(18),12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)6-(3-hydroxyfenyl)-hexanové, MS: 508,2 (M+H)+.

Podle postupů popsaných v Příkladech 51 až 54 byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17) oktadeka-1 l(18)12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl) hexanová, MS: 562,2 (M-H)-;

kyselina (3R,9S)-6-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17) oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová, MS: 520,1 (M⁺);

kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0^12,17) oktadeka (18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamayl)-6-(4-(3-piperidin-l-yl-propoxy)fenyl)hexalnová, MS: 631,1 (M-H');

kyselina (3R,9S)-6-(4-(3-dimethylamino-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová,

MS: 591,1 (M-H');

kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-dimethylamino-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová,

MS: 577,1 (M-H');

kyselina (3R,9S)-6-(4-kyano-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová,

MS: 515,1 (M-H');

kyselina (3R,9S)-6-nafíalen-2-yl-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷) oktadeka-ll(l8),12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová, MS: 542,3 (M+H⁺);

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)-6-(4-pyrrol-i-yl-fenyl)-hexanová,

MS: 557 (M+H)⁺;

kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-3-methyl-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)hexanová, MS: 522,3 (M+H⁺);

kyselina (3R,9S)-6-(4-amino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷) oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)-hexanová, MS: 505,1 (M-H');

kyselina (3R,9S)-6-(4-acetylamino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷) oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)-hexanová, MS: 547,8 (M-H-);

kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-hydroxy-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18), 12,14, 16-tetraen-9-yl-karbamayl) hexanová,

MS: 550,1 (M-H-); a kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka

11(18), 12,14,16-tetraen-9-yl-karbamoyl)-6-(4-(2-pyrrolidin-1 -yl-ethoxy)fenyl)hexanová, MS: 605,5 (M+H+).

Příklad 55

Sloučeniny vzorce Is & It

A. K roztoku 4-t-butyl esteru kyseliny 2-(R)-isobutyljantarové (317 mg,

1,45 mmol), 9-amino-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17) oktadeka 11(18), 12,14,16tetraen-8-onu (330 mg, 1,21 mmol) v 30 ml DMF byl přidán HOBT (163 mg,

1,2 mmol), DMAP (50 mg), N-methylmorfolin (0,16 ml. 1,45 mmol), a EDCI (348 mg, 1,8 mmol). Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Po odstranění DMF za sníženého tlaku byl zbytek převeden do EtOAc (60 ml) a solanky (20 ml). Organická vrstva byla promyta solankou (2x50 ml) a nasyceným roztokem NaHCO3 (2x50 ml) a sušena. Po odpaření rozpouštědla byl surový produkt čištěn kolonovou chromatografií • · · · ·· ····

104 .........

(30-50 % obj. EtOAc/dichlormethan) za vzniku 466 mg čistého t-butyl esteru kyseliny (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadekal 1(18)12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)-hexanové.

B. t-Butyl ester sloučeniny získané v předchozím kroku (460 mg, 0,9 mmol) byl míchán v 15 ml TFA/dichlormethan při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno. Ke zbytku byl přidán dichlormethan a odpařen. Aby byly odstraněny zbytky TFA, tento postup se opakoval několikrát. Zbytek byl krystalizován ze směsi EtOAc/dichlormethan/hexan (4:1:3) za vzniku 100 mg kyseliny (3R,9S)-5-methyl-3-(8oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11 (18) 12,14,16-tetraen-9ylkarbamoyl)-hexanové, teplota tání 193-194 °C.

Podobně byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina (3R,9S)-3-cyklobutylmethyl-N-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18) 12,14,16-tetraen-9-yl)-succinamová,

MS: 456,2 (M+H)⁺;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadekall(18)12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenoxy-pentanová, MS: 493 (M⁴);

kyselina (3R,9S)-5-(4-chlor-fenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka-1 l(18)12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)pentanová, MS: 526,3 (M-H-);

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11(18)12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová, t.t. 190-193 °C;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷)oktadeka1 l(18)12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)-5-fenyl-pentanová, MS: 478,3 (M+H)⁺;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka11(18)12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)-6-fenyl-hexanová, MS: 492,3 (M+H)⁴; a kyselina (3R,9S)-5-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18) 12,14,16-tetraen-9-yl karbamoyl)pentanová,

MS: 508 (M+H)⁺.

···· •τ · ······ : ·* . :::.

105 ··· ^;

Příklad 56

Sloučeniny vzorce Iu t-Butyl ester kyseliny (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diazatricyklo(9,6,1,0^{12> 17})oktadeka-11(18)12,14,16-tetraen- 9-ylkarbamoyl)-hexanové (1,56 g, 2,5 mmol) byl rozpuštěn v 50 ml EtOH nasyceného HC1. Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo bylo odpařeno a surový produkt byl čištěn kolonovou chromatografií (50-80 % obj. EtOAc/dichlormethan) za vzniku 0,88 g (59 % hmotn.) čistého ethyl esteru kyseliny (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka-ll(16) 12,14, 16-tetraen9-ylkarbamoyl)-hexanové, MS: 594,0 (M+H)⁺.

Podobně byly připraveny následující sloučeniny:

ethyl ester kyseliny (3R,9S)-5-(4-chlor-fenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,l,0^{12 l7})oktadeka-ll (18) 12,14, 16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-pentalnové, MS: 556,3 (M+); a ethyl ester kyseliny (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷)oktadeka 11(18)12,14,16-tatraen-9-ylkarbamayl)-5-fenoxy-pentanové, MS: 521 (M⁺).

Příklad 57

Sloučeniny vzorce Iw

A. K t-butyl esteru kyseliny (3R,9S)-6-(4-hydroxyfenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7diazatricyklo(9,6,l,0¹²’^l7)oktadeka-ll(18) 12, 14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanové (1,0 g, 1,72 mmol) v DMF (20 ml) při 0 °C byl přidán 3-iodpropanol (363mg,

1,95 mmol) a uhličitan česný (636 mg, 1,95 mmol). Směs byla míchána 2,5 hod při teplotě místnosti. DMF byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl extrahován mezi EtOAc (70 ml) a solanku (40 ml). EtOAc vrstva byla promyta solankou a sušena MgSOzj. Po odstranění rozpouštědla byl získán t-butyl ester kyseliny (3R,9S)-6-(4(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18) 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanové (1,1 g, 100 % hmotn.).

MS: 622,4 (M+H⁺).

• · ·♦· φ

106

ΦΦΦ·

Φ· φφφφ ·· · 9 99 • 9 9 9 9 Φ • · · · ΦΦΦ φ

9 9 9 9

999 99 ΦΦ φ

Β. Sloučenina získaná v předchozím kroku byla poté převedena na odpovídající kyselinu (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxypropoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²‘¹⁷)oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanovou, pomocí postupu popsaného v Příkladu 55B. Vzniklá sloučenina měla MS: 564,9 (M-H-) a 566,1 (M+H⁺).

Podobně byly připraveny následující sloučeniny:

kyselina (3R,9S)-6-14-(2-methoxy-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0^12,17)oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová,

MS: 564,2 (M-H-);

kyselina (3R,9S)-6-(4-benzyloxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9,6,1,0¹²¹⁷) oktadeka-11(18) 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová, MS: 598,3 (M+H⁺);

kyselina (3R,9S)-6-(4-(4-amino-butoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6. l,0^12,17) oktadeka-1 l(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová, MS: 579,3 (M+H⁺); a kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)loktadeka-l 1(18),12,14, 16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-(pyridin-4-ylmethoxy)-fenyl) hexanová, MS: 599,2 (M+H), teplota tání 169,5-171,2 °C.

Příklad 58

Sloučeniny vzorce I, kde man jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je hydroxyaminokarbonyl

Kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl)-hexanová byla kaplována s O-benzylhydroxyaminem podle postupu popsaného v Příkladu 36 za vzniku (3R,9S)N-benzyloxy-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18) 12,14,16tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyrÍdin-4-yl)-hexanamidu. Podle postupu popsaného v Příkladu 37 byla tato sloučenina dále převedena na (3R,9S)-N-hydroxy-3-(8-oxo-4oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,⁰¹²’17)oktadeka-ll(18) 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6pyridin-4-yl)-hexanamid, MS: 506 (M+H)⁺; teplota tání: 224-225 °C.

9999

9 • 9 · ·

9 9

999 9

9

Příklad 59

Soli sloučeniny vzorce I

Kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²¹⁷)oktadeka11 (18), 12( 17), 13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová byla převedena na odpovídající kyselinu trifluoroctovou pomocí míchání sloučeniny v 15 % obj. TFA v dichlormethanu 15 min. Rozpouštědlo bylo odpařeno. Ke zbytku byl přidán dichlormethan a byl znovu odpařen.Produkt měl teplotu tání 158-160 °C.

Podobně byly připraveny následující sloučeniny:

trifluoracetát kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12(17),13,15-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanové;

trifluoracetát kyseliny (3R, 10S)-3-(9-oxo-l ,8-diaza-tricyklo(l0,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-6-pyridin-3-yl-hexanové; a trifluoracetát kyseliny (3R, 10S)-3-(9-oxo-l ,8-diaza-tricyklo(10,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanové.

Příklad 60

Převedení soli sloučeniny vzorce lna odpovídající volnou bázi (3R, 9S)-Ethyl-3-(8-oxo-4-oxa-l 7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka 11(18), 12,14,16tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanoát hydrochlorid byl míchán ve směsi dichlormethen/nasycený Na₂CO₃10 min. Organická vrstva byla oddělena, sušena a odpařena. Surový produkt byl krystalizován za směsi dichlormethan/hexan za vzniku (3R,9S)-ethyl-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanoatu, teplota tání 203-205 °C.

Příklad 61

Tento příklad popisuje přípravu representativního farmaceutického prostředku pro orální podávání, obsahujícího sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např.

(3R, 10S)-N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10,6,1,^0113,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid:

9999 «9·9

108	• 9999 9 ·« ♦· * 99 9 9 • · 9 9 9 • · * 9 · · » • · 9 9 9 •99 · 999 99
A.
Složky	% hmotn./hmotn.
Sloučenina vzorce I	20,0 %
Laktosa	79,5 %
Stearát hořečnatý	0,5 %
Výše uvedené složky se smísí a rozdělí do silnopouzdré želatinové kapsle, každá obsahuje 100 mg, jedna kapsle je přibližně celková denní dávka.
B.
Složky	% hmotn./hmotn.
Sloučenina vzorce I	20,0 %
Stearát hořečnatý	0,9 %
Škrob	8,6 %
Laktosa	79,6 %
PVP (polyvinylpyrrolidin)	0,9 %
Výše uvedené složky kromě stearátu hořečnatého se spojí a granulují za použití vody jako granulující kapaliny. Forma se poté suší, smísí se stearátem hořečnatým a tvaruje do tablet pomocí vhodného tabletovacího stroje.
C.
Složky
Sloučenina vzorce I	0,1 g
Propylenglykol	20,0 g
Polyethylenglykol 400	20,0 g

···♦

109	· · · ··· ·
Polysorbát 80	1,0 g
Voda	do 100 ml

Sloučenina vzorce I se rozpustí v propylenglykolu, polyethylenglykolu 400 a polysorbátu 80. Poté se za míchání přidá potřebné množství vody a získá se 100 ml roztoku, který se filtruje a uskladní do lahve.

D.

Složky	% hmotn./hmotn.
Sloučenina vzorce I	20,0 %
Arašídový olej	78,0 %
Spán 60	2,0 %

Výše uvedené složky se rozpustí, smísí a naplní do měkkých elastických kapslí.

Příklad 62

Tento příklad popisuje přípravu representativnho farmaceutického prostředku pro parenterální podávání, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např. (3R,llS)-N-hydroxy-5-methyl-3-(10-oxo-l,9diazatricyklo( 11,6,1,0^14,19)eikosa-13(20), 14( 19), 15,17-tetraen1 l-ylkarbamoyl)hexanamid:

Složky

Sloučenina vzorce I	0,02 g
Propylenglykol	20,0 g
Polyethylenglykol 400	20,0 g
Polysorbát 80	1,0 g

0,9 % Solný roztok do 100 ml

110

Sloučenina vzorce I se rozpustí v propylenglykolu, polyethylenglykolu 400 a polysorbátu 80. Poté se za míchání přidá potřebné množství 0,9 % solného roztoku a získá se 100 ml I. V. roztoku, který se filtruje přes 0,2 μ membránový filtr a skladuje za sterilních podmínek.

Příklad 63

Tento příklad popisuje přípravu representativního farmaceutického prostředku v čípkové formě, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např.

(10S)-2-merkaptomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-1,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0¹³’¹⁸)nonadeka12( 19), 13( 10), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)pentanamid:

Složky % hmotn./hmotn.

Sloučenina vzorce I 1,0 %

Polyethylenglykol 1000

Polyethylenglykol 4000

74,5 %

24,5 %

Složky se společně rozpustí a smísí na parní lázni a nalijí do formy obsahující celkem 2,5 g.

Příklad 64

Tento příklad popisuje přípravu representativního farmaceutického prostředku pro insuflaci, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např. kyseliny (10S)-4-methyl-2-(9-oxo-1,8-diazatricyklo-(l 0,6,1,0^13,18)nonadeka12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)pentyl-(chinolin-2-ylthiomethyl)fosfinové:

Složky % hmotn./hmotn.

Mikronizovaná sloučenina vzorce I 1,0 %

Mikronizovaná laktosa 99 %

Složky se rozemelou, smísí a balí do insuflátoru, který je vybaven dávkovači pumpou.

	• ··· · ,, »«»« ·· » ···♦·· • · ··«·♦» * * · ·· ·· ····
111	·. · ♦ · · · · ··· * ··♦ ·· ·· «
Příklad 65

Tento příklad popisuje přípravu representativního farmaceutickho prostředku pro nebulizační formu, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např. (3R, 10S)N-hydroxy-5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo(10,6,1,0¹³¹⁸)nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanamid.

Složky	% hmotn./hmotn.
Sloučenina vzorce I	0,005 %
Voda	89,995 %
Ethanol	10,0 %

Sloučenina vzorce I se rozpustí v ethanolu a smísí s vodou. Prostředek se poté balí do nebulizátoru, který je vybaven dávkovači pumpou.

Příklad 66

Tento příklad popisuje přípravu representativního farmaceutického prostředku pro aerosolovou formu, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl, např. (3R, 1 lS)-N-hydroxy-5-methyl-3-(10-oxo-l,9diazatricyklo( 11,6,1,0^14,19)eikosa-13(20), 14( 19), 15,17-tetraen1 l-ylkarbamoyl)hexanamid:

Složky	% hmotn./hmotn.
Sloučenina vzorce I	0,10 %
Propelant 11/12	98,90 %
Kyselina olejová	1,00%

Sloučenina vzorce I se disperguje v kyselině olejové a propelantech. Vzniklá směs se naplní do aerosolové nádoby opatřené dávkovacím ventilem.

Φ φ

ΦΦΦ φ

112 ·· ···· φ · Φ·

Příklad 67

In vitro test

Fibrioblast kolagenázy typu I byl čištěn od nosiče kultury bez sera buněk GM0010A, stimulovaných PMA, pomocí heparinu a zinek chelatující sefarozové kolony a následovala FPLC na MONO S koloně. Enzym byl aktivován inkubací s trypsinem.

Kolagenáza typu IV byla čištěna od sérum obsahujícího nosiče kultury buněk fibrioblástu (GM0010A) pomocí zinek chelatující a želatinové-sefarozové kolony a následovala FPLC na MONO S koloně. Enzym byl aktivován inkubací s 1 mmol ΑΡΜΑ po dobu 1 hodiny při 35 až 37 °C.

Sloučeniny vzorce I byly rozpuštěny v DMSO a přidány do kyvety obsahující 0,2 pg kolagenázy Typu I nebo 0,03 pg kolagenázy Typu IV v 1 ml TC pufru (20 mM Tris, mM CaCh, pH 7,5) (2 % konečná koncentrace). Koncentrace sloučenin vzorce I byly zvoleny tak, aby existoval nejméně jeden údaj pro každou 20 % změnu v aktivitě.

Enzym a sloučeniny byly podrobeny pre-inkubaci při 37 °C 3 minuty. Pro iniciaci reakce bylo přidáno N-(7-dimethylamino-4-methyl-3-kumarinyl)maleimid („DACM“) (Sigma) a thiopeptid (Ac-Pro-Leu-Gly-S-Leu-Leu-Gly-OEt, Bachem Bioscience lne.), vždy 20 pM. Růst fluorescence byl zaznamenán při excitačních a emisních vlnových délkách 395 a 485 nm v tomto pořadí. Všechny údaje jsou průměrnými hodnotami dvou pokusů. Nejméně šest údajů uvádí jak byly analyzovány změny ve fluorescenci za minutu proti koncentraci sloučeniny za použití IC50 programu, Enzfitter.

Jak prokázal tento test, sloučeniny vzorce I vykazují schopnost inhibovat kolagenázy.

Příklad 68

In vitro test

Tento test stanovuje, jestli sloučeniny vzorce I inhibují uvolňování S-značený glykosaminoglykan (GAG) z chrupavkových explantátů.

Malé chrupavkové explantáty (3 mm průměr) byly připraveny z čerstvých kolenních kloubů hovězího dobytka a označeny ³⁵SO₄.³⁵S-značený glykosaminoglykan (GAG) byl vložen na nosič kultury jako reakce na přidání rhlL-1-alfa, který obsahuje produkty

9999

113

9999

9« « _A •99 99 99 9 chrondrocytových matricových metaloproteáz (MMP), zahrnujících stromelysin a kolagenázu. Procentuální míra inhibice značeného GAG byla upravena podle spontáního uvolňování za nepřítomnosti rhlL-1-alfa. Výsledky pro každou skupinu znamenají střed ± S.E.M. pro pět explantátů.

Sloučeniny vzorce I, které byly testovány v této zkoušce, vykazují schopnost inhibovat vylučování ³⁵S-značený GAG z chrupavkových explantátů.

Příklad 69

In vitro test

Ke studiu účinku sloučenin vzorce I proti vstřebávání kosti sloučenin vzorce I byl použit model dlouhých kostí plodu krys.

K vyvolání vstřebávání kosti in vitro byl použit hovězí PTH. Účinky na vstřebávání kosti jsou vyjádřeny množstvím uvolněného ⁴⁵Ca z ⁴⁵Ca předznačených dlouhých kostí plodu kiys na kultivačním mediu. Inhibiční účinek sloučenin vzorce I proti PTH vyvolanému vstřebávání kosti hovězího dobytka byl vyjádřen jako střední procentuální inhibice ± sem.

⁴⁵Ca předznačené dlouhé kosti plodu krys (z předloktí) byly rozkrájeny a kultivovány na Linbro miskách při 37 °C přes noc na BGJb mediu, doplněném 1 mg/ml BSA. V každé skupině bylo pět párů kostí. Sloučenina vzorce I byla nejprve rozpuštěna v ethanolu, poté zředěna na různé koncentrace a přidána současně s hovězím PTH (1-34) při lxl O'⁸ M najeden den. Koncentrace ethanolu v roztoku sloučeniny byla nižší než 0,05 %, což neovlivní test. Test byl ukončen po šesti dnech, přičemž ve třetím dni bylo vyměněno medium.

Po ukončení všech výměn media bylo zaznamenáno množství ⁴⁵Ca přítomné v kultivačním mediu. Zbylé kosti byly rozpuštěny v 0,1 N HC1 a ⁴⁵Ca přítomný v kostním roztoku byl také zaznamenán. Výsledky byly vyjádřeny jako % celkového množství ⁴⁵Ca uvolněného z každého páru kostí. Hovězí PTH při lxl0‘⁸ způsobil vstřebávání kosti na maximální úroveň, která byla považována za 100 % a tato koncentrace byla použita jeko standard. Úroveň základní linie resorpce kosti pouze za přítomnosti media byla považována za 0 %. Všechny skupiny testovaných sloučenin

114 ···· ·· *··· ·· · · · · · • · · · · · • · · · ·· · · • · · · · ··· ·· ·· · o

byly porovnány s hovězím PTH (1-34) při 1x10' M. Koncentrace, při které sloučenina inhibovala vstřebávání kosti z 50 % byla definována jako IC50.

Sloučeniny vzorce I, které byly testovány v této zkoušce, vykazují schopnost inhibovat vstřebávání kosti vyvolané hovězí PTH.

Příklad 70

In vitro test

A. Izolace MMP pro testy

Katalytická oblast lidské kolagenázy-1 byla uvolněna jako fuze proteinu s ibiquitnem u

E.Coli (Gehring, E.R. a kol., J. Biol. Chem., 270, 22507, (1995)). Po vyčištění fúze proteinu byla katalytická oblast kolagenázy-1 fibrioblastu uvolněna reakcí s 1 mM acetátem aminofenylrtuťnatým (ΑΡΜΑ) po 1 hod při 37 °C byla čištěna zinek chelatující chromatografií.

Lidská kolagenáza-2 a želatináza B byly izolovány v aktivní formě z bůvolí kůže (Mooklitiar, K.A. a kol., Biochemistry, 29,10620, (1990)).

Propeptidická a katalytická oblast části lidské kolagenázy-3 byla uvolněna u E. Coli jako N-koncová fúze proteinu s ubiquitinem. Po vyčištění byla katalytická oblast získána reakcí s 1 mM acetátem aminofenylrtuťnatým (ΑΡΜΑ) po 1 hod při 37 °C byla čištěna zinek chelatující chromatografií.

Krysí kolagenáza-3 byla čištěna v aktivní formě z nosiče kultury buněk hladkého svalstva dělohy (Roswit, W.T. a kol., Arch. Biochem. Biofýs., 225, 285-295 (1983)).

Katalytické a fibronektinu podobné části lidské proželatinázy A byly uvolněny jako fuze proteinu s ubiquitinem u E. Coli. Testy byly prováděny na autokatalyticky aktivovaném materiálu. Krysí proželatinázy A byly čištěny z nosiče kultury interleukinu-1 stimulovaného keratinicyty a aktivovaného reakcí s 1 mM acetátem aminofenylrtuťnatým (ΑΡΜΑ) po 1 hod při 37 °C a postupně dialyzovány z důvodu odstranění přebytku ΑΡΜΑ.

»···

Lidský prostromelysin-1 byl čištěn od nosiče kultury synoviálních fíbrioblastů pomocí afinitní chromatografie za použití imibilizované monoklonální protilátky. Zymogen byl aktivován reakcí s trypsinem (1,5 pg/ml) po 1 hod při 23 °C za vzniku směsi 45 a 28 kD druhů.

Katalytická oblast lidského stromelysinu byla připravena uvolněním a vyčištěním prostromelysinu-1 od E. Coli aktivované 1 mM ΑΡΜΑ 1 hod při 37 °C a následnou dialýzou.

Lidský promatrilysin byl uvolněn a čištěn od buněk vaječníků křečků (Bamett, J. a kol., Prot. Expres. Pur., 5, 27, (1994)). Zymogen byl aktivován reakcí s 1 mM ΑΡΜΑ 1 hod při 37 °C a čištěn zinek chelatující chromatografií.

Jak bylo prokázáno v tomto testu, sloučeniny vzorce I vykazují schopnost inhibovat kolagenázy.

B. Postup in vitro testu

Testy byly prováděny v testovacím pufru (50 mM Tricin pH 7,5, 200 mM chloridu sodného, 10 mM chloridu vápenatého, 0,005 % Brij-35) obsahujícím 2,5 % obj. DMSO po zředění inhibitoru a substrátu. Zásobní roztok inhibitorů byl připraven ve 100 % obj. DMSO. Zásobní roztoky substrátů byly připraveny ve 100 % obj. DMSO při koncentraci 2 mM.

Testovací metody byly založeny na hydrolýze MCA-Pro-Leu-Gly-Leu-DPA-Ala-ArgNH₂ (Bachem, lne.) při 37 °C (Knight, C.G. a kol., FEBS, 296, 263-266 (1992)). Změny fluorescence byly měřeny pomocí fluorimetru Perkin-Elmer LS-50B za použití excitační vlnové délky 328 nm a emisní vlnové délky 393 nm. Koncentrace substrátu (S) použitá při testech byla 10 μΜ. Inhibitor byl pro testování zředěn z roztoku 100 % obj. DMSO a kontrolován náhradou stejného objemu DMSO tak, že konečná koncentrace DMSO ve všech testech byla 2,5 % obj.. Výsledky inhibice jsou vyjádřeny jako koncentrace inhibitoru, který způsobí 50 % inhibici aktivity (IC50) proti kontrolní (neinhibované) reakci.

····

·· *·Η ί

Sloučenina	IC₅₀(nM)
A	8,8
B	4,2
C	0,7
D	3,9
E	4,8
F	0,9

A: kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷) oktadeka (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová

B: kyselina (3R, 9S)-3-(8-oxo-l,7-diaza-tricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka11(18),12(17),13,15 -tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanová

C: kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-methoxy-ethoxy)fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa1,7-diazatricyklo(9,6,1,0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová

D: kyselina (3R,9S)-6-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diazatricyklo(9,6,l,0¹²’¹⁷)oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová

E: kyselina(3R,9S)-6-(4-(2-hydroxy-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diazatricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová

F: kyselina (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7diazatricyklo(9,6,l,0^12,17)oktadeka-l 1(18),12, 14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová ···· ·· ·«·»

117 • · · · *·· · • · · · · • ·· ·· ·· ·

Příklad 71

In vitro test

Tento test ukazuje schopnost sloučenin vzorce I inhibovat rozklad kolagenové matrice (posouzeno podle uvolňování hydroxyprolinu) a proteoglykan (posouzeno podle uvolňování³⁵S značených glykosaminoglykanů) z chrupavkových explantátů.

Malé chrupavkové explantáty (3 mm průměr) byly připraveny z čerstvých kolenních kloubů hovězího dobytka a označeny ³⁵SO₄.³⁵S-značený glykosaminoglykan (GAG) byl vložen na nosič kultury jako reakce na přidání rhlL-1-alfa, který obsahuje produkty chrondrocytových matricových metaloproteáz (MMP), zahrnujících stromelysin a kolagenázu. Procentuální míra inhibice hydroxyprolinu a uvolněného GAG byla upravena podle spontánního uvolňování bez přítomnosti rhlL-1-alfa.

Sloučeniny vzorce I, které byly testovány v této zkoušce, vykazují schopnost inhibovat vylučování) ak kolagenových fragmentů, tak S-značený GAG z chrupavko vých explantátů.

Příklad 72

In vitrotest

Test implantace chrupavkového čepu měří rozklad kolagenové matrice implantovaného chrupavkového čepu u krys (Bishop, J. a kol., J. Farm. Tox. Methods, 30, 19, (1993)) .

Dříve zmrazené hovězí nosní chrupavkové čepy vážící asi 20 mg byly vloženy do polyvinylové houby impregnované Mycobacterium tuberculosis a postupně implantovány samicím Lewisových krys. Dávkování začalo 9 dní po implantaci a čepy byly vyjmuty asi o týden později. Čepy byly zváženy, hydrolyzovány a byl měřen obsah hydroxyprolinu. Účinnost byla určena porovnáním léčené skupiny s kontrolní skupinou léčenou pouze pojivém.

Podle tohoto testu sloučeniny vzorce I vykazují schopnost rozkladu chrupavkových čepů.

··

118 ···· φφ ·· ·· ···· • · · • · φφφ φ • · ··· • · · ··· · • φ φφ φ

Příklad 73

Toxicita

Samicím krys byly orálně podávány dávky 75 až 200 mg/kg/den kyseliny (3R,9S)-3-(8oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo(9,6,1,0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-yl-hexanové po dobu 10 dní. Ani při jedné dávce nebyly zjištěny žádné patologické změny během léčby.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I:

kde:

m je 2,3,4, 5 nebo 6; a n je 0,1,2, 3 nebo 4; takže:

když m je 2,3 nebo 4; n je 1,2,3, nebo 4; a

A je -CH₂-, -0-, nebo -N(R’ *)-, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl;

R¹ je a) -(CH₂)-R⁴ kde R⁴ je merkapto, acetylthio, karboxyl, aminokarbonyl, N-hydroxylformylaminoskupina, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, arylalkoxykarbonyl, benzyloxyaminokarbonyl, nebo \R⁶

OH kde R⁶ je případně substituovaný aryl, kde aryl skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl;

b) -CH(R⁷)-R⁸ kde R⁷ je alkyl, hydroxyl, aminoskupina, alkylaminoskupina, arylaminoskupina, alkylsulfonylaminoskupina, arylalkylaulfonylaniinoskupina, alkoxykarbonyl, aminokarbonyl, arylalkyl nebo karboxyl; nebo R⁷ je • · · · ·· ····

120 ·:· i .

-CH₂NHR, kde R je vodík, alkyl, aryl, 2-benzoxazol, -SO₂R^a, -SO2NHR^a, -SO2OR^a -C(O)R^a -C(O)NHR^a, -C(O)OR^a, kde R^a je alkyl, trifluormethyl, aryl, arylalkyl, arylalkenyl nebo arylkarbonylaminoalkylaryl; a R⁸ je karboxyl, hydroxylaminokarbonyl,alkoxykarbonyl nebo ary lalkoxykarbony 1; nebo

c) -NH-CH(R⁹)-R¹⁰ kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylalkyl, a R¹⁰ je karboxyll, alkoxykarbonyl nebo arylalkoxykarbanyl, fosfonyl, dialkylfosfonyl nebo methoxyfosfonyl;

R² je alkyl, alkenyl, trifluormelhylalkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, aiylalkoxyalkyl, aryl, aryloxyalkyl nebo arylalkyl; a R³ je vodík, hydroxyl, halogen, alkyl, alkoxy nebo arylalkoxyskupina;
2,
3,
4.

když n je 0; m je 4, 5 nebo 6; a

A je -CH(R¹²)- kde R¹² je karboxyl, alkoxykarbonyl nebo případně substituovaný karbamoyl; a

R¹, R² a R³ jsou definovány výše;

ve formě jednoho stereoizomeru nebo směsi štereoizomerů nebo jejich farmaceuticky vhodné soli.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 1 , kdenje 1,2 nebo 3; m je 2 nebo 3; a A je -CH₂-.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kde n je 2; R¹ je -CH₂-R⁴; a R³ je vodík.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 3 , kde R² je alkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl nebo arylalkyl a R⁴ je karboxyl, alkoxykarbonyl nebo hydroxylaminokarbonyl. ⁵
5. 3R, 1 OS Stereoisomer sloučeniny nebo soli podle nároku 4 , kdeR je bifenylpropyl a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,10S)-6-(bifenyl-4-yl)-3(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10.6.1.0¹³¹⁸)nonadeka-12(19), 13( 18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanová.

121
6. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 4 , kde R² je thien2- ylethyl a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,10S)-3-(9-oxo1,8-diazatricyklo( 10.6.1.0^{13 * *}’¹⁸)-nonadeka-12(19),13(18),-14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)-5-(thiofen-2-yl)pentanová.
7. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 4 , kde R² je cyklopentyl a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,10S)-3-cyklopentyl-3(9-oxo-l ,8-diazatricykIo(l 0.6.1.0 ’³¹⁸)-nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)propionová.
8. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 4 , kde R² je cyklopentylmethyl a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,10S)-4-cyklopentyl3- (9-oxo-1,8-díazatrieyklo( 10.6.1.0¹³’¹⁸)-nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)butanová.

o
9. Stereoisomer 3R, 10S sloučeniny nebo soli podle nároku 4 ,kdeR je cyklopropylmethyl a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,10S)4- cyklopropyl-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo( 10.6.1.0^l3’¹⁸)-nonadeka12( 19), 13(18),14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)butanová.
10. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 4 , kde R² je cyklopentylmethyl a R⁴ je ethoxykarbonyl nebo isopropoxykarbonyl.
11. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 3 , kde R²cyklopentylmethyl a R⁴ je N-methylpiperid-4-yl-oxykarbonyl nebo isopropoxykarbonyl.

•y
12. Stereoisomer 3R,10S sloučeniny nebo soli podle nároku 3 , kdeR je 2-methylpropyl; a R⁴ je N-methylpiperid-4-yl-oxykarbonyl, dimethylaminoethylkarbamoyl nebo N-hydroxylformylaminoskupina.
13. Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kde R¹ je -CH2-R⁴; R² je 2-methylpropyl a R³ je vodík a R⁴ je karboxyl, N-hydroxylaminokarbonyl nebo

N-hydroxylformylaminoskupina.
14. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 13 ,kdenje2;aR⁴je karboxyl; s výhodou kyselina (3R, 10S)-5-methyl-3-(9-oxo-l,8-diazatricyklo(10.6.1.0^13,8)-nonadeka-l 2(19), 13(18), 14,16-tetraen-l 0-ylkarbamoyl)hexanová.
15. Stereoisomer 3 R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 13 , kdenje2;aR⁴je N-hydroxylaminokarbonyl; s výhodou (3R, 10S)-N-hydroxyl-5-methyl-3(9-oxo-1,8-diazatrieyklo-( 10.6.1.0^13,18)-nonadeka-12( 19), 13( 16), 14,16-tetraen1O-ylkarbamoyl )hexanamid.
16. Stereoisomer 3R, 11S sloučeniny nebo soli podle nároku 13 , kdenje3;aR⁴je N-hydroxylaminokarbonyl; s výhodou (3R,1 lS)-N-hydroxyl-5-methyl-3(10-oxo-1,9-diazatricyklo( 11.6.1.0^14,19)-eikosa-13(20), 14( 19), 15,17-tetraen11 -ylkarbamoy l)hexanamid.
17. Stereoisomer 3R, 9S sloučeniny nebo soli podle nároku 13 , kde n je 1; a R⁴ je karboxyl; s výhodou kyselina (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo1.7- diazatricyklo(9.6.1 O¹²¹⁷)-oktadeka-11(18), 12(17), 13,15-tetraen9-ylkarbamoyl)hexanová.
18. Stereoisomer 3R,9S sloučeniny nebo soli podle nároku 13 , kde n je 1; a R4 je N-hydroxylaminokarbonyl; s výhodou (3R,9S)-N-hydroxyl-5-methyl-3(8-oxo1.7- diazatricyklo-(9.6.1.0^12,7)-oktadeka-l 1(18),12(17),13,15-tetraen9- ylkarbamoyl)hexanamid.
19. Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kde R¹ je -CH2-R⁴; R² je 2-methylpropyl a R³ je vodík a R⁴ je merkapto nebo acetylthioskupina.
20. Sloučenina nebo sůl podle nároku 19 , kde n je 2 a R⁴ je merkapto, s výhodou (10S)-2-merkaptomethyl-4-methyl-N-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(10.ó.1.O^13,18)nonadeka-12(19), 13(18), 14,16-tetraen-10-yIkarbamoyI)pentanamid.
21. Sloučenina nebo sůl podle nároku 19 , kde n je 2 a R⁴ je acetylthioskupina, s výhodou (10S)-2-acetylthiomethyl-4-methyl-N-(9-oxo1.8- diazatricyklo( 10.6.1.0¹³’¹⁸)-nonadeka-12( 19), 13 (18), 14,16-tetraen10- ylkarbamoyljpentanamid.

• ® · · • · · · · ·

123
22. Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kdeR¹ je

OH kde R⁶ je nesubstituovaný nebo substituovaný aryl ze skupiny, kterou tvoří chinol-2-yl, naft-1 -yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl.
23. Sloučenina nebo sůl podle nároku 22 , kde n je 2 a R⁶ je chinol-2-yl.
24. Stereoisomer 10S sloučeniny nebo soli podle nároku 23 , kde R je

2-methylpropyl a R³ je vodík, s výhodou kyselina (10S)-(4-methyl-2-(9-oxo1.8- diazatricyklo( 10.6.1.0^,318)-nonadeka-12( 19), 13( 18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)pentanamido)-(chinolm-2-ylthiomethyl)fosfinová.
25. Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kdeR¹ je-CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH₂NHR.
26. Sloučenina nebo sůl podle nároku 25 ,kdenje2;Rjevodík-C(O)OR^a, SO?R^a nebo -C(O)NHR\ kde R^a je alkyl; R² je 2-methylpropyl; R³ je vodík; a R⁸je karboxyl.
27. Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 26 , kde R je vodík, s výhodou kyselina (3R,10S)-2-(aminomethyl)-5-methyl-3-(9-oxo1.8- diazatricyklo(l 0.6.1.0^,3,8)-nonadeka-12(l 9),13( 18),14,16-tetraen10-yikarbainoyl)hexanová.
28. Stereoisomer 3R,1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 26 , kdeR je -C(O)OCH₃, s výhodou kyselina (3R,10S)-2-(methoxykarbonylaminomethyl)5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-(l 0.6.1 .Ó^13,18)-nonadeka12(19),13(18), Í4,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová.
29. Stereoisomer 3R,1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 26 , kdeR je -SO2CH3, s výhodou kyselina (3R,10S)-2-(methansulfonamidomethyl)124 .:. :

5-melhyi-3-(9-oxo-1,8-diazatricyklo-(l 0.6.1 0^13,18)-nonadeka12(19), 13( 18), 14,16-tetraen-10-ylkarhamoyl)hexanová.

·· ·· ·
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.

Stereoisomer 3R, 1 OS sloučeniny nebo soli podle nároku 26 , kde Rje -C(O)NHCH₂CH3, s výhodou kyselina (3R,10S)-2-(3-ethylureidomethyl)5-methyl-3-(9-oxo-l ,8-diazatricyklo-( 10.6.1.0^l3l8)-nonadeka12( 19), 13(18), 14,16-tetraen-10-ylkarbamoyl)hexanová.

Sloučenina podle nároku 2 , kde R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je alkyl nebo alkoxykarbonyl.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 31 , kde R² je 2-methylpropyl; R³ je vodík; a R⁸ je hydroxylaminokarbonyl.

Sloučenina podle nároku 2 , kde R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁸ je hydroxylaminokarbonyl.

Sloučenina podle nároku 33 , kde R⁷ je hydroxyl, R² je isobutyl a R³ je vodík.

Sloučenina podle nároku 34 , kde man jsou 2, s výhodou (3R,9S)N-hydroxyl-2-hydroxy-5-methyl-3-(8-oxo-1,7-diazatrieyklo-(9.6.1.0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18), 12(17), 14,16-tetraen-9-y)karbamoyl)hexanamid nebo jeho (2S,3R,9S) stereoisomer.

Stereoisomer 3R, 10S sloučeniny nebo soli podle nároku 32 , kde n je 2, s výhodou (3R, 10S)-N-hydroxy-5-methyl-2-methoxykarbonyl-3-(9-oxo1,8-diazatricyklo- (10.6.1.0¹³’¹⁸)-nonadeka-12( 19), 13(18), 14,16-tetraen10-ylkarbamoyl)hexanamid.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 2 , kde R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R¹⁰ je karboxyl, alkoxykarbonyl nebo arylalkoxykarbonyl.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 37 , kde R⁹ je alkyl a R¹⁰ je karboxyl nebo alkoxykarbonyl.

Sloučenina nebo sůl podle nároku 1 , kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -N(Rⁿ)-, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; R² je alkyl; a R³ je vodík, halogen nebo alkoxyl.
39.

9 9999 • 99 99 9999

125
40.

Sloučenina podle nároku 39 , kde R² je 2-methylpropyl; R³ je vodík a R¹¹ je
41. Sloučenina podle nároku 40 , kdeR¹ je-ClF-R⁴, kde R⁴ jekarboxyl, hydroxy laminokarbony 1, N-hydroxyformylaminoskupina, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, arylalkoxykarbonyl nebo benzyloxyaminokarbonyl.
42. Sloučenina podle nároku 41 , kde n je 2 a R¹ je -CH2-Č(Q)NHOH.
43. Sloučenina podle nároku 1 , kde m je 2; n je 2; a A jé kyslík.
44. Sloučenina podle nároku 43 , kdeR¹ je-CH?-R⁴ a R³ je vodík.
45. Sloučenina podle nároku 44 , kdeR² je vodík, alkyl nebo cykloalkylalkyl.
46. Sloučenina podle nároku 45 , kde R² je isobutyl nebo cyklobutylmethyl a R⁴ je karboxyl, s výhodou kyselina (3R,9S)-5-methyl-3-(8-oxo-4-oxa1,7-diazatricyklo(9.6.1 O¹²’¹⁷)-oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen9-ylkarbamoyl)hexanová a kyselina (3R,9S)-3-cýklobutylmethyl-N-(8-oxo4-oxa-1,7-diazatricyklo(9.6.1.0^12,17)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen9-yl)sukcinamová nebo jejich farmaceuticky vhodné soli ze skupiny, kterou tvoří acetát, trifluoracetát nebo chlorid.
47. Sloučenina podle nároku 44 , kde R² je aryl.
48. Sloučenina podle nároku 47 , kde R⁴ je karboxyl nebo její farmaceuticky vhodná sůl ze skupiny, kterou tvoří acetát, trifluoracetát nebo chlorid.
49. Sloučenina podle nároku 44 , kde R² je aryloxyalkyl.
50. Sloučenina podle nároku 49 , kde R² je fenoxyethyl, 4-chlorfenoxyethyl; a R⁴ je karboxyl, s výhodou, kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9.6.1.0¹²’¹⁷)- oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5fenoxy-pentanová a kyselina(3R,9S)-5-(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diaza-tricyklo-(9.6.1.0¹²¹⁷)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)pentanová, v tomto pořadí nebo jejich farmaceuticky vhodné soli ze skupiny, kterou tvoří acetát, trifluoracetát nebo chlorid.

• ·

126
51. Sloučenina podle nároku 49 , kde R² je 4-chlorfenoxyethyl nebo fenoxyethyl; a R⁴ je ethoxykarbonyl, s výhodou ethylester kyseliny (3R,9S)-5(4-chlorfenoxy)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9.6.1.0^,217)-oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)pentanové a ethylester kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo(9.6.1.0^,2’^I7)-oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenoxy-pentanové nebo jejich farmaceuticky vhodné soli ze skupiny, kterou tvoří acetát, trifluoracetát nebo chlorid.
52. Sloučenina podle nároku 44 , kde R² jearylalkyl.
53. Sloučenina podle nároku 52 , kde R³ je 3-(4-hydroxylfenyl)propyl,

3-(4-pyridinyl)propyl, 3-(4-(3-hydroxylpropoxy)fenyl)propýl, 4-fenoxy-fenylethyl, 3-(4-(2’hydroxy-ethoxy)fenyl)propyl, 3-(4-(2-pyrrolidin-1 -yl-ethoxy)-fenyl)propyl, 3-(4-methoxyfenyl)propyl, 3-(4-(2-methoxy-ethoxy)-fenyl)propyi, fenylethyl, 3fenyl-propyl, 3-(3-hydroxylfenyl)propyl, 3-(4-(3-piperidin-l-ylpropoxy)-fenyl)propyl, 3-(4-(3-dimethylamino-propoxy)-fenyl)propyl, 3-(4(2-dimethylamino-ethoxy)fenyl)propyl, 3-(4-kyano-fenyl)própyl, 3(naftalen-2-yl)propyl, 3-(4-pyrrol-l-ylfenyl)propyl, 3-(4-hydroxy-3methyl-fenyl)propyl, 3-(4-benzyloxy-fenyI)propyl, 3-(4amino-butoxyfenyl)propyl, 4-methoxyfenylethyl, 3-(4-amino-fenyl)propyl, 3(4-pyridin-4-ylmethoxy-fenyl)propyl nebo 3-(4-acetylamino-fenyl)propyl; a R⁴ je karboxyl, s výhodou kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo(9.6.1.0^12,17)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3 R,9S)-3~(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.O¹²,¹⁷)-oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyi)-6-pyridin-4-yl-hexanová;

kyselina (3R, 9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo (9.6.1.0^12,17)-oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0^,2l7)-oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-(4-fenoxy-fenyl)-pentanová;

··*· ·· ···· • ·· • · ♦ · · · • · · · · ♦ · • · · · · · · ·· · ι·ο*7 * · · · · · iZř * · · · · · · · · ₉₉ kyselina (3 R,9S)-6-(4-(2-hydroxy-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0 ’^2,17)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl) hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0^12,I7)-oktadeka 11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl )-6-(4-(2-pyrrol idin-1-ylethoxyfenyl)hexanová;

kyselina (3 R,9S)-6-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0ⁱ²¹⁷)-oktadeka 11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-methoxy-ethoxy)-ťenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza- tricyklo (9.6.1.0¹²’¹⁷)-oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová; kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1,0¹²¹⁷)-oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-5-fenylpentanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0¹²’^,7)-oktadeka~

11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-fenylhexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(3-hydroxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0’^2,17)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7-díaza-tricyklo(9.6.1.O¹²’¹⁷)-oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-(3-piperidin-1 -yl-propoxy)fenyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(3-dimethylainino-propoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo(9.6.1.0^,2’¹⁷)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(2-dimethylamino-ethoxy)-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diazatricyklo (9.6.1.O^12,7)-oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9- ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-kyano-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3 R,9S)-6-naftalen-2-yl-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diazatricyklo (9.6.1.0^12,17)oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

128

99 9 · • 9 9 • 99

9 9 9

999 99

9 9 kyselina (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0¹²’¹⁷)-oktadeka11(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-pyrrol-1 -yl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-hydroxy-3-methyl-fenyl)-3-(8-oxo~4-oxa-l,7-diazatricyklo (9.6.1.0¹²¹⁷)-oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-benzyloxy-fenyl)-3~(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0^12,17)- oktadeka-1 l(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbsmoyl)hexanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-(4-aminobutoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7-diazatricyklo (9.6.1.0^12,17)-oktadeka-11 (18) 12,14,16-tctraen-9-ylkarbamayl) hexanová;

kyselina (3R,9S)-5-(4-methoxy-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza- tricyklo (9.6.1.0^12,17)- oktadeka-1 l(18),12,14,16-tetracn-9-ylkarbamoyl)pentanová;

kyselina (3R,9S)-6-(4-amino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7-diaza-tricyklo(9.6.1.0¹²’¹⁷)oktadeka-11(18),12,14,16-tetraen-9-y lkarbamoyl)hcxanová;

kyselina (3 R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.()’^2,7)-oktadeka11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-(4-(pyridin-4-ylmethoxy)-fenyl)hexanová; a kyselina (3R,9S)-6-(4-acetylamino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0^12,17)-oktadeka-l 1 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)hexanová nebo jejich farmaceuticky vhodné soli ze skupiny, kterou tvoří acetát, triíluoracetát nebo chloridu.
54. Sloučenina podle nároku 53 ,ato sůl kyseliny octové a kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo (9.6.1.0^12,17)-Oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)- 6-(4-(2-pyrrolidin-1 yl-ethoxy)-fenyl)-hexanové; nebo sůl kyseliny trifluoroctové a kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatrieyklo (9.6.1.0^12,17)-oktadeka-l 1(18),12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-pyridin-4-ylhexanově; nebo ·· ····.

sůl kyseliny trifluoroctové a kyseliny (3R,9S)-6-(4-(3-dimethylamino-propoxy)fenyl3-(8-oxo-4-oxa-l,7-diazatricyklo (9.6.1.0^,2,17)-oktadeka 1 l(18),12,14,16-tetraen-9ylkarbamoyl)-hexanové; nebo sůl kyseliny trifluoroctové a kyseliny (3R,9S)-6-(4-(2-dimethylamino-ethoxy)fenyl)3- (8-oxo-4-oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.0¹²’¹⁷)-oktadeka-11(18), 12,14,16-tatraen-9ylkarbamoyl)-hexanové; nebo sůl kyseliny trifluoroctové a kyseliny (3R,9S)-6-(4-(4-amino-butoxy)-fenyl)-3(8-oxo4- oxa-1,7-diaza-tricyklo (9.6.1.O¹²¹⁷)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen9-ylkarbamoyl)-hexanové; nebo sůl kyseliny octové a kyseliny (3R,9S)-6-(4-amino-fenyl)-3-(8-oxo-4-oxa-l ,7diazatricyklo (9.6.1.0^,2,7)-oktadeka-l 1(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbainoyl) hexanové; nebo sůl kyseliny trifluoroctové a kyseliny (3R.9S)-3-(8-oxo-4-axa-l,7-diazatricyklo (9.6.1. O^l2,17)-oktadeka-l 1(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)-6-4-(pyridin-4ylmethoxy)-fenyl)-hexanové.
55. Sloučenina podle nároku 52 , kde R'je 3-(4-(3-bydroxy-propoxy)-fenylpropyl nebo 3-(4-pyridinyl)propyl a R⁴ je etboxykarbonyl, s výhodou, ethylester kyseliny (3R,9S)-6-(4-(3-hydroxy-propoxy)-fenyI)-3-(8-oxo-4-oxa1,7-diazatricykló (9.6.1.O¹²'¹⁷)-oktadeka-11 (18), 12,14,16-tetraen-9ylkarbamoyl)hexanové a ethylester kyseliny (3R,9S)-3-(8-oxo-4-oxa-l,7diaza-trieyklo (9.6.1.O^12,17)-oktadeka-11(18), 12,14,16-tetraen-9-ylkarbamoyl)6-pyridin-4-yl-hexanové nebo jejich farmaceuticky vhodné soli.
56. Farmaceuticky vhodná sůl sloučeniny podle nároku 55 , a to hydrochlorid.
57. Farmaceutický prostředek vyznačující se t í m , že obsahuje sloučeninu nebo sůl podle nároku 1 a farmaceuticky vhodnou látku usnadňující podávání.
58. Způsob léčení savců trpících chorobou, kterou zmírňuje léčení inhibitory matricové metaloproteáty, vyznačující se tím, že • · ·· · • · · · · ·

130 • * ·· ·« ··· · • · · · · · • ··· ·· ·· φ zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny nebo soli podle nároku 1.
59. Způsob podle nároku 58 vyznačující se tím, že chorobou je arthritida.
60. Způsob podle nároku 58 vyznačující se tím, že chorobou je osteoporóza.
61. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1 vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce K, kde R^7a je vodík nebo alkoxykarbonyl; R¹⁴je alkyl nebo benzyl a R² je definováno v popisu; se sloučeninou obecného vzorce J, kde p je 5, 6, 7 nebo 8 a R³ je definován v popisu; ϊά vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CIL-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (b) reakci sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kdenje 1,2 nebo 3; m je 3 nebo4; Aje -CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxyl; a R² a R³jsou definovány v popisu; nebo (c) reakci sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -GH2-R⁴, kde R⁴ je karboxyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; s O-chráněným hydroxylaminem např. O-benzylhydroxylaminem za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (d) reakci sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxyaminokarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R , kde R- je hydroxylaminokarbonyl; a R a R jsou definovány v popisu; nebo • ·

131 « · 9 (e) reakci sloučeniny obecného vzorce M, kde R je definováno v popisu, se sloučeninou obecného vzorce J, kde p je 5,6, 7 nebo 8 a R³ je vodík, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je acetylthio; a R² a R³jsou definovány v popisu; nebo (f) reakci Sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je acetylthio; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je merkapto; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (g) reakci sloučeniny obecného vzorce BB, kde R je definováno v popisu; a R je případně substituovaný aryl, kde arylovou skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl; se sloučeninou obecného vzorce J, kde p je 5,6,7

-J nebo 8 a R je definováno v popisu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-R⁴, kde R⁴ je

OH kde R⁶ je případně substituovaný aryl, kde arylovou skupinou je chinol-2-yl, naft-l-yl, naft-2-yl, pyridyl nebo fenyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (h) reakci sloučeniny obecného vzorce Im, kde n j e 2 nebo 3; m je 4; A je -NR¹¹, kde R¹¹ je vodík nebo alkyl; je -CH2-R⁴, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 2 nebo 3; m je 4; A je -NRⁿ, kde R je vodík nebo alkyl; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je hydroxylaminókarbonyl; a R a R jsou definovány v popisu; nebo o 2 reakci sloučeniny obecného vzorce MM, kde R je vodík, alkyl nebo arylkyl a R je definováno v popisu; se sloučeninou obecného vzorce J, kde p je 5,6,7 nebo 8 a R³ je definováno v popisu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH₂-, R¹ je -NH-GH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, (i) ί ’ (

ΦΦ φφφφ

132 • φ φ φ φφφ φφφ ΦΦ • Φ φ φφφ φ φ φ alkyl nebo arylalkyl a R¹⁰ je arylalkoxykarbonyl; a R² a R³ jsóu definovány v popisu; nebo (j) reakci sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylalkyl a R¹⁰ je arylalkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH?-; R¹ je -NH-CH(R⁹)-R¹⁰, kde R⁹ je vodík, alkyl nebo arylalkyl a R¹⁰ je karboxyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (k) reakci sloučeniny obecného vzorce PP, kde p je 5,6, 7 nebo 8; R¹⁴ je hydroxyl, benzyl nebo alkyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CII(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH2NHR, kde R je vodík a R⁸ je karboxyl, benzyloxykarbonyl nebo alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (l) reakci sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CH(R⁷)-R\ kde R⁷ je -CH₂N1 IR, kde R je vodík a R⁸ je karboxyl, benzyloxykarbonyl nebo alkoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde n je 1,2 nebo 3 ; m je 3 nebo 4; A je -CH2-; R¹ je -CH(R⁷)-R⁸, kde R⁷ je -CH2NHR, kde R je vodík a R⁸ je karboxyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (m) reakci sloučeniny obecného vzorce Ka, kde R² je definováno v popisu se sloučeninou obecného vzorce ff, R³ je definováno v popisu; za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R^J je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (n) hydrogenaci sloučeniny obecného vzorce ii, kde R³ je definováno v popisu za vzniku sloučeniny obecného vzoree I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; R² je arylkyl (aryl-(CH₂)3-); a R³ je definován v popisu; nebo ····

133 (o) převedení sloučeniny obecného vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; na sloučeninu obecného vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2--R⁴, kde R⁴ je karboxyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; nebo (p) převedení sloučeniny obecného vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je

-CH2-R⁴, kde R⁴ je karboxyl nebo t-butoxykarbonyl; a R² a R³ jsou definovány v popisu; na sloučeninu obecného vzorce I, kde m a n jsou 2; A je kyslík; R¹ je -CH2-R⁴, kde R⁴ je alkoxykarbonyl jiný než t-butoxykarbonyl; a R²a R³ jsou definovány v popisu; nebo

2 · 1 (q) převedení sloučeniny obecného vzorce I, kde R je hydroxylarylalkyl; a m, n, R a R jsou definovány v popisu na sloučeninu obecného vzorce I, kde R je hydroxylarylalkyl; a m, n, R¹ a R³ jsou definovány v popisu; a dále případně (r) převedení sloučeniny obecného vzorce I na její farmaceuticky vhodnou sůl; nebo (s) převedení soli sloučeniny obecného vzorce I na odpovídající volnou bázi.